Biología General Ciclo I – 2023 BIG173 Práctica de Laboratorio Nº1

UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR
FACULTAD MULTIDISCIPLINARIA PARACENTRAL
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AGRONOMICAS
BIOLOGIA GENERAL
PRACTICA DE LABORATORIO No.1

EL MICROSCOPIO

Los microscopios son aparatos que, en virtud de las leyes de formación de imágenes
ópticas aumentadas a través de lentes convergentes, permiten la observación de
pequeños detalles de una muestra dada que a simple vista no se percibirían. El estudio
detallado de microorganismos y de los componentes de células y tejidos animales y
vegetales, por el tamaño que poseen requiere del uso de estos instrumentos que
permitan ampliar muchas veces más la imagen de las estructuras que los constituyen.

El nombre del microscopio deriva etimológicamente de dos raíces riegas: mikrós que
significa pequeño y skopéo, que significa observar; es un instrumento que permite
visualizar cerca y aumentados cuerpos pequeños y sus detalles estructurales, cuyas
dimensiones son inferiores al límite del poder de resolución del ojo humano.

Existen dos tipos de microscopios que emplean la luz como fuente de energía para
formar imágenes aumentadas y detalladas de objetos: 1) Microscopio óptico simple o lupa
y 2) Microscopio óptico compuesto. El microscopio simple o lupa es un instrumento de
amplificación de imágenes que cosiste en la utilización de un lente convergente en un
solo sistema óptico. Los microscopios ópticos compuestos se denominan así porque la
imagen se forma mediante la utilización de tres sistemas de lentes, cada uno de ellos
constituidos por lentes convergentes y divergentes, produciendo aumentos hasta de
1800 veces. Los sistemas de lentes son el condensador, los objetivos y los oculares.
(Montalvo Arenas 2010, Narváez Armas sf).

El descubrimiento del microscopio compuesto tuvo un precedente atribuido a Galileo

(1564 – 1642). El verdadero impulsor de la microscopia fue sin duda, el holandés Antón
Van Leeuwenhoek (1632 – 1723). Construyo microscopios simples, con los cuales realizo
observaciones muy diversas: estudio la composición de la sangre, fue el primero en
observar y dibujar los protozoos y descubrió las bacterias entre otras.

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Hoy día, hay unanimidad en considerar a los holandeses Hans y Zacarias Janssen,
padre e hijo como constructores del primer microscopio compuesto en 1590. Desde
entonces y hasta nuestros días, el microscopio compuesto no ha cesado de
perfeccionarse. Pese a todo, el microscopio óptico presenta una serie de limitaciones que
le impone la naturaleza de la propia luz. Es por ello que los investigadores tuvieron la
idea de utilizar haces de electrones en lugar de rayos luminosos y potentes
electroimanes, en lugar de lentes; con ello nació el microscopio electrónico. No obstante,
en la actualidad el microscopio óptico es un instrumento de uso cotidiano en los
laboratorios de investigación y de diagnóstico en las aulas de enseñanza.

El conocimiento de las estructuras del ser vivo está basado casi totalmente en el estudio
con el microscopio. El microscopio óptico es un instrumento que permite la observación
de objetos y detalles de estructuras tan pequeñas que no podrían ser observadas a
simple vista. Con él, nuestro grado de visibilidad se amplía en cientos o miles de veces,
gracias a un conjunto de lentes, dispuestos convenientemente. Las principales
dificultades en la observación y estudio de estructuras biológicas son su REDUCIDO
TAMAÑO Y SU TRANSPARENCIA a la luz visible. Dado que el microscopio permite
superar estas dos dificultades, su uso y el conocimiento de los principios y técnicas en
microscopía, resultan fundamentales para el desarrollo de la investigación en ciencias
biológicas.

TIPO DE MICROSCOPIOS
➢ Microscopio de transparencia o de campo claro: Este microscopio se
caracteriza porque emplea luz natural o luz artificial como energía luminosa para
formar las imágenes del objeto que se observa. La imagen muestra puntos o áreas
iluminadas (generalmente coloreados) sobre un fondo claro o transparente. Para
que a imagen sea visible con nitidez es necesario que el objeto examinado este
coloreado o teñido, es decir que los componentes celulares y tisulares de la
estructura se contrasten mediante colorantes específicos que absorban y
transmitan determinadas longitudes de onda del espectro visible. Como en la
mayoría de los casos, la luz pasa a través de muestras transparentes o
traslucidas con poca o sin definición de la estructura. (Montalvo Arenas 2010,
Narváez Armas sf.; Solís Rojas 2005)

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➢ Microscopio de campo oscuro: Se denomina así porque la imagen que se forma

está constituida por una serie de estructuras brillantes sobre un fondo oscuro.
Permite ver el contorno de las bacterias y su movilidad. Permite ver los
microorganismos sin teñir (Montalvo Arenas 2010, Narváez Armas sf.; Solís Rojas
2005).

➢ Microscopio de contraste de fases: Es el microscopio fotonico más utilizado

para observar estructuras transparentes sin teñir. Al igual que el microscopio de
campo oscuro facilita la observación de células vivas para distinguir y analizar
sus componentes morfológicos y ciertas funciones que ellas puedan desarrollar
(fagocitosis, mitosis, movimientos ameboideos, ciliares o flagelares, entre otras).

Los microscopios ópticos descritos tienen una capacidad máxima de mostrar detalles
de la imagen de un objeto (poder de resolución) cuando entre ellos existe una distancia
aproximada de 0.2 micrometro. Estos tipos de microscopios son incapaces de ofrecer
un poder de resolución mayor porque existen dos factores limitantes: la longitud de
onda de la energía luminosa utilizada y la apertura numérica (A.N.) de la lente
del objetivo. La AN es la expresión matemática que describe la forma en que la luz es
concentrada por el condensador y captada por el objetivo (Montalvo Arenas 2010,
Narváez Armas sf.; Solís Rojas 2005).
➢ Microscopio estereoscópico: Este tipo de microscopio proporciona una imagen
estereoscópica, en tres dimensiones (3D) del espécimen. Se fundamenta en la
visión binocular convencional, en la que los dos ojos observan el espécimen con
ángulos levemente distintos. El microscopio estereoscópico debe ser binocular.
Se utiliza para observar especímenes de gran tamaño, sin corte o preparación
previa puesto que emplea luz incidente y no funciona por trans-iluminación. Es
útil para observar objetos opacos y de poco aumento (4 a 40X). Es ideal para
realizar microdisección (Solís Rojas 2005).

➢ Microscopio electrónico: La única manera de aumentar el poder de resolución

de un microscopio fue encontrar energía radiante con longitudes de onda
menores a las que posee el espectro radiante visible, lo que se ha logrado con la
fabricación del microscopio electrónico.

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Existen dos tipos de microscopios electrónicos: el microscopio electrónico de

transmisión y el microscopio electrónico de barrido (scanning)

➢ Microscopio electrónico de transmisión: Fue diseñado y construido basándose

en los mismos principios de un microscopio fotónico; con la diferencia que en vez
de usar energía luminosa emplea haces de electrones y reemplaza las lentes
ópticas (de vidrio) por “lentes” construidas mediante campos electromagnéticos.

➢ Microscopio electrónico de barrido (Scanning): Este tipo de microscopio

electrónico funciona con los mismos principios electrónicos del M.E. de
transmisión: una fuente generadora de electrones, campos electromagnéticos que
actúan como “lentes” concentradores de los haces de electrones o como
ampliadoras de imágenes. La diferencia estriba en que los electrones no
atraviesan el espécimen para formar las imágenes.

OBJETIVOS DE LA PRACTICA.
La presente práctica tiene por objetivos:
1. Identificar las partes del microscopio compuesto y manipularlo correctamente
2. Aprender a realizar preparaciones no permanentes.
3. Realizar una observación con este instrumento.
4. Conocer y comparar dos tipos de microscopios.

Materiales de Laboratorio Materiales que aportara el Estudiante

Microscopio Compuesto Muestras de Agua Estancada.

Láminas porta-objetos. Goteros
Láminas cubre-objetos. Papel Toalla (rollo)
Jabón Líquido

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TIPOS DE MICROSCOPIOS

Fig.1 MICROSCOPIOS ELECTRONICOS

Fig.2 ESTEREOMICROSCOPIO Fig.3 MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES

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El Microscopio óptico compuesto

PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

• Sistema óptico
o OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del
objetivo.
o OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de
ésta.

Objetivos de un microscopio.

o CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la

preparación.

o DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

o FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

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• Sistema mecánico
o SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el
brazo.
o PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
o CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular,
binocular
o REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar,
cambiar los objetivos.
o TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y
micrométrico que consigue el enfoque correcto.

Fig. Microscopio compuesto u óptico.

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Propiedades del microscopio:

Poder de resolución: distancia mínima entre dos puntos próximos que pueden verse
separados. El ojo humano tiene un poder de resolución de 1/10 de milímetros, o sea,
de 100 micras. El microscopio óptico tiene un poder de resolución de 0,2 micras o 200
nanómetros o 2000 Angstron, mejoran la visión unas 500 veces a la del ojo humano.

Poder de ampliación: Es la magnificación total que sufre la imagen del objeto debido
al efecto de los lentes oculares y objetivos. Se obtiene multiplicando el número de veces
que aumenta el lente ocular por el número de veces que aumenta el lente objetivo. Si el
objetivo aumenta la imagen de un objeto 40 veces, ésta al pasar por la lente ocular será
nuevamente aumentada.

Si el ocular aumenta 10 veces, la magnificación total en este caso será:

10X x 40X = 400X.

Este resultado permite saber cuánta vez más grande estamos viendo la imagen de un
objeto.

Distancia de Trabajo: Es la distancia que existe entre el objeto en observación y el lente

objetivo. Esta distancia variará según el aumento del lente objetivo con la cual se
trabaje. Es inversamente proporcional al grado de aumento; es decir, cuanto mayor sea
el aumento del lente objetivo menor será la distancia de trabajo. Cuando se trabaje con
un lente de inmersión la distancia de trabajo será mínima. En estos casos es necesario
usar aceite de inmersión entre el lente objetivo y la preparación debido a que el índice
de refracción para este tipo de lente es la del aceite y no la del aire. Esto permite obtener
una imagen de gran tamaño y al mismo tiempo de gran nitidez.

MANEJO DEL MICROSCOPIO

1. Limpiar el espejo, condensador y los lentes del microscopio, se realiza de la siguiente

manera:

a. Eliminar el polvo mediante un soplete de aire o pincel fino.

b. Frotar sin presionar, con papel de lente, usando este solo una vez.

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2. Comprobar si el lente objetivo de menor aumento está a continuación del tubo; si no

es así, debe colocarse en dicha posición haciendo girar el revolver hasta alcanzar un
"tope" que lo indique.

3. Abrir completamente el diafragma y observando a través del ocular, mover el espejo

orientándolo de modo que la luz reflejada se observe en un círculo uniformemente
iluminado. Este constituye el "campo óptico". Una vez obtenida la iluminación
máxima, NO SE DEBE CAMBIAR LA POSICION DEL MICROSCOPIO. Con luz
incorporada no hay espejo.

4. Ubicar y sujetar el porta-objetos en la platina, procurando que la preparación se halle

en el centro de la abertura circular.

5. Mover el tornillo macrométrico para acercar el lente objetivo de menor aumento hacia
la preparación, hasta llegar a un tope.

6. Observando por el lente ocular, mover nuevamente el tornillo macrométrico en el

sentido inverso hasta que aparezca la imagen.

7. Una vez enfocada la imagen girar el tornillo hasta que sea nítida. Nunca se debe usar
el tornillo micrométrico para grandes desplazamientos, para ello está el tornillo
macrométrico.

8. Cuando los tornillos macro y micrométrico se encuentren incorporados en un solo

dispositivo, el ajuste fino se hace solo después de haber realizado el avance rápido de
acercamiento a la preparación.

9. Antes de pasar al siguiente aumento verificar que la imagen a observar se encuentre

en el centro del campo, hacer girar el revolver cambiando el lente objetivo hasta llegar
al "tope" y accionar solamente el tornillo micrométrico hasta obtener la nueva imagen.

10. Para observar una muestra con el objetivo de inmersión, se coloca una gota de aceite
de cedro encima de la lámina de la preparación antes de girar el revolver. Esto permite
que la imagen se vea con nitidez para realizar la observación ya que este tipo de lentes
requiere que el índice de refracción sea similar al del vidrio.

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11. Terminada la observación, girar el revólver para colocar el objetivo de menor

aumento en la primera posición de trabajo.

12. Retirar la preparación y dejar limpio el microscopio, secando la platina con cuidado.

13. Si usó el objetivo de inmersión, debe limpiarse inmediatamente después de su uso

con ayuda del papel de lente. Quitar el grueso del aceite con una hoja, luego limpiar
con una segunda impregnada en xilol y finalmente con una tercera, secar el lente.
No usar cantidades excesivas de solvente pues puede disolver el cemento de los
componentes de los lentes.

14. Mantener cubierto o guardado el microscopio cuando no esté en uso.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición
de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del
borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su
funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma
prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del
polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el
microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en
el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos
recomendable). En cualquier caso, se pasará el papel por la lente en un solo sentido
y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que
limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este
tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar
las lentes y su sujeción.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico,
micrométrico, platina, revólver y condensador).

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7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la

preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de
objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando
a través del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún
líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño
humedecido en xilol.

PROCEDIMIENTO
Ejercicio N°1: COMPONENTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO
Con mucho cuidado y siguiendo las instrucciones del profesor, saque el microscopio del
comportamiento y colóquelo sobre la mesa de trabajo para estudiar sus partes visibles.
Los componentes de un microscopio compuesto son tres tipos: mecánicos, ópticos y
de iluminación (Montalvo Arenas 2010, Narváez Armas sf)

SISTEMA MECÁNICO: conjunto de piezas que sirven de soporte a las lentes y demás
elementos del microscopio.
Pie: base que sostiene todos los componentes del microscopio
Brazo: se apoya en la base y sostiene al tubo binocular, al revolver y a la platina. Permite
la sujeción y traslado del microscopio.
Tubo porta ocular: soporta los oculares y mantiene constante la distancia entre
oculares y objetivos. Los tubos porta oculares pueden ajustarse a la distancia entre los
ojos de cada persona. Además, existen anillos que regulan el enfoque individual para
cada ojo.
Tornillo Macrométrico: se utiliza para grandes movimientos en el enfoque (enfoque
aproximado)
Tornillo Micrométrico: se utiliza para pequeños movimientos (enfoque exacto)
Revolver: sostiene los objetivos y permite efectuar los cambios para pasar de un objetivo
a otro.
Platina: placa que sostiene las preparaciones; en el centro posee una abertura para dar
paso a la luz y su movimiento en cruz.

SISTEMA ÓPTICO: conjunto de lentes responsables del poder de aumento y resolución.

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OCULARES: conjunto de lentes que se encuentran en la parte superior del tubo porta
ocular. Su magnificación puede ser de 10X, 15X, y 20X; el más utilizado es el 10X.
OBJETIVOS: sistema de lentes con diferentes aumentos situados en el revolver. Los
objetivos son considerados los elementos más importantes en la formación de la imagen,
microscópica, ya que estos sistemas de lentes establecen la calidad de la imagen en
cuanto a su nitidez y la capacidad que tiene para captar los detalles de la misma.
La mayoría de microscopios ópticos compuestos tienen los siguientes objetivos:

Panorámico = 4X Seco Fuerte = 40X

Seco Débil = 10X Inmersión = 100X

SISTEMA DE ILUMINACIÓN: elementos que producen las radiaciones (luz visible o no)
y transmiten, reflejan y regular tanto la intensidad como la cantidad de rayos que van
a incidir sobre el espécimen.
Fuente de luz: generalmente consiste de una lámpara ubicada en la base del
microscopio o en su defecto puede ser un espejo que refleje la luz del sol.
Condensador: conjunto de lentes situados debajo de la platina y permiten concentrar
los rayos de luz que provienen de la fuente luminosa.
Diafragma: está unido al condensador y su función es regular el paso de los rayos de
luz.
Filtro: también está unido al condensador y su coloración permite atenuar la intensidad
de luz que se requiere.

Ejercicio N°2: OBSERVE Y ESTUDIE LOS COMPONENTES DEL MICROSCOPIO

ESTEROSCOPICO
ACTIVIDAD A: montaje del objeto
1. El material a observar se coloca en una lámina porta objetos, que es una pieza
delgada de vidrio de 1 X 3 y se cubre con otra pieza aún más pequeña y delgada
que se llama cubre objeto.
2. Coloque una gota de agua con gotero en el centro del porta objeto luego coloque
una muestra agua estancada.
3. Para colocar el cubre objeto forme un ángulo de 45° con respecto al porta objeto y
déjelo caer lentamente hasta que quede en contacto con la preparación. Si

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usted sigue estos pasos puede disminuir en gran parte la formación de burbujas
y la preparación será mejor. Una preparación microscópica perfecta no debe tener
burbujas.
ACTIVIDAD B: enfoque correcto
Luego que ha hecho su preparación proceda a enfocarla correctamente:
1. Coloque la preparación sobre la platina del microscopio.
2. Sujete el porta-objeto con los brazos o pinzas de la platina. Antes de iniciar el
enfoque, el microscopio debe de estar alineado con el objetivo panorámico (4X).
3. Manipule el tornillo macro métrico y eleve la platina hasta que los hilos sean
visibles; centre la preparación moviendo la platina con los tornillos de arrastre.
4. Manipule despacio el tornillo micrométrico hasta lograr que la imagen de la
muestra de agua aparezca bien definida (imagen enfocada).
5. En seguida, para observar con objetivo seco débil (10X) gire el revólver y manipule
únicamente el tornillo micrométrico hasta lograr nitidez de la imagen. Regule la
intensidad de la luz manipulando el diafragma y observe detenidamente la
muestra.
6. A continuación, para observar con el objetivo seco fuerte (40X) gire el revólver y
manipule con mucho cuidado el tornillo micrométrico hasta lograr la imagen
enfocada.
7. APUNTES

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