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Inmunohistoquimica 1 PDF
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FUNDAMENTOS BIOLGICOS DE
INMUNOHISTOQUMICA
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Fundamentos biolgicos de inmunohistoqumica
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MDULO 7: TCNICAS DE INMUNOHISTOQUMICA Y BIOLOGA MOLECULAR
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Fundamentos biolgicos de inmunohistoqumica
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UNIDAD FORMATIVA 2:
ASPECTOS TCNICOS DE LA
INMUNOHISTOQUMICA
2. 1. Marcaje inmunohistoqumico
2. 2. Procesamiento en inmunohistoqumica
2. 3. Aplicaciones de la histoqumica
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2. ASPECTOS TCNICOS DE LA
INMUNOHISTOQUMICA
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Aspectos tcnicos de la inmunohistoqumica
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pasndolo por un bao de solucin tamponada por ltimo. Los cortes de parana
se obtienen de un grosor de 3 - 5 micrmetros y se dejan secar toda la noche en la
estufa a 37 C.
Los uorocromos son molculas qumicas que absorben la luz a una determinada
longitud de onda emitiendo otra diferente. Se caracterizan por sus espectros de
excitacin y emisin que varan segn el tipo de uorocromo. Su capacidad de
absorber fotones de alta energa procedente de la radiacin ultravioleta o del espectro
visible provoca una redistribucin de los electrones de las molculas uorescentes,
puesta de maniesto por la emisin de una radiacin luminosa de longitud de onda
distinta aunque dentro del espectro visible.
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Aspectos tcnicos de la inmunohistoqumica
Si al iluminar una sustancia con luz visible ocurre un fenmeno similar al descrito
y la liberacin de energa se produce de forma gradual, prolongndose la emisin de
luz despus de cesar la iluminacin del objeto, estaremos ante un fenmeno llamado
fosforescencia. Hay uorocromos que producen el llamado fenyPeno de 4uengcKin
(se produce por la colisin entre molculas, ambas con capacidad de uorescencia,
disminuyndose as la intensidad de la uorescencia emitida).
Estas sustancias pueden unirse de forma covalente a los anticuerpos sin alterar
la unin de stos a sus correspondientes antgenos, por ello esta capacidad es
muy til para visualizar los lugares donde reproduce la reaccin Ag-Ac.
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Anticuerpos Parcados:
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E/I6A directo.
9
E/I6A indirecto: Es el ms utilizado en la deteccin de anticuerpos. .
9
E/I6A sandZicK:
Heterlogo (HADAS)
Doble (DAS)
Antgeno Parcado
9 E/I6A coPpetitivo: Se parte de un anticuerpo poli o monoclonal, frente
a un antgeno conocido, que previamente ha sido jado en la placa. Se le
denomina de competicin porque el suero problema es incubado previamente
con el antgeno, antes de incubarlo con el antisuero jado en la placa, y por
tanto compite con l. Los pasos siguientes sern los de adicin e incubacin
del conjugado, lavado y nalizacin con el sustrato y lectura.
7odos los tipos de ELISAs citados se pueden resumir en dos grandes grupos:
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Aspectos tcnicos de la inmunohistoqumica
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Amiloide del tipo AA marcado con anticuerpo monoclonal anti-AA. Se trata de una reaccin
positiva de la peroxidasa (colorante unido al anticuerpo anti-AA).
Estos complejos PAP van a actuar como trazadores de la reaccin Ag-Ac. Para
obtener los Ac especcos frente a la peridoxidasa, se le inocula previamente
al animal, y luego se extraen del suero para someterlos a tcnicas in vitro con
la peroxidasa. As se formarn, a travs de una reaccin de precipitacin, los
complejos Ac-Ag peroxidasa-antiperoxidasa o complejos PAP.
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Aspectos tcnicos de la inmunohistoqumica
En caso de que los tejidos sean muy ricos en peroxidasa endgena se utiliza
como trazador la fosfatasa alcalina, para cuyo revelado se utilizan otras sustancias.
Por otro lado la biotina, es una vitamina de bajo peso molecular que se encuentra
en la yema del huevo y se conjuga fcilmente con Ac y enzimas marcadoras por
ligarse de forma covalente a cadenas laterales amino o carbonilo. Pueden unirse
hasta 150 molculas de biotina por una sola molcula de Ac.
Bazo. Representa una inmunorreaccin para vPRRS (virus del sndrome respiratorio y
reproductivo en cerdos) en los macrfagos de la pulpa esplnica. Complejo ABC, contrateido
con hematoxilina. 200X.
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En cuanto a la metodologa del oro coloidal, hay que tener en cuenta su baja
capacidad de penetracin en los tejidos y por tanto pueden enmascarar anticuerpos
al unirse a jadores como glutaraldehdo o tetrxido de osmio. Su aplicacin
ideal es en tejidos poco jados y cortados con crioultramicrotomos. 7ambin da
buen resultado en tejidos frescos o jados y cortados con vibratomo empleando
7ritn x-100 o 7Zin 20 en las soluciones de lavado. Actualmente los problemas
que sufre la muestra por jadores, detergentes y sometimiento a temperaturas
ms altas, se estn disminuyendo con el uso de resinas sintticas hidroflicas que
adems de polimerizar a bajas temperaturas, no requieren oxidantes ni uso de
osmio (provocando menor prdida de antgenos).
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Aspectos tcnicos de la inmunohistoqumica
En estos casos citados, se entiende que el anticuerpo podr ser marcado sin
que merme su capacidad inmunoreactiva. El marcaje de protenas o pptidos con
yodo radiactivo (I125 I132) puede realizarse por diferentes mtodos.
2.2 PROCESAMIENTO EN INMUNOHISTOQUMICA
En el siguiente esquema se puede ver un resumen de todo el proceso, que a
continuacin se desarrollar:
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Aspectos tcnicos de la inmunohistoqumica
CD68 Macrfagos
S100 Clulas de SchZann
HMB-45 Melanocitos
AE1 Citoqueratinas de bajo peso molecular
AE3 Citoqueratinas de alto peso molecular
DESMINA Clulas musculares
GFAP Gla
CEA Antgeno carcino-embrionario
AFP Alfa-fetoprotena
REN Receptores nucleares de estrgenos
VIM Sarcomas
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