Transporte a nuclesidos travs de membranas Estructura de y nucletidos

Qumica-fsica del transporte

Difusin: ley de Fick Bioenergtica Potencial de membrana: ecuacin de Nernst

Clasificacin y tipos de transporte

Distinciones bioenergticas y cinticas (mecanismos)

Difusin facilitada

Permeasas: Glut e intercambiador Cl-/HCO3 Canales inicos: estructura, funcin y regulacin

ATPasas de membrana: Bombas inicas

Estructura y clasificacin P-ATPasas: mecanismo, ejemplos y funciones V-ATPasas Transportadores ABC/Mdr1/CFTR

Mecanismos de transporte acoplado

Intercambiadores: mecanismo y bioenergtica Transporte transepitelial: trabajo conjunto

Transporte mediado por endocitosis

Clasificacin y tipos Potocitosis: transporte de folato Endocitosis mediada por receptor Transcitosis

smosis y fenmenos osmticos

Ley de van't Hoff Tonicidad de disoluciones: coeficiente de reflexin Equilibrio Gibbs-Donnan Regulacin del volumen celular

Enrique Castro, 2004

Enrique Castro, 2004

Permeabilidad de las membranas

Agua Gases

H2O O2, CO2, NO, CO, N2 urea etanol, glicerol c. Actico

polares pequeas sin carga

Hidrfobas c. grasos pequeas Esteroides

polares grandes sin carga iones

glucosa sacarosa

K+, Na+, Ca2+, Mg2+ Cl-, HCO3-, H2PO4aminocidos glucosa--6-P ATP, nucletidos

polares cargadas

Enrique Castro, 2004

Permeabilidad e Hidrofobicidad
K+ Na+ glucosa Cl+ trp urea indol H2O

Coeficiente de permeabilidad, cm/s

-12

-10

-8

-6

-4

-2

Log P

Coeficiente de permeabilidad, cm/h

Permeabilidad

Permeabilidad hidrofobicidad

Coeficiente de reparto aceite/agua

Hidrofobicidad
Enrique Castro, 2004

Difusin libre: leyes de Fick

Difusin: camino al azar (relaciones de Einstein) x =0 x = 2 Dt d = 2 Dt
Movimiento browniano
2

D= coeficiente de difusin
(depende del tamao)

L 2 cm2 [ D ]= = T s
En tres dimensiones

r = 6 Dt

2n

Flujo a travs de una frontera: 1 ley de Fick

1 2

c1

c2

dn 1 dc = J =D , dt A dx

[ J ]=

M mol = 2 2 L T cm s

Flujo proporcional al gradiente de concentracin Variacin temporal: 2 ley de Fick

dc dJ d c = = D 2 dt dx dx n c x , t = D t e 2
x2 4Dt 2

t=1

C
t=4 t=16
-2 -1 0 1 2 3

Distribucin gausiana

t=64
-3

X
Enrique Castro, 2004

Difusin a travs de membrana

cm dc m J = D = D dx = c im ci
s

c1m
=2

c im=cis ;

c m= c s c1S
=1
=0.5

D J = c s J = P c s
0

c2m

c2S

=0.2

P=

[ P ]= L TL 1 = cm s
2

Coeficiente de permeabilidad
Coeficiente de reparto Coeficiente de difusin (Mr) Espesor de la membrana

Enrique Castro, 2004

Energa libre y transporte

equilibrio
componente qumico
+

G = RTln [ Na ]

[ Na + ]destino
origen

componente elctrico

zF E m
E m= E destino E origen

R = 8.315 Jmol-1K-1 (1.987 calmol-1K-1) F = 96480 Cbmol-1 ( Jmol-1V-1 ) (23059 calmol-1V-1) 1 cal = 4.184 J

Enrique Castro, 2004

Difusin de iones: potencial de membrana

Membrana impermeable Em= 0 mV 0
-60 +60

Membrana permeable a Na+ Em= -59 mV

-60 0 +60

NaCl 15 mM

NaCl 150 mM

NaCl 15 mM

NaCl 150 mM

V= 0 Membrana permeable a Cl0 Em= +59 mV
-60 +60

Na+

V 0 constante Membrana permeable a Na+ y Cl0 -60 +60

PNa>PCl

NaCl 15 mM

NaCl 150 mM

NaCl 15 mM

NaCl 150 mM

Cl+

Na+ Cl+
V 0 transitorio

V 0 constante

Enrique Castro, 2004

Potencial de equilibrio
Inicio Em=0 Equilibrio Em=Eeq

G = RTln [ Na ]
+

[ Na + ]destino
origen

zFE m

En el equilibrio

G = 0 y E m = E eq
RT zF

E eq = -

ln [ Na ]
+

[ Na + ]destino
origen

Ecuacin de Nernst
R = 8.315 Jmol-1K-1 (1.987 calmol-1K-1) F = 96480 Cbmol-1 ( Jmol-1V-1 )

Walther Nernst 1864-1941 Premio Nobel 1920

Enrique Castro, 2004

Transporte a nuclesidos travs de membranas Estructura de y nucletidos

Qumica-fsica del transporte Difusin: ley de Fick Bioenergtica Potencial de membrana: ecuacin de Nernst

Clasificacin y tipos de transporte

Distinciones bioenergticas y cinticas

(mecanismos)

Difusin facilitada Permeasas: Glut e intercambiador Cl-/HCO3 Canales inicos: estructura, funcin y regulacin ATPasas de membrana: Bombas inicas Estructura y clasificacin P-ATPasas: mecanismo, ejemplos y funciones V-ATPasas Transportadores ABC/Mdr1/CFTR Mecanismos de transporte acoplado Intercambiadores: mecanismo y bioenergtica Transporte transepitelial: trabajo conjunto Transporte mediado por endocitosis Clasificacin y tipos Potocitosis: transporte de folato Endocitosis mediada por receptor Transcitosis smosis y fenmenos osmticos Ley de van't Hoff Tonicidad de disoluciones: coeficiente de reflexin Equilibrio Gibbs-Donnan Regulacin del volumen celular

Enrique Castro, 2004

Enrique Castro, 2004

Enrique Castro, 2004

Enrique Castro, 2004

Ionforos
transportadores

canales

Complejo valinomicina-K+

Valinomicina (K+)

Canal de gramicidina

nonactina

monensina (Na+)

gramicidina

Hlice 6.3 hueca dmero cabeza-cabeza

En solvente hidrfobo
Enrique Castro, 2004

En bicapa lipdica

Transporte a nuclesidos travs de membranas Estructura de y nucletidos

Qumica-fsica del transporte Difusin: ley de Fick Bioenergtica Potencial de membrana: ecuacin de Nernst Clasificacin y tipos de transporte Distinciones bioenergticas y cinticas (mecanismos)

Difusin facilitada

Permeasas: Glut e intercambiador Cl-/HCO3 Canales inicos: estructura, funcin y regulacin

ATPasas de membrana: Bombas inicas Estructura y clasificacin P-ATPasas: mecanismo, ejemplos y funciones V-ATPasas Transportadores ABC/Mdr1/CFTR Mecanismos de transporte acoplado Intercambiadores: mecanismo y bioenergtica Transporte transepitelial: trabajo conjunto Transporte mediado por endocitosis Clasificacin y tipos Potocitosis: transporte de folato Endocitosis mediada por receptor Transcitosis smosis y fenmenos osmticos Ley de van't Hoff Tonicidad de disoluciones: coeficiente de reflexin Equilibrio Gibbs-Donnan Regulacin del volumen celular

Enrique Castro, 2004

Enrique Castro, 2004

D. facilitada: Glucosa permeasas

Saturable Especfico

Enrique Castro, 2004

Estructura de transportadores Glut

Elementos funcionales

12 segmentos transmembrana 9 hlice anfipticas (polares no cargados) haz de hlices (sitio de unin)

Puentes de Hidrgeno

Hlice anfiptica

Haz de hlices (bolsillo de unin)

Enrique Castro, 2004

Intercambiador Cl-/HCO3- : banda 3/pAE1 del eritrocito

Capilares sistmicos
alta pCO2, baja pO2 (metabolismo tisular) hemoglobina

Anhidrasa carbnica

eritrocito Protena AE1

Capilares pulmonares
baja pCO2, alta pO2 (ventilacin)

Efecto Bohr

Anhidrasa carbnica

eritrocito

Enrique Castro, 2004

Canales inicos
Componentes funcionales
Bocas: externa e interna Fick Poro Boca externa Filtro selectivo Sensor Compuerta

Filtro

Saturable baja G alto n recambio (>107 ion/s)

poro Boca interna

Sensor compuerta

Topologa transmembrana
Bsico: 2TM/P Componentes adicionales

Activados por cNMP

Bucle P

sensibles a Em INa, IK, ICa

TM IK ir

Unin de nucletido

No sensibles a Em
Activados por ligando (R. Ionotrpicos)

IK (Ca) big
Enrique Castro, 2004

IK (rep)

Unin de ligando

Canales inicos: selectividad

Canal de K+: estructura del poro

Buen ajuste

mal ajuste

Bucle P
Filtro selectivo

Selectividad= compensar desolvatacin

extracelular

citosol

compuerta

Poro inico

Vista superior
Enrique Castro, 2004

Mecanismos de compuerta
Receptores ionotrpicos
fam. nAchR fam. iGluR fam. P2X

Canales dependientes de voltaje

Na+, Ca2+ K+ etc.

Canales dependientes de voltaje

Ca2+ K+ etc.

IK(M)

Canales dependientes de voltaje y Ca2+

IK(Ca)

Canales dep. cAMP Canales dep. cGMP Canales dep. ATP

(clula )
Enrique Castro, 2004

(olor, gusto) (vista)

Transporte a nuclesidos travs de membranas Estructura de y nucletidos

Qumica-fsica del transporte Difusin: ley de Fick Bioenergtica Potencial de membrana: ecuacin de Nernst

Clasificacin y tipos de transporte Distinciones bioenergticas y cinticas (mecanismos) Difusin facilitada Permeasas: Glut e intercambiador Cl-/HCO3 Canales inicos: estructura, funcin y regulacin

ATPasas de membrana: Bombas inicas

Estructura y clasificacin P-ATPasas: mecanismo, ejemplos y funciones V-ATPasas Transportadores ABC/Mdr1/CFTR

Mecanismos de transporte acoplado Intercambiadores: mecanismo y bioenergtica Transporte transepitelial: trabajo conjunto Transporte mediado por endocitosis Clasificacin y tipos Potocitosis: transporte de folato Endocitosis mediada por receptor Transcitosis smosis y fenmenos osmticos Ley de van't Hoff Tonicidad de disoluciones: coeficiente de reflexin Equilibrio Gibbs-Donnan Regulacin del volumen celular

Enrique Castro, 2004

Transporte activo primario: ATPasas de Membrana

ATPasas tipo P
Tetrmeros 2/2 Asp-P (vanadato) m. plasmtica y r. endoplsmico Na+, K+, H+, Ca2+ (y otros)

asp-P P-asp

ATPasas tipo V y F

Muy complejas 3 integrales 8 perifricas Exclusivamente H+ D. integral: canal de H+ D. perifrico: unin de ATP Intracelular ATP-sintasa mitocondrial Lisosomas vesculas sinpticas

F: mitocondria
ATP F1, V1
citosol matriz

Canal de H+ F0, V0

citosol

V: vesculas

ATPasas tipo "transportadores ABC"

4 dominios 2T+2A Estructura diversa (mono-, di-, tetramricas) Membrana plasmtica Iones y compuestos orgnicos

extracelular

citosol ATP ATP

Enrique Castro, 2004

Enrique Castro, 2004

Na+/K+-ATPasa de membrana
Estructura
Subunidad : esencial para plegamiento
3 N-glicosilada 1 TM 40 kD Tetrmero 2/2 Sitio de unin de ATP intracelular Asp-P

Subunidad : Centro activo

No glicosilada 10 TM 120 kD

citosol

Funcin

extracelula r

Transporte vectorial 3 Na+ / 2K+ / 1ATP Inhibida por vanadato Inhibida por cardiotnicos (ouabaina digoxina)

citosol aspP Pasp extracelular

Actividad biolgica

citosol

control del volumen celular control del pHi control de [Ca2+]i importacin de metabolitos (cotransporte) excitabilidad elctrica

Gradiente Na+/K+
25-30% consumo ATP >60% en cerebro

Enrique Castro, 2004

Mecanismo de la Na+/K+-ATPasa

Enrique Castro, 2004

Cardiotnicos

Enrique Castro, 2004

ATPasas "transportador ABC"

Estructura
4 dominios 2T+2A Estructura diversa (mono-, di-, tetramricas)

MDR CFTR 2T+2A fusionados 12 TM

Funcin

Membrana plasmtica Exportacin de mol. hidrfobas (MDR1) Canal de aniones (CFTR)

Destoxificacin interferencia antitutorales

Enrique Castro, 2004

Frmacos quimioterpicos y MDR

Enrique Castro, 2004

Estructura del CFTR

Enrique Castro, 2004

Transporte a nuclesidos travs de membranas Estructura de y nucletidos

Qumica-fsica del transporte Difusin: ley de Fick Bioenergtica Potencial de membrana: ecuacin de Nernst Clasificacin y tipos de transporte Distinciones bioenergticas y cinticas (mecanismos) Difusin facilitada Permeasas: Glut e intercambiador Cl-/HCO3 Canales inicos: estructura, funcin y regulacin ATPasas de membrana: Bombas inicas Estructura y clasificacin P-ATPasas: mecanismo, ejemplos y funciones V-ATPasas Transportadores ABC/Mdr1/CFTR

Mecanismos de transporte acoplado

Intercambiadores: mecanismo y bioenergtica Transporte transepitelial: trabajo conjunto

Transporte mediado por endocitosis Clasificacin y tipos Potocitosis: transporte de folato Endocitosis mediada por receptor Transcitosis smosis y fenmenos osmticos Ley de van't Hoff Tonicidad de disoluciones: coeficiente de reflexin Equilibrio Gibbs-Donnan Regulacin del volumen celular

Enrique Castro, 2004

Familias de transportadores
F. co-transportador Na+-glucosa
14 TM 1-2 Na+:1 sustrato Intestinal (SGLT1), renal (SGLT2)

Sitio de permeasa

F. co-transportador Na+/Cl- de neurotransmisores

12 TM cotransporte Cl- obligado (antiporte K+) 2 Na+:1 Cl-:1 sustrato+ GABA, monoaminas, Gly/Pro, NTT4
Cocaina, anfetas, tricclicos exterior

citosol

F. co-transportador de glutamato
8 TM antiporte K+ obligado 1Na+:1Glu-/1K+:HOExclusivamente Glu sinptico
exterior citosol

F. antiportador Na+/Ca2+
12 TM 3 Na+:1 Ca2+

exterior

citosol

F. transportador dependiente de H+
12 TM Antiporte 2 H+:1 sustrato+ Vesculas sinpticas y lisosomas
(neurotransmisores)
+

citosol

Reserpina, extasis(H )
Enrique Castro, 2004

Luz vescula

Transportadores de membrana y regulacin del pHi

glucosa

HOAntiportador Cl-/HOCl
glucosa
-

acidificacin

Antiportador Na+/H+
lactato

Na+

alcalinizacin Activado por H+ amilrido

H+ CO2 HCO3Na+ Cl
-

H+

DIDS, SITS

HCO3-

intercambiador Cl-/HCO3acidificacin inhibido por H+

Intercambiador Cl-/HCO3dependiente de Na+ HCO3acidificacin

activado por H+
velocidad relativa, %

Dependencia del pH de los transportadores de H+ y HCO3-

intercambiador Cl-/HCO3-

antiportador Na+/H*

intercambiador Na+ Cl-/HCO3pH intracelular

Enrique Castro, 2004

Transporte transepitelial de glucosa

luz intestinal
SGLT
(activo)

canal Cl(pasivo)

[Na+] alta (dieta, secretado) [glucosa] baja glucosa

2 Na+

Cl-

activo contra gradiente

citosol

2 Na+ glucosa canal K+ gluc

(pasivo)

Cl-

[Na+] baja (12 mM) [glucosa] alta [K+] alta (150 mM)

pasivo a favor de gradiente Glut2

ADP Pi ATP 3 K+

sangre

(permeasa)

[Na+] alta [glucosa] media (5.5 mM) [K+] baja (5 mM)

2 Na+ glucosa

3 K+

Cl-

Na+/K+-ATPasa (activo)
glucit+2Na+cit glusangre 2Na+sangre+3K+cit+ADP+Pi 3K+sangre 2Cl-cit 2Cl-sangre glusangre+2Na+sangre+2Cl-sangre+ ADP+Pi

gluluz+2Na+luz glucit 2Na+cit+3K+sangre+ATP 3K+cit 2Cl-luz 2Cl-cit gluluz+2Na+luz+2Cl-luz+ATP

Enrique Castro, 2004

Enrique Castro, 2004

Transporte a nuclesidos travs de membranas Estructura de y nucletidos

Qumica-fsica del transporte Difusin: ley de Fick Bioenergtica Potencial de membrana: ecuacin de Nernst Clasificacin y tipos de transporte Distinciones bioenergticas y cinticas (mecanismos) Difusin facilitada Permeasas: Glut e intercambiador Cl-/HCO3 Canales inicos: estructura, funcin y regulacin ATPasas de membrana: Bombas inicas Estructura y clasificacin P-ATPasas: mecanismo, ejemplos y funciones V-ATPasas Transportadores ABC/Mdr1/CFTR Mecanismos de transporte acoplado Intercambiadores: mecanismo y bioenergtica Transporte transepitelial: trabajo conjunto

Transporte mediado por endocitosis

Clasificacin y tipos Potocitosis: transporte de folato Endocitosis mediada por receptor Transcitosis

smosis y fenmenos osmticos Ley de van't Hoff Tonicidad de disoluciones: coeficiente de reflexin Equilibrio Gibbs-Donnan Regulacin del volumen celular

Enrique Castro, 2004

Enrique Castro, 2004

Potocitosis= endocitosis mediada por caveolina

Enrique Castro, 2004

Enrique Castro, 2004

Enrique Castro, 2004

Transporte a nuclesidos travs de membranas Estructura de y nucletidos

Qumica-fsica del transporte Difusin: ley de Fick Bioenergtica Potencial de membrana: ecuacin de Nernst Clasificacin y tipos de transporte Distinciones bioenergticas y cinticas (mecanismos) Difusin facilitada Permeasas: Glut e intercambiador Cl-/HCO3 Canales inicos: estructura, funcin y regulacin ATPasas de membrana: Bombas inicas Estructura y clasificacin P-ATPasas: mecanismo, ejemplos y funciones V-ATPasas Transportadores ABC/Mdr1/CFTR Mecanismos de transporte acoplado Intercambiadores: mecanismo y bioenergtica Transporte transepitelial: trabajo conjunto Transporte mediado por endocitosis Clasificacin y tipos Potocitosis: transporte de folato Endocitosis mediada por receptor Transcitosis

smosis y fenmenos osmticos

Ley de van't Hoff Tonicidad de disoluciones: coeficiente de reflexin Canales de agua: Acuaporinas Equilibrio Gibbs-Donnan Regulacin del volumen celular/presin osmtica

Enrique Castro, 2004

Las membranas biolgicas son muy permeables al agua

Enrique Castro, 2004

Enrique Castro, 2004

Enrique Castro, 2004

Acuaporinas: Estructura y funcin

Acuaporinas: canales de H2O
6TM (3+3 invertido) Tetrmeros Impermeable a iones y mol. pequeas invertido
A B C A' B' C' extracelular

Columna de H2O en poro

citosol

directo

Transporte 5108 s-1

CHIP 28 kDa

Acuaporinas: localizacin y funciones

localizacin funcin AQP-1 ubicua: rinn, pulmn, Reabsorcin de agua en tbulos ojo, plexos coroideos colectores; secrecin de fluido en humor
acuoso y lquido cefalorraquideo; homeostasis de agua en el pulmn

AQP-2 Rinn: Tbulo colector Reabsorcin de agua (diabetes inspida) AQP-3 Rinn: Tbulo colector Retencin de agua AQP-4 cerebro: vellosidades Reabsorcin de lquido cefalorraquideo en SNC. Regulacin del edema cerebral aracnoideas AQP-5 glndulas salivares, lacrimales y epitelio alveolar
Enrique Castro, 2004

secrecin de fluido

Enrique Castro, 2004

Enrique Castro, 2004