Microtbulos

INTRODUCCION

Prof. Ivn Rebolledo

GTP Los microtbulos son tubos cilndricos de un cercano a 25 nm. Actan como un andamio para determinar la forma de la clula y en una variedad de movimientos, tales como, el transporte intracelular de organelos y vesculas y la separacin de las cromtidas en la mitosis.

-tubulina

-tubulina

Los microtbulos estn construidos por unidades de protenas globulares llamadas tubulinas (55 kd). Dos de estas tubulinas se asocian en un dmero : tubulina alfa y tubulina beta. Son los dmeros de tubulinas los que se unen para formar los microtbulos, este proceso se llama polimerizacin o ensamble. Cada subunidad del dmero posee una molcula de GTP, pero como podr observar en la figura de abajo, el sitio que ocupa el GTP en la -tubulina est en el centro del dmero, en cambio, el

GTP de la -tubulina se encuentra cerca de la periferia: ste GTP es susceptible de poder hidrolizarse, dando GDP y luego ser intercambiado por otro GTP.

Este comportamiento de la subunidad permite que los dmeros puedan aadirse a microtbulos prexistentes por su extremo con GTP. Una vez dentro del microtbulo, ocurre la hidrlisis del GTP en la subunidad , lo cual debilita la unin con otros dmeros favoreciendo la desorganizacin del microtbulo, fenmeno conocido como despolimerizacin o desensamble. El extremo de adicin de dmeros suele llamarse extremo + del microtbulo y en el extremo ocurre el desensamble. As, los microtbulos tienen un comportamiento llamado inestabilidad dinmica, por el cual alternan ciclos de alargamiento y acortamiento.

Citoesqueleto

El primer estado en la formacin de un microtbulo se denomina nucleacin. Este proceso requiere de Mg+2 y de GTP y ocurre como sigue: una molcula de tubulina alfa se une a una beta para formar un dmero, luego stos se unen con otros similares en una disposicin anillada, como lo muestra la figura de abajo , en nmero de 13.
13 12 11 10 9 8 7 6 1 2 3 4 5

Inestabilidad dinmica Se mencion que los microtbulos pueden alargarse o acortarse segn las necesidades de la clula; en trminos moleculares, pueden polimerizarse o despolimerizarse, respectivamente. La polimerizacin consiste en la adicin de dmeros de tubulina, por su lado beta (con GTP perifrico) a un extremo del microtbulo, el cual viene a ser sealado como ms (+). Una vez que se han aadido varias capas de dmeros, los GTP mencionados sufren hidrlisis convirtindose en GDP, lo cual debilita la unin con las molculas adyacentes, favoreciendo la despolimerizacin.

El siguiente paso es la elongacin del microtbulo. Sobre los dmeros existentes se van ubicando nuevos dmeros para ir conformando hileras, que reciben el nombre de protofilamentos. Como puede ver en la figura de abajo, los 13 protofilamentos llegan a forma un microtbulo.

polimerizacin

despolimerizacin

Citoesqueleto

La velocidad de alargamiento o acortamiento est determinado por el grado de adicin de dmeros de tubulina en relacin con el grado de hidrlisis de GTP. Expliquemos esto: si la adicin de dmeros es ms rpida que la hidrlisis, el microtbulo se alarga. Por el contrario, si la adicin es ms lenta que la hidrlisis el microtbulo se acorta.

COMT
Esta sigla significa centro organizador de microtbulos, es decir, que en la clula existe una estructura que permite organizar microtbulos. Dicha estructura es el centrosoma, estructura compleja formada por 2 centrolos, ubicados en ngulo recto, y una cubierta proteica de tubulina gamma que conforma el llamado material pericentriolar. Lo ms curioso es que los centrolos son estructuras cilndricas de 0.2 m de formadas por microtbulos. Cada centrolo est integrado por 9 tripletes de microtbulos. Cada triplete se denomina, desde adentro hacia fuera, A, B y C. El microtbulo A contiene 13 protofilamentos, en tanto que el B y el C solo tienen 10. Examine la figura de abajo.

Drogas
Esta rpda renovacin de los microtbulos, que pueden tener una vida media de varios minutos, es crtica para la mantencin del citoesqueleto, especialmente durante la mitosis. Se han experimentado con drogas que afectan el ensamble de los microtbulos durante la mitosis de clulas cancerosas. La colchicina y la colcemida son drogas usadas como herramientas experimentales para detener la mitosis, ya que ellas se unen a los dmeros de tubulina e inhiben la polimerizacin de los microtbulos. Por otro lado, la vincristina y la vinblastina son drogas que se usan en quimioterapia para el cncer, ellas inhiben selectivamente la mitosis de las clulas daadas. Por ltimo, otra droga llamada taxol produce estabilizacin de los microtbulos y, por ende, bloquea la mitosis.

Citoesqueleto

Esta estructura de los centrolos lo poseen tambin los cuerpos basales presentes en la base de los cilios y flagelos. Otra cosa curiosa, parece ser que los centrolos no son necesarios para la organizacin de los microtbulos, puesto que no existen en clulas vegetales y en algunas clulas eucariticas unicelulares. Entonces, la pregunta aqu es cmo se organizan los microtbulos? La respuesta la tiene el material pericentriolar. Recordemos que est integrado por tubulina gamma, as sus molculas pueden formar una plantilla de forma anular sobre la cual se ensamblan los dmeros de tubulina. Estos complejos de -tubulina tienen un de 25-28 nm, similar al de los microtbulos y se estima que contengan 10-13 molculas de tubulina que sirven como sitios de nucleacin de microtbulos.

MAPs(*)
Seguramente habr deducido que todos los microtbulos estn alargndose y acortndose peridicamente. Pues djeme decirle que varios microtbulos no se modifican. La estabilidad de ciertos microtbulos es importante para la forma y polaridad de la clula. Esta estabilidad la logran asocindose con protenas. De aqu viene la sigla MAP (en ingls), que traducido viene a ser: protenas asociada a microtbulo. Estas protenas se unen a la superficie de los microtbulos e inhiben la disociacin de los dmeros de tubulina.

Se han aislado varias de ellas, en el tejido nervioso: MAP-1, MAP-2, tau (), dinamina, etc. Las prolongaciones de las neuronas han sido las estructuras en las cuales se han identificado estas MAPs. En los axones, los extremos + estn orientados lejos del cuerpo celular y en las dendritas estn en ambas direcciones. Los axones poseen protena tau y las dendritas poseen MAP-2.
(*) En libro de Karp se mencionan como PRM: protenas relacionadas con microtbulos.

Citoesqueleto

Con ayuda del ME se ha observado que poseen un dominio globular que se fija al microtbulo y otro dominio filamentosa que se extiende hacia fuera del microtbulo (ver figura pgina anterior). La actividad de las MAPs es controlada por adicin o eliminacin de grupos PO4 por proteincinasas. En el caso del sistema nervioso, la presencia de las MAPs contribuyen al desarrollo de las prolongaciones. De hecho, si se eliminan las tau se inhibe el desarrollo de los axones y, al contrario, adicin experimental de tau en fibroblastos, produce proyecciones similares a axones.
Molcula de cinesina que consta de 2 cadenas pesadas que se unen al microtbulo y dos cadenas livianas que se unen a la carga.

Protenas Motoras
Los microtbulos son responsables de una variedad de movimientos, como son: transporte de vesculas, separacin de cromosomas en mitosis, movimiento del cilio y flagelo Se han descrito dos familias de protenas que tienen carcter motor: cinesinas y dinenas.

Estas protenas se mueven en direcciones opuestas por la superficie del microtbulo. As, la cinesina (340 aminocidos; 360 kd) se mueve hacia el extremo ms (+) del microtbulo y la dinena (2000kd) hacia el extremo menos (). Si tomamos el caso del axn, las estructuras (vesculas) que transporte la cinesina desde el cuerpo neuronal hacia el extremo axonal se dice que se mueven en una direccin antergrada. Por el contrario, si el movimiento desde el extremo del axn hacia el cuerpo neuronal se dice que es retrgrado.

Molcula de dinena que consta de 2 cabezas globulares que se unen al microtbulo y un grupo de unidades pequeas que se unen a la carga.

Citoesqueleto

Ambas molculas motoras, en su extremo ms abultado, poseen un dominio que maneja ciclos de ATP, cuya energa determina el movimiento de las molculas. La cinesina se relaciona tambin con el movimiento de vesculas derivadas del RER, endosomas, lisosomas y grnulos secretorios. Esto se logra por la disposicin de los microtbulos: orientan sus extremos mas en direccin a la membrana plasmtica.

Cilio y flagelo
Las estructuras nombradas son proyecciones de la membrana plasmtica, conformadas por microtbulos responsables de movimientos en una variedad de clulas eucariticas. El siguientes cuadro destaca las diferencias entre cilio y flagelo.

Caracterstica
Vescula transportada por la cinesina

CILIO Corto Muchos Remiforme

FLAGELO Largo Pocos Ondulatorio

Dimensiones
Vescula transportada por la dinena

Nmero Movimiento

Analice los siguientes resultados experimentales: (a) Drogas que despolimerizan los microtbulos retraen el RE hacia el centro de la clula. Cuando la clula entra en mitosis, el aparato de Golgi se desintegra en pequeas vesculas.

Ambos comparten semejanzas en que estn limitados por membrana y poseen una estructura microtubular llamada axonema. El axonema consta de 9 microtbulos perifricos dobles, acompaados por sus protenas asociadas, y un par de microtbulos centrales. Esta disposicin suele llamarse 9 + 2. Cada doblete perifrico consta de un microtbulo completo con 13 profilamentos denominado tbulo A y uno incompleto con 10 protofilamentos denominado tbulo B, ms afuera que el anterior.

(b)

Citoesqueleto

Vaina central Membrana plasmtica

Microtbulos centrales

Espigas radiales

Subfibrilla B Subfibrilla A

Puente de nexina

dinena

Considero que con el esquema presentado arriba, se podr imaginar cmo es la estructura de un cilio. As que no es necesario dar mayores explicaciones. Adems aqu abajo podr observar una fotografa electrnica de cilios cortados transversalmente.

Lo ms importante en la estructura del cilio son las molculas de dinena, pues ellas manejan ciclos de ATP-ADP y con ello producen el movimiento del cilio. El modelo de produccin del movimiento se denomina deslizamiento, ya que un microtbulo se desliza con respecto al otro. Antes de explicar los detalles de este mecanismo del deslizamiento debemos indicar que una mutacin en la dinena determina inhibicin del movimiento del cilio. Tal es el caso de la enfermedad de Kartagener, en la cual los pacientes sufren alteraciones respiratorias por acumulacin de mucus en las vas respiratorias y si es varn puede manifestar esterilidad (espermatozoides no se mueven).

Citoesqueleto

El concepto del deslizamiento se refiere a que un microtbulo se desplaza de posicin con respecto al vecino. Recordemos que el microtbulo A o subfibrilla A (el ms interno del doblete) posee en su periferia molculas de dinena. El dominio ligero de la molcula est unido al microtbulo A de un doblete y el dominio globular se une al microtbulo B del doblete vecino. Recordemos que todos los microtbulos estn orientados con su extremo ms hacia la punta del ciclio y su extremo menos hacia la estructura que le da origen: el cuerpo basal. Recordemos tambin que la dinena se mueve hacia el extremo menos y que sus dominios globulares requieren de ATP para desplazarse por los monmeros de tubulina.. Entonces, si tenemos que el microtbulo A de un doblete posee las dinenas fijas en su superficie, el movimiento de los extremos globulares de las dinenas hacia el extremo menos, har que el microtbulo B del doblete vecino se doble. Como lo muestra la figura mostrada a la derecha, ambos dobletes se doblan. Si proyectamos esto a los nueve dobletes, todos unidos por uniones de nexinas, resultar que todo el cilio se mover en una direccin; llamaremos a este movimiento inicial como un latido.

Extremos

Dinena fija al microtbulo A

Doblez de los microtbulos

Los cilios y flagelos laten de 10-40 veces por segundo, de tal forma que los latidos deben tener una orientacin precisa y coordinada, para que en conjunto lleguen a producir el movimiento deseado. Adems del ATP, los cilios requieren de los iones Ca+2 y del AMPc. Ambos compuestos qumicos actan en la orientacin y velocidad de los latidos ciliares. El Paramecium es una ciliado unicelular que si avanza hacia delante y encuentra un obstculo con el cual choca, su membrana se despolariza abriendo los canales de calcio. El aumento del calcio intracelular hace invertir la direccin de los latidos y el unicelular retrocede. Cualquier sustancia qumica externa que abra los canales de K de la membrana provocar un aumento en los niveles de AMPc y aumentar la velocidad de los latidos.