Universidad Nacional de Colombia
Departamento de Farmacia
Farmacognosia y Fitoquímica – 2015659
Informe de laboratorio
𝑉𝑎𝑙𝑒𝑛𝑡𝑖𝑛𝑎 𝐵𝑒𝑐𝑒𝑟𝑟𝑎 𝑃𝑒𝑑𝑟𝑎𝑧𝑎1, 𝐾𝑎𝑟𝑜𝑙 𝐷𝑎𝑦𝑎𝑛𝑎 𝐺𝑢𝑎𝑙𝑡𝑒𝑟𝑜𝑠 𝑃𝑎𝑠𝑐𝑎𝑔𝑎𝑧𝑎1,
𝐼𝑛𝑔𝑟𝑖𝑑 𝑉𝑎𝑙𝑒𝑛𝑡𝑖𝑛𝑎 𝑅𝑒𝑦𝑒𝑠 𝑃𝑒ñ𝑎1,
Práctica: Extracción e identificación de Flavonoides
Objetivos
● Determinar la presencia de flavonoides en las plantas del género Phyllanthus sp.
mediante cromatografía en capa delgada (CCD) y pruebas de tubo.
● Realizar una revisión de los compuestos químicos tipo flavonoides tanto en la planta
patrón (Sambucus nigra) como en la muestra problema (Phyllanthus sp.)
● Analizar los resultados obtenidos de las pruebas de tubo y de la cromatografía de
capa delgada realizados para la identificación de flavonoides para las plantas del
género Phyllanthus sp. y para el patrón Sambucus nigra.
Marco teórico
Phyllanthus sp.
Se ha reportado que las plantas del género Phyllanthus en su variedad poseen más de 45
flavonoides. Flavononoles como Aromadedrina; alrededor de doce Flavanonas como
Naringenina y Eriodictiol; de dieciséis Flavonoles como Kaempferol, Quercetina,
Rhamnocitrina, Astragalina y Rutina; tres Flavonas entre ellas Niruriflavona; cinco Flavan-3-
ol como (-)-Epigalocatequina, (-)-Epicatequina y (+)-Catequina; y cuatro biflavonotipos como
Prodelfinidina A1, B1 y B2. Entre ellos, los flavonoles y flavonas constituyen los compuestos
principales. De los flavonoides que se han encontrado, veintidós compuestos fueron aislados
en forma de O-glucósidos. Además, tres de los compuestos (Galangina 8-sulfonato,
Galangina 3-O-B-D-glucosido-8-sulfonato y Kaempferol 8-sulfonato)representan los primeros
ejemplos conocidos de flavonoides-8-sulfonatos de una fuente natural. Los compuestos de la
clase flavonoide ocurrieron principalmente en P. emblica, P. niruri, P. virgatus, y P. urinaria.[1]
Phyllanthus sp. es un género tropical muy extendido y ha sido muy empleado en la medicina
tradicional [2] con propiedades atribuidas que no están estrictamente ligadas a la presencia
de flavonoides en este género, sino que se otorgan a diferentes tipos de metabolitos
secundarios [3] En el caso de flavonoides, estos no van a ser predominantes en el género.
Sin embargo, se señalan algunas de sus propiedades. Los flavonoides participan fácilmente
en los procesos de oxidación-reducción, tanto dentro como fuera de las células. El poder
antioxidante de estos depende de su capacidad para interactuar con los radicales libres que
inician las reacciones de oxidación o los que se producen durante las reacciones en cadena.
En la inhibición de aquellos procesos de oxidación disminuye la actividad de las enzimas
oxidasas y la composición de los iones metálicos de transición que catalizan estas reacciones.
[4] Los flavonoides poseen actividad antioxidante, esto por su capacidad de captar radicales
libres gracias a su estructura química compuesta de enlaces pi. Además, poseen actividad
antimicrobiana (antiviral, antibacteriana y antifúngica) in vitro. Por otro lado, poseen actividad
sobre en SNC, donde mejoran la plasticidad sináptica y mejoran o regulan la irrigación
sanguínea: inhiben la agregación plaquetaria y modulan la función vascular periférica.
Además, los flavonoides se reporta que tienen múltiples efectos biológicos incluyendo anti
carcinogénico, antiinflamatorio, inmunoestimulante y antialérgico.[4]
Figura 1. Estructuras químicas generales de los flavonoides presentes en Phyllanthus sp.
Sambucus nigra (Sauco)
Las infusiones de flores de S. nigra se conocen como un buen remedio tradicional para varios
tipos de enfermedades. Sus propiedades farmacológicas resultan, entre otras cosas, de la
presencia de flavonoides, específicamente de los Flavonoles más representativos (rutina,
isoquercitrina, astragalina) y Antocianinas (cianidina-3-sambubiósido, cianidina-3-
glucósido)[4]
Figura 2. Estructuras químicas de los principales Flavonoles presentes en Sambucus nigra.
(1. Rutina, 2. Isoquercitrina, 3. Astragalina) y Antocianinas (4. Cianuro-3-sambubiósido, 5.
Cianidina-3-glucósido)
Metodología
Resultados
Resultados de Pruebas de Tubo
Patrón: Problema:
Prueba
Sambucus nigra Phyllanthus sp.
Blanco
Cloruro férrico
Shinoda
Leucoantocianidinas
Tabla 1. Resultados de las pruebas de tubo del patrón (Sambucus nigra.) y de la muestra
problema (Phyllanthus sp.) para la prueba de cloruro férrico, shinoda y para la de
leucoantocianidinas.
Resultados de Cromatografía en Capa Delgada
Condiciones cromatográficas
Fase estacionaria: Sílica gel
Fase móvil:acetato de etilo–ácido acético-ácido fórmico-agua (100:11:11:27)
Agentes reveladores: Reactivo NP-PEG, Luz UV 254nm y Luz UV 365nm
CCD
CCD CCD
Luz visible LUZ UV 254 nm LUZ UV 365 nm
Izq: P:Phyllantus sp. ; Centro S: Izq: P:Phyllantus sp. ; Centro S: Izq: P:Phyllantea sp. ; Centro S:
Sauco; Der: Patrón rutina Sauco; Der: Patrón rutina Sauco; Der: Patrón rutina
Tabla 2. Cromatogramas obtenidos por CCD, utilizando como muestra patrón Sambucus
nigra (saúco) y una muestra de rutina, y como muestra problema Phyllantus sp.
Revelador: Reactivo NP-PEG Revelador: Reactivo NP-PEG
Luz UV-254 nm y UV-365 nm Luz visible
Muestra Muestra
Muestra Muestra
Muestra Patrón 2 Pa Muestra Patrón 2 Pa
Patrón(s) Patrón(s)
Problema (Rutina) Problema (Rutina)
(Sambucus (Sambucus
(Phyllantus sp) (Phyllantus sp)
nigra)(Sauco) nigra)(Sauco)
0,37 (1) 0,36(3) 0,36(5) 0,37(1) 0,36(3) 0,36(5)
0,60(2) 0,60(4) 0,60(4)
0,48(6) 0,60(2)
Tabla 3. Factores de retención para los compuestos que presentan un resultado positivo al
usar como revelador el reactivo NP-PEG, con observación a la luz visible y con luz UV. Entre
paréntesis se asigna un número de mancha a cada valor de Rf
Análisis de resultados
Para la identificación de flavonoides en Phyllanthus sp. se emplearon métodos de
identificación cualitativos como los son los ensayos de color, los cuales permiten el
reconocimiento de flavonoides por un cambio en la coloración. Posteriormente se
corroboraron los resultados obtenidos con su respectivo análisis cromatográfico.
En primer lugar se llevó a cabo la prueba de Shinoda la cual es específica para flavonoides
con núcleo y-benzopirona, como lo son las flavonas, flavonoles, flavanonas [5], en esta
prueba la reacción del magnesio en medio ácido, provoca la reducción del flavonoide
generando un producto coloreado naranja, rojo o violeta [6].
También se llevó a cabo la prueba del cloruro férrico, la cual ante compuestos fenólicos da
coloraciones color marrón, verde o azul; la variación de color depende de la cantidad y
posición de los hidroxilos fenólicos presentes. Finalmente se realizó una prueba para
leucoantocianidinas la cual se considera positiva si se desarrolla un color naranja, rojo o
violeta. Las tres pruebas realizadas fueron positivas tanto para el patrón Sambucus nigra
como para Phyllanthus sp. Por lo cual es posible asegurar que nuestra planta problema
cuenta con compuestos de tipo flavonoides.
Después de realizar las pruebas de tubo y haber obtenido un resultado positivo, se esperaba
entonces que al realizar la cromatografía de capa delgada (CCD) se pudiera confirmar la
presencia de flavonoides en la muestra problema (Phyllanthus sp.) y realizar una posible
caracterización de dichos compuestos al compararlos con una muestra patrón que en este
caso fue Sambucus nigra (saúco) y rutina. Según los resultados observados en la tabla 2,
donde se muestran los cromatogramas obtenidos, inicialmente se puede decir que la muestra
problema P (Phyllanthus sp.) tiene presencia de flavonoides pues al realizar el revelado con
el reactivo NP-PEG, se observaron a la luz visible dos manchas de color amarillo que
indicaron la presencia de estos compuestos, ahora bien para realizar una observación más
específica, observando los resultados de la tabla 3 donde se muestran los factores de
retención de estas manchas se puede afirmar que ambos compuestos (1) y (2) que presentan
un Rf de 0,37 y 0,60 respectivamente , a pesar de ser ambos flavonoides tienen variaciones
estructurales que hacen que sus polaridades sean diferentes y por ende se retengan en la
placa de diferente manera.
Ahora para realizar una posible caracterización de (1) y (2) es necesario comparar los
resultados junto a la muestra patrón (Sambucus nigra) que según la literatura tiene la
presencia de rutina, isoquercitrina, astragalina como flavonoides representativos [4], en la
tabla 2 se puede observar que para la muestra patrón se observaron también 2 manchas de
color amarillo (3) Y (4) cuyos Rf respectivos fueron 0,36 y 0,60 que coincidencialmente tienen
el mismo valor que las manchas (1) y (2) respectivamente, para asignar un probable
compuesto a cada uno de estos Rf se compararon dichos resultados con un cromatografía
obtenida del libro A thin layer chromatography atlas [7], dicha cromatografía se realizó con
una muestra de Sucumbus nigra utilizando una fase móvil cuya composición fue acetato de
etilo–ácido acético-ácido fórmico-agua (100:11:11:27), que corresponde a la misma fase
móvil utilizada para la CCD realizada en esta práctica, a diferencia de la proporción del agua
que cambia en un punto, además que se usó el mismo agente revelador (NP-PEG de manera
que los resultados obtenidos pueden ser comparados con los datos extraídos de la literatura,
donde la cromatografía mostro dos manchas al visible que corresponden a rutina e
isoquercitrina cuyos Rf son 0,35 y 0,65 respectivamente, valores semejantes a los obtenidos
en la práctica, por lo que teniendo en cuenta todo lo anterior es posible indicar la muestra
problema (Phyllanthus sp.) tiene la presencia de estos dos flavonoides. La presencia de la
rutina también puede ser confirmada al comparar los resultados de la muestra con el segundo
patrón (Rutina), pues la mancha observada al visible presenta el mismo Rf (0,37) que la (1)
observada en Phyllanthus sp.
Otro aspecto a tener en cuenta es que al realizar el revelado de la placa con Luz UV- 365 nm
es que las manchas amarillas observadas al visible también se observan y aumentan su
fluorescencia sin embargo en la muestra patrón 2 (Rutina) se observa una segunda mancha
de color azul fluorescente (Rf 0,48), inicialmente se puede decir que dicha mancha no
corresponde a un flavonoide pues al visible no presentó ninguna coloración con el reactivo
NP-PEG, por lo que de la misma manera que el caso anterior se comparó el resultado con
una cromatografía obtenida del mismo libro [7], igualmente se realizó a condiciones muy
semejantes y en ella se pudo observar un compuesto que con este reactivo (NP-PEG) y con
luz UV 365 nm presentó la misma coloración y un Rf semejante al que presento la manchada
de color azul observada en el patrón 2 (Rutina),de manera que realizando un correlación se
puede decir que la mancha (6) corresponde al ácido clorogénico, que no presento coloración
al visible por ser un ácido fenólico y no un flavonoide.
Conclusiones
Mediante pruebas de tubo y análisis de cromatografía en capa delgada se determinó que
tanto la planta estudiada Phyllanthus sp. Como la muestra patrón Sambucus nigra (saúco)
posee compuestos tipo flavonoides.
Observando los resultados por CCD además de confirmar la presencia de flavonoides en la
muestra problema Phyllanthus sp. se puede afirmar que dichos flavonoides corresponden a
rutina e isoquercitrina.
Bibliografía
[1]Q. Weiyan, L. Hua, K. Gao,Chemical Constituents of the Plants from the Genus
Phyllanthus, Chemistry and biodiversity, Vol 11, p. 1-13 (2014).
[2] W. C. Evans. “Trease and Evans Pharmacognosy”. Saunders, Elsevier. 16th edition, 2009.
[3] J.B. Calixto , A.R.Santos , V. Cechinel , R.A. Yunes. A review of the plants of the genus
Phyllanthus: their chemistry, pharmacology, and therapeutic potential. Medicinal research
reviews vol. 18, No. 4, (1998)
[4] A. Dawidowicz, D. Wianowska, B. Baraniak. The antioxidant properties of alcoholic extracts
from Sambucus nigra L. (antioxidant properties of extracts). Elsevier, LWT-Food Science and
Technology. Vol. 39, Issue 3, p. 308-315, 2006.
[5] J. M. Monedero. Identificación y caracterización de flavonoides por espectrometría de
masas en melazas residuales de un ingenio azucarero. Universidad ICESI. (2016) p. 15
[6] L. Ochoa, A. Sarmiento. Estudio fitoquímico de la especie vegetal Bucquetia glutinosa (L.
f.) DC. (Melastomataceae) y evaluación de su actividad biológica. Universidad de ciencias
aplicadas y ambientales. (2018) p. 30
[7] H. Wagner, S. Bladt. A thin layer chromatography atlas Plant drug analysis. Springer.
Germany. (1996) Segunda edición, P. 36,37,218,219
