Departamento de Bioqumica Humana

Facultad de Medicina Universidad de Buenos Aires

Agosto 2004
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CONTROL RESPIRATORIO
CURVAS DE CONSUMO DE OXIGENO
Prof. Dra. Silvia Gonzlez-Calvar
Prof. Dr. Hctor Coirini
En
condiciones
fisiolgicas,
el
transporte de electrones en la cadena
respiratoria mitocondrial est acoplado a la
fosforilacin de ATP. Recordemos que, desde
el punto de vista termodinmico, dos procesos
estn acoplados cuando la energa libre
liberada por uno de ellos (proceso exergnico)
es utilizada por el otro (proceso endergnico),
el cual, de otra manera, no podra ocurrir
espontneamente. Esto se pone en evidencia
cuando observamos que en la cadena
respiratoria
(proceso
exergnico),
los
electrones pueden fluir slo si el ADP es
simultneamente fosforilado a ATP (proceso
endergnico). As, el consumo de oxgeno
mitocondrial est regulado no slo por el aporte
de NADH, sino tambin por los niveles de ADP
y Pi.
La regulacin de la velocidad de
fosforilacin oxidativa por los niveles de ADP
se denomina CONTROL RESPIRATORIO.
Este mecanismo regulatorio permite que,
cuando los niveles de ADP se incrementan
como consecuencia de un gasto de ATP,
paralelamente aumenta la velocidad de
fosforilacin oxidativa para reponer el ATP
consumido. Debido a que la fosforilacin
oxidativa est acoplada a la cadena de
transporte de electrones, el incremento en la
velocidad de la fosforilacin oxidativa se refleja
por un aumento en el flujo de electrones a
travs de la cadena respiratoria y, por lo tanto,
del consumo de oxgeno (o bien por una

disminucin de la concentracin del oxgeno

del entorno).
En condiciones experimentales, el
control respiratorio puede evaluarse en
suspensiones mitocondriales de un dado tejido
en presencia de oxgeno. Las mitocondrias
deben estar intactas y ser incubadas con un
medio con sustratos oxidables que permitan la
generacin de coenzimas reducidas. Las
variaciones en el consumo de oxgeno son
evaluadas por un dispositivo que tiene un
electrodo sensible a las concentraciones de
oxgeno (polargrafo). Observar que un
aumento en el consumo de oxgeno se traduce
en una disminucin en la concentracin de
oxgeno. Los cambios en la velocidad de
consumo de oxgeno (consumo de oxgeno en
la unidad de tiempo) de la suspensin
mitocondrial puede comprobarse agregando
ADP al medio: esto provoca un rpido aumento
en el consumo de oxgeno.
Cuando las mitocondrias son suspendidas en un medio en el cual existe una alta
concentracin de sustratos, fosfatos y oxgeno,
se encuentran en un estado metablico
llamado Estado 4 y la respiracin es lenta.
Cuando se aade ADP se estimula la sntesis
de ATP y se incrementa la velocidad del
transporte de electrones, y por lo tanto, del
consumo de oxgeno: este estado metablico
se lo llama Estado 3, y permanece as hasta
que se consume el ADP aadido.

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GRAFICO 1

Concentracin de Oxgeno

Mitocondrias de hgado en suspensin

Estado4

ADP + Pi

Estado3

TIEMPO

Se denomina CONTROL RESPIRATORIO a

la relacin entre la respiracin en el Estado
3 y la correspondiente al Estado 4.
Otro ndice til para evaluar la
actividad mitocondrial es la relacin P:O, es
decir, la relacin entre el fosfato incorporado
al ATP y el oxgeno consumido al oxidar el

sustrato. Tanto el control respiratorio como

la relacin P:O, son utilizados para expresar
el grado de acoplamiento entre los procesos
de oxidacin y de fosforilacin. Valores
bajos de control respiratorio o de ndice P:O
indican mitocondrias daadas o desacopladas.

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ESTADOS METABLICOS MITOCONDRIALES

Nivel de
Factor
sustrato de la Velocidad de determinante de
cadena
respiracin
la actividad
respiratoria
respiratoria

Estado
Metablico

O2

Nivel de
ADP

Disponible

Bajo

Bajo

Lenta

Disponible

Alto

Muy bajo

Lenta

Disponible

Alto

Alto

Rpida

Disponible

Bajo

Alto

Lenta

ADP

No disponible
(anaerobiosis)

Alto

Alto

Nula

Oxgeno

ADP
Sustrato de la
cadena
respiratoria
Cadena
respiratoria

La evolucin de la concentracin de oxgeno en una suspensin mitocondrial en funcin de los

niveles de ADP y sustrato se puede ver en el GRAFICO 2

Inicialmente, las mitocondrias estn suspendidas en un medio con bajo nivel de sustrato y de
ADP, en presencia de oxgeno.
A.- Las mitocondrias no consumen oxgeno
porque al carecer de sustrato oxidable no
generan coenzimas reducidas y por lo tanto no
requieren oxgeno para su reoxidacin.

B.- El agregado de malato no modifica

marcadamente el consumo de oxgeno por
falta de ADP, por lo tanto no se observa
variacin en la concentracin de oxgeno.

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refleja con el cambio de pendiente que se

observa al final de esta fase.

El bajo nivel de ADP slo produce una ligera

disminucin de la concentracin de oxgeno (o
bien, un ligero incremento en el consumo de
oxgeno.

D.- El agregado de ADP no modifica los niveles

de oxgeno presentes. Esta situacin se debe
al agotamiento del sustrato.

C.- El agregado de ADP exgeno permite que

ocurra la fosforilacin oxidativa y, por lo tanto,
hay una disminucin en la concentracin de
oxgeno (aumento en el consumo de oxgeno).
El ADP agregado se va agotando a medida
que la fosforilacin oxidativa ocurre. Esto se

E.- El agregado de ms sustrato restablece el

sistema y la suspensin mitocondrial respira
activamente.

GRAFICO 2
Mitocondrias de hgado en suspensin

Concentracin de Oxgeno

Malato

ADP + Pi
Malato

C
D

TIEMPO

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ALGUNOS COMPUESTOS QUE INTERFIEREN EN LA CADENA RESPIRATORIA

Y LA FOSFORILACION OXIDATIVA
Tipo de interferencia: Inhibicin de la transferencia de electrones
Cianuro (CN-) ; Monxido de carbono (CO) ; Azida sdica (Na3N)
Inhiben la citocromo oxidasa (Complejo IV)
Antimicina A
Bloquea la transferencia de electrones desde el citocromo b al citocromo c1.
Rotenona ; Amital ; Piercidina A
Inhiben la transferencia de electrones desde un centro Fe-S de la NADH deshidrogenasa (Complejo I)
a la ubiquinona (CoQ).
Malonato
Inhibe la transferencia de electrones a nivel de la succinato deshidrogenasa (Complejo II).
Tipo de interferencia: Inhibicin de la ATPsintasa
Oligomicina ; Venturicidina
Bloquea el flujo de protones a travs de Fo.
Tipo de interferencia: Inhibicin del intercambio ATP-ADP
Atractilsido
Inhibe la adenina nucletido translocasa.
Tipo de interferencia: Desacoplamiento de la fosforilacin oxidativa y el transporte de
electrones
Dinitrofenol ; Carbonil-cianuro ; fenil hidrazona
Actan como cidos dbiles, disminuyendo la concentracin de protones en el espacio intermembrana.
Valinomicina
Ionforo del K+, disminuyendo el gradiente elctrico.
Protena desacopladota (termogenina)
Forma poros conductores de protones en la membrana interna de la mitocondria del tejido adiposo
marrn.

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ESTRUCTURAS DE ALGUNOS COMPUESTOS QUE INTERFIEREN EN LA

CADENA RESPIRATORIA Y LA FOSFORILACIN OXIDATIVA
Inhibidores de la transferencia de electrones desde un centro Fe-S de la NADH deshidrogenasa
(Complejo I) a la ubiquinona (CoQ)

Rotenona

Amital

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Bloqueante de la transferencia de electrones desde el citocromo b al citocromo c1

Antimicina A
Bloqueante de la fraccin Fo de la ATP sintasa , detiene el flujo de protones a travs de esta protena
e inhibe la sntesis de ATP

Oligomicina A

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Agentes desacopantes : Actan como cidos dbiles, disminuyendo la concentracin de protones en el

espacio intermembrana,

2,4 - Dinitro-fenol
o bien en el caso de un ionforo que transporta K+ hacia la matriz mitocondrial, disminuyendo el
gradiente elctrico.

Valinomicina

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Inhibidor de la translocasa de nucletidos de adenina. Disminuye la disponibilidad de ADP en la matriz

mitocondrial, inhibiendo la sntesis de ATP por falta de sustrato y aumento de ATP intramitocondrial.

Atractilsido

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EJEMPLOS DE CURVAS DE CONSUMO DE OXGENO CON EL AGREGADO DE COMPUESTOS

QUE INTERFIEREN EN LA CADENA RESPIRATORIA Y LA FOSFORILACION OXIDATIVA

EJEMPLO 1

Concentracin de Oxgeno

Mitocondrias de hgado en suspensin

Succinato
A

ADP + Pi
CN-

B
C

DNF
E
D

TIEMPO

A.- La suspensin mitocondrial en un entorno

aerbico y sustratos oxidables consume
oxgeno.
B.- Al agregar un sustrato oxidable se aumenta
la velocidad de consumo de oxgeno y por lo
tanto la concentracin de oxgeno disminuye y
tambin la del ADP endgeno, por lo tanto este
compuesto comienza a ser limitante.
C.- Al agregarle ADP + Pi, la velocidad de
consumo de oxgeno aumenta significativamente y entonces, la concentracin de
oxgeno disminuye en forma abrupta.

D.- Al agregar cianuro, que es un inhibidor del

complejo IV (citocromo oxidasa) se bloquea el
transporte de electrones y, por lo tanto, no hay
consumo de oxgeno. La concentracin de
oxgeno no se modifica.
E.- Al agregar 2,4 dinitro-fenol que es un
desacoplante de la fosforilacin oxidativa, sigue
sin variar la concentracin de oxgeno, es decir
no se reanuda el consumo de oxgeno porque la
cadena respiratoria contina bloqueada por el
cianuro que se agreg en los pasos anteriores.

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EJEMPLO 2
Mitocondrias de hgado en suspensin
Succinato

Concentracin de Oxgeno

D.- Al agregar oligomicina, que es

un inhibidor de la fraccin Fo de la
ATP sintasa, se bloquea la sntesis
de ATP y por lo tanto, tambin se
bloquea el transporte de electrones
porque ambos procesos estn
acoplados. As, no hay consumo de
oxgeno y la concentracin del
mismo se mantiene constante.

ADP + Pi
OLIG

B
C

DNF

D
E

E.- Al agregar 2,4 dinitro-fenol que

es un desacoplante de la fosforilacin oxidativa, se reanuda el
consumo de oxgeno (disminuye la
concentracin del mismo) porque la
cadena respiratoria puede funcionar
normalmente a pesar de que no hay
sntesis de ATP.

[ O 2] = 0

TIEMPO

A.- La suspensin mitocondrial en un entorno aerbico y

sustratos oxidables consume oxgeno.
B.- Al agregar un sustrato oxidable se aumenta la velocidad
de consumo de oxgeno y por lo tanto la concentracin de
oxgeno disminuye y tambin la del ADP endgeno, por lo
tanto este compuesto comienza a ser limitante.
C.- Al agregarle ADP + Pi , la velocidad de consumo de
oxgeno aumenta significativamente y entonces, la
concentracin de oxgeno disminuye en forma abrupta.

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Bibliografa
Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations. T.M. Devlin (ed). Wiley Liss, New York, 1997.
Principios de Bioqumica. A.L. Lehninger, D.L. Nelson, M.M. Cox. Ediciones Omega, Barcelona, 1995.
Alvarez S, Novoa Bermdez MJ, Boveris A. La mitochondria: estructura, funcin y especies reactivas
del Oxgeno. Antioxidantes y calidad de vida. 2 (5): 14-22, 1995.

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