Universidad de Carabobo, FCS

Escuela de Ciencias Biomdicas y Tecnolgicas

Departamento de Microbiologa
Asignatura Inmunologa

Prctica de Aglutinacin

Objetivo: Demostrar la capacidad de los anticuerpos de reaccionar con los determinantes

de superficie de un antgeno y producir una reaccin visible de aglutinacin.
Actividad I:
Reaccin 1: Determinacin de grupos sanguneos ABO. Prueba en lmina
Realizaremos la deteccin de Ag de la membrana de eritrocitos humanos (Grupos
Sanguneos) del Sistema ABO; comnmente denominada tipiaje de los glbulos rojos.

Prepare una suspensin de glbulos rojos (GR) de la siguiente manera:

1. Mida 0,5 ml de solucin salina en un tubo de ensayo.
2. Con una lanceta obtenga 1 gota de sangre del pulpejo del dedo, previamente lavado
con alcohol.
3. Tome la gota con un tubo capilar y depostela en el tubo con salina.
4. Mezcle por agitacin suave. Se obtiene as una suspensin de GR. de un 3%
aproximadamente.
Tome una lmina portaobjeto y divdala en dos reas, con un marcador.
Coloque en cada rea, una gota de antisuero especfico para tipiaje ABO (anti-A y antiB, respectivamente).
Aada al lado de cada gota de suero, una gota de la suspensin de GR
Mezcle suavemente cada par de gotas con un palillo y extienda la mezcla (en un rea
aprox. de 1 cm2 ).
Aplique movimientos rotatorios a la lmina, por unos 5 min.
Verifique el resultado de la reaccin, segn la presencia (o no) de aglomeracin de GR
(aglutinacin). Identifique la reaccin como positiva o negativa.

Interprete los resultados con ayuda del siguiente esquema:

GRUPO SANGUINEO

TIPO DE SUERO
anti A

anti - B

AB

Reaccin 2: Determinacin de grupos sanguneos ABO. Prueba en tubo de hemlisis

Este tipiaje, tambin se realiza en tubos, de la siguiente manera:

Coloque en una gradilla, tres tubos de vidrio (12 x 75 mm.).

Aada al primer tubo, una gota de suero anti A, al segundo una de suero anti B y
al tercero una gota de suero mixto anti AB, si est disponible.
Deposite en cada tubo, 1 gota de la suspensin de GR 3%.
Mezcle suficiente por agitacin manual suave.
Centrifugue los tubos por 1 min. a 1.500 rpm.
Tome cada tubo y agite suavemente, al mismo tiempo que lo observa sobre una fuente
de iluminacin.
Verifique la presencia o ausencia de aglutinacin macroscopica.
Anote los resultados y compare con la prueba anterior.

Actividad II: Prueba de aglutinacin comercial para la determinacin de la Protena C

Reactiva (PCR)
Seguir las indicaciones del fabricante (PCR-ltex directo, Wiener Lab, Argentina)
Actividad III: Determinacin de antgenos febriles:
Seguir las indicaciones del fabricante (Inmuno/Bactacol febrile antigens, I
mmunostics, Inc, USA)
Actividad IV: Determinacin del ttulo de antiestreptolisina O
Seguir las indicaciones del fabricante (O-Estreptolisina liofilizada, Wiener Lab,
Argentina)

gggm/14