REPRODUCCIN IN VITRO DEL ERIZO DE MAR

El erizo de mar Tetrapygus niger es muy utilizado en estudios reproductivos ya que es fcil obtener sus gametos y realizar fecundaciones, adems las etapas de desarrollo pueden ser identificadas claramente. A travs de esta actividad los alumnos pueden realizar una fecundacin in vitro del erizo de mar y observar las diferentes fases del desarrollo hasta llegar a la larva pluteus.
OBJETIVOS ESPECFICOS Se espera que los alumnos y alumnas: conozcan una de las tcnicas utilizadas para la obtencin de gametos en el erizo de mar. Realicen el proceso de fecundacin en esta especie marina, aplicando tcnicas de fecundacin in vitro. Sean capaces de identificar tanto los gametos como los diferentes estados del desarrollo embrionario en esta especie. Comprendan cmo afecta la intervencin humana a la reproduccin del erizo y la asocien a los efectos que se producen en la reproduccin de otros organismo marinos. SUGERENCIAS METODOLGICAS Para esta actividad se requieren erizos (los negros son ms fciles de conseguir), esta especie vive en la parte ms baja del intermareal rocoso. Puedes organizar una salida a terreno para su colecta, siguiendo las indicaciones explicadas en otras guas para el trabajo con marea baja, la otra opcin es encargar 15 erizos negros en una caleta de pescadores o en el terminal pesquero. (Los erizos deben ser de tamaos superiores a los 6 cm de dimetro) El KCl se prepara siguiendo los siguientes pasos: 1.- Depositar 37.3 gramos de KCl en un matraz de aforo. 2.- Agregar agua destilada hasta completar un litro. 3.- Mezclar. (para preparar 100 ml. de solucin se requieren 3.73 gr. de KCl) Otro aspecto importante a considerar es que el agua de mar debe estar lo mas limpia posible, sera ideal
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un proceso de filtracin, sin embargo lo que se puede realizar es mantener el agua durante un par de das en un recipiente sin moverla para decantar toda la materia en suspencin, luego trasladarla a otro recipiente con mucho cuidado. Es aconsejable tambin realizar una esterilizacin del agua, este proceso puede ser sencillo, podras mantener a "Bao Mara" un recipiente con el agua de mar, durante 45 minutos a temperatura de 100C. De esta manera se evita la contaminacin del agua durante el desarrollo embrionario. Es importante la disposicin de los microscopios en tu establecimiento, debido a que es una experiencia bsicamente de observacin es ideal que los alumnos y alumnas tengan suficiente tiempo para observar cada muestra. Los grupos ojal sean de dos personas, en caso contrario puede dividir al curso y realizar la experiencia en das diferentes. Por ltimo la actividad implica que los alumnos deben observar el desarrollo del erizo durante varios das y a diferentes intervalos de tiempo, por tanto es bueno asegurarse que observen las muestras en los tiempos correspondientes. CONTENIDOS: Los estudios en erizos de mar proporcionan informacin sobre la fecundacin y el desarrollo embrionario, siendo un modelo de desarrollo del embrin. El tamao de los gametos en erizo es muy similar al de los gametos humanos. Qu es la fecundacin? Es la unin de dos gametos distintos espermatozoide (masculino) y ovocito (femenino) respectivamente, seguida de la unin de los proncleos de ambos gametos.

REPRODUCCIN IN VITRO DEL ERIZO DE MAR Gnadas en el erizo de mar Los Echinoideos (erizos de mar), son todos diocos, es decir tienen sexos separados. Por lo general, existen cinco gnadas dispuestas en el lado interno del caparazn. De cada una parte un conducto denominado gonoducto que se abre por un orificio llamado gonoporo localizado en la zona aboral (parte superior del erizo). Obtencin de gametos Existen diversas tcnicas a travs de las cuales se pueden obtener los gametos en un organismo vivo. Consisten bsicamente en estmulos que se aplican al animal en todo el cuerpo o en sectores localizados con el fin de alterar sus gnadas e inducir la liberacin de los gametos. Existen tres mtodos empleados: Estmulo Qumico, Estmulo Fsico y Estmulo Elctrico. El estmulo qumico consiste en la aplicacin de un compuesto qumico o reactivo en el individuo, el cual acta directamente sobre las gnadas induciendo la salida de los gametos. El estmulo fsico de basa en la aplicacin de un agente fsico sobre el individuo como "shocks" trmicos, salinos o estimulacin por masajes, como en el caso de los peces. El estmulo elctrico consiste en aplicar pequeos golpes de electricidad de bajo voltaje, lo que cambia la polaridad de las membranas de las gnadas, permitiendo con ello la salida de los gametos. Esta tcnica es usada generalmente en camarones. Fecundacin en organismos marinos El proceso de la fecundacin comienza con la interaccin del espermatozoide con el ovocito maduro. La primera interaccin consiste en el contacto del espermatozoide con la cubierta ms externa del ovocito, esto desencadena una serie de reacciones, entre ellas la reaccin del espermatozoide, lo que permite finalmente la incorporacin y dispersin del material gentico al interior del ovocito. En los erizos la primera interaccin de los gametos ocurre en la cubierta de gelatina externa del ovocito. Esta cubierta posee receptores especie-especficos, que interactan con los receptores de la membrana celular de los espermatozoides, gateando la reaccin del acrosoma. Con esto se desencadena una serie de eventos que llevan a la fusin de la membrana plasmtica del ovocito con la membrana interna del acrosoma. Luego se forma una capa de fecundacin, la que evita la poliesperma. Posteriormente el espermatozoide penetra hacia el interior del ovocito para terminar en la fusin de ambos proncleos. Desarrollo embrionario Luego de la fecundacin, la fusin de ambos gametos forman una nica clula denominada zigoto, con el cual se recupera el nmero inicial de cromosomas del individuo. Con esto se gatilla el inicio de la segmentacin, proceso por el cual, a partir de una clula nica, se suceden una serie de divisiones mitticas hasta llegar al estado de blstula. La segmentacin se inicia con la divisin del ncleo, quedando la clula huevo dividida en dos clulas hijas denominadas blastmeros, cada una de la cuales se divide para en total 4 clulas y de esta manera el aumento de blastmeros crece en forma geomtrica. En esta etapa los blastmeros permanecen unidos dando al cigoto el aspecto de una mora (Estado de Mrula).
ESTADOS DE DESARROLLO EN EL ERIZO DE MAR

HUEVO FECUNDADO 90-110 min

DOS BLASTOMEROS 2,5 h

4 BLASTOMEROS

8 BLASTOMEROS

16 BLASTOMEROS

32 BLASTOMEROS

64 BLASTOMEROS

BLASTULA 24 h

GASTRULA 48 h

PLUTEUS 3 dias

PLUTEUS 5 dias

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REPRODUCCIN IN VITRO DEL ERIZO DE MAR Tras cada divisin los blastmeros son ms pequeos. La Blstula, el ltimo estado de segmentacin, en el cual podemos encontrar 64 blastmeros formando una capa externa de clulas compactas entre s (blastodermo) y con una gran cavidad interna (blastocele) convirtiendo al embrin en una especie de esfera hueca. La siguiente fase es la Gastrulacin, en la cual el blastodermo da origen a las capas germinales, el estado resultante se llama gstrula. Posteriormente la gstrula pasa a formar la larva, en este caso denominada larva pluteus. Esta posee boca, ano y tubo digestivo, su forma es cnica y caracterizada por la presencia de 4 brazos o espinas. En la Figura anexo al final de esta gua se puede apreciar el desarrollo embrionario del erizo y los tiempos en que se produce cada estado. DESARROLLO DE LAS ACTIVIDADES Actividad 1: El erizo de mar y su morfologa. El objetivo de esta actividad es que el alumno logre diferenciar las partes de un erizo. Materiales: slo se necesita papel, lpiz, una bandeja y un erizo por grupo. Sugerencia: se debe instar a observar detalladamente ambos extremos, oral y aboral, debido a que posteriormente la inyeccin del KCl se realizar por el lado oral y la evacuacin de los gametos por el lado aboral. Quizs algunos alumnos o alumnas puedan presentar cierto temores, es importante recalcar que el erizo es un animal inofensivo, sus espinas no poseen ningn tipo de veneno y adems es un organismo herbvoro por lo que su alimentacin es a base de algas. Actividad 2: Obtencin de gametos. El objetivo de esta actividad es que los alumnos y alumnas conozcan la tcnica mediante la cual se obtienen los gametos en el erizo de mar. Materiales: Cada grupo necesita una bandeja, una cpsula de Petri, un vaso precipitado, solucin de KCl 0,5M y un erizo. Sugerencias: Al comenzar esta actividad puedes comentarle que existen otras tcnicas utilizadas por cientficos, tal como se menciona ms arriba. Es importante recalcar que la aplicacin del KCl debe realizarse con mucho cuidado, aunque este reactivo en s mismo no es peligroso, siendo el ingrediente principal en formulaciones substitutas de la sal, la inyeccin en una vena o una arteria puede causar un desequilibrio elctrico en el corazn o en el cerebro dando por resultado la muerte. Se debe inyectar en la cavidad del cuerpo del erizo y no en la boca. Luego se sacude suavemente el erizo para mezclar la solucin de KCl dentro de l. En esta etapa como no sabemos el sexo del erizo se debe esperar la salida de los gametos, depositando los animales en la bandeja, una vez comenzada la salida de gametos, de acuerdo a la coloracin se separan, y se depositan en un vaso o cpsula de Petri con la parte aboral hacia abajo. Cabe mencionar que la coloracin de los gametos es roja para las hembras y blanco para los machos. Actividad 3: Observando los gametos. El objetivo de esta actividad es que los alumnos logren observar y diferenciar los gametos masculinos y femeninos del erizo. Materiales: se requiere de lpiz, papel, dos cubreobjetos, dos portaobjetos, una cpsula de Petri y dos pipetas Pasteur. Sugerencia: se debe poner nfasis en la dilucin de los espermatozoides, ya que es tan alta la concentracin que al no realizar una dilucin sera imposible su observacin. En la siguiente figura se puede ver un esquema con la forma de los espermatozoides. 5 micrones ERIZO DE MAR

Acrosoma

Ncleo

Mitocondra

Flagelo

HUMANO

Actividad 4: La fecundacin. El objetivo de esta actividad es observar el proceso de la fecundacin.

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REPRODUCCIN IN VITRO DEL ERIZO DE MAR Materiales: por grupo se requiere: dos vasos precipitados de 200 ml., 500 ml. de agua de mar, 2 pipetas Pasteur, un portaobjetos y un cubreobjetos. Sugerencia: es importante destacar que por ser un proceso de fecundacin externa, las especies presentan algunos mecanismos para reconocer los gametos de la misma especie, en este caso los ovocitos, poseen una capa de gelatina que reconoce e interacta slo con los espermatozoides de erizos negros. Sin embargo, puedes comentar algunos casos de fecundacin interespecies, como el de asnos y yeguas, dando origen a las mulas. Sin embargo estas especies son hbridos incapaces de reproducirse. Una vez realizada la experiencia, los alumnos podran apreciar la denominada corona de espermios, esto es, varios espermatozoides rodeando al ovocito. Actividad 5: Desarrollo embrionario. El objetivo de esta actividad es observar los diferentes estados de desarrollo de un erizo de mar, desde la primera divisin hasta la fase de Larva Pluteus. Materiales: por grupo se requiere: un vaso precipitado de 200 ml. un portaobjetos, un cubreobjetos y una pipeta Pasteur. En esta etapa, se requiere la observacin en diferentes lapsos de tiempos, incluso, puedes realizar fecundaciones algunas horas antes del laboratorio, para que los alumnos logren apreciar las primeras divisiones, lo que da pie para comentar la importancia de la mitosis y meiosis en estos procesos. EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD Se espera que los estudiantes observen todas las fases del desarrollo, para lo cual se podra solicitar un informe con los diferentes estados, tambin es importante recoger sus opiniones en cuanto al trabajo desarrollado, realizando preguntas sobre la actividad. Se puede tambin realizar una discusin grupal, en la que se toquen diferentes aspectos relacionados con la fecundacin, como, la reproduccin entre especies diferentes, inseminaciones artificiales, etc. CONTINUACIN DE LA ACTIVIDAD Se sugiere algunos trabajos al final de la gua del estudiante, como la observacin de la movilidad de los espermios en medios con diferentes niveles de acidez o en presencia de Informacin erizos http://icarito.tercera.cl/especiales/mes_del_mar/rec ursos/mariscos/erizos.htm http://marenostrum.org/vidamarina/animalia/invert ebrados/equinodermos/equinodermos.htm Informacin completa sobre las reproduccin en erizo de mar, imgenes, grficos, animaciones 3D, materiales, mtodos, etc. http://www.stanford.edu/group/Urchin/contents.html detergentes u otros agentes contaminantes, para relacionarlos con el efecto del hombre y la contaminacin en la reproduccin de organismos marinos. En este caso sera interesante observar el desarrollo embrionario completo, en algunos casos, las larvas presentaran cierto nivel de deformaciones, comparadas con las obtenidas en el proceso de fecundacin in vitro realizada en la actividad 4y 5. Con las observaciones se puede solicitar la realizacin de maquetas (plasticina) o esquemas con los diferentes estados de desarrollo observados. FUENTES DE INFORMACIN Direcciones Internet

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