Man Microbiologia 25septiembre2014

Microbiologa
Manual de Prcticas
U. M. S. N .H. Facultad de Biologa
Universidad Michoacana de
San Nicols de Hidalgo
Facultad de Biologa
MICROBIOLOGA
Manual de Prcticas
Microbiologa
Manual de Prcticas
Morelia, Michoacn, agosto de 2014
INTEGRANTES DE LA MATERIA DE MICROBIOLOGA
PROFESORES:
Dra. Irene vila Daz
Dra. Yazmn Carren Abud
M.C. Rosenda Aguilar Aguilar
Dr. Jos Lpez Bucio
Dr. Eduardo Valencia Cantero
TECNICOS ACADMICOS
Bil. Ana Isabel Reza Maqueo
Bil. Manuel Medina Barriga
M.C. Cornelio Tllez Snchez
Q.F.B. Rita Sandra Mendoza Olivares
PARTICIPANTES EN LA ACTUALIZACIN DEL MANUAL
Bil. Ana Isabel Reza Maqueo

M.C. Cornelio Tllez Snchez
Q.F.B. Rita Sandra Mendoza Olivares
Agosto de 2014
Microbiologa
Manual de Prcticas
Manual de Prcticas de
Microbiologa
Nombre del alumno:

________________________________________
Seccin: ___________________
Matrcula:__________________
Profesor:
________________________________________
Tcnico Acadmico:
________________________________________
Ciclo escolar: __________ Evaluacin: ___________
Morelia, Mich., Agosto de 2014
Microbiologa
Manual de Prcticas
CONTENIDO
Presentacin.................................................................................................. i
Reglas para el trabajo en el laboratorio.............................................................. ii
Prctica No. 1.
Tcnicas de esterilizacin en bacteriologa....................... 1
Prctica No. 2.
Principales medios de cultivo y su preparacin............... 11
Prctica No. 3.
Tcnicas de aislamiento bacteriano.................................. 18
Prctica No. 4.
Morfologa bacteriana y colonial....................................... 29
Prctica No. 5.
Preparacin de frotis y tinciones................................... 36
Prctica No. 6.
Requerimientos nutricionales de los microorganismos..... 45
Prctica No. 7.
Fermentacin de Lactosa.
Prctica No. 8.
Determinacin de coliformes............................................. 54
Prctica No. 9.
Agentes fsicos y ambientales...........................
Prctica No. 10.
Evaluacin de productos comerciales antimicrobianos...... 64
Prctica No. 11.
Diferencia entre un agente bactericida y un
48
61
Bacteriosttico.. 68
Prctica No. 12.
Prueba de sensibilidad a los antibiticos. 71

Bibliografa..79
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Manual de Prcticas
PRCTICA No. 1
TCNICAS DE ESTERILIZACIN EN BACTERIOLOGA
INTRODUCCIN
Existen diversos mtodos fsicos de esterilizacin y de inhibicin del crecimiento
microbiano, como pueden ser el calor, la filtracin y la radiacin, pero el ms ampliamente
usado es el calor, ya sea hmedo seco, los cuales tienen diferente penetrabilidad.
El calor, de cualquier forma, es utilizado extensamente como un agente letal
bacteriano y se puede aplicar a numerosos instrumentos, materiales y substancias, con el
propsito de matar a las bacterias que ellos contengan.
Este proceso se llama Esterilizacin y al material, cultivo medio de cultivo
sometido a ste, se le denomina entonces Estril, es decir, desprovisto de toda forma
viviente.
Cuando se efecta experimentalmente la esterilizacin de una poblacin microbiana,
contenida en un medio de cultivo en todo el material utilizado en bacteriologa es de suma
importancia conocer los diversos mtodos de esterilizacin los cuales se dividen en:
1).Mtodos fsicos tales como: calor, rayos ultravioleta, filtracin, etc.
2).Mtodos qumicos, en donde se utilizan substancias bactericidas o bacteriostticos como
son alcoholes, fenoles, halgenos, detergentes, entre otros.
La eleccin del mtodo de esterilizacin depende del tipo de material a esterilizar,
as como la finalidad que se persiga.
La esterilizacin por calor es uno de los mtodos ms comnmente utilizados en el
laboratorio, es muy til para la cristalera, los medios de cultivo y para la esterilizacin de
los medios despus de su utilizacin y este puede ser:
a) Calor Hmedo
b) Calor Seco
c) Calor Directo
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a) Calor Hmedo
Se utiliza para esterilizar medios de cultivo, la esterilizacin se hace por el vapor a
presin en una autoclave (Chamberland) u olla de presin.
Descripcin de la autoclave.
Construido segn el principio de la Marmita de Papins, es un cilindro de acero
inoxidable que consta de los siguientes elementos (Fig. 1a):
Figura 1.Una autoclave es un dispositivo

que sirve para esterilizar el material de
laboratorio, utilizando vapor de agua a alta
presin y temperatura para ello. Por lo
general, la utilizacin de una autoclave
inactiva todos los virus y bacterias, aunque
recientemente se ha llegado a saber de
algunos microorganismos, as como los
priones, que pueden soportar las
temperaturas de autoclave.
Un fondo de acero inoxidable con

resistencia elctrica
Un nivel con llave de paso para

fluido de agua al cual se puede fijar
solidamente una tapadera de acero
inoxidable por medio de pernos
Un empaque junta de hule para

asegurar su hermeticidad
Una tapadera que contiene un

indicador de presin, una vlvula de
seguridad y una espitia de escape de
vapor
Un control de tres calores (bajo,

medio y alto)
Un foco piloto
Una cesta metlica
Descripcin de la olla. Fig. (2)

Es de forma cilndrica de acero inoxidable y consta de los siguientes elementos:
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Un cuerpo cilndrico con topes hermticos

Una tapa que contiene un indicador de presin y temperatura, una vlvula de
seguridad y una espitia de escape de vapor.
Figura 2. El tipo olla de presin es el ms comn, es un aparato para agua hirviendo a

presin. Tiene una cmara vertical de metal provista de una tapa metlica fuerte que se
aprieta y cierra hermticamente mediante un aro de goma. Se disponen en la tapa una espita
para la salida del aire y el vapor, un indicador de presin y una vlvula de seguridad. El
agua del fondo de la autoclave se calienta mediante mecheros de gas exterior, un calentador
elctrico de inmersin o un serpentn de vapor.
b) Calor Seco
La esterilizacin se hace por medio de un horno que permite alcanzar temperaturas
ms elevadas (150- 180C) que no pueden soportar los medios de cultivo y el material de
goma plstico, se utiliza ms para la esterilizacin del material de vidrio (matraces,
pipetas, cajas de petri, etc.) y en los instrumentos.
Descripcin del Horno de Pasteur (Fig.3)
Es de forma rectangular, tiene doble
pared que permite circular el calor producido
por unos picos de gas una resistencia elctrica.
Se utiliza para esterilizar material de vidrio,
porcelana y tambin para objetos metlicos. El
material deber introducirse en el horno una vez
limpio y seco, una vez introducido hay que
procurar que estos no toquen las paredes de la
estufa, porque alcanza temperaturas muy altas.
Una vez introducido el material, se cierra el
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horno y se enciende, dejndolo calentar hasta 180 , dejndolo a estas temperaturas por
espacios de tiempo variables, dependiendo del tipo de material que se ha introducido. Una
vez transcurrido el tiempo deseado se apagar y se dejar enfriar totalmente antes de sacar
el material.
c) Calor Directo
Se utiliza en asas bacteriolgicas y agujas de inoculacin. La esterilizacin se
efecta directamente en la flama del mechero hasta al rojo vivo del metal (Fig.4).
Figura 4. La esterilizacin adecuada del material es importante para obtener los resultados
esperados.
OBJETIVO
1. Conocer y aplicar las tcnicas de esterilizacin utilizadas en bacteriologa, as como
comprender la importancia de este proceso.
MATERIALES
-
Medios de cultivo: SIM, caldo nutritivo, agar sangre, agar nutritivo, etc.
Alcohol fenol
Cajas de petri
Tubos de ensaye
Pipetas
Matraz Erlermeyer
Asas y aguja de siembra
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Pipeteros
Autoclave u olla de presin
Horno de esterilizacin
Papel revolucin
Algodn y gasas
METODOLOGA
a) TCNICA DE ESTERILIZACIN DE CALOR HMEDO
Se utiliza principalmente la autoclave la olla de presin, es til para medios de
cultivo.
AUTOCLAVE
1.- Lavar el material de vidrio (matraces) hasta dejarlos perfectamente limpios y libres de
sales, para lo cual se lavan y despus se les da un enjuague final con agua destilada.
2.- Colocar el los medios de cultivo ya preparados (de acuerdo a las indicaciones del
frasco) en los matraces tubos de ensaye antes de su esterilizacin.
3.- Tapar el material de vidrio ya sea con sus tapaderas o fabricarlas con algodn gasa.
4.- Depositar el material en la cubeta de la autoclave, cuidando de colocar un capuchn de
papel aluminio en el cuello del material.
5.- Vaciar el agua destilada en la autoclave hasta donde indica la marca del nivel.
6.- Cerrar la tapa cuidando de apretar los pernos como lo indique el instructor.
7.- Encender y girar el restato (botn) en la posicin alto.
8.- Cuando el agua contenida dentro de la autoclave hierve, el vapor elimina el aire de la
autoclave, el escape del vapor por la espitia (que estar abierta) es irregular. Un chorro
continuo indica la eliminacin completa del aire, con lo que se procede a cerrar la espitia, la
temperatura y la presin suben enseguida.
9.- Cuando se ha obtenido la temperatura deseada de 120C que corresponde a 1 Kg. de
presin, girar el botn en la posicin de medio lo cual nos permite conservar la
temperatura y la presin deseada por un tiempo determinado de 120C por 15 minutos a 1
Kg. de presin.
10.- Trascurridos los 15 minutos se coloca el restato en la posicin de OFF (apagado), el
manmetro indicar un descenso en la presin.
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11.- Cuando la presin es nula, se abre la espitia de escape de vapor, penetrando el aire al
aparato. Solamente entonces puede abrirse la tapadera y retirar los objetos hmedos
ya esterilizados.
NOTA: para la cristalera el procedimiento es de la misma manera.
OLLA DE VAPOR
1.- Colocar en la olla de presin el agua suficiente para que el nivel llegue hasta la rejilla.
2.- Introducir el material perfectamente limpio y libre de sales con el medio de cultivo ya
preparado a esterilizar (ya con tapones).
3.- Cerrar la olla hermticamente.
4.- Poner calor y esperar a que salga el aire contenido dentro de la olla.
5.- Cerrar la vlvula y dejar que el manmetro marque 120C 15 libras de presin.
6.- Mantener la temperatura necesaria para que la presin permanezca constante durante 15
minutos.
7.- Transcurrido el tiempo, retirar la olla del fuego y dejar que baje la presin hasta cero
para poder destapar la olla.
b) TCNICA DE ESTERILIZACIN CON CALOR SECO
1.- El material de vidrio debe encontrarse limpio y libre de sales.
2.- Se procede a tapar el material ya sea con sus tapaderas fabricarlas con algodn gasa.
3.- Envolver en papel y llevarlo al horno (evitando el contacto con las paredes del horno),
las extremidades de los objetos que llevan algodn papel deben colocarse hacia arriba.
4.- Encender y controlar la calidad de la flama si el calentamiento es con gas.
5.- Para tubos de vidrio, pipetas (por separado) y cristalera en general, utilizar 170C por
espacio de 1 hora.
6.- Transcurrido el tiempo de esterilizacin se apaga el horno y se deja enfriar para sacar el
material.
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NOTA: Los pipeteros requieren de un tiempo de 2 horas.

c) TCNICA DE ESTERILIZACIN CON CALOR DIRECTO
Se utiliza para asas bacteriolgicas y agujas de inoculacin.
1.- Estas se deben esterilizar antes y despus de llevar acabo la siembra de cualquier tipo de
bacteria.
2.- Poner el asa o aguja directamente en la parte azul de la flama durante algunos segundos.
3.- Cuando el metal se torna de color rojo, se retira y se enfra en las paredes inferiores del
recipiente de cultivo.
REPORTE
Resultados
Escribir los resultados de las tcnicas anteriores en la siguiente tabla:
A a)
b)
c)
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CUESTIONARIO
1) Qu mtodos de esterilizacin son utilizados en bacteriologa?
2) Explica qumicamente que le sucede al microorganismo en cada uno de los mtodos?
3) Cul es la importancia de la esterilizacin de todo el material usado en bacteriologa?
4) Qu mtodos se usan para esterilizar los medios de cultivo? y Por qu no se utilizan

las otras tcnicas conocidas?
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5) Cul es la temperatura, presin y tiempo para la esterilizacin en autoclave, olla de

presin y horno de Pasteur?
6) Por qu el asa bacteriolgica se debe esterilizar siempre antes y despus de usarse?
7) Mencione otras tcnicas de esterilizacin diferentes a las explicadas en la prctica.
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
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PRCTICA No. 2
PRINCIPALES MEDIOS DE CULTIVO Y SU PREPARACIN
INTRODUCCIN
El estudio adecuado de las bacterias, exige como requisito previo, poder cultivarlas
en condiciones de laboratorio. Para lograr esto, es preciso conocer, los elementos nutritivos
para la obtencin de energa que ser empleada para la biosntesis y la reproduccin celular
y las condiciones fsicas. Las exigencias nutritivas de las bacterias se han establecido
despus de dilatadas investigaciones, cuyos resultados han sido el desarrollo de numerosos
medios de cultivo artificiales, estas necesidades nutritivas son muy diversas, debido a ello
existen grandes diferencias.
Los medios de cultivo ms comunes utilizados son los que estn constituidos con
peptonas, extractos de carne o carne parcialmente digerida y extractos de levadura llamados
tambin medios bsales.
Cuando hay que utilizar medios slidos, se agregan agar a los medios lquidos,
como agente coagulante o solidificante. La preparacin de los medios de cultivo, ha sido
reemplazada en gran medida por el uso de medios de cultivo deshidratados a los cuales se
les agrega agua destilada, tales medios son estables y bien estandarizados con respecto a pH
y concentracin de materiales. Segn el propsito para lo que son fabricados los medios de
cultivo se pueden clasificar en:
a) Medios bsales, bsicos o generales: Son medios simples que contienen en general
los nutrientes esenciales para promover el desarrollo de microorganismos poco
exigentes nutricionalmente in vitro, ejemplo: agar nutritivo (A.N.), caldo nutritivo
(C.N.), agar soya triptosa (T.A.S.), caldo soya tripticasa (T.C.S.) y caldo cerebro
corazn (B.H.I.).
b) Medios enriquecidos: Son medios que han sido complementados con otros
nutrientes que proporcionan factores de crecimiento y cuya finalidad es promover el
desarrollo de microorganismos de requerimiento nutricional ms exigentes,
ejemplo: gelosa sangre (G.S.), gelosa chocolate (G.CH.).
c)
Medios selectivos o inhibitorios: Cuando una muestra contiene gran cantidad de

microorganismos, su crecimiento puede ser excesivo por lo que es necesario suprimir
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su desarrollo y al mismo tiempo promover y/o seleccionar el crecimiento de los

microorganismos de inters que pudieran encontrarse en dicha muestra, ejemplo: agar
verde brillante (A.V.B.), agar salmonella shigella (S.S).
d)
Medios diferenciales, Son aquellos en los que se ponen de relieve propiedades

(normalmente pruebas bioqumicas) que un determinado microorganismos posee y de
esa forma se puede distinguir ese microorganismo de otros que tambin pueden crecer
en ese medio.
e)
Medios de transporte, sirve para mantener varios microorganismos por un lapso

corto de tiempo, ejemplo: cary-blair.
Figura 5. Tipos de medios de cultivo: a) y b) Medios generales; c) Medios enriquecidos;

d) y e) Medios selectivos (por ej. Inhibidores de Gram+ y los medios para antibiticos); f)
Medios diferenciales (por ej. el agar-sangre).
OBJETIVO
1. Conocer y preparar los medios de cultivo ms comunes empleados en bacteriologa.
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MATERIALES
-
Agar nutritivo
Caldo nutritivo
E.M.B.
Agar(S-110)
Medio SIM
Agua destilada
Cajas de Petri esterilizadas
Tubos de ensaye
Matraces Erlenmeyer
Probetas.
Balanza granataria
Algodn gasa estril
Marcador permanente
METODOLOGA
1.- Preparar 75 ml. o lo que indique su instructor o de agar nutritivo como lo seala el
frasco, esterilizar a 121C por 15 min en autoclave u olla de presin. Vaciar el medio en
cajas de petri esterilizadas, dejar solidificar. Marcar las cajas con lpiz graso.
2.- Preparar 70 ml. de agar (S-110) como lo indica el frasco, vaciar en cajas de Petri
estriles marcadas.
3.- Preparar la cantidad en mililitros que indique el instructor de E.M.B. segn
especificaciones del frasco, esterilizar, dejar enfriar un poco, vaciar en cajas de petri
estriles y marcar las cajas.
4.- Preparar la cantidad en mililitros que indique el instructor de medio SIM segn
especificaciones del frasco, esterilizar y vaciar en tubos de ensaye.
5.- Preparar 50 ml. de caldo nutritivo como lo indica el frasco, distribuirlo en tubos de
ensaye (3 ml. c/u) esterilizar a 121 C por 15 minutos.
6.- Preparar la cantidad en mililitros que indique el instructor de medio Agar nutritivo
segn especificaciones del frasco, distribuirlo en tubos de ensaye (6 ml cada uno),
esterilizar y dejarlos enfriar en superficie inclinada.
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Figura 6. Antes de ser esterilizados en autoclave, los medios lquidos se distribuyen en los
recipientes adecuados (tubos o matraces) y se tapan; en ningn caso la altura del lquido en
el recipiente debe exceder un tercio del volumen total de ste. Si se trata de un medio que
contenga agar (slido o semislido) suele ser preciso calentarlo (al bao Mara o al
microondas) para fundir el agar antes de esterilizarlo en el autoclave. Una vez fundido se
reparte en matraces o en tubos (nunca en placas de Petri), se tapa y se esteriliza.
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Figura 7. Finalizada la esterilizacin en al autoclave los medios lquidos se dejan enfriar a

temperatura ambiente. Los medios slidos contenidos en tubo deben inclinarse para que al
solidificarse adopten la forma de agar inclinado, si tal es su finalidad.
REPORTE
Resultados
Elaborar una tabla con los resultados:
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CUESTIONARIO
1.- Cmo prepar c/u de los medios de cultivo?
2.- Qu diferencia hay entre un cultivo y un medio de cultivo?
3.- Qu sucede si el medio est muy fri y se desea vaciar en caja de Petri o en tubo de
ensaye?
4.- Contesta correctamente

a. Qu es el agar?
b. A qu temperatura solidifica?
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c. Con qu finalidad se utiliza en los medios de cultivo?
5.- Por qu no se utiliza la gelatina como solidificante o coagulante para los medios
slidos?
6.- Por qu es tan importante que el agua utilizada en la preparacin de medios de cultivo
sea destilada?
CONCLUSIONES.
BIBLIOGRAFA.
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PRCTICA No 3
TCNICAS DE AISLAMIENTO BACTERIANO
INTRODUCCIN
Una tcnica muy comn en el laboratorio de microbiologa es la transferencia de
microbios de un ambiente a otro con el propsito de cultivarlos. Es necesario tomar las
debidas precauciones para evitar la contaminacin de los cultivos.
Para el estudio e identificacin de microorganismos stos deben aislarse o separarse
a partir de un cultivo mixto o de poblaciones que se encuentran en la naturaleza. Existen
varias tcnicas para el aislamiento de microorganismos y la obtencin de cultivos puros,
dentro de las ms utilizadas se encuentran:
a) Siembra por estras en caja de Petri o tubo de ensaye.
b) Vaciado en placa donde se obtienen colonias tanto en la superficie como en
partes profundas del medio inoculado.
c) Cultivo por dilucin y agitacin.
d) Aislamiento de bacterias con una varilla angular de vidrio.
e) Aislamiento de microbios extrados con un aplicador de algodn.
f) Siembra por picadura, etc.
Despus de que una poblacin de microorganismos ha estado creciendo por cierto
tiempo en el mismo tubo de ensaye o caja de Petri, debe ser transferido a un medio de
cultivo nuevo para que pueda continuar su crecimiento y supervivencia.
OBJETIVO
1. Aprender las tcnicas fundamentales empleadas para la transferencia y aislamiento de
microorganismos.
MATERIALES
-Tubos de ensaye con caldo nutritivo

-Tubos de ensaye con agar nutritivo (superficie inclinada)
- Cajas de Petri con agar EMB
-Tubos de ensaye con medio SIM (superficie horizontal)
-Cajas de Petri con agar nutritivo
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-Tubos de ensaye con S-110

-Asa y aguja de inocular
-Mechero
-Algodn
-Masking tape
-Kleen pack
-Muestra mixta
Cultivos:
-Bacillus subtilis
-Escherichia coli
-Staphylococcus epidermidis
-Pseudomonas aeruginosa
-Proteus vulgaris
METODOLOGA
Tcnica asptica:
1.- Limpiar perfectamente la mesa de trabajo con alcohol, flamearla con el mechero.
2.- Lavarse las manos con jabn y despus frotrselas con un algodn con alcohol.
3.- Colocar los tubos y dems material en una posicin adecuada en la que se puedan
alcanzar sin dificultad y sin peligro de quemarse.
4.- Trabajar siempre junto al mechero, ya que este proporciona una zona de esterilidad de
aproximadamente 20 cm. de radio.
5.- Antes de realizar cualquier siembra, esterilizar el asa o aguja a fuego directo hasta el
rojo vivo de la base a la punta y enfriar cerca del mechero.
6.- Para tomar el inoculo de siembra debe tocar con el asa una colonia seleccionada o asada
si es liquido. Inocular y volver esterilizar.
7.- Durante la siembra, deben permanecer cerradas las puertas y ventanas y no se debe
hablar o generar corrientes de aire.
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Tcnicas de sembrado.
1.- Inoculacin de medios lquidos:
a) Tomar con una mano el tubo que contenga el cultivo y otro con caldo nutritivo estril.
b) Con la otra mano, tomar el asa y esterilizarla hasta el rojo vivo de base a punta dejar
enfriar. Quitar y sostener los tapones de los tubos con los dedos libres de la mano que sujeta
el asa, tener cuidado de no acercarlo demasiado al mechero.
c) Flamear los bordes de ambos tubos, introducir el asa al cultivo y tocar una colonia si el
medio es slido tomando una pequea muestra sin rasgar el medio.
d) Introducir el asa con el inculo dentro del tubo con el caldo y agitar el asa en circulos.
e) Retirar el asa, flamear nuevamente los bordes de los tubos y colocar los tapones.
f) Esterilizar el asa de la base a la punta.
g) Etiquetar el tubo inoculado (medio de cultivo empleado, microorganismo inoculado,
nmero de equipo, seccin y fecha)
h) Guardar a temperatura ambiente.
Figura 9.Para la inoculacin de un medio lquido a partir de

un cultivo en medio slido se utiliza un asa de siembra.
Figura 8. Mtodo correcto de la inoculacin con el asa en medio lquido.
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2.-Inoculacin en medio inclinado

a)
Tomar un tubo que contenga el cultivo y otro con el medio inclinado.
b)
Sujetar los tubos, remover los tapones y realizar los pasos aspticos como se
explic anteriormente.
c)
Esterilizar el asa de la base a la punta, dejar enfriar y tomar un inculo del
medio de cultivo.
d)
Introducir el asa hasta el fondo del tubo y deslizarla a manera de estras sobre
la superficie del medio hasta el extremo externo, sin repetir la operacin.
e)
Flamear los bordes de los tubos y taparlos.
f)
Esterilizar el asa como se indico anteriormente.
g)
Etiquetar el tubo inoculado.
h)
Incubar.
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Figura 10 y 10a. Siembra en medio slido inclinado
3.- Cultivo por picadura:
a)
Tomar el tubo que contenga el cultivo y otro con medio de cultivo SIM.
b)
Realizar los pasos de flameado y remocin de tapones.
c)
Esterilizar la aguja de la base ala punta, enfriar y tomar una muestra de
cultivo.
d)
Introducir la aguja en el medio sin llegar al fondo del tubo, sacarla por el
mismo trayecto de la entrada sin repetir la operacin.
e)
Flamear los bordes de los tubos y taparlos.
f)
Esterilizar la aguja como lo realizo anteriormente.
g)
Etiquetar el tubo.
h)
Incubar.
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Figura 11. Esquema de la siembra por picadura.
4.- Siembra por estras en caja de Petri

Aislamiento primario de bacterias:
Todo el proceso se realizar en zona estril, junto al mechero y abriendo la caja slo
que sea necesario. Los pasos son los siguientes:
a) Esterilizar el asa de siembra como se ha indicado y tomar una asada de la

muestra mixta.
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b) Tomar la caja de Petri, reposarla sobre la palma de la mano, abrir la tapa con
el pulgar y el dedo medio.
c) Colocar el inculo en el borde del agar y hacer una estra inicial sin despegar el
asa, presionando, pero sin perforar el agar, hasta cubrir aproximadamente una
cuarta parte de la caja como se indica en la figura 12.
d) Bajar la tapa de la caja y esterilizar el asa.
e) Girar la caja de petri un cuarto de vuelta, levantar la tapa, enfriar el asa

tocando la superficie de agar, lejos de la estra recin hecha.
f) Tocar una vez ms la superficie de la estra recin hecha con el asa y hacer un
segundo grupo de estras. Tener cuidado de no cruzar ninguna de las estras
originales.
g) Tapar la caja y repetir los paso d, e y f
h) Sellar la caja con kleen pack
i) Etiquetar con marcador indeleble la caja (medio de cultivo utilizado, muestra

empleada, No. de equipo, seccin y fecha)
j) Incubar la caja de manera invertida.
Si se trata de un cultivo puro, se puede sembrar por estras en un tubo de ensaye con
superficie inclinada o bien en una caja de petri realizando nicamente una estra en
toda la superficie.
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Figura 12. Mtodo de aislamiento por siembra por estra en placa. Para obtener un cultivo
axnico: (a) esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero, (b)
introducirla en la suspensin bacteriana para recoger una muestra, (c) sembrar haciendo
estras sobre la superficie de un medio slido en una placa Petri, y (d) volver a esterilizar
el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer un segundo grupo de estras en
una regin nueva de la placa. Repetir el proceso una tercera y una cuarta vez, hasta
conseguir que los grupos de clulas se diluyan y se separen clulas aisladas. (e) Despus de
la incubacin, se desarrollan colonias aisladas. Para estar seguro de que el cultivo es puro,
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repetir el proceso entero; para ello tomar una colonia aislada y sembrar por estras una
segunda placa.
Figura 13. Algunos de los diseos que se pueden dibujar sobre el agar al inocular una caja
de petri.
Microbiologa
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Figura 14.Caractersticas de los cultivos de bacterias
5.- Aislamiento de microbios extrados con un aplicador de algodn

a) Introducir el aplicador de algodn a un cultivo mixto.
b) Trazar con el algodn unas lneas inoculando una pequea zona en el borde de una
caja de Petri con agar nutritivo.
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c) Cubrir la caja, sumergir el aplicador en solucin desinfectante, para posteriormente

quemarlo.
d) Esterilizar el asa como lo has realizado y pasarla al sector inoculado con el algodn,
realizando estras por cuadrantes.
e) Esterilizar el asa, invertir la caja e incubar.
REPORTE
Resultados
a) Cultivos en medio lquido:
Caracterstica
Pelcula
Microorganismo
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Turbidez
Sedimento
Pigmento
Otros
b) Cultivos en medio inclinado:
Medio
Medio
Microorganismo
Microorganismo
Caractersticas
Forma de crecimiento
Pigmento
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Consistencia
Otros
c) Representar un cuadro de los resultados de los microorganismos sembrados en el

medio SIM.
Caractersticas
Forma de crecimiento
Pigmento
Consistencia
Otros
Microorganismo
Microorganismo
d) Realizar esquemas de las estras formadas en las cajas de petri.
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CUESTIONARIO
1.- Qu es una cepa en bacteriologa?
2.-Qu es un cultivo mixto? Y menciona 3 ejemplos.
3.- Por qu los cultivos en caja de Petri deben de manejarse de manera invertida?
4.- Cmo se puede evitar la introduccin y desarrollo de microorganismos contaminantes

en un medio de cultivo?
5.- Cundo es recomendable utilizar el mtodo de dilucin en un cultivo?
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
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PRCTICA No. 4
MORFOLOGA BACTERIANA Y COLONIAL
INTRODUCCIN
Las clulas bacterianas pueden presentar diversas formas, pero las ms comunes son
los bastones llamados bacilos, las esferas llamadas cocos y en forma de espiral o
sacacorchos llamadas espirilos o vibriones.
Las formas ms comunes son los bacilos, cuyo tamao puede variar de tal manera
que algunos son tan cortos que se confunden con los cocos; sus extremos pueden ser
redondeados o rectos. Algunos al dividirse quedan alineados formando cadenas largas.
Las formas esfricas se presentan con frecuencia en agrupaciones coloniales de
distintas maneras: pueden formar cadenas, recibiendo entonces el nombre de estreptococos;
otros forman racimos irregulares, stos son los llamados estafilococos; o se pueden agrupar
en paquetes de formas muy regulares como las sarcinas. En ocasiones se ordenan en pares
y reciben el nombre de diplococos.
Las bacterias en forma de espiral pueden ser cortos o largos, cuando son cortos
pueden tener solo una vuelta por lo que parecen bacilos curvos y en este caso se conocen
como vibriones, mientras que los espirilos presentan varias vueltas helicoidales, por lo que
son ms largos.
Las agrupaciones se forman cuando la bacteria se divide dando origen a muchas
otras que cuando se desarrollan en un medio de cultivo aparecen en masas relativamente
grandes que se aprecian a simple vista. El trmino colonia se aplica a cada una de las masas
de crecimiento que se desarrollan sobre el medio slido y se puede inferir que se trata de un
cultivo puro al suponerse que se form a partir de una sola clula bacteriana.
Las colonias presentan caractersticas propias de cada especie (forma, color,
tamao, elevacin, tipo de bordes, etc.), por lo que pueden ser de utilidad en la
identificacin; por esta razn es importante en un estudio bacteriolgico realizar un
reconocimiento de la morfologa colonial.
OBJETIVOS
1.- Reconocer las diferentes caractersticas que presentan las colonias bacterianas.
2.- Identificar las formas y tipos de agrupaciones que se pueden presentar en las bacterias.
Microbiologa
Manual de Prcticas
MATERIALES
- Microscopio compuesto
- Asa microbiolgica
- Portaobjetos
- Regla
- Marcador indeleble
- Cultivos de bacterias en caja de Petri
METODOLOGA
a) Estudio de la morfologa colonial.
1) Tomar un cultivo en caja de Petri y seleccione para su estudio algunas colonias

que se encuentren aisladas, procurando seleccionar una de cada tipo de los que hayan
desarrollado.
2) Numerar cada una de las colonias seleccionadas para que pueda identificarlas
(marcar los nmeros con marcador permanente por fuera de la caja de Petri)
3) Tomar nota del color que presenta cada tipo seleccionado.
4) Anotar tambin el tamao aproximado de las colonias, haciendo uso de una regla,
pero sin tocar el cultivo.
5) Analizar las caractersticas de forma, borde y tipo de elevacin que presentan las
colonias.
6) Hacer esquemas de cada tipo de colonia.
b) Reconocimiento de las diferentes formas bacterianas.

1) Siguiendo siempre la tcnica asptica, prepare un frotis de cada una de las
colonias seleccionadas para el ejercicio anterior (la tcnica para la preparacin del frotis se
describe en la prctica de tinciones)
2) Aplique en cada frotis una tcnica de tincin diferente.
Microbiologa
Manual de Prcticas
3) Observe al microscopio usando el objetivo de inmersin e identifique la forma de

las clulas bacterianas en cada una de las muestras.
4) Identifique el tipo de agrupacin que presentan las bacterias.
Figura 15. Aspectos ms comunes de las diversas colonias microbianas aisladas sobre
medio slido.
Coco. Bacterias en
redonda, esferoides.
forma
Bacilos: Bacterias de forma

cilndrica. Los bacilos pueden
presentarse
aislados
o
agrupados.
Cocobacilos: Ciertas especies se
presentan
como
bacilos
pequeos, redondos difciles de
distinguir de los cocos.
Diplobacilos: Pares de bacilos.
Estreptobacilos:
agrupados en cadenas.
Bacilos
Vibriones: Bacterias curvas (en

forma de coma).
Bacterias en forma de espiral:

Muchas bacterias poseen una
forma semejante a bacilos largos
retorcidos para formar espirales
o hlices.
Dependiendo de las especies,
presentan
diferencias
significativas en el nmero y
rigidez de las espiras y en la
longitud. A estas bacterias se los
denomina espirilos si son rgidas
y espiroquetas cuando son
flexibles.
Microbiologa
Manual de Prcticas
Microbiologa
Manual de Prcticas
Figura 16. Diferentes formas de bacterias. A la izquierda se presenta un dibujo y a la

derecha el ejemplo de una especie bacteriana vista al microscopio.
Diplococos: Pares de clulas
Estreptococos:
Cadenas
cuatro o ms clulas.
de
Ttradas: Son agrupaciones de

cuatro cocos en una disposicin
cuadrada.
Se dividen en dos direcciones
perpendiculares.
Sarcinas: Paquetes cbicos de

ocho clulas. Resultan de la
divisin en tres direcciones
perpendiculares.
Estafilococos: Se agrupan en
forma de racimos, no siguen un
patrn regular de orientacin en
divisiones sucesivas.
Figura 17. Los tipos de agrupacin que pueden presentar las bacterias de forma esfrica
(cocos).
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Manual de Prcticas
REPORTE
Resultados
Escribir los resultados a continuacin:
Morfologa colonial
Colonia No. Tamao
Color
Forma
Bordes
Elevacin
Morfologa bacteriana
Colonia No.
Forma
bacteriana
Agrupacin
Reaccin al
Gram
Superficie
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CUESTIONARIO
1.- Qu formas bacterianas no se encontraron en sus muestras?
2.- Cuntos tipos de colonias encontr en su cultivo? Qu indica esto?
3.- Qu tipo de agrupaciones encontr?
4.- Investigue a qu se debe que las bacterias formen grupos de forma tpica.
5.- Se observ el ncleo de las bacterias? Por qu?
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
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PRCTICA No. 5
PREPARACIN DE FROTIS Y TINCIONES
INTRODUCCIN
Dado que por lo general las bacterias no tienen pigmentos y son incoloras en estado
natural en su forma real. Algunos investigadores como Robert Koch, Paul Erlich y otros
vencieron esta dificultad usando mtodos de fijacin (preparacin de frotis) y tincin de
bacterias ya que es necesario teirlas para poder observar su morfologa as como tambin
poner de manifiesto algunas caractersticas de su estructura.
Los mtodos de tincin pueden ser simples o diferenciales.
a) Tinciones Simples: son aquellas en las que solo se utiliza un colorante ya que
muchas bacterias tienen material cido (RNA o DNA) distribuido en su clula, por
lo que se colorea intensamente con colorantes bsicos estos son colorantes
nucleares ejemplo: fucsina bsica, cristal violeta, azul de metileno entre otras.
b) Las tinciones diferenciales son aquellas en las que se utilizan dos o ms colorantes
que ponen de manifiesto alguna(s) estructura (s) o un tipo de clulas se tien de un
color y el resto de otro.
El mtodo de tincin ms utilizado es el de la tincin del Gram, ya que es la
coloracin ms importante para bacterias fue ideada por Hans Cristian Gram en 1884,
permiti distinguir entre varias especies de bacterias que pueden presentar morfologa
colonial similar.
Cuando las bacterias retienen el complejo cristal violeta-yodo, tindose de violeta,
son bacterias gram (+), las bacterias que se tian de rojo por la safranina son gram
negativas.
Las clulas bacterianas gram (+) se les adhiere el cristal violeta, porque hay
disminucin de la permeabilidad de la pared celular causada por el efecto deshidratante del
alcohol, mientras que las gram (-) el complejo sale por el aumento de la permeabilidad
causada por la solubilidad de los lpidos de la pared celular al alcohol.
Existen tambin bacterias gram variables (Nisseria spp) y bacterias gram no
reactivas (Mycobacterium spp) otros ejemplos de tinciones diferenciales son: la tincin
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cido-alcohol-resistente (utilizada para diferenciar bacterias del gnero Mycobacterium de

otros tipos) y la tincin de endosporas.
OBJETIVOS
1. Aprender a realizar frotis y preparaciones fijas de bacterias.

2. Conocer los mtodos de tinciones, practicar la tcnica de tincin simple usada en
bacteriologa.
3. Conocer y distinguir que es tincin diferencial as como aplicar la tcnica de
Tincin de Gram.
MATERIALES
Cultivos de: Escherichia coli, Staphylococcus epidermidis, Bacillus subtilis

Azul de metileno
Cristal violeta 0.1% en solucin acuosa
Yodo lugol
Alcohol-cetona (1:1)
Safranina
Aplicador estril (s el instructor lo cree necesario).
Agua destilada
Aceite de inmersin
Papel seda
Asa bacteriolgica
Marcador permanente
Alcohol y algodn para limpiar su mesa
Goteros y micro pipeta
Mecheros
Portaobjetos
Microscopio compuesto
METODOLOGA
a) Preparacin de Frotis y Fijado

1. - limpiar con alcohol el portaobjetos donde se realizar el frotis, dejarlo
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secar, una vez seco pasarlo por el mechero 2 o 3 veces.

2.- Cuando este fri, marcar la cara donde se har el frotis.
3.- Calentar el asa de inoculacin hasta que este al rojo vivo el metal.
4.-. Tomar el cultivo del que se har el frotis y flamear la boca

de este. Tomar la porcin de la muestra que se va a examinar
por medio de un asa.
5.- Colocar la muestra sobre un portaobjetos limpio y sin grasa,

debidamente marcado
***Si la muestra se encuentra en un medio lquido, basta con colocar
una pequea gota con el asa estril sobre el portaobjetos.
***Si la muestra est en un medio slido, colocar una gotita de solucin salina o agua
destilada estril sobre el portaobjetos y con el asa estril se transfiere una pequea muestra
de bacterias en la gotita.
6.- Trazar con la muestra una espiral del centro a la periferia. Extienda con
el asa la gotita para obtener un frotis delgado y uniforme. Secar al aire.
7.- Calentar nuevamente el asa para esterilizarla.
8.- Dejar secar el frotis cerca del mechero encendido durante 10

min o hasta que seque completamente.
9.- Fijar el frotis con calor suave sobre la flama del mechero,
pasndolo tres veces a travs de la llama con la muestra hacia arriba, de tal forma que
pueda tolerarlo sobre el dorso de la mano.
b) Tincin Simple
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1.- Cubra el frotis (B. subtilis) con la solucin de azul de metileno durante 2 minutos.
a) Lave el portaobjetos, con una corriente

suave de agua, de manera que el agua no
incida directamente sobre la preparacin
hasta que ya no escurra colorante.
b) Deje secar el frotis al aire.
c) Enfocar y Localizar la zona teida con el objetivo de 10X, observar las bacterias al
microscopio con el objetivo de 100X.
2.- Hacer frotis de cada uno de los cultivos.
A) dejar secar a temperatura ambiente.
B) Fijar al calor.
C) Agregar cristal violeta durante 1 minuto.
D) Lavar con agua y secar.
E) Observar a inmersin.
3.- Repetir el inciso C, en lugar de cristal violeta usar safranina.
4.- Opcional.
A) con un aplicador tomar un exudado de su boca de preferencia por el borde gingival.
B) Hacer un frotis.
C) Teir con cristal violeta 0.1 % durante un minuto
D) Observar a inmersin e identificar cocos, bacilos, etc.
A) Tincin de Gram.
Consta de cuatro reactivos diferentes: el cristal violeta es el primer colorante o colorante
primario que imparte color a todos los microorganismos del frotis. Enseguida se utiliza una
solucin del yodo (lugol), la que acta como mordente (que aumenta o refuerza la unin,
entre un colorante y un sustrato ), el tercer reactivo es un decolorante que disuelve y
arrastra el colorante primario, los organismos que resisten la decoloracin y conserva una
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tonalidad azul son Gram (+), el cuarto reactivo es el colorante de contraste la safranina que
se aplica como contra tincin ya que los organismos se destieron con el decolorante, ahora
toman el color rojo de la safranina denominndose gram (-).
PASOS A SEGUIR EN LA TCNICA DE GRAM

1.- Preparar los frotis como en la tcnica de tinciones simples. Y preparacin de frotis y
fijado.
2.- Preparar los frotis con cultivos de S. epidermis, E. coli.
3.- Cubrir los frotis con cristal violeta durante un minuto.
4.- Lavar los portaobjetos con una corriente suave de agua.
5.- Cubrir los frotis con yodo lugol durante 1 minuto.
6.- Lavar como se indic en el paso (4).
7.- Decolorar con alcohol-cetona hasta que no escurra lquido azul.
8.- Lavar inmediatamente como se hizo en el paso (4).
9.- Cubrir el frotis con safranina durante 1 minuto.
10.- Lavar como en el paso (4).
11.- Observar al microscopio a inmersin. OB (100 X). Ver figura Tincin Gram.
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Figura 18. Al finalizar el proceso de Tincin de Gram, las bacterias gram-positivas se tien
de color prpura-violeta y las bacterias gram-negativas se tien de color rojizo-rosado.
Gram
positivos
(De violeta a azul claro)
Forma: cocos y bacilos (finos, gruesos,
ramificados)
Agrupaciones:
racimos,
cadenas, ttradas
Gram negativos
(De rosa a rojo intenso)
Forma: cocos, bacilos
Agrupaciones: aislados,
(diplos)
Figura 19. Interpretacin de resultados a partir de la tincin de Gram.
y vibrios.
en parejas
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REPORTE
Resultados
A) Realizar esquemas de lo observado.
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B) Realizar una tabla donde indique cada uno de los microorganismos observados su
forma, agrupacin y reaccin al Gram.
CUESTIONARIO
1. Por qu es necesario fijar el frotis al calor?
2. Ejemplos de tincin simple o colorantes bsicos
3. Explica:
a) Las diferencias en composicin qumica por estructura de las paredes
celulares gram (+) y gram (-).
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b) Qu tipo de bacterias toma el colorante primario y que tipo el de contraste?
4. Podra sustituirse el colorante primario por otro colorante en la tincin de Gram?

Explica.
5. Qu inconveniente encontrara si agrega primero safranina en esta tcnica?
6. Mencione 5 bacterias gram (+) patgenas as como las enfermedades que causan.
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
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PRCTICA No. 6
REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES DE LOS MICROORGANISMOS
INTRODUCCIN
Una de las facetas ms importantes de cualquier estudio de los seres vivos es la
NUTRICIN. La nutricin trata sobre las clases de alimentos que un organismo debe
incluir en su dieta.
Al igual que todos los seres vivos los microorganismos requieren una fuente de
NITRGENO utilizable, proveniente de alguna sustancia que contenga dicho Nitrgeno;
como las Protenas o los aminocidos. Pero muchos otros no requieren formas tan
complejas de este elemento, los compuestos de amonio; inclusive el Nitrgeno como su
forma natural gaseosa que de hecho constituyen la nica fuente de Nitrgeno, todas ellas
para que la clula produzca sus protenas celulares.
Otro compuesto familiares nutritivo son los CARBOHIDRATOS que por lo general
proporcionan energa inmediata o rpida. La fuente de energa vara entre los
microorganismos; algunos pueden emplear la mayora de los carbohidratos, mientras que
otros nicamente algunos o ninguno.
Muchos microorganismos requieren fuentes de energa muy compleja
molecularmente, pero otros poseen requerimientos muy sencillos.
Idealmente, todos los distintos medios de cultivo que se emplean en Microbiologa deberan
ser del tipo llamado sinttico, por lo que la formula qumica estructural se conoce con
exactitud.
Otras sustancias nutritivas son en general las Sales Minerales que proporcionan
iones o elementos que intervienen en el metabolismo de la clula.
En el estudio de la nutricin microbiana, es prctica comn preparar una dieta
completa que incorpore todos los factores esenciales para el crecimiento o excepto aquel
que se quiera probar para determinar si el microorganismo es capaz de degradar o no.
Los microorganismos necesitan para su subsistencia que el sustrato los provea de
Agua, Carbono, Nitrgeno, Fsforo, Azufre y sales de sodio o de potasio, que toma por
diferentes procesos de asimilacin.
Las bacterias se pueden clasificar de acuerdo a los requerimientos nutricionales en:
Autotrofas y Heterotrofas. Las primeras son aquellas que transforman sustancias
inorgnicas en orgnicas y las ltimas, toman los elementos necesarios para su nutricin de
compuestos orgnicos.
OBJETIVO
1. El alumno inocular microorganismos en medios con diferentes contenidos de
requerimientos nutricionales y diferenciar su crecimiento en los mismos.
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Manual de Prcticas
MATERIALES
- Cultivo de 24 hrs. de Escherichia coli, Saccharomyces cereviceae y Streptococcus
feacalis o Staphylococcus epidermidis.
- 4 cajas de Petri con:
- nicamente agar.
- Agar y minerales.
- Agar, minerales y fuente de Carbono orgnico (glucosa)
- Agar, minerales, glucosa y fuentes de Nitrgeno (peptona).
- Asa bacteriolgica
- Mechero.
- Marcador permanente
METODOLOGA
a)
b)
c)
d)
e)
Dividir las 4 cajas de Petri en 4 partes cada una.

Inocular las 3 cepas en cada parte dividida, una parte quedar sin inocular.
Incubar a 35C /48 hrs.
Anote sus resultados y haga los esquemas de lo que realiz.
Escriba sus observaciones y conclusiones.
REPORTE
Resultados
C) Realizar esquemas de lo observado.
D) Elaborar una tabla donde indique cada uno de los microorganismos observados su
crecimiento y los diferentes requerimientos que asimilo.
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CUESTIONARIO
1. Defina lo que es un Nutriente.
2. Enumere 3 sustratos como fuente de Carbono.
3. Enumere 3 sustratos como fuente de Nitrgeno.
4. Explique Por qu los microorganismos tienen diferentes requerimientos

nutricionales?
5. En base a los resultados obtenidos. Explica con qu nutrientes se obtuvo el mayor

crecimiento bacteriano.
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
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PRCTICA No. 7
FERMENTACIN DE LACTOSA
INTRODUCCIN
La fermentacin de la lactosa, tambin llamada fermentacin lctica, es el proceso
celular donde se utiliza glucosa para obtener energa teniendo como producto de desecho
la formacin de cido lctico.
Se produce en muchas bacterias (bacterias lcticas), tambin en algunos protozoos y
en el msculo esqueltico humano. Es responsable de la produccin de productos lcteos
acidificados tales como yogurt, quesos, cuajada, crema cida, etc. El cido lctico tiene
excelentes propiedades conservantes de los alimentos.
Las bacterias difieren en los hidratos de carbono que pueden utilizar y en los tipos y
cantidades de cidos mixtos producidos. Estas diferencias de actividades enzimticas
constituyen una de las caractersticas importantes por las cuales se reconocen las diferentes
especies.
La fermentacin bacteriana de la lactosa es ms compleja que la de la glucosa, ya
que la lactosa es un disacrido compuesto de glucosa y galactosa unido por un enlace
glucosdico.
La capacidad de un microorganismo para fermentar un carbohidrato dado, depende
de las enzimas que contenga el microorganismo. Los productos finales de la fermentacin
varan de un microorganismo a otro.
Un ejemplo de este tipo de fermentacin es la acidificacin de la leche. Ciertas
bacterias (lactobacilos), al desarrollarse en la boca utilizan la lactosa (azcar de leche)
como fuente de energa. La lactosa, al fermentar, produce energa que es aprovechada por
las bacterias y el cido lctico es eliminado. La precipitacin de las protenas de la leche,
ocurre por el descenso de pH debido a la presencia de cido lctico. En ausencia de
oxgeno, las clulas animales convierten el cido pirvico en cido lctico. El cido lctico
puede ser un veneno celular. Cuando se acumula en las clulas musculares produce
sntomas asociados con la fatiga muscular.
El cido lctico se produce mediante la fermentacin alcohlica y fermentacin

lctica. En condiciones anaerobias (ausencia de oxgeno), la fermentacin responde a la
necesidad de la clula de generar la molcula de NAD+, que ha sido consumida en el
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proceso energtico de la gluclisis. En la gluclisis la clula transforma y oxida la glucosa

en un compuesto de tres tomos de carbono, el cido pirvico, obteniendo dos molculas de
ATP; sin embargo, en este proceso se emplean dos molculas de NAD+ que actan como
aceptores de electrones y pasan a la forma NADH. Para que puedan tener lugar las
reacciones de la gluclisis que producen energa es necesario restablecer el NAD+ por otra
reaccin.
Figura 20. La Gluclisis, del griego glycos: azcar y lysis: ruptura, es el primer paso de la
respiracin, es una secuencia compleja de reacciones que se realizan en el citosol de la
clula y por el cual la molcula de glucosa se desdobla en dos molculas de cido pirvico.
Es el ciclo metablico ms difundido en la naturaleza, tambin se lo conoce como ciclo de
Embden-Meyerhof.
OBJETIVO
1.- Realizar una prueba presuntiva de fermentacin de carbohidratos
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MATERIALES
Muestras problema de agua y alimentos

Caldo lactosado
Tubos de ensaye con agua estril
Tubos para campana Durham
Algodn
Asa de siembra
Incubadora
Termmetro
Mechero
Alcohol
Pipetas estriles
Pinzas estriles
Papel aluminio estril
Balanza
Marcador permanente
METODOLOGA
1) Con el marcador permanente

Etiquetar cada uno de los tubos que
contiene caldo lactosado con los
siguientes datos:
Tipo de muestra
Fecha
No. de equipo
Seccin.
Figura 21. Los datos deben marcarse perfectamente
en cada tubo para evitar confusiones en los
resultados.
2) Con las muestras lquidas ejemplo fig. 23, medir 1 ml. y verterlo al tubo con caldo
lactosado fig. 24mezclar perfectamente agitando el tubo, incubar a 36C + - 0.5
durante 48 hrs.
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Figura 23.-Muestras liquidasFig. 24.- Tubos con caldo lactosado inoculados
3) Si la muestra es slida, pesar un gramo del alimento y depositarlo en el tubo con agua
estril, agitar y tomar 1 ml. de esta muestra e incorporarla al tubo con el caldo
lactosado. Incubar como se explic en el paso anterior.
Figura 25.-Incubadora
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NO GAS
GAS
SIN VIRAJE DE COLOR

VIRAJE DE COLOR
Figura 26. Tubos con campana Durham.
REPORTE
Resultados
Dibujar cada uno de los tubos e indicar si son positivos o negativos.
CON
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CUESTIONARIO
1.- Qu se forma con la fermentacin de carbohidratos?
2.- Cul es la funcin de la campana Durham?
3.- Qu es una prueba presuntiva para la determinacin de coliformes?
4.- En base a la clasificacin de medios de cultivo, Qu tipo de medio es el caldo lactosado

segn sus componentes?
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
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PRCTICA No. 8
DETERMINACIN DE COLIFORMES
INTRODUCCIN
Con el anlisis bacteriolgico del agua o de los alimentos se puede determinar

parcialmente si son aptos o no para el consumo humano. Con este tipo de estudios es
posible detectar a microorganismos que son muy numerosos en las aguas negras y en las
heces fecales, son las bacterias coliformes fecales de la familia Enterobacteraceae.
Cuando estos organismos se encuentran presentes en el agua o alimentos, nos indica
que han sido contaminados con aguas negras o materia fecal. Puede ser que contengan
bacterias que causen enfermedades gastrointestinales como la fiebre tifoidea o disentera.
OBJETIVO
1.- Realizar una prueba confirmativa para coliformes.
MATERIALES:
- Tubos positivos de la prctica anterior
- Caldo bilis verde brillante
- Caldo EC
- Incubadora
- Bao Mara
- Termmetro
- Algodn
- Alcohol
- Asa bacteriolgica
METODOLOGA
1.- Separar los tubos positivos de la prctica anterior.
2.- Por cada tubo positivo, con el marcador permanente etiquetar un tubo con caldo EC y
otro con caldo bilis verde brillante.
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3.-Determinacin de Coliformes Totales: Esterilizar el asa y tomar una muestra de caldo

lactosado e inocular el tubo con caldo bilis verde brillante, incubar a 36C por 48 hrs.
4.- Determinacin de Coliformes Fecales: Repetir el paso anterior pero ahora inoculando el
tubo con caldo EC , incubar a 45C en bao Mara durante 24 hrs.
5.- Realizar una tincin de Gram de las muestras positivas.
Calde EC o CBVB
Figura 27
Incubar
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Interpretacin de resultados
La reaccin es positiva cuando se produce fermentacin de los carbohidratos del

medio que provoca que este vire a amarillo y produzca gas que queda retenido en la
campana Durham.
Figura 28. El viraje de color del medio indica

crecimiento de la bacteria inoculada con
utilizacin de la lactosa como fuente de
carbono.
Figura 29. El gas en la campana de

Durham indica fermentacin de la
lactosa con formacin de gas a esa
temperatura de 37 C.
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Figura 30. La determinacin de coliformes se realiza mediante la utilizacin de medios de

cultivo selectivos.
Figura 31.El grupo coliforme est formado por los siguientes gneros: a) Enterobacter,
b)Klebsiella, c) Citrobacter y
d) Escherichia (No todos los autores incluyen al gnero
Citrobacter dentro de este grupo).
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REPORTE
Resultados
a) Dibujar y reportar las muestras positivas como coliformes totales y/o fecales.
b) Indicar el sitio exacto donde fueron comprados los alimentos.
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CUESTIONARIO
1.Qu caractersticas tienen las bacterias coliformes?
2. Menciona 3 gneros de bacterias coliformes indicando su importancia.
3. Los medios que se utilizaron en esta prctica, son diferenciales o selectivos, por qu?
4. Indica las diferencias entre coliformes totales y fecales.
5.- Completa el siguiente cuadro correctamente.

Medio de cultivo
Caldo lactosado
Caldo bilis verde brillante
Caldo EC
Componentes
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
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Microbiologa
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PRACTICA No. 9
AGENTES FSICOS Y AMBIENTALES
INTRODUCCIN
Los microorganismos responden de manera distinta a cualquier cambio que puede
presentarse en su entorno que no sea de ndole nutricional o qumica; sino ms bien de
carcter fsico y ambiental; los cuales tienen una relacin muy estrecha en consecuencia de
su desarrollo y finalmente de su crecimiento. Estos efectos hacen responder a los
microorganismos de tal virtud que se han agrupado en diferentes categoras en
consecuencia a dicho resultado:
1. Cuando se toma como parmetro la temperatura los microorganismos se clasifican
en:
a) Psicotrficos
b) Mesoflicos
c) Termoflicos y termodricos
De los agentes fsicos, el calor tienen las mayores aplicaciones y los mtodos ms
importantes para el estudio y cultivo de los microorganismos. Y para la destruccin de
stos bajo ciertas condiciones son la esterilizacin y la pasteurizacin.
2. Refirindose al pH est enfocado a la preferencia que tienen ciertos grupos de
microorganismos, sin embargo podemos encontrar bacterias que pueden crecer no
solo a pH neutro, sino que tambin a pH tanto acido ( de 5.0 a 6.5) y alcalinos (de
8.0 a 9.0). Por otra parte los hongos y levaduras desarrollan a pH por debajo de 5.0,
y muchos hongos filamentosos desarrollan a mrgenes de pH extremos.
3. De acuerdo a la capacidad de resistir presiones osmticas considerablemente altas se
encuentran los haloflicos. Tiene mucho que ver la Actividad Acuosa (Aw) que se
relaciona con esta tipo de parmetro.
4. Cuando los microorganismos se desarrollan y crecen adecuadamente respondiendo a
condiciones de atmosfera de incubacin se clasifican en:
a) Aerobios estrictos
b) Aerobios y anaerobios facultativos
c) Anaerobios estrictos
d) Microaeroflicos
e) Capnoflicos
5. Existe un factor fisicoqumico denominado Potencial Redox (Eh), que tiene mucho
que ver tanto con el comportamiento aerobio y anaerobio de los microorganismos,
como su capacidad de reducir u oxidar sustancias orgnicas e inorgnicas.
Microbiologa
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OBJETIVO
1. Realizar tcnicas de carcter fsico que alteran el entorno en que se desarrollan los
microorganismos y estudiar la clasificacin que se les da de acuerdo a cada parmetro
fsico.
DESTRUCCIN DE LAS BACTERIAS POR EL CALOR.

MATERIALES
Cultivos bacterianos.
2 tubos o matraces con caldo nutritivo estril.
2 cajas de Petri con agar nutritivo (A.N.).
Asa bacteriolgica
Mechero.
Marcador permanente
MTODO
f) Inocule los tubos o matraces con las cepas bacterianas proporcionadas.
g) Marcar los tubos perfectamente y calentarlos de la siguiente forma:
Tubo 1: 61 C por 10 minutos.
Tubo 4: 100 C por 20 minutos
Tubo 6: No calentar (control).
h) Dividir una caja de Petri con A.N. en 6 partes y sembrar una asada de cada uno de
los tubos.
i) Incubar a 37C /24 hrs.
j) Haga lo mismo, usando la otra cepa.
k) Llene la siguiente tabla con los resultados para el efecto del calor de las bacterias.
Microorganismos
CRECIMIENTO DESPUS DEL CALENTAMIENTO

CONTROL
61C/10
l) Haga los esquemas representativos
61C/20
100C/10
100C/20
120C/15
Microbiologa
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CUESTIONARIO
6. Cules son los intervalos de temperatura ptima de cada uno de los siguientes
grupos de microorganismos?
Anote ejemplos de cada uno de los grupos
a) Psicotrficos,__________________________________________________Ejemplo
s:__________________________________________________________________
____
b) Mesoflicos,_________________Ejemplos: __________________________.
c) Termoflicos y termodricos, _____________________________________
Ejemplos: ____________________________________________________.
7. Mencione algunas bacterias patgenas que sean sensibles al calor.
8. Cul es el pH ptimo de crecimiento de las bacterias, hongos y levaduras que sean

patgenas?
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
Microbiologa
Manual de Prcticas
PRCTICA No. 10
EVALUACIN DE PRODUCTOS COMERCIALES
ANTIMICROBIANOS
INTRODUCCIN
Desde que se tuvo conocimiento de que muchas enfermedades son ocasionadas por
microorganismos, la humanidad ha estado buscando la forma de exterminarlos.
En la actualidad existen en el mercado infinidad de productos a los que se les
atribuyen propiedades germicidas y que tienen muy diversos usos: pastas de dientes,
lquidos desinfectantes, etc.
Es interesante valorar el poder antimicrobiano que tienen este tipo de productos.
Para ello existen tcnicas como la de difusin en agar y la tcnica de diluciones en tubo. En
esta ocasin se aplicar la tcnica en tubos, la cual consiste en agregar a un cultivo del
microorganismo, una cantidad conocida del producto que se desea probar.
OBJETIVOS
1.- Evaluar la eficacia en la actividad antimicrobiana de diferentes productos comerciales.
2.- Comparar diferentes marcas de productos de este tipo.
MATERIALES
- Tubos con caldo nutritivo estril
- Mechero
- Asa bacteriolgica
- Diferentes agentes antimicrobianos comerciales
- Cultivos puros de Escherichia coli y Staphylococcus sp.
- Pipetas estriles de 1ml
- Pipetero de Acero Inoxidable
- Horno Pasteur
METODOLOGA
1) En un tubo con caldo nutritivo estril, con la pipeta esterilizada de 1ml agregar
0.l ml. de solucin del antimicrobiano que se desea probar.
Microbiologa
Manual de Prcticas
2) Enseguida inocular en un tubo un cultivo puro de Escherichia coli.

Como se muestra en la fig.32
3) Repetir la operacin del inciso 1 y 2 con Staphylococcus sp.
4) Agitar los tubos para distribuir uniformemente las bacterias.
5) Incubar durante 48 horas a 35 o 37C
6) Despus de la incubacin observar si hay desarrollo.
Figura 32
Figura 32. Es importante cuidar la asepsia durante la evaluacin de los productos
antimicrobianos, ya que as se sabr en verdad cual es su alcance y eficacia en el control de
microorganismos indeseables.
Figura 33. Difusin en agar y diluciones en tubo para probar la eficacia de los productos
antimicrobianos.
Microbiologa
Manual de Prcticas
REPORTE
Resultados
Microorganismo
Agente
antimicrobiano
Desarrollo
Efectividad
CUESTIONARIO
1.- Mencione dos de los diferentes efectos que pueden tener los agentes qumicos sobre los
microorganismos.
2.- Qu aplicacin tienen los agentes probados?
3.- Qu indica un resultado con desarrollo microbiano en presencia del agente qumico?
Microbiologa
Manual de Prcticas
4.- Cul de los agentes probados tuvo mayor efectividad con E. coli?
5.- Cul de los microorganismos utilizados present mayor sensibilidad a los agentes
qumicos?
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
Microbiologa
Manual de Prcticas
PRCTICA No. 11
DIFERENCIA ENTRE UN AGENTE BACTERICIDA
Y UN BACTERIOSTTICO
INTRODUCCIN:
Por sus efectos en los microorganismos los agentes qumicos pueden ser de dos
tipos bsicos: bactericidas y bacteriostticos.
Cuando un antibitico mata a los microorganismos se dice que es bactericida;
mientras que cuando simplemente impide su desarrollo se habla de un bacteriosttico. Por
lo general los agentes bacteriostticos tienen un efecto reversible; es decir, que al eliminar
el agente, los microorganismos vuelven a su actividad normal y pueden crecer si se les
coloca en las condiciones que necesitan para su crecimiento.
OBJETIVO
1. Probar la accin bactericida o bacteriosttica de algunos agentes qumicos con efecto
antimicrobiano.
MATERIALES:
- Tubos con caldo nutritivo estril
- Asa bacteriolgica
- Mechero
- Tubos problema de la prctica anterior
-.Marcador permanente
METODOLOGA
1) Con el asa estril Tomar una asada del material contenido en cada uno de los tubos en
que se probaron los agentes qumicos de la prctica anterior. (los negativos)
2) Inocular por separado en tubos que contengan caldo nutritivo estril.
3) Incubar a 37C por 48 horas.
4) Despus del tiempo de incubacin, observar si hay desarrollo del cultivo.
Microbiologa
Manual de Prcticas
NOTA: Se toman como positivos aquellos tubos en los que se presente turbidez en el medio
y como negativos los que estn cristalinos (Fig. 34).
Figura 34. Tubos con microorganismos y dosis de productos antimicrobianos.
REPORTE
Microbiologa
Manual de Prcticas
Resultados
Microorganismo
Agente
Qumico
Turbidez en
el medio
Efecto
del agente
CUESTIONARIO
1.- Qu diferencia hay entre un agente bactericida y un bacteriosttico?
2.- En ausencia de un agente qumico antimicrobiano, qu otros factores pueden inhibir

del crecimiento de las bacterias?
3.- Por qu se utilizaron nicamente los tubos negativos de la prctica anterior?
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
Microbiologa
Manual de Prcticas
Microbiologa
Manual de Prcticas
PRACTICA No. 12
PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIBITICOS
INTRODUCCIN
Un antibitico se ha definido como una sustancia producida por un organismo
viviente, que inhibe el crecimiento o la actividad de otro organismo y que tiene una
toxicidad selectiva.
El uso de los antibiticos en la quimioterapia tuvo su origen en 1929 cuando
Fleming encontr que el hongo Penicillium inhiba el crecimiento de los estafilococos,
desde entonces se han descubierto otros organismo productores de este tipo de sustancias y
en la actualidad muchos se preparan por sntesis.
Aunque se han encontrado cientos de antibiticos diferentes, no todos se utilizan en
medicina, ya que la mayora de ellos presentan una alta toxicidad para el organismo
humano. Los que se utilizan son aquellos que tienen efecto sobre los microorganismos, a
concentraciones relativamente inofensivas para las clulas humanas.
No todas las substancias con propiedades antibiticas actan de la misma manera,
sino que se pueden presentar diferentes mecanismos de accin.
La actividad antimicrobiana se mide in vitro para determinar: 1) la potencia de un
agente antimicrobiano en solucin; 2) la concentracin de agentes en los lquidos del
cuerpo o en los tejidos y 3) la sensibilidad de un microorganismo dado, a concentraciones
conocidas de la droga.
En muchos casos de infeccin es necesario conocer la sensibilidad del
microorganismo al antibitico, incluso cuando se conoce la identidad del agente causal, ya
que existen muchas cepas mutantes que se tornan resistentes.
La sensibilidad a los antibiticos se puede medir por un mtodo de difusin en agar,
o utilizando una tcnica de dilucin en tubo para determinar la concentracin inhibitoria
mnima (CIM).
Existen varios aspectos importantes en la interpretacin de los mtodos de
sensibilidad con discos, ya que la zona de inhibicin de crecimiento depende de varios
factores:
1.) El poder de difusin del antibitico en el medio. Algunos antibiticos no
difunden bien en el medio de cultivo utilizado.
Microbiologa
Manual de Prcticas
2.) El espesor del medio de cultivo. Una capa gruesa del medio permite una mayor
difusin vertical del antibitico, disminuyendo entonces la difusin en la superficie; por
estas razones la zona de inhibicin resulta relativamente menor en las placas gruesas.
3.) La colocacin correcta del disco. Mientras mayor sea la superficie del medio
que toque el disco, mayor ser la difusin del antibitico, y por lo tanto, ser mayor su
efectividad.
4.) Agentes bloqueadores. Existen algunas substancias con efecto bloqueador de la
accin de los antibiticos. Por ejemplo, el cido paraaminobenzoico bloquea la accin de
las sulfonamidas; por lo tanto si quiere investigarse la sensibilidad a estas sustancias debe
utilizarse un medio que no contenga este cido.
5.) El pH del medio. La aureomicina da zonas de inhibicin ms anchas en los
medios cidos que en los alcalinos, mientas que para el caso de la estreptomicina los
resultados son a la inversa.
6.) La tasa de desarrollo de los microorganismos que se investigan. Un
microorganismo de desarrollo lento permite que un antibitico de difusin rpida
establezca un nivel bactericida en el medio ambiente antes de que el desarrollo produzca
fenmenos visibles. Un microorganismo de desarrollo rpido, alrededor del mismo disco
de antibitico, podra alcanzar un nivel bastante alto antes de que se obtuvieran
concentraciones bactericidas en el medio; en estas condiciones la zona de inhibicin sera
mucho menor.
OBJETIVO
1. Probar la efectividad de algunos antibiticos sobre dos cepas de Escherichia coli y
Staphylococcus aureus.
MATERIALES:
- Discos impregnados con diferentes antibiticos
- Pinzas
- 2 Cajas de Petri con agar nutritivo estril
- Mechero
- Pipetas estriles
- Hisopos estriles
- Cultivos puros de: Escherichia coli y Staphyococcus aureus.
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Manual de Prcticas
METODOLOGA
Mtodo de Kirby-Bauer (difusin en agar)
1) Tomar una caja de Petri con agar nutritivo estril.
2) Inocular cerca de la periferia del medio, con una asada llena de cultivo puro de
Escherichia coli.
3) Con un hisopo estril distribuir uniformemente el inculo por toda la superficie del
medio de cultivo como se ilustra en la figura 35.
4) Sumergir en solucin desinfectante el hisopo, para posteriormente esterilizarlo.
5) En otra placa hacer lo mismo con un cultivo de Staphylococcus aureus.
6) Enseguida colocar sobre la superficie sembrada, los discos impregnados de diferentes
antibiticos, procurando que se adhieran bien al medio para que pueda efectuarse la
difusin sin problemas.
7) Etiquetar las cajas con los datos correspondientes.
8) Incubar a 35C por 48 horas.
9) Observar, interpretar los resultados y tomar nota de ellos.
Microbiologa
Manual de Prcticas
Figura 35
Interpretacin de resultados:
Durante la incubacin, el agente antimicrobiano difunde desde el disco hacia el
agar; cuanto ms se aleja del disco, menor ser su concentracin.
A una cierta distancia del disco se alcanza la MIC (concentracin mnima
inhibitoria); pasado este punto hay crecimiento, pero pasado este punto no hay desarrollo
bacteriano, sino que se presenta una zona de inhibicin (ver fig. 36 y 38), y el dimetro de
esta zona es proporcional a la cantidad de agente antimicrobiano aadida al disco y a la
efectividad total del agente contra el microorganismo.
Cada disco debe tener especificada la concentracin de antibitico que contiene y
despus de la incubacin, se podr observar la presencia o ausencia de la zona de
inhibicin. Si existe esta zona deber medirse el dimetro de la misma, hasta donde
empieza el crecimiento bacteriano.
Las medidas de las zonas inhibitorias dadas en milmetros, se comparan con datos
estndar para saber si realmente el microorganismo es sensible al antibitico en cuestin
(ver tabla).
Microbiologa
Manual de Prcticas
Figura 36. Disco de antibiticos (tambin llamado disco de Kirby-Bauer)
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Manual de Prcticas
Figura 37. Mtodo de la difusin en agar para determinar la actividad de los antibiticos.
Microbiologa
Manual de Prcticas
FIGURA 38. Despus de la incubacin se observan zonas de inhibicin alrededor de los

antibiticos que son efectivos.
REPORTE
Resultados
En el siguiente cuadro anote sus resultados para las dos especies probadas:
a)
El nombre del antibitico.
b)
El cdigo que corresponde al antibitico en el disco.
c)
El dimetro de la zona de inhibicin, medida en milmetros.
d) De acuerdo a las medidas del dimetro, compare en la tabla de datos del inserto estndar
y anote si el microorganismo es sensible, intermedio o resistente al antibitico.
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Manual de Prcticas
Staphylococcus aureus
Agente
antimicrobiano
Cdigo
Dimetro Sensibien mm.

lidad
Escherichia coli
Cdigo
Dimetro Sensibien mm.

lidad
CUESTIONARIO
1.- Qu diferencia existe entre un agente antimicrobiano y un antibitico?
2.- Por qu en algunas ocasiones los antibiticos no funcionan?
3.- Qu aplicacin tiene la prueba de sensibilidad a los antibiticos?
4.- Qu indica la ausencia de una zona de inhibicin?
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Manual de Prcticas
5.- De acuerdo a sus resultados qu antibitico recomendara aplicar para el caso de una
infeccin por Staphylococcus aureus?
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
Microbiologa
Manual de Prcticas
BIBLIOGRAFA
Alvarez M., Mendoza E. 1994.

Atlas R., Bartha R. 2005.
Wesley Longman. 677 pp.
Bradshaw J.
Manual Bsico de Bacteriologa. UNAM. 151pp.
Ecologa microbiana y microbiologa ambiental. Addison
1976. Microbiologa del laboratorio. Ed. Manual Moderno. 231 pp.
Brock, T. D., Madigan, M. T. Martinko, K. M. y Parker, J. 2004. Biology of

Microorganims.
Dcima
edicin.
PrenticeHall.
USA.
986
pp.
Campbell,
R.
1987.
Ecologa
Microbiana.
Ed.
Limusa.
Mxico.
586
pp.
Cowan K. y Park. K. T. 2006. Microbiology systems approach. McGraw Hill International

Edition. Boston. USA. 806 pp.
Holt, G. J., Krieg, N. R., Sneath, P. H. A., Staley, J. T., Williams S. T. 1994. Bergey.
1994. Manual of Determinative Bacteriology. 9a. Ed. Williams & Wilkins. Baltimore. 787
pp
Pelczar
M.1982.
Microbiologa,
Mc.
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Prescott, H. K. 2004. Microbiologa, Mc. Graww Hill 1240.pp.

Snchez-Yez J. M. 2005. Tpicos selectos de microbiologa. UMSNH 141.pp.
Stanier, R. Y., Adelberg, E. A. y Ingraham, J. L. 1989. Microbiologa. Cuarta Edicin.
Editorial
REPLAEspaa.
836.pp.
Tortora, F. C. 2001. Microbiology. Addison Wesley Longman
887
pp.

Man Microbiologia 25septiembre2014

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Microbiologa

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

Morelia, Michoacn, agosto de 2014

INTEGRANTES DE LA MATERIA DE MICROBIOLOGA

Bil. Ana Isabel Reza Maqueo

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

Nombre del alumno:

Ciclo escolar: __________ Evaluacin: ___________

Morelia, Mich., Agosto de 2014

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

Tcnicas de esterilizacin en bacteriologa....................... 1

Principales medios de cultivo y su preparacin............... 11

Tcnicas de aislamiento bacteriano.................................. 18

Morfologa bacteriana y colonial....................................... 29

Preparacin de frotis y tinciones................................... 36

Requerimientos nutricionales de los microorganismos..... 45

Agentes fsicos y ambientales...........................

Prctica No. 10.

Evaluacin de productos comerciales antimicrobianos...... 64

Prctica No. 11.

Diferencia entre un agente bactericida y un

Prueba de sensibilidad a los antibiticos. 71

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

Figura 1.Una autoclave es un dispositivo

Un fondo de acero inoxidable con

Un nivel con llave de paso para

Un empaque junta de hule para

Una tapadera que contiene un

Un control de tres calores (bajo,

Una cesta metlica

Descripcin de la olla. Fig. (2)

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

Un cuerpo cilndrico con topes hermticos

Figura 2. El tipo olla de presin es el ms comn, es un aparato para agua hirviendo a

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

NOTA: Los pipeteros requieren de un tiempo de 2 horas.

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

2) Explica qumicamente que le sucede al microorganismo en cada uno de los mtodos?

3) Cul es la importancia de la esterilizacin de todo el material usado en bacteriologa?

4) Qu mtodos se usan para esterilizar los medios de cultivo? y Por qu no se utilizan

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

5) Cul es la temperatura, presin y tiempo para la esterilizacin en autoclave, olla de

6) Por qu el asa bacteriolgica se debe esterilizar siempre antes y despus de usarse?

7) Mencione otras tcnicas de esterilizacin diferentes a las explicadas en la prctica.

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

Medios selectivos o inhibitorios: Cuando una muestra contiene gran cantidad de

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

su desarrollo y al mismo tiempo promover y/o seleccionar el crecimiento de los

Medios diferenciales, Son aquellos en los que se ponen de relieve propiedades

Medios de transporte, sirve para mantener varios microorganismos por un lapso

Figura 5. Tipos de medios de cultivo: a) y b) Medios generales; c) Medios enriquecidos;

1. Conocer y preparar los medios de cultivo ms comunes empleados en bacteriologa.

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

Figura 7. Finalizada la esterilizacin en al autoclave los medios lquidos se dejan enfriar a

U. M. S. N .H. Facultad de Biologa

Ciclo escolar: Evaluacin: _