Revista Argentina de Endocrinologa y Metabolismo Copyright 2004 por la Sociedad Argentina de Endocrinologa y Metabolismo

Vol 41 No. 2

REVISIN

Disruptores Endocrinos. Efectos en la Reproduccin.

Endocrine Disrupting Chemicals. Effects in the Reproduction.
Parte 2
Chichizola, C.

Mecanismo de Accin de los Disruptores Hormonales.

Un qumico disruptor endocrino puede afectar al sistema endocrino de un organismo por varias vas. stas focalizan particularmente los disruptores sexuales.

1. Unin y Activacin de Receptores Estr gnicos o

(actan como estrgenos). Por imitacin del 17 estradiol. Existe una cantidad de receptores estrognicos en una amplia variedad de tejidos. Muchos qumicos que pueden unirse y activar el receptor estrognico presentan efectos aditivos y producen una accin ms prolongada 84. Qumicos como el butilbencilftalato y el di-n-butilftalato demostraron que suman sus efectos a algn estrgeno natural presente 85. Adems del efecto aditivo, estos productos podran tener una accin sinrgica. No es comn que ocurra que dos qumicos acten a travs de un receptor, un trabajo que demostraba sto luego fue retirado 86. De cualquier manera, se sabe que el sinergismo ocurre en reas de la toxicologa cuando dos qumicos trabajan en distintos mecanismos, por ejemplo: en los fumadores de tabaco se acenta la toxicidad de muchos qumicos.

4. Modificando el Metabolismo Hormonal. Algunos qumicos como el Lindano y la Atrazina pueden efectuar el camino metablico del estradiol, produciendo ms metabolitos estrognicos. Otros qumicos activan enzimas, las cuales aceleran el metabolismo de las hormonas, por lo tanto, afectan su estado natural. Los testculos contienen enzimas especficas para metabolizar estrgenos. Estas enzimas metabolizan rpidamente al estrgeno a una forma impedida de unirse a su receptor espcfico. Si esta enzima est afectada por un xenoestrgeno, este metabolismo se reducira, incrementando la exposicin de los testculos al estrgeno. sto podra ser particularmente relevante durante el desarrollo fetal, cuando hay altos niveles de estrgenos 87. 5. Modificando el nmero de receptores hormo nales en la clula. El nmero de receptores hormonales en las clulas es un mecanismo de control complejo. Un qumico podra reducir o incrementar el nmero de receptores y, por lo tanto, afectar el estado de respuesta a las hormonas naturales o artificiales. 6. Modificando la produccin de hormonas naturales. Los qumicos pueden afectar la produccin normal de hormonas por interferir en otros sistemas como el tiroideo, inmune o nervioso. 7. Por inhibicin selectiva de la transcripcin del DNA. Se ha demostrado que el metal Arsnico produce una disrupcin en la transcripcin del DNA inducida por los glucocorticoides mediados por su receptor (GR).

2. Unin pero no Activacin del Receptor Estr ognico (actan como antiestrgenos). 3. Unin a otros Receptores. Como los receptores de andrgenos para hormonas masculinas. Esta unin puede activar o inactivar el receptor. Esto pasa con los antiandrgenos como el DDT y sus metabolitos.

Carlos Chichizola. Bioqumico. Dir. Alkemy-Center Lab. Santa Fe. E-mail: cchichizola@alkemyweb.com Palabras clave: Mimticos Estrognicos, Qumicos Ambientales, Receptores Estrognicos, Contaminantes Orgnicos Persistentes, Seales ambientales. Key words: Hormonal Mimics, Environmental Chemicals, Estrogen Receptors, Persistent Organic Pollutants, Environmental Signals. Recibido: 02-02-03 Aprobado: 29-04-04

CHICHIZOLA, C.

79

Mecanismo de Accin de Algunos de los Qumicos Ambientales.

En reportes recientes se demuestra que algunos qumicos sintticos que contaminan el ambiente, pueden activar el receptor retinoide, ejerciendo una accin simil a los mismos convirtindose en retinoides ambientales 88. Tambin, ha sido sugerido que los PCBs, pudieran unirse a receptores tiroideos. Se estn realizando trabajos en este sentido para demostrar esta posibilidad 89, pero todava no ha sido demostrado. Zoeller y col. 90 recientemente report que algunos PCBs activan, claramente, el sistema de hormonas tiroideas sin una demostracin directa de la unin al receptor de la hormana tiroidea. Otros estudios tambin demostraron unin de agentes ambientales a la protena transportadora de T4, pero no al receptor de la hormona tiroidea 91,92. Todava no ha sido demostrado que los qumicos ambientales sintticos actan como andrgenos, pero un gran nmero de plaguicidas han sido recono cidos recientemente, como antagonistas andrognicos, por ejemplo los metabolitos del diclorodifeniltricloroetano (DDT) y algunos insecticidas 93,94. Howell y col. 95,96 describi msculinizacin del pescado mosquito hembra, Gambusia affinis hol brooki, el cual fue capturado ro abajo de una papelera en Cantonment, Escambia Country, Florida. Las hembras exhibieron caractersticas sexuales secundarias masculinas tales como un rgano sexual masculino y comportamiento sexual masculino. Los au-

Fig. 10

tores remarcaron que esta especie era sensible a los efectos de masculinizacin de andrgenos y propusieron que un material andrognico se produca en el efluente. En estudios posteriores 103 el grupo determin que el agente de masculinizacin era un andrgeno pero de una fuente muy inusual. Se encontr un esterol en una planta, el stigmasterol, y se determin que el Micobacterium smegmatis, el cual produce andrgenos como producto metablico habra formado varias colonias en la ruta del efluente. Estas bacterias utilizan el colesterol de la planta (stigmasterol) como fuente de carbono y lo metabolizan a un potente andrgeno, la androstenediona. Fig. 10 ltimamente se ha visto que concentraciones no txicas de arsnico pueden funcionar como un factor de modulacin del receptor glucocorticoideo (GR), por la inhibicin selectiva de la transcripcin del GR mediada a travs de la funcin nuclear alterada 97. Kaltreider 97 demostr que muy bajos niveles de Arsnico (equivalentes a 10 ppb) inhiben selectivamente la accin glucocorticoidea mediada por el GR. Los niveles capaces de producir disrupcin endocrina son mucho ms bajos que aquellos necesarios para causar toxicidad celular, especulando que estas bajas concentraciones pudieran, en exposiciones crnicas, estar involucradas en numerosas enfermedades, incluyendo cncer y diabetes. La EPA en enero de 2001 redujo el estndar de exposicin del Arsenico de 100 ppb a 10 ppb, sin embargo en base a la hiptesis de Kaltreider esta concentracin pudiera todava ser inadecuada. El mecanismo propuesto por Kaltreider es que la disrupcin del Arsnico en el mecanismo de accin de los glucocorticoides se producira despus que el complejo receptor hormona penetra al ncleo involucrando una inhibicin selectiva de la transcripcin del DNA que normalmente habra sido estimulada por el complejo glucocorticoide - GR. El mecanismo detallado no es bien conocido todava. Estudios previos demostraron que el arsenito, cadmio y el selenito interactan con las cistenas del dominio de unin del ligando de GR, por este mecanismo inhibe la unin de la dexametasona al GR 98.

80

DISRUPTORES ENDOCRINOS

RAEM 2004 Vol 41 No. 2

El Cadmio se demostr recientemente que activa receptores estrognicos alfa (ER) por interaccionar con el dominio de unin del ligando al receptor 99. Estos resultados revelan que el "metal pesado cadmio" es un nuevo estrgeno medioambiental. Tambin ha sido demostrado en lneas celulares obtenidas de cncer de mama que este metal promueve la proliferacin y la regulacin celular de la expresin del gen del ER 100.

en la organela celular activa que puede utilizar la capacidad de donar electrones del estrgeno catecol.

Las Mezclas Qumicas Activan Receptores Mltiples.

La activacion de la transcripcion de genes por las mezclas de los xenobiticos puede involucrar receptores y vas de seales mltiples. Se ha hecho una hiptesis sobre el rol de los receptores mltiples en la disrupcin endocrina, resultando en la induccin de varios enzimas de fase I y II que catalizan el metabolismo de los xenobiticos y de las hormonas endgenas 109. La respuesta inducida por los xenobiticos se relacion con el 3 metilcolantrene (3-MC), el fenobarbital (PB) o la mezcla de ambos 110 porque varios compuestos y mezclas tienen patrones de expresin de genes similares a los inducidos por los PAHs, el 3MC el PB o a la mezcla de estos dos ltimos. El marco de respuesta del tipo PB es la induccin de P450s de la subfamilia CYP2B mientras que la respuesta de tipo 3-MC es por induccin de P450s de la subfamilia CYP1A. Adems del 3-MC y el PB, el esteroide pregnenolona 16a carbonitrilo (PCN) es un conocido inductor de la expresin de los genes que codifican P450s de las subfamilias CYP3A y el CYP2B. Tambin un nmero de sustancias qumicas parecen mimetizar al PCN en la induccin de la transcripcin de los genes mencionados. Un ejemplo lo constituye el Aroclor de PCBs, un complejo de mezclas de varios congeneres di-orto, mono-orto y no-orto sustituidos con diferentes grados de sustitucin de cloros, actuando a nivel celular por la activacin de receptores mltiples. Los Arocloros provocan las respuestas de tipo 3MC, PB y PCN en roedores 111,112 y el PCB expuesto a humanos parece mostrar un patrn similar a la induccin de la enzima 113. Est bien establecido que la induccin enzimtica por el tipo 3-MC es similar a la producida por las dioxinas, furanos, PAHs y no-orto PCBs, cuyo mecanismo de accin resulta mediado por los AhR (receptores de hidrocarburos aromticos). El AhR y su patrn heterodimrico, el AhR traslocador nuclear (ARNT) y ARNT2 114,115 son miembros de la familia

Receptores Estrognicos en Vertebrados.

El sistema de reconocimiento de la seal ligando est ampliamente distribuido filogenticamente. En mamferos, pjaros y peces se identificaron subtipos del ER y receptores estrgenicos beta (ER). Recientemente una tercera forma, el receptor estrgenico gamma (ER) se clon de un pez cartilaginoso, el atlantic croake, Micropogonias undulates 101. Anlisis filogenticos sugieren que ER evolucion a travs de la duplicacin del gen del linaje ER temprano en estos peces Los tres subtipos de ER unen al 17 -Estradiol con alta afinidad, sugiriendo que la seal de estrgenos puede ser amplificada en cadena a travs de los mismos. Queda por demostrar que el ER existe en otras especies de vertebrados. Sin embargo, en un estudio usando ratones con Knock out (ERKO) del receptor ER se demostr que los catecol estrgenos y el metoxicloro, pero no el 17 -E2, estimulaban la proliferacin celular uterina y la induccin de lactotransferrina en el ER de ratn, sugiriendo la posibilidad de un tercera forma o gamma () de ER 102. Se sabe que las membranas de las clulas endoteliales contienen el ER acoplado a la xido ntrico sintetasa como un modulador de la seal estrognica 103,104. Los ER tambin se encuentran en la perimembrana de clulas neuronales 105 sugiriendo que podra ocurrir una seal estrognica rpida no genmica. La actividad de los receptores de membrana para estrgenos y dopamina pudieran activarse por estrgenos ambientales como un mecanismo de disrupcin hormonal de los mismos 106. Chen y Yager 107,108 recientemente localizaron ER y en las mitocondrias de clulas tratadas con estradiol. Esto provee todava otra rea de control para seales estrognicas y localiza un mdulo de respuesta

CHICHIZOLA, C.

81

Per-ARNT-SIM(PAS) de factores de transcripcin helix-loop-helix bsicos, los cuales tambin incluyen un factor inducible de hipoxia, la 1 (HIF-1). En contraste, diferentes estudios han mostrado que las respuestas a los tipos PB y el PCN son mediados por miembros de una familia de receptores nucleares de factores de transcripcin que incluyen los receptores de la hormona esteroide y tiroidea. Estudios recientes mostraron evidencia que dos receptores hurfanos de la familia de receptores nucleares, el receptor androstane constitutivo (CAR) y el receptor pregnano X (PXR), median la respuesta de tipo PB y PCN 116,117.

Receptores CAR y PXR como Mediadores de la Respuesta tipo PB y PCN.

Los cambios en la expresin de genes en la respuesta a la exposicin de varios xenoqumicos no planares, incluyendo o-PCBs y varios pesticidas fueron similares a aquellos provocados por PB y PCN. Debido a que las mezclas pueden contener mltiples agonistas y antagonistas de muchos receptores y que los genes que son inducidos por PB y PCN se superponen (ambos qumicos inducen P450s de las subfamilias CYP2B y CYP3A) los factores que controlan esta transcripcin han sido desconocidos hasta hace poco tiempo. La identificacin de los elementos de respuesta PB en las regiones 5 de los genes CYP2B 118 y subsecuente identificacin del CAR como el receptor que es activado por la exposicin al PB fue un gran avance 119-121. Similarmente los elementos genticos responsables de la unin de PXR se han identificado 122. Ambos PXR y CAR forman heterodmeros con el receptor X retinoide (RXR) para activar la transcripcin del gen y estudios recientes indican que los dos receptores pueden unir el mismo elemento de DNA 123 lo cual explica la habilidad de PB para causar alguna induccin de CYP3A y PCN para inducir CYP2B. Aunque el efecto de varios xenoqumicos sobre PXR y CAR estn bajo investigacin, se sabe que el orto PCBs activan el PXR del ratn 124 y el CAR del humano 125. La identificacin y caracterizacin de RXR, PXR y

CAR de roedores y humanos y los estudios de su interaccin con los elementos regulatorios de un nmero de genes han indicado que la afinidad y especificidad del ligando no puede ser comparado a otras especies 126. La interaccin de agonistas y antagonistas con el receptor humano pueden ser evaluados. La tcnicas moleculares y celulares desarrolladas recientemente y los sistemas de anlisis que usan genes reporteros permitieron determinar la afinidad y eficacia de unin de agonistas y antagonistas de estos receptores in vitro. Los PB y PCN codifican las enzimas que metabolizan xenobiticos de la famila P450s y glucuronosil-transferasas. Esta accin est mediada a travs de los CAR y PXR. Se pens que la expresin de un nmero significante de otros genes est regulado por la accin de CAR y PXR 127 y que la regulacin de CAR y PXR no est limitada al hgado y se observ en tejido extraheptico incluyendo cerebro 128.

Las Mezclas Qumicas y los Efectos Mediados por los Receptores AhR.
Muchas mezclas ambientales contienen numerosos agonistas de AhR (receptores de hidrocarburos aromticos), principalmente PAHs, PCDDs, PCDF (policlorados dibenzodioxinas y dibenzofuranos) y PCBs. La exposicin a los agonistas de AhR puede ser el resultado de quemar a fuego abierto sustancias orgnicas 129 y tambin producido por el humo del tabaco. Aunque los compuestos individuales y las mezclas provocan una variedad de acciones debido a sus propiedades agonistas /antagonistas, la persistencia de la respuesta depender del grado de metabolizacin del ligando y del mecanismo de transcripcin del gen mediado por el AhR. Al unirse el ARNT a su receptor AhR se libera del mismo la protena 90-kDa HSP activndolo y permitiendo que el complejo AhR-ARNT entre al ncleo, donde en las regiones regulatorias 5 del ADN se produce la induccin de muchos genes codificando las enzimas de la fase I y II. Las enzimas de la batera de genes de Ah cuya expresin est directamente regulado por el AhR incluye los P450s, CYP1A1 y CYP1B1, UDP-glucuronosiltransferasa 1A6, glutation S-transferasa Ya, NAD(P)H:

82

DISRUPTORES ENDOCRINOS

RAEM 2004 Vol 41 No. 2

quinona reductasa 1 (NQ01) y aldehido dehidrogenasa clase 3. Los eventos moleculares que llevan a la activacin transcripcional del gen CYP1A1 regulado por el AhR han sido bien caracterizados 130,131. Recientes estudios se enfocaron sobre las funciones detalladas de los dominios especficos del AhR 132, funciones del AhR dentro de la cromatina 133, interacciones de AhR con otra protena para aumentar 134-138 o inhibir su funcin 139 y la regulacin de la respuesta de AhR por degradacin de AhR mediada por proteosomas 140,141. La identificacin y caracterizacin reciente del gen que codifica al receptor AhR 142 representa otro nivel de regulacin en el control complejo de las respuestas mediados por el mismo. Resultados recientes sustentan la hiptesis que el AhR es un receptor para algunos hormonas endgenas no identificadas o factores autocrinos 143-145 y continan los esfuerzos para identificar los ligandos AhR endgenos. Aunque un nmero de compuestos endgenos mostraron que activan el AhR , los activadores ms comunes parecen ser los derivados de los ndoles 146. De las enfermedades que involucran al AhR y los genes regulados por AhR el cncer de pulmn inducido por PAHs es una de los que ms se conoce a nivel molecular 147.

Respuesta a la Exposicin a las Mezclas Qumicas.

Las hormonas esteroideas tienen poca solubilidad en el plasma, son transportadas por protenas con un dominio especfico de unin. La molcula libre y no la unida a protenas es la que se une a la clula blanco a travs de su receptor. Los receptores para estas hormonas se encuentran en el ncleo o particionados entre el ncleo y el citoplasma. El receptor se encuentra en la clula como un heterodmero unido a una protena de 90 kDa (heatshock protein) que impide que el receptor se active y se una al DNA. Esta protena se libera del receptor en presencia de la hormona esteroidea. El receptor activado se une al DNA en un sitio especfico iniciando la transcripcin de genes y eventualmente resultando en una respuesta biolgica especfica (por ej. proliferacin celular y reestructuracin del tejido). La regulacin del sistema hormonal esteroideo

ocurre a traves de un mecanismo feed-back que involucra tanto a la produccin de la hormona como a su receptor en los tejidos blanco. Tericamente los qumicos ambientales pueden actuar en algunos de los pasos descriptos. Las ltimas investigaciones demuestran que agentes hormonalmente activos o xenoestrgenos y xenoantiestrgenos actan a travs de su unin al receptor de estrgeno (ER). Una mezcla qumica puede contener un nmero de xenoestrgenos que actan agonsticamente sobre el receptor estrognico, aumentando la respuesta del estrgeno endgeno o puede contener un nmero de xenoantiestrgenos que antagonizan la unin al ER inhibiendo la accin normal del estrgeno endgeno. Algunos compuestos estrognicos pueden alterar la respuesta no por unin al ER pero s por unin a la protena de transporte lo que resulta en ms estrgeno endgeno libre. Una mezcla conteniendo xenoestrgenos/xenoantiestrgenos puede no tener respuesta biolgica en el organismo. En numerosos qumicos ambientales no puede demostrarse in vitro actividad estrognica o antiestrognica, sin embargo in vivo pueden ser activados por uno de los citocromos P450 (P450 o CYP). Los P450s son el fuerte del sistema de detoxificacin y como tal estn involucrados en el metabolismo de la mayora de los xenobiticos como el de las hormonas esteroideas. Las mezclas qumicas ambientales pueden contener compuestos qumicos que inducen y/o son metabolizados por P450s. La induccin de CYP1A1 y/o CYP1B1 ocurre cuando xenobiticos tal es como TCDD o PAHs se unen al AhR y dan como resultado una actividad antiestrgeno a travs del incremento del metabolismo y deplecin del estrgeno endgeno 148. Por otro lado compuestos que son metabolizados por P450s pueden tener un efecto neto estrognico. Un modelo de investigacin sobre cncer de mama 149,150 incluye la actividad hormonal y carcinognica de los estrgenos endgenos y considera las poblaciones de alto riesgo genticamente e incluye el rol de las mezclas qumicas en el desarrollo de cncer de mama. En el primer paso de este modelo, un qumico ambiental o estrgeno se convierte en el tejido ma-

CHICHIZOLA, C.

83

mario en un agente genotxico (PAH activado o catecol-estrgeno derivado a quinona, respectivamente). En el segundo paso el agente genotxico derivado del qumico ambiental induce mayor concentracin enzimtica que puede resultar en un nivel ms alto de toxicidad en las subpoblaciones. En el tercer paso el estradiol incrementa la proliferacin de clulas ER-positivas. Adems, en presencia de estradiol si ambas clulas ER-positivas y ER-negativas se transformaron en malignas, las ERpositivas sern seleccionadas debido a que las ERnegativas crecern ms lentamente, dando tiempo al DNA para la reparacin o apoptosis. Este modelo explica por qu ms del 60% de todos los tumores de mama son ER-positivos cuando menos del 20% de las clulas epiteliales de mama son ER-positivas. Aunque numerosos productos qumicos, inducen cncer mamario en animales de laboratorio, no se identificaron carcingenos qumicos en la mama humana como tal. Aunque pesticidas, PCBs, o PCB hidroxilados, en forma individual son estrognicos in vitro o in vivo, esta actividad estrognica es aparente solamente a altas concentraciones (micromolar) 151-156. Ha sido sugerido por Sarkar 157 el efecto del etanol en la produccin de radicales libres. Sin embargo, se necesitan ms estudios para aclarar si el dao inducido por el etanol en el DNA es mediado por la formacin de radicales libres. Datos recientes sugieren que el consumo de alcohol puede aumentar la bioactivacin del acetaldehdo mutgeno/carcingeno y/o radicales libres. Castro 158 demostr que la incubacin de un citosol preparado de tejido de mama de rata con xantina oxidoreductasa como cosustrato (nicotinamida adenina dinucletido, hipoxantina, xantina, cafena, teobromina o 1,7 dimetilxantina) aumenta significativamente la biotransformacin de etanol a acetaldehdo. Estos datos sugieren que la bioactivacin in situ de etanol a un carcingeno como el acetaldehdo y potencialmente a radicales libres puede estar involucrado en el cncer de mama inducido por alcohol. El consumo de alimentos que proveen cosustratos como xantina oxidoreductasa, como bebidas con cafena y alimentos ricos en purinas puede aumentar la biotransformacin de etanol a acetaldehdo. Los PAHs un grupo de contaminantes ambientales a accin mutagnica y carcinognica activan pri-

mariamente el P450s y el epxido hidroxilasa. Al reaccionar PAH con el diolepxido se une al DNA y forma un ducto PAH-DNA. Ha sido comunicado alta cantidad de estos ductos en tejidos mamario de pacientes con cncer de mama comparados con controles 159. Ha sido sugerido que por unin a los ERs, los PAHs pueden acumularse en el ncleo de la clula, resultando en un incremento de la mutagnesis 160164. Aunque esta hiptesis no est adecuadamente testeada, sin embargo en presencia de altas dosis de estrgenos se inhibe el desarrollo y /o crecimineto de tumores mamarios inducidos por PAHs mutagnicos, 3-metilcolantreno o 7,12-dimetilbenzo(a)antraceno 164,166. Presumiblemente los estrgenos y antiestrgenos ocupan los ER previniendo la unin de los PAHs a stos, inhibiendo la mutagnesis. Los humanos estn continuamente expuestos y tienen niveles detectables de PAHs, por lo cual hacen a estos compuestos potenciales agentes genotxicos importantes en la iniciacin del cncer de mama, particularmente en estadios hipoestrognicos. Resultados de muchos estudios indican que muchos qumicos ambientales incluyendo pesticidas, PCBs, PAHs, Ftalatos, fitoestrgenos y otros son estrognicos in vitro. De cualquier manera la potencia de estos compuestos es muy baja comparada con estrgenos endgenos (10000 a 200000 veces ms bajas) y no est claro si los humanos ante una mezcla qumica ambiental reciben un efecto estrognico neto. Rubin 167 report que la exposicin perinatal a bajas dosis de bifenol A en agua de consumo afecta el peso del cuerpo, el ciclo menstrual y los niveles de LH en plasma en ratas adultas y que dosis ms bajas tuvieron un efecto ms grande que altas dosis. Las concentraciones usadas fueron ms bajas que las utilizadas para una respuesta uterotrfica en hembras ovarectomizadas indicando una susceptibilidad nica en el desarrollo del organismo. En general, en humanos, estos compuestos circulan en sanre perifrica y se encuentran en los tejidos en concentraciones nanomolar. Se necesitaran concentraciones del orden micromolar para que ejercieran su accin. No est claro si la actividad estrognica de estos compuestos son aditivos en tejido humano, si as fuera la actividad total de una mezcla de rganoclorados individuales estrognicos en

84

DISRUPTORES ENDOCRINOS

RAEM 2004 Vol 41 No. 2

bajas dosis pudieran producir efectos txicos. Adems el hecho de que alguno de estos xenobiticos son persistentes pueden tener efectos por acumulacin a pesar de su baja potencia y concentracin 168. Rajapakse 169 us un gen reportero de levadura para bifenol A y o,p-DDT para investigar la accin combinada de qumicos estrognicos dbiles con estradiol. Ellos encontraron que a concentraciones efectivas corresponientes a grados de mezclas molares entre 1:20000 y 1:100000 (E2:BPA o E2:o,pDDT), se puso de manifiesto una modulacin sustancial de los efectos de estradiol. Estos datos sugieren que mezclas de compuestos estrognicos dbiles como los xenoestrgenos pueden inducir un efecto estrognico an cuando los niveles de estradiol son muy bajos, condicin que ocurre en los nios. Rajapakse concluye que las implicaciones potenciales en salud de los efectos aditivos por combinacin entre xenoestrgenos y estrgenos merece una seria consideracin. Para que una mezcla qumica estrognica dbil resulte con actividad estrognica no slo depende de la concentracin total sino tambien de la concentracin individual de cada qumico. Hany 170 report que una mezcla de PCBs preparado para reflejar los congneres de PCB y su concentracin rutinariamente detectadas en leche de mama humana fueron estrognicos. Ratas hembras lactantes cuyas madres recibieron la mezcla de PCBs incrementaron el peso uterino a las 21 das. Otras mezclas de PCBs testeados en concentraciones similares no fueron estrognicos. Du 171 determin la proliferacin celular en cultivos de clulas MCF-7 tratados con estradiol y mezclas de PCB3 y PCB5, de origen chino los cuales son similares en composicin de los congneres a los Arocloros de US 1242 y 1254 respectivamente Los PCB3 y PCB5 fueron tan potentes como el estradiol produciendo 100% del efecto proliferativo del estradiol a concentraciones de 0.03 y 0.6 nM. A 30 nM, el tratamiento con PCB3 todava resulta en un 86% de efecto proliferativo donde el PCB5 no mostr efecto. Du sugiere que PCB5 puede ser txico a 30nM. Estos resultados son alarmantes porque todos los reportes previos han sugerido que los congneres de PCBs individuales y sus mezclas son estrognicas en el rango micromolar y no muestran efecto a niveles nanomolar y picomolar.

La razn de esta discrepancia es desconocida pero puede ser que PCB3 y PCB5 contuvieran un contaminante estrognico ms potente que otros congneres de PCB. La mayora de las mezclas a las cuales los humanos estn expuestos contienen una variedad de compuestos con efectos estrognicos o antiestrognicos. La mayora de los anlisis miden la actividad estrognica de un compuesto sobre la base de la unin al ER y la activacin de la transcripcin. Recordemos que un agente qumico puede producir una respuesta estrognica in vivo por otro mecanismo (ej. alteracin de los niveles de ER, alteracin del metabolismo estrognico endgeno). Por lo tanto, es posible que mezclas qumicas pueden ser mas estrognicas/antiestrognicas in vivo que los anlisis predictivos in vitro. Otro indicio que los compuestos ambientales de mezclas pueden ser antiestrognicos es el hallazgo de un estudio de toxicidad crnica comprensivo de cuatro mezclas de PCB comerciales (Arocloros 1016, 1242, 1254 y 1260) en los cuales las ratas recibieron una de las mezclas por 24 meses. Las hembras que se alimentaron con las mezclas con el ms alto contenido de cloro (aroclor 1260) tuvieron una significativa disminucin de la incidencia de neoplasmas mamarios comparadas con el grupo control 172.

Contaminantes Ambientales y su Efecto en la Reproduccin. La Contribucin Ambiental en las Enfermedades Humanas.

Podemos dividir a las enfermedades relacionadas al medio ambiente en dos categoras: 1) Las que por efecto de los agentes ambientales causan alteraciones de los mecanismos fisiolgicos, y 2) las que causan dao celular directo.

1) Enfermedades Causadas por Alteracin de los Mecanismos Fisiolgicos. Los agentes ambientales actan alterando la bioqumica y la fisiologa del organismo. Si estas acciones ocurren durante el desarrollo pueden alterar la estructura fsica, la inteligencia, el comportamiento, la reproduccin y sensibilizar la susceptibilidad a otras enfermedades. Con posterioridad pueden alte-

CHICHIZOLA, C.

85

rar las funciones sexuales y mentales. Podemos describir dos categoras de enfermedades para ilustrar este punto.

a- Anormalidades del Comportamiento. Ha sido sugerido que la dopamina central pudiera estar involucrada en algunas alteraciones del comportamiento como la depresin. Bemis y Seegal 173 comunicaron evidencias que la interaccin sinrgica entre el metilmercurio y los PCBs produce reduccin del contenido del neurotransmisor dopamina cerebral. b- Disrupcin Hormonal Sexual Estos efectos durante el desarrollo son de particular significancia porque ellos son, a menudo, irreversibles y los pacientes deben vivir con funcin sexual y reproductiva alterada por el resto de su vida. En los adultos hay evidencia de la influencia de los disruptores endocrinos sobre la incidencia de cncer de los rganos reproductivos y sobre las enfermedades como la endometriosis, fibroides, hiperplasia prosttica y recuentos de esperma reducidos. Un estudio que demuestra los efectos de los contaminantes especficos es el de Yucheng en Taiwan, sobre exposicin a PCBs, dioxinas y furanos de aceites de coccin contaminados. Varones nacidos de madres contaminadas mostraron disminucin del tamao del pene pero no efecto sobre el tamao testicular o estados de desarrollo de Tanner 174. Blank y col. 175 mostraron que nias expuestas en tero a PBBs. (bifenilos polibromados) alcanzaron la pubertad antes que las no expuestas. Los hallazgos tienen alguna consistencia, indicando un aumento en la incidencia de endometriosis en mujeres expuestas a los PCBs y/o dioxinas 176,177, lo cual es consistente con estudios en mama 178. En un estudio de 29 pacientes y 14 controles se encontraron cantidades ms altas de tetra y pentaclorados bifenilos, DDE, DDT y Lindano (g-hexaclorociclohexano) en hombres con problemas de infertilidad que en controles 179. Los niveles de los congneres de PCBs (2,2`,4,4`,5,5`, hexaclorobifenil; 2,2`,3,4,4`,5 hexaclorobifenil y 2,3`,4,4`,5 pentaclorobifenil) fue correlacionado inversamente con el ndice de la motilidad espermtica en muestras con un conteo menor que 20 mill. de espermatozoides/mL 180. En contraste, en una investigacin clnica de 38 trabajadores que reparaban transformadores y 56 trabajadores controles que tenan en suero niveles

de PCBs de 12 ppb y 6 ppb respectivamente, no se comunicaron diferencias en el conteo espermtico 181. El plomo tambin funciona com disruptor endocrino causando disminucin espermtica, disminucin del volumen del semen y cambios en la motilidad y morfologa 182. Otro estudio lo asocia con aumento de infertilidad 183. Lancranjan y col. 184 clasifican 150 hombres expuestos ocupacionalmente al plomo, la motilidad espermtica disminuye y la morfologa anormal aumenta con el incremento de la exposicin. Otro estudio de 149 trabajadores industriales masculinos que presentaban buena salud 185 reportaron una correlacion entre el nivel del plomo en sangre y los parmetros reproductivos, que incluyen una disminucin en la densidad espermtica, cuentas totales y motilidad espermtica.

2) Enfermedades Causadas por Alteracin de los Mecanismos Moleculares y Celulares. a- Cncer El cncer en general resulta de la interaccin entre la exposicin ambiental y la gentica. Los factores genticos no son ms del 5% de los cnceres 186. Sabemos que hay individuos susceptibles a ciertas enfermedades y que los factores ambientales provocan cambios en la susceptibilidad. Los estrgenos endgenos no slo actan como hormonas, tambin se ha comprobado que son carcingenos 187,188. Inducen carcinognesis por mltiples mecanismos como modificando covalentemente el receptor estrognico 189,190, induccin de anormalidades cromosmicas 191,192, mecanismo epigenotxico 193, conversin de 17 estradiol a catecol estrgenos y redox activa , y formando aductos de estrgenos quinonas 187,194 y con el subsiguiente dao del DNA posiblemengte mediado por los radicales libres 195,196. Disruptores Endocrinos. Efectos sobre el Embrin y el Desar rollo Prenatal
An pequeas dosis de hormonas en el comien zo del desarrollo sexual del embrin pueden causar anormalidades en el comportamiento sexual, adems, pueden producir malformacin genital, y disminuir el recuento espermtico.

86

DISRUPTORES ENDOCRINOS

RAEM 2004 Vol 41 No. 2

Como las hormonas tambin regulan el desarrollo del sistema inmunolgico y cerebral, el nio es propenso a padecer ciertas enfermedades y poseer desrdenes en su comportamiento. Gray y Kelce 197 describieron que el DDE y los productos de descomposicin del DDT que se encuentran en el cuerpo humano, actan como bloqueadores andrognicos. De manera similar al vinclozolin (plaguicida antiandrognico), se unen y bloquean al receptor andrgenico. El estradiol se metaboliza por dos caminos en las mujeres, una va es la 16 hidroxiestrona y la otra va es la 2-hidroxiestrona (Bradlow, 1995). Los investigadores encontraron que altos niveles de 16a hidroxiestrona respecto de 2-hidroxiestrona llevan a un riesgo ms alto de cncer de mama, posiblemente debido a que la 16 hidroxiestrona es estrognica. Por otro lado el aumento de los niveles de 2-hidroxiestrona respecto de la 16 hidroxiestrona reducen el riesgo de cncer de mama debido a que el 2-hidroxiestrona es un estrgeno dbil. Fig.11 La concentracin de estos dos esteroides pueden ser alterada por el ejercicio (ms ejercicio, ms 2-hidroxiestrona) y por la calidad de la dieta (menos grasa, ms 2-hidroxiestrona). Tambin ciertos qumicos afectan el balance por ejemplo: indol 3 carbinol presente en vegetales tales como el repollo y el brcoli incrementan el nivel de 2-hidroxiestrona y por lo tanto pueden redu cir el cncer de mama. Tambin se encontr que la exposicin de clulas de cultivo de mamas humanas al DDT, DDE, Atrazina, clodecona, lindano y endosulfan llevan a un incremento de los niveles de 16a hidroxiestrona, lo que potencialmente llevara a un incremento del

riesgo de cncer de mama (Bradlow, 1995). Se han encontrado productos qumicos con la capacidad de alterar el sistema endocrino en semen, folculos del ovario, en el tero, y en concentraciones especialmente altas, en la leche materna. Algunas sustancias qumicas tienen la capacidad de atravesar la placenta por lo cual pasan de la madre al feto en desarrollo. Debido a que el feto es extremadamente sensible an a concentraciones pequeas, se ha sugerido que la exposicin a estos qumicos, mientras el feto est en el tero, puede tener efectos algunos aos despus. Un ejemplo de un estrgeno sinttico es el DES (dietilstilbestrol) que le fue suministrado a ms de cinco millones de personas entre los aos 1948 y 1971, en la actualidad se lo toma como modelo de los problemas que pueden causar este tipo de drogas. El DES que fue originalmente dado para prevenir los abortos naturales, para los sntomas de la menopausia, como anticonceptivo, para nias que estaban creciendo demasiado, tambin fue utilizado por los granjeros para hacer aumentar de peso a los pollos, vacas y cualquier otro tipo de ganado. Aos ms tarde, los hijos de las mujeres que consumieron esta droga desarrollaron distintos tipos de cncer y anormalidades genitales. (198) Los mayores daos ocurren durante el embarazo cuando los POPs (COPs- Contaminantes Orgnicos Persistentes) imitan o bloquean las delicadas seales que enva el sistema hormonal madre-feto al feto para guiar su desarrollo. De acuerdo con investigaciones cientficas realizadas por Colborn (1996), De Vito (1995), Jacobson y por la EPA (1994), los defectos desarrollados por un nio el cual ha sido expuesto a concentraciones

Fig. 11

16 hidroxiestrona

2-hidroxiestrona

CHICHIZOLA, C.

87

de estas sustancias in utero y por la leche materna, pueden ser los siguientes: cncer, endometriosis, problemas en el aprendizaje, desrdenes inmunolgicos y neurolgicos, bajo recuento espermtico y bajo volumen de esperma, abortos, bajo IQ, malformaciones genticas e infertilidad. Cuando se realiz la anamnesis de las madres de varones con criptorquidia se encontr que las condiciones clnicas reportadas por la madre durante estas gestaciones (la vida fetal de estos) fueron obesidad, hiperemesis, primer embarazo, o hipertensin y se asoci cada una con niveles elevados de estrgenos 199.

200mg/da desde la octava semana hasta el final 206. Las lesiones genitales en el nio incluyeron hipospadias y testes aparentemente desprovistas de clulas germinales. Davis y Potter 207 no observaron anormalidades en los genitales externos de 4 nios cuyas madres fueron expuestas al DES en altas dosis despus del primer trimestre

Impacto de los Contaminantes Orgnicos Persis tentes (POPs) en la Salud. Anormalidades Reproductivas.
Los POPs han sido asociados por tener un impacto particular en la mujer, particularmente en la concepcin de hijos sanos o en el desarrollo normal de los mismos. Se han considerado las siguientes patologas que estn relacionadas con la exposicin del feto a los agentes disruptores: Aborto: los estudios en animales han demostrado que la exposicin a ciertos qumicos sintticos como los PCBs, incrementan el riesgo de que se produzcan abortos 208. Desarrollo intelectual: los estudios realizados por Sarah y Joseph Jacobson sobre el dao causado por los PCBs a los nios que han recibido exposiciones intrauterinas de los mismos demuestra que tienen disminucin en los puntajes IQ, con fuertes efectos sobre la memoria y la atencin. Lo que preocupa es que estos defectos se ven en nios que han sido expuestos a concentraciones de PCBs muy poco superiores a las que se encuentran en la poblacin en general 209. Recuentos espermticos: Ha sido demostrado que estos agentes, alteraran la composicin espermtica pudiendo ser causa de infertilidad masculina. Los estudios demuestran que tanto el volumen de semen como el nmero de espermatozoides han disminuido entre los aos 1949 y 1990. Las investigaciones realizadas en 61 pases demuestran que el volumen de semen ha disminuido desde los 3,40 a los 2,75 ml y el nmero de espermatozoides de 113.000.000 hasta 66.000.000 por mililitro. El anlisis de distintas evidencias sugiere que los estrgenos pueden ser los responsables de afectar seriamente la fertilidad masculina 210.

Estrogenizacin en humanos por efecto del dietilstilbestrol-DES

Los defectos del tracto genital, similares a aquellos vistos en el ratn tratado con DES, han sido observados tambin en hombres cuyas madres han tomado DES 200,201. Un grupo de la Universidad de Chicago report que los hombres expuestos al DES tuvieron una incidencia ms alta de testculos no descendidos (criptorquidia) y quistes epididimales comparados con hombres no expuestos. Gill y Col. 202,203 confirmaron y extendieron estos estudios y demostraron que hay una ms alta incidencia de testes hipoplsticas y de esperma anormal. En un estudio se report cncer de testculos en un hombre expuesto al DES. La posibilidad de cncer testicular como resultado de exposicin prenatal al DES fue reportado por Gill y col. 203. Han sido reportados otros pocos casos de cncer testicular (seminoma) y de quistes epididimales en hombres expuestos prenatalmente al DES 204. Un estudio reciente por el grupo de Wilcox confirm anormalidades estructurales en hombres expuestos al DES pero encontr que no existe una diferencia signifitiva de la fertilidad de los participantes del estudio y sujetos controles 205. Uno de los primeros reportes sobre los efectos adversos de la exposicin prenatal al DES sobre la progenia masculina fue un caso simple de seudohermafroditismo en un nio. La madre del nio tom altas dosis de DES durante el embarazo (50 mg/da) comenzando en la sexta semana de gestacin;

88

DISRUPTORES ENDOCRINOS

RAEM 2004 Vol 41 No. 2

Cncer Testicular: Increment su incidencia en el 55% entre los aos 1979 y 1991 en Inglaterra y Gales. Hubo 1137 casos nuevos en 1991 (Campaa de Investigacin de Cncer, enero 1998. Se cree que el cncer testicular resulta principalmente de problemas que ocurren durante el desarrollo de las testes mientras el individuo est en desarrollo en el tero y se cree que los qumicos disruptores son la causa del crecimiento (Skakkebaek y col.1998). El cncer testicular es una enfermedad de hombres jvenes, pero el incremento de edad en la poblacin no es una razn para el incremento de este cncer (como ocurre con otros). Grados de incremento medidos en otros pases incluyen: un incremento del 300% entre el 1945 y 1990 en Dinamarca y un incremento anual del 2,3% en pases del Bltico. Est claro que los grados de incremento e incidencia varan entre diferentes pases, Finlandia tiene la ms baja incidencia en Europa, los hombres de Finlandia tienen la ms alta concentracin de esperma en Europa (Jensen,1995). Recientemente se ha descripto un gen llamado hiwi que es hasta 16 veces ms activo en hombres con cncer testicular que en pacientes sanos 211. Reducida proporcin de bebes masculinos: el grado de nacimientos masculinos disminuy durante los ltimos 20-40 aos en Dinamarca, Holanda, Suecia, Alemania, Noruega, Finlandia, Canada y EE.UU.: No est claro porque pasa esto, aunque se ha sugerido que los disruptores qumicos hormonales y la poblacin ambiental son una posible causa. Esta hiptesis est apoyada por los datos de Seveso en Italia, donde un accidente industrial liber grandes cantidades de dioxinas. Ocho aos despus del accidente nacieron de 9 matrimonios 12 mujeres y ningn varn con la ms alta exposicin a las dioxinas (Davis, 1998, Raloff, 1998). Las propiedades antiandrognicas de las dioxinas en ratones alteran el tiempo de trnsito del esperma y el comportamiento de apareamiento, el cual provoca retraso de la fertilizacin del huevo. Las propiedades antiestrognicas de las dioxinas alteran durante la mitad del ciclo la licuefaccin del mucus y la maduracin del huevo 212. Pubertad temprana: las investigaciones sugieren que las nias en EE.UU. llegan ms temprano a la pubertad (Herman-Giddens,1997). Esto se apoya en un estudio, el cual compara el comienzo de la pu-

bertad en nias cuyas madres durante el embarazo tenan niveles de exposicin a PCBs y DDE . Estas nias cuyas madres tuvieron los ms altos niveles de exposicin al DDE y PCBs en el tero, entraron a la pubertad 11 meses ms temprano que nios con una baja exposicin. La llegada de la pubertad en varones no fue afectada. Otros estudios mostraron que las nias que entraron a la pubertad ms tempranamente incrementaron el riesgo de cncer (Boyce, 1997).

Mecanismos Moleculares y Celulares durante el Desar rollo Fetal.

La impresin genmica refiere a un fenmeno especfico; la forma epigentica heredada no Mendeliana de la regulacion del gen que resulta en una expresion monoallica o la impresin genmica es una forma epigentica de la regulacin del gen que resulta en la expresin de slo un alelo parenteral 213. Los elementos de la impresin genmica son el cambio persistente en la expresin del gen que se logr de una manera epigentica y el silenciamiento del gen de un padre pero no del otro. El proceso de diferenciacin celular se basa sobre la expresin del gen o el prendido y apagado secuencial de diferentes genes para establecer un fenotipo estable. Mientras este proceso puede no ser monoallico, este es epigentico y heredado. En toxicologa el trmino impresin del gen se refiere a cambios persistentes en la expresin del gen que ocurre a travs de mecanismos no mutagnicos. El mismo enigma apareca en la biologa molecular del cncer, en la cual el silenciamiento de lo genes supresores tumorales se asociaron con el proceso de cncer. Desde que los genes supresores tumorales son en algunos casos genes monoallicos impresos genmicamente, el proceso ajusto la definicin especfica. De cualquier manera en los casos donde el proceso de transformacin neoplsica involucra activacin o represin persistente de genes monoallicos impresos no genmicamente, el trmino gen impreso es de utilidad. Se considera que los estrgenos actan como seales ambientales celulares reversibles. La administracin de estrgenos en un rata ovarectomizada re-

CHICHIZOLA, C.

89

sulta en el desarrollo de rganos, proliferacin celular y exposicin del gen blanco en el tero 214. Cuando se retira la administracin de estrgenos, el tamao y el peso uterino, retornan casi al estado no estimulado. La administracin de estrgenos al ratn recin nacido induce la expresin de mltiples genes, alguno de ellos persite durante mucho tiempo an despus de cesar en la administracin de la hormona 215. En el promotor de lactotransferrina del ratn cinco sitios CpG disponibles para la metilacin estn en una regin desde el ERE, slo un sitio CpG permanece no metilado 216. En el ratn estrogenizado, dos de estos sitios permanecen no metilados; el ratn adulto tratado con la misma dosis de DES por el mismo perodo de tiempo no tuvo un cambio en el modelo de metilacin de DNA del gen de la lactotransferrina. Esto es consistente con la inhabilidad de tal tratamiento en el adulto para cambios de la expresin del gen de la lactotransferrina. La exposicin a estrgenos resulta en la sobreexpresin persistente de lactotransferrina en el tero de hembras 215. Esta sobreexpresin se observa por los niveles de RNAm y la concentracin tisular de la protena y perdura como si el ratn estuviese recibiendo inyecciones de estrgenos an 3 semanas despus de la ovariectoma. Recientemente se demostr que la exposicin hormonal induce la expresin persistente de genes normalmente reguladores hormonales, pudiendo ser el resultado del imprinting inducida genmicamente por la hormona manteniendo su efecto an en su ausencia 216. El tratamiento con estrgenos que resulta de la exptresin persistente de lactotransferrina tambin produce cnceres epiteliales de tero en la mayora de los ratones 217, posiblemente por su accin sobre los sitios de metilacin del gen. Esto pudiera explicar cmo una seal reversible pueda hacerse irreversible en la ausencia de la hormona que gener la seal. Un evento fundamental en la diferenciacin celular involucra genes programados para la realizacin de tales eventos. Un mecanismo para lograr esta programacin gentica es la metilacin o desmetilacin del DNA selectivo de su promotor. El modelo de metilacin alterado asociado con tratamiento de estrgenos durante la diferenciacin de clulas del epitelio uterino provee un mecanismo para la

expresin irreversible de una seal reversible o provee de una posible ruta para el cambio epigentico a gentico en la carcinognesis hormonal. La generalizacion de este mecanismo a carcinognesis hormonal requiere estudios sobre la metilacin y expresin de diferentes genes que son importantes para la diferenciacin o proliferacin celular. Se demostr que las celulas de cncer de mama han silenciado genes que de otra manera funcionaran como genes supresores de tumores y que este silenciamiento es una funcin alterada de la metilacin 218. No se sabe si los estrgenos juegan algun rol en la metilacin o desmetilacin de los genes. La terminologa es especialmente til cuando considera mecanismos de carcinognesis hormonal. Es bien conocido que el tratamiento de varias especies, incluyendo hormonas, con estrgenos exgenos se asocia con tumores en diferentes rganos 219. Se asumi que los estrgenos funcionan en el proceso tumorgeno como un estmulo secundario o promotor 220. A pesar de no poder demostrar que las sustancias qumicas de accin estrognica, no como otros quimicos carcinognicos, no forman uniones covalentes con el DNA, ni inducen mutaciones estructurales del DNA, ha sido demostrado que estrgenos de varias estructuras y potencias biolgicas pueden funcionar como carcingenos. Esta evidencia incluye transferencia neoplsica de clulas en cultivo 221-223, efectos carcinognicos en el rin del hamster adulto 224, o ratn neonatal 217 y tero de hamster. De hecho se sabe muy poco acerca del rol de los estrgenos u otras hormonas en la imprinting del gen. Un caso puede ser que el camino de la seal asociada a estrgenos pueda contribuir a la metilacin o desmetilacin del DNA hecho de cualquier manera. Por. ejemplo se demostr que los efectos con estrgenos fueron inducidos en clulas uterinas en cultivo 225 o en el tero del ratn in vivo 226 por factor de desarrollo epidrmico (ECF). Luego se de mostr que la seal ECF requera la presencia de un ER funcionante en clulas en cultivo para la expresin del efecto del factor de desarrollo 227. Este fue luego confirmado en ratas carentes del gen ER 228. La demostracin de cross-talk entre receptores de membrana y receptores de hormonas esteroides tambin se demostr para IGF-I y ER, dopamina y

90

DISRUPTORES ENDOCRINOS

RAEM 2004 Vol 41 No. 2

IGF-I, EGF y ER en cultivos celulares. Los estudios del receptor cross-talk establecieron al ER como una seal importante de transduccin proteica en sistemas de seal de hormonas peptdicas. Se demostr tambin que el camino o va de supervivencia, proliferacin y diferenciacin celular asociado con fosfatidilinositol-3kinasa y AKT tambin requiere un ER funcionante para su accion (Burow,M.E,. J.A. McLachlan). Posiblemente este mecanismo pudiera deberse a que el estrgeno aumenta los niveles de c-fos o c-jun en celulas o tejidos blanco. El EGF parecera tener un efecto similar 229. La respuesta inmediata de genes al estrgeno tambin procede aparentemente va ER. En el caso de la estrogenizacin el c-fos y el c-jun fueron expresados persistentemente. Recientemente ha sido demostrado que las celulas que sobreexpresan c-fos el cual regula la metiltransferasa, enzima involucrada en metilacin del DNA, sugerira que c-fos puede ser un regulador de este proceso 230. En suma, se sugiere un mecanismo donde los estrgenos directamente o a travs de vas de seales relacionadas juegan un rol en los genes programados o de impresin involucrados en la proliferacin, diferenciacin o supervivencia celular. De esta manera los genes estn persistentemente sobreexpresados o apagados, luego en presencia de un estmulo hormonal se altera la funcin celular produciendo la enfermedad. En la diferenciacin celular el proceso de imprinting del gen y el silenciamiento allico genmico ocurre normalmente, se puede especular que para los estrgenos o qumicos estrognicos la distincin entre fisiologa y patologa est borrosa. El caso de la accin de los estrgenos sobre el imprinting de determinados genes est consolidada por dos trabajos recientes que demuestran que el neoplasma del tracto genital inducido por el DES puede transmitirse generacionalmente a la progenia femenina 229 o masculina 230. El imprinting celular puede incrementarse por compuestos estrognicos a travs de, al menos, dos mecanismos: -en un caso, el qumico estrognico puede modificar el gen a travs de un proceso que lleva a cambios genticos persistentes, probablemente al nivel de la metilacin de DNA. -por otro lado, los componentes que alteran la

va de seal en puntos clave en la diferenciacin celular alteran la expresin del gen generando una memoria bioqumica. La mayora de lo genes en este proceso seran aquellos involucrados en la respuesta a seales hormonales secundarios (sustancias qumicas de accin estrognica). Cuando un gen programado a responder al estradiol en la pubertad es desprogramado o reprogramado para la accin del qumico sinttico, ste responder anormalmente a la seal secundaria, resultando en una funcin celular anormal. ste es el concepto de memoria epigentica que es irresistible en el mecanismo de accin de hormonas durante el desarrollo. La Vitelogenina o protena de la yema de huevo constituye un ejemplo de este fenmeno 231-238. Los estrgenos en pollos o ranas resulta en una induccin bifsica de la vitelogenina, una aguda rpida, seguida de un segundo estmulo. La memoria molecular aparentemente es codificada en la conformacin del sitio de la cromatina asociada con la vitelogenina como puede verse por la biosntesis tarda de la protena. Estudios de este tipo no han sido hechos con mamferos, Esto provee un modelo adicional con el cual ver los efectos posibles del imprinting de estrgenos durante el desarrollo.

Disruptores Endocrinos y Fertilidad

La exposicin perinatal a las mezclas qumicas producen alteracin de la funcin endocrina sexual si las sustancias qumicas actan como antiandrgenos, estrgenos, receptores hidrocarbonados aromticos agonistas AhR o txicos de las clulas germinales fetales.

- Antiandrgenos: Se unen al receptor andrognico sin activarlo. La actividad antiandrognica se registr para un nmero diferente de sustancias qumicas, incluyendo farmacuticos (hidroxiflutamida), plaguicidas (procymidone, vinclozolin, o,p-DDE), funguicidas (vinclozolin) y estrgenos (DES y estradiol). En animales de experimentacin, la exposicin perinatal a los antiandrgenos se puede detectar como disminucin de la distancia anogenital, reten-

CHICHIZOLA, C.

91

cin del pezn, hipospadia, retraso en la separacin prepucial, disminucin en el peso de las glndulas sexuales accesorias e inhibicin de la expresin endgena de los genes.

- Estrgenos: Pueden producir efectos antiandrgenicos, o por inhibicin de la secrecin andrognica testicular va bloqueadores de la secrecin de LH o por supresin directa de la sntesis de testosterona por las clulas de Leydig. Tambin pueden alterar la reproduccin masculina unindose al ER y activando la respuesta de genes especficos. Los efectos antiandrognicos de los estrgenos son detectables in vivo en animales de laboratorio como alteraciones en el comportamiento, niveles sricos de LH y espermatognesis. - Los agonistas AhR: Los TCDD (tetracloro dibenzo dioxina), non-orto-sustituidos PCBs (policlorados bifenilos) unidos al AhR (receptpr de hidrocarburos aromticos) inducen el P450s que puede activar procarcingenos y alterar el metabolismo de las hormonas esteroideas. Se ha estudiado los efectos txicos del TCDD en la reproduccin. La administracin en ratas macho adultas una simple dosis de TCDD indujo una disminucin en plasma de la concentracin de testosterona y dihidrotestosterona en un 90 y 75 % respectivamente y concomitantemente disminucin del peso de la vescula seminal y de la prstata 239. Adems, se estudi el efecto de la exposicin de TCDD en el tero y sobre la lactacin. En ratas macho adultas esta sustancia indujo una disminucin en el estado androgenico (muy disminuida la testosterona), componentes sexuales alterados, disminucin de LH, disminucin de espermatognesis, capacidad reproductiva, desmaculinizacin y alteraciones del comportamiento sexual 240-245. Gray 246 mostr que la exposicin prenatal permanente a TCDD redujo el numero de espermatozoides y el peso de la glndulas accesorias pero que no alter los niveles de testosterona. Adems, una simple exposicin a TCDD en el da gestacional 15 fue suficiente para reducir permanentemente las reservas de esperma epididimarias 247. A menudo se ha dicho que los efectos de TCDD son, al menos, parcialmente debidos al catabolismo de la testosterona porque el TCDD aumenta el catabolismo de

testosterona, pero in vivo no se pudo verificar 248. Hasta este momento estos mltiples efectos del TCDD en la reproduccin no estn claros. Los efectos reproductivos a la exposicin del TCDD han sido bien documentados en animales de laboratorio. En general los estudios experimentales son coincidentes con estudios epidemiolgicos. La exposicin al acetato de plomo en agua de consumo result en una disminucin de la cantidad de espermatozoides 249-251, una disminucin en la produccin de testosterona basal e inducida por GCH 252 y una disminucin en el efecto de la testosterona sobre la capacitacin espermtica 253. En el caso de los PCBs la exposicin perinatal de ratas a Aroclor 1242 o 1254 result en un hipotiroidismo 253. La hormona tiroidea suprime directamente la mitognesis de las clulas de Sertoli neonatales y en el hipotiroidismo se puede inducir el incremento de la proliferacin de clulas de Sertoli neonatales y una poblacin de clulas ms numerosas pueden ser responsables del incremento del nmero de clulas germinales, del peso de la testis y de la produccin de esperma diaria que caracteriza este fenmeno. Esta hiptesis se sustenta por los resultados de los anlisis en animales tratados con PCB y analizada la proliferacin de clulas de Sertoli 253. Ratas de 15 das (control y tratadas con PCB) recibieron timidina tritiada dos horas antes de morir y su testes fueron fijadas en 10% de formalina. Anlisis de la incorporacin de timidina tritiada revelaron una proliferacin ms grande de clulas de Sertoli en testes con PCB que controles. El goitrogen 6 y el propil2tiouracil reducen los niveles de tiroxina con un incremento concomitante en el peso testicular. Los PCBs se unen al AhR que induce P450s que puede aumentar el catabolismo de las hormonas esteroideas o disminuir la produccin de testosterona. Machal 254 estudi los efectos de la exposicin crnica a los PCBs sobre el citocromo P450s y la esteroidognesis en hgado y testes de un toro. Observ induccin enzimtica de orto-deetilacin usando una droga como el etoxiresorufin en el hgado e induccin de 6 hidroxilacin de testosterona en el testculo, adems hall niveles altos de androstenediona inducibles tambin por PCBs. La exposicin al PCB redujo el P450s microsomal

92

DISRUPTORES ENDOCRINOS

RAEM 2004 Vol 41 No. 2

testicular y afecto la formacin de androstenediona y la 16 hidroxilacin de testosterona. El CYP11A mitocondrial, la enzima limitante de la esteroidogenesis fue inhibida un 50% en las testes de animales expuestos. Machal sugiri que todos estos efectos pueden contribuir significativamente a la disminucin de los niveles de testosterona a menudo observados con exposicin al PCB. ste y otros estudios de exposicin perinatal al PCB sugiere que el mecanismo del mismo podra resultar del imprinting enzimtica. En otro estudio una simple exposicin perinatal al Aroclor 1254 altera permanentemente la exposicin en el adulto a la accin heptica y testicular del P450 255.

La exposicin al plomo aumenta la generacin de radicales libres. Usando un anlisis basado en una seal quimioluminiscente producida por la reaccin del luminol con radicales libres, Hsu 261 encontr que el esperma de ratas expuestas al plomo tenan aumentado los niveles de radicales libres que fueron inversamente correlacionados con la cantidad de esperma, movilidad y grado de penetracin al oocito. El mecanismo de formacin de radicales libres por el plomo no ha sido resuelto. Marchlewicz 262 demostr que muchos espermatozoides de ratas expuestas al plomo tenan reacciones anormales de las enzimas antioxidantes en la pieza media, sugiriendo que la formacin de radicales libres puede ser un factor importante.

Contaminantes en el Lquido Espermtico. Estrs Oxidativo.

Los fosfolpidos son los compuestos principales (60-70%) de los lpidos en las clulas espermticas 256 y stos tienen un alto contenido de cidos grasos poliinsaturados. Consecuentemente las clulas espermticas son susceptibles a la peroxidacin lipdica por varios radicales libres tales como aniones superxido, radicales hidroxilados y perxido de hidrgeno. La degradacin de cidos grasos se acompaa de un aumento en la oxidacin lipdica por la formacin de malondialdehido (MDA). Esta degradacin de fosfolpidos puede llevar a la destruccin de membranas celulares. Adems, los radicales libres pueden reaccionar con molculas de DNA llevando a mutaciones que afectan el status de la progenia gentica y la espermatognesis. En estudios de infertilidad en poblaciones humanas masculinas se demostr que niveles de MDA y/o niveles de un biomarcador para el dao oxidativo del DNA, el 8OH,2 deoxi guanosina (8-OhdG) estuvieron estadsticamente asociados con la disminucin en el nmero y la motilidad espermtica 257,258. Cuando los hombres infrtiles recibieron como antioxidantes vitamina E y C su grado de fertilizacin in vitro aument, los niveles de MDA disminuyeron 259, la concentracin de esperma aument y la 8OhdG disminuy 257. La disminucin de la vitamina C en la dieta tuvo el efecto de incrementar los niveles de 8OhdG en el esperma 260.

Mecanismos Moleculares en Anormalidades Reproductivas. Impacto de la Accin Estrognica.

La exposicin en tero de estrgenos en ratas inducen fenotipos macho estrogenizados (testes retenidas o criptorquidea, disminucin del nmero de esperma, aumento del esperma anormal, ductos mllerianos retenidos, quistes epididimales, hipospadias y enfermedades prostticas). Observaciones similares han sido comunicadas en, ratones, hamsters y humanos embarazados expuestos a estrgenos intrauterinos. Los genes involucrados en el proceso de morfognesis del tracto genital masculino se estn definiendo ahora. La modulacin aguda o persistente de la expresin de genes hormona respondientes o de desarrollo crtico del tracto genital masculino por compuestos estrognicos est en desarrollo en numerosos laboratorios. Criptorquidia. Emmen y col. 263 mostraron que la criptorquidia asociada con tratamiento prenatal con varios estrgenos en el ratn puede estar relaciona do a la inhibicin del factor de insulina 3 - ILF3 (insulin like factor 3-ILF3), inducida por los estrgenos producidos por las testes fetales. Se mostr que el ILF3 afecta el descenso testicular a travs de la seal de las testes fetales al gubernaculum. El ratn con ILF3 mutante exhibe criptorquismo bilateral, se piensa que ocurre como resultado del desarrollo alterado de un componente del mescenterio genital, el gubernaculum, el cual retiene una estrutura fe-

CHICHIZOLA, C.

93

menina elongada 264,265. Hipospadias. La hipospadia constituye un defecto del genital masculino externo asociado con tratamiento prenatal de estrgenos. En este caso el grupo de Yamada 266 report que el desarrollo del genital externo del ratn involucra seales para el factor de desarrollo fibroblstico (FGF) durante la formacin del tubrculo genital. El ratn nockeado con el gen de FGF 10 muestra desarrollo anormal del pene sugiriendo un rol importante de esta molcula como seal en la induccin de hipospadias. Retencin del ducto mlleriano. El mecanismo molecular para la retencin del conducto mlleriano asociado con DES se est aclarando. Se demostr que el efecto reside a nivel del conducto ms que del testculo fetal 267, la alteracin molecular demostr ser una falla del receptor MIS en el conducto fetal que impide responder al pptido 268. Los mecanismos moleculares asociados con patologa mlleriana despus de la exposicin prenatal al DES estn comenzando a ser entendidos. Ma y Col. 269 estudiaron la localizacin de los genes Hox relacionados a la morfognesis del ducto mlleriano fetal en el ratn. Los cambios en la distribucin longitudinal de genes a lo largo del tracto genital debido a la exposicin prenatal de DES han sido relacionados con los cambios descriptos en la disrupcin del gen Hoxa 10.

Feminizacin del tejido masculino inducido por estrgenos. Protenas secretoras andrgenodependientes, SVS-IV, V y VI han sido caracterizadas en la vescula seminal de la rata 270,271 y del ratn. En ambos el SVS-IV estuvo bajo control de andrgeno y por lo tanto no expres en hembras o tejido masculino castrado. Una protena secretora uterina estrgenodependiente 272 y el gen que la codifica fue indentificada como lactotransferrina un miembro de la familia del gen de la transferrina 273. La lactotransferrina est bajo el poderoso control de los estrgenos, est localizada en el epitelio uterino y vara con los niveles de estrgenos durante el ciclo menstrual 274. La lactotransferrina fue expresada en glndula mamaria y leucocitos pero no estaba regulada por estrgenos en estos tejidos 274. La lactotransferrina no expresa en rata hembra ovarectomizadas o ratn control masculino. El ratn masculino que fue cas-

trado y tratado con estrgenos no expres lactotransferrina en su vescula seminal 275. Cuando se analiz la vescula seminal de machos expuestos prenatalmente al DES se detect RNAm de lactotransferrina. El nivel del mensajero de lactotransferrina expresado increment despus de la castracin del macho y estuvo muy aumentado en tero cuando se estimulaba con estrgenos. Estos resultados constituyeron la primer demostracin a nivel gentico de la alteracin del desarrollo sexual. Muchos estudios de vesculas seminales de ratn tratados con DES demostraron que mientras ellos retenan la citoarquitectura asociada con el rgano masculino, ellos expresaban lactotransferrina y ER 276. De hecho virtualmente todas las clulas del epitelio de la vescula seminal del ratn expuestas al DES expresan antgenos reconocidos por antisueros a lactotransferrina y a ER. Otros experimentos condujeron a evaluar si la exposicin prenatal al DES feminizaba las clulas de la vescula seminal o alternativamente bloqueaba la masculinizacin del rgano a nivel molecular. Se demostr que la vescula seminal del ratn expuesta al DES fue competente para expresar la protena SVS-IV especfica de vescula seminal bajo control andrognico como lactotransferrina. De hecho la misma clula a menudo fue capaz de hacer ambos productos 277. Reversin del sexo. Un estudio en humanos describe un mecanismo molecular plausible para un fenotipo femenino en machos genticos. La sobre expresin de WNT-4, un gen putativo determinante del sexo, debido a la duplicacin de 1P31-P35 lleva al desarrollo femenino en un individuo XY. Los autores proponen que este desbalance gentico est asociado con condiciones que incluyen genitales ambiguos y faltas en el descenso testicular 278.

Contaminantes Orgnicos Persistentes y Cncer de Mama.

Una gran cantidad de estudios han analizado la conexin entre muchos POPs y este tipo de cncer. Se detectan POPs en casi todas los muestras de tejido adiposo mamario o grasa de leche materna. Numerosos estudios relacionan varios compues-

94

DISRUPTORES ENDOCRINOS

RAEM 2004 Vol 41 No. 2

tos rganoclorados, que incluyen DDE, PCBs y otros pesticidas con el cncer de mama. Estos estudios incluyen los realizados por Frank Falck, Mary Wolff y otros, quienes compararon muestras de sangre de mujeres con cncer de mama y encontraron niveles de DDE, un metabolito del DDT, 35 % mayores respecto a controles normales 279-282. Los estudios realizados por Walter Rogan, Caren Lanting y otros muestran que la presencia de DDT y PCBs en la leche materna reduce la habilidad de amamantar, reduciendo su duracin en un 40% entre mujeres con altos niveles de estos contaminantes en su leche 283-285. La WEDO (Org.de Mujeres para el Desarrollo y el Medio Ambiente-Womens Environment & Development Organization) ha inspeccionado 50 pases en el mundo y el 22% han demostrado contaminacin de la leche materna por exposicin a contaminantes qumicos.

Estadsticas de Cncer de Mama relacionadas al Medio Ambiente.

Se sabe que la evidencia cientfica que relaciona el cncer de mama con los contaminantes ambientales est aumentando. Los cientficos creen que la reduccin en un 30% de este tipo de cncer en Israel entre los aos 1976 y 1986 se debi a la prohibicin de tres pesticidas cancergenos. Se encontr en estudios realizados en Connecticut que los valores de PCBs y DDT en los tejidos de mujeres con cncer de mama son entre 50 y 60 % mayores que lo encontrado habitualmente 286-288. Se estudi la relacin entre cncer de mama y exposicin a dioxina (mujeres de aproximadamente 40 aos expuestas en Seveso, Italia en 1976), y se encontr que el 1,5 % tena diagnstico de cncer de mama con niveles de dioxinas ms altos de lo encontrado en otras poblaciones expuestas (entre 13 y 1960 ppt) 289.

Mecanismos Moleculares y Celulares en el Cncer de Mama.

El cncer de mama ejemplifica la dificultad en la comprensin de la interaccin de la accin endocrina y carcinognica de los estrgenos. Se ha encon-

trado niveles elevados de estradiol en suero e incrementada excrecin urinaria de estrona, estradiol y estriol en pacientes con cncer de mama comparado con controles 290. En mujeres posmenopusicas que viven en zonas de alto riesgo de cncer de mama se encontraron altos niveles de estrgeno en suero y en orina (USA,UK) comparado con pacientes de bajo riesgo como Japn, China y Singapur 291-294. La hiptesis de que los clorados persistentes juegan un rol en la etiologa del cncer de mama es controvertido 295-298. El primer estudio que sugiere correlacin entre estrgenos ambientales y cncer de mama fue el de Falck 299. Se estudi los niveles de varios contaminantes clorados persistentes en tejidos adiposo mamario de mujeres con enfermedad de mama maligna y no maligna y se encontr niveles ms elevados de muchos compuestos como PCBs, DDT y DDE en tejidos de mujeres con enfermedad maligna. Otros estudios han encontrado 300-302, o no encontraron 303-307, una relacin entre exposicin y enfermedad. Un estudio reciente de meta-analisis de cinco reportes previamente publicados concluy que no hubo correlacin significante entre exposicin a rganoclorados y el riesgo de cncer de mama 308, aunque este estudio no puede omitir la existencia de subpoblaciones vulnerables genticamente. Feigelson 309 propuso un modelo multignico de cncer de mama basado en la susceptibilidad de los individuos. Sugiere que las diferencias genticas entre mujeres que tienen alteraciones de la biosntesis y el metabolismo de estrgenos endgenos explicaran la diferencia en la incidencia de cncer de mama. Feigelson 310 report que polimorfismos genticos en dos genes involucrados en el metabolismo estrognico, el CYP17 y el HSD17B1, estn relacionados a la incidencia de cncer de mama. Moysich 311 encontr que mujeres con PCB alta tenan una variante CYP1A1 en el alelo y tenan una muy alta incidencia de cncer de mama comparado con mujeres que no tenan esta variante allica 311. Millikan 312 encontr una relacin estadsticamente significativa entre cncer de mama y niveles de PCBs en suero en mujeres AfroAmericanas pero no en mujeres blancas pero adems, aclara que aunque la relacin entre PCBs y cncer de mama es dbil,

CHICHIZOLA, C.

95

sta es significante para la poblacin vulnerable. Rundle 313 report similares hallazgos investigando la relacin entre el dao al DNA en el tejido mamario debido a exposicin a los PAHs y a una delecin en el gen que codifica una enzima de detoxificacin xenobitica, la glutation S-transferasa M1. Aunque el genotipo de la glutation S-transferasa M1 no predijo casos de cncer de mama, se observaron ductos DNA-PAH en tejidos de mama malignos con lo cual pudiera correlacionarse con el cncer de mama 314.

Consideraciones de la Seal Ambiental como Disruptor de la Comunicacin Endocrina.

Si recordamos que a los xenobiticos o disruptores hormonales o seales ambientales (como se les llama ltimamente) los portamos en concentraciones que multiplican por varios millones los niveles

naturales de estrgenos libres y que estas sustancias qumicas orgnicas son txicas, persistentes y bioacumulables deberamos pensar en cmo proceder para prevenir la disrupcin endocrina que se produce por este efecto. Para ello el desafo de la ciudadana debera ser exigir ms efectividad en el control de las regulaciones de las sustancias qumicas como un acto esencial de la preservacin propia de un mundo seriamente afectado. Los objetivos a alcanzar deberan ser una contribucin muy importante a la proteccin de la salud humana y del medio ambiente; un estmulo a la industria qumica para que sea innovadora y competitiva en el desarrollo de nuevos productos; y posibilitar a los usuarios, profesionales y la poblacin en general para que pueda tomar decisiones acerca de las sustancias qumicas a emplear mediante una mejor informacin del producto.

Bibliografa
84. Soto, A. 1995.The E-Screen Assay a tool to identify estrogens. An update on estrogenic environmental pollutants. EHP.103:113-122. 85. Jobling, S. 1995. A variety of environmentally persistent chemicals incluiding some ftalate plasticizers are weakly estrogenic. EHP:103:582-587. 86. McLachlan, J. 1997. Synergistuic effects fenvironmental estrogens. Report withdrown. Science 277:462-463. 87. Toppari, J. 1996. Male reproductive health and environmental xenostrogens. EHP.104. Suppl.4: 741-803. 88. Harmon, M.A. 1995. Activation of mammalian retinoid X receptors by the insect growth regulator methoprene. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 6157-6160. 89. Rickenbacher, U. 1986. Structurally specific binding of halogenated biphenyls to thyroxine transport protein.J.Med.Chem.29:641-648. 90. Zoeller, R.T . 2000. Development Exposure to polychlorynates biphenyls exerts thyroid hormone like effects on the expression of RC3/neurogranin and myelin basic protein messenger ribonucleic acids in the developing rat brain. Endocrinology 141:181-189.

91. Cheek, A.O. 1999. Potencial Mechanisms of thyroid disruption in human interaction of organochlorine. Compunds with thyroid receptor, transthyretin, and thyroid-binding globulin. EHP. 107:273-278. 92. Rickenbacher, U. 1986. Structurally specific binding of halogenated biphenyls to thyroxine transport protein.J.Med.Chem.29:641-648. 93. Kelce, W.R. 1994. Environmental Hormon disruptors,evidence that vinclozolin developmenttoxicity is mediated by antiandrogenic metabolites.toxicol.appl.Pharmacol.126:276-285. 94. Wong, C. 1995. androgen receptor antagonist vs. agonist activities of the fungicide vinclozolin relative to hydroxyflutamide.J.Biol. Chem. 270: 19998-20003. 95. Howell, W.M. 1980 Abnormal expresin of secondary sex characters in a population of mosquitofish, gambusia affinis holbrooki:evidence for environmentally-induced masculinization Coeian:676-681. 96. Denton, T.E. 1985. masculinization of female mosquitofish by exposure to plant sterols and Mycobacterium smegmatis. Bull Envirom. Contam. Toxicol. 35:627-632. 97. Kaltreider, R.C. 2001. Arsenic alters the function of the glucocorticoid receptor as a trans-

96

DISRUPTORES ENDOCRINOS

RAEM 2004 Vol 41 No. 2

cription factor.EHP.109:245-251. 98. Simons, S.S. 1990.Arsenite and Cadmiun II as a probes of glucocorticoide receptor structure and function .J.Biol.Chem.265:1938-1945. 99. Stoica, A. 2000.Activation of estrogen receptor alpha by the heavy metal cadmiun.mol.endocrinology 14:545-553. 100. Garcia-Morales, P . 1994. Effect of cadmiun on estrogen receptor revels and estrogen induced responses in human breast cancer cells.J.Biol. Chem.269:16896-16901. 101. Hawkins, M.B.; Thornton, J.W.; Crews, D. y col. 2000 Identification of a third distinct estrogen receptor and reclassification of estrogen receptors in teleosts. Proc Natl Acad Sci USA 97:1075110756 102. Das, S.K.; Taylor, J.A.; Korach, K.S. y col. 1997 Estrogenic responses in estrogen receptor- deficient mice reveal a distinct estrogen signaling pathway. Proc Natl Acad Sci USA 94:1278612791 103. Haynes, M.P.; Sinha, D.; Russell, K.S. y col. 2000 Membrane estrogen receptor engagement activates endothelial nitric oxide synthase via the PI3-kinase-Akt pathway in human endothelial cells. Circ Res 87:677682 104. Chambliss, K.L.; Yuhanna, I.S.; Mineo, C. y col. 2000 Estrogen receptor and endothelial nitric oxide synthase are organized into a functional signaling module in caveolae. Circ Res 87: E4452 105. Clarke, C.H.; Norfleet, A.M.; Clarke, M.S. y col. 2000 Perimembrane localization of the estrogen receptor protein in neuronal processes of cultured hippocampal neurons. Neuroendocrinology 71:3442 106. Nadal, A.; Ropero, A.B.; Laribi, O. y col. 2000 Nongenomic actions of estrogens and xenoestrogens by binding at a plasma membrane receptor unrelated to estrogen receptor and estrogen receptor . Proc Natl Acad Sci USA 97:1160311608 107. Chen, J.; Li, Y.; Lavigne, J.A. y col. 1999 Increased mitochondrial superoxide production in rat liver mitochondria, rat hepatocytes, and HepG2 cells following ethinyl estradiol treatment. Toxicol Sci 51:224235 108. Chen, J.; Yager, J.D. 2001 Mitochondrial localization of estrogen receptor (ER)s and . Proc Am Assoc Cancer Res 42:882

109. Suchar, L.A.; Chang, R.L.; Thomas, P.E. y col. Effects of phenobarbital, dexamethasone, and 3-methylcholanthrene administration on the metabolism of 17-beta-estradiol by liver microsomes from female rats Endocrinology 137:663676 (1996). 110. Hansen, L.G. Stepping backward to improve assessment of PCB congener toxicities. Environ Health Perspect 106:171189 (1998). 111. Guengerich, F.P.; Dannan, G.A.; Wright, S.T. y col. Purification and characterization of liver microsomal cytochromes P-450: electrophoretic, spectral, catalytic, and immunochemical properties and inducibility of eight isozymes isolated from rats treated with phenobarbital or beta-naphthoflavone. Biochemistry 21:60196030 (1982). 112. Li, M.H.; Hansen, L.G. Enzyme induction and acute endocrine effects in prepubertal female rats receiving environmental PCB/PCDF/PCDD mixtures. Environ Health Perspect 104:712722 (1996). 113. Brown, J.F . Determination of PCB metabolic, excretion, and accumulation rates for use as indicators of biological response and relative risk. Environ Sci Technol 28:22952305 (1994). 114. Hirose, K.; Morita, M.; Ema, M. y col. cDNA cloning and tissue-specific expression of a novel basic helix-loop-helix/PAS factor (Arnt2) with close sequence similarity to the aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator (Arnt). Mol Cell Biol 16:17061703 (1996). 115. Keith, B.; Adelman, D.M.; Simon, M.C. Targeted mutation of the murine arylhydrocarbon receptor nuclear translocator 2 (Arnt2) gene reveals partial redundancy with Arnt. Proc Natl Acad Sci U S A 98:66926697 (2001). 116. Honkakoski, P.; Negishi, M. Regulation of cytochrome P450 (CYP) genes by nuclear receptors. Biochem J 347:321337 (2000). 117. Xie, W.; Barwick, J.L.; Simon, C.M. y col. Reciprocal activation of xenobiotic response genes by nuclear receptors SXR/PXR and CAR. Genes Dev 14:30143023 (2000). 118. Tr ottier, E.; Belzil, A.; Stoltz, C. y col. Localization of a phenobarbital-responsive element (PBRE) In the 5-flanking region of the rat CYP2B2 gene. Gene 158:263268(1995).

CHICHIZOLA, C.

97

119. Sueyoshi, T.; Kawamoto, T.; Zelko, I. y col. The repressed nuclear receptor CAR responds to phenobarbital in activating the human CYP2B6 gene. J Biol Chem 274:60436046 (1999). 120. Sueyoshi, T.; Negishi, M. Phenobarbital response elements of cytochrome P450 genes and nuclear receptors. Annu Rev Pharmacol Toxicol 41:123143 (2001). 121. Yoshinari, K.; Sueyoshi, T.; Moore, R. y col. Nuclear receptor CAR as a regulatory factor for the sexually dimorphic induction of CYP2B1 gene by phenobarbital in rat livers. Mol Pharmacol 59:278284 (2001). 122. Xie, W.; Barwick, J.L.; Simon, C.M. y col. Reciprocal activation of xenobiotic response genes by nuclear receptors SXR/PXR and CAR. Genes Dev 14:30143023 (2000). 123. Smirlis, D.; Muangmoonchai, R.; Edwards, M. Phillips, I.R.; Reviews, 2002 o Carpenter y col. 40 VOLUME 110 | SUPPLEMENT 1 | February 2002 o Environmental Health Perspectives Shepard, EA. Orphan receptor promiscuity in the induction of P450 by xenobiotics. J Biol Chem 276:1282212826 (2001). 124. Schuetz, E.G.; Brimer, C.; Schuetz, J.D. Environmental xenobiotics and the antihormones cyproterone acetate and spironolactone use the nuclear hormone pregnenolone X receptor to activate the CYP3A23 hormone response element. Mol Pharmacol 54:11131117 (1998). 125. Sueyoshi, T.; Kawamoto, T.; Zelko, I. y col. The repressed nuclear receptor CAR responds to phenobarbital in activating the human CYP2B6 gene. J Biol Chem 274:60436046 (1999). 126. Moore, L.B.; Parks, D.J.; Jones, S.A. y col. Orphan nuclear receptors constitutive androstane receptor and pregnane X receptor share xenobiotic and steroid ligands. J Biol Chem 275:1512215127 (2000). 127. Waxman, D.J. P450 gene induction by structurally diverse xenochemicals: central role of nuclear receptors CAR, PXR, and PPAR. Arch Biochem Biophys 369:1123 (1999). 128. Schilter, B.; Andersen, M.R.; Acharya, C. y col. Activation of cytochrome P450 gene expression in the rat brain by phenobarbital-like inducers. J Pharmacol Exp Ther 294:916922 (2000). 129. Lemieux, P.M.; Lutes, C.C.; Abbott, J.A. y col.

Emissions of polychlorinated dibenzo-p-dioxins and polychlorinated dibenzofurans from the open burning of household waste in barrels. Environ Sci Technol 34:377384 (2000). 130. Whitlock, J.P. Jr.; Okino, S.T.; Dong, L. y col. Cytochromes P450 5: induction of cytochrome P4501A1: a model for analyzing mammalian gene transcription. FASEB J 10:809818 (1996). 131. Rowland, J.C.; Gustafsson, J.A. Aryl hydrocarbon receptormediated signal transduction. Crit Rev Toxicol 27:109134 (1997). 132. Jones, L.C.; Whitlock, J.P. Jr . Dioxin-inducible transactivation in an chromosomal setting. J Biol Chem 276:2503725042 (2001). 133. Okino, S.T.; Whitlock, J.P. Jr . Dioxin induces localized, graded changes in chromatin structureimplications for CYP1A1 gene transcription. Mol Cell Biol 15:37143721 (1995). 134. Kumar, M.B.; Tarpey, R.W.; Perdew, G.H. Differential recruitment of coactivator RIP140 by Ah and estrogen receptors- absence of a role for LXXL motifs. J Biol Chem 274:2215522164 (1999). 135. Ma, Q.; Whitlock, J.P . A novel cytoplasmic protein that interacts with the Ah receptor, contains tetratricopeptide repeat motifs, and augments the transcriptional response to,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin. J Biol Chem 272:88788884 (1997). 136. Carver, L.A.; LaPres, J.J.; Jain, S. y col. Characterization of the Ah receptor-associated protein, ARA9. J Biol Chem 273:3358033587 (1998). 137. Elferink, C.J.; Ge, N.L.; Levine, A. Maximal arylhydrocarbon receptor activity depends on an interaction with the retinoblastoma protein. Mol Pharmacol 59:664673 (2001). 138. Klinge, C.M.; Jernigan, S.C.; Risinger, K.E. y col. Short heterodimer partner (SHP) orphan nuclear receptor inhibits the transcriptional activity of aryl hydrocarbon receptor (AHR)/AHR nuclear translocator (ARNT). Arch Biochem Biophys 390:6470 (2001). 139. Tian, Y.; Ke, S.; Denison, M.S. y col. Ah receptor and NF-_B interactions, a potential mechanism for dioxin toxicity. J Biol Chem 274:510515 (1999). 140. Davarinos, N.A.; Pollenz, R.S. Aryl hydrocarbon receptor imported into the nucleus follo-

98

DISRUPTORES ENDOCRINOS

RAEM 2004 Vol 41 No. 2

wing ligand binding is rapidly degraded via cytoplasmic proteasome following nuclear export. J Biol Chem 274:2870828715 (1999). 141. Ma, Q.; Baldwin, K.T . 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxininduced degradation of aryl hydrocarbon receptor (AhR) by the ubiquitin-proteasome pathwayrole of the transcription activation and DNA binding of AhR. J Biol Chem 275:84328438 (2000). 142. Baba, T.; Mimura, J.; Gradin, K. y col. Structure and expression of the Ah receptor repressor gene. J Biol Chem 276:3310133110 (2001). 143. Ma, Q.; Whitlock, J.P. Jr . The aromatic hydrocarbon receptor modulates the Hepa 1c1c7 cell cycle and differentiated state independently of dioxin. Mol Cell Biol 16:21442150 (1996). 144. Chang, C.Y.; Puga, A. Constitutive activation of the aromatic hydrocarbon receptor. Mol Cell Biol 18:525535 (1998). 145. Dey, A.; Nebert, D.W. Markedly increased constitutive CYP1A1 mRNA levels in the fertilized ovum of the mouse. Biochem Biophys Res Commun 251:657661 (1998). 146. Adachi, J.; Mori, Y.; Matsui, S. y col. Indirubin and indigo are potent aryl hydrocarbon receptor ligands present in human urine. J Biol Chem 276:3147531478 (2001). 147. Spivack, S.D.; Fasco, M.J.; Walker, V.E. y col. The molecular epidemiology of lung cancer. Crit Rev Toxicol 27:319365 (1997). 148. Spink, D.C.; Lincoln, D.W.; Dickerman, H.W. y col. 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin causes an extensive alteration of 17_-estradiol metabolism in MCF-7 breast tumor cells. Proc Natl Acad Sci U S A 87:69176921 (1990). 149. Liehr, J.G. Is estradiol a genotoxic mutagenic carcinogen? Endocr Rev 21:4054 (2000). 150. Parl, F.F . Estrogens, Estrogen Receptor, and Breast Cancer, Vol 36. In: Biomedical and Health Research. Nashville, TN:IOS Press, 2000. 151. Soto, A.M.; Sonnenschein, C.; Chung, K.L. y col. The E-screen assay as a tool to identify estrogens: an update on estrogenic environmental pollutants. Environ Health Perspect 103:113122 (1995). 152. Korach, K.S.; Sarver, P.; Chae, K. y col. Estrogen receptor-binding activity of polychlorinated hydroxybiphenyls: conformationally restricted

structural probes. Mol Pharmacol 33:120126 (1987). 153. Fielden, M.R.; Chen, I.; Chittim, B. y col. Examination of the estrogenicity of 2,4,6,2,6-pentachlorobiphenyl (PCB 104), its hydroxylated metabolite 2,4,6,2,6-pentachloro-4-biphenylol (HO-PCB 104), and a further chlorinated derivative, 2,4,6,2,4,6- exachlorobiphenyl (PCB 155). Environ Health Perspect 105:12381248 (1997). 154. Jansen, H.T.; Cooke, P.S.; Porcelli, J. y col. Estrogenic and antiestrogenic actions of PCBs in female rat: in vitro and in vivo studies. Reprod Toxicol 7:237248 (1993). 155. Li, M.H.; Hansen, L.G. Uterotropic and enzyme induction effects of 2,2,5-trichlorobiphenyl. Bull Environ Contam Toxicol 54:494500 (1995). 156. Arcar o, K.F.; Yi, L.D.; Seegal, R.F. y col. 2,2,6,6Tetrachlorobiphenyl is estrogenic in vitro and in vivo. J Cell Biochem 72: 94102 (1999). 157. Sarkar, D.K.; Liehr, J.G.; Singletar y, K.W. Role of estrogen in alcohol promotion of breast cancer and prolactinomas. Alcoholism: Clin Exp Res 25:230S236S (2001). 158. Castro, G.D.; Delagado de Layno, A.M.A.; Cos tantini, M.H. y col. Cytosolic xanthine oxidoreductase mediated bioactivation of ethanol to acetaldehyde and free radicals in rat breast tissue. Its potential role in alcohol-promoted mammary cancer. Toxicology 160:1118 (2001). 159. Rundle, A.; Tang, D.; Zhou, J. y col. The association between glutathione S- ransferase M1 genotype and polycyclic aromatic hydrocarbonDNA adducts in breast tissue. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 10:10791085 (2000). 160. Schneider, S.L.; Alks, V.; Mor real, C.E. y col. Reviews, 2002 o Human health effects of chemical mixtures Environmental Health Perspectives o VOLUME 110 | SUPPLEMENT 1 | February 2002 39 Estrogenic properties of 3,9dihydroxybenz[a]- anthracene, a potential metabolite of benz[a]anthracene. J Natl Cancer Inst 57:13511354 (1976). 161. Ebright, R.H.; Wong, J.R.; Chen, L.B. Binding of 2-hydroxybenzo(a)pyrene to estrogen receptors in rat cytosol. Cancer Res 46:23492351 (1986). 162. Sheen, Y.Y.; Kim, S.S.; Yun, H.C. Effect of 3methylcholanthrene on the rat uterus: uterine

CHICHIZOLA, C.

99

growth and mechanism of action of 3-methylcholanthrene. Arch Pharmacal Res 16:276282 (1993). 163. Arcaro, K.F.; OKeefe, P.W.; Yang, Y. y col. Antiestrogenicity of environmental polycyclic aromatic hydrocarbons in human breast cancer cells. Toxicology 133:115127 (1999). 164. Fertuck, K.C.; Kumar, S.; Sikka, H.C. y col. Interaction of PAH-related compounds with the __and __isoforms of the estrogen receptor. Toxicol Lett 121:167177 (2001). 165. Kledzik, G.S.; Bradley, C.J.; Marshall, S. y col. Effects of high doses of estrogen on prolactinbinding activity and growth of carcinogen-induced mammary cancers in rats. Cancer Res 36:32653268 (1976). 166. Jordan, V.C. Laboratory models of breast cancer to aid the elucidation of antiestrogen action. J Lab Clin Med 109:267277 (1987). 167. Rubin, B.S.; Murray, M.K.; Damassa, D.A. y col. Perinatal xposure to low doses of bisphenol A affects body weight patterns of estrous cyclicity, and plasma 1h levels. Environ Health Perspect 109:675680 (2001). 168. Payne, J.; Scholze, M.; Kortenkamp, A. Mixtures of four organochlorines enhance human breast cancer cell proliferation. Environ Health Perspect 109:391397 (2001). 169. Rajapakse, N.; Ong, D.; Kortenkamp, A. Defining the impact of weakly estrogenic chemicals on the action of steroidal estrogens. Toxicol Sci 60:296304 (2001). 170. Hany, J.; Lilenthal, H.; Sarasin, A. y col. Developmental exposure of rats to a reconstituted PCB mixture or Aroclor 1254: effects on organ weights, aromatase activity, sex hormone levels and sweet preference. Toxicol Appl Pharmacol 158:231243 (1999). 171. Du, K.; Chu, S.; Xu, X. Stimulation of MCF-7 cell proliferation by low concentrations of Chinese domestic polychlorinated biphenyls. J Toxicol Environ Health 61:201207 (2000). 172. Mayes, B.A.; Mcconnell, E.E.; Neal, B.H. y col. Comparative carcinogenicity in Spraque-Dawley rats of the polychlorinated biphenyl mixtures Aroclors 1016, 1242, 1254, and 1260. Fundam Appl Toxicol 41:6276 (1998). 173. Bemis, J.C.; Seegal, R.F . Polychlorinated bip-

henyls and methylmercury act synergistically to reduce rat brain dopamine content in vitro. Environ Health Perspect 107:879885 (1999). 174. Guo, Y.L.; Hse, C.C.; Lambert, G.H. Effects of environmental chemicals (EC) on sexual maturation. Pediatr Res 39:74 (1996). 175. Blanck, H.M.; Marcus, M.; Tolbert, P.E. y col. Age at menarche and tanner stage in girls exposed in utero and postnatally to polybrominated biphenyl. Epidemiology 11:641647 (2000). 176. Pauwels, A.; Cenijn, P.; Covaci, A. Analysis of PCB congeners by GC-ECD and dioxin-like toxic equivalents (by CALUX assay) in females with endometriosis and other fertility problems. Organohal Comp 44:407410 (1999). 177. Carpenter, D.O.; Shen, Y.; Nguyen, T. y col. Incidence of endocrine disease among residents of New York Areas of Concern. Environ Health Perspect 109(6):845851 (2001). 178. Rier, S.E.; Turner, W.E.; Martin, D.C. y col. Serum levels of TCDD and dioxin-like chemicals in rhesus monkeys chronically exposed to dioxin: correlation of increased serum PCB levels with endometriosis. Toxicol Sci 59:147159 (2001). 179. Pines, A.; Cucos, S.; Ever-Hardani, P. y col. Some organochlorine insecticide and polychlorinated biphenyl blood residues in infertile males in the general Israeli population of the middle 1980s. Arch Environ Contam Tox 16:587597 (1987). 180. Bush, B.; Bennett, A.H.; Snow, J.T . Polychlorobiphenyl congeners, p,p-DDE, and sperm function in humans. Arch Environ Contam Tox 15:333341 (1986). 181. Emmett, E.A.; Maroni, M.; Jefferys, J. y col. Studies of transformer repair workers exposed to PCBs. II: Results of clinical laboratory investigations. Am J Ind Med 14:4762 (1988). 182. Apostoli, P.; Kiss, P.; Por ru, S. y col. ASCLEPIOS study group. Male reproductive toxicity of lead in animals and humans. Occup Environ Med 55:364374 (1998). 183. Sallmen, M.; Lindbohm, M.L.; Nurminen, M. Paternal exposure to lead and infertility. Epidemiology 11:148152 (2000). 184. Lancranjan, I.; Popescu, H.I.; Gavanescu, O. y col. Reproductive ability of orkmen occupationally exposed to lead. Arch Environ Health

100

DISRUPTORES ENDOCRINOS

RAEM 2004 Vol 41 No. 2

30:396401 (1975). 185. Telisman, S.; Cvitkovic, P.; Jurasovic, J. y col. Semen quality and reproductive endocrine function in relation to biomarkers of lead, cadmium, zinc, and copper in men. Environ Health Perspect 108:4553 (2000). 186. Venitt, S. Mechanisms of carcinogenesis and individual susceptibility to cancer. Clin Chem 40:14371425 (1994). 187. Liehr, J.G. Dual role of oestrogens as hormones and procarcinogens tumor initiation by metabolic activation of oestrogens. Eur J Cancer Prev 6:310 (1997). 188. Liehr, J.G . Genotoxicology of the steroidal oestrogens and oestradiol: possible mechanism of uterine and mammary cancer development. Hum Reprod Update 7:273281 (2001). 189. Bradlow, H.L.; Hershcopf, R.J.; Martucci, C.P. y col. Estradiol 16_-hydroxylation in the mouse correlates with mammary tumor incidence and presence of murine mammary tumor virus: a possible model for the hormonal etiology of breast cancer in humans. Proc Natl Acad Sci U S A 82:62956299 (1985). 190. Schneider, J.; Kinne, D.; Fracchia, A. y col. Abnormal oxidative metabolism of estradiol in women with breast cancer. Proc Natl Acad Sci U S A 79:30473051 (1982). 191. Tsutsui, T.; Suzuki, N.; Fukuda, S. y col. 17Estradiol-induced cell transformation and aneuploidy of Syrian hamster embryo cells in culture. Carcinogenesis 8:17151719 (1987). 192. Bar rett, J.C.; Wong, A.; McLachlan, J.A. Diethylstibestrol induces neolpastic transformation without measurable gene mutation at two loci. Science 212:14021404 (1981). 193. Li, J.J.; Li, S.A. Estrogen carcinogenesis in the hamster kidney: a hormone-driven multi-step process. In: Cellular Molecular Mechanisms of Hormonal Carcinogenesis: Environmental Influences (Huff J, Boyd J, Barrett JC, eds). Philadelphia: Wiley-Liss, 1996; 255267. 194. Cavalieri, E.L.; Stack, D.E.; Devanesan, P.D. y col. Molecular origin of cancer: catechol estrogen-3,4-quinones as endogenous tumor initiators. Proc Natl Acad Sci U S A 94:1093710942 (1997). 195. Nutter, L.M.; Ngo, E.O.; Abul-Hajj, Y.Y . Cha-

racterization of DNA damage induced by 3,4estrone-o-quinone in human cells. J Biol Chem 226:1638016386 (1991). 196. Nutter, L.M.; Wu, Y.Y.; Ngo, E.O. An o-quinone form of estrogen produces free radicals in human breast cancer cells: correlation with DNA-damage. Chem Res Toxicol 7:273281 (2001). 197. Gray, Jr. L.E.; Kelce, W.R.; Wiese, T. y col. 1997 Endocrine Screening Methods Workshop report: detection of estrogenic and androgenic hormonal and antihormonal activity for chemicals that act via receptor or steroidogenic enzyme mechanisms. Reprod Toxicol 11:719750 198. New Approaches for Estimating Risk from Exposure to Diethylbestrol.Gerald.Cunha.EHP107,suppl4:625-630.1999 199. Santti, R.; Newbold, R.R.; Makela, S. y col. 1994 Developmental estrogenization and prostatic neoplasia. Prostate 24:6778 200. Bibbo, M.; Al-Naqeeb, M.; Baccarini, I. y col. 1975 Follow-up study of male and female offspring of DES-treated mothers a preliminary report. J Reprod Med 15:2932 201. Bibbo, M.; Ali, I.; Al-Naqeeb, M. y col. 1975 Cytologic findings in female and male offspring of DES treated mothers. Acta Cytol 19:568572 202. Gill, W.B.; Schumacher, G.F.; Bibbo, M. 1977 Pathological semen and anatomical abnormalities of the genital tract in human male subjects exposed to diethylstilbestrol in utero. J Urol 117:477480 203. Gill, W.B.; Schumacher, G.F.; Bibbo, M. y col. 1979 Association of diethylstilbestrol exposure in utero with cryptorchidism, testicular hypoplasia and semen abnormalities. J Urol 122:3639 204. Conley, G.R.; Sant, G.R.; Ucci, A.A. y col. 1983 Seminoma and epididymal cysts in a young man with known diethylstilbestrol exposure in utero. JAMA 249:13251326 205. Wilcox, A.J.; Baird, D.D.; Weinberg, C.R. y col. 1995 Fertility in men exposed prenatally to diethylstilbestrol. N Engl J Med 332:14111416 206. Kaplan, N.M. 1959 Male pseudohermaphrodism. N Engl J Med 261:641644 207. Davis, M.E.; Potter, E.L. 1948 The response of the human fetal reproductive system to the ad-

CHICHIZOLA, C.

101

ministration of diethylstilbestrol and testosterone propionate during early pregnancy. Endocrinology 42:370378 208. Leoni, V.; Fabiani y col. PCB and other organochlorine compounds in blood of women with or without miscarriage: a hypothesis of correlation. Ecotoxicol Environ Saf. 1989 Feb; 17(1):1-11. 209. Schantz, S.; Widholm, J. 2001. Cognitive effects of endocrine disrupting chemicals in animals.EHP 109:1197-1206. 210. Hanser, R. 2001.Environmental Organochlorines and semen quality: Results of a pilot study EHP:110229-233. 211. Qiao, D.; Zeeman, A.M. Molecular characteization of hiwi, a human member of the Pili gene family whose overexpression is correlated to seminomas. Oncogene 2002,jun 6, 21(25).3988-99 212. Pakdel, F.; Le Guellec, C.; Vaillant, C. y col. 1989 Identification and estrogen induction of two estrogen receptors (ER) messenger ribonucleic acids in the rainbow trout liver: sequence homology with other ERs. Mol Endocrinol 3:4451 213. Jirtle, R.L. 1999 Genomic imprinting and cancer. Exp Cell Res 248:1824 214. Gyorgypal, Z.; Kondorosi, A. 1991 Homology of the ligand-binding regions of Rhizobium symbiotic regulatory protein NodD and vertebrate nuclear receptors. Mol Gen Genet 226:337340 215. Nelson, K.G.; Sakai, Y.; Eitzman, B. y col. 1994 Exposure to diethylstilbestrol during a critical developmental period of the mouse reproductive tract leads to persistent induction of two estrogen-regulated genes. Cell Growth Differ 5:595606 216. Li, S.; Washburn, K.A.; Moore, R. y col. 1997 Developmental exposure to diethylstilbestrol elicits demethylation of estrogen-responsive lactoferrin gene in mouse uterus. Cancer Res 57:43564359 217. Newbold, R.R.; Bullock, B.C.; McLachlan, J.A. 1990 Uterine adenocarcinoma in mice following developmental treatment with estrogens: a model for hormonal carcinogenesis. Cancer Res 50:76777681 218. Ferguson, A.T.; Evron, E.; Umbricht, C.B. y col. 2000 High frequency of hypermethylation at

the 143-3 sigma locus leads to gene silencing in breast cancer. Proc Natl Acad Sci USA 97:60496054 219. Hertz, R. 1976 The estrogen-cancer hypothesis. Cancer 38:534540 220. Degen, G.H.; Metzler, M. 1987 Sex hormones and neoplasia: genotoxic effects in short term assays. Arch Toxicol Suppl 10:264278 221. Bar rett, J.C.; Wong, A.; McLachlan, J.A. 1981 Diethylstilbestrol induces neoplastic transformation without measurable gene mutation at two loci. Science 212:14021404 222. McLachlan, J.A.; Wong, A.; Degen, G.H. y col. 1982 Morphologic and neoplastic transformation of Syrian hamster embryo fibroblasts by diethylstilbestrol and its analogs. Cancer Res 42:30403045 223. Tsutsui, T.; Maizumi, H.; McLachlan, J.A. y col. 1983 Aneuploidy induction and cell transformation by diethylstilbestrol: a possible chromosomal mechanism in carcinogenesis. Cancer Res 43:38143821 224. Li, J.J.; Li, S.A. 1990 Estrogen carcinogenesis in hamster tissues: a critical review. Endocr Rev 11:524531 225. Tomooka, Y.; DiAugustine, R.P.; McLachlan, J.A. 1986 Proliferation of mouse uterine epithelial cells in vitro. Endocrinology 118:10111018 226. Nelson, K.G.; Takahashi, T.; Bossert, N.L. y col. 1991 Epidermal growth factor replaces estrogen in the stimulation of female genital-tract growth and differentiation. Proc Natl Acad Sci USA 88:2125 227. Ignar-Trowbridge, D.M.; Nelson, K.G.; Bidwell, M.C. y col. 1992 Coupling of dual signaling pathways: epidermal growth factor action involves the estrogen receptor. Proc Natl Acad Sci USA 89:46584662 228. Curtis, S.W.; Washburn, T.; Sewall, C. y col. 1996 Physiological coupling of growth factor and steroid receptor signaling pathways: estrogen receptor knockout mice lack estrogen-like response to epidermal growth factor. Proc Natl Acad Sci USA 93:1262612630 229. Newbold, R.R.; Hanson, R.B.; Jefferson, W.N. y col. 1998 Increased tumors but uncompromised fertility in the female descendants of mice exposed developmentally to diethylstilbestrol.

102

DISRUPTORES ENDOCRINOS

RAEM 2004 Vol 41 No. 2

Carcinogenesis 19:16551663 230. Newbold, R.R.; Hanson, R.B.; Jefferson, W.N. y col. 2000 Proliferative lesions and reproducti ve tract tumors in male descendants of mice exposed developmentally to diethylstilbestrol. Carcinogenesis 21:13551363 231. Andres, A.C.; Muellener, D.B.; Ryffel, G.U. 1984 Persistence, methylation and expression of vitellogenin gene derivatives after injection into fertilized eggs of Xenopus laevis. Nucleic Acids Res 12:22832302 232. Baker, H.J.; Shapiro, D.J. 1978 Rapid accumulation of vitellogenin messenger RNA during secondary estrogen stimulation of Xenopus laevis. J Biol Chem 253:45214524 233. Corthesy, B.; Leonnard, P.; Wahli, W . 1990 Transcriptional potentiation of the vitellogenin B1 promoter by a combination of both nucleosome assembly and transcription factors: an in vitro dissection. Mol Cell Biol 10:39263933 234. Edinger, R.S.; Mambo, E.; Evans, M.I. 1997 Estrogen-dependent transcriptional activation and vitellogenin gene memory. Mol Endocrinol 11:19851993 235. Farmer, S.R.; Henshaw, E.C.; Berridge, M.V. y col. 1978 Translation of Xenopus vitellogenin mRNA during primary and secondary induction. Nature 273:401403 236. Folger, K.; Anderson, J.N.; Hayward, M.A. y col. 1983 Nuclease sensitivity and DNA methylation in estrogen regulation of Xenopus laevis vitellogenin gene expression. J Biol Chem 258:89088914 237. Gerber-Huber, S.; Felber, B.K.; Weber, R. y col. 1981 Estrogen induces tissue specific changes in the chromatin conformation of the vitellogenin genes in Xenopus. Nucleic Acids Res 9:24752494 238. Gschwendt, M.; Rincke, G.; Schuster, T. 1982 The estrogen-induced vitellogenin synthesis in chicken liver after estrogen withdrawal or antiestrogen treatment. Mol Cell Endocrinol 26:231242 239. Moore, R.W.; Potter, C.L.; Theobald, H.M. y col. Androgenic deficiency in male rats treated with 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin. Toxicol Appl Pharmacol 79:9911(1985). 240. Mably, T.A.; Moore, R.W.; Peterson, R.E. In utero and lactational exposure of male rats to

2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin. 1: Effects of androgenic status.Toxicol Appl Pharmacol 114: 97107 (1992). 241. Mably, T.A.; Moore, R.W.; Goy, R.W. y col. In utero and lactational exposure of male rats to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin. 2: Effects of sexual behavior and the regulation of uteinizing hormone secretion in adulthood. Toxicol Appl Pharmacol 114:108117 (1992). 242. Mably, T.A.; Bjerke, D.L.; Moore, R.W. y col. In utero and lactational exposure of male rats to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin. 3: Effects on spermatogenesis and reproductive capability. Toxicol Appl Pharmacol 114:118126 (1992). 243. Bjerke, D.L.; Peterson, R.E. Reproductive toxicity of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin in male rats: differenteffects of in utero versus lactational exposure. Toxicol Appl Pharmacol 127:241249 (1994). 244. Bjerke, D.L.; Sommer, R.J.; Moore, R.W. y col. Effects of in utero and lactational 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-pdioxin exposure on responsiveness of the male rat reproductive system to testosterone stimulation in adulthood. Toxicol Appl Pharmacol 127:250257 (1994). 245. Bjerke, D.L.; Brown, T.J.; MacLusky, N.J. y col. Partial demasculinization and feminization of sex behavior in male rats by in utero and lactational exposure to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-pdioxin is notassociated with alterations in estrogen receptor binding or volumes of sexually differentiated brain nuclei. Toxicol Appl Pharmacol 127:258267 (1994). 246. Gray, L.E. Jr.; Kelce, W.R.; Monosson, E. y col. Exposure to TCDD during development permanently alters reproductive function in male Long Evans rats and hamsters: reduced ejaculated and epididmymal sperm numbers and sex accessory gland weights in offspring with normal androgenic status. Toxicol Appl Pharmacol 131:108118 (1995). 247. Gray, L.E.; Ostby, J.S.; Kelce, W .R. A dose-reponse analysis of the reproductive effects of a single gestational dose of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-pdioxin in male Long Evans hooded rat offspring. Toxicol Appl Pharmacol 146:1120 (1997). 248. Moore, R.W.; Peterson, R.E. Androgen catabo-

CHICHIZOLA, C.

103

lism and excretion in 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-treated rats. Biochem Pharmacol 37:560562 (1988). 249. McGivern, R.F.; Sokol, R.Z.; Berman, N.G. Prenatal lead exposure in the rat during the third week of gestation: longterm behavioral, physiological, and anatomical effects associated with reproduction. Toxicol Appl Pharmacol 110:206215 (1991). 250. Ronis, M.J.; Gandy, J.; Badger, T . Endocrine mechanisms underlying reproductive toxicity in the developing rat chronically exposed to dietary lead. J Toxicol Environ Health 54:7799 (1998). 251. Sokol, R.Z.; Madding, C.E.; Swerdloff, R.S. Lead toxicity and the hypothalamic-pituitarytesticular axis. Biol Reprod 33:722728 (1985). 252. Thoreux-Manlay, A.; Le Goascogne, C.; Segr etain, D. y col. Lead affects steroidogenesis in rat Leydig cells in vivo and in vitro. Toxicology 103:5362 (1995). 253. Cooke, P.S.; Zhao, Y.D.; Hansen, L.G. Neonatal polychlorinated biphenyl treatment increases adult testis size and sperm production in the rat. Toxicol Appl Pharmacol 136:112117 (1996). 254. Machala, M.; Neca, J.; Drabek, P. y col. Effects of chronic exposure to PCBs on cytochrome P450 systems and steroidogenesis in liver and testis of bulls (Bos taurus). Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol 120:6570 (1998). 255. Haake-McMillan, J.M.; Safe, S.H. Neonatal exposure to Aroclor 1254: effects on adult hapatic testosterone hydroxylase activities. Xenobiotica 21:481489 (1991). 256. Minassian, E.S.; Terner, C. Biosynthesis of lipids by human fish spermatozoa. Am J Physiol 210:615618 (1996). 257. Kodama, H.; Yamaguchi, R.; Fukuda, J. y col. Increased oxidative deoxyribonucleic acid damage in the spermatozoa of infertile male patients. Fertil Steril 68:519524 (1997). 258. Ni, Z.Y.; Liu, Y.Q.; Shen, H.M. y col. Does the increase of 8-hydroxydeoxyguanosine lead to poor sperm quality? Mutat Res 381:7782 (1997). 259. Geva, E.; Bartoov, B.; Zabludovsky, N. y col. The effect of antioxidant on human spermatozoa and fertilization rate in an in vitro fertilization program. Fertil Steril 66:430434 (1996).

260. Fraga, C.G.; Motchink, P.A.; Shigenaga, M.K. y col. Ascorbic acid protects against endogenous oxidative DNA damage in human sperm. Proc Natl Acad Sci U S A 88:1100311006 (1991). 261. Hsu, P.C.; Liu, M.Y.; Hsu, C.C. y col. Lead exposure causes generation of reactive oxygen species and functional impairment in rat sperm. Toxicology 122:133143 (1997). 262. Marchlewicz, M.; Protasowicki, M.; Rozewicka, L. y col. Effect of long-term exposure to lead on testis and epididymis in rats. Folia Histochem Cytobiol 31:5562 (1993). 263. Emmen, J.M.; McLuskey, A.; Adham, I.M. y col. 2000 Involvement of insulin-like factor 3 (Insl3) in diethylstilbestrol-induced cryptorchidism. Endocrinology 141:846849 264. Nef, S.; Parada, L.F . 1999 Cryptorchidism in mice mutant for Insl3. Nat Genet 22:295299 265. Zimmermann, S.; Steding, G.; Emmen, J.M. y col. 1999 Targeted disruption of the Insl3 gene causes bilateral cryptorchidism. Mol Endocrinol 13:681691 266. Haraguchi, R.; Suzuki, K.; Murakami, R. y col. 2000 Molecular analysis of external genitalia formation: the role of fibroblast growth factor (Fgf) genes during genital tubercle formation. Development 127:24712479 267. Newbold, R.R.; Suzuki, Y.; McLachlan, J.A. 1984 Mllerian duct maintenance in heterotypic organ culture after in vivo exposure to diethylstilbestrol. Endocrinology 115:18631868 268. Visser, J.A.; McLuskey, A.; Verhoef-Post, M. y col. 1998 Effect of prenatal exposure to diethylstilbestrol on Mllerian duct development in fetal male mice. Endocrinology 139:42444251 269. Ma, L.; Benson, G.V.; Lim, H. y col. 1998 Ab dominal B (AbdB) Hoxa genes: regulation in adult uterus by estrogen and progesterone and repression in Mllerian duct by the synthetic estrogen diethylstilbestrol (DES). Dev Biol 197:141154 270. Ostrowski, M.C.; Kistler, M.K.; Kistler, W.S. 1979 Purification and cell-free synthesis of a major protein from rat seminal vesicle secretion. A potential marker for androgen action. J Biol Chem 254:383390 271. Harris, S.E.; Mansson, P.E.; Tully, D.B. y col. 1983 Seminal vesicle secretion IV gene: allelic

104

DISRUPTORES ENDOCRINOS

RAEM 2004 Vol 41 No. 2

difference due to a series of 20-base-pair direct tandem repeats within an intron. Proc Natl Acad Sci USA 80:64606464 272. Teng, C.T.; Walker, M.P.; Bhattacharyya, S.N. y col. 1986 Purification and properties of an oestrogen-stimulated mouse uterine glycoprotein (approx. 70 kDa). Biochem J 240:413422 273. Pentecost, B.T.; Teng, C.T . 1987 Lactotransferrin is the major estrogen inducible protein of mouse uterine secretions. J Biol Chem 262: 1013410139 274. Teng, C.T.; Pentecost, B.T.; Chen, Y.H. y col. 1989 Lactotransferrin gene expression in the mouse uterus and mammary gland. Endocrinology 124:992999 275. Pentecost, B.T.; Newbold, R.R.; Teng, C.T. y col. 1988 Prenatal exposure of male mice to diethylstilbestrol alter the expression of the lactotransferrin gene in seminal vesicles. Mol Endocrinol 2:12431248 276. Newbold, R.R.; Pentecost, B.T.; Yamashita, S. y col. 1989 Female gene expression in the seminal vesicle of mice after prenatal exposure to diethylstilbestrol. Endocrinology 124:25682576 277. Beckman, Jr. W.C.; Newbold, R.R.; Teng, C.T . y col. 1994 Molecular feminization of mouse seminal vesicle by prenatal exposure to diethylstilbestrol: altered expression of messenger RNA. J Urol 151:13701378300. 278. Jordan, B.K.; Mohammed, M.; Chiung, S.T. y col. 2001 Upregulation of WNT-4 signaling and dosage-sensitive sex reversal in humans. Am J Hum Genet 68:11021109 279. Lopez-Carrillo, L. y col. Serum levels of betahexachlorocyclohexane, hexachlorobenzene and polychlorinated biphenyls and breast cancer in Mexican women. Eur J Cancer Prev. 2002 Apr;11(2):129-35. 280. Allam, M.F.; Lucena, R.A. Breast cancer and PCBs: true or false association? Eur J Cancer Prev. 2001 Dec;10(6):539-40. No abstract available. 281. Demers, A.; Ayotte, P. y col. Plasma concentrations of polychlorinated biphenyls and the risk of breast cancer: a congener-specific analysis. Am J Epidemiol. 2002 Apr 1;155(7):629-35. 282. Charlier, C.; Plomteux, G. [Environmental chemical pollution and risk of human exposure: the role of organochlorine pesticides] Ann Biol

Clin (Paris). 2002 Jan-Feb;60(1):37-46. French. 283. Moysich, K.B. y col. Exposures associated with serum organochlorine levels among postmenopausal women from western New York State. Am J Ind Med. 2002 Feb;41(2):102-10. 284. Ahmed, M.T. y col. Residue levels of DDE and PCBs in the blood serum of women in the Port Said region of Egypt. J Hazard Mater. 2002 Jan 4;89(1):41-8. 285. Woolcott, C.G. y col. Organochlorines and breast cancer risk by receptor status, tumor size, and grade (Canada).Cancer Causes Control. 2001 Jun;12(5):395-404. 286. Desaulniers, D. y col. Modulatory effects of neonatal exposure to TCDD, or a mixture of PCBs, p,p'-DDT, and p-p'-DDE, on methylnitrosourea-induced mammary tumor development in the rat. Environ Health Perspect. 2001 Jul;109(7):739-47. 287. Laden, F.; Collman, G. y col. 1,1-Dichloro-2,2bis(p-chlorophenyl)ethylene and polychlorinated biphenyls and breast cancer: combined analysis of five U.S. studies. J Natl Cancer Inst. 2001 May 16;93(10):768-76. 288. Laden, F. Hankinson y col. Plasma organochlorine levels and the risk of breast cancer: an extended follow-up in the Nurses' Health Study. Int J Cancer. 2001 Feb 15;91(4):568-74. 289. Serum Dioxin Concentrations and Breast cancer in the Seveso womens Healthy Study. Marcello Warner y col..EHP.110:625-628. N7, july 2002. 290. Bernstein, L.; Ross, R. Endogenous hormones and breast cancer risk. Epidemiol Rev 15:4865 (1993). 291. Goldin, B.R.; Adlercreutz, H.; Gorbach, S.L. y col. The relationship between estrogen levels and diets of Caucasian American and Oriental immigrant women. Am J Clin Nutr 44:945953 (1986). 292. Key, T.J.A.; Chen, J.; Wang, D.Y. y col. Sex hormones in women in rural China and Britain. Br J Cancer 62:631636 (1990). 293. Shimizu, H.; Ross, R.K.; Bernstein, L. y col. Serum estrogen levels in postmenopausal women: comparison of US whites and Japanese in Japan. Br J Cancer 62:451454 (1990). 294. Ursin, G.; Wilson, M.; Henderson, B.E. y col. Do urinary estrogen metabolites reflect the

CHICHIZOLA, C.

105

differences in breast cancer risk between Singapore Chinese and United States African-American and white women? Cancer Res 61:33263329 (2001). Reviews, 2002 o Carpenter et al. 38 VOLUME 110 | SUPPLEMENT 1 | February 2002 o Environmental Health Perspectives. 295. Davis, D.L.; Bradlow, H.L.; Wolff, M. y col. Medical hypothesis: xenoestrogens as preventable causes of breast cancer. Environ Health Perspect 101:372377 (1993). 296. Dorgan, J.F.; Brock, J.W.; Rothman, N. y col. Serum organochlorine pesticides and PCBs and breast cancer risk: results from a prospective analysis (USA). Cancer Causes Control 10:111 (1999). 297. Wolff, M.S.; Toniolo, P.G. Environmental organochlorine exposure as a potential etiologic factor in breast cancer.Environ Health Perspect 103:141145 (1995). 298. Safe, S.H. Interactions between hormones and chemicals in breast cancer. Annu Rev Pharmacol Toxicol 38:121158 (1998). 299. Falck, F. Jr.; Ricci, A. Jr.; W olff, M.S. y col. Pesticides and polychlorinated biphenyl residues in human breast lipids and their relation to breast cancer. Arch Environ Health 47:143146 (1992). 300. Wolff, M.S.; Toniolo, P.G.; Lee, E.W. y col. Blood levels of organochlorine residues and risk of breast cancer. J Natl Cancer Inst 85:648652 (1993). 301. Dewailly, E.; Dodin, S.; Ver reault, R. y col. High organochlorine body burden in women with estrogen receptor-positive breast cancer. J Natl Cancer Inst 86:232234 (1994). 302. Guttes, S.; Failing, K.; Neumann, K. y col. Chloroganic pesticides and polychlorinated biphenyls in breast tissue of women with benign and malignant breast disease. Arch Environ Contam Toxicol 35:140147 (1998). 303. Unger, M.; Kiaer, H.; Blichert-Toft, M. y col. Organochlorine compounds in human breast fat from deceased with and without breast cancer and in a biopsy material from newly diagnosed patients undergoing breast surgery. Environ Res 34:2428 (1984). 304. Kreiger, N.; Wolff, M.S.; Hiatt, R.A. y col. Breast cancer and serum organochlorines: a

prospective study among white, black and Asian women. J Natl Cancer Inst 86:589599 (1994). 305. Hunter, D.J.; Hankinson, S.E.; Laden, F. y col. Plasma organochlorine levels and the risk of breast cancer. N Engl J Med 337:12531258 (1997). 306. Lopez-Car rillo, L.; Blair, A.; Lopez-Cervantes, M. y col. Dichlorodiphenyltrichloroethane serum levels and breast cancer risk: a case control study from Mexico. Cancer Res 57:37283732 (1997). 307. Vant Veer, P.; Lobbezoo, I.E.; Martin-Moreno, J.M. y col. DDT (dicophane) and postmenopausal breast cancer in Europe: case-control study. Br Med J 315:8185 (1997). 308. Laden, F.; Collman, G.; Iwamoto, K. y col. 1,1Dichloro-2,2-bis(pchlorophenyl) ethylene and polychlorinated biphenyls and breast cancer: combined analysis of five US studies. J Natl Cancer Inst 93:768776 (2001). 309. Feigelson, H.S.; Ross, R.K.; Yu, M.C. y col. Sex steroid hormones and genetic susceptibility to breast and prostate cancer. Drug Metab Rev 30:421434 (1998). 310. Feigelson, H.S.; McKean-Cowdin, R.; Coetzee, G.A. y col. Building a multigenic model of breast cancer susceptibility: CYP17 and HSD17B1. Cancer Res 61:785789 (2001). 311. Moysich, K.B.; Shields, P.G.; Freudenheim, J.L. y col. Polychlorinated biphenyls, cytochrome P4501A1 polymorphism, and postmenopausal breast cancer risk. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 8:4144 (1999). 312. Millikan, R.; DeVoto, E.; Duell, E.J. y col. Dichlorodiphenyldichlorethane, polychlorinated biphenyls, and breast cancer among AfricanAmerican and white women in North Carolina. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 9:12331240 (2000). 313. Rundle, A.; Tang, D.; Hibshoosh, H. y col. The relationship between genetic damage from polycyclic aromatic hydrocarbons in breast tissue and breast cancer. Carcinogenesis 7:12811289 (2000). 314. Rundle, A.; Tang, D.; Zhou, J. y col. The association between glutathione S-transferase M1 genotype and polycyclic aromatic hydrocarbonDNA adducts in breast tissue. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 10:10791085 (2000).