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Trabajo Prctico No2

BUFFERS BIOLGICOS

OBJETIVOS
- A partir de la ecuacin de Henderson-Hasselbach calcular la concentracin de
(H+),(Aceptor de H+) o (Dador de H+).
-Conocer cmo se mantiene el equilibrio cido-base del metabolismo celular y
corporal
-Analizar cmo funcionan los buffers biolgicos ms importantes del organismo
-Reconocer diferentes patologas asociadas al equilibrio cido-base corporal.

Buffers biolgicos
Las soluciones de cidos dbiles y sus bases conjugadas se
comportan como "soluciones amortiguadoras" o "buffers" ya que tienden a
resistir los cambios de pH. El efecto amortiguador se produce debido al
equilibrio:
AH + H2O A- + H3O+
Si se agrega un cido, aumentar la [H+], pero el equilibrio se desplazar hacia
la izquierda favoreciendo la formacin del cido, lo cual consumir los protones
aadidos. Si en cambio se agrega una base, se producir inicialmente una
disminucin de la [H+] y esto favorecer la disociacin del cido (el equilibrio se
desplazar hacia la derecha) que repondr los H+ gastados.
La eficacia del amortiguador o tampn depende de las [A -] y [AH], del pH del
medio y es mxima cuando este valor es prximo al pKa.

BUFFERS BIOLGICOS
El metabolismo celular genera permanentemente agua, calor y metabolitos
cidos.

Estos ltimos comprenden:

1.- cidos voltiles: el dixido de carbono (CO2) es un importante producto final
de la oxidacin de glcidos, lpidos y aminocidos. Se lo considera "cido" en
virtud de que reacciona con el agua para formar cido carbnico (H 2CO3), el
cual, por ser un cido dbil, se disocia en bicarbonato (HCO3-) y H+.
CO2 + H2O H2CO3
H2CO3 + H20 HCO3- + H30+
Se denomina "voltil" debido a que es un gas y puede ser eliminado por los
pulmones.

2.- cidos fijos: cido sulfrico (H2SO4) y cido fosfrico (H3PO4) provenientes
principalmente de las protenas de cuyo metabolismo procede alrededor del 65%
del total; fundamentalmente de la oxidacin de los aminocidos azufrados para
dar H2SO4 y de las fosfoprotenas para dar H3PO4. Este ltimo tambin es

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producto del metabolismo de los cidos nucleicos y de los fosfolpidos. Estos
cidos deben ser neutralizados y posteriormente eliminados por los riones. Por
ejemplo, las dietas de leche y carne generan unos 70 meq de H + por da y los
riones tienen que excretar a diario una cantidad semejante para mantener el pH
sanguneo.

3.- cidos orgnicos: la oxidacin parcial de glcidos, lpidos y aminocidos da

lugar a la formacin de cidos orgnicos (lactato, piruvato, acetoacetato, hidroxibutirato) siendo todos ellos cidos dbiles capaces de liberar H+.
Como se ve, la produccin potencial de H+ en el organismo es enorme. Con un
pH plasmtico normal de 7,4, la [H+] libres es slo de unos 0,0000398 meq/l. Esta
concentracin se debe mantener dentro de lmites muy estrechos ya que de ella
depende la acidez del medio que es un determinante fundamental de las
funciones celulares. Estos valores se conservan gracias a la accin de dos
mecanismos: los amortiguadores o buffers por un lado y los sistemas respiratorio
y renal como excretores de cidos por el otro.
Los sistemas buffers se pueden dividir en:
1.- extracelulares: HCO3- / H2CO3
HPO42- / H2PO4proteinatos
hemoglobina (HbO2 / HbH)
2. - intracelulares:
El sistema HCO3- / H2CO3 constituye el sistema regulador fisiolgico ms
importante del plasma. El cido carbnico con dos protones ionizables de
constantes pKa1=3,89 y pKa2=10,22, tendra una capacidad amortiguadora
pequea en los seres humanos si no fuera porque se deshidrata a CO 2 que
puede ser espirado. Esta reaccin est catalizada por la enzima anhidrasa
carbnica (AC).

AC
CO2 + H2O

H2CO3 HCO3- + H+

El sistema acoplado tiene un pKa de 6,1 y es adecuado para mantener el pH

sanguneo siempre que haya un exceso de bicarbonato con respecto al CO 2.
De todas maneras a pesar de que el sistema amortiguador de bicarbonato no es

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particularmente poderoso, tiene igual importancia que todos los dems del
cuerpo humano porque la concentracin de cada uno de los elementos del
sistema bicarbonato puede regularse: el CO2 por el sistema respiratorio y el
bicarbonato por los riones.

El buffer fosfato: es el principal sistema buffer de la orina y de los lquidos

intracelulares debido a que la concentracin de fosfatos a este nivel es varias
veces mayor que en los lquidos extracelulares y tambin porque el pH de los
lquidos intracelulares se halla generalmente ms cerca del pKa del buffer
fosfato. Adems tiene importancia en los lquidos tubulares de los riones por dos
motivos: en primer lugar, el fosfato suele concentrarse mucho en los tbulos, con
lo cual aumenta el poder amortiguador del sistema. En segundo lugar, el lquido
tubular se vuelve ms cido que los lquidos extracelulares acercndose al pKa
del sistema.
En el sistema fosfato el par conjugado efectivo para mantener el pH fisiolgico
es:
H2PO4-

HPO42- + H+

pKa= 6,8

En el plasma la relacin HPO42- / H2PO4- es 4/1.

En la orina a pH 5,4 predomina la forma cido conjugado.
Las protenas pueden funcionar como uno de los sistemas buffers ms
importantes de la sangre y los tejidos y su capacidad amortiguadora procede de
los grupos disociables que poseen los aminocidos que las forman. Sin embargo
el pKa de los grupos carboxilos de los aminocidos es de alrededor de 2 y el pKa
de los grupos amino es de alrededor de 9,5, lo cual se aleja del pH de la mayora
de los lquidos biolgicos.

Debido a que el pKa del grupo imidazol tiene un valor de 6, la histidina es el

nico aminocido con capacidad reguladora importante del pH fisiolgico. La
hemoglobina es una protena buffer efectiva debido a su alta concentracin y a
sus residuos histidina. Contribuye tambin a la efectividad el hecho de que la
desoxihemoglobina tiene grupos imidazlicos con un pKa ligeramente ms alto
que la oxihemoglobina. El CO2 producido en los tejidos entra al glbulo rojo en
donde es hidratado en una reaccin catalizada por la anhidrasa carbnica. El

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cido carbnico resultante se disocia rpidamente en bicarbonato y H +. Los H+
son aceptados por la hemoglobina cuyo poder buffer evita que disminuya el pH.

ALTERACIONES ACIDO-BASE
Muchas patologas estn asociadas con alteraciones del equilibrio cidobase. Teniendo en cuenta al sistema bicarbonato/C02 como principal sistema
amortiguador del pH, el estudio del estado cido base se basa en el anlisis de
los componentes de este sistema. Segn los valores de pH del plasma y el
componente del sistema buffer originalmente afectado, las alteraciones cidobase se clasifican clsicamente en los siguientes grupos: acidosis respiratoria,
acidosis metablica, alcalosis respiratoria y alcalosis metablica. Las condiciones
clnicas caracterizadas como metablicas se relacionan con las alteraciones en la
concentracin de HC03- y las llamadas respiratorias se relacionan con
perturbaciones de la presin parcial de CO2 (pC02).
Ante una alteracin cido-base el organismo pone en marcha mecanismos
compensadores. Por ejemplo, en una acidosis metablica se estimula el centro
respiratorio lo cual facilita la eliminacin del CO2. En la alcalosis metablica, la
respuesta es inversa y tiende a retener el CO2. Cuando el desequilibrio cidobase tiene origen respiratorio, el rin es el que produce la respuesta
compensadora. Esta respuesta no es instantnea y necesita varios das. En una
acidosis respiratoria aumenta la eliminacin de protones por orina y la
reabsorcin de bicarbonato. En una alcalosis respiratoria disminuye la excrecin
de protones y aumenta la eliminacin de bicarbonato.

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Las causas de las alteraciones del equilibrio cido-base pueden superponerse
originado condiciones mixtas que complican su identificacin.

Evaluacin del estado cido-base:

Acidemia: pH sanguneo < 7,35

Alcalemia: pH sanguneo > 7,45
Acidosis y alcalosis: estados patolgicos que pueden llegar a la acidemia o
alcalemia respectivamente. En el siguiente cuadro se muestran los parmetros
de laboratorio que caracterizan una alteracin cido-base y las respuestas
compensatorias de los sistemas renales y respiratorio para corregir el disbalance.

Acidosis metablica
La acidosis metablica se puede detectar por una disminucin del
bicarbonato plasmtico. Las causas de la prdida de bicarbonato pueden ser:
1.- Una mayor produccin de cidos orgnicos que exceda la velocidad de
eliminacin. El bicarbonato se pierde cuando se combina con los H+. Por ejemplo,
la produccin de cuerpos cetnicos en la cetoacidosis diabtica y la produccin
de cido lctico en la acidosis lctica.
2.- Una reduccin en la excrecin de H+ como se observa en algunas
alteraciones renales.
3.- Una excesiva prdida de bicarbonato debido a una mayor excrecin renal
(disminucin de la reabsorcin renal) o a una prdida del fluido duodenal
(diarrea).
Cuando se produce alguna de estas alteraciones, la relacin bicarbonato/CO2
disminuye. El descenso del pH estimula la hiperventilacin como un mecanismo
compensador respiratorio que resulta en una mayor eliminacin de CO2. Los

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riones responden aumentando la excrecin de protones en forma de amonio y
preservando la base con un aumento de la reabsorcin de bicarbonato.

Acidosis respiratoria
Cualquier alteracin que disminuya la eliminacin del CO2 por los
pulmones produce un aumento de la pCO2 y una acidosis respiratoria. Las
causas pueden ser factores que depriman el centro respiratorio a nivel del
sistema nervioso central (traumas, drogas o infecciones) o factores que afecten al
aparato respiratorio como por ejemplo una obstruccin de las vas areas. El
aumento en la pC02 lleva a un aumento del cido carbnico que se disocia
liberando protones. La compensacin de la acidosis respiratoria se produce
inmediatamente a travs de otros sistemas buffer, principalmente el sistema de la
hemoglobina y otras protenas. Los riones responden, con mayor tiempo, de la
misma manera que en una acidosis metablica aumentando la eliminacin de
amonio y la reabsorcin de bicarbonato.

Alcalosis metablica
La alcalosis se produce cuando se agrega un exceso de base al sistema o
se pierden fluidos cidos (vmitos gastrointestinales). Ante un dficit de sodio o
de potasio, la reabsorcin de bicarbonato y la excrecin de protones estn
aumentadas lo que tambin puede conducir a una alcalosis. En la alcalosis
metablica el paciente hipoventila. Si el aumento del pH es importante, aumenta
la actividad neuromuscular y se produce tetania. La causa es una disminucin de
la concentracin de calcio libre debido a un aumento de la unin del calcio a
protenas u otros aniones.

Alcalosis respiratoria
Se produce una disminucin de la pC02 como resultado de un aumento en
la velocidad de la respiracin. La excesiva prdida de CO2 desplaza el sistema
bicarbonato hacia la formacin de cido carbnico con la consiguiente
disminucin de la concentracin de protones y el aumento del pH. Tambin se
produce una disminucin de bicarbonato, lo cul atena el aumento del pH. Los
mecanismos compensadores actan a dos niveles. En primer lugar otros
sistemas buffer proveen protones y en segundo lugar, el rin disminuye la
reabsorcin de bicarbonato.

EJERCITACIN
1) Considerando que el cido actico CO3-COOH tiene un pKa = 4,76 y que el
dihidrgeno fosfato H2PO4tiene un pKa = 6,86, responda las siguientes preguntas:
a) Cul de los dos es el cido ms fuerte?
b) Si se dispone de soluciones de actico y de dihidrgeno fosfato de igual
concentracin, cul tendr mayor pH?
c) Si se dispone de soluciones de cido actico y de dihidrgeno fosfato de igual pH,
cul de ellas tiene mayor concentracin?
d) Qu especie qumica predomina en una solucin de cido actico de pH = 3? Y a
pH = 5,5 y a pH = 9?
e) Qu pH tendr una solucin de cido actico en la que hay igual concentracin de
anin acetato y de actico?
f) Qu especie qumica predomina en una solucin de dihidrgeno fosfato de pH = 3?
Y a pH = 5,5 y a pH = 9?
g) Una solucin de cido actico puede ser un buffer de utilidad para regular el pH en
el rango fisiolgico? Y una solucin de dihidrgeno fosfato? Justifique.

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EJERCITACIN DE SOLUCIONES Y pH APLICADOS EN LA PRCTICA MDICA

1. La muestra de orina de un paciente tiene una densidad de 1,02 g/ml.

Cuntos g de orina elimin dicha persona en un da durante el que excret
1250 ml de orina?
(Rta:1275 g)
2. A un enfermo hay que administrarle 15 g de KCl (PM 149 g/mol) y 126 g de
glucosa (PM 180 g/mol). En qu volumen de agua habr que disolverlos para
que resulte un suero 0,4 osmolar?
(Rta: 2,25 litros)
3. Un paciente de 18 meses se presenta en la guardia con signos y sntomas
propios de una deshidratacin moderada. El mdico de guardia determina que
se deben reponer 2,2 l de lquido, 88 meq de Na+ y 44 meq de K+. El Na+ se
administra como NaCl y es provisto como solucin 3,4 N. El K+ se administra
como KCl y es provisto como solucin 1 M. Calcular el volumen de las
soluciones comerciales de NaCl y KCl que se le deben suministrar al paciente.
(Rta: 26 ml NaCl 3,4 N y 44 ml KCl 1 M, en 2,2 l de solucin de dextrosa 5%.)
La solucin de re-hidratacin se prepara en dextrosa 5%. Discuta por qu esta
solucin no se reemplaza por agua.
4) Respecto de las alteraciones del equilibrio cido base en el ser humano y sus
mecanismos compensatorios, complete en siguiente esquema, considerando valores
de pH (alto o bajo), pCO2 (alta o baja) y el tipo de alteracin correspondiente
(metablica o respiratoria).
De un ejemplo de cuadro clnico en cada caso
ACIDOSIS
pH

pCO2
Tipo de
acidosis

ALCALOSIS
pH

pCO2
Tipo de
alcalosis

Principal compensacin a nivel

renal

ACIDOSIS
pH

pCO2
Tipo de
acidosis

ALCALOSIS
pH

pCO2
Tipo de
alcalosis

Principal compensacin a nivel

respiratorio

5) Los valores normales de los parmetros que se determinan en la evaluacin del

estado cido base de un individuo son:
pH 7,35 - 7,45
pO2 38 - 42 mmHg
pCO2 32 - 39 mmHg
HCO3- 23 - 27 mM
CO2 = 1,2 mM
Un paciente con acidosis metablica presenta valores de pH = 7,03 y [CO2] = 1,10
mM. Se desea saber:
a) La concentracin de protones en sangre
Rta: 9,3x10-8 M
b) La concentracin de HCO3 en sangre
Rta: 9,4 mM
c) Cunto de la concentracin normal de HCO3 - se ha consumido? Rta: 14,6 m

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6) La seorita AM ingresa al hospital con contusin torcica. Los anlisis de sangre

arterial arrojan los siguientes valores:
pH = 7,2
pO2 = 48 mmHg
pCO2 = 75 mmHg
[HCO3-] = 29 mmol/l
Qu indican estos resultados?
7) Un nio de 4 aos llega a la guardia de un hospital presentando mareos, debilidad y
vmitos reiterados como consecuencia de una intoxicacin alimentaria.
Los datos de laboratorio indican:
pCO2 = 45 mmHg
HCO3= 40 mM
Na+ = 140 meq/l
Glucemia = 3,3 mM
El tratamiento consiste en el tratamiento con antibiticos y rehidratacin oral con
solucin fisiolgica (NaCl 0,9 %) y D-glucosa.
Valores normales:
pH 7,35 - 7,45
pCO2 32 - 39 mmHg
HCO323 - 27 m
Na+ 135 - 150 meq/l
Glucosa 70 - 110 mg%
PM NaCl 58,5
pKa HCO3-/ H2CO3 6.1
PM Glucosa= 180
[CO2] (en mM) = 0,03 pCO2 (en mmHg)
En base a los datos anteriores y considerando el momento de ingreso del paciente al
hospital, indique:
a) El pH de la sangre
Rta: 7,5
b) Cul es el estado cido/base del paciente y el origen de la alteracin cido/base
que presenta?
Rta: alcalosis metablica
c) En qu sentido se encuentra desplazado el sistema bicarbonato/carbnico en el
paciente en estudio?
Rta: Hacia la formacin de bicarbonato
d) El estado de ventilacin que presenta el paciente. Rta: Hipoventilacin
e) La participacin del rin para compensar el estado cido/base del paciente.
Rta: Elimina bicarbonato
f) El estado glucmico del paciente.
Rta: Hipoglucemia
g) Es posible tratar al paciente con solucin de L-glucosa, en lugar de administrarle
D-glucosa? Justifique.

8) Se dispone de un antiinflamatorio que es electrolito dbil (pKa = 9,5). Se busca

preparar la mejor formulacin farmacutica para esa droga de manera de obtener una
rpida absorcin. Discuta la conveniencia de preparar comprimidos, teniendo en
cuenta que el pH del jugo gstrico es 1,5.

9) Teniendo en cuenta que slo las formas no disociadas de los electrolitos dbiles
difunden a travs de las membranas, compare el grado de absorcin de la aspirina
(cido acetil saliclico, pKa 3,5) administrada por va oral (comprimidos) y por va anal
(supositorios) considerando que en el estmago el pH es 1,5 mientras que en el
intestino el medio tiene un pH = 7,4.