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ELABORACIN DE UN ATLAS PARA LA DESCRIPCIN MACROSCPICA Y

MICROSCPICA DE HONGOS FITOPATGENOS DE INTERS EN ESPECIES DE


FLORES DE CORTE CULTIVADAS EN LA SABANA DE BOGOT








JULIE KATHERINE ARIAS TAUTA
ANDREA DEL PILAR JEREZ RAMIREZ







TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar el titulo de


Microbilogas Industriales











PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
BOGOT D.C
Noviembre 2008
















NOTA DE ADVERTENCIA





Artculo 23 de la Resolucin N 13 de Julio de 1946

La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus
alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velar por que no se publique nada
contrario al dogma y a la moral catlica y por que las tesis no contengan
ataques personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el
anhelo de buscar la verdad y la justicia.



























ELABORACIN DE UN ATLAS PARA LA DESCRIPCIN MACROSCPICA Y
MICROSCPICA DE HONGOS FITOPATGENOS DE INTERS EN ESPECIES DE
FLORES DE CORTE CULTIVADAS EN LA SABANA DE BOGOT





JULIE KATHERINE ARIAS TAUTA
ANDREA DEL PILAR JEREZ RAMIREZ











APROBADO




DAVID GMEZ HUMBERTO IBARRA
MICROBILOGO MICROBILOGO
DIRECTOR CODIRECTOR



ZULMA ARGUELLES OLGA MONTAEZ
BACTERIOLOGA MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
JURADO JURADO











ELABORACIN DE UN ATLAS PARA LA DESCRIPCIN MACROSCPICA Y
MICROSCPICA DE HONGOS FITOPATGENOS DE INTERS EN ESPECIES DE
FLORES DE CORTE CULTIVADAS EN LA SABANA DE BOGOT





JULIE KATHERINE ARIAS TAUTA
ANDREA DEL PILAR JEREZ RAMIREZ











APROBADO





Dra. INGRID SHULER Dra. JANETH ARIAS
BIOLOGA BACTERIOLOGA
DECANA ACADMICA DIRECTORA DE CARRERA

































DEDICAMOS ESTE TRABAJ O A DIOS POR SU GRACIA
Y PROTECCIN
A NUESTROS PADRES, AMIGOS Y FAMILIARES
POR SU APOYO, PACIENCIA, AYUDA Y CONFIANZA


























AGRADECIMIENTOS


A:

La Corporacin MICROS y a Humberto Ibarra por la capacitacin que nos brindaron acerca
de microscopia y por permitirnos emplear los equipos necesarios en nuestra etapa prctica.

Las fincas asociadas a la empresa Americaflor Ltda. distribuidas en la Sabana de Bogot,
que nos permitieron la toma de muestras de plantas infectadas, e igualmente a los grupos
MIPE de cada de unas de estas fincas.

Todos los empleados del Laboratorio de sanidad vegetal de Americaflor y a Zulma Arguelles
por el apoyo y facilitacin de materiales para llevar a cabo el procesamiento de las muestras,
y por su incondicional colaboracin para facilitar la realizacin de nuestro trabajo.

David Gmez y Humberto Ibarra por su apoyo, experiencia y conocimiento sobre el tema.
Por ser guas y acompaarnos en nuestro proceso de aprendizaje.








TABLA DE CONTENIDO
RESUMEN
ABSTRACT
1. INTRODUCCIN .................................................................................................................. 3
2. MARCO TERICO ............................................................................................................. 4
2.1 SECTOR FLORICULTOR EN COLOMBIA.................................................................... 4
2.1.1 Antecedentes ........................................................................................................... 4
2.1.2 Flor de corte ........................................................................................................... 5
2.1.2.1 Alstroemeria ................................................................................................... 6
2.1.2.1.1 Enfermedades ........................................................................................ 6
2.1.2.2 Anigozanthus ................................................................................................. 7
2.1.2.2.1 Enfermedades ........................................................................................ 7
2.1.2.3 Antirrhinum majus ......................................................................................... 8
2.1.2.3.1 Enfermedades ....................................................................................... 8
2.1.2.4 Clavel ............................................................................................................ 9
2.1.2.4.1 Enfermedades ....................................................................................... 9
2.1.2.5 Delphinium .................................................................................................. 11
2.1.2.5.1 Enfermedades ..................................................................................... 11
2.1.2.6 Gerbera ....................................................................................................... 13
2.1.2.6.1 Enfermedades ..................................................................................... 13
2.1.2.7 Girasol ......................................................................................................... 15
2.1.2.7.1 Enfermedades ..................................................................................... 15
2.1.2.8 Gypsophila .................................................................................................. 17
2.1.2.8.1 Enfermedades ..................................................................................... 17
2.1.2.9 Kales ........................................................................................................... 18
2.1.2.9.1 Enfermedades ..................................................................................... 18
2.1.2.10 Molucellas ................................................................................................. 18
2.1.2.10.1 Enfermedades ..................................................................................... 18
2.1.2.11 Rosa .......................................................................................................... 19
2.1.2.11.1 Enfermedades ................................................................................... 19
2.1.2.12 Solidago .................................................................................................... 20
2.1.2.12.1 Enfermedades ................................................................................... 21
2.1.2.13 Statice ....................................................................................................... 21
2.1.2.13.1 Enfermedades ................................................................................... 21

2.1.2.14 Stock ......................................................................................................... 22
2.1.2.14.1 Enfermedades .................................................................................... 22
2.2 HONGOS FITOPATOGENOS ..................................................................................... 23
2.2.1 Hongos patgenos vasculares .............................................................................. 23
2.2.2 Hongos causantes de la pudricin de la base del tallo y races ........................... 24
2.2.3 Hongos causantes de enfermedades foliares ....................................................... 24
2.2.4 Hongos causantes de enfermedades en flores ..................................................... 24
2.2.5 Fitopatgenos asociados a flor de corte ................................................................ 25
2.2.5.1 Alternaria sp. ................................................................................................. 25
2.2.5.1.1 Taxonoma ............................................................................................. 25
2.2.5.1.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas ................................... 26
2.2.5.1.3 Sntomas ................................................................................................ 26
2.2.5.2 Botrytis sp ...................................................................................................... 26
2.2.5.2.1 Taxonoma ............................................................................................. 27
2.2.5.2.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas .................................... 27
2.2.5.2.3 Epidemiologa y sntomas ...................................................................... 28
2.2.5.3 Cercospora ..................................................................................................... 29
2.2.5.3.1 Taxonoma ............................................................................................. 29
2.2.5.3.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas ................................... 29
2.2.5.3.3 Patognesis y Sntomas ........................................................................ 30
2.2.5.4 Fusarium sp ................................................................................................... 30
2.2.5.4.1 Taxonoma ............................................................................................. 31
2.2.5.4.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas ................................... 31
2.2.5.4.3 Patognesis y sntomas ........................................................................ 32
2.2.5.5 Heterosporium sp. ......................................................................................... 33
2.2.5.5.1 Taxonoma .............................................................................................. 33
2.2.5.5.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas ................................... 33
2.2.5.5.3 Patognesis y sntomas ........................................................................ 34
2.2.5.6 Itersonilia sp .................................................................................................. 34
2.2.5.6.1 Taxonoma .............................................................................................. 35
2.2.5.6.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas ................................... 35
2.2.5.6.3 Patognesis y sntomas ......................................................................... 35
2.2.5.7 Peronospora sp ............................................................................................. 35
2.2.5.7.1 Taxonoma ............................................................................................. 36
2.2.5.7.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas ................................... 36
2.2.5.7.3 Patognesis y Sntomas ........................................................................ 36
2.2.5.8 Phragmidium sp. ........................................................................................... 37

2.2.5.8.1 Taxonoma ............................................................................................. 37
2.2.5.8.2 Caractersticas microscpicas ................................................................ 37
2.2.5.8.3 Patognesis y sntomas ........................................................................ 38
2.2.5.9 Pythium sp. ................................................................................................... 38
2.2.5.9.1 Taxonomia ............................................................................................. 39
2.2.5.9.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas ................................... 39
2.2.5.9.3 Patognesis y sntomas ........................................................................ 39
2.2.5.10 Rhizoctonia solani ....................................................................................... 40
2.2.5.10.1 Taxonoma ........................................................................................... 40
2.2.5.10.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas ................................. 41
2.2.5.10.3 Patognesis y Sntomas ...................................................................... 41
2.2.5.11 Sclerotinia sp............................................................................................... 42
2.2.5.11.1 Taxonoma ........................................................................................... 42
2.2.5.11.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas ................................. 42
2.2.5.11.3 Patognesis y sntomas ...................................................................... 42
2.2.5.12 Sphaerotheca sp. ........................................................................................ 43
2.2.5.12.1 Taxonoma ........................................................................................... 43
2.2.5.12.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas ................................. 44
2.2.5.12.3 Patognesis y sntomas ...................................................................... 44
2.2.5.13 Verticillium ................................................................................................... 45
2.2.5.13.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas ................................. 45
2.2.5.13.3 Patognesis y sntomas ..................................................................... 45
2.3 MICROSCOPA DE LUZ COMO TCNICA PARA LA OBSERVACIN DE HONGOS
FITOPATOGENOS ............................................................................................................. 46
2.3.1 LUZ ........................................................................................................................ 46
2.3.1.1 Propiedades de la luz .................................................................................... 47
2.3.1.2 Tipos de luz .................................................................................................... 47
2.3.2 FORMACIN DE IMGENES .............................................................................. 48
2.3.3 PLANOS DE IMAGEN Y APERTURA EN EL MICROSCOPIO ............................ 49
2.3.4 ILUMINACIN KOEHLER .................................................................................... 50
2.3.5 COMPONENTES OPTICOS DEL MICROSCOPIO DE LUZ ................................. 51
2.3.6 TCNICAS DE MICROSCOPA DE LUZ ............................................................. 53
2.3.6.1 Microscopa de campo claro .......................................................................... 54
2.3.6.2 Microscopa de contraste de fases ............................................................... 55
2.3.6.3 Microscopa de contraste de interferencia diferencial (DIC) .......................... 57
3. JUSTIFICACIN ................................................................................................................ 61
4. OBJETIVOS ....................................................................................................................... 63

4.1 OBJETIVO GENERAL ................................................................................................. 63
4.2 OBJETIVOS ESPECFICOS ........................................................................................ 63
5. MATERIALES Y MTODOS ............................................................................................. 64
5.1 DISEO DE LA INVESTIGACIN .............................................................................. 64
5.1.1 Poblacin de estudio y muestra ............................................................................ 64
5.2 MTODOS ................................................................................................................... 64
5.2.1 Localizacin del rea de muestreo ........................................................................ 64
5.2.2 Mtodo de muestreo ............................................................................................. 64
5.3 PROCESAMIENTO DE MUESTRAS .......................................................................... 65
5.3.1 Aislamiento de microorganismos .......................................................................... 65
5.4 MICROSCOPA ............................................................................................................ 66
5.4.1 Obtencin de imgenes ........................................................................................ 66
5.5 RECOLECCION DE INFORMACION Y ANALISIS DESCRIPTIVO ............................ 66
5.6 DISEO Y ELABORACIN DEL ATLAS .................................................................... 67
6. RESULTADOS .................................................................................................................. 68
6.1 Identificacin y descripcin de enfermedades fngicas en flores de corte ................. 68
6.1.1 ALSTROEMERIA ................................................................................................... 68
6.1.1.1 Hongos fitopatgenos en Alstroemeria ......................................................... 68
6.1.2 ANIGOZANTHUS ................................................................................................... 71
6.1.2.1 Hongos fitopatgenos en Anigozanthus ...................................................... 71
6.1.4 CLAVEL................................................................................................................. 74
6.1.4.1 Hongos fitopatgenos en Clavel ................................................................... 75
6.1.5 DELPHINIUM ........................................................................................................ 80
6.1.5.1 Hongos fitopatgenos en Delphinium .......................................................... 80
6.1.6 GERBERA ............................................................................................................. 83
6.1.6.1 Hongos fitopatgenos en Gerbera ................................................................ 84
6.1.7 GIRASOL .............................................................................................................. 87
6.1.7.1 Hongos Fitopatgenos en Girasol ................................................................ 87
6.1.8 GYPSOPHYLA ...................................................................................................... 89
6.1.8.1 Hongos Fitopatgenos en Gypsophyla ......................................................... 89
6.1.9 KALES ................................................................................................................... 91
6.1.9.1 Hongos fitopatgenos en Kales .................................................................... 92
6.1.10 MOLUCELLA ...................................................................................................... 93
6.1.10.1 Hongos Fitopatgenos en Molucella .......................................................... 93
6.1.11 ROSA .................................................................................................................. 94

6.1.11.1 Hongos Fitopatgenos del Rosal ................................................................ 95
6.1.12 SOLIDAGO ....................................................................................................... 101
6.1.12.1 Hongos Fitopatgenos en Solidago .......................................................... 101
6.1.13 STATICE ........................................................................................................... 104
6.1.13.1 Hongos Fitopatgenos en Statice ............................................................. 104
6.1.14 STOCK .............................................................................................................. 106
6.1.14.1 Hongos Fitopatgenos en Stock ............................................................... 106
6.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas de hongos fitopatgenos ................ 109
6.2.1 Alternaria sp. ........................................................................................................ 109
6.2.2 Botrytis sp ........................................................................................................... 110
6.2.4 Fusarium oxysporum ............................................................................................ 112
6.3.5 Fusarium roseum ................................................................................................. 113
6.3.6 Heterosporium sp ................................................................................................. 114
6.3.7 Itersonilia .............................................................................................................. 115
6.3.8 Peronospora sp. ................................................................................................... 116
6.3.9 Pragmidium sp. .................................................................................................... 117
6.3.10 Pythium sp. ........................................................................................................ 119
6.3.11 Rhizoctonia sp .................................................................................................... 120
6.3.12 Sclerotinia sp. ..................................................................................................... 121
6.3.13 Sphaerotheca pannosa ...................................................................................... 122
6.3.14 Verticillium sp. .................................................................................................... 123
7. DISCUSIN DE RESULTADOS ...................................................................................... 124
8. CONCLUSIONES ............................................................................................................. 129
9. RECOMENDACIONES ..................................................................................................... 130
10. REFERENCIAS BIBLIOGRAFCAS .............................................................................. 131










LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Alternaria sp. ............................................................................................................ 25
Figura 2. Botrytis cinerea ........................................................................................................ 27
Figura 3. Conidios de Cercospora .......................................................................................... 29
Figura 4. Macroconidias de Fusarium oxysporum .................................................................. 30
Figura 5. Heterosporium sp..................................................................................................... 33
Figura 6. Esporas de Itersonilia sp. ........................................................................................ 34
Figura 7. Esporangios y esporas de Peronospora sp. ............................................................ 35
Figura 8. Esporas de Phragmidium sp .................................................................................... 37
Figura 9. Pythium oligandrum ................................................................................................. 38
Figura 10. Micelio de Rhizoctonia solani ................................................................................ 40
Figura 11. Sclerotinia sp. ........................................................................................................ 42
Figura 12. Condios Sphaerotheca pannosa .......................................................................... 43
Figura 13. Conidiforos y conidios de Verticillium .................................................................. 45
Figura 14. Representacin de la luz como Quantos, Ondas, Vectores, Rayos. .................... 46
Figura 15. Configuracin de los planos focales conjugados en el microscopio de luz. ......... 50
Figura 16. Especificaciones del objetivo ................................................................................. 53
Figura 17. Mecanismo ptico del microscopio de campo brillante. ........................................ 54
Figura 18. Esquema descriptivo de contraste de fase Positivo (a) y Negativo (b) ................. 56
Figura 19. Configuracin esquemtica para microscopa de contraste de fases. .................. 57
Figura 20. Incidencia al azar de los rayos de luz en un polarizador ...................................... 58
Figura 21. Representacin esquemtica del Prisma Wollaston Modificado ........................... 59
Figura 22. Ilustracin esquemtica de la configuracin del microscopio para contraste
diferencial de interferencia. ..................................................................................................... 59
Figura 23. Trayectorias de onda alterando el espcimen de reas adyacentes de acuerdo
con el grosor e ndice de refraccin ........................................................................................ 60
Figura 24. Alstroemeria ........................................................................................................... 68
Figura 25. Sntomas iniciales de enfermedad por Alternaria sp. en hojas de Alstroemeria ... 69
Figura 26. Formacin de manchas aceitosas por infeccin con Alternaria sp ....................... 69
Figura 27. Deterioro de tejidos y formacin de micelio de Botritys sp. en tallo ...................... 70
Figura 28. Anigozantus ........................................................................................................... 71
Figura 29. Manchas causadas por Botritys sp.en hojas de Anigozhantus ............................. 71
Figura 30. Snapdragon ........................................................................................................... 72
Figura 31. Pudricin de tejidos con presencia de micelio del patgeno. ................................ 73
Figura 32. Lesin inicial de tejidos de Snapdragon por Sclerotinia sp. .................................. 73
Figura 33. Decaimiento generalizado de la planta con aparicin de micelio de Sclerotinia sp.
en tallos ................................................................................................................................... 74
Figura 34. Clavel ..................................................................................................................... 74
Figura 35. Plantas de clavel afectadas por Botritys sp. Decaimiento de ramas y presencia de
micelio en flor. ......................................................................................................................... 75
Figura 36. Infeccin avanzada de Fusarium roseum presentando muerte de tejidos ............ 76
Figura 37. Sntomas iniciales de enfermedad por Heterosporium sp. en hojas de clavel ...... 77
Figura 38. Boton de clavel afectado por Heterosporium sp. ................................................... 77
Figura 39. Corte transversal de un tallo de clavel afectado por Fusarium oxysporum ........... 78
Figura 40. Sntomas avanzados de infeccin por Sclerotinia en rama de clavel ................... 79

Figura 41. Delphinium ............................................................................................................. 80
Figura 42. Corona en Delphinium afectada por Botritys sp. ................................................... 80
Figura 43. Atrofia y pudricin de tejidos con formacin de micelio algodonoso de Botritys sp.
en Delphinium ......................................................................................................................... 81
Figura 44. Sntomas de Mildeo Polvoso sobre el haz de una hoja en Delphinium ................ 82
Figura 45. Tallo con necrosis por infeccin de Mildeo Polvoso .............................................. 82
Figura 46. Haz de una hoja con manchas causadas por Alternariaen Delphinium ................ 83
Figura 47. Gerbera .................................................................................................................. 83
Figura 48. Mancha en ptalo de Gerbera afectado con Botritys sp ....................................... 84
Figura 49. Manchas acuosas causadas por Alternaria sp. en ptalos .................................. 85
Figura 50. Lesiones caractersticas de Itersonilia sp en ptalos de Gerbera ......................... 86
Figura 51. Girasol .................................................................................................................... 87
Figura 52. Hoja de girasol afectada con Mildeo Polvoso ........................................................ 87
Figura 53. Decaimiento y pudricin de una rama de Girasol afectada con Scerotinia sp. ..... 88
Figura 54. Gypsophila ............................................................................................................. 89
Figura 55. Sntomas avanzados de enfermedad en tallos de Gypsophila. Atrofia de rganos y
presencia interna de esclerocios ............................................................................................ 89
Figura 56. Sntomas caractersticos de enfermedad por Pythium en brotes de gypsophila . 90
Figura 57. Sntomas avanzados de enfermedad por Phytium sp. Atrofia y necrosis de races
y tallos ..................................................................................................................................... 91
Figura 58. Kyles ...................................................................................................................... 91
Figura 59. Sntomas iniciales de mildeo velloso en hojas de Kyles ....................................... 92
Figura 60. Mollucellas ............................................................................................................. 93
Figura 61. Mancha causada por Cercospora sp en etapas iniciales de enfermedad............. 93
Figura 62. Hojas de Mollucella infectadas con Cercospora sp. Debilitamiento y ruptura de
tejidos ...................................................................................................................................... 94
Figura 63. Rosa ....................................................................................................................... 94
Figura 64. Envs de una hoja mostrando pstulas de roya en rosa ...................................... 95
Figura 65. Areas clorticas en el haz de hojas de rosa causadas por la esporulacin del
patgeno en el envs .............................................................................................................. 95
Figura 66. Esporulacin del patogeno sobre hojas de rosa ................................................... 96
Figura 67. Sntomas avanzados de enfermedad afectando follaje en rosas .......................... 97
Figura 68. Sntomas iniciciales de mildeo velloso en la base de la cabeza floral del rosal. .. 97
Figura 69. Curvatura y enrojecimiento de tejidos de rosa afectados por Peronospora sp. ... 98
Figura 70. Sntomas caractersticos de enfermedad generados por Botritys en ptalos de
rosa ......................................................................................................................................... 98
Figura 71. Infeccin severa del patgeno con produccin de micelio en flor ......................... 99
Figura 72. Clorosis y enrojecimiento parcial del tallo por Verticillium sp. ............................. 100
Figura 73. Sntomas avanzados de enfermedad presentando necrosis unilateral y formacin
de micelio en tallos ................................................................................................................ 100
Figura 74. Solidago ............................................................................................................... 101
Figura 75. Manchas foliares de mildeo polvoso en solidago ................................................ 101
Figura 76. Clorosis y presencia de pstulas de Phragmium sp. en hojas de solidago ....... 102
Figura 77. Sntoma de infeccin por Sclerotinia sp. en ramas de solidago .......................... 103
Figura 78. Sntomas avanzados de enfermedad. Atrofia y amarillamiento de tejidos.
Presencia de esclerocios ...................................................................................................... 103
Figura 79. Statice .................................................................................................................. 104
Figura 80. Atrofia y pudricin de tejidos de Statice por Botritys sp. ..................................... 104
Figura 81. Haz de hojas de Statice presentando manchas causadas por Cercospora sp. .. 105
Figura 82. Lesiones caractersticas de Cercospora sp. con presencia de esporas sobre hojas
de statice. .............................................................................................................................. 105
Figura 83. Stock .................................................................................................................... 106
Figura 84. Pudricin de tejidos con presencia de micelio del patgeno ............................... 106
Figura 85. Sntomas caractersticos de infeccin por Rhizoctonia sp. ................................. 107

Figura 86. Muerte de plntulas por contaminacin de Rhizoctonia sp. en suelo ................. 107
Figura 87. Planta afectada por Sclerotinia sp . ..................................................................... 108
Figura 88. Sntomas avanzados de enfermedad con presencia de micelio. ........................ 108
Figura 89. Crecimiento de Alternaria sp. en medio V8 ......................................................... 109
Figura 90. Condios de Alternaria sp. empleando DIC. Objetivo: 100 x AN: 1.3 .................. 109
Figura 91. Crecimiento de Botritys sp. en medio PDA ......................................................... 110
Figura 92. Botrytis sp. Campo claro. Objetivo: 100 x AN: 1.3 ........................................... 110
Figura 93. Hifas Botrytis sp. Campo claro Objetivo: 100 X AN: 1.3 .................................... 110
Figura 94. Crecimiento de Cercospora sp. en medio V8 ...................................................... 111
Figura 95. Conidios de Cercospora sp. Campo Claro Objetivo: 100 x AN: 1.3 ................... 111
Figura 96. Crecimiento de Fusarium oxysporum en medio PDA .......................................... 112
Figura 97. Fusarium oxysporum. empleando campo claro. Objetivo: 100 x AN: 1.3 .......... 112
Figura 98. Crecimiento de Fusarium roseum en medio PDA ............................................... 113
Figura 99. Fusarium roseum, empleando DIC. Objetivo: 100 x AN: 1.3 ............................ 113
Figura 100. Crecimiento de Heterosporium sp. en medio V8. .............................................. 114
Figura 101. Heterosporium sp. Campo Claro Objetivo: 40 x AN: 0.65 ................................. 114
Figura 102. Crecimiento de Itersonilia sp. en medio PDA .................................................... 115
Figura 103. Itersonilia sp. empleando DIC Objetivo:60X AN: 1.3 ........................................ 115
Figura 104. Envs de una hoja de rosa contaminada con Peronospora sp. Muestra enfocada
en estereo. Microscopio Olympus BX 51 .............................................................................. 116
Figura 105. Peronospora sp. empleando campo claro Objetivo: 40x AN: 0.65 .................. 116
Figura 106. Envs de una hoja de solidago infectada con Pragmidium sp. Imagen enfocada
en Estereo Microscopio Olympus BX51 ............................................................................... 117
Figura 107. Esporas de Pragmidium sp. empleando contraste de fases. Objetivo 60 x. A.N:
0.65 ....................................................................................................................................... 118
Figura 108. Esporas de Pragmidium sp empleando Campo claro. Objetivo 40x. A.N: 1.3 .. 118
Figura 109. Esporas de Pragmidium sp. empleando DIC. Objetivo: 100 x AN: 1.3 ........... 118
Figura 110. Crecimiento de Pythium en medio V8 ............................................................... 119
Figura 111. Zoosporas de Pythium sp. empleando Campo Claro. Objetivo: 60x A.N: 0.65 119
Figura 112. Crecimiento de Rhizoctonia sp. en medio PDA ................................................. 120
Figura 113. Hifas de Rhizoctonia sp. empleando contraste de fases. Objetivo 40x A.N: 0.65
.............................................................................................................................................. 120
Figura 114. Crecimiento de Sclerotinia sp. en medio PDA .................................................. 121
Figura 115. Esclerocios de Sclerotinia sp. tomados a partir de una planta infectada ......... 121
Figura 116. Micelio de Sclerotinia sp. empleando campo claro Objetivo: 40x AN: 0.65 ..... 121
Figura 117. Envs de una hoja de rosa contaminada con Sphaerotheca sp. Muestra
enfocada en estreo, microscopio Olympus. BX 51 ............................................................. 122
Figura 118. Condios Sphaerotheca pannosa empleando Campo Claro Objetivo: 40 x ...... 122
Figura 119. Crecimiento de Verticillium sp. en medio PDA .................................................. 123
Figura 120. Conidiforos y condios de Verticillium sp empleando Campo claro Objetivo:
100 x AN: 1.3 ........................................................................................................................ 123








RESUMEN

Las enfermedades causadas por hongos son algunos de los principales problemas que
afectan a las flores de corte cultivadas en la Sabana de Bogot. Algunos de estos hongos
presentan similitudes en cuanto a los sntomas manifestados en las plantas, lo cual conlleva
a una difcil identificacin del patgeno y as mismo a la adopcin de medidas adecuadas de
prevencin y control. Debido a esto, se propuso la elaboracin de un atlas descriptivo e
ilustrativo acerca de las principales enfermedades fngicas causadas en flores de corte
cultivadas en esta rea.

Para la identificacin de los principales hongos fitopatgenos de inters se realizaron visitas
a diferentes fincas vinculadas a la empresa Americaflor Ltda., donde se tomo material
infectado, que luego fue procesado y analizado. Estos hongos luego fueron evaluados
microscpicamente llevando a cabo diferentes tcnicas de microscopa ptica, que
permitieron la identificacin y la toma de micrografas de las diferentes caractersticas
morfolgicas de los microorganismos.

Se determin que el hongo con mayor incidencia fue Botrytis sp. evidenciando ataques
sobre diversos rganos en todas las especies de plantas colectadas en las diferentes fincas.
La tcnica de campo claro result ser mas empleada para la obtencin de la mayora de
micrografas, con respecto a otras tcnicas.











ABSTRACT


Diseases caused by fungi, are one of the mayor troubles that affect cut flowers cultivated in
Sabana de Bogot. Some of this fungus presents similarities in the symptoms displayed in
the plants which entails to a difficult identification of the pathogen as well as the adoption of
suitable prevention and control measures. Due to several problems, like the exposed ones
previously, it is decided to make a descriptive and illustrative atlas about main diseases
caused in flowers cultivated in this area.

To fungus identify cause of disease, visits to different farms of Americaflor Ltda. Company,
were made, to take samples of infected material, for its processing and analysis. Strains were
then evaluated microscopically, using different optical microscopy techniques, which allowed
differentiation and micrographs taking of typical morphologic characteristics.

The most incident fungus was Botrytis sp., demonstrating attacks on diverse organs in all
plant species collected in the farms. Significantly influencing in this aspect, diversity of
factors like environmental conditions, plant type and strain nature. The technique of brilliant
field turned out being most useful for the micrographs obtaining, in relationship to other
techniques.









3

1. INTRODUCCIN


La produccin de flores en Colombia se destina principalmente a la exportacin, siendo una
actividad de significativa importancia en el mbito internacional, ya que posiciona al pas en
el segundo lugar a nivel mundial despus de Holanda. Existe una alta variedad de plantas
cultivadas de inters y uso ornamental, incluyendo dentro de las ms conocidas, rosa, clavel,
alstroemeria, ster, statice, solidago, grbera y girasol, entre otras, las cuales se
caracterizan por ser altamente distribuidas como flores de corte. En la Sabana de Bogot se
produce el 92% del total de la produccin que en gran medida se comercializa a nivel
nacional e internacional. No obstante, el sector floricultor se ve afectado por la presencia de
hongos patgenos encontrados en el suelo o como consecuencia de diversas fuentes de
contaminacin, los cuales generan un alto impacto debido a la variedad de formas en que se
presentan, as como la diversidad de climas en los que se desarrollan y el amplio nmero de
especies de plantas a las que pueden afectar, teniendo en su rango de hospederos a todas
las familias de plantas conocidas; situacin que ocasiona una gran vulnerabilidad del sector
al ataque en ecosistemas que conllevan a daos irreparables, lo que constituye un factor
limitante en la productividad provocando la sustitucin o erradicacin de una gran variedad
de cultivos, afectando por tanto el fortalecimiento sectorial.

Dentro de los microorganismos ms incidentes, se encuentran hongos como Fusarium sp.,
Botrytis sp., Alternaria sp., Peronospora sp., Rhizoctonia sp., y Phytium sp. entre otros, los
cuales son de gran relevancia por su capacidad para atacar diversos cultivos, por las
representativas lesiones y el dao generado en la planta y su facilidad de propagacin.

La investigacin orientada a la identificacin de microorganismos fitopatgenos, es de vital
importancia para el desarrollo de planes de contencin en cultivos de inters, siendo
fundamental que el acceso a material de soporte de calidad, el cual es actualmente
deficiente debido al celo con el que los tcnicos y directrices del sector floricultor conservan
su informacin, y a la falta de aportes pblicos por parte de quienes desarrollan estudios
referentes al tema. Lo que requiere acceso a equipos con tcnicas avanzadas de
observacin, obteniendo un excelente material grfico, que sirva como herramienta para la
identificacin y caracterizacin morfolgica, evitando confusiones entre microorganismos y
asegurando la obtencin de diagnsticos confiables y la toma de medidas de control
efectivas.

4

2. MARCO TERICO


2.1 SECTOR FLORICULTOR EN COLOMBIA

2.1.1 Antecedentes

Las actividades de floricultura en Colombia tienen su inicio a mediados de la dcada de los
60s, cuando los costos y condiciones de produccin del sector permitieron encontrar
elementos altamente competitivos respecto a otros actores del comercio mundial. Las
principales reas de cultivo como la Sabana de Bogot y la zona de Rionegro en Antioquia,
representaban tierras frtiles que acompaadas de una temperatura adecuada (de 13C a
21C), la uniformidad entre las horas de luz y sombra y la ausencia de estaciones, permitan
obtener un alto nivel de cosechas por ao. La actividad en el pas tambin tena la ventaja
de contar con bajos costos salariales, lo que permiti que a comienzos de los 70s el 80% de
las flores producidas en el pas fueran exportadas a los Estados Unidos (BAON et al
1993).

La floricultura fue convirtindose en una actividad destacada dentro del sector agropecuario
colombiano caracterizndose por el uso intensivo de recursos, el mximo aprovechamiento
de la tecnologa y la mayor optimizacin posible del espacio, conservando una gran
incidencia social puesto que es la actividad agrcola con ms mano de obra trabajando por
hectrea (BAON et al 1993).

El crecimiento de la actividad floricultora en Colombia ha permitido generar beneficios
econmicos importantes para el pas como fuente de generacin de divisas: actualmente,
Colombia es el segundo exportador de flores frescas cortadas en el mundo, con una
participacin del 13% en el comercio total despus de Holanda, que cuenta con una
participacin del 56%. Adicionalmente, la floricultura es el primer rengln de exportaciones
no tradicionales del pas. Estados Unidos es hasta el momento el primer cliente de flores de
Colombia con una participacin del 75% del total importado (BAON et al 1993).
.




5

2.1.2 Flor de corte

Las flores se caracterizan por ser generalmente, terminales solitarias, con spalos en
nmero de cinco y presentan lbulos laterales; por tanto la disposicin y el nmero de
ptalos, se distingue en varias clases incluyendo:

- Apuntada o con centro elevado: en donde sus ptalos centrales siguen erectos y no
se extienden.
- Globosa o centro globoso: todos los ptalos tienen forma de plato, incursados por
arriba, presentan adems ptalos centrales erectos formando una esfera.
- Forma de copa: el centro permanece libre al abrir y los ptalos se extienden,
formando una copa.
- Llana: los ptalos se abren horizontalmente o ligeramente reflejos. Ocurre
frecuentemente en flores sencillas o semidobles.
- Imbricadas: solo se produce en flores muy dobles, con ptalos cortos, reflexos, que
se solapan, formando una roseta como una camelia.
- Informal: Irregular en lnea, arreglo y tamao de ptalos.
- Forma de estrella: habitual en flores semidobles, con ptalos horizontales, pero los
bordes laterales se enrollan hacia abajo.
- Forma de clavel: ptalos dentados en el borde superior.
- Fino: expansin gradual del cliza al centro, luego el capullo se afina hacia la parte
superior.
- Puntiagudo: extendido del todo en la base, con punta clara en la parte alta.
- Ovoide: forma de huevo.

Los frutos poseen un receptculo carnoso, que rodea numerosos carpelos monospermos
situados en su pared interna. Algunas variedades son estriles, y por ello no tiene fruto.
(FERRER 1995)

Las flores, pueden ser de color blanco, prpura, rosa, amarillo; solitarios o reunidos en
corimbo terminal. No obstante, por medio de los cruces e hibridaciones actualmente es
posible obtener nuevas formas y colores, as como diversos nmeros de ptalos (BAON et
al 1993).


6

2.1.2.1 Alstroemeria

Se trata de plantas perennes, raramente anuales, con rizomas cilndricos simple o
ramificados, de color parduzco con races delgadas o las nutricias cilndricas, blancas,
carnosas, en ocasiones con alto contenido de almidn. Los tallos areos erectos, a veces
decumbentes, en general son de dos tipos: estriles, con muchas hojas desarrolladas y
frtiles, generalmente con hojas reducidas, como escamas alargadas. Hojas alternas,
resupinadas (con torsin cerca de la base o algo ms arriba) o no, separadas o agrupadas
en rosetas, lminas gruesas o delgadas, de borde entero, liso o encrespado, glabras o con
papilas, de forma linear, lanceolada, elptica u ovalada, agudas u obtusas (MUOZ et al
2003).

2.1.2.1.1 Enfermedades

Pudriciones de tallo y raz (Pythium sp.)

Podredumbre de raz y del tallo tienen tpicamente como resultado el amarillamiento,
raquitismo o marchitamiento de las partes reas de las plantas. Las races pueden tener
lesiones diferenciadas y se pueden pudrir las races laterales y las puntas de las races, sin
embrago con frecuencia se pudren grandes partes del sistema radicular. (DIAZ et al 2002)

Pudriciones de tallo y raz (Phythophthora sp.)

Causa podredumbre de la raz y de la corona, que se traduce en raquitismo o
marchitamiento de la planta, consiste en lesiones superficiales blandas, hundidas y reas
internas blandas necrticas, de color pardo oscuro. (DAUGHTREY et al 2001)

Los tallos enfermos tienen lesiones hundidas y acuosas que pueden ser bastante estrechas
y estn verticalmente dispuestas, o bien pueden ser muy grandes y rodear el tallo. Las hojas
infectadas son acuosas, de colores pardos oscuros y flcidos. (DAUGHTREY et al 2001)

Pudriciones de tallo y raz (Rhizoctonia solani)

Causa la pudricin de las plntulas, los tallos se oscurecen en la lnea del suelo y se
encogen hasta tener una apariencia de tallo de alambre. En condiciones clidas y hmedas
7

el hongo crecer por toda la plntula, a veces englobando grandes partes de las bandejas
de plntulas. (DAUGHTREY et al 2001)

Manchas en las hojas (Alternaria sp.)

En las hojas se presentan pequeas manchas circulares de color caf frecuentemente
rodeadas de un halo amarillo. Las manchas tienen la caracterstica de tener anillos
concntricos de color oscuro. Usualmente las manchas a parecen en las hojas mas viejas y
de estas suben al resto de la planta. (DAUGHTREY et al 2001)

2.1.2.2 Anigozanthus

Planta herbcea perenne de hasta 3 metros de altura, con tallos altos y ramificados.
Rizomas horizontales ms o menos alargados, algunas veces con un ltex rojo. Las hojas
son principalmente basales, muy largas, con unas pocas hojas pequeas en el tallo. Las
flores, dispuestas en grupos, son tubulares y estn densamente cubiertas de pelos;
presentan una escotadura que llega hasta la mitad de su longitud. Son de color verde
amarillento, destacando el color naranja de los estambres. El gnero Anigozanthos
comprende 11 especies que habitan de forma natural nicamente en el sudoeste de
Australia (GOODWIN 1993).

2.1.2.2.1 Enfermedades

Alternaria sp

Los sntomas de Alternaria aparecen sobre tallos, follaje durante perodos lluviosos.
Despus del inicial moteado, las hojas se tornan quebradizas y cambian de color amarillo-
caf a caf oscuro. Las manchas se agrandan y forman aros concntricos, con apariencia
rizada; y por ltimo todo el follaje es destruido. Si la humedad persiste los botones florales y
flores se infectan. La temperatura ptima para la enfermedad es de 30C. En estados
avanzados la enfermedad destruye la planta. (AGRIOS 1997)




8

Fusarium sp

Los sntomas de la enfermedad aparecen de forma unilateral; se acompaa de un
amarillamiento parcial de las hojas, a veces se observa una mitad clortica y la otra verde
normal y el doblamiento de los brotes hacia el lado de la planta enferma. (AGRIOS 1997)

Pudriciones de tallo y raz (Pythium sp)

Ocasiona lesiones graves en raz y en tallo, dependiendo la edad de desarrollo de la planta,
siendo ms severa la infeccin al comienzo de su desarrollo, se habla entonces de la etapa
de enraizamiento; o mas leve en la etapa adulta en la cual hay ms fortaleza en la planta
logrando contrarrestar la enfermedad ( AGRIOS 1997)

Podredumbre Gris (Botrytis sp.)

Produce podredumbres blandas, y se puede observar un caracterstico moho de color
grisceo. En hojas se puede observar una necrosis, alrededor del punto de entrada,
pudiendo avanzar al resto de la hoja si las condiciones son favorables para el hongo.
(AGRIOS 1997)

2.1.2.3 Antirrhinum majus

Planta erecta, leosa por debajo de la familia de las escrofulariceas de hasta 2 m. Hojas
opuestas o esparcidas de forma lanceolada de hasta 7 cm. Flores de color prpura de 3 a 4
cm agrupadas en espigas pegajosas. A veces flores de color amarillento claro, rosa, roja,
violeta, etc. Florecen desde primavera a otoo, dependiendo de la fecha de siembra En
paredes abandonadas en rocas y sitios secos. Con una altura de 40-60 cm la mayora de
variedades y hasta 1 m (ALVAREZ 2006).

2.1.2.3.1 Enfermedades

Roya (Puccinia antirrhini.)

Las hojas presentan pequeas pstulas parduzcas. En los tallos y flores en primavera,
aparecen otras pstulas negras, la planta pierde las hojas y se debilita. (DAUGHTREY et al
2001)
9


Mildeo Velloso (Peronospora antirrhini.)

Las hojas presentan en el haz manchas irregulares de color amarillo plido. En el envs, si
el ambiente es hmedo y clido, aparece un moho blanco-grisceo. (DAUGHTREY et al
2001)

Podredumbre del cuello (Fusarium sp., Verticillium sp., Phytophthora sp.)

Produce la muerte de plantas en semillero a consecuencia de diversos hongos que necrosan
el cuello. (DAUGHTREY et al 2001)

Pudriciones de tallo y raz (Sclerotinia sp.)

Produce marchitamiento causado por las germinacin de los esclerocios; y la pudricin
foliar, de tallos, de flores es el resultado de la infeccin de las ascosporas. (DAUGHTREY et
al 2001)

2.1.2.4 Clavel

Esta planta se caracteriza por ser herbcea, con ncleos muy marcados en el tallo, posee
hojas sencillas, enteras, con frecuencia estrechas, opuestas y sin estipulas. La flor es
actinomorfa, hermafrodita, con perianto diferenciado en el cliz de cinco spalos
concrescentes y en corola, que casi nunca falta, de ptalos libres. Posee estambres en uno
o dos verticilios, cada uno de cinco piezas, posee crpelos concrescentes en un ovario
supero unilocular. El fruto suele ser una cpsula que muchas veces se abre por dientes
apicales (FONTQUER, 1991).

2.1.2.4.1 Enfermedades

Alternaria (Alternaria dianthi)

Se presenta sobre las hojas, pequeas manchas translcidas, luego sobre la base de las
hojas, se forman manchas de 1.5 cm de dimetro, inicialmente son grisceas y se recubren
de puntas negras bien visibles. A nivel del nudo el ataque provoca un blanqueado y
10

desecamiento de las hojas laterales, tambin la muerte de la ramificacin axilar. (GAMBOA
1998)
Maya del clavel (Fusarium oxysporum)

Induce una marchitez vascular caracterizada por el amarillamiento progresivo del follaje, que
finalmente conduce a la muerte de las plantas. El hongo invade las races y se disemina a
travs del xilema, causando adems una pudricin del cuello. (ARBELAEZ 1998)

Enfermedad de la rama (Fusarium roseum)

Es bastante comn en lugares de mucha humedad y puede matar completamente la planta.
En una planta adulta que aparenta estar sana en el tallo a nivel del nudo, aparece una
mancha roscea con el centro blanco y un poco amarillento.

La apariencia de una planta atacada por esta enfermedad es semejante a la de una planta
atacada por Fusarium oxysporum Sin embargo, en el cuello se observa fcilmente unas
motas algodonosas color rosado, adems, se observa cierto estrangulamiento del cuello con
una pudricin, provocando finalmente la muerte de la planta (GAMBOA 1998)

Pudriciones de tallo y raz (Rhyzoctonia sp.)

Ataca principalmente en los primeros das de la plantacin, se agrava si los esquejes se
siembran muy enterrados. El hongo se favorece con altas temperaturas y vive a nivel del
suelo.

La planta se pone de color verde grisceo y toma un aspecto de flacidez hasta que se
marchitan completamente. Generalmente al arrancar la planta se separa fcilmente el
sistema radicular del cuello de la planta, donde se nota una pudricin. (GAMBOA 1998)

Podredumbre gris (Botrytis sp.)

Es muy grave y aunque a veces se encuentra en las hojas y tallos en el clavel, afecta ms
las flores y a nivel del corte de la flor. En este ltimo caso, es comn en invernaderos que
riegan con manguera y que mojan el punto donde se cortaron las flores, es aqu donde se
desarrolla una pudricin que va corriendo hasta la base de la planta provocando su muerte.
11

En la flor es aun ms problemtica, su deteccin a simple vista se dificulta, principalmente
cuando se inicia en los ptalos internos (GARCS 1986).

En algunas variedades de color oscuro, a veces es casi imposible detectar la enfermedad en
su inicio. Generalmente empieza con un moho de color gris sobre los ptalos, luego se va
formando una pudricin suave color caf amarillenta hasta cubrir completamente la flor (PIE
et al 1991).

Mancha anillada (Heterosporium sp.)

Se ha reportado como un patgeno que ataca las hojas, tallos y flores del clavel. Los
sntomas iniciales se manifiestan por manchas blanquecinas que van evolucionando hasta
convertirse en crculos manchados de color pardo grisceo con un anillo exterior pardo
oscuro, cuya apariencia le ha dado a la enfermedad el nombre tpico de mancha anillada
(BRICEO, G 1990).

Verticillium sp.

Clorosis, bronceamiento o enrojecimiento parcial de la lmina foliar y escaldadura marginal
de las hojas. Los sntomas aparecen unilateralmente en la planta (LATORRE 1999).

2.1.2.5 Delphinium

El gnero Delphinium, perteneciente a la familia Ranunculceas, agrupa alrededor de 200
especies originarias de Europa, Asia, frica y Amrica. Comprende herbceas que pueden
comportarse como anuales, bianuales o perennes, en dependencia del clima, alcanzando
una altura mxima de 2 m. Poseen hojas alternas, pecioladas, sumamente divididas, de
color verde brillante. De entre ellas surgen los tallos o espigas florales, grandes y erectos.
Las flores, simples o dobles, tienen forma de espoln y los colores ms frecuentes son
blanco, rosado, rojo, prpura, azul y violeta. (KEHDI 2003)

2.1.2.5.1 Enfermedades

Las enfermedades ms severas son causadas por hongos habitantes del suelo que pudren
la regin de la corona llegando a producir el colapso de la planta.

12

Entre estos se destacan:

Pudriciones de tallo y raz (Pythium sp.)

Ataca principalmente plantas jvenes, sobre todo en suelos demasiado hmedos y que no
estn bien drenados. Tras la presencia de Pythium, las plantas tendrn tallos muy hmedos
y se colapsarn. Aparentemente sin razn, las plantas ya crecidas y plantas madres
comenzarn a marchitarse y cogern un color amarillento (que a menudo se identifica
errneamente como una deficiencia nutricional), y a veces las hojas tendern a enrollarse
hacia abajo. Las plantas tendrn un crecimiento pobre y el rendimiento se reducir; hasta se
puede llegar a una prdida de la planta.

No es fcil detener un ataque de Pythium a tiempo, especialmente cuando se cultiva en
suelo, ya que los primeros sntomas de estrs en la planta no aparecen inmediatamente en
la parte que est sobre la tierra. Slo despus de algunos das las plantas se vern
afectadas. Pero en el mbito de las races el desarrollo de la enfermedad ha empezado hace
tiempo. (KEHDI 2003).

Pudriciones de tallo y raz (Sclerotinia sp)

Que pueden distinguirse por la presencia de masas fungosas blancas, en el cuello de la
planta.

Fusarium oxysporium

Que causa un chancro de la corona y marchites (NOTICIAS BALL, 2003).

Podredumbre gris (Botrytis sp.)

Las infecciones que se origina o que parten de las conidias, al llegar al tejido permanecen
quiescentes (campo), pero se convierten en agresivas cuando el tejido entra en senescencia
o es estresado. En contraste, infecciones iniciadas por micelio en residuos de plantas, tales
como ptalos muertos adheridos al tejido sano, inician una infeccin inmediata y agresiva.
La esporulacin de Botrytis en los residuos colonizados requiere de periodos favorables de
temperatura y humedad. (SUTTON 1995)

13

Manchas en las hojas (Alternaria sp)

En las hojas se presentan pequeas manchas circulares de color caf frecuentemente
rodeadas de un halo amarillo. Las manchas tienen la caracterstica de tener anillos
concntricos de color oscuro. Usualmente las manchas a parecen en las hojas mas viejas y
de estas suben al resto de la planta.

Mildeo Polvoso (Sphaerotheca sp)

Manchas blancas con aspecto harinoso aparecen en forma aislada sobre las hojas ms
jvenes, son el primer sntoma. Segn las variedades, poco a poco todo el follaje puede ser
infestado, igualmente los pednculos y las flores, afectando el aspecto decorativo del
producto. (EXPOFLORES, 1999)

2.1.2.6 Gerbera

Las formas cultivadas estn disponibles con flores rayadas en tonos intensos de amarillos,
salmn, rosa y rojo. Son propagadas a partir de cultivos de tejidos, as como de semilla. Son
propensas a deficiencias de boro, magnesio y hierro cuando se cultivan en mezcla de
nutrientes sin suelo. Se desarrollan muy bien con altas intensidades de luz. (DAUGHTREY et
al 2001)

2.1.2.6.1 Enfermedades

Manchas en las hojas (Alternaria sp.)

Formacin de pequeas manchas acuosas y con forma de ampollas parecen en el envs de
las hojas inferiores. Cuando las manchas maduran los centros aparecen hundidos de color
marrn y pueden mostrar halos difusos amarillos. Finalmente las manchas aparecen en el
haz de las hojas. Si las condiciones siguen siendo apropiadas para el desarrollo de la
enfermedad, las manchas se agrandan. En ciertos casos, las lesiones muestran anillos
concntricos y las lesiones prximas pueden unirse. (VALENZUELA 2001)




14


Podredumbre gris (Botrytis sp.)

La infeccin puede aparecer directamente o a travs de aberturas naturales o heridas por
medio de los tubos germinativos conidiales, o por el crecimiento hifal sobre las plantas.

En gerbera causa podredumbre de las plntulas (damping off), punteado, marchitamiento de
hojas y flores y podredumbre de la corona. Las hojas desarrollan lesiones zonada, y los
ptalos de la flor muestran manchas marrones y necrosis de las puntas o se marchitan
enteramente. (VALENZUELA 2001)

Cercospora brunkii

Las lesiones foliares, son al principio manchas hundidas de color verde plido, con el tempo
las manchas se vuelven grises y la acumulacin de esporas causa que las lesiones se
oscurezcan y que parezca que tienen centros salientes. Cuando las lesiones se unen, se
desarrollan reas necrticas, puede desarrollarse clorosis en las proximidades de las
heridas, las hojas fuertemente infectadas se caen. (VALENZUELA 2001)

Rhizopus sp.

El tejido de hojas, flores y tallos, se marchita y se puede desarrollar telaraas de micelio
sobre los tejidos muertos en condiciones hmedas. Los esporangios del hongo aparecen a
simple vista como manchitas en las blancas telaraas miceliales. (VALENZUELA 2001)

Pudriciones de tallo y raz (Fusarium sp.)

Las lesiones presentan un color negro oscuro y son blandas, se causa una podredumbre de
la raz y de la corona y finalmente mata la planta. (VALENZUELA 2001)

Pudriciones de tallo y raz (Rhizoctonia solani)

Causa la pudricin de las plntulas, los tallos se oscurecen en la lnea del suelo y se
encogen hasta tener una apariencia de tallo de alambre. En condiciones clidas y hmedas
el hongo crecer por toda la plntula, a veces englobando grandes partes de las bandejas
de plntulas. (VALENZUELA 2001)
15

Mildeo Polvoso

Las hojas se cubren completamente con micelio blanco y conidias, dando a la superficie de
la hoja una apariencia pulverulenta. Las hojas gravemente infectadas se ponen amarillas y
se mueren. (VALENZUELA 2001)

2.1.2.7 Girasol

El girasol es una planta anual, diploide y alegama cuya polinizacin es realizada
preferiblemente por insectos. Las flores se renen en una inflorescencia llamada captulo,
cuya dimensin varia entre 8 y 50 cm de dimetro (AGUDELO et al 1993). Se presentan
numerosas flores sobre un receptculo discoide. El captulo puede tener una configuracin
plana, cncava o convexa. (ARISMENDY et al 1990).

La florescencia se inicia en la parte perifrica de la flor, y contina en crculos concntricos.
En condiciones normales del cultivo, cada flor demora dos das para desarrollarse y cada da
florecen de tres a cuatro crculos para un perodo de florecimiento del captulo de cinco a
diez das, igual al nmero de crculos concntricos o zonas de florescencia. (ARISMENDY et
al 1990).

2.1.2.7.1 Enfermedades

Pudriciones de tallo y raz (Fusarium sp.)

Las plantas afectadas presentan, flacidez de las hojas, con marchitamiento y secamiento de
estas, con una incidencia relativamente baja en la poca cercana a la floracin.

Al observar la parte basal del tallo y hasta 10 cm hacia arriba, se nota un secamiento de la
epidermis o corteza, la cual debe ser desprendida fcilmente, algunas veces acompaado
de un micelio blanco o rosado anaranjado que cubre la lesin. (ARISMENDY et al 1990).

Podredumbre gris (Botrytis sp.)

Ataca el tallo, a la base y en la insercin del mismo con el captulo, penetrando el hongo
mecnicamente a travs de la cutcula y enzimticamente por las paredes celulares,
destruyendo el tejido de la planta apareciendo manchas marrones que despus se secan.
16

En la parte inferior del captulo apareen primero manchas amarillas y luego marrones, que se
van cubriendo de un tejido algodonoso gris. (ARISMENDY et al 1990).

Pudriciones de tallo y raz (Sclerotinia sp.)

Es una enfermedad cuyos sntomas aparecen en diversas fases del desarrollo de la planta,
el primer sntoma parece durante la mascencia y se manifiesta en que el tallo bajo los
cotiledones se vuelve blanco y estos decaen hasta el suelo. La infeccin se produce por
micelios, los cuales han invernado sobre las semillas y tambin por contacto de la semilla
con esclerocios del captulo. (ARISMENDY et al 1990)

El segundo sntoma aparece en la poca de formacin de botones florales percibindose en
el tallo y en la base del captulo se van pudriendo superficies blandas, apareciendo en estos
lugares micelios blancos que despus de poco tiempo empiezan a secarse y se forman
esclerocios oscuros. El tallo se vuelve dbil, las hojas se secan y se caen si sopla el viento
fuerte. (ARISMENDY et al 1990)

El tercer sntoma sera la infeccin del captulo, cuya parte inferior se vuelve blanda, mas
tarde toma un color marrn y aparece un tejido algodonoso blanquecino. (ARISMENDY et al
1990).

Mildeo Polvoso (Sphaerotheca sp)

Sus sntomas se manifiestan por la presencia de un micelio blanco o grisceo en el haz de
las hojas viejas y ocasionalmente en tallos, puede llegar a cubrir toda la lmina foliar.
(ARISMENDY et al 1990)

Pudriciones de tallo y raz (Pythium sp.)

Los sntomas se caracterizan por la pudricin en la parte de la unin del tallo con la flor
manifestando abundante micelio blanco algodonoso, el cual atraviesa el tejido para afectar la
semilla; en estado avanzado el hongo descompone todo el captulo induciendo mal olor.
(AGUDELO et al 1993).



17

Manchas en las hojas (Alternaria sp.)

Se presenta en las hojas bajeras en forma de pequeas manchas necrticas rodeadas de un
halo clortico, distribuidas en todo el fololo. (AGUDELO et al 1993).

2.1.2.8 Gypsophila

La gypsophila (Gypsophila paniculata L) es una de las flores de corte de mas demanda y
popularidad en Estados Unidos y Europa es utilizada como complemento en arreglos
florales. De los requisitos de suelo y las necesidades fertilizacin, se sabe muy poco sobre
esta planta. La gypsophila es originaria de regiones templadas y se adapta muy bien a
suelos desde ligeramente cidos a alcalinos. El pH optimo oscila entre 6,5 y 7,5 (WARREN,
1980).

2.1.2.8.1 Enfermedades

Manchas en las hojas (Alternaria sp.)

Produce manchas pardo- grisceas y halo prpura. Masas negras de esporas. (WARREN,
1980)

Podredumbre gris (Botrytis sp.)

Pudricin hmeda y caf en flor. Moho gris crece en tejido afectado. Ataca base de tallos.
(WARREN, 1980)

Fusarium oxysporum

Clorosis y marchites foliar. Similares a las de Pythium.

Pudriciones de tallo y raz (Phytophthora sp.)

Las plantas se marchitan y colapsan. Pudricin de races. Ennegrecimiento de tallos y
races. (WARREN, 1980)

18

Pudriciones de tallo y raz (Pythium sp.)

Las plantas se marchitan y colapsan. Pudricin de races. Ennegrecimiento de tallos y
races.

2.1.2.9 Kales

2.1.2.9.1 Enfermedades

Mildeo velloso

Los esporangiforos emergen en grupos a travs de los estomas de los tejidos de la planta.
Mas tarde, adquieren una tonalidad griscea o caf clara y forman una matriz visible
constituida por las hifas del hongo en la superficie inferior de las hojas. (AGUDELO et al
1993)

2.1.2.10 Molucella

Se le conoce comnmente como campana de Irlanda. Anualmente produce tallos con flores
a intervalos a lo largo de su longitud. La parte atractiva floral es el cliz abierto, grande, en
forma de campana aplanada, ya que las flores en si mismas son insignificantes. Los
vstagos pueden venderse verdes o desecados hasta un color marrn paja. (AGUDELO et
al 1993)

2.1.2.10.1 Enfermedades

Cercospora

Las manchas provocadas por Cercospora al principio aparecen a lo largo de los mrgenes
de las hojas, causando a menudo que las hojas se ricen. Sin embargo, los sntomas son
normalmente ms severos y obvios a lo largo de todos los mrgenes de las hojas.
(AGUDELO et al 1993)

19

El hongo prefiere atacar a las hojas y plantas jvenes ms que a las adultas. En campos con
infecciones graves sin embargo, tanto las hojas jvenes como ms adultas pueden ser
atacadas. (AGUDELO et al 1993)

2.1.2.11 Rosa

El rosal es una planta arbustiva, de porte abierto, con ramos leosos y normalmente
espinosos. A excepcin de la especie H, persica, la cual no presenta hojas subdivididas,
todas las dems poseen foliolos dispuestos en forma de plumas, desde 5 hasta 19 foliolos,
las hojas son pinnadas, con estipulas y caducas.

2.1.2.11.1 Enfermedades

Mildeo Polvoso (Sphaerotheca pannosa)

No produce la muerte pero transfigura a las partes atacadas dndoles un efecto de invasin
por un polvo finsimo blanco que muchos denominan ceniza y otros blanco del rosal.
Ataca las espinas en su base, a los tallos en las partes mas tiernas, a las hojas jvenes en
toda su rea, todo el pednculo y se aduea del botn antes de abrir los ptalos. (FERRER
et al 1995).

Mildeo Velloso (Peronospora sparsa)

Esta enfermedad provoca severas defoliaciones y ocasiona graves debilitamientos en las
plantas. Afecta a hojas, tallos y pednculos florales. Los sntomas que se observan en el haz
de las hojas son manchas amarillentas en un principio, que posteriormente se secan. En el
envs aparecen zonas pulverulentas de color gris, que son las resultantes de la esporulacin
del hongo. Las hojas daadas, se curvan, marchitan y caen. En brotes y tallos florales
tambin es posible observar la esporulacin del hongo en un estado avanzado de la
enfermedad, observndose lesiones de color negro y de longitud mayor a dos centmetros.
El desarrollo del patgeno esta fuertemente influenciado por la humedad relativa elevada
(90%) y la temperatura (15-18C). (BAM S.A. 2000)



20

Podredumbre gris (Botrytis cinerea)

Aparece en forma de tizones de inflorescencias y pudriciones del fruto, pero tambin como
chancros o pudriciones del tallo ahogamiento de plntulas, manchas foliares y como
pudriciones del tubrculo, como, un bulbo o races.

Bajo condiciones hmedas el hongo produce una capa fructfera de moho gris sobre los
tejidos afectados. (FERRER et al 1995).

Roya (Phragmidium sp.)

Con frecuencia, el primer sntoma que se observa es un aspecto general de mala salud en la
planta. Despus pueden observarse reas irregulares de color rojo y/o amarillo en la cara
superior de las hojas. Las esporas fngicas se vuelven de color pardo rojizo a naranjo
brillante. Estas esporas se encuentran principalmente en la cara inferior de las hojas, pero
tambin se pueden observar en la cara superior cuando se trata de una infestacin fuerte.
(BAON et al 1993)

Verticilosis (Verticillium sp)

Los sntomas aparecen unilateralmente en la planta, produciendo necrosis del tejido
vascular, y muerte generalizada del follaje. Aparicin de micelio algodonoso blanco.

2.1.2.12 Solidago

El solidago es una planta plurianual originaria del hemisferio norte (norte Amrica, Asia) y
que pertenece a la familia de las compuestas, subfamilia asteracea y que de forma natural
florece al final del verano. La planta es capaz de soportar temperaturas moderadamente
altas y pasar el invierno acumulando reservas. La floracin es abundante y se compone de
un gran nmero de pequeas flores compuestas de intenso color amarillo, de unos
milmetros de dimetro. Las hojas son simples y se insertan directamente en el tallo.
(PLANTFLOR, 2000)

Los tallos solo se ramifican cuando desarrollan la inflorescencia, as la planta para seguir
desarrollndose emite nuevos brotes vegetativos desde el suelo y todos ellos al final
desarrollan inflorescencia. (PLANTFLOR, 2000)
21

2.1.2.12.1 Enfermedades

Mildeo Polvoso (Erisiphe cichoracearum)

Los sntomas aparecen en forma de manchas blancas en las hojas ms viejas.

Verticillium sp.

Algunos tallos de la planta se ponen mustios y se secan rpidamente y se observan
manchas de color marrn oscuro en los vasos conductores (PLANTFLOR. 2000).

Pudriciones de tallo y raz (Sclerotinia sp.)

En las plantas se observa, que en la base del tallo o cuello de la raz hay una lesin seca de
color caf, acompaada generalmente de un micelio algodonoso blanco con formacin de
esclerosis de forma redondeada, inicialmente blancos y posteriormente cafs (ARISMENDY
et al 1990).

2.1.2.13 Statice

Planta de porte erguido y de lento desarrollo, oriunda de la regin mediterrnea. Se
caracteriza por sus flores perfectas, actinomorfas, hipginas, protegidas por brcteas,
dispuestas dicasios o cincinos, espigas, panojas o captulos, pueden ser azuladas o
amarillentas y sus escapos alados, sus hojas son simples, enteras, lobuladas o pinnatfidas,
alternas o arrosetadas, envainadoras o amplexicaules de color verde oscuro. (UNNE 2000)

2.1.2.13.1 Enfermedades

Podredumbre gris (Botrytis sp.)

Botrytis sp. causa una variedad de sntomas que incluyen manchas y marchitamiento en los
tejidos de la hoja y los ptalos, podredumbre de la corona. Los tejidos en depsito como
races, cormos o rizomas son tambin susceptibles. Las lesiones causadas son identificadas
por esporulacin caracterstica gris vellosa, sin embargo las esporas solo se desarrollan en
22

condiciones hmedas. Los ptalos de la flor pueden tener pequeas manchas o se
marchitan completamente.

Pudriciones de tallo y raz (Fusarium sp.)

Causa podredumbres de la raz, corona y tallo y es capaz de provocar marchitamiento
vascular sistmico.

Manchas en las hojas (Alternaria sp.)

Formacin de pequeas manchas acuosas y con forma de ampollas parecen en el envs de
las hojas inferiores. Cuando las manchas maduran los centros aparecen hundidos de color
marrn y pueden mostrar halos difusos amarillos. Finalmente las manchas aparecen en el
haz de las hojas.

2.1.2.14 Stock

Presenta un alto porcentaje de flores dobles. Con un desarrollo especial para la flor de
corte, las hojas son en su mayora pequeas y verticales, lo que se traduce en ms plantas
por m2 que otras series. Los tallos y hojas son brillantes y de color verde oscuro, lo que
contrasta con los colores claros de las flores.

2.1.2.14.1 Enfermedades

Pudriciones de tallo y raz (Sclerotinia sp.)

Produce marchitamiento causado por las germinacin de los esclerocios; y la pudricin
foliar, de tallos, de flores es el resultado de la infeccin de las ascosporas.

Pudriciones de tallo y raz (Rhizoctonia solani)

Pudricin caf a nivel del cuello de raz. Plntulas se marchitan y colapsan.

23

2.2 HONGOS FITOPATOGENOS

Los patgenos infecciosos son de naturaleza variada e incluyen virus y tiroides, bacterias,
hongos, algas, plantas superiores y nematodos capaces de penetrar y establecer una directa
y compleja relacin parasitaria con el agente hospedero, al mismo tiempo, son agentes
transmisibles desde una planta enferma a una sana, por lo cual se les denomina agentes
infectivos. Dentro de los agentes causales de tipo infectivo que provocan enfermedad en
plantas, se destacan los hongos quienes constituyen el grupo ms importante y pertenecen
a diversas categoras taxonmicas.

Los hongos se definen como miembros del reino fungi, y consisten en un talo carente de
clorofila, microorganismos eucariontes, usualmente filamentosos, ramificados, formadores de
espora, unicelulares o multicelulares; no utilizan la luz solar como fuente de energa, la pared
de clulas esta formada por quitina, celulosa o ambas. Algunos hongos pueden crecer y
multiplicarse solo por la asociacin con su planta hospedera, durante toda su vida; estos, se
conocen como parsitos obligados o biotrfos. Otros, requieren la planta como hospedero
para realizar parte de sus ciclos de vida, quienes lo pueden completar en materia orgnica
en descomposicin, as como tambin crecer y multiplicarse all, denominados parsitos no
obligados ( DE LA ISLA 1994).

Para que suceda una enfermedad, es necesaria la completa interaccin de tres
componentes: patgeno, husped y condiciones ambientales favorables (AGRIOS 1995).

2.2.1 Hongos patgenos vasculares

Los hongos que causan la enfermedad denominada como marchitez vascular tapan los
conductos internos de conduccin de agua de las plantas y como consecuencia se observan
sntomas de marchitez. Puede presentarse muerte del follaje, hojas o de la planta en
general. Para detectar si hay marchitez vascular, se efectan cortes diagonales en una rama
afectada y se observa si hay una decoloracin verde oscura a marrn en la parte interna del
tallo, lo cual es un sntoma diagnstico de la presencia de estos patgenos vasculares. Las
ramas afectadas por estos hongos generalmente mueren. Algunas plantas mueren
rpidamente mientras que en otras se observa la muerte de algunas ramas y posteriormente
la de la planta (ARBELAEZ 1987).

24

2.2.2 Hongos causantes de la pudricin de la base del tallo y races

Son enfermedades causadas por hongos habitantes del suelo, y que pueden causar
pudricin temprana o damping off de semillas, plntulas o plugs as como de las races y la
parte baja de los tallos en plantas maduras. Los sntomas que comnmente aparecen
cuando el sistema radicular se encuentra enfermo, son marchitez, enanismo o deficiencias
nutricionales en la parte area de la planta (GALINDO, et al. 1995).

2.2.3 Hongos causantes de enfermedades foliares

Las enfermedades foliares limitan el rendimiento del cultivo, porque se desarrollan a
expensas de la planta, consumiendo energa. De manera general, stas afectan el cultivo,
provocando un mal funcionamiento y destruccin de los tejidos fotosintticos, ya que los
patgenos ejercen su parasitismo aprovechndose de la energa producida por el cultivo. De
esta manera colonizan, crecen y se reproducen exclusivamente a expensas de la planta,
generndoles prdidas de carbohidratos y nutrientes producidos o de reserva (ARBELAEZ
1996).

La mayora de las enfermedades foliares producen clorosis, necrosis, afectando la
fotosntesis, disminuyendo la intercepcin de radiacin y aumentando la reflectancia. As
tambin la mayora de ellas generan senescencia y algunas ms graves, una intensa
desfoliacin afectando la intercepcin lumnica. Esta senescencia anticipada de las hojas
puede inducir tambin una removilizacin de las reservas del tallo, lo cual aumenta la
predisposicin a las pudriciones de raz y tallo con el consiguiente riesgo de vuelco de las
plantas y /o quebrado durante la cosecha (VALCARCEL 1995).

2.2.4 Hongos causantes de enfermedades en flores

El patgeno ms comn atacando diversos tipos de flores en produccin, almacenamiento y
transporte es Botrytis cinerea Esta es una de las enfermedades mas frecuentes y limitantes
en rosa, crisantemo y estatice. Con una menor incidencia, la enfermedad se presenta en
clavel, gypsophila y alstroemeria. En los ltimos aos la enfermedad ha aumentado
notablemente su incidencia, con un incremento importante en prdidas y en los costos de
produccin. (GARCS DE GRANADA 1992)

25

En clavel, el hongo Cladosporium echinulatum ataca severamente el cliz y los tallos de
variedades muy susceptibles, ocasionando prdidas severas, ya que las flores afectadas no
se pueden exportar. (GARCS DE GRANADA 1992)

2.2.5 Fitopatgenos asociados a flor de corte

2.2.5.1 Alternaria sp.

Alternaria engloba unas 50 especies de distribucin cosmopolita, fitoparsitas o saprofitas
sobre vegetacin, capaces de colonizar y degradar numerosos sustratos como papel, cuero,
tapiceras, pinturas, o alimentos que se puedan contaminar con micotoxinas.











2.2.5.1.1 Taxonoma

Reino: Mycetae
Divisin: Amastigomycota
Sub. Divisin: Deuteromycotina
Forma- Clase: Deuteromycetes
Forma Sub. Clase: Hyphomycetidae
Orden: Moniliales
Familia: Dematiaceas
Genero: Alternaria


Figura 1. Alternaria sp.
Fuente: SUTTON 2004
26

2.2.5.1.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas

En cultivo presenta colonias de colores oscuros, grises, olivceos, marrones o negros. Sus
conidiforos son macronematosos, mononematosos, simples o ramificados, de color marrn
claro a oscuro. (ALEXOPOULOS. 1996)

La clula conidiogena es integrada, terminal o intercalar, generalmente simpodial. Los
conidios, son muy caractersticos por su tabicacin longitudinal, transversal u oblicua, son
del tipo dictiospreo y presentan forma ovoide u obclavada, con superficie lisa o rugosa y de
coloracin marrn claro a oscuro, generalmente se forma en cadenas acrpetas. Los
conidios pueden aparecer solitarios o encadenados y son fcilmente reconocibles debido a
su tamao (30-50 x 10 -14 micras) color y forma caractersticos anteriormente nombrados
(ALEXOPOULOS. 1996).

2.2.5.1.3 Sntomas

El hongo ataca los tallos, hojas y frutas. En las hojas se presentan pequeas manchas
circulares de color caf frecuentemente rodeadas de un halo amarillo. Las manchas tienen la
caracterstica de tener anillos concntricos de color oscuro. Usualmente las manchas
aparecen en las hojas mas viejas y de estas suben al resto de la planta. A medida que la
enfermedad progresa, el hongo puede atacar tallos. En los anillos concntricos se producen
esporas polvorientas y oscuras. Las esporas se pueden observar si la lesin se le acerca un
objeto de coloracin clara (DIMATE. 2000).

2.2.5.2 Botrytis sp

Botrytis sp. se presenta principalmente en flores de exportacin como la rosa, clavel,
crisantemo, statice entre otras. Su ataque es especialmente grave durante el
almacenamiento y transporte de la flor en la cadena de fro, debido a que se dan las
condiciones optimas para el desarrollo del hongo, que ataca los ptalos en muchas las
variedades, y afecta el pednculo floral en otras (GARCES 1992).





27











2.2.5.2.1 Taxonoma

Sper reino: Eucaryonta
Reino: Mycetae
Divisin: Amastigomycota
Sud Divisin: Deuteromycotina
Clase: Deuteromycetes
Sub. Clase: Hyphomycetidae
Orden: Moniliales
Familia: Moniliaceae
Genero: Botrytis

2.2.5.2.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas

Las colonias de Botrytis son de crecimiento moderado, blancas o grises, dependiendo del
medio de cultivo donde se encuentre puede ser de tipo micelial, esclerocial o esporulante. La
de tipo micelial es de crecimiento mas rpido, abundante, algodonosa y de color pardo. La
de tipo esclerocial, es una colonia de crecimiento lento, micelio escaso de color blanco
inicialmente y luego de cloro gris a pardo con abundantes esclerocios de color negro,
distribuidos irregularmente en el medio. (BAYONA 1996)

Los esclerocios son de color negro, generalmente son redondos o de forma irregular. Tiene
de 1 a 5 mm de longitud. Se forman sobre tejidos blancuzcos y hmedos de plantas
atacadas por el hongo. (BAYONA 1996)

Figura 2. Botrytis cinerea
Fuente: SUTTON 2004
28

Cuando los esclerocios germinan, pueden producir esporas (conidias) o forman un cuerpo
fructificante, que se asemeja a una capa o platillo, conocido como apotecio. Cada asco
produce 8 ascosporas o esporas sexuales. Los conidiforos presentan ramificaciones
alternas y rectas. Las hifas suelen encontrarse septadas, hialinas y dematiceas con
ramificaciones en forma dictoma (LATORRE et al 1998).

El micelio es hialino cuando joven y con la edad va tomando color oscuro, es septado y
presenta una perforacin en el centro (BAYONA 1996).

2.2.5.2.3 Epidemiologa y sntomas

Este hongo permanece todo el ao en los invernaderos principalmente en forma de conidias
y micelio, pero tambin puede vivir en forma de esclerocios, en plantas que estn muy
infectadas. (ASOCOLFLORES, 1995)

Las esporas de este hongo pueden sobrevivir en el suelo de los invernaderos por perodos
ms largos, a la intemperie, sobre material en descomposicin. (DOSS, 1995)

Para que el hongo se desarrolle, no es suficiente que una espora se deposite sobre la
superficie de la planta, tambin es necesario que se presenten condiciones ambientales
favorables como alta humedad relativa, pH adecuado, temperatura optima, etc. (VOLPIN
1991) y que en el tejido de la planta donde se deposite la espora, se encuentre en la etapa
susceptible, ya que el hongo ataca tejidos blandos o tejidos en proceso de envejecimiento y
muerte, por ser estos fuente nutritiva disponible para que las esporas del hongo germinen y
causen la infeccin. (GAMBOA 1998)

El fitopatgeno se manifiesta mediante la aparicin de puntos y manchas, destruyendo los
ptalos, lo que causa grandes prdidas en las flores. Sin embargo, tambin causa
ulceraciones en el tallo y produce lesiones en las hojas y brotes vegetativos. En plantas con
alto nivel de infeccin se presentan esclerocios, los cuales pueden sobrevivir por largos
periodos de tiempo a la intemperie sobre el material en descomposicin. (GARCS 1992)



29

2.2.5.3 Cercospora









2.2.5.3.1 Taxonoma

Reino: Fungi
Divisin: Deuteromycota
Clase: Mitosporico
Orden: Moniliales
Familia: Dematiaceae
Gnero: Cercospora.

2.2.5.3.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas

Macroscpicamente presenta colonias de color gris oscuro por su cara superior, negras por
su cara inferior, de borde a veces irregular, aterciopeladas, elevadas.

Al microscopio, se observan conidios alargados septados, filiformes algo sinuoso, hialino, de
base ensanchada, con cicatriz conidial marcada, conidiforos fasciculados, muy largos,
oscuros y tabicados, de crecimiento definido, y el nmero de septos es de 9 por brazo; son
de una coloracin pardo-griscea (CABRERA et al 2003). Micelio de desarrollo lento,
castao grisceo (ALVAREZ et al 2003) (CABRERA et al 2006).



Figura 3. Conidios de Cercospora
Fuente: NAVA et al 1989
30

2.2.5.3.3 Patognesis y Sntomas

Al principio de la enfermedad las hojas manifiestan pequeas manchas necrticas de color
marrn oscuro de aproximadamente 1 mm de dimetro con borde indefinido y halo clortico,
pudindose encontrar solitarias o coalesciendo y distribuidas por toda la hoja. Las manchas
en estado avanzado de desarrollo llegan a medir hasta 10 mm, se necrosan y el centro se
torna de color gris claro volvindose quebradizo el tejido. La enfermedad provoca la
abscisin de las hojas por lo que es comn observar muchas con sntomas caractersticos
en el suelo al pie de la planta afectada (PALENCIA et al 2003).

Las manchas provocadas por Cercospora al principio aparecen a lo largo de los mrgenes
de las hojas, causando a menudo que las hojas se ricen. Sin embargo, los sntomas son
normalmente ms severos y obvios a lo largo de todos los mrgenes de las hojas.

El hongo prefiere atacar a las hojas y plantas jvenes ms que a las adultas. En campos con
infecciones graves sin embargo, tanto las hojas jvenes como ms adultas pueden ser
atacadas. El patgeno tambin produce lesiones en los peciolos y tallos, caracterizadas por
filos marrn oscuro y centros que van desde el tono bronceado hasta el gris. Las lesiones
pueden juntarse y presionar los tallos, haciendo que las hojas mueran (PLANT PRO 2007).

2.2.5.4 Fusarium sp










Hongo Deuteromicete (imperfecto), patgeno, causante del marchitamiento vascular
principalmente en vegetales y flores; adems recientemente se ha visto que es responsable
Figura 4. Macroconidias de Fusarium oxysporum
Fuente: SHERWOOD, 2007
31

de micosis en animales y humanos. (AGRIOS 1998). Presenta especies fitopatgenas como,
fusarium solani, fusarium moniliforme, fusarium roseum, fusarium lateritium y fusarium
oxysporum La mayora de los casos del marchitamiento vascular debidos a este gnero, son
producidos por especies de fusarium oxysporum; diferentes huspedes son atacados por
diferentes formas especiales y/o especies de este hongo (AGRIOS 1998). Fusarium
oxysporum f. sp. dianthi es el agente etiolgico que produce la enfermedad conocida como
marchitamiento del clavel.

2.2.5.4.1 Taxonoma

Sper reino: Eucaryonta
Reino: Mycetae
Divisin: Eumycota
Sub Divisin: Deuteromycotina
Clase forma: Hyphomycetes
Orden familia: Moniliales
Familia forma: Tuberculariceae
Genero: Fusarium

2.2.5.4.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas

Macroscpicamente Fusarium sp, se caracteriza por producir colonias de crecimiento
rpido. Su micelio es generalmente areo, abundante, algodonoso y con coloracin variable
de blanco a rosado durazno. Algunos especies presentan usualmente un tinte de color
intenso al dorso de la colonia (RATTINK, et al.2000).

Microscpicamente Fusarium puede presentar tres clases de esporas:

Microconidias: Esporas unilaterales, sin septos, hialinas, elipsoidales a cilndricas, rectas o
curvas, se forman sobre fialides laterales, cortas, simples o sobre conidiforos poco
ramificados tienen 5 -12 m de largo por 2.5 3.5 m de ancho.

Macroconidias: Esporas de pared delgada, fusiformes, largas, moderadamente curvas en
forma de hoz, con varias clulas de tres a cinco septas transversales, tienen de 27 -46 m
de largo por 3.0 -4.5 m de ancho.

32


Clamidioesporas: Esporas formadas a partir de la condensacin de los contenidos de las
hifas y macroconidias, de paredes gruesas, mediante las cuales el hongo sobrevive en
condiciones ambientales desfavorables y en ausencia de plantas hospederas. Estas esporas
se forman simples o en pares, terminales o intercaladas; tienen un tamao de 5 a 15 m de
dimetro (GARCES DE GRANADA, et al 1999).

2.2.5.4.3 Patognesis y sntomas

Fusarium sp. penetra la epidermis de las races, la corteza y endodermos, finalmente entra a
los vasos del xilema, colonizando el sistema vascular, en el cual el fitopatgeno produce
compuestos complejos que interfieren con la capacidad de la planta al traslocar la toma de
agua y nutrientes; ocasionando la degradacin de tejidos y la muerte (OCHOA. 1996).

Las hifas del hongo penetran directamente o a travs de heridas hechas en forma mecnica
o por nematodos, insectos o miripodos, la epidermis de las races, pasa a la corteza y a los
endodermos y entran a los vasos del xilema invadindolos cuando estn maduros. El
patgeno coloniza el xilema de las plantas por crecimiento del micelio o por medio del
transporte pasivo de las microconidias lo cual contribuye a la colonizacin no uniforme,
generalmente un lado de la planta; el hongo deteriora los tejidos por medio de enzimas que
degradan la pared celular como xilanasas entre otras y se comienzan a formar cavidades en
las hojas y paredes lignificadas del tallo (OCHOA. 1996).

Los sntomas de la enfermedad aparecen de forma unilateral; se acompaa de un
amarillamiento parcial de las hojas, a veces se observa una mitad clortica y la otra verde
normal y el doblamiento de los brotes hacia el lado de la planta enferma; a su vez se
observa enanismo de stos y disminucin en el crecimiento de la planta, los sntomas
avanzan lentamente por la planta hacia arriba hasta causar un marchitamiento generalizado
y la muerte (ARBELAEZ 2000).







33

2.2.5.5 Heterosporium sp.











2.2.5.5.1 Taxonoma

Divisin: Mycota
Clase: Deuteromycetes
Orden: Moniliales
Familia: Dematiaceae
Gnero: Heterosporium

2.2.5.5.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas

Presenta micelio septado, nudoso, oscuro y ancho en estado adulto. En estadios juveniles el
micelio no posee septas. El micelio puede ramificarse dicotmica o tricotmicamente
terminando en extremos romos.

Tiene conidiforos septados, oscuros, fasciculares, agrupados o simples; conidias
equinuladas o espinosas, grandes y de forma elptica, septadas hasta cuatro veces en su
madurez. El tamao de las esporas varia entre 9.8 y 50.6 micras de largo y 6.6 y 13.2 micras
de ancho; y los promedios de longitud y anchura son 33.7 y 9.98 micras respectivamente.

Las colonias son circulares con constricciones radiales y micelio pardo con bordes
blanquecinos (BRICEO, G 1990).


Figura 5. Heterosporium sp
Fuente: HANSEN, 2000
34

2.2.5.5.3 Patognesis y sntomas

Se ha reportado como un patgeno que ataca las hojas, tallos y flores del clavel. Los
sntomas iniciales se manifiestan por manchas blanquecinas que van evolucionando hasta
convertirse en crculos manchados de color pardo grisceo con un anillo exterior pardo
oscuro, cuya apariencia le ha dado a la enfermedad el nombre tpico de mancha anillada.

En estadios avanzados de la enfermedad, las partes centrales de las manchas se oscurecen
por la presencia de fructificaciones tomando una tonalidad verde negruzca y una textura
pulverulenta que llega a manifestarse en anillos concntricos. Cuando las manchas se
presentan al borde de las hojas pueden adoptar formas circulares.

En el cliz el aspecto de las lesiones es semejante al que se puede observar en las hojas,
pero el dimetro de la mancha es menor y causa deformaciones en las flores que se abren
de manera imperfecta o no llegan a hacerlo.

No se han reportado daos a nivel vascular o radicular. Se ha establecido que el hongo
penetra por las partes areas produciendo daos a nivel del parnquima (BRICEO, G
1990).

2.2.5.6 Itersonilia sp












Figura 6. Esporas de Itersonilia sp.
Fuente: MCGOVERN, 2006

35

2.2.5.6.1 Taxonoma

Clase: Blastomyces
Orden: Sporobolomycetales
Familia: Sporobolomycetaceae
Gnero: Itersonilia

2.2.5.6.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas

Macroscpicamente presenta colonias delgadas y algodonosas con pigmentacin color
crema. Al microscopio se observan esporas de color naranja brillante, y basidiosporas
cortas hialinas.

2.2.5.6.3 Patognesis y sntomas

Es conocido como saprofito de la superficie foliar. Causando marchites de ptalos,
especialmente en el aire libre y en condiciones hmedas. Las lesiones se inician como
manchas pequeas como cabezas de alfiler, pardas en las flores externas del capitulo que
posteriormente se extienden y aparecen cubierta por una eflorescencia blanca opaca
(SMITH 1992).


2.2.5.7 Peronospora sp











Figura 7. Esporangios y esporas de Peronospora sp.
Fuente: CUEVAS et al 2001
36

2.2.5.7.1 Taxonoma

Reino: fungi
Divisin: Eumycota
Sub. Divisin: Mastigomycotina
Clase: Oomycetes
Orden: Peronosporales
Familia: Peronosporaceae
Genero: Peronospora

2.2.5.7.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas

Posee micelio interno no tabicado, alargado, que al momento de reproducirse forma
esporangiforos largos, hialinos, agrupados y ramificados dicotmicamente, muy numerosos,
con abundantes esporangios globosos, hialinos (CABRERA et al 2000).

Produce zoosporas en zoosporangios. Las oosporas se forman por la fusin de gametos
morfolgicamente distintos. Apariencia vellosa de los esporangiforos y esporangios
producidos en el tejido de plantas infectadas. Produce en hojas felpa blanco griscea
(AGRIOS 1995).

2.2.5.7.3 Patognesis y Sntomas

Produce esporangiforos con esporangio terminal en lesiones de las hojas. En la
reproduccin asexual, los esporangios contienen zoosporas con dos flagelos, aquellos
escapan y nadan en las hojas sobre la pelcula de agua formada por precipitaciones. Las
zoosporas son atradas por los estomas y despus de un corto perodo de descanso se
enquista. Posteriormente forman un tubo germinativo que penetra a travs del estoma en el
envs de la hoja, y produce un micelio formado por filamentos tubulares, sin tabiques, pero
ramificados y provistos de rganos de succin repartidos irregularmente (DIAZ 1993).

Esta enfermedad provoca severas defoliaciones y ocasiona graves debilitamientos en las
plantas. Afecta a hojas, tallos y pednculos florales. Los sntomas que se observan en el haz
de las hojas son manchas amarillentas en un principio, que posteriormente se secan. En el
envs aparecen zonas pulverulentas de color gris, que son las resultantes de la esporulacin
del hongo. Las hojas daadas, se curvan, marchitan y caen. En brotes y tallos florales
37

tambin es posible observar la esporulacin del hongo en un estado avanzado de la
enfermedad, observndose lesiones de color negro y de longitud mayor a dos centmetros.
El desarrollo del patgeno esta fuertemente influenciado por la humedad relativa elevada (90
%) y la temperatura (15 18 C) (BAM S.A. 2000).

2.2.5.8 Phragmidium sp.











2.2.5.8.1 Taxonoma

Reino: Fungi
Divisin: Basidiomycota
Clase: Teliomycetes
Orden: Uredinales
Familia: Pucciniaceae
Gnero: Phragmidium
Especie: Phragmidium
Nombres comunes: Roya del rosal.

2.2.5.8.2 Caractersticas microscpicas

Es un parsito obligado. Uredosporas individuales, casi siempre equinuladas. Teliosporas
robustas, desde bi hasta multicelulares por septos horizontales originadas individualmente
sobre pedicelos que por lo general son higroscpicos con 2-3 poros germinativos por cada
clula. El ciclo de vida completo de los hongos causantes de royas tiene 5 diferentes formas
de esporas, Espermogoonio, Aeciosporas, Uredosporas, Teliosporas, Basidiosporas.
Figura 8. Esporas de Phragmidium sp
Fuente: RUBIO, 2007
38

2.2.5.8.3 Patognesis y sntomas

La roya del rosal se manifiesta con reas clorticas, numerosas, en el haz de las hojas, las
cuales estn en correspondencia con los uredosoros del patgeno en el envs. Las pstulas
son de color amarillo intenso y en muchas ocasiones se pueden observar tambin, las
grandes y caractersticas teliosporas multitabicadas, de color oscuro. (CABRERA et al 2006)

Los espermogonios se desarrollan bajo la cutcula de las hojas, son amarillentos y
aplanados. En estos se encuentran los espermacios, rganos reproductores masculinos, y
las hifas receptoras, que recogen los anteriores, originando los ecios cuando entran en
contacto. Los ecios se forman en el envs de las hojas, en el pecilo y tambin sobre los
frutos, a modo de heridas. Son de color anaranjado. En ellos se forman cadenas de esporas,
aciosporas.

2.2.5.9 Pythium sp.

Pythium sp. se encuentra distribuido en los suelos y en aguas en todo el mundo. Es un
organismo saprfito y vive sobre los restos de animales y plantas muertas, o bien se pueden
desarrollar como parsito atacando las races fibrosas de las plntulas jvenes de una gran
variedad de espermatofitas susceptibles. Cuando un suelo hmedo se encuentra
densamente infestado por Pythium este hongo ataca todo tipo de semillas o plntulas que
emerjan de aquellas (CARONE 1986).













Figura 9. Pythium oligandrum
Fuente: DIAZ 2002
39

2.2.5.9.1 Taxonomia

Reino: Stramenopila
phylum: Oomycota
Clase: Oomycetes
Orden: Pythiales
Familia: Pythiaceae
Genero: Pythium

2.2.5.9.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas

Se caracteriza por poseer hifas incoloras dispuestas en forma de racimo. Las estructuras de
la reproduccin sexual son oogonios equinulados generalmente plerticos, fertilizados por
anteridios en forma de clava, de pared reticulada que se producen en grupos sobre una
misma hifa; las estructuras de la reproduccin asexual estn representadas por zoosporas
que se producen en zoosporangios intercalares morfolgicamente poco diferenciados, las
cuales se liberan desde vesculas bien diferenciadas (CORREA DE RESTREPO et al 1990).

Microscpicamente se observan hifas blanquecinas y delgadas, con un crecimiento hacia
arriba, en forma arborescente, que parte del estrato basal o vegetativo, tendiendo a ser de
forma tridimensional, semejante a una esfera; en conjunto presenta un aspecto algodonoso
formando los tpicos pilares que caracterizan su apariencia macroscpica (CORREA DE
RESTREPO et al 1990).

2.2.5.9.3 Patognesis y sntomas

El tubo germinal de las esporas o el micelio saproftico de Pythium entra en contacto con los
tejidos de las plantas hospedantes ya sea al azar, o debido a que los exudados de stas le
sirvan al hongo como nutrientes y estimulantes para sus zoosporas y micelio, los cuales se
mueven o crecen en direccin de las plantas. La infeccin inicial se produce a nivel de la
superficie del suelo o por debajo de ella dependiendo del grado de humedad y la
profundidad del cultivo; el micelio del hongo entra directamente en las clulas epidrmicas y
corticales del tallo, nutrindose as de la mayora de los contenidos celulares, por lo tanto
degradan las paredes celulares, desintegrando clulas y tejidos.

40

Lo anterior ocurre por la secrecin de enzimas pectinolticas por parte del hongo, las cuales
degradan la lmina media que mantiene unida a las clulas dando como resultado la
maceracin de los tejidos.

En el momento en que las lesiones llegan al tejido vascular se observa decoloracin,
indicando la cercana muerte de la planta; mientras que cuando la invasin del hongo se da
en la corteza del tallo subterrneo de la planta, esta puede durar y crecer durante un breve
periodo de tiempo hasta que la lesin se extiende por arriba de la superficie del suelo; en tal
caso, los tejidos invadidos y colapsados no tienen la capacidad de sostener la planta, por lo
tanto, cae en el terreno y muere (AGRIOS 1997).

2.2.5.10 Rhizoctonia solani










2.2.5.10.1 Taxonoma

Reino: Fungi
Divisin: Eumycota
Sub. Divisin: Deuteromycota
Sub. Clase: Hyphomycetidae
Clase: Hyphomycete
Orden: Moliniales
Familia: Agronomycetaceae
Genero: Rhizoctonia

Figura 10. Micelio de Rhizoctonia solani
Fuente: CASTRO et al 2005
41


2.2.5.10.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas

Las hifas cuando jvenes son hialinas de 6 a 12 micras de dimetro, vacuolazas, con
tabiques gruesos, al envejecer adquieren color castao a castao rojizo, presenta
caractersticas de ramificarse en ngulo recto. Produce esclerocios en forma de masa
miceliales, color blanco, que luego se oscurecen hasta llegar a distintos tonos de castao,
irregulares, grandes de 1 a 8 mm visibles a simple vista, variando las condiciones en que se
produce, de consistencia dura en cortes microscpicos muestran una constitucin de hifas
entrelazadas, de dimetro variable, cortas, elpticas, semejantes a diminutos barriles
dispuestos en cadena (SARASOLA et al 1975).

Macroscpicamente las colonias tpicas de este microorganismo se caracterizan por ser
blancas, algodonosas, planas, sin embargo, dependiendo de la especie, puede presentarse
tonalidades cremas amarillentas (BARNETT et al 1982).

2.2.5.10.3 Patognesis y Sntomas

Ataca principalmente en los primeros das de la plantacin, se agrava si los esquejes se
siembran muy enterrados. El hongo se favorece con altas temperaturas y vive a nivel del
suelo. Tambin ataca a plantaciones adultas con problemas de mal drenaje y altas
temperaturas.

La planta se pone de color verde grisceo y toma un aspecto de flacidez hasta que se
marchitan completamente. Generalmente al arrancar la planta se separa fcilmente el
sistema radicular del cuello, donde se nota una pudricin.









42

2.2.5.11 Sclerotinia sp










2.2.5.11.1 Taxonoma

Clase Deuteromicetes
Orden: Discomicetes
Familia: Sclerodermataceae
Genero: Sclerotinia
2.2.5.11.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas

Ascomycete que forma fructificaciones vernales acopados y provistos de un pedculo de
sostn desarrollado que sale de un esclerocio tuberiforme, generalmente enterrado,
exteriormente negruzco e interiormente blanco. Parece que se asocia con las raicillas de
muy diversas plantas vasculares (RUBIO, E.2007).

La principal estructura de supervivencia de Sclerotinia sp. son los esclerocios, estructura de
resistencia que consiste en su interior de una porcin llamada mdula y una cubierta
protectora en el exterior, llamada corteza.

2.2.5.11.3 Patognesis y sntomas

La especie causa lesiones caf claras sobre el tallo, el cual puede ser cubierto por un
crecimiento micelial esponjoso de color blanco y numerosos esclerocios. (SANDOVAL et al
2000).

Figura 11. Sclerotinia sp.
Fuente: RUBIO, E. 2007
43

Sclerotinia sp. produce cuerpos esclerociales negros en las plantas enfermas. Estos
cuerpos, son las estructuras de resistencia que sobreviven en el suelo. Dependiendo del
hospedero y el ambiente, los esclerocios germinan, produciendo micelio que infecta las
races y las bases de los tallos, causando marchitamiento y decaimiento foliar. Tambin
puede producir ascosporas que puede infectar los tejidos areos de las plantas; la infeccin
ocurre a travs de los estomas abiertos; el hongo penetra el tejido foliar y forma apresorios;
una vez la infeccin ocurre, el micelio se ramifica rpidamente. La dispersin de planta a
planta se efecta a travs del crecimiento micelial.

En las primeras etapas de desarrollo del ataque en los tallos, el follaje muestra muy pocos
signos de ataque del hongo, de ah que las plantas infectadas pasen inadvertidas fcilmente.
Los esclerocios negros del hongo pueden formasen internamente en el tallo o pueden
formase fuera del tallo donde son bastante conspicuos.

Para la mayora de los huspedes, las races, tallos y follaje infectado desarrolla primero
lesiones acuosas. Posteriormente las lesiones se expanden y toman una coloracin caf.
2.2.5.12 Sphaerotheca sp.











2.2.5.12.1 Taxonoma

Reino: Fungi
Divisin: Ascomycota
Orden: Erysiphales
Familia: Ericiphaceae
Gnero: Sphaerotheca
Figura 12. Conidios Sphaerotheca pannosa
Fuente: MAGNUS GAMMELGAARD, 2008
44

2.2.5.12.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas

El cuerpo fructfero de este hongo es un ascocarpo que, por ser esfrico, se denomina
cleistotecio, en cuyo interior se producen las ascas, de forma oblongo-globosa con 8
ascosporas. La formacin de cleistotecios puede proporcionar a la especie mayores
posibilidades de sobrevivir a las condiciones invernales y ampliar la variabilidad del miceto
(SINOBAS 1997).

Las conidias van dispuestas en cadenas, por esto se disemina por el viento. Estas conidias
puede generar muchos ciclos, pero en condiciones adecuadas generaran el cleistotecio.

Se caracteriza por formar un micelio de color blanco-grisceo sobre la planta infectada.

2.2.5.12.3 Patognesis y sntomas

Manchas blancas con aspecto harinoso aparecen en forma aislada sobre las hojas ms
jvenes, son el primer sntoma. Segn las variedades, poco a poco todo el follaje puede ser
infestado, igualmente los pednculos y las flores, afectando el aspecto decorativo del
producto.

El desarrollo del patgeno esta relacionado con tres factores bsicos: la temperatura, una
baja humedad relativa y la insolacin.

El hongo se caracteriza por un micelio superficial de color blanco. Dicho micelio, compuesto
de rganos chupadores, penetra la cutcula y se introduce en las clulas de la epidermis
vegetal.

Con temperaturas adecuadas aparecen las conidias (forma sexual de reproduccin de los
hongos) que dan a las manchas el aspecto polvoriento, que caracteriza esta enfermedad
fungosa. Posteriormente sobre el micelio nacen los conidioforos que llevan las conidias
(EXPOFLORES 1995).



45

2.2.5.13 Verticillium









2.2.5.13.1 Taxonoma

Reino: Fungi
Clase: Deuteromycetes
Orden: Moniliales
Familia: Moniliaceae
Genero: Verticillium

2.2.5.13.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas

Las colonias son delgadas, algodonosas y con variedad de pigmentos; blancos, verdes,
rojos o rosados.

Microscpicamente, tiene conidiforo recto, tabicado y ramificado cuya terminacin es en
filides, con pices puntiagudos. Los ameroconidios se producen en bolsas (gloisporas)
presentando caractersticas hialinas y agrupndose en el extremo de la filide. No presentan
clamidosporas (AGRIOS 1995).

2.2.5.13.3 Patognesis y sntomas

Produce clorosis, bronceamiento o enrojecimiento parcial de la lmina foliar y escaldadura
marginal de las hojas. Los sntomas aparecen unilateralmente en la planta. Se evidencia una
necrosis del tejido vascular, y provoca la muerte generalizada del follaje. Las plantas
Figura 13. Conidiforos y conidios de Verticillium
Fuente: CEDEO. 1997
46

enfermas tienden a rebrotar desde la base. La incidencia y severidad se relaciona con el
potencial de inoculo del suelo con el manejo y edad de la planta (LATORRE 1999).

2.3 MICROSCOPA DE LUZ COMO TCNICA PARA LA OBSERVACIN DE
HONGOS FITOPATOGENOS

2.3.1 LUZ

La luz, definida como una forma de energa conocida como radiacin electromagntica, est
contenida en unidades o quantos llamados fotones que tienen las propiedades de partculas
y ondas (Figura 14). Esta puede representarse de varias maneras dependiendo de las
caractersticas en las cuales se desee enfatizar (MURPHY, D 2001):

- Como quantos (fotones) de radiacin electromagntica, donde los fotones son
detectados como quantos individuales de energa (como fotoelectrones) sobre las
superficies de instrumentos de mediacin cuantitativos.

- Como ondas, donde la propagacin de un fotn es representada grficamente como
un par de campos elctricos y magnticos que oscilen en fase y en dos planos
mutuamente perpendiculares.









Figura 14. Representacin de la luz como Quantos, Ondas, Vectores, Rayos.
Fuente: MURPHY, D. 2001
47

- Como vectores, donde la longitud del vector representa la amplitud, y el ngulo del
vector representa el avance o el retraso de la onda concerniente a una referencia
imaginaria.

- Como rayo, donde la trayectoria linear de un rayo en un medio homogneo se
muestra como una lnea recta.

2.3.1.1 Propiedades de la luz

La luz interacta con la materia en una amplia variedad de formas, presentando una serie de
propiedades caractersticas que al incidir sobre un cuerpo varan su comportamiento segn
la superficie y constitucin de ste y la inclinacin de los rayos incidentes, dando lugar a
diversos fenmenos fsicos (MURPHY, D. 2001).

Un rayo de luz puede ser desviado mientras pasa a travs de un objeto transparente el cual
presenta un ndice de refraccin diferente, fenmeno conocido como Refraccin, o puede
curvarse uniformemente rodeando los bordes de un objeto opaco, fenmeno conocido como
difraccin, o incluso dispersarse por pequeas partculas y estructuras que tienen
dimensiones similares a la longitud de onda de la luz (Tambin conocido como difraccin).
Fenmenos que aplicados a un espcimen presentan una gran influencia en el proceso de
formacin de la imagen en microscopa de luz (MURPHY, D. 2001).

2.3.1.2 Tipos de luz

De acuerdo al grado de uniformidad de los rayos, la luz puede clasificarse en varias clases.
Encontrando dentro de los tipos ms frecuentes referidos a microscopa de luz (MURPHY, D.
2001):

- Monocromtica: Ondas que tienen la misma longitud de onda o frecuencia
vibracional.
- Polarizada: Ondas cuyos vectores oscilan en planos que son paralelos uno del otro.
- Coherente: Ondas de una longitud de onda dada que mantienen la misma relacin
de fase mientras que viajan a travs del espacio y el tiempo.
48

- Focalizada: Ondas que presentan una trayectoria coaxial de propagacin a travs
del espacio, sin convergencia o divergencia, pero no necesariamente tiene la misma
longitud de onda, fase, o estado de la polarizacin.

2.3.2 FORMACIN DE IMGENES

La formacin de imgenes, se basa en el uso de lentes los cuales consisten en un plano
principal y un plano focal, definidos como aquellos planos, dentro del lente y en la imagen
enfocada, respectivamente, donde los rayos o las extensiones de rayos se interceptan y se
unen fsicamente. Lo que implica parmetros geomtricos especficos de los lentes los
cuales incluyen (MURPHY, D. 2001):

- Plano focal: Plano en el cual los rayos se interceptan para formar una imagen.
- Plano principal: Plano en el lente en el cual las extensiones de los rayos incidentes y
emergentes se interceptan.
- Longitud focal: Definida como la distancia comprendida entre el plano principal y el plano
focal
- Eje ptico: Definido como la lnea imaginaria que recorre los centros de un sistema
ptico y forma ngulo recto con el plano de la imagen.

En el microscopio ptico, la luz que pasa alrededor y a travs del espcimen sin ser alterada
en su trayectoria (luz directa), es proyectada por el objetivo y se extiende uniformemente a
travs del plano de imagen entrando en el diafragma del ocular. La luz difractada por el
espcimen es conducida al foco en varios puntos situados sobre el mismo plano de la
imagen, donde causa interferencia destructiva y reduce la intensidad resultando en ms o
menos reas oscuras. Estos patrones de luz y oscuridad son los reconocidos como imagen
del espcimen. Debido a que los ojos son sensibles a las variaciones en brillo, la imagen se
convierte en una reconstitucin ms o menos fiel del espcimen original, donde los lentes
del ocular magnifican la imagen que finalmente se proyecta sobre la retina o el plano de la
pelcula de una cmara fotogrfica (ABRAMOWITZ, M. 1987).

El principio fundamental para la mayora de mtodos de contraste, en microscopa ptica se
basa en la combinacin de luz directa y difractada como factor crtico en la formacin de la
imagen, siendo los lugares claves para tal fin, el plano focal anterior del objetivo y el plano
focal frontal del condensador (DAVIDSON, et al 2001).

49



2.3.3 PLANOS DE IMAGEN Y APERTURA EN EL MICROSCOPIO

La configuracin del microscopio se basa en una serie de planos focales conjugados, los
cuales se presentan simultneamente en un sistema dado (Figura 15) Dichos planos se
componen de dos sistemas: un conjunto de cuatro planos de campo y un conjunto de cuatro
planos de difraccin, que determinan posiciones definidas con respecto al objeto, elementos
pticos, fuente de luz y el ojo o cmara (DAVIDSON, et al 2001).

El conocimiento de los planos focal anterior y frontal de un lente, es esencial para el ajuste
y comprensin de los principios implicados en la formacin de la imagen, los cuales en orden
de secuencia iniciando con la fuente de luz, se establecen de la siguiente manera
(MURPHY, D. 2001):



Planos de Campo Planos de Apertura

- Diafragma de campo - Filamento de la lmpara

- Plano de campo o objeto - Diafragma del condensador

- Plano de imagen real intermedio - Apertura anterior del objetivo

- Retina o cmara - Salida de la pupila del ocular










50

Planos de campo Planos de apertura
Conjugados conjugados




2.3.4 ILUMINACIN KOEHLER

En microscopa de luz, la tcnica de iluminacin Koehler es empleada como mtodo
estndar ya que proporciona un control total del funcionamiento ptico para la obtencin de
imgenes de calidad, generando la iluminacin uniforme del espcimen (DAVIDSON, et al
2001).

El principio de la iluminacin del microscopio, por el mtodo de Koehler, se basa en el uso
de un juego de lentes involucrados con el fin de controlar los factores fundamentales en
iluminacin, en el cual un lente (lente de la lmpara) es situado frente a la lmpara. El plano
focal anterior de este lente es usado como fuente de luz para iluminar el espcimen, lo que
garantiza iluminacin uniforme desde cualquier punto donde la lmpara est, por lo que su
luz ser distribuida incluso en el plano focal anterior. En este plano se encuentra el iris de
Figura 15. Configuracin de los planos focales conjugados en el
microscopio de luz.
Fuente: MURPHY, D. 2001
51

campo, el cual controla el tamao de la fuente eficaz, y por lo tanto el tamao del rea
iluminada sobre el espcimen (COX, G. 2002).

El iris de campo y por tanto el plano focal anterior del lente de la lmpara es enfocado sobre
el espcimen por el condensador. En el plano focal anterior del condensador se encuentra
otro iris el cual controlar el ngulo de luz que alcanza el espcimen y debe por tanto
ajustarse para diferentes aperturas numricas en los objetivos (COX, J. 2002).

2.3.5 COMPONENTES OPTICOS DEL MICROSCOPIO DE LUZ

En el uso del microscopio se encuentran dos principios involucrados: la magnificacin
(capacidad de aumentar el tamao de una imagen) y la resolucin (capacidad de producir
una imagen ntida, o la capacidad del instrumento para dar imgenes bien definidas de
puntos situados muy cerca uno del otro). El microscopio de luz compuesto, se basa en el
uso de luz visible para producir una imagen magnificada de un objeto (o espcimen) que se
proyecta sobre la retina del ojo o sobre un dispositivo de proyeccin de imagen. ste es el
resultado de dos sistemas de lentes los cuales trabajan juntos para producir la magnificacin
final de la imagen (MURPHY, D. 2001):

(1) El lente del objetivo, el cual colecta la luz difractada por el espcimen y forma una
imagen real magnificada en el plano de imagen intermedio cerca al ocular.

Los objetivos del microscopio, estn diseados para proyectar una imagen en un
plano fijo (plano de imagen intermedio) el cual est establecido por la longitud del
tubo del microscopio y situado a una distancia especifica del plano focal anterior con
respecto a la distancia del objetivo. Los especmenes son reflejados en una distancia
muy corta ms all del plano focal frontal del objetivo con un medio de ndice de
refraccin definido, generalmente aire, agua, glicerina, o aceites de inmersin
especializados (MURPHY, D. 2001).

En la obtencin de imgenes de calidad, los objetivos presentan una serie de
especificaciones que aportan valor (Figura 16):

- Correcciones pticas: Se encuentran usualmente abreviadas como Achro
(acromtico), Apo (apocromtico), y Fl, Fluar, Fluor, Neofluar, o Fluotar (fluorina) lo
52

que indica correccin para aberraciones esfricas y cromticas. Y como Plan, Pl,
EF, Acroplan, Plan Apo o Plano para correcciones de curvatura de campo.

- Apertura numrica: Es un valor crtico que indica el ngulo de aceptacin de luz el
cual alternadamente determina la energa de luz acumulada, energa de resolucin,
y profundidad de campo del objetivo.

- Longitud mecnica del tubo: Es la longitud del tubo del cuerpo del microscopio
entre la pieza, donde es incorporado el objetivo, y el borde superior de los tubos de
observacin donde se insertan los oculares. La longitud del tubo usualmente est
escrita sobre el objetivo como el tamao en milmetros (160, 170, 210, etc.) para las
longitudes fijas, o el smbolo infinito () para el longitudes de tubo corregidas a
infinito.

- Grosor del cubreobjeto: La mayora de luz transmitida de los objetivos se designa
a la imagen de los especmenes que son cubiertos por un cubreobjeto. El grosor de
estas placas est actualmente estandarizado a 0.17 mm para la mayora de
aplicaciones, aunque hay algunas variaciones en el grosor de ciertos portaobjetos.
Por esta razn algunos de los objetivos de apertura numrica alta tienen un ajuste
de correccin de los elementos internos del lente para compensar esta variacin.

- Medio de inmersin: La mayora de los objetivos se designan a la imagen del
espcimen con aire como el medio entre el objetivo y el cubreobjeto. Para lograr
aperturas numricas de un funcionamiento ms alto, muchos objetivos se designan
a la imagen del espcimen con otro medio que reduzca diferencias del ndice de
refraccin entre el cristal y el medio de proyeccin de imagen.

- Cdigos de color: Permiten una identificacin rpida de la magnificacin. Algunos
objetivos especializados tienen un cdigo de color adicional que indica el tipo de
medio de inmersin necesario para alcanzar la apertura numrica ptima.

- Propiedades pticas especializadas: Los objetivos del microscopio usualmente
tienen designados parmetros que optimizan el funcionamiento sobre condiciones
especficas. Como los designados para luz polarizada, contraste diferencial de
interferencia y fluorescencia entre otros (INOU, et al 1995).
53



Figura 16. Especificaciones del objetivo
Fuente: MURPHY, D. 2001

(2) El lente del condensador, el cual concentra la luz del iluminador sobre una pequea
rea del espcimen.

La subetapa del condensador recoge luz de la fuente de luz del microscopio y la concentra
en un cono de de luz que ilumina el espcimen con rayos paralelos de intensidad uniforme
de todos los ngulos sobre el campo de vista (ABRAMOWITZ, D. 1987).

El ajuste de apertura y enfoque adecuado del condensador son de importancia crtica para
aprovechar el potencial completo del objetivo. El uso apropiado de la apertura ajustable del
iris del diafragma permite asegurar la correcta iluminacin, contraste y profundidad de
campo. El cierre y apertura de este iris controla el ngulo de los rayos luminosos los cuales
pasan a travs del condensador, a travs del espcimen y luego al objetivo (DAVIDSON, et
al 2001).

2.3.6 TCNICAS DE MICROSCOPA DE LUZ

El desarrollo de tcnicas de contraste en microscopa, permite mejorar la visibilidad del
espcimen proporcionando una imagen ms definida. La habilidad de un detalle para
54

resaltar contra el fondo u otro detalle adyacente es una medida del contraste del espcimen
(DAVIDSON, et al 2001).

En microscopa ptica es posible distinguir variantes que ofrecen diferentes imgenes de un
mismo objeto de estudio, segn sea la naturaleza del material, sus caractersticas y el
objetivo para el que se examina, lo que permite la eleccin de una u otra tcnica especfica.

2.3.6.1 Microscopa de campo claro

La tcnica de campo claro efecta la iluminacin del espcimen con un cono slido de rayos.
En esta, la absorcin en gran parte y la difraccin en un menor grado de importancia, dan
lugar a la formacin de la imagen (MURPHY, D. 2001).

La iluminacin del espcimen se basa en la conduccin de luz proveniente de la lmpara
hacia el lente situado bajo el condensador, el cual proyecta un cono de luz sobre este. Luego
de atravesarlo, el haz luminoso, en forma de cono, penetra en el objetivo; el objetivo
proyecta una imagen aumentada en el plano focal del ocular, que nuevamente la amplia. Por
lo que la imagen provista por el ocular puede ser percibida por la retina del ojo (Figura 17)
(BARRERA, et al 1997).
















Figura 17. Mecanismo ptico del microscopio de campo brillante.
Fuente: LASSLET, 2006
55

Los objetos son observados en la trayectoria de luz, porque la pigmentacin natural o las
tinciones absorben luz diferencialmente, o porque son lo suficientemente gruesas para una
cantidad significativa de luz a pesar de ser incoloras (BARRERA, et al 1997).

2.3.6.2 Microscopa de contraste de fases

La tcnica de contraste de fases se basa en el retraso en la longitud de onda que pueden
producir diversas estructuras con ndices de refraccin distintos. Mediante un sistema ptico,
las diferencias de fase, en las cuales se altera levemente la fase de la luz difractada por el
espcimen, se traducen en diferencias de amplitud las cuales generan cambios en la
amplitud de la imagen que son detectados por el ojo humano como diferencias en la
intensidad luminosa (MURPHY, D. 2001).

En la microscopa de contraste de fases, se distinguen dos tipos de contraste, lo cual
depende de la aceleracin o retraso en la luz directa (Figura 18):

Contraste de fase positivo u oscuro: basado en la aceleracin de la luz directa de longitud
de onda, por lo que la diferencia en la longitud de onda entre la luz directa y difractada para
un espcimen de fase es de de longitud de onda, causando interferencia destructiva entre
la luz directa y difractada la cual llega al nivel de imagen del ocular lo que resulta en la
aparicin de detalles oscuros contra un fondo ms claro (ABRAMOWITZ, M. 1987).

Contraste de fase negativo o brillante: basado en el retraso de la luz directa de longitud de
onda, por lo que la luz directa y difractada alcanzan el ocular y pueden interferir
constructivamente, lo que resulta en una imagen brillante de los detalles del espcimen
sobre un fondo oscuro (PLUTA, 1989).









56



El mtodo involucra la separacin de la luz directa de orden cero, de la luz difractada en el
plano focal anterior del objetivo, ubicando para esto, un aro anular en posicin directa bajo el
lente inferior del condensador (plano focal frontal). Debido a que el cono hueco de luz de
dicho anular pasa a travs del espcimen sin desviarse, ste alcanza el plano focal anterior
del objetivo en forma de aro de luz. La luz ms tenue difractada por el espcimen, es
entonces dispersada por todo el plano focal anterior del objetivo (ABRAMOWITZ, M. 1987).
Para acelerar la luz directa de orden cero, el microscopio para contraste de fases presenta
una placa de fase con un aro formado desfasador sobre sta, en el plano focal anterior del
objetivo. El rea estrecha del aro de la placa de fase es ms delgada que el resto de la placa
(Figura 19); generando como resultado, que la luz no desviada que pasa a travs del aro de
fase, viaje una distancia mas corta en atravesar el objetivo con respecto a la luz difractada
(DAVIDSON, et al 2001).




Figura 18. Esquema descriptivo de contraste de fase Positivo (a) y Negativo (b)
Fuente: (ABRAMOWITZ, M. 1987).
57








Placa de Fase







Anular





El diseo ptico para la implementacin de la tcnica, se basa entonces en dos aspectos
esenciales: 1) el aislamiento de los rayos circundantes y difractados emergiendo del
espcimen para que estos ocupen diferentes posiciones en el plano de difraccin en la
apertura anterior del lente del objetivo, y 2) el avance en fase y la reduccin en la amplitud
de la luz circundante, con el fin de maximizar diferencias en amplitud entre el objeto y el
fondo en el plano de imagen; lo que requiere por tanto el empleo de dos piezas
fundamentales para el equipamiento del microscopio: un condensador anular y un lente del
objetivo sosteniendo una placa de fase (MURPHY, D. 2001).
2.3.6.3 Microscopa de contraste de interferencia diferencial (DIC)

La microscopa de contraste de interferencia diferencial, se basa en la interferencia de cada
rayo de luz, con otro que pasa a travs del espcimen una distancia muy corta lejos de l. Si
el ndice de refraccin del espcimen cambia en este punto, se efectuar una diferencia en
Figura 19. Configuracin esquemtica para microscopa de
contraste de fases.
Fuente: DAVIDSON, et al 2001.
58

la trayectoria entre los dos rayos, mientras si es uniforme no se presentar, por lo que el
contraste observado al final de la imagen depender del cambio en el ndice de refraccin.

El principio de la tcnica consiste en el manejo de ptica de interferencia de rayo-dual
basada en luz polarizada y dos dispositivos los cuales actan separando o recombinando los
rayos denominados prismas Wollaston (COX, G. 2002).

Esta involucra el paso de la luz proveniente de la lmpara, a travs de un polarizador
localizado bajo el condensador (Figura 20).












RAYOS DE LUZ CON RAYOS DE LUZ TRANSMITIDA POR
ORIENTACIN AL AZAR DEL EL POLARIZADOR LOS CUALES TIENEN
PLANO DE VIBRACIN EL MISMO PLANO DE VIBRACIN





Consecuentemente en la trayectoria de la luz de este plano de luz polarizada, se encuentra
un prisma Wollaston modificado, situado bajo el lente inferior del condensador, el cual
separa el rayo entrante de luz polarizada en dos rayos viajando en direcciones levemente
diferentes. Los rayos de luz emergentes vibran a 90 grados en relacin uno del otro con una
leve diferencia en la trayectoria (Figura 21) (ABRAMOWITZ, 1987). Y se interceptan

Figura 20. Incidencia al azar de los rayos de luz en un polarizador
Fuente: (ABRAMOWITZ, M. 1987).
59














posteriormente en el plano focal frontal del condensador, donde viajan paralelos y
extremadamente cerca con una leve diferencia en la trayectoria pero vibrando an
perpendicularmente uno del otro, por lo que son incapaces de interferir (Figura 22)
(BRADBURY, et al 1996).















Figura 22. Ilustracin esquemtica de la configuracin del
microscopio para contraste diferencial de interferencia.
Fuente: DAVIDSON, et al 2001
Figura 21. Representacin esquemtica del Prisma Wollaston
Modificado
Fuente: ABRAMOWITZ, M. 1987.
60


Los rayos separados entran y pasan a travs del espcimen, donde sus trayectorias son
alteradas segn las variaciones en el grosor, inclinacin e ndices de refraccin del mismo.
Estas variaciones causan alteraciones en la trayectoria de la onda de ambos rayos pasando
a travs de reas de detalles del espcimen (Figura 23). Los rayos paralelos estn an
avanzando a travs del microscopio dentro del objetivo donde son enfocados en el plano
focal anterior del objetivo, e ingresan posteriormente a un segundo prisma que combina los
dos rayos. Esto remueve la cizalla y la diferencia en la trayectoria original entre los pares de
rayos (ABRAMOWITZ, 1987).
















Para que los rayos interfieran, las vibraciones de los rayos de diferente longitud de
trayectoria deben ser conducidas en el mismo plano y eje. Esto es llevado a cabo ubicando
un segundo polarizador (analizador) sobre el prisma superior que combina los rayos. La luz
procede entonces a travs del ocular, donde puede observarse como diferencias en
intensidad y color (ABRAMOWITZ, 1987). La imagen producida finalmente, presenta una
apariencia atrayente bajorrelieve con una parte de cada objeto apareciendo brillante (o
posiblemente en color) y la otra sombreada (o de otro color). Los efectos de color y/o
intensidad de luz observados en la imagen estn relacionados al cambio en el ndice de
refraccin, el grosor o ambos en detalles a reas adyacentes del espcimen (COX, 2002).


Figura 23. Trayectorias de onda alterando el espcimen de reas adyacentes
de acuerdo con el grosor e ndice de refraccin
Fuente: ABRAMOWITZ.1987.
61


3. JUSTIFICACIN


A travs de los aos, Colombia ha logrado alcanzar un importante posicionamiento en el
mercado internacional de las flores, el cual se encuentra altamente diversificado
convirtindose en el principal proveedor de productos tradicionales como la rosa, el clavel y
el pompn. Sin embargo, las empresas floricultoras se enfrentan a problemas fitosanitarios
que reducen la calidad de los cultivos, generando prdidas econmicas, tiempo y esfuerzos.
Alrededor de un 80 % de las enfermedades en plantas son causadas por hongos, siendo los
cultivos de flores altamente susceptibles debido a muchos factores y condiciones que
pueden favorecer la proliferacin de microorganismos patgenos. As mismo, se encuentran
fallas en cuanto a los planes de manejo adecuados los cuales involucran un seguimiento y
control de enfermedades lo que requiere del conocimiento y anlisis de los agentes
causales; consecuencia indirecta de la falta de herramientas necesarias que conducen a
garantizar la identificacin de patgenos tomando por ende las medidas pertinentes para su
control.

Actualmente, el pas presenta una gran falencia en cuanto al acceso a equipos que
proporcionen tecnologas avanzadas en la identificacin morfolgica de microorganismos de
inters en varios niveles. Adems, no se cuenta con informacin apreciable disponible, ya
que aunque en ocasiones se desarrollan estudios referentes al tema, las investigaciones se
han centrado en la solucin de problemas existentes, sin generar documentos que permitan
su consulta posterior. Esta escasez de informacin es atribuida principalmente a la falta de
equipos, tecnologa y herramientas eficaces para el logro de dicho objetivo. Por otra parte,
ya que los controles de sanidad vegetal son fundamentales como criterio de aceptacin de
producto, y eje central en las regulaciones para la prevencin de enfermedades, contar con
material grfico que proporcione imgenes tiles en la deteccin de microorganismos
patgenos, es indispensable como instrumento de referencia para la identificacin confiable
de stos y el logro de un enfoque preventivo correcto, lo que contribuye al beneficio del
sector.


62

Por lo anterior, y debido al escaso material disponible hasta el momento, el presente trabajo
propone desde la microbiologa y mediante la aplicacin de microscopa de luz, la
elaboracin de un atlas para la descripcin de hongos fitopatgenos que afectan flores de
corte, el cual aporte informacin valiosa que pueda ser empleada y comprendida desde
diversos campos, permitiendo de este modo, una aproximacin a un mejor conocimiento de
los microorganismos implicados, no solo para la prevencin y solucin de problemas, sino
tambin como instrumento de referencia.




































63

4. OBJETIVOS



4.1 OBJETIVO GENERAL

Elaborar un atlas descriptivo de los principales hongos fitopatgenos que afectan flores de
corte de especies cultivadas en la Sabana de Bogot.

4.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Aislar e identificar hongos fitopatgenos de mayor incidencia en especies de flores
de corte a partir de material vegetal infectado con sintomatologa presuntiva de
enfermedad fngica.

Caracterizar morfolgicamente los principales hongos causantes de enfermedad en
flores de corte cultivadas en la Sabana de Bogot.

Obtener, mediante microscopia de luz y fotografa digital, imgenes representativas
para la descripcin microscpica y macroscpica de hongos y la manifestacin de
enfermedades en los distintos rganos de las plantas, las cuales permiten una
aproximacin en la identificacin del agente causal.







64

5. MATERIALES Y MTODOS

5.1 DISEO DE LA INVESTIGACIN

El estudio realizado, se bas en un componente experimental el cual incluy el aislamiento y
obtencin de microorganismos a partir de material vegetal infectado, con el fin de aportar
material grfico til en la evaluacin y reconocimiento de hongos fitopatgenos de
importancia en cultivos de flores de corte, mediante un enfoque descriptivo soportado en
argumentacin bibliogrfica y la aplicacin de tcnicas de microscopa de luz.

5.1.1 Poblacin de estudio y muestra

La poblacin de estudio comprendi muestras de cepas de hongos y plantas presentando
los signos y sintomatologa caractersticos de enfermedad. La coleccin de microorganismos
fue realizada con base en las muestras enviadas para anlisis en el lugar de estudio, y las
colectadas en el transcurso de la investigacin.

El tamao de muestra estuvo sujeto al nmero de aislamientos y la capacidad de
preparaciones realizadas durante el trabajo en el cultivo.

5.2 MTODOS

5.2.1 Localizacin del rea de muestreo

Las muestras fueron obtenidas de los invernaderos del cultivo Americaflor Ltda., distribuidos
en varias locaciones de la Sabana de Bogot, para su posterior procesamiento, el cual fue
llevado a cabo en el laboratorio de Sanidad Vegetal de ste, ubicado en el municipio de
Cajic, Cundinamarca. El anlisis, caracterizacin y toma de imgenes de microorganismos
fue efectuado en la Corporacin MICROS, situada en el municipio de Cha, Cundinamarca.

5.2.2 Mtodo de muestreo

Se colectaron muestras basadas en material vegetal con sntomas tpicos de enfermedad
fngica, procedentes de tres partes puntuales: flor, hoja y tallo, las cuales fueron
transportadas en bolsas y procesadas para el aislamiento de microorganismos.
65

La preparacin de material para la observacin microscpica, se realiz mediante el
montaje de lminas en fresco por muestreo directo, y/o impronta. Cada preparacin
contena las estructuras diagnsticas caractersticas de cada gnero o especie, para su
posterior toma de imgenes.

La preparacin de material para descripcin macroscpica se efectu mediante la
adquisicin de hongos crecidos en cajas de petri y la observacin de plantas con previa
confirmacin de la presencia del microorganismo, paso que igualmente incluy la toma de
fotografas representativas.

5.3 PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

5.3.1 Aislamiento de microorganismos

El aislamiento y recuperacin de microorganismos se realiz mediante cortes de tejido
vegetal de 1 cm
2
tomados de la zona de transicin entre el tejido sano y el enfermo en los
diferentes rganos de la planta y la consecuente desinfeccin del mismo por inmersin en
solucin de hipoclorito de sodio al 1%, efectuando luego enjuagues con agua clorada estril
para retirar el exceso de germicidas (Garca, et al. 2003).

La siembra se efectu mediante la transferencia a partir del material infectado con aguja de
diseccin de una porcin de micelio o mediante el pase de tres o cuatro secciones del tejido
de cada rgano a cajas de petri conteniendo medio de cultivo: Agar Papa Dextrosa (PDA),
Agar (V8), Agar Corn meal (CMA), Agar cido glico (GAA) y Agar (P5). Los medios fueron
incubados por 5 -7 das a 22 25 C (Sylvia, 1998).

La purificacin de microorganismos se realiz a travs del pase de stos en los medios
iniciales y la idoneidad de las cepas fue efectuada a partir del reconocimiento de
caractersticas macroscpicas mediante evaluacin de criterios como: color, topografa,
textura, tasa de crecimiento y produccin de pigmentos, y verificacin microscpica mediante
anlisis morfolgico basado en la observacin e identificacin de estructuras tpicas.

La recuperacin de microorganismos no cultivables, se desarroll mediante la tcnica de
cmara hmeda colocando partes del material vegetal en recipientes estriles y toallas
humedecidas, incubadas a temperatura ambiente, realizando observaciones frecuentes
hasta obtener masa fngica sobre el material que posibilitara la observacin al microscopio.
66


5.4 MICROSCOPA

La evaluacin de estructuras para descripcin morfolgica fue realizada a travs de
microscopio ptico (BX51, Olympus) efectuando observaciones con magnificaciones 20x
(A.N. 0.50), 40x (A.N. 0.65), 60x (A.N. 0.75, Inmersin en aceite) y 100x (A.N. 1.30,
Inmersin en aceite) y mediante el examen del material con tincin azul de lactofenol y
montajes en agua, aplicando tcnicas de microscopa de luz las cuales incluyeron:

Microscopa de campo brillante
Microscopa de contraste de fases
Microscopa diferencial de contraste de interferencia (DIC)

5.4.1 Obtencin de imgenes

La obtencin de imgenes micromorfolgicas fue llevada a cabo mediante cmara digital
(Olympus DP50) incorporada al microscopio ptico en uso (BX51, Olympus), y analizada
empleando un software de adquisicin de imgenes, como base fundamental para el anlisis
descriptivo relativo a caractersticas microscpicas, seleccionando finalmente la
fotomicrografa mas representativa como resultado de la tcnica de microscopa elegida para
tal fin con cada microorganismo evaluado. As mismo, se obtuvieron fotografas mediante
cmara digital referentes a caractersticas macroscpicas de los microorganismos
implicados, y la manifestacin de la enfermedad (Evidenciada por los signos y
sintomatologa caractersticos) en plantas.

5.5 RECOLECCION DE INFORMACION Y ANALISIS DESCRIPTIVO

El anlisis descriptivo basado en la caracterizacin de microorganismos incluy adems de
la descripcin pertinente a especies de hongos, plantas y caractersticas especficas acerca
de la manifestacin de enfermedades en las mismas. Dicho anlisis fue soportado con
material bibliogrfico con el fin obtener y proporcionar finalmente informacin completa
sobre los aspectos fundamentales implicados en el presente estudio.



67

5.6 DISEO Y ELABORACIN DEL ATLAS

El compendio de informacin fue finalmente representado mediante en el atlas de
fitopatologa el cual colecta la totalidad del trabajo desarrollado en el transcurso del estudio
mediante las herramientas y material proporcionado por el cultivo (Americaflor Ltda.) y el
apoyo de la corporacin MICROS.



























68

6. RESULTADOS

6.1 Identificacin y descripcin de enfermedades fngicas en flores de corte

6.1.1 ALSTROEMERIA











6.1.1.1 Hongos fitopatgenos en Alstroemeria

MANCHAS EN LAS HOJAS

Agente causal: Alternaria sp.


El hongo ataca principalmente las hojas, presentando pequeas manchas aceitosas
circulares de color caf frecuentemente rodeadas de un halo amarillo. Las manchas tienen la
caracterstica de tener anillos concntricos oscuros, sobre los cuales se producen esporas
polvorientas (Figura 25).






Figura 24. Alstroemeria
69













Usualmente, las hojas senescentes de la parte inferior de la planta, son atacadas en primer
trmino, pero la enfermedad asciende hacia la parte superior de sta y hace que las hojas
afectadas se tornen amarillas y endebles (Figura 26), por lo que se desecan y debilitan
hasta desprenderse finalmente.





Figura 26. Formacin de manchas
aceitosas por infeccin con Alternaria sp

Figura 25. Sntomas iniciales de enfermedad
por Alternaria sp. en hojas de Alstroemeria
70

PODREDUMBRE GRIS

Agente causal: Botrytis sp.

Sntomas

El fitopatgeno coloniza tejidos vegetales que entran en etapa de senescencia o que estn
sometidos a estrs. Se manifiesta mediante la aparicin de puntos y manchas, destruyendo
los ptalos. Sin embargo tambin causa ulceraciones en el tallo y produce lesiones en
brotes jvenes, manifestndose por el deterioro de los tejidos, los cuales toman una
coloracin caf, presentando tambin sequedad.




















En las hojas bsales y tallo, es posible evidenciar la presencia de una capa densa color
grisceo, como resultado del desarrollo del hongo, el cual con el tiempo y conforme avanza
la enfermedad cubre por completo el tejido afectado con un micelio gris del cual se liberan
esporas negras (Figura 27).

Figura 27. Deterioro de tejidos y formacin de
micelio de Botritys sp. en tallo
71

6.1.2 ANIGOZANTHUS









6.1.2.1 Hongos fitopatgenos en Anigozanthus

PODREDUMBRE GRIS

Agente causal: Botrytis sp.

Sntomas

El hongo ataca principalmente las hojas, presentando en los sntomas iniciales decoloracin
ascendente, a causa del desecamiento y quemazn de los tejidos, por lo que se tornan de
color caf plido bordeadas por una zona negra intensa al final de lesin (Figura 29).











Figura 29. Manchas causadas por
Botritys sp. en hojas de Anigozanthus

Figura 28. Anigozanthus
72

Cuando la enfermedad avanza, y como consecuencia del desarrollo del patgeno, se
presenta la formacin de masas de esporas de color grisceo-pardo de paredes delgadas, lo
cual se favorece bajo condiciones de clima nublado, hmedo y fresco.

6.1.3 ANTIRRHINUM MAJUS (SNAPDRAGON)











6.1.3.1 Hongos fitopatgenos en antirrhinum majus (snapdragon)

PODREDUMBRE GRIS

Agente causal: Botrytis sp.

Sntomas

El fitopatgeno produce el marchitamiento de hojas, sobre las cuales se evidencia el
crecimiento de un moho gris apareciendo en las zonas ms afectadas. ste puede
presentarse en forma de esclerocios o de micelio, desarrollndose sobre restos de plantas
en proceso de descomposicin.



Figura 30. Snapdragon
73













Las hojas se tornan caf, y presentan pudricin hasta obtener finalmente la muerte del
rgano implicado (Figura 31).

Agente Causal: Sclerotinia sp.

Sntomas














La infeccin inicia en la base del tallo, a partir de la cual asciende hasta afectar las hojas,
provocando un decaimiento general de la planta (Figura 32). A medida que la enfermedad
Figura 32. Lesin inicial de tejidos
de Snapdragon por Sclerotinia sp.
Figura 31. Pudricin de tejidos con
presencia de micelio del patgeno.
74

avanza, el hongo induce una pudricin blanda acompaada de micelio algodonoso blanco
(Figura 33).















Al interior del tallo, es posible encontrar cuerpos fructificantes conocidos como esclerocios.
El desarrollo del patgeno se ve favorecido bajo condiciones de temperatura media y
hmeda relativa alta, cuando ataca principalmente las partes ms susceptibles de la planta.

6.1.4 CLAVEL











Figura 33. Decaimiento generalizado de la planta con
aparicin de micelio de Sclerotinia sp. en tallos
Figura 34. Clavel
75

6.1.4.1 Hongos fitopatgenos en Clavel

PODREDUMBRE GRIS

Agente causal: Botrytis sp.

Sntomas

El hongo se establece en los ptalos de la flor, los cuales son particularmente susceptibles a
envejecer, produciendo un micelio abundante. Genera tambin lesiones en el tallo, las
cuales pueden ser hendidas, alargadas y de color oscuro de contorno bien definido o pueden
extenderse sobre ste y hacer que se debilite y se quiebre a nivel de la zona de infeccin
(Figura 35). (CHVEZ et al 1982)














Cuando el clima es hmedo y fro el micelio del hongo produce numerosos conidios que
causa varias infecciones, pero el micelio tambin se desarrolla, penetra e invade el resto de
la inflorescencia la cual se llena de un moho de color grisceo a caf claro. (AGRIOS 1991)






Figura 35. Plantas de clavel afectadas por Botritys sp.
Decaimiento de ramas y presencia de micelio en flor.
76

ENFERMEDAD DE LA RAMA

Agente causal: Fusarium roseum

Sntomas

El hongo se caracteriza por la invasin de los tallos a nivel de la base de la planta. Por lo
general, se observa un decaimiento de la misma y una pudricin de tejidos de tallos
infectados que progresa de adentro hacia fuera. Los rganos afectados se tornan de color
amarillo y las ramas presentan resequedad como consecuencia del taponamiento vascular
generado por el hongo (Figura 36).





La enfermedad es bastante comn en lugares de mucha humedad y puede matar
completamente la planta. En una planta adulta que aparenta estar sana en el tallo a nivel del
nudo, aparece una mancha roscea con el centro blanco y un poco amarillento.




Figura 36. Infeccin avanzada de Fusarium
roseum presentando muerte de tejidos
77


MANCHA ANILLADA DEL CLAVEL

Agente causal: Heterosporium sp.

Sntomas


La enfermedad ataca toda la parte area de la planta con especial preferencia por las hojas
y las flores. El sntoma caracterstico se produce en hojas y spalos. En las hojas, comienza
a manifestarse como manchas pequeas de color prpura que ms tarde se ensanchan,
mostrando centro cremoso o gris claro y margen prpura. En el
centro de las lesiones aparece un moho oscuro que contiene los
conidiforos y conidios del hongo (Figura 37).


En los ptalos el hongo induce el desarrollo de manchas color
marrn-claro, donde produce una gran cantidad de conidios
(Figura 38). Los botones florales con infecciones severas se abren
prematuramente y las flores emergentes no alcanzan el tamao
normal.


Figura 38. Botn de clavel
afectado por Heterosporium sp.
Figura 37. Sntomas iniciales de enfermedad
por Heterosporium sp. en hojas de clavel
78

MAYA DEL CLAVEL

Agente causal: Fusarium oxysporum

Sntomas

La enfermedad se caracteriza por la apariencia unilateral de los sntomas de marchitamiento,
acompaado por el amarillamiento parcial de las hojas y el doblamiento de los brotes hacia
un lado de la planta enferma.

En estados iniciales en las hojas pueden observarse la mitad clortica y la otra mitad de un
verde normal el marchitamiento es progresivo de la base del tallo hacia arriba, hasta causar
un marchitamiento general y la muerte. Al realizar un corte transversal del tallo, es posible
evidenciar la presencia del patgeno la cual es identificada por un oscurecimiento sectorial
de los vasos conductores en forma de anillo alrededor del cilindro vascular de los tallos
infectados (Figura 39).













El hongo tambin daa y bloquea los haces vasculares de la raz del clavel, y se disemina a
travs del xilema, causando adems una pudricin del cuello, y finalmente, la muerte de la
planta.



Figura 39. Corte transversal de un tallo de
clavel afectado por Fusarium oxysporum
79

Agente Causal: Sclerotinia sp.

Sntomas

Los sntomas se evidencian por la generacin de una pudricin blanda, con lesiones
marrones sobre los tallos, sobre los cuales se desarrolla la formacin de masas algodonosas
de color blanco, correspondientes al micelio del patgeno, sobre los tejidos afectados.

El hongo se caracteriza por desarrollar cuerpos fructificantes resistentes de color negro
grisceo y forma circular u ovalada sobre el micelio, conocidos como esclerocios, los
cuales se encuentran dentro o sobre los tallos.

Los tejidos localizados arriba de la lesin se marchitan y mueren con el tiempo (Figura 40).
Las esporas germinan sobre tejido sano y sobre rganos enfermos y al hacerlo invade
tejidos y completa su desarrollo formando nuevamente esclerocios, forma en la cual el
microorganismo inverna en el suelo.



















Figura 40. Sntomas avanzados de
infeccin por Sclerotinia sp. en
rama de clavel
80

6.1.5 DELPHINIUM









6.1.5.1 Hongos fitopatgenos en Delphinium

PODREDUMBRE GRIS

Agente causal: Botrytis sp.

Sntomas

Bajo condiciones muy hmedas, una capa fina griscea de micelio puede ser visible. Una
estructura llamada "conidiforo" que contiene esporas crece a menudo en el tejido (Figura
42). Cuando se sacuden las plantas infectadas, grandes nubes de polvo que contienen
esporas pueden ocurrir.









Figura 41. Delphinium
Figura 42. Corona en Delphinium
afectada por Botritys sp.
81

El hongo no invade tejido celular verde saludable como hojas y tallos a menos que se
encuentre presente un rea injuriada o muerta, o que crezca directamente de una base
como un ptalo u hoja cada. El hongo ataca primero tejidos afectados presentando
pudricin (Figura 43) y posteriormente afecta tejido saludable.






MILDEO POLVOSO

Agente causal: Erysiphe cichoracecearum
Sntomas

Los sntomas presentan el desarrollo de parches blancos difusos sobre las hojas, en donde
crece el hongo, especialmente en el haz. Con el avance de la enfermedad el patgeno
genera un recubrimiento, por lo que se evidencia un aspecto polvoso blancuzco (Figura 44).







Figura 43. Atrofia y pudricin de tejidos
con formacin de micelio algodonoso de
Botritys sp. en Delphinium
82


En ataques severos, se presenta clorosis o necrosis en el tejido por debajo de la mancha,
en el envs de las hojas y sobre los tallos, e incluso pednculos y flores pueden ser
afectados (Figura 45).






Figura 45. Tallo con necrosis por
infeccin de Mildeo Polvoso
Figura 44. Sntomas de Mildeo Polvoso
sobre el haz de una hoja en Delphinium
83

MANCHAS EN LAS HOJAS

Agente causal: Alternaria sp.

Sintomas


Los sntomas iniciales de enfermedad, presentan puntos
pequeos en la hoja, circulares, y hmedos.
Posteriormente, las manchas se agrandan hasta 13
milmetros de dimetro con los anillos concntricos
oscuros dentro de los puntos (Figura 46).

Los puntos se unen para afectar reas grandes de hojas,
afectando fuertemente el rgano hasta causar el deshoje.




6.1.6 GERBERA












Figura 46. Haz de una hoja con
manchas causadas por Alternaria en
Delphinium
Figura 47. Gerbera
84

6.1.6.1 Hongos fitopatgenos en Gerbera

PODREDUMBRE GRIS

Agente causal: Botrytis sp.

Sntomas

La infeccin se inicia en tejidos senescentes y en descomposicin, especialmente en flores
que han quedado sin cosechar.

Se evidencian manchas pequeas color caf sobre los ptalos, las cuales con el tiempo, se
agrandan tomando una forma ovalada (Figura 48). Cuando la enfermedad se encuentra en
un estado avanzado, se desarrollan pequeas esporas grises sobre afeccin, las cuales son
las encargadas de diseminar el hongo e iniciar infecciones en hojas y flores de otras plantas.




















Figura 48. Mancha en ptalo de Gerbera afectado
con Botritys sp.
85

MANCHAS EN LAS HOJAS

Agente causal : Alternaria sp.

Sintomas

El hongo genera la formacin de pequeas manchas acuosas, las cuales presentan aspecto
de ampollas sobre el envs de las hojas inferiores.

Cuando las manchas maduran, los centros aparecen hundidos de color marrn y pueden
mostrar halos difusos amarillos. Finalmente las manchas aparecen en el haz de las hojas. Si
las condiciones siguen siendo apropiadas para el desarrollo de la enfermedad, las manchas
se agrandan.

En ciertos casos, las lesiones muestran anillos concntricos y las lesiones prximas pueden
unirse. En los ptalos, aunque menos incidente, es posible evidenciar la presencia del
hongo, sobre los cuales se observan diminutas lesiones plidas circulares (Figura 49).















Figura 49. Manchas acuosas causadas
por Alternaria sp. en ptalos
86

Agente causal: Itersonilia perplexans.

Sintomas

El patgeno se encuentra muy distribuido como saprofito de la superficie foliar. Pero causa
tambin marchites de ptalos, especialmente en el aire libre y en condiciones hmedas.

Las lesiones se inician con manchas pequeas como cabezas de alfiler pardas, en las flores
externas del capitulo, las cuales se extienden tomando posteriormente una coloracin
amarilla de borde oscuro, y aparecen cubiertas desde el centro hacia afuera por una
eflorescencia blanca opaca (Figura 50)
.

















Las lesiones se presentan mayormente en los ptalos externos, y consecuente afectan la flor
hacia el interior hasta causar el decaimiento total de la misma.



Figura 50. Lesiones caractersticas de Itersonilia sp
en ptalos de Gerbera
87

6.1.7 GIRASOL










6.1.7.1 Hongos Fitopatgenos en Girasol

MILDEO POLVOSO

Agente causal Sphaerotheca sp.

Sntomas

Los sntomas de la enfermedad se manifiestan en las hojas, sobre las cuales se genera una
clorosis alrededor de las nervaduras principales, la cual se evidencia principalmente en el
haz (Figura 52).











Figura 51. Girasol
Figura 52. Hoja de girasol
afectada con Mildeo Polvoso
88

Como resultado del ataque del hongo, se observan parches radiales blanquecinos
pertenecientes al micelio y fructificaciones asexuales del hongo.

En condiciones en que la humedad atmosfrica es alta se forman en el envs de las hojas,
en las partes invadidas por el micelio, una capa blanca que esta integrada por
zoosporangios del hongo.

Agente causal: Sclerotinia sp.

Sntomas

El primer sntoma aparece durante la mascencia y se manifiesta en que el tallo bajo los
cotiledones se vuelve blanco y estos decaen hasta el suelo. La infeccin se produce por
micelios, los cuales han invernado sobre las semillas y tambin por contacto de la semilla
con esclerocios del captulo.

Despus en el tallo y en la base del captulo se van pudriendo superficies blandas,
apareciendo en estos lugares micelios blancos que despus de poco tiempo empiezan a
secarse y se forman esclerocios oscuros. El tallo se vuelve dbil, las hojas se secan y se
caen (Figura 53).











Por ultimo se presenta la infeccin del captulo, cuya parte inferior se vuelve blanda, mas
tarde toma un color marrn y aparece un tejido algodonoso blanquecino.
Figura 53. Decaimiento y pudricin de una
rama de Girasol afectada con Sclerotinia sp.
89


6.1.8 GYPSOPHYLA









6.1.8.1 Hongos Fitopatgenos en Gypsophyla

Agente causal: Sclerotinia sp.

Sntomas

La enfermedad afecta principalmente los tallos, los cuales presentan un decaimiento
generalizado, que inicia usualmente en la porcin terminal y avanza hacia la corona.
Conforme avanza la enfermedad los rganos se tornan plidos y presentan alta resequedad.












Figura 54. Gypsophila
Figura 55. Sntomas avanzados de enfermedad en tallos de
Gypsophila. Atrofia de rganos y presencia interna de esclerocios
90

La porcin de la corteza ubicada entre la corona y aproximadamente 10 cm de altura de los
tallos, se vuelve blanquecina y en el corte longitudinal es posible encontrar esclerocios
ovales de color negruzco, los cuales son los resultantes de las fructificaciones del hongo
(Figura 55).

PUDRICIONES DE TALLO Y RAZ

Agente causal: Pythium sp.

Sntomas

El primer sntoma es el amarillamiento de las hojas inferiores de la planta, indicativo de un
problema radicular (Figura 56).Especficamente sobresale la necrosis parcial o total de las
races cuando el hongo penetra por stas.

Si la infeccin se da en el tallo, se observan pequeos puntos negros, los cuales
evolucionan en poco tiempo. Las zonas invadidas se vuelven acuosas y decoloradas,
tambin la parte basal del tallo, se torna ms delgada y dbil. Perdiendo su firmeza y soporte
hasta que la planta cae sobre el suelo. El hongo sigue invadiendo la planta hasta que esta
finalmente muere.
















Figura 56. Sntomas caractersticos de
enfermedad por Pythium sp. en brotes
de gypsophila
91

En plantas adultas, el hongo desarrolla pequeas lesiones, causando pudricin de raz y
tallo, reduciendo considerablemente su desarrollo y crecimiento (Figura 57).













6.1.9 KALES


















Figura 58. Kales
Figura 57. Sntomas avanzados de enfermedad por
Phytium sp. Atrofia y necrosis de races y tallos
92

6.1.9.1 Hongos fitopatgenos en Kales

MILDEO VELLOSO

Agente causal: Peronospora sp.

Sntomas

Se localizan esporangios en las puntas de las ramas. En un principio los esporangiforos
casi siempre son largos y blancos y emergen en grupos a travs de los estomas de los
tejidos de la planta (Figura 59).















Mas tarde, adquieren una tonalidad griscea o caf clara y forman una matriz visible
constituida por las hifas del hongo en la superficie inferior de las hojas (o en ambas
superficies de ellas) o bien sobre otros tejidos infectados. Cada esporangiforo crece hasta
llegar a la madurez y entonces produce varios esporangios casi simultneamente.




Figura 59. Sntomas iniciales de Mildeo
velloso en hojas de Kyles
93

6.1.10 MOLUCELLA











6.1.10.1 Hongos Fitopatgenos en Molucella

Agente causal: Cercospora

Sntomas

Se manifiesta en las hojas con pequeas manchas necrticas de color marrn oscuro de
aproximadamente 5 mm de dimetro con borde indefinido y halo clortico al inicio de la
enfermedad (Figura 61), pudindose encontrar solitarias distribuidas por toda la hoja.












Figura 60. Molucella
Figura 61. Mancha causada por Cercospora
sp en etapas iniciales de enfermedad
94


En estados mas avanzados de la enfermedad, las hojas se rizan, y las manchas se
ensanchan tomando forma oval, y adquiriendo una coloracin amarilla intensa. El patgeno
debilita finalmente los tejidos, causando la ruptura de los mismos (Figura 62).



6.1.11 ROSA













Figura 62. Hojas de Molucella infectadas con
Cercospora sp. Debilitamiento y ruptura de tejidos
Figura 63. Rosa
95

6.1.11.1 Hongos Fitopatgenos del Rosal

ROYA

Agente Causal: Pragmidium sp.

Sintomas

Durante el desarrollo de la enfermedad,se producen cuerpos de color naranja redondeados,
los cuales se observan como pequeos tumores en el envs de las hojas (Figura 64).












El haz presenta reas clorticas, las cuales estn en correspondencia con los uredosoros
del patgeno en el envs (Figura 65). Las plantas afectadas se marchitan y mueren.












Figura 64. Envs de una hoja
mostrando pstulas de roya en rosa
Figura 65. reas clorticas en el haz de hojas de rosa
causadas por la esporulacin del patgeno en el envs
96

MILDEO POLVOSO

Agente causal: Sphaerotheca pannosa.

Sintomas

El ataque del patgeno inicia la infeccin sobre las hojas jvenes de la planta, causando su
deformacin, con abullonado. En las hojas aparecen manchas pulverulentas de color
blanco grisceo sobre el haz y el envs; los bordes del limbo se crispan, por lo que las hojas
se vuelven curvadas y deformes, tomando una forma abarquillada (Figura 66).
















El ataque se manifiesta con el recubrimiento de las estructuras fungosas blancuzcas, que
forman una capa semejante a polvo, las cuales corresponden al micelio (con
conidiforos) que se forman en el crecimiento ectoparsito del hongo (Figura 67).
Tambin es posible el desarrollo de manchas del patgeno en los tallos jvenes, de forma
especial, en la base de las espinas y en las partes ms sensibles donde persisten
durante la maduracin de los tallos, aunque con menor incidencia.



Figura 66. Esporulacin del patgeno sobre hojas de rosa
97













MILDEO VELLOSO

Agente causal: Peronospora sparsa.

Sntomas














Esta enfermedad provoca severas defoliaciones y ocasiona graves debilitamientos en las
plantas. Afecta a hojas, tallos y pednculos florales. El patgeno se caracteriza por la
Figura 67. Sntomas avanzados de
enfermedad afectando follaje en rosas
Figura 68. Sntomas iniciales de Mildeo velloso
en la base de la cabeza floral del rosal.
98

generacin de lesiones elpticas grandes a lo largo de la hoja. Manchas violceas sobre
hojas y tallo (Figura 68).













Avanzada la infeccin, se presenta entorchamiento de las hojas y marchitamiento de las
mismas. En el envs, se desarrollan reas grisceas, pequeas, de aspecto velloso, que
son las resultantes de la esporulacin del patgeno (Figura 69).Los foliolos infectados se
caen rpidamente y un cultivo infectado con severidad puede aparecer casi completamente
defoliado.

PODREDUMBRE GRIS

Agente causal: Botrytis sp.

Sntomas










Figura 69. Curvatura y enrojecimiento de tejidos de
rosa afectados por Peronospora sp.
Figura 70. Sntomas caractersticos de enfermedad generados por Botritys en ptalos
de rosa


99


La presencia de esta enfermedad es evidenciada por un crecimiento fngico gris, con
cuerpos oscuros realzados, productores de esporas, sobre cualquier zona de crecimiento.
Se producen necrosis extensas en los tallos y brotes, pero lo ms conocido es el dao que
causa en las flores. En los botones florales, con diferentes grados de apertura, aparecen,
primero, pequeas manchas rojo-prpura (Figura 70); posteriormente el micelio y las
estructuras de propagacin del hongo cubren toda la flor observndose en este caso una
masa pulverulenta gris (Figura 71). El ambiente hmedo y la falta de viento con temperatura
suave, facilita el desarrollo de la enfermedad.

















Las lesiones foliares se inician desde los mrgenes hacia el interior del rgano. En stas la
penetracin se produce por el estilo, ptalos o pednculos. En el tallo de rosa, el patgeno
origina una coloracin roja cobriza y hace su epidermis quebradiza desprendindose
fcilmente del resto de la corteza.






Figura 71. Infeccin severa del patgeno con produccin de
micelio en flor
100

VERTICILOSIS

Agente causal: Verticillium sp.

Sntomas











Al inicio de la enfermedad se observa un color amarillo en la base de la planta (Figura 72).
El patgeno causa clorosis, bronceamiento o enrojecimiento y marchitez parcial de la lmina
foliar. La decoloracin vascular causada se distribuye en forma uniforme por todo el tallo.

Los sntomas aparecen unilateralmente en la planta, produciendo necrosis del tejido
vascular, y muerte generalizada del follaje. Los tallos permanecen secos hasta su muerte, y
las hojas se secan y mueren de abajo hacia arriba. Finalmente, se evidencia aparicin de
micelio algodonoso blanco (Figura 73).





Figura 72. Clorosis y enrojecimiento parcial del tallo por Verticillium sp.
Figura 73. Sntomas avanzados de enfermedad presentando
necrosis unilateral y formacin de micelio en tallos
101

6.1.12 SOLIDAGO










6.1.12.1 Hongos Fitopatgenos en Solidago

MILDEO POLVOSO

Agente causal: Sphaerotheca sp.

Sntomas

El micelio del hongo se desarrolla rpido cubriendo las superficies infectadas, siendo tenue
al principio y como eflorescencias densas y de aspecto apelmazado al final de las
infecciones (Figura 75).Usualmente los sntomas se presentan en las hojas ms viejas, pero
la infeccin es ms severa cuando ms jvenes son las plantas al ser afectadas.











Figura 74. Solidago
Figura 75. Manchas foliares de Mildeo polvoso en solidago
102

Toda la parte area se puede recubrir de las eflorescencias blancas, se produce defoliacin
y decaimiento hasta la muerte de las plantas.

ROYA

Agente causal: Puccinia sp.

Sntomas













Los sntomas de esta enfermedad son muy tpicos, ya que se evidencian cuerpos naranjas,
redondeados y produciendo esporas en el haz y envs de las hojas (Figura 76).El haz
presenta adems superficies planas, clorticas en las reas correspondientes a la presencia
de las esporas del patgeno.

Agente causal: Sclerotinia sp.

Sintomas

La enfermedad inicia con el decaimiento generalizado de la planta, presentando sequedad y
marchitamiento que inicia de la base hacia arriba. Se produce una pudricin blanda del tallo,
y ste es debilitado hasta perder su rigidez (Figura 77).


Figura 76. Clorosis y presencia de pstulas de
Puccinia sp. en hojas de solidago
103
















En estados avanzados de enfermedad, es posible evidenciar la presencia del patgeno
mediante la aparicin de micelio blanco algodonoso, y formacin de esclerocios dentro y/o
fuera de ste (Figura 78).















Figura 78. Sntomas avanzados de enfermedad.
Atrofia y amarillamiento de tejidos. Presencia de
esclerocios
Figura 77. Sntoma de infeccin por
Sclerotinia sp. en ramas de solidago
104

6.1.13 STATICE









6.1.13.1 Hongos Fitopatgenos en Statice

PODREDUMBRE GRIS

Agente causal: Botrytis sp.

Sntomas

El patgeno genera pudricin de las hojas, las cuales se marchitan con el tiempo. Tambin
afecta la base de las cabezas florares, en donde causa el deterioro de los tejidos
perjudicando la apertura y ocasionando sequedad, por lo que se tornan de color caf (Figura
80).











Cuando la infeccin es severa, se evidencia la formacin de micelio algodonoso gris sobre
flores, las cuales terminan por entorcharse y marchitase.
Figura 79. Statice
Figura 80. Atrofia y pudricin de tejidos de Statice por Botritys sp.
105

Agente causal: Cercospora sp.

Sntomas

La enfermedad se presenta principalmente en la base de la planta, afectando el follaje, sobre
el cual se forman manchas pequeas, relativamente circulares (3-5 mm), las cuales
presentan una coloracin crema a gris claro en el centro y borde caf rojizo (Figura 81).












En el transcurso de la enfermedad, las manchas crecen, y estructuras pequeas polvosas se
desarrollan debido a la esporulacin del hongo (Figura 82).

Inicialmente se observan los sntomas de dao en algunas hojas, sin embargo, la
enfermedad puede extenderse a todo el cultivo, propagndose por lluvia, riego por aspersin
y viento. Eventualmente el follaje y las ramas muertas se desprenden de planta.








Figura 81. Haz de hojas de Statice presentando
manchas causadas por Cercospora sp.
Figura 82. Lesiones caractersticas de Cercospora
sp. con presencia de esporas sobre hojas de statice.
106

6.1.14 STOCK











6.1.14.1 Hongos Fitopatgenos en Stock

PODREDUMBRE GRIS

Agente Causal: Botritys sp.

Sntomas

En esta especie el patgeno afecta las hojas, causando pudricin de los tejidos. Las puntas
se tornan rugosas y toman una coloracin marrn claro o amarillenta. Con el progreso de la
enfermedad, la mancha se extiende hacia la base de las hojas y se desarrolla un moho gris
de aspecto polvoriento como consecuencia del desarrollo del hongo (Figura 84).












Figura 84. Pudricin de tejidos con presencia
de micelio del patgeno
Figura 83. Stock
107

PUDRICIN DEL TALLO Y LA RAZ

Agente causal: Rhizoctonia sp.

Sntomas

Los sntomas en la planta presentan inicialmente decaimiento con amarillamiento y
deshidratacin del follaje. El patgeno genera un aspecto flcido en la planta, acompaado
de un bronceado y descomposicin de las races y de la corona. La parte afectada, se torna
arrugada y de color caf (Figura 85).













El ptimo desarrollo de la planta es afectado, hasta que termina muriendo por la pudricin
de races y base del tallo. Generalmente la pudricin ocurre en el tallo que se encuentra en
contacto con la superficie del suelo (Figura 86).











Figura 86. Muerte de plntulas por contaminacin de Rhizoctonia sp. en suelo
Figura 85. Sntomas caractersticos de infeccin por
Rhizoctonia sp.
108

Agente causal: Sclerotinia sp.

Sntomas












La infeccin con Sclerotinia sp, se manifiesta en el cultivo con un notorio decaimiento y
marchitez de la planta (Figura 87). Si las condiciones ambientales acompaan el desarrollo
del patgeno, se evidencia la aparicin de un micelio de color blanco (Figura 88), afectando
la planta hasta abarcar todo el tallo y provocar la cada, total o parcial, del mismo.












En estados avanzados de la podredumbre se pueden distinguir cuerpos negros, que son los
esclerocios del hongo (estructuras de resistencia), los cuales caen al suelo y perduran hasta
el cultivo siguiente.

Figura 87. Planta afectada por Sclerotinia sp.
Figura 88. Sntomas avanzados de enfermedad con
presencia de micelio.
109

6.2 Caractersticas macroscpicas y microscpicas de hongos fitopatgenos

6.2.1 Alternaria sp.

Macroscopa










Alternaria sp. presenta en cultivo colonias de color verde oscuro, tornndose oscuras o casi
negras a medida que envejece. Polvosas por el desarrollo de un micelio areo, denso bien
desarrollado, de borde irregular.

El envs de la caja, no presenta diferencias en la pigmentacin de la colonia.


Microscopa

Los conidios pueden aparecer solitarios o encadenados y son fcilmente reconocibles
debido a su tamao (30 50 x 10-14 micras) color y forma caractersticos.

Los conidios, son muy caractersticos por su
tabicacin longitudinal, transversal u oblicua y
presentan forma ovoide u obclavada, con superficie
lisa o rugosa y de coloracin marrn claro a oscuro,
generalmente se forma en cadenas.

Presenta hifas septadas coloreadas, caf -
olivceas o cafs.



Figura 89. Crecimiento de Alternaria sp. en medio V8
Figura 90.Conidios de Alternaria sp.
empleando DIC. Objetivo: 100 x AN: 1.3
110

6.2.2 Botrytis sp

Macroscopa









Botrytis sp. presenta colonias de crecimiento moderado, cuyo micelio es de apariencia
vellosa color blanco a gris.

Microscopa



Presenta conidias formadas en conidiforos, el cual forma
en el pice una vescula con varios puntos conidiales.
Estos conidios son grandes, y sus conidiforos pueden ser
erectos, simples o ramificados.









Micelio hialino en etapas iniciales de desarrollo,
posteriormente, toma un color oscuro, presentando
septos y perforaciones centrales.



Figura 92. Botrytis sp. Campo
claro. Objetivo: 100 x AN: 1.3
Figura 93. Hifas Botrytis sp. Campo
claro Objetivo: 100 X AN: 1.3
Figura 91. Crecimiento de Botritys sp. en medio PDA
111


6.2.3 Cercospora sp.

Macroscopa









Colonias de color gris oscuro, de borde irregular, aterciopeladas por su cara superior. En el
envs, la colonia presenta pigmentacin negra.

Microscopia


Los conidiforos son siempre coloreados, olivceos a
caf plidos o muy oscuros. Conidios alargados
septados, filiformes algo sinuosos, hialinos, de base
ensanchada













Figura 94. Crecimiento de Cercospora sp. en medio V8
Figura 95. Conidios de Cercospora sp.
Campo Claro Objetivo: 100 x AN: 1.3
112

6.2.4 Fusarium oxysporum

Macroscopa











El hongo produce colonias de rpido crecimiento, presentando micelio areo abundante,
algodonoso, con una coloracin variable, de blanco a rosado. Con pigmentacin violeta o
prpura

Usualmente un tinte prpura o violeta ms intenso se presenta al dorso de la colonia.

Microscopa

Posee microconidias que son esporas unilaterales, sin septos, hialinas, elipsoidales a
cilndricas, rectas o curvas, se forman sobre fialides laterales, cortas, simples o sobre
conidiforos poco ramificados Macroconidias, esporas de pared delgada, fusiformes, largas,
moderadamente curvas.

Presenta clamidioesporas formadas a partir de la
condensacin de los contenidos de las hifas y
macroconidias, de paredes gruesas, mediante las
cuales el hongo sobrevive en condiciones
ambientales desfavorables




Figura 96. Crecimiento de Fusarium oxysporum en medio PDA
Figura 97. Fusarium oxysporum. empleando
campo claro. Objetivo: 100 x AN: 1.3
113


6.3.5 Fusarium roseum

Macroscopa









Fusarium roseum, produce colonias de rpido crecimiento, algodonosas, de micelio blanco a
rosado. Por el envs de la caja se observa un crecimiento con una pigmentacin de un
rosado mas oscuro.

Microscopa


Formacin de macroconidias las cuales son
delgadas, de pared gruesa septadas, hialinas y
bien curvadas.

A diferencia de Fusarium Oxysporum, no forma
microconidias ni clamidosporas.











Figura 98. Crecimiento de Fusarium roseum en medio PDA
Figura 99. Fusarium roseum, empleando
DIC. Objetivo: 100 x AN: 1.3
114

6.3.6 Heterosporium sp

Macroscopa











Las colonias presentan coloracin verde oscuro en el borde y verde aceituna en el interior.
Son de aspecto pulverulento, y ocasionalmente pueden presentar lneas radiales. El reverso
de la colonia, no presenta diferencias en la pigmentacin

Microscopa

El hongo presenta micelio septado, nudoso, oscuro y
ancho en estado adulto. En estadios juveniles el
micelio no posee septas. Posee conidiforos
septados, oscuros, fasciculares, agrupados o
simples; conidias equinuladas o espinosas, grandes y
de forma elptica, septadas hasta cuatro veces en su
madurez.







Figura 100. Crecimiento de Heterosporium
sp. en medio V8.
Figura 101. Heterosporium sp. Campo
Claro Objetivo: 40 x AN: 0.65
115


6.3.7 Itersonilia

Macroscopa








Presenta colonias delgadas, pulverulentas, de crecimiento lento, con pigmentacin color
crema en el dorso.

Microscopa


Posee balistosporas, es decir, conidios formados en
una estructura llamada esterigma. Estas
balistosporas vistas al microscopio son hialinas y
muy cortas.










Figura 102. Crecimiento de Itersonilia sp. en medio PDA
Figura 103. Itersonilia sp. empleando
DIC Objetivo: 60X AN: 1.3
116

6.3.8 Peronospora sp.

Macroscopa



















Microorganismo viable, no cultivable.

Microscopa


Esporangiforos largos, hialinos, agrupados y
ramificados dicotmicamente, muy numerosos, con
abundantes esporangios globosos, hialinos

Presenta micelio hialino, no septado.









Figura 104. Envs de una hoja de rosa contaminada
con Peronospora sp. Muestra enfocada en estreo.
Microscopio Olympus BX 51
Figura 105. Peronospora sp. empleando
campo claro Objetivo: 40x AN: 0.65
117

6.3.9 Pragmidium sp.

Macroscopa













Microorganismo viable, no cultivable.

Microscopa
Pragmidium sp. presenta diferentes tipos de esporas dentro de las cuales se encuentran:
Las ecidiosporas que son redondas o elipsoides, de 19-30 de largo y 17-24 de ancho,
con episporio hialino, provistas de verrugas lenticulares con punta sobrepuestas, muy
espaciadas.
Las Uredosporas son elipsoides a ovaladas, de 25-32 de largo y 21-24 de ancho, con
episporio hialino, provisto de verrugas espinudas distanciadas, fuertes y cnicas.
Las Teleutosporas, de 85-110 de largo y 32-35 de ancho, compuestas de 3-5 clulas
(generalmente 4), cilndricas, poco contradas en los tabiques, con pice redondeado
provisto de una papila amarilla. Membrana celular parda, de 8-10 de espesor, provista de
numerosas verrugas hialinas; poros germinativos 3-4. Pedicelo incoloro, hinchado en la parte
basal, de mayor longitud que la espora



Figura 106. Envs de una hoja de solidago
infectada con Pragmidium sp. Imagen enfocada en
Estereo Microscopio Olympus BX51
118










































Figura 107. Esporas de Pragmidium sp.
empleando contraste de fases. Objetivo 60
x. A.N: 0.65
Figura 108. Esporas de
Pragmidium sp empleando Campo
claro. Objetivo 40x. A.N: 1.3
Figura 109. Esporas de Pragmidium sp.
empleando DIC. Objetivo: 100 x AN: 1.3
119


6.3.10 Pythium sp.

Macroscopa









Macroscpicamente presenta hifas blanquecinas y delgadas, con un crecimiento hacia
arriba, en forma arborescente, que parte del estrato basal o vegetativo, tendiendo a ser de
forma tridimensional, semejante a una esfera: en conjunto presenta un aspecto algodonoso
formando los tpicos pilares que caracterizan su apariencia macroscpica. El dorso de la
colonia, no presenta diferencias en su pigmentacin.

Microscopa

Se caracteriza por poseer hifas incoloras dispuestas en forma de racimo. Las estructuras de
la reproduccin sexual son oogonios equinulados
generalmente plerticos, fertilizados por anteridios en
forma de clava, de pared reticulada que se producen
en grupos sobre una misma hifa; las estructuras de la
reproduccin asexual estn representadas por
zoosporas que se producen en zoosporangios
intercalares morfolgicamente poco diferenciados, las
cuales se liberan desde vesculas bien diferenciadas
(CORREA DE RESTREPO et al 1990)





Figura 110. Crecimiento de Pythium en medio V8
Figura 111. Zoosporas de Pythium sp.
empleando Campo Claro. Objetivo: 60x
A.N: 0.65
120

6.3.11 Rhizoctonia sp

Macroscopa









Se caracterizan por presentar colonias blancas, algodonosas, planas, sin embargo,
dependiendo de la especie, puede presentarse tonalidades cremas amarillentas. Por el
envs de La caja se observa un crecimiento con una pigmentacin amarilla ms oscura

Microscopa

Hifas relativamente anchas y tiene un modelo de la
bifurcacin caracterstico. Se orientan las ramas de
hifas perpendicularmente a su punto de origen y se
estrechan a su base

Muestran una constitucin de hifas entrelazadas, de
dimetro variable, cortas, elpticas, semejantes a
diminutos barriles dispuestos en cadena






Figura 112. Crecimiento de Rhizoctonia sp. en medio PDA
Figura 113. Hifas de Rhizoctonia sp.
empleando contraste de fases. Objetivo
40x A.N: 0.65
121

6.3.12 Sclerotinia sp.

Macroscopa









Se caracteriza por formar micelio algodonoso blanco. Desarrolla cuerpos fructificantes
resistentes sobre este micelio conocidos como esclerocios, de color negro grisceo, en
forma circular u ovalada. Por el envs de la caja se observa el micelio blanco y los
esclerocios.








Microscopa



Hifas septadas con caracterstica forma de Y-formando la
bifurcacin, presenta ramificaciones excesivas




Figura 114. Crecimiento de Sclerotinia sp. en medio PDA
Figura 115. Esclerocios de Sclerotinia sp. tomados a partir
de una planta infectada
Figura 116. Micelio de Sclerotinia sp. empleando
campo claro Objetivo: 40x AN: 0.65


122

6.3.13 Sphaerotheca pannosa

Macroscopa












Microorganismo viable, no cultivable

Microscopia


El cuerpo fructfero de este hongo es un ascocarpo que, por ser esfrico, se denomina
cleistotecio, en cuyo interior se producen las ascas, de forma oblongo-globosa con 8
ascosporas. Los cleistotecios, con apndices
micelioides tortuosos de color marrn plido a
negros, se forman irregularmente en algunas
zonas de la planta, solamente en algunos
cultivares pero no en otros. Las conidias van
dispuestas en cadenas, por esto se disemina por
el viento. Estas conidias puede generar muchos
ciclos, pero en condiciones adecuadas generaran
el cleistotecio.







Figura 117. Envs de una hoja de rosa contaminada con
Sphaerotheca sp. Muestra enfocada en estreo,
microscopio Olympus. BX 51
Figura 118. Conidios Sphaerotheca pannosa
empleando Campo Claro Objetivo: 40 x
123

6.3.14 Verticillium sp.

Macroscopa










Presenta en medio de cultivo, colonias delgadas, algodonosas y con variedad de pigmentos

Microscopa


Tiene conidiforo recto, tabicado y ramificado. El
hongo presenta hifas las cuales pueden variar de
hialinas a color gris o pardo. Presenta conidias hialinas
de forma cilndrica elipsoidal formadas en sucesin
en el pice del filide.













Figura 119. Crecimiento de
Verticillium sp. en medio PDA
Figura 120. Conidiforos y conidios de
Verticillium sp empleando Campo claro
Objetivo: 100 x AN: 1.3
124

7. DISCUSIN DE RESULTADOS


El anlisis de enfermedades fngicas en las variedades de flores colectadas, demostr la
presencia de diversos microorganismos en los diferentes rganos de las plantas. Los
gneros de hongos fitopatgenos encontrados en el estudio, correspondieron con los
reportados en la literatura para las diferentes especies. No obstante, se obtuvieron muestras
de gneros poco mencionados, como el caso de Itersonilia sp. y Cercospora sp. los cuales
fueron solo evidenciados en las variedades gerbera y molucellas respectivamente,
encontrando escasos estudios reportando su presencia. As mismo, otros gneros
ampliamente citados por varios autores, por su alta incidencia y/o el efecto causado sobre
las plantas, como el caso de roya blanca en (flor) y Phialophora sp en clavel, no fueron
evidenciados en ninguna ocasin durante el transcurso de la recoleccin en campo. Estudios
realizados anteriormente por autores como (Garca, Camargo. 2000) evaluando presencia
de enfermedades fngicas en flores, sugieren la influencia de factores en el rea como:
humedad relativa alta mayor al 93%, temperatura elevada y presencia de agua libre sobre
los tejidos, que favorecen el desarrollo de la infeccin, as como las condiciones del suelo y
agua de riego los cuales pueden ser tambin medios que facilitan la transmisin de
fitopatgenos a las plantas. As mismo, la obtencin de muestras en campo, mostr incluso
la susceptibilidad de ciertas variedades de plantas dentro de una misma especie, a
microorganismos especficos, siendo Botrytis sp., uno de los hongos de mayor incidencia,
evidenciando ataques sobre diversos rganos de todas las especies de plantas colectadas
en las diferentes fincas, y su alta prevalencia como contaminante, el cual result invadir y
colonizar frecuentemente tejidos senescentes o ya afectados por otros microorganismos,
como fue el caso de los montajes de Mildeos en cmara hmeda, los cuales fueron
rpidamente contaminados con este microorganismo, hecho que se presume puede deberse
a las estructuras reproductivas propias del hongo; las esporas grises son las encargadas de
diseminar el microorganismo e iniciar infecciones en hojas y flores de otras plantas, adems
puesto que ste es saprofito, y produce formas resistentes (clamidosporas), puede ser
fcilmente diseminado en los residuos de la cosecha, en el suelo o sustrato, mediante el
riego, el movimiento del personal, la cosecha y la propagacin, lo que requiere por tanto, la
adopcin de medidas mas estrictas para su control, como las evidenciadas en el cultivo del
rosal, en el cual se realizaba el cubrimiento de la flor con bolsas de papel para prevenir su
expansin, lo que mostr la capacidad del microorganismo para afectar varias especies de
plantas, y desarrollarse ampliamente, atribuyendo este hecho principalmente a los bajos
requerimientos nutricionales y ambientales del mismo. Otros microorganismos incidentes en
125

varios cultivos fueron tambin evidenciados, como Sclerotinia sp., aunque su presencia en
este caso, se relacion principalmente con condiciones del suelo y la formacin de
estructuras resistentes conocidas como esclerocios, los cuales pueden sobrevivir por largos
perodos de tiempo en el suelo (Garca, Camargo. 2000). Un caso contrario fue
experimentado con otros hongos como Heterosporium sp., el cual aunque se colect con
facilidad en los muestreos en campo a partir de clavel, su recuperacin in vitro no se efectu
de igual manera. Los aislamientos realizados con este microorganismo mostraron diferencias
en cuanto a requerimientos nutricionales con respecto a los dems hongos, teniendo en
cuenta que la mayora mostr un rpido crecimiento en el medio PDA, mientras
Heterosporium sp. slo se desarroll en el medio V8 el cual es un medio selectivo y para
lograr un amplio crecimiento este deba ser ubicado en zonas especficas del laboratorio lo
que mostr altas exigencias en cuanto a condiciones de luz y temperatura. Esto concuerda
con lo planteado en otros estudios (Cedeo, Carrero. 2003) en los que el patgeno present
dificultad para desarrollarse bajo condiciones a nivel de laboratorio y su crecimiento fue lento
con respecto a otros hongos tambin relacionados en este estudio. Un hecho similar fue
observado en la recuperacin de los hongos Rhizoctonia sp. y Phytium sp., microorganismos
que presentaron dificultades al realizar su identificacin presuntiva en campo, ya que ambos
se caracterizan por atacar la misma zona en la planta y su sintomatologa es muy similar,
adems los aislamientos a partir de material infectado en pocas ocasiones lograron la
recuperacin de stos, lo que dificultaba verificar la presencia del microorganismo afectante,
e igualmente, mostraron un mejor desarrollo en medios diferentes a PDA, permitiendo
confirmar tambin que aunque se encontraron gneros con requerimientos nutricionales mas
complejos, el medio de cultivo PDA, es adecuado para la recuperacin de los patgenos
implicados permitiendo el crecimiento y desarrollo de los mismos, as como la formacin de
estructuras reproductivas y la esporulacin, por lo que se recomienda su uso en este tipo de
estudios.

La manifestacin de enfermedades, mostr una caracterstica en comn al analizar la
presencia de patgenos en diversas variedades, observando que la sintomatologa entre
una especie de planta y otra, no presentaba diferencias relevantes al ser afectada por un
mismo microorganismo, Por otra parte, el rgano afectado por un patgeno especfico,
result ser mas variable, hecho observado principalmente con Botrytis sp., el cual present
facilidad para infectar varios rganos y su presencia en stos estuvo relacionada a la
especie de planta en particular. Sin embargo ste no mostr mayor especificidad por algn
rgano debido a la facilidad de desarrollo y diseminacin anteriormente mencionadas.
Autores como (Horst, 2003), atribuyen el grado de susceptibilidad de las plantas, as como
126

de rganos especficos a factores genticos e incluso la influencia del color de la variedad en
el ataque por un microorganismo.

Con relacin a las caractersticas morfolgicas de los microorganismos colectados, se
evidenciaron diferencias en el aspecto macroscpico, as como las observadas al
microscopio, en la formacin de estructuras en un mismo microorganismo, las cuales
predominaron dependiendo el medio de cultivo empleado, la variedad de planta a partir de la
cual fue aislado y el estado de la enfermedad; lo que demuestra la capacidad de los
microorganismos para producir diversos pigmentos o formar estructuras somticas o de
reproduccin de acuerdo a los componentes del medio, los cuales pueden estimular dichas
caractersticas, e igualmente debe tenerse en cuenta la edad del cultivo lo que genera
tambin cambios en el tipo y/o color de la estructura evidenciada. Literatura enfocada al
estudio de morfologa de hongos reporta cambios en el color y grosor de las hifas de varios
microorganismos empleados en este estudio, factor que puede encontrarse relacionado al
tiempo del cultivo (Garca, et al., 2000). Aunque contrariamente a lo planteado, las
caractersticas observadas presentaron usualmente la misma apariencia, para todos los
microorganismos. Por otra parte, el anlisis comparativo con la implementacin de tcnicas
de microscopa, mostr que contrario a los esperado, la tcnica de campo claro result ser la
mas apropiada para la obtencin de la mayora de micrografas, ya que permiti evidenciar
detalles especficos en ciertas estructuras los cuales no eran fcilmente observados en otras
tcnicas como la tabicacin de conidios y septos de hifas, como los evidenciados en
Alternaria sp. y Heterosporium sp., adems de proporcionar una aproximacin mas clara del
color de las estructuras. La aplicacin de tcnicas como DIC y contraste de fases
proporcion mejores micrografas con hongos como Botritys sp., y Fusarium sp,
principalmente en la observacin de conidios los cuales proporcionaron un aspecto en
relieve y las variaciones de contraste resaltaban significativamente la imagen. En base a lo
evaluado en los montajes realizados con los diferentes microorganismos, se presume que
varios factores influyeron en este hecho; dentro de los cuales se destaca el uso de agua o
colorantes empleados como el azul de lactofenol, los cuales intervienen de manera positiva
o negativa dependiendo la tcnica empleada, as como el uso de cinta a cambio de laminilla,
montaje apropiado para evitar daos y desfragmentacin de estructuras, pero en algunos
casos caus interferencia disminuyendo la nitidez, apresando gran cantidad de burbujas
entre la muestra e incluso dificultando la implementacin de alguna tcnicas. Este fue uno
de las principales inconvenientes encontrados en el desarrollo del trabajo, ya que la
morfologa de varios hongos por su aspecto plano y poco algodonoso, dificulta en gran
medida la obtencin de una muestra adecuada para observacin con laminilla, igualmente,
127

las variaciones en el grosor de la muestra, modificaban la resolucin debido a que sta, se
encontraba en varios planos y su enfoque no poda ser optimizado. Por lo que no se
recomienda el uso de materiales adhesivos o plsticos para cubrir la muestra en este tipo de
estudios. Una de las limitaciones mas reportadas en bibliografa en el empleo de tcnicas
como DIC y contraste de fases, es su requisito para una muestra transparente de ndice de
refraccin bastante similar a sus alrededores, lo que afecta su implementacin con
especmenes gruesos o altamente pigmentados, y el uso de materiales como cinta, que
interfieren con la trayectoria de la luz. (Lasslet. 2006). Aunque por los resultados obtenidos
de imgenes con tcnicas diferentes a campo claro con microorganismos como Botritys sp.
el cual presentaba una estructura fuertemente coloreada, se asume que diferencias en la
composicin estructural, o el aspecto morfolgico del microorganismo, intervienen en la
imagen final obtenida. Las experiencias evidenciadas durante el desarrollo de las tcnicas,
mostraron que los hongos que presentaban una aspecto mas denso y algodonoso
proporcionaban mayor informacin en una micrografa, lo que generaba posiblemente,
cambios mayores en el ndice de refraccin intensificando el contraste y resultando por ende
en una imagen mas significativa. Teniendo en cuenta que el principio de estas tcnicas se
basa en las diferencias en el ndice de refraccin dentro el espcimen o entre este y el
medio y la distancia a la que viajan las ondas de luz dentro de estas regiones, lo que resulta
en efectos de sombras, permitiendo resaltar caractersticas especificas en una muestra
(Davidson., et al. 2001). Por lo que no es posible afirmar mejores resultados con alguna de
las tcnicas, ya que esto depende en gran parte, de la naturaleza de la muestra. Sin
embargo, y con base a los aspectos anteriormente mencionados, se destaca que la tcnica
de campo claro fue mas flexible y adaptable a la variacin de montajes realizados y no
gener interferencias un ningn caso.

La identificacin de enfermedades y coleccin de muestras en campo, proporcion una
aproximacin a lo frecuentemente encontrado en este tipo de cultivos, susceptibles no solo
al ataque de hongos, si no tambin bacterias y nematodos. Hecho en el que los factores
ambientales y la naturaleza del microorganismo desempean un papel fundamental como se
mencion anteriormente, encontrando microorganismos de alta incidencia, los cuales se
presentan fcilmente y se mantienen en el tiempo, y hongos ocasionales que requieren un
control mas estricto, pues su aparicin en un cultivo, es una amenaza que genera un gran
impacto. Aunque se not un amplio control de estas enfermedades, lo que impide avances
perjudiciales para un cultivo, razn por la cual se resalta la importancia de contar con
informacin adecuada para tal fin y se recomienda adems, la coleccin de preparaciones
permanentes de manera que sea posible mantener cepas de referencia que faciliten la
128

identificacin de microorganismos a partir de sus caractersticas morfolgicas, pues su
existencia facilitara tambin la toma de decisiones respecto a las medidas preventivas y de
control para la creacin de programas fitosanitarios especficos, soportando igualmente, la
experimentacin in vitro.



















129

8. CONCLUSIONES

Se elaboro un atlas descriptivo con los principales hongos encontrados en flores de corte
cultivadas en la Sabana de Bogot, el cual ser til como instrumento de referencia en el
estudio de enfermedades fngicas en cultivos de inters

Los hongos identificados en material vegetal contaminado, presentaron la capacidad de
atacar diferentes especies de flores, destacndose entre estos a Botrytis sp.

Los hongos encontrados en material vegetal contaminado, fueron caracterizados
morfolgicamente, identificando estructuras propias de cada microorganismo, soportadas
con material bibliogrfico antes investigado.


Las muestras obtenidas a partir de material vegetal infectado, posibilitaron la recuperacin
de hongos fitopatgenos de inters de las especies de flores colectadas, mostrando que la
mayora de microorganismos crecieron en medio nutritivo no selectivo, lo que permiti el
rpido crecimiento de cepas, para su posterior caracterizacin.


Las tcnicas de microscopia ptica distintas a campo claro, proporcionaron imgenes de
gran contraste, pero presentaron mayores restricciones en su implementacin con un
espcimen.


El uso de elementos y montajes inadecuados durante la implementacin de tcnicas de
microscopa, gener interferentes los cuales afectaron la obtencin de imgenes deseadas.









130

9. RECOMENDACIONES

Se recomienda realizar estudios complementarios incluyendo otras enfermedades como
bacterias, nematodos y virus que atacan a flores de corte en la Sabana de Bogot, y que
permitiran aportar informacin en este aspecto.

Sera pertinente realizar estudios acerca de las enfermedades ocasionadas en flores
cultivadas en diferentes regiones del pas, las cuales involucren especies distintas a las
relacionadas en el presente estudio.

Se propone la implementacin de otros tipos de tcnicas de microscopia, que permitan
continuar evaluando la obtencin de imgenes de calidad.





















131

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