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Guia de Metodos de Analisis Por HPLC 2013-2 PDF
Guia de Metodos de Analisis Por HPLC 2013-2 PDF
ESCUELA DE QUIMICA
FACULTAD DE CIENCIAS
INSTRUMENTAL ANALITICO
Caracas 2013
Profa. Rosa Amaro
Prof. Luis Gmez
Prfa. Yosmery Vita
Prof. Mara A. Alvarez
TABLA DE CONTENIDO
Contenido
Prlogo . 3
Determinacin de cido ascrbico en una pastilla de vitamina C .. 5
Determinacin de cafena en refresco (PEPSI) 6
Determinacin de cafena, acetaminofn y/ acido acetilsaliclico en analgsicos8
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PRLOGO
Equipo
El equipo de cromatografa que se encuentra en el laboratorio de Instrumental analtico
tiene las siguientes caractersticas:
Cromatgrafo de lquidos de alta eficiencia, marca Jasco Modelo L6-2080-02 Terniary
gradient, Bomba Jasco PU-2080 plus HPLC, Desgasificador Populaire.
Detector: UV/Vis 2075 plus ( Fotomultiplicador)
Jeringa: Tipo Hamilton, apreciacin: 2 L
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Columna de acero Inoxidable (fase estacionaria: C18); Longitud: 250 mm; Dimetro
interno: 4.6 mm; y Tamao de partcula del soporte: 5 m.
Objetivos
General:
Especficos:
Parte Experimentales
Condiciones Experimentales
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Esquema 2. Preparacin de la muestra
pesar 0.30000 g
Diluir: 0,40 mL en 25 mL
Nota:
- Realizar el procedimiento para tres pastillas (concentracin promedio y dispersin en
el lote de pastillas). Para una de las pastillas realizar el procedimiento por triplicado
(concentracin promedio en la pastilla y precisin del procedimiento de anlisis).
Referencias
Justificacin
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la intoxicacin con cafena son similares a los del pnico y de ansiedad generalizada. La
*LD50 estimada de la cafena es de 10 g, cuyo equivalente es de un promedio de 51
tazas de caf.
Objetivos
General:
- Determinar el contenido de cafena en un refresco (PEPSI) por HPLC.
Especficos:
- Ajustar las condiciones experimentales para la determinacin de la cafena en el
refresco.
- Determinar el contenido de cafena en la muestra problema aplicando el mtodo de
calibracin absoluta.
- Determinar la exactitud y la precisin de los resultados analticos obtenidos a travs
del mtodo aplicado.
Parte Experimentales
Condiciones Experimentales
- Volumen de inyeccin 10L
- Deteccin a 254 nm
- Flujo y presin a optimizar
- Fase mvil a optimizar (usualmente: 60% agua, 40% metanol)
Preparacin de la muestra
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DETERMINACIN DE CAFENA, ACETAMINOFN Y/ ACIDO
ACETILSALICLICO EN ANALGSICOS.
Justificacin
Los analgsicos son medicinas que reducen o alivian los dolores de cabeza, musculares,
artrticos y muchos otros achaques y dolores. Existen muchos tipos diferentes de
analgsicos y cada uno tiene sus ventajas y riesgos. Algunos tipos de dolor responden
mejor a determinadas medicinas que a otras. Adems, cada persona puede tener una
respuesta ligeramente distinta a un analgsico.
La cafena es una sustancia bastante conocida por todos pero de la que en realidad, se
ignoran muchos aspectos que pueden influir en la actividad fsica. La cafena ha sido
consumida por el hombre desde hace siglos. Constituye la sustancia psicoactiva ms
empleada en el mundo y se encuentra naturalmente en las hojas de t, los granos de caf
y en el cacao. La cafena es un estimulante directo y moderado del sistema nervioso
central y tambin estimula el corazn y el sistema cardiovascular.
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Objetivos.
General:
- Determinar el contenido de cafena, acetaminofn y/ acido acetilsaliclico en
frmaco usando la tcnica de cromatografa de lquidos de alta eficiencia (HPLC).
Especficos:
- Optimizar las condiciones de anlisis para la mezcla de componentes en el frmaco
- Determinar cuantitativamente los componentes el frmaco mediante curva de
calibracin externa.
- Comparar la precisin del anlisis y la precisin del lote de pastillas.
Parte Experimental
Condiciones Experimentales
- Volumen de inyeccin: 10 L
- Deteccin a 254 nm
- Flujo y presin a optimizar
- Soluciones para preparar las fase mvi:
- Solucin A: 1000 mL de una solucin acuosa al 1% cido actico
- Solucin B: 1000 mL de una solucin de Metanol grado HPLC al 1% cido actico
(El cido actico se emplea para igualar la fuerza inica de las fases y no define la
polaridad de las mismas).
Anlisis Cualitativo
Procedimiento:
- Prepare soluciones madres de 1000 mg/L de cada patrn. Para ello se disuelve el
slido correspondiente en 40,0 mL de la solucin B y se enrasa a un volumen 100,0
mL usando la solucin A.
- Prepare por dilucin soluciones patrn: Prepare 25 mL de soluciones estndares que
contengan: a) 10 mg/L de acetaminofn; b) 300 mg/L de acetilsaliclico; y c) 60
mg/L de cafena. Use la fase mvil A para enrasar cada una de ellas.
- Prepare 50 mL de una solucin estndar que contenga la mezcla de: 10 mg/L de
acetaminofn, 300 mg/L de acetilsaliclico y 60 mg/L de cafena. Use la fase mvil A
para realizar el enrase.
- Prepare la solucin de muestra de acuerdo al procedimiento descrito en las practicas
anteriores
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a- Inyecte la solucin patrn mezcla de los componentes, filtrando previamente < 45 um
y emplee la fase mvil de polaridad intermedia, as como el flujo y presin intermedios.
b. De acuerdo al cromatograma obtenido, razone el cambio de la fase mvil que debe
utilizar para la separacin apropiada de los componentes.
c. Empleando la fase mvil apropiada, modifique el flujo y luego la presin para obtener
el mejor cromatograma.
d- Bajo las condiciones ptimas inyecte las soluciones de cada patrn por separado para
identificar cada componente.
Curva de calibracin.
Anlisis de la muestra
Diluya cada una de las soluciones (0,1 0,2 mL en 10 mL) para determinar los
componentes de alta o baja concentracin, respectivamente
Referencias
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