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TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
para optar al Ttulo de
Microbilogo Industrial
NOTA DE ADVERTENCIA
ataques personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo
de buscar la verdad y la justicia.
de
Puntos
de
Contaminacin
en
Aguas
Superficiales
Los derechos morales sobre el trabajo son de los autores de conformidad con
lo establecido en el artculo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artculo 11 de la
Decisin Andina 351 de 1993, los cuales son irrenunciables, imprescriptibles,
inembargables e inalienables. Atendiendo lo anterior, siempre que se consulte
la obra, mediante cita blibliogrfica se debe dar crdito al trabajo y a sus
autores. Este documento se firma, sin perjuicio de los acuerdos que los autores
pacten con la Unidad Acadmica referentes al uso de la obra o a los derechos
de propiedad industrial que puedan surgir de la actividad acadmica.
APROBADO
_________________________
_______________________________
Microbilogo M. Sc.
Director
Asesor
_________________________
_______________________________
Bacteriloga M. Sc.
Bacteriloga M. Sc.
Jurado
Jurado
APROBADO
_________________________
__________________________
Biloga M. Phil.
Microbilogo M. Sc.
Decana Acadmica
Director de Carrera
AUTOR O AUTORES
Apellidos
Nombres
Cabrera Moya
Garca Ospina
Edna Carolina
DIRECTOR
Apellidos
Nombres
Caldern Muoz
Rodrigo Fabin
ASESOR
Apellidos
Nombres
Gmez Mndez
TRABAJO
PARA
Luis David
OPTAR
POR
EL
TTULO
DE:
MICROBILOGO
INDUSTRIAL.
TTULO
COMPLETO
DEL
TRABAJO:
IDENTIFICACIN
DE
NMERO DE PGINAS 78
7
TIPO DE ILUSTRACIONES
- Ilustraciones
- Mapas
- Retratos
- Tablas, grficos y diagramas
- Planos
- Lminas
- Fotografas
TABLA DE CONTENIDO
Pgina
RESUMEN
Abstract
1. INTRODUCCIN
2. MARCO TERICO
Superficiales en Cementerios
2.2.2. Microorganismos Indicadores presentes en Aguas
10
10
11
12
12
13
3. JUSTIFICACIN
15
4. OBJETIVOS
16
16
16
5. MATERIALES Y MTODOS
17
17
5.2. Muestreo
17
19
19
20
20
9
20
20
20
21
21
22
23
23
23
23
23
24
25
25
26
27
27
27
27
28
41
45
46
48
Lactosa, Gelatina)
6.1.1.4. Aislamiento de Coliformes Totales y Fecales
50
55
de Aguas Superficiales
57
7. CONCLUSIONES
10
8. RECOMENDACIONES
58
9. REFERENCIAS
59
10. ANEXOS
64
64
71
72
73
74
75
Salmonella spp.
10.6. Metodologa Cultivo, Aislamiento e Identificacin de
76
Shigella spp.
10.7. Metodologa Cultivo, Aislamiento e Identificacin de
77
Clostridium spp.
10.8. Metodologa Aislamiento de Coniformes Totales y Fecales
11
78
RESUMEN
Con el tiempo los Cementerios pueden convertirse en una amenaza para el
ambiente, ya que muchos no renen las condiciones requeridas por el plexo
legal formando puntos de contaminacin. A raz de esto surge la necesidad de
aislar e identificar posibles microorganismos y establecer una serie de
parmetros a tener en cuenta en el establecimiento de stos, con el objeto de
reducir los posibles factores de riesgo de contaminacin de las Aguas
Superficiales y por consiguiente el peligro que representan. A lo largo de este
estudio se realiz una Caracterizacin Microbiolgica de muestras de Aguas
Superficiales tomadas de diferentes puntos
12
Abstract
With the years Cemeteries can become in a threat to the environment because
many of them dont have the conditions required for the legal framework,
causing many points of contamination. For this reason, there is a necessity to
isolate and identify the possible microorganisms and to establish some
parameters to take into mind in order to reduce the possible risk factors of the
superficial waters and consequently the danger that they represent.
Throughout of this study we did a microbiological characterization of samples of
superficial waters that were taken from different points of the cemetery Jardines
del Recuerdo. These samples were pre-enrichment, enrichment and isolated
into selective mediums. The biochemical identification was performed with the
tests of TSI, Lactose, SIM, and Urea, to suspicious colonies of Salmonella spp.,
helped by a fast confirmation method with the identification system API E20. For
the determination of Clostridium spp., we did a selective isolation accompanied
of biochemical tests like Catalase, Nitrates, Motility, and Liquefaction of gelatin.
Finally we used the MPN method in LMX broth to identify the coliforms group.
According to the results we determinated that water samples closed to the
sepultures contain more microorganisms, such as Salmonella choleraesuis,
Enterobacter cloacae, Clostridium spp. And total and faecal Coliforms, these
microorganisms are indicator microorganisms of contamination.
13
1. INTRODUCCIN
14
por aguas son Clostridium tetani (Ttanos), Salmonella typhi (fiebre tifoidea),
S. paratyphi (fiebre paratifoidea) y Shigella (disentera bacilar).
De ah la importancia de este trabajo, del anlisis e identificacin de
microorganismos
contaminantes
presentes
en
aguas
superficiales,
15
2. MARCO TERICO
16
17
alcoholes,
cidos
grasos
pptidos
entre
otros
el cual
2.2.1.1.
Parmetros
para
controlar
la
Contaminacin
de
aguas
Superficiales en Cementerios
Segn Manuales de Gestin Ambiental y a la Normatividad existente Nacional
e internacional, se podran tener en cuenta los siguientes parmetros, para
evitar la Contaminacin de aguas Superficiales por Cementerios.
1.
establecimiento de Cementerios.
2.
demogrficas.
4.
21
En caso de ser necesaria una reforma del cementerio as como ampliacin del
mismo que no suponga un aumento de su superficie se deber incluir la misma
documentacin citada anteriormente excepto el estudio hidrogeolgico y el
informe urbanstico.
Finalmente para la aprobacin-autorizacin de la construccin de un
cementerio, la ampliacin o reforma, es necesario que la Direccin General del
Ministerio de Salud y Proteccin Social emita un informe sanitario vinculante
sobre el cementerio, segn Leyes Cementerios. Decreto EL SALVADOR
12/1994, Decreto COLOMBIA 391/1991,
por
bacterias
de
los
gneros
Escherichia
spp.
precisa saber si la
complicaciones
(colecistitis,
hepatitis,
hemorragia
intestinal,
27
3. JUSTIFICACIN
28
4. OBJETIVOS
29
5. MATERIALES Y MTODOS
5.2. Muestreo
Para la realizacin de este estudio se recolectaron muestras de aguas
superficiales compuestas, el 15 Octubre 2005, 31 Octubre 2005 y el 10
Noviembre de 2005, provenientes del cementerio Jardines del Recuerdo
ubicado en el Norte de Bogot (Anexo 10.4.).
Durante este muestreo se tomaron cuatro muestras compuestas por cada
punto a ser evaluado, cada una de ellas consta de una mezcla de varias
muestras a diferentes horas (08:00, 12:00 y 16:00), la toma de muestras se
hizo por triplicado, siendo en total 12 muestras evaluadas.
La ubicacin de los puntos de muestreo corresponde a: La Etapa I sector 6
(figura 3 - Muestra Estanque), Etapa I Seccin A4 (figura 4 - Muestra Caera),
Etapa II Sector 7 (figura 5 - Muestra Alcantarillado), Etapa III Seccin 2B (figura
6 - Muestra Pozo), los cuales fueron escogidos teniendo en cuenta su
ubicacin dentro del cementerio as como la cercana a posibles fuentes de
contaminacin y el acceso a la toma de muestras.
30
31
como
caractersticas
bioqumicas
importantes
con
Salmonella
spp.
(Anexo 10.5).
Procedimiento
Para la realizacin del sistema de identificacin API 20E, se realizaron
suspensiones de las colonias sospechosas en 5 ml de agua destilada estril,
hasta obtener una turbidez igual al patrn 2 de McFarland. Luego se
transfirieron con la ayuda de una micropipeta 100 l en cada uno de los pocillos
evitando la formacin de burbujas. Las tiras fueron colocadas en las cmaras
de incubacin previamente humedecidas para proporcionar una atmsfera
hmeda, siendo llevadas a 37C de 24-48 horas. La lectura de los resultados
se llev a cabo por comparacin de los colores de cada pocillo con los de la
tabla de lectura, del conjunto de reacciones y resultados se obtuvo un perfil
numrico de 7 cifras, el cual se introdujo en un programa de datos dando como
resultado la identificacin del microorganismo (Geissler K., 2000).
35
de
Coliformes
de
otros
microorganismos
antagonistas
(Merck, 2000).
5.2.4.2.2. Crecimiento Selectivo de Shigella spp.
Se utiliz Agar SS que permite diferenciar la degradacin de la lactosa por
algunos microorganismos, tambin posee verde brillante, Bilis de Buey,
Tiosulfato y Citrato como inhibidores.
Otro medio utilizado fue el Agar Xilosa-lisina desoxicolato (XLD) (Anexo 10.6)
que se fundamenta en la fermentacin de la Xilosa, Carboxilacin de la Lisina y
la produccin de cido Sulfhdrico para la diferenciacin primaria de
Shigella spp., de Salmonella spp., ya que en el medio la xilosa permite la
identificacin del microorganismo por una reaccin negativa (Merck, 2000).
azcar
se
determin
por
un
cambio
en
el
color del
medio
37
La
adicin
del
sustrato
cromgeno
38
5-bromo-4-cloro-3-indolil--D-
de la actividad de -D-
con
las
diluciones de
la
muestra
(en
diluciones decimales
UV para observar
39
6. RESULTADOS Y DISCUSIONES
6.1.1.1.
40
6.1.1.1.1.
de Salmonella spp.
Para el Pre-enriquecimiento se utiliz Caldo BHI, el cual fue elegido porque
permite la recuperacin de diversos microorganismos que se encuentran en
bajas concentraciones, debido a que no posee inhibidores permite reducir el
estrs ambiental al que est sometido ste patgeno gastrointestinal, siendo
adecuado para el cultivo de microorganismos patgenos exigentes, como en el
caso de Salmonella spp., segn Merck (2000).
Para el enriquecimiento selectivo se utiliz Caldo Tetrationato y Caldo
Rappaport, el primero de ellos posee tetrationato y tiosulfato los cuales actan
como inhibidores del Grupo Coliforme, mientras que en el caso del Rappaport
el incremento de Verde de Malaquita, permite una mayor inhibicin del Grupo
Coliforme segn Oxoid (1995).
Al comparar los dos Caldos de Enriquecimiento Selectivo se observ, que el
Caldo Tetrationato proporcion una mejor recuperacin del microorganismo
objeto de estudio, lo cual se vio reflejado en el aislamiento por la presencia de
una gran cantidad de colonias sospechosas y una menor proporcin de
colonias no sospechosas (figura 7) a diferencia del Rappaport (figura 8)
posiblemente a que este medio aparte de tener Verde Brillante y Tetrationato
como inhibidores de Coliformes y de otras bacterias intestinales, tambin tiene
sales biliares que estimularon el crecimiento de Salmonella spp., constatado en
estudios realizados por Dusch (1995).
41
identificable
de
otras
especies
Cooke (1999).
42
presentes,
afirmado
por
43
Porcentaje de
Recuperacin (%)
60
50
40
29%
30
14%
20
10
0%
0
Agar EMB
Agar
MacConkey
Agar Endo-S
Agar Hektoen
Agar EMB
Agar Endo
Muestreados
Estanque
Pozo
Alcantarillado
Caera
Agar
Agar
Hektoen
MacConkey
23x102
20x102
29x102
18x102
UFC/ml
UFC/ml
UFC/ml
UFC/ml
14x102
20x10
15x10
24x10
UFC/ml
UFC/ml
UFC/ml
UFC/ml
20x102
30x101
50x101
15x102
UFC/ml
UFC/ml
UFC/ml
UFC/ml
25x102
26x102
25x102
17x102
UFC/ml
UFC/ml
UFC/ml
UFC/ml
45
Agar Hektoen
Agar
MacConkey
Tamao
Grandes
Medianas
Pequeas
Grandes
Medianas
Forma
Circulares
Circulares
Circulares
Rizoides
Elevacin
Convexas
Convexas
Umbonada
Planas
Borde
Regulares
Regulares
Regulares
Rizadas
Color
Moradas y
Blancas
Amarillas
Ambar
rosadas
Apariencia Cremosas
Aspecto
Brillantes
Cremosas
Cremosas
Secas
Brillantes
Opacas
Opacas
Brillantes
Viraje del
Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
medio
Agar Hektoen
Agar
MacConkey
Tamao
Grandes
Medianas
Grandes
Grandes
Medianas
Forma
Circulares
Circulares
Circulares
Circulares
Elevacin
Convexas
Convexas
Umbonadas
Planas
46
Borde
Regulares
Regulares
Regulares
Irregulares
Color
Moradas,
Blancas
Ambar
rosadas,
centro negro.
vinotinto
Apariencia Cremosas
Cremosas
Cremosas
Secas
Aspecto
Brillantes
Brillantes
Brillantes
Opacas
Viraje del
Negativo
Negativo
Negativo
Positivo
medio
Agar Hektoen
Agar
MacConkey
Tamao
Grandes
Medianas
Pequeas.
Grandes
Forma
Circulares
Circulares,
Circulares
Rizoides
puntiformes
Elevacin
Convexas
Planas
Umbonadas
Planas
Borde
Regulares
Regulares
Regulares
Rizadas
Color
Moradas
Blancas
Amarillas con
Ambar
centro negro.
Verdes con centro
negro.
Apariencia Cremosas
Cremosas
Cremosas
Secas
Aspecto
Brillantes
Brillantes
Brillantes
Opacas
Viraje del
Negativo
Negativo
Positivo
Positivo
medio
47
Agar Hektoen
Agar
MacConkey
Tamao
Grandes
Medianas,
Pequeas
Grandes
grandes
Forma
Circulares
Circulares
Umbonadas
Rizoides
Elevacin
Convexas
Convexas,
Convexas
Planas
Irregulares
Rizadas
Ambar
planas
Borde
Regulares
Regulares,
irregulares
Regulares
Color
Moradas y
Blancas,
rosadas
crema
negro
Cremosas
Cremosas
Secas
Apariencia Cremosas
Aspecto
Brillantes
Brillantes
Brillantes
Opacas
Viraje del
Negativo
Negativo
Negativo
Positivo
medio
agua
dulce
agua
salada,
adems
de
ciertos
alimentos
en
la
expresin
de
sus
genes,
pudiendo
adems
ocurrir
Salmonella spp., ms
inherentes
las
variaciones biolgicas
de
determinados
bioqumicas: TSI, Lactosa, Urea y SIM (Tabla 3), las cepas que coincidieron
en dos o ms fueron llevadas a una identificacin bioqumica adicional
por medio del Sistema de Identificacin API 20E, con el objeto de corroborar
los resultados obtenidos a partir de las bioqumicas realizadas y permitir una
Clasificacin Taxonmica de los microorganismos encontrados, ms confiable
y eficaz.
LACTOSA
SIM
UREA
Hektoen
Hektoen
Hektoen
Hektoen
Ak/Ac
Negativa
Indol negativo
Negativa
Motilidad positiva
50
LACTOSA
SIM
UREA
Hektoen
Hektoen
Hektoen
Hektoen
Ak/Ac
Negativa
Indol negativo
Negativa
Motilidad positiva
LACTOSA
SIM
UREA
Hektoen
Hektoen
Hektoen
Hektoen
Ac/Ac
Positiva
Indol negativo
Negativa
H2S negativo
Motilidad positiva
51
LACTOSA
SIM
UREA
Hektoen
Hektoen
Hektoen
Hektoen
Ac/Ac
Negativa
Indol negativo
Negativa
H2S positivo
Motilidad positiva
52
Resultados
ONPG
Negativo
ADH
Positivo
LDC
Positivo
ODC
Positivo
CIT
Positivo
H2S
Positivo
URE
Negativo
TDA
Negativo
IND
Negativo
VP
Negativo
Gel
Negativo
Glu
Positivo
54
Man
Positivo
Ino
Negativo
Sor
Positivo
Rha
Positivo
Sac
Negativo
Mel
Positivo
Amy
Positivo
Ara
Positivo
Salmonella
choleraesuis
subespecie
choleraesuis,
es
una
de
las
de
enfermedades
infecciosas
denominadas
salmonelosis
55
Resultados
ONPG
Positivo
ADH
Positivo
LDC
Negativo
ODC
Positivo
CIT
Positivo
H2S
Negativo
URE
Negativo
TDA
Positivo
56
IND
Negativo
VP
Negativo
Gel
Negativo
Glu
Positivo
Man
Positivo
Ino
Positivo
Sor
Positivo
Rha
Positivo
Sac
Positivo
Mel
Positivo
Amy
Positivo
Ara
Positivo
Figura 21. Foto Mtodo de Identificacin API E 20. Muestra Estanque y Pozo.
Microorganismo Identificado: Enterobacter cloacae
58
59
60
Agar SPS
Estanque
< 10 UFC/ml
Pozo
< 10 UFC/ml
Alcantarillado
< 10 UFC/ml
Caera
50 UFC/ml
subterrneas,
estuarinas
ambientes
marinos
6.1.1.4.
(Estanque,
Pozo,
Alcantarillado
Caera),
se
encuentran
1 ml
0.1 ml
0.01
Combinacin
Indice
ml
de positivos
NMP/100 ml
Caera
4/5
4/5
0/5
4-4-0
3400
Estanque
0/5
0/5
0/5
0-0-0
<20
Pozo
2/5
2/5
0/5
2-2-0
90
Alcantarillado
4/5
3/5
1/5
4-3-1
3300
1 ml
0.1 ml
0.01
Combinacin
Indice
ml
de positivos
NMP/100 ml
Caera
2/5
1/5
0/5
2-1-0
70
Estanque
0/5
0/5
0/5
0-0-0
<20
Pozo
1/5
0/5
0/5
1-0-0
20
Alcantarillado
2/5
0/5
0/5
2-0-0
40
65
70 y 40 para el
67
6.2.
68
debido a la Restriccin en la
69
7. CONCLUSIONES
70
8. RECOMENDACIONES
71
9. REFERENCIAS
72
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74
75
76
10. ANEXOS
2.0 g
Cloruro sdico .
5.0 g
Hidrgenofosfato disdico .
2.5 g
Agar-agar . 15.0 g
pH: 7.4+/-0.2
Esterilizar en autoclave 15 minutos a 121C.
Agar Endo-S (g/L). Merck 2000.
Peptona .
8.0 g
Hidrogenofosfato dipotsico ..
2.0 g
15.0 g
Peptona de carne
5.0 g
Extracto de carne .
3.0 g
Extracto de levadura ..
3.0 g
77
Cloruro sdico
5.0 g
Lactosa .
10.0 g
Sacarosa ..
10.0 g
D(+)-glucosa ...
1.0 g
0.5 g
Tiosulfato sdico .
0.3 g
12.0 g
pH: 7.4+/-0.1
Esterilizar en autoclave 15 minutos a 121C.
Agar Lisina-Hierro (g/L). Merck 2000.
Peptona de carne .
5.0 g
Extracto de levadura ..
3.0 g
D(+)-glucosa .
1.0 g
L-lisina monoclorhidrato .
10.0 g
Tiosulfato Sdico ..
0.04 g
0.5 g
Purpura de bromocresol .
0.02 g
Agar-agar ...
12.5 g
pH: 6.7+/-0.1
Esterilizar en autoclave 15 minutos a 121C.
Agar MacConkey (g/L). Merck 2000.
Peptona de casena 20.0 g
Lactosa .. 10.0 g
Bilis de Buey desecada ..
5.0 g
78
0.5 g
0.12 g
Agar-agar .
13.9 g
pH: 7.1+/-0.1
Esterilizar en autoclave 15 minutos a 121C.
Agar SS (Agar para Salmonella y Shigella) (g/L). Merck 2000.
Peptona . 10.0 g
Lactosa .. 10.0 g
Bilis de buey desecada
8.5 g
8.5 g
1.0 g
0.025 g
Agar-agar .. 12.0 g
pH: 7,0+/-0,1
No esterilizar en autoclave
Agar XLD (Agar Xilosa-lisina-desoxicolato) (g/L). Merck 2000.
Extracto de levadura . 3.0 g
Cloruro sdico 5.0 g
Xilosa 3.5 g
Lactosa 7.5 g
Sacarosa . 7.5 g
L(+)-lisina 5.0 g
Desoxicolato sdico .. 2.5 g
79
0.8 g
Rojo de fenol ..
0.08 g
Agar-agar
13.5 g
pH: 7,4+/-0,2
No esterilizar en autoclave
Agua Peptonada Bufferada (BPW) (g/L). Merck 2000.
Peptona . 10.0 g
Cloruro de Sodio
5.0 g
27.5 g
2.0 g
Cloruro sdico
5.0 g
Hidrgenofosfato disdico ..
2.5 g
pH: 7,4+/-0,2
Esterilizar en autoclave 15 minutos a 121C.
Caldo de Enriquecimiento Rappaport y Vassiliadis (g/L). Merck 2000.
Peptona de harina de soja .
4.5 g
29.0 g
Cloruro sdico .
8.0 g
Hidrgenofosfato dipotsico
0.4 g
Dihidrgenofosfato potsico .
0.6 g
Verde de malaquita
0.036 g
pH: 5,2+/-0,1
Esterilizar en autoclave 15 minutos a 121C.
80
5.0 g
Extracto de Carne .
3.0 g
Lactosa .
5.0 g
pH:6.9+/-0.1
Esterilizar en autoclave 15 minutos a 121C.
Caldo LMX Fluorocult (g/L). Merck 2000.
Triptosa . ..
5.0 g
Cloruro sdico .
5.0 g
Sorbitol
1.0 g
Triptfano .
1.0 g
Hidrgenofosfato dipotsico .
2.7 g
Dihidrgenofosfato potsico ..
2.0 g
0.1 g
5-bromo-4-cloro-3-indolil--D-galactopiransido
(X-GAL) ... 0.08 g
4-metilumbeliferil- -D-glucurnido (MUG) ... 0.05 g
1-isopropil- -D-1-tiogalactopiransido .
0.1 g
pH:6.8+/-0.1
Esterilizar en autoclave 15 minutos a 121C.
Caldo Nitrato (g/L). Merck 2000.
Peptona de Carne 8.6 g
Cloruro Sdico .
6.4 g
81
2.5 g
Peptona de carne
2.5 g
1.0 g
Carbonato clcico
10.0 g
Tiosulfato sdico .
30 g
5.0 g
Yodo .
6.0 g
Verde brillante .
0.01g
pH: 7,0+/-0,1
No esterilizar en autoclave
Caldo Tioglicolato (g/L). Merck 2000.
Peptona de casena ....
15.0 g
5.0 g
D-(+)glucosa .
5.5 g
L-(+)cisterna .
0.5 g
Cloruro sdico ..
2.5 g
Tioglicolato sdico ..
0.5 g
pH: 7.1+/-0.2
Esterilizar en autoclave 15 minutos a 121C.
Caldo Urea (g/L). Merck 2000.
Extracto de levadura ..
0.1 g
Dihidrgenofosfato potsico .
9.1 g
Hidrgenofosfato disdico
9.5 g
Urea .
20.0 g
Rojo de fenol
0.01 g
pH: 6.8+/-0.1
No esterilizar en autoclave.
82
5.0 g
Extracto de Carne .
3.0 g
Gelatina .. 120.0 g
pH: 7.0 +/-0.2
Esterilizar en autoclave 10 minutos a 115C
Medio de Cultivo SIM (g/L). Merck 2000.
Peptona de caseina
20.0 g
Peptona de carne .
6.6 g
0.2 g
Tiosulfato sdico .
0.2 g
Agar-agar .
3.0 g
pH: 7.3+/-0.1
Esterilizar en autoclave 15 minutos a 121C.
83
Bioqumicas
Cdigo
ONPG
ONPG
Arginina deshidrolasa
ADH
Lisina descarboxilasa
LDC
Ornitina descarboxilasa
ODC
Citrato de Simmons
CIT
H2S
Urea
URE
Indol
IND
Voges-Proskauer
VP
Gelatina
GEL
Glucosa
GLU
Manitol
MAN
Inositol
INO
Sorbitol
SOR
Rhamnosa
RHA
Sacarosa
SAC
Melobiosa
MEL
Arabinosa
ARA
84
85
86
87
Pre-enriquecimiento
Caldo BHI
Enriquecimiento
Caldo Tetrationato
Caldo Rappaport
Aislamiento Selectivo
Hektoen
Hektoen
Bioqumicas
Sistema de
Identificacin
API 20E
88
Caldo Nutritivo
Aislamiento Selectivo
89
10.7. Metodologa
Cultivo,
Aislamiento
Identificacin
Clostridium spp.
Incubacin en
Anaerobiosis
48-72 horas 35C
Hielo 10 min.
90
de
Diluciones Seriadas
Caldo LMX
Identificacin
Coliformes
Totales
(Viraje)
Coliformes
Fecales
(Fluorescencia)
91