Validación de Método Analítico Completo

SEMESTRE 2017-2
PRECISIN DEL SISTEMA

Mtodo: Un analista debe preparar por lo menos un
sextuplicado de soluciones a la concentracin del analito
que represente la concentracin de la solucin de
referencia utilizada, o en ciertos casos, la concentracin
que represente el 100% de la muestra procesada para
su medicin.
Calcular, S y CV de la respuesta analtica
Criterio de aceptacin:
C.V 1.5 % para mtodos fisicoqumicos
C.V 3% para mtodos biolgicos.
Valores superiores debe ser justificado.
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE CLCULO
CON EJEMPLO PARA PRECISIN DEL
SISTEMA

A) Frmulas: =
Media aritmtica
2 ( )2
Desviacin estndar =
Coeficiente de variacin ( 1)
n= nmero de mediciones

= 100

CLCULOS
B) Procedimiento de clculo
Ejemplo: Absorbencia (y)
1.-Tabular los resultados 1.0520
1.0462
1.0566
1.0568
2.- Calcular y, y2 y determinar n 1.0554
3.- Calcular y S 1.0498
4.- Calcular el C.V

ADECUABILIDAD DEL
SISTEMA
Mtodo: Inyectar por quintuplicado la solucin
de adecuabilidad. Reportar la respuesta del
analito, calcular el C.V y para cada inyeccin
informar cuando proceda:
Factor de capacidad (k)
Resolucin (si procede)
Retencin relativa (si procede Rr)
Factor de coleo (T)
Nmero de platos tericos (N).
CRITERIOS DE ACEPTACIN
C.V2% para la respuesta analtica
Valores superiores deben ser justificados
Para cada inyeccin se recomienda:
K>2
R> 2
T<2
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE
CLCULO CON EJEMPLO PARA
ADECUABILIDAD DEL SISTEMA
A) Frmulas:

Media aritmtica =

Desviacin estndar
Coeficiente de variacin
2 ( )2
=
n= nmero de mediciones ( 1)

= 100

CLCULOS
B) Procedimiento de clculo Inyeccin rea
Ejemplo: (mAu*s)
1 1131.6
1.- Tabular los resultados
2.- Calcular y, y2 y determinar n 2 1134.1
3.- Calcular y S
3 1162.8
4.- Calcular el C.V
4 1132.9
5 1136.2
LINEALIDAD DEL SISTEMA
Mtodo: Un analista debe preparar por lo menos por triplicado
5 niveles de concentracin (intervalo) de la solucin de
referencia ya sea por dilucin o por pesadas independientes.
La concentracin central debe ser igual a la que se prepara la
solucin de referencia en el mtodo o en ciertos casos, la
concentracin que represente el 100 % en la muestra
procesada para su medicin. Calcular el valor de la pendiente
(b1), la ordenada en el origen (b0), el coeficiente de
determinacin (r2) y el intervalo de confianza para la pendiente
(IC(b1)).
Criterios de aceptacin:
R20.98
IC(b1), no debe incluir el cero
Cualquier otro criterio de aceptacin debe ser justificado.
CON EJEMPLO PARA LINEALIDAD DEL SISTEMA
Frmulas
1 =
Pendiente 2 ( )2
n= nmero de mediciones (concentracin-respuesta
analtica)
1
Ordenada al origen 0 =

Coeficiente de determinacin
2
( )
2=
(( 2 ) 2 )( 2 2 )
FRMULAS
Intervalo de confianza para la pendiente
1 = 1 (0.975, 2) 1
1
1 = 2
( )
2

2 1 0
=
2
CLCULO
Procedimiento de clculo
Ejemplo:
2.- Calcular x, y, x2, y2, xy y determinar n
3.- Calcular b1, b0 y r2
4.- Calcular Sy/x y Sb1
5.- Determinar en tablas t0.975, n-2 y calcular IC(b1)
CLCULOS
Solucin X (ppm) Y (absorbencia)
1 80 0.5194
2 80 0.5172
3 80 0.5147
4 100 0.7800
5 100 0.7846
6 100 0.8063
7 120 1.5917
8 120 1.5844
9 120 1.5837
ESPECIFICIDAD DEL MTODO
Mtodo: Partiendo de la experiencia en el anlisis de
la muestra, se deben establecer las posibles sustancias
interferentes, y adicionar cantidades conocidas de
stas, solos o combinadas a la muestra y evaluar su
respuesta al mtodo, bajo las mismas condiciones de
anlisis.
Para mtodos de identificacin: se deben
seleccionar sustancias que potencialmente interfieran
en la determinacin con base en la estructura
molecular del analito, precursores, sustancias
relacionadas, vas degradativas, entre otros.
Para mtodos de contenido/ potencia/ valoracin: se
deben analizar placebos del producto, como lo indica
el mtodo, muestras de producto, y cuando proceda:
Sustancias relacionadas
Precursores
Homlogos
Y una mezcla del producto o mezcla de ellos
La respuesta del mtodo nicamente debe ser debida
al analito.
EXACTITUD Y REPETIBILIDAD
DEL MTODO
Mtodo
1. Se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar un
placebo analtico.
Un analista debe preparar el placebo analtico con el tipo de componentes
que generalmente estn presentes en la muestra. A la cantidad de placebo
analtico equivalente a una muestra analtica por sextuplicado, adicionarle la
cantidad de analito (puede ser una sustancia de referencia secundaria)
correspondiente al 100% de ste en la muestra
2.- No se conocen los componentes de la muestra.
Un analista debe analizar la muestra con el mtodo, para determinar el

contenido del analito. El mismo analista debe preparar por lo menos 6
muestras adicionadas del analito, por ejemplo utilizando la mitad de la muestra
Analtica que originalmente requiere el mtodo y adicionar el analito hasta
completar lo que represente el 100% de ste en la muestra.
MTODO
Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo
analtico o muestra adicionada, cociente de la
cantidad recuperada respecto de la cantidad
adicionada expresada en porcentaje.
Calcular el promedio aritmtico (x), la desviacin
estndar (DS), el coeficiente de variacin (CV) y el
intervalo de confianza para la media poblacional
IC() del porcentaje de recobro.
CRITERIOS DE ACEPTACIN:
El IC() debe incluir el 100 % o que el promedio
aritmtico del % de recobro se incluya en el
intervalo:
98-102 % si el mtodo es cromatogrfico o
volumtrico
97-103 % si el mtodo es qumico o
espectrofotomtrico
95-105% si el mtodo es microbiolgico
MTODO
El CV del porcentaje de recobro:
No debe ser mayor de 2 % si el mtodo es
cromatogrfico
No mayor de 2 % si el mtodo es volumtrico
No mayor de 3 % si es qumico o espectrofotomtrico
No mayor de 5 % si es microbiolgico,
No mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la
especificacin del analito en la muestra.
Cualquier otro criterio de aceptacin, debe ser
justificado.
CON EJEMPLO PARA EXACTITUD Y
REPETIBILIDAD DEL MTODO
A) Frmulas:
Media aritmtica
Desviacin estndar (S)
Coeficiente de variacin (% CV)
Intervalo de confianza para la media poblacional

= (0.975, 1)

t0.975, n-1 buscar en tablas
CLCULO
PROCEDIMIENTO DE CLCULO
Placebo Cantidad Cantidad % de recobro
analtico Adicionada recuperada (y)
adicionado (mg) (mg)
1 50.00 50.04
2 50.10 50.39
3 50.00 50.11
4 49.90 49.89
5 50.00 50.23
6 50.00 49.93
CLCULO
2.- Calcular y, y determinar n
3.- Calcular y S:
4.- Calcular el C.V
5.- Determinar y calcular IC()
LINEALIDAD DEL MTODO
Mtodo I:
Se conocen los componentes de la muestra y es

posible preparar un placebo analtico
Un analista debe preparar el placebo analtico con el
tipo de componentes que generalmente estn
presentes en la muestra. A la cantidad de placebo
analtico equivalente a una muestra analtica por
triplicado, adicionarle la cantidad de analito
correspondiente al 100 % de ste en la muestra.
Mtodo I
Seleccionar al menos dos niveles, superior e
inferior de la cantidad del analito (intervalo) y
preparar el placebo adicionado al menos por
triplicado cada nivel, manteniendo constante la
cantidad de placebo analtico en los tres niveles.
Mtodo II. No se conocen los componentes de la
muestra.
Un analista debe analizar la muestra con el mtodo, para
determinar el contenido del analito. El mismo analista
debe preparar por lo menos 3 muestra adicionadas, por
ejemplo utilizando la mitad de la muestra analtica que
originalmente requiere el mtodo y adicionar el analito
hasta completar lo que represente el 100 % de ste en la
muestra.
Mtodo II
Seleccionar al menos dos niveles, superior e
inferior de la cantidad del analito (intervalo) y
preparar la muestra adicionada al menos por
triplicado cada nivel, manteniendo constante la
cantidad de muestra en los tres niveles.
El intervalo de la concentracin del analito
adicionado, depende del propsito del mtodo y
debe incluir la especificacin. La siguiente tabla
sugiere intervalos para el estudio de linealidad, en la
cual la especificacin se maneja como porcentaje;
como por ejemplo el 100 % puede representar 100
mg/g de muestra, 10 ppm, 5 mg/ml, etc.
PROPSITO ESPECIFICACIN INTERVALO MNIMO
CONTENIDO/POTENCIA/VALORACIN LMITE INFERIOR (Li), Li- 10% a LS+10%
LMITE SUPERIOR (LS)
EJEMPLO
VALORACIN 90%-110% 80% a 120%
Por lo tanto los nivele podran
ser 80%, 100% y 120%
UNIFORMIDAD DE DOSIS 75%-125% 60% a 140%
Por l2o tanto los niveles podran
ser 60%, 100% y 140%
DISOLUCIN Q= 75% 40% a 130%
En el caso conservador, de llegar Por lo tanto los niveles podran
a tercera etapa, ninguna unidad ser 40%, 100% y 130%
es menor a Q-25%
CONTENIDO/ VALORACIN PARA LMITE SUPERIOR (LS) LS-20% a L-20%
PRUEBAS DE IMPUREZAS
EJEMPLO
Sustancias relacionadas No debe contener ms del 100% 80% a 120%
Por lo tanto los niveles podran
ser 80%, 100% y 120%
Reportar la relacin cantidad adicionada vs cantidad
recuperada. Utilizando el mtodo de estimacin por
mnimos cuadrados, calcular el valor de la pendiente
(b1), la ordenada en el origen (b0), el coeficiente de
determinacin (r2), el intervalo de confianza para la
pendiente (IC(b1), el intervalo de confianza para la
ordenada al origen (IC(b0) y el coeficiente de
variacin de regresin ( CVy/x).
Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo
adicionado o muestra adicionada, al obtener el cociente
de la cantidad recuperada respecto de la cantidad
adicionada expresada en porcentaje. Calcular el
promedio aritmtico (),
la desviacin estndar (DS), el
coeficiente de variacin (CV) y el intervalo de confianza
para la media poblacional IC(m) del porcentaje de
recobro.
Cantidad adicionada vs cantidad recuperada
r2 0.98
IC(b1) debe incluir la unidad.
IC(b0) debe incluir el cero.
El CVy/x del porcentaje de recobro, no debe ser mayor de 2%
si el mtodo es cromatogrfico,
no mayor de 2 % si el mtodo es volumtrico,
no mayor de 3 % si es qumico o espectrofotomtrico
no mayor del 5 % si es microbiolgico
no mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la
Porcentaje de recobro
El IC(m) debe incluir el 100 % o que el promedio aritmtico
del % de recobro se incluya en el intervalo:
98-102 % si el mtodo es cromatogrfico o volumtrico
97-103 % si el mtodo es qumico o espectrofotomtrico
95-105 % si el mtodo es microbiolgico.
El CV del porcentaje de recobro:
No debe ser mayor de 2 % si es mtodo es cromatogrfico o
volumtrico
No mayor de 3 % si el mtodo es qumico o
espectrofotomtrico
No mayor del 5 % si es microbiolgico.
FRMULAS Y PROCEDIMIENTOS DE
CLCULO CON EJEMPLO PARA LA
CANTIDAD ADICIONADA VS CANTIDAD RECUPERADA
Frmulas
Pendiente
n= nmero de mediciones (cantidad adicionada-cantidad
recuperada)
Ordenada al origen
Intervalo de confianza para la ordenada al origen
Coeficiente de variacin de regresin
1 2
0 = + 2
2

0 = 0 (0.975, 2) 0
/
/ =

CLCULO
Procedimiento de clculo
1.-Tabular los resultados
Cantidad adicionada (x)- cantidad recuperada (y) de
un mtodo cromatogrfico
TABLA: Cantidad adicionada (x)- cantidad
recuperada (y) de un mtodo cromatogrfico
Placebo analtico X (mg/mL) Y (mg/mL)
adicionado
1 1.860 1.857
2 1.860 1.885
3 1.860 1.861
4 2.479 2.482
5 2.479 2.485
6 2.479 2.491
7 3.099 3.126
8 3.099 3.115
9 3.099 3.122
CLCULO
3.- Calcular y S:
4.- Calcular el C.V
5.- Determinar y calcular IC()
PRECISIN DEL MTODO (PRECISIN INTERMEDIA
O TOLERANCIA INTERDA/ANALISTA)
Mtodo: Analizar por triplicado una muestra homognea
del producto que tenga un nivel cercano o igual al 100%
(en el caso de contenido/potencia/valoracin) o una
muestra homognea cuyo contenido est incluido en el
intervalo lineal de concentracin de linealidad del
mtodo ( para el caso de impurezas), en dos das
diferentes y por dos analistas diferentes.
Utilizar de preferencia la misma sustancia de referencia y
los mismos instrumentos y/o equipos. Reportar el
contenido/potencia/valoracin del analito de todas las
muestras.
CV 2% para mtodos cromatogrficos y volumtricos
CV 3% para mtodos qumicos o
espectrofotomtricos.
CV 5% para mtodos biolgicos.
No mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la
Valores superiores deben ser justificados.
FRMULAS Y PROCEDIMEINTO DE CLCULO
CON EJEMPLO PARA PRECISIN DEL MTODO
(PRECISIN INTERMEDIA)
A) FRMULAS:
Media aritmtica
Desviacin estndar
Coeficiente de variacin
n=nmero de muestras de
contenido/potencia/valoracin
B) PROCEDIMIENTO DE CLCULO
Tabla: CONTENIDO DE ANALITO EN mg/g PARA
UN MTODO BIOLGICO
ANALISTA
1 2
49.85 52.53
1 48.70 51.78
DA
50.04 51.80
53.43 51.86
2 53.12 52.44
54.12 52.30
y= Es el cociente porcentual de la cantidad recuperada

respecto de la cantidad adicionada.
CLCULOS

3.- Calcular Promedio y S:
4.- Calcular el C.V
ESTABILIDAD ANALTICA DE LA
MUESTRA
Mtodo: El analista debe establecer la etapa de anlisis
en la cual se desea evaluar la estabilidad, adems de
determinar si en dicha etapa es posible fraccionar
(muestras dependientes) o no (muestras independientes)
y las condiciones de almacenaje.
Para determinar la estabilidad analtica para muestras
dependientes, el analista debe procesar hasta la etapa
preestablecida por lo menos por triplicado una muestra
homognea.
Para determinar la estabilidad analtica para muestras
independientes, a partir de una muestra homognea,
el analista debe analizar por triplicado
(contenido/potencia/valoracin). Simultneamente y
de la misma muestra, procesar el nmero de muestras
necesarias para cada condicin de almacenaje hasta la
etapa de preestablecida (preparaciones) al menos por
triplicado.
Calcular la media aritmtica del anlisis
inicial(y0) y de cada condicin de almacenaje (yi).
Calcular la diferencia absoluta de la media
aritmtica de cada condicin di.
CRITERIO DE ACEPTACIN
di2% para mtodos cromatogrficos y

volumtricos
di3% para mtodos qumicos o
espectrofotomtricos
di5% para mtodos biolgicos
FRMULAS Y PROCEDIMIENTO DE
ESTABILIDAD ANALTICA DE LA MUESTRA
A) Frmulas:
Media aritmtica del anlisis inicial
0
0 =
0
Media aritmtica del anlisis de cada condicin de
almacenaje.

=

CLCULOS
Diferencia absoluta de la media aritmtica de cada

condicin de almacenaje respecto de la media
aritmtica del anlisis inicial
= 1 0
CLCULO
B).- PROCEDIMIENTO DE CLCULO
1.- Tabular los resultados:
2.- Calcular y0, y1, y2, y3, y determinar n0,n1,n2 y n3
3.- Calcular , , ,
4.- Calcular di:
Tabla: Contenido de analito en % para
un mtodo cromatogrfico
Muestra Inicial (y0) Tiempo de almacenamiento en el inyector

6 horas (y1) 24 horas (y2) 36 horas (y3)
1 100.05 99.50 100.26 98.31
2 99.98 99.31 99.50 98.50
3 100.10 99.50 99.31 98.31
LMITE DE DETECCIN
A) LD con base en seal de ruido
Mtodo: Este procedimiento aplica a mtodos que utilizan instrumentos para
medir la respuesta analtica y que presentan una seal de ruido basal. Un
analista debe determinar la respuesta de muestras blanco y la respuestas de
muestras analticas en un intervalo de concentraciones del analito que incluya
la especificacin de la prueba de impurezas lmite.
Determinar aquella cantidad del analito que genere una respuesta con
respecto a la muestra blanco en una proporcin de por lo menos de 3 a 1, lo
que corresponde a la concentracin asociada al lmite de deteccin. Este
procedimiento se utiliza para verificar el lmite de deteccin estimado por otros
procedimientos.
LMITE DE DETECCIN
El LD debe ser menor a la especificacin de la prueba de
impurezas lmite
B) LD con base en curva de calibracin y desviacin
estndar de los blancos
Mtodo: Este procedimiento aplica tanto a mtodos
instrumentales como a no instrumentales. Un analista
debe preparar por lo menos 3 concentraciones de la
sustancia de inters (analito, placebos adicionados,
etc.; segn proceda) a valores menores o que incluya la
especificacin de la prueba de impurezas lmite.
LMITE DE DETECCIN
Simultneamente, preparar por lo menos 5 blancos.
Medir las respuestas analticas. Para la curva de
calibracin, sin incluir los blancos, calcular el valor de
la pendiente (b1), el coeficiente de determinacin (r2) y
el intervalo de confianza para la pendiente (IC(b1)).
Para los blancos, calcular la desviacin estndar (Sb).
Calcular el lmite de deteccin con la siguiente
ecuacin:
3.3xSb
LD
b1
El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la

seal de ruido.
LMITE DE DETECCIN
r2 0.98
IC(b1) no debe incluir el cero
El LD debe ser menor a la especificacin de la prueba
de impurezas lmite.
Cualquier otro criterio de aceptacin debe ser
justificado.
LMITE DE DETECCIN
C) LD con base en la curva de calibracin y la
desviacin estndar de regresin
instrumentales como a no instrumentales. Un analista debe
preparar por lo menos 3 concentraciones de la sustancia de
inters a valores menores o que incluya la especificacin de
la prueba de impurezas lmite. Calcular el valor de la
pendiente (b1), el coeficiente de determinacin (r2), la
desviacin estndar de regresin (Sy/x) y el intervalo de
confianza para la pendiente (IC(b1)). Calcular el lmite de
deteccin con la siguiente ecuacin.
3.3xSy / x
LD
b1
LMITE DE DETECCIN
r2 0.98
de impurezas lmite.
justificado.
LMITE DE DETECCIN
D) LD con base en la curva de calibracin y la
desviacin estndar de la ordenada al origen.
Calcular el valor de la pendiente (b1), el coeficiente de
determinacin (r2), la desviacin estndar de regresin
(Sb0) y el intervalo de confianza para la pendiente
(IC(b1)). Calcular el lmite de deteccin con la
siguiente ecuacin.
3.3xS b 0
LD
b1
LMITE DE DETECCIN
r2 0.98
de impurezas lmite.
justificado.
LMITE DE DETECCIN (clculos)
1) Seal Ruido
Muestra Seal analtica
a) tabular resultados
Blanco 3525
o ruido
3* Ruido 10575
Analito ppm
0.5 4215
1 6954
1.5 9267
2 11045
2.5 13578
El LD se estima en 2 ppm, que es la cantidad de analito inmediatamente posterior

a 3 veces el ruido
2) Curva de calibracin basado en la desviacin
estndar de los blancos.
A) Frmulas para la curva de calibracin
Pendiente
1 =
2 ( )2
2
( )
2=
(( 2 ) 2 )( 2 2 )
1 = 1 (0.975, 2) 1
1
1 =
( ) 2
2

2 1 0
=
2
B) Frmulas para los blancos (DE).
C) Frmula para el lmite de deteccin

D) Procedimiento de clculo para la curva de calibracin
1) Tabular los resultados
2) Calcular x, y, x2, y2, xy y determinar n
Muestra X (ppm) Y (absorbencia)

1 0.963 0.315
2 0.963 0.314
3 1.284 0.417
4 1.284 0.418
5 1.605 0.522
6 1.605 0.521
7 1.926 0.629
8 1.926 0.629
3.- Calcular b1 y r2
4.- Calcular b0 , Sy/x y Sb1
5.- Determinar en tablas t0.975, n-2 y calcular IC (b1)
t0.975,6=2.447
E) Procedimiento de clculo para los blancos
1.- Tabular resultados
2.- Calcular y, y2 y determinar n
Blancos Y (Absorbencia)
1 0.003
2 0.004
3 0.006
4 0.002
5 0.004
F) Clculo del lmite de deteccin
3.- Curva de calibracin basada en la desviacin
estndar de regresin
A)Frmulas: Pendiente, Coeficiente de determinacin,
Intervalo de confianza para la pendiente y lmite de
deteccin
Muestra X (ppm) Y( absorbencia)

1 0.963 0.315
2 0.963 0.314
3 1.284 0.417
4 1.284 0.418
5 1.605 0.522
6 1.605 0.521
7 1.926 0.629
8 1.926 0.629
4.- Curva de calibracin basada en la desviacin
estndar de la ordenada al origen
A)Frmulas: Pendiente, Coeficiente de determinacin,
Intervalo de confianza para la pendiente , desviacin
estndar de la ordenada al origen y lmite de deteccin
1 2
0 = + 2
2

6.- calcular X y Sb0
7.- Calcular lmite de deteccin
1 0.963 0.315
2 0.963 0.314
3 1.284 0.417
4 1.284 0.418
5 1.605 0.522
6 1.605 0.521
7 1.926 0.629
8 1.926 0.629
LMITE DE CUANTIFICACIN
Para la estimacin del lmite de cuantificacin se
sugieren los siguientes procedimientos:
Seal de ruido
Mtodo:
Este procedimiento aplica a mtodos que utilizan un
instrumento para medir la respuesta analtica y que
presentan una seal de ruido basal. Un analista debe
determinar la seal de muestra blanco (reactivos,
placebos, etc., segn proceda) y la seal analtica de
muestras (analito, placebos adicionados, segn proceda)
a concentraciones
Conocidas del analito, inferiores o que incluya la
especificacin del contenido/valoracin de la prueba
de impurezas. Determinar aquella cantidad del
analito cuya seal sea similar o mayor a la de la
muestra blanco en una proporcin de 10 a 1, lo que
corresponde a la cantidad asociada al lmite de
cuantificacin. Es necesario verificar que dicha
cantidad corresponda al lmite de cuantificacin,
evaluando la exactitud y repetibilidad del valor
estimado.
El LC debe ser menor a la especificacin del
contenido/valoracin de la prueba de impurezas
LC con base en la curva de calibracin y la
desviacin estndar de los blancos
instrumentales como a no instrumentales. Un
analista debe preparar por lo menos 3
concentraciones de la sustancia de inters (analito,
placebos adicionados, etc., segn proceda) a
valores menores o que incluya la especificacin de
contenido/valoracin de la prueba de impurezas, ya
sea por dilucin o por pesada independiente del
analito.
Simultneamente, preparar por lo menos 5 blancos
(reactivos, placebos, etc., segn proceda). Medir las
respuestas analticas. Calcular el valor de la
pendiente (b1), el coeficiente de determinacin (r2) y
el intervalo de confianza para la pendiente (IC(b1).
Para los blanco, calcular la desviacin estndar de
los blancos. Calcular el lmite de cuantificacin con
la siguiente ecuacin: (10) Sb
LC
b1
Evaluar la exactitud y repetibilidad del valor
estimado del lmite de cuantificacin
r2 0.98
justificado
LC con base en la curva de calibracin basado
en la desviacin estndar de regresin.
analito. Medir las respuestas analticas.
Calcular el valor de la pendiente (b1), el coeficiente
de determinacin (r2), las desviacin estndar de
regresin (Sy/x) y el intervalo de confianza para la
pendiente (IC(b1). Calcular el lmite de cuantificacin
con la siguiente ecuacin:
(10) S y / x
LC
b1
r2 0.98
justificado
LC con base en la curva de calibracin y la
desviacin estndar de la ordenada al origen
analito. Medir las respuestas analticas.
Calcular el valor de la pendiente (b1), el coeficiente
de determinacin (r2), las desviacin estndar de la
ordenada al origen (Sb0) y el intervalo de confianza
para la pendiente (IC(b1). Calcular el lmite de
cuantificacin con la siguiente ecuacin:
(10) Sb 0
LC
b1
r2 0.98
justificado
LMITE DE CUANTIFICACIN (clculos)
E) Procedimiento de clculo para los blancos
1.- Tabular resultados
Blancos Y (Absorbencia)
1 0.003
2 0.004
3 0.006
4 0.002
5 0.004
F) Clculo del lmite de deteccin
LMITE DE CUANTIFICACIN (clculos)
1 0.963 0.315
2 0.963 0.314
3 1.284 0.417
4 1.284 0.418
5 1.605 0.522
6 1.605 0.521
7 1.926 0.629
8 1.926 0.629
ROBUSTEZ
Mtodo: Se deben establecer aquellos
factores instrumentales (temperatura de la
columna, presin en la columna, velocidad
de flujo, etc.) y/o factores no
instrumentales (pH de fases, volmenes
de disolventes orgnicos para una
extraccin, etc.), relacionados al propio
mtodo, que se considere crticos.
ROBUSTEZ
En cada condicin de operacin distinta; as como

a la condicin normal, analizar la misma muestra
por lo menos por triplicado.
Reportar el contenido/potencia/valoracin del
analito para las muestras de condicin normal de
operacin y para la(s) muestra(s) de las otra(s)
condicin (es) de operacin, expresadas(s) como
%.
ROBUSTEZ
Calcular la media aritmtica de la condicin

normal de operacin (Y0 (prom)) y de cada
condicin de operacin diferente a la
condicin normal (Yi (prom)). Calcular la
diferencia absoluta de la media aritmtica de
cada condicin respecto a la condicin
normal di.
ROBUSTEZ
di 2% para mtodos cromatogrficos y
volumtricos
di 3% para mtodos qumicos o
espectrofotomtricos
di 5% para mtodos biolgicos
No mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la especificacin

del analito en la muestra.
FRMULAS Y PROCEDIMEINTO DE
ROBUSTEZ
A) FRMULAS:
MEDIA ARITMTICA DEL ANLISIS INICIAL

y0
y 0
n0
no= # de muestras de la condicin normal de operacin
MEDIA ARITMTICA DEL ANLISIS DE CADA CONDICIN DE
OPERACIN, DIFERENTE A LA CONDICIN NORMAL

yi
y i
ni
ni= # de muestras de la i-sima condicin de operacin
ROBUSTEZ
DIFERENCIA ABSOLUTA DE LA MEDIA ARITMTICA

DE CADA CONDICIN RESPECTO DE LA MEDIA
ARITMTICA DE LA CONDICIN NORMAL
= 1 0
ROBUSTEZ
B).- PROCEDIMIENTO DE CLCULO
1.- Tabular los resultados:
2.- Calcular y0, y1, y2 y determinar n0,n1 y n2

3.- Calcular promedios de cada y: y0 y1 y2
4.- Calcular di:
Valoracin (%) del analito: Robustez al % de un
componente de la fase mvil de un mtodo
cromatogrfico
CONDICIN
% 0.31 0.34 0.37

Muestra Baja (y1) Normal (y0) Alta (y2)
1 101.88 100.55 100.26
2 101.88 100.22 99.5
3 101.37 103.63 99.31
TOLERANCIA
Mtodo: Se deben establecer aquellos factores
ajenos al mtodo, como diferentes equipos, lotes de
reactivos, columnas, etc., que se puedan presentar
al reproducir el mtodo en otras condiciones de uso.
Fijar por lo menos 2 condiciones de uso y analizar
una misma muestra por lo menos por triplicado a
cada condicin.
Reportar el contenido/potencia/valoracin del analito
de todas las muestras.
Calcular la media aritmtica, desviacin estndar y
coeficiente de variacin del
contenido/potencia/valoracin
TOLERANCIA
CV 2% para mtodos cromatogrficos y
volumtricos
CV 3% para mtodos qumicos y
espectrofotomtricos
CV 5% para mtodos biolgicos
No mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la especificacin

del analito en la muestra.
CON EJEMPLO PARA TOLERANCIA
A) Frmulas:
Media aritmtica =

Desviacin estndar 2 ( )2
=
Coeficiente de variacin ( 1)

= 100

n= nmero de muestras de contenido/potencia/valoracin
CLCULOS
Ejemplo:
3.- Calcular promedio y S (DE)
4.- Calcular el C.V
VALORACIN DEL ANALITO
TOLERANCIA DE UN MTODO CROMATOGRFICO
A EQUIPOS
Muestra HPLC 1 HPLC 2
1 98.69 97.9
2 98.51 97.5
3 98.35 98.11
COMPARACIN DE DOS MTODOS
ANALTICOS: REPETIBILIDAD EN
EXACTITUD
Placebo analtico adicionado Mtodo A Mtodo B
1 101.22 100.08
2 99.56 100.59
3 100.39 100.22
4 99.11 99.97
5 100.19 100.47
6 100.95 99.85
1.- Calcular varianza de cada mtodo y para fines de
clculo del intervalo de confianza para la razn de
varianzas
Establecer:
Intervalo de confianza para la razn de varianzas
se buscan en tablas F de Fisher

n1= nmero de recobros del mtodo de varianza menor
n2= nmero de recobros del mtodo de varianza mayor
Criterio de aceptacin: El intervalo de confianza para la

razn de varianzas, debe incluir el valor de 1.
justificado
Ejercicio: COMPARACIN DE DOS MTODOS
ANALTICOS: REPETIBILIDAD EN LINEALIDAD DEL
MTODO
Mtodo A Mtodo B
Cantidad Adicionada Cantidad recuperada Cantidad Cantidad
(mg/g) (mg/g) Adicionada recuperada
(mg/g) (mg/g)
400.00 392.88 400.00 407.72
400.00 389.88 400.00 409.24
400.00 397.72 400.00 398.36
400.00 393.76 400.00 405.60
500.00 513.65 400.00 398.36
500.00 497.20 500.00 493.95
500.00 494.00 500.00 511.90
500.00 489.00 500.00 493.85
550.00 543.02 500.00 393.80
550.00 535.15 500.00 497.20
550.00 545.82 550.00 534.49
550.00 534.38 550.00 545.10
550.00 550.17
550.00 551.93
550.00 535.21

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SEMESTRE 2017-2

PRECISIN DEL SISTEMA

4.- Calcular el C.V

2.- No se conocen los componentes de la muestra.

Un analista debe analizar la muestra con el mtodo, para determinar el

Se conocen los componentes de la muestra y es

y= Es el cociente porcentual de la cantidad recuperada

2.- Calcular y, y determinar n

di2% para mtodos cromatogrficos y

Diferencia absoluta de la media aritmtica de cada

Muestra Inicial (y0) Tiempo de almacenamiento en el inyector

El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la

El LD se estima en 2 ppm, que es la cantidad de analito inmediatamente posterior

C) Frmula para el lmite de deteccin

Muestra X (ppm) Y (absorbencia)

Muestra X (ppm) Y( absorbencia)

En cada condicin de operacin distinta; as como

Calcular la media aritmtica de la condicin

No mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la especificacin

DIFERENCIA ABSOLUTA DE LA MEDIA ARITMTICA

% 0.31 0.34 0.37

No mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la especificacin

Muestra HPLC 1 HPLC 2

se buscan en tablas F de Fisher

Criterio de aceptacin: El intervalo de confianza para la

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