Manual de Prácticas de Química Analítica II

Manual de prcticas de qumica analtica II
Jos Ramn Verde Calvo Ma. de Lourdes Escamilla Hurtado Alberto Reyes Dorantes Frida Malpica Snchez
Casa abierta al tiempo
UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA

UNIDAD IZTAPALAPA
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Ramn Verde Calvo es egresado de la Facultad de Qumica de la UNAM, en donde obtuvo su ttulo de qumico farmacutico bilogo, tecnlogo en alimentos. Posteriormente realiz sus estudios de maestra en la Facultad de Ciencias de la UNAM. Actualmente trabaja en la UAM-Iztapalapa en el grupo de Enologa y Alimentos Fermentados, en donde lleva a cabo investigaciones sobre el cambio en el color del vino tinto durante el aejamiento. Mara de Lourdes Escamilla Hurtado realiz sus estudios de licenciatura en la Facultad de Qumica de la UNAM, obteniendo el ttulo de qumica farmacutica biloga, orientacin en Tecnologa de Alimentos. Posteriormente obtuvo su grado de maestra en la Universidad de Hiroshima, Japn, en el rea de Tecnologa de Fermentaciones. Posteriormente se ha desarrollado profesionalmente como profesora-investigadora en la Universidad Autnoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa, desde 1982, dirigiendo proyectos sobre fermentaciones lcticas en alimentos indgenas tradicionales, produccin de aromas por fermentacin y enologa, de los cuales surgieron diversas publicaciones nacionales e internacionales. Tambin ha ejercido la docencia, tanto en la UAM-Iztapalapa como en la Facultad de Qumica de la UNAM, formando recursos humanos en los campos de microbiologa y biotecnologa alimentaria.
UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA
Dr. Jos Luis Gzquez Mateos Rector General Lic. Edmundo Jacobo Molina Secretario General
UNIDAD IZTAPALAPA Dr. Luis Mier y Tern Casanueva Rector Dr. Eduardo Carrillo Hoyo Secretario Dr. Jos Luis Arredondo Figueroa Director de la Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud Dr. Gerardo Saucedo Jefe del Departamento de Biotecnologa Ma. del Rosario Hoyos Alea Jefa de la Seccin de Produccin Editorial
Jos Ramn Verde Calvo Ma. de Lourdes Escamilla Hurtado Alberto Reyes Dorantes Frida Malpica Snchez
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Cuidado de la edicin y correccin de estilo: Ma. Guadalupe Olvera Arellano
Primera impresin: 1999
UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA UNIDAD IZTAPALAPA Av. Michoacn y La Pursima Iztapalapa, 09340, Mxico, D.F. ISBN: 970-654-363-5 Impreso y hecho en Mxico / Printed in Mxico
ndice
Presentacin Captulo 1. CROMATOGRAFA DE GASES Prctica 1. Anlisis cualitativo de cromatografa de gases (dos columnas) Prctica 2. Factor de respuesta en cromatografa de gases Bibliografa Captulo 2. CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN Prctica 3. Cuantificacin de una muestra problema de anisaldehdo (mtodo del patrn interno)
9 11
33 37 40
43 63
Prctica 4. Separacin y cuantificacin de una muestra de antocianinas (mtodo del patrn externo) 69 Bibliografa Captulo 3. ESPECTROFOTOMETR A
I. VISIBLE ULTRAVIOLETA
74 75
77
Prctica 5. Desarrollo de un mtodo espectrofotomtrico Prctica 6. Determinacin por espectrofotometra de la concentracin de cobalto y nquel en una mezcla
85
91
II. TURBIDIMETRA
95
Prctica 7. Cuantificacinturbidimtrica de sulfates Bibliografa Captulo 4-MTODOS ELECTROQUMICOS Prctica 8. Determinacin potenciomtnca de constantes de ionizacin Prctica 9, Titulacin potenciomtnca del ferrocianuro con ceno Bibliografa
97 101 103
113 117 125
Presentacin
El presente manual tiene como meta apoyar de la manera ms amplia el curso terico-prctico de Qumica Analtica II, materia que se imparte en el sexto trimestre de las carreras de ingeniera en alimentos e ingeniera bioqumica industrial. El material est elaborado pensando en el sistema trimestral de la Universidad Autnoma Metropolitana, hecho que no restringe que cualquier curso de qumica analtica impartido en otra escuela pueda utilizar este material. En el manual se abordan temas como: cromatografa de gases y de lquidos de alta resolucin, espectrofotometra y potenciometra. Cada captulo est estructurado con una introduccin (los fundamentos tericos necesarios para comprender los temas incluidos en la parte prctica), y presenta la descripcin de los aparatos a utilizar, as como la forma correcta de operarlos. El texto se compone de nueve prcticas, estructuradas con objetivos, introduccin, material y reactivos, normas y reglas de seguridad, tcnicas, tratamiento de datos experimentales, cuestionario y bibliografa. Esta ltima se presenta al final de cada captulo e incluye textos de autores reconocidos, as como revistas con artculos actualizados de apoyo a los experimentos. Para la obtencin de mejores resultados, se recomienda relacionar ampliamente los conceptos tericos con las actividades experimentales.
Los autores
Captulo 1
CROMATOGRAFA DE GASES
Introduccin
Este captulo tiene como objetivo mostrar al alumno los fundamentos prcticos de la cromatografa de gases: cmo funciona un cromatgrafo con detector de conductividad trmica y cmo se obtiene e interpreta el cromatograma, incluyendo una explicacin sobre los clculos para cuantificar muestras a partir de compuestos puros. La cromatografa de gases es la tcnica ms utilizada entre los mtodos instrumentales de separacin, ya que identifica de manera sencilla y rpida el nmero de componentes de una mezcla. El nico requisito para su implementacin es que las sustancias a separar sean estables a la temperatura necesaria para mantenerlas en estado gaseoso (Ewing, 1979).
Clasificacin de la cromatografa
Por sus caractersticas analticas la cromatografa puede ser: a) b) Cromatografa cualitativa, que consiste solamente en la separacin de los componentes de una mezcla. Cromatografa cuantitativa o analtica, que permite identificar y cuantificar cada uno de los componentes de la mezcla.
De acuerdo con la naturaleza de la fase estacionaria, la cromatografa de gases se divide en dos: a) Cromatografa gas slido (CGS), tambin conocida como cromatografa de adsorcin, en donde la fase estacionaria cuenta con un material slido como el slice granular, la almina o el carbn. El soluto se adsorbe en la superficie de las partculas slidas. Las separaciones se llevan a cabo sobre adsorbentes, debido a que se crea un equilibrio entre el adsorbente y las molculas de la fase mvil. Si las molculas de un componente estn estrechamente ligadas al adsorbente, la sustancia
no correr por la columna ya que es retenida fuertemente por sta. Si las molculas tienen una baja atraccin por el adsorbente, tendern a moverse con rapidez junto con la fase mvil (figura 1.1).
Soluto absorbido en la superficie de la fase estacionaria
Figura 1.1 Cromatografa de adsorcin.
La tabla siguiente muestra algunos ejemplos de columnas capilares comerciales, utilizadas en cromatografa gas slido, mencionando su aplicacin y la temperatura mxima de trabajo.
Tabla 1.1 Columnas capilares comerciales.

Columna HPSoM Poraplot Q Temperatura Mxima 200 C 250 C Aplicacin Hidrocarburos, gas natural Alcoholes voltiles en agua,gases Compuestos voltiles polares, aldehidos
Poraplot U
190C
HP Hewlett Packard Columnas capilares, soporte; A12O3
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Cromatografa de gases
b)
Cromatografa gas lquido (CGL) o cromatografa de reparto, en donde la fase estacionaria es una capa delgada de un lquido no voltil, colocada sobre un soporte slido (figura 1.2). La fase estacionaria forma una pelcula delgada en la superficie de un soporte slido. El soluto se equilibra entre este lquido estacionario y una fase mvil gaseosa. La cromatografa de reparto o de particin presenta grandes ventajas, comparada con la cromatografa de adsorcin: es mucho ms reproducible y, gracias a que el coeficiente de particin se hace constante en un margen ms amplio de concentraciones, permite que las bandas sean ms definidas y mucho ms simtricas.
Soluto disuelto en la fase lquida que recubre la superficie del soporte slido
Figura 1.2 Cromatografa de reparto.
El soporte slido ideal no debe tener efecto en el proceso cromatogrfico, slo debe servir como matriz mecnica para la fase lquida. El soporte ms comn es la tierra de diatomeas, tambin conocida como kieselguhr, material muy poroso que contiene muchos grupos oxidrilo libres en su superficie.
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Componentes importantes de un cromatgrafo de gases

Uno de los puntos ms importantes a considerar en la cromatografa de gases, es el grado de separacin que puede lograrse entre diferentes componentes en una columna dada. Son varios los factores que pueden influir en la separacin deseada: dimensiones de la columna, temperatura, velocidad de flujo del gas acarreador, volumen de la muestra y cada de presin en la columna. Existen dos diferentes tipos de columnas: las empacadas y las capilares. En las primeras el soporte se encuentra empacado en tubos de acero inoxidable o vidrio, que comnmente tienen un dimetro de 3 a 6 mm y de uno a cinco metros de longitud. Las columnas con mayor dimetro son utilizadas en trabajos de preparacin para obtener una mayor cantidad de compuestos separados. En las columnas capilares la longitud es mucho mayor, pudiendo llegar hasta 100 metros con un dimetro de 0.1 a 0.3 mm. Estas ltimas se caracterizan por tener un mayor nmero de platos tericos, lo que implica mejor resolucin, menor tiempo de anlisis y una mayor sensibilidad, aunque la cantidad de muestra por correr debe ser menor (Harris, 1992). Se pueden emplear muy diversos soportes slidos y fases lquidas estacionarias. La eleccin depende bsicamente de la naturaleza de los compuestos que se desean separar (tabla 1.2). La literatura informa acerca de gran cantidad de soportes slidos que han resultado satisfactorios, y de un nmero aun mayor de lquidos para la fase estacionaria. El lquido estacionario debe producir un reparto diferencial de los diversos componentes de la mezcla de ensayo, y poseer suficiente poder de disolucin sobre los componentes en estado vapor. Por supuesto, el lquido estacionario no ha de ser voltil a las temperaturas de trabajo, pues de otra manera se evaporara abandonando la columna. Si se tiene inters por profundizar en este tema, se pueden consultar los trabajos de Bens (1961), donde describe algunas propiedades y caractersticas de los soportes ordinarios. Rohrschneider (1971) report una clasificacin de las fases lquidas en funcin de su polaridad, y propuso una escala de 0 a 100 en la que el escualeno es tomado como cero y el oxidipropionitrilo como cien. La temperatura necesaria para efectuar la separacin de una mezcla est determinada por dos factores: el grado de separacin que se considere suficiente y el tiempo razonable para el anlisis. En general, cuanto ms baja es la temperatura mayor es la separacin de los componentes, y mayor tambin el tiempo
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de retencin de estos ltimos en la columna. Rowan (1961), al igual que Desty (1965) y muchos otros autores (Meloan, 1973), analizan el efecto de la temperatura en la cromatografa de gases. La velocidad de flujo del gas portador vara con cada anlisis y puede cambiar para diferentes tipos de compuestos por analizar. Tal velocidad influye en la cuantificacin de la altura equivalente de un plato terico (AEPT). Para las columnas empacadas de 0.63 cm de dimetro, se recomiendan flujos de 40 a 100 ml/min, que debern regularse con una precisin mayor de 1 ml/min. Los gases portadores que se utilizan con ms frecuencia son: nitrgeno, helio, argn y dixido de carbono. Su eleccin se basa, al menos en parte, en el factor econmico, pero un criterio ms importante es el tipo de detector empleado. Para un detector de conductividad trmica, los gases adecuados son: nitrgeno, hidrgeno, argn y helio. El hidrgeno presenta altos valores de conductividad trmica, factor muy importante en la deteccin de compuestos, pero debido a su explosividad no es recomendable para la docencia. El helio tambin tiene un alto valor de conductividad trmica, pero es un recurso no renovable y de costo elevado. En cambio, el nitrgeno se utiliza ampliamente por ser barato e inocuo, a pesar de no tener un valor alto de conductividad trmica.
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Tabla 1.2 Fases estacionarias lquidas de uso comn en cromatografa de gases.

Nombre Comercial Escualeno Apienzon L SE-30 OV-1 UCW-982 DC-200 OV-101 SP-2100 SE-52 0 SE-54 Dexsii 300 OV-17 OV-25 OV-210 Carbowax20M Carbowax20M TPA Carbowax1500 SilariOC Descripcin Polaridad* Temperatura Iquido/C 20/100 50/300 50/300 50/300 0/300 0/250 0/350 0/350 50/300 50/450 0/375 0/350 0/275 60/225
Escualeno Apienzon L 100% goma de silicona 100% goma de silicona goma del 99% metil, 1% vinil 100% de metil silicona lquida 100% de metil silicona lquida 100% de metil silicona lquida fenilo al 5% Metil carbonato de silicona Metil fenil silicona al 50% Metil fenil silicona al 75% 3,3,3-trifluoropropilo al 50% polietilen glicol polietilen glicol modificado con cido tereftlico polietilen glicol Cianopropil silicona al 100%
I I I I II II II II II II II III III IV
IV IV IV
60/250 40/200 0/250
* I a IV de menor a mayor polaridad.
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La muestra lquida se introduce en el cromatgrafo inyectndola con una jeringa a travs de un septo de goma, la temperatura vaporiza la muestra y el gas acarreador lo lleva a lo largo de la columna. Las columnas analticas requieren de 0.1 a 10 jal de muestra lquida, mientras que las columnas para trabajo preparativo llegan a utilizar de 20 a 1000 jil. Las muestras gaseosas requieren de jeringas con cierre hermtico o vlvulas de muestreo de gases. Para el trabajo analtico se utilizan volmenes de 0.5 a 10 mi de gas, y para el anlisis preparativo los volmenes pueden aumentar hasta un litro (Harris, 1992). Detector de conductividad trmica. La capacidad de enfriamiento de un gas est basada en la facilidad que tiene para transferir el calor que absorbe, cualidad representada por su valor de conductividad trmica. Entre ms grande sea el valor, la capacidad para transmitir el calor ser mejor. Por lo tanto, si se suministra una cantidad constante de energa elctrica al filamento del detector, su temperatura estar en funcin de la conductividad trmica del gas acarreador. Con un gas puro, la temperatura del filamento es constante, pero al presentarse cambios en la composicin del gas, la temperatura vara y se modifica la resistencia elctrica. Por lo tanto, los filamentos deben ser resistentes a los cambios de temperatura y a la corrosin qumica. Para su fabricacin se emplea generalmente platino, tungsteno y nquel. Los factores que afectan la sensibilidad de los filamentos son: su geometra, la corriente que pasa a travs de los mismos, su resistencia y el valor de la conductividad trmica del gas. La tabla 1.3 muestra la conductividad trmica de los gases y de algunos compuestos utilizados en cromatografa.
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Tabla 1.3 Conductividad trmica.

sustancia Nitrgeno Helio Argn ct* 5.81 34.80 3.98 13.52 41.60 5.89 5.63 7.21 3.58 3.22 3.50 2.37 1.58
co2
Hidrgeno Oxgeno CO Metano Propano n-Butano tanol Acetona Cloroformo
* unidades de la conductividad trmica cal cnrr2 seg^2/C crrr1
Clculos en cromatografa
Con los datos de un cromatograma es posible realizar una serie de clculos sencillos para conocer parmetros como la eficiencia de la columna, adems, si aplicamos tcnicas de estndares se puede conocer tambin la concentracin de muestras problema. A continuacin se desarrollan los clculos ms comunes y tiles en cromatografa.
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Nmero de platos tericos en una columna (n)

Un plato terico es el lugar donde se lleva a cabo el equilibrio de distribucin de la muestra entre la fase mvil y la fase estacionaria. A mayor nmero de platos tericos, la separacin en la columna es mejor. w= 16 n - nmero de platos tericos t^ = tiempo que transcurre desde la inyeccin hasta el centro del pico del componente Aw=ancho del pico del componente tj^ y Aw se expresan en las mismas unidades (tiempo, volumen, distancia, etc.)
Altura equivalente de un plato terico (AEPT)

Un plato terico puede considerarse la longitud de columna necesaria para establecer un equilibrio de distribucin entre la fase estacionaria del soluto y la fase mvil.
AEPT = ^
AEPT = altura equivalente de un plato terico L = longitud de la columna n = nmero de platos tericos
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Clculo del rea de un pico con forma de tringulo

Las curvas o picos en un cromatograma generalmente presentan una forma gaussiana. Un mtodo sencillo para calcular el rea bajo la curva es transformarla en un tringulo, extrapolando la tangente en los puntos de inflexin hacia la lnea de referencia, como lo indica la figura 1.3.
tr o vr
Respuesta del.
detector
Punto de inflexin (parte ms inclinada de la curva)
j / /
t =0 inyeccin
tiempo o volumen
Figura 1.3 Cromatograma ideal
Frmula para calcular el rea de un tringulo:

A
A
b*h
A = rea h = altura b = longitud de la base
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Clculo de la resolucin
Mide la separacin entre componentes. La figura 1.4 indica la manera de medir los parmetros:
ECUACIN DE RESOLUCIN
Figura 1.4 Resolucin entre dos picos cromatogrficos. V

V
-V
V
1/2 (Wx + W2)
Vx = distancia desde la aplicacin hasta el centro del pico 1 V2 = distancia desde la aplicacin hasta el centro del pico 2 FPj y fP2 = ancho de los picos 1 y 2
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Anlisis cuantitativo
Existen diversos mtodos para el clculo de concentraciones en un sistema cromatogrfico. Los hay sencillos, pero poco confiables, pues no utilizan ninguna sustancia de referencia, y los hay ms elaborados con un mayor grado de confiabilidad. Estos mtodos son: 1. 2. 3. 4. Normalizacin Calibracin absoluta Estndar interno Estndar externo
Normalizacin o porcentaje por reas

Con base en el cromatograma de una mezcla separada, es posible determinar la concentracin de cada uno de sus componentes por el rea bajo la curva. Primero hay que medir las reas individuales de cada pico, sumarlas y, con base en el total, sacar el porcentaje de cada componente. Este porcentaje es proporcional a la concentracin del componente en la mezcla, siempre y cuando la conductividad trmica de los componentes sea la misma, o muy parecida, y que la respuesta del detector de conductividad trmica tambin sea igual para todos los componentes. Como esto no es posible en la mayora de los casos, se requiere utilizar otros mtodos ms exactos.
Calibracin absoluta
Consiste en inyectar en la columna una cantidad conocida de sustancia pura para medir el rea del pico resultante. Enseguida, bajo las mismas condiciones de corrimiento cromatogrfico, se mide el rea del pico que resulte de la sustancia en la mezcla desconocida. Finalmente, estableciendo una proporcin, se puede encontrar la concentracin de la sustancia desconocida.
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Estndar interno
Este mtodo se puede utilizar de dos formas, para calcular un factor de respuesta o elaborando una curva estndar para encontrar la concentracin de una muestra problema. El estndar o patrn interno es aquella sustancia que se inyecta junto con la o las muestras problema en un cromatgrafo. Las condiciones que esta sustancia debe cumplir son (Len, 1982): No debe formar parte de la muestra que se desea analizar. Tener similitud con los componentes del problema. Proporcionar por s sola y junto con la muestra problema, picos bien resueltos y de buena forma. Eluir en un tiempo cercano al de los componentes del problema. No debe reaccionar con los componentes de la muestra. a) Factor de respuesta El mtodo se basa en calcular el factor de respuesta para cada sustancia analizada, ya que los detectores no responden de la misma manera a todos los solutos. La tcnica no es muy complicada y consiste en medir el rea bajo los picos de cada compuesto, en relacin con el rea de los picos de un patrn interno. El factor de respuesta est definido por la relacin:
[P]
\Ap
[S] = concentracin del soluto (cualquier unidad de masa/volumen) [P] = concentracin del patrn (cualquier unidad de masa/volumen) As = rea del soluto Ap = rea del patrn Este factor de respuesta se puede utilizar tanto con el mtodo de normalizacin como con el del patrn interno. b) Estndar interno con elaboracin de curva estndar. En este caso tambin se requiere de la adicin de un compuesto de concentracin conocida. Se utilizan mezclas conocidas del patrn (P) y del soluto o analito (S) para construir una curva patrn, como en la figura 1.5. Si una
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cantidad conocida de patrn se agrega a una muestra problema, la curva de calibracin puede utilizarse para hallar la concentracin del soluto. Cuando se use un estndar interno es recomendable que la curva de calibracin se elabore cuando menos con tres puntos. Las unidades de concentracin pueden ser moles/litro, g/1, mg/1, porcentuales, etc. hs ~hp
[S] = concentracin del soluto [P] = concentracin del patrn
hs = altura del soluto hp = altura del patrn internos.
Figura 1.5 Curva para estndares
Estndar externo
Esta tcnica es menos complicada que el estndar interno, pero requiere de mayor cuidado durante las separaciones cromatogrficas. Las curvas de calibracin con patrones puros son elaboradas con base en varias concentraciones. Es importante cuidar que los volmenes de inyeccin sean los mismos que para los compuestos de inters. Se construye una grfica de rea o altura, en funcin de la concentracin, la cual puede estar en cualquier unidad de masa/volumen, ya sea molaridad, % p/v, o tambin puede utilizarse el % p/p. La concentracin del compuesto desconocido se interpola en el grfico, con base en el dato de rea o altura del pico correspondiente (figura 1.6). rea o altura
Concentracin
Figura 1.6 Curva para estndares externos.
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Operacin del cromatgrafo Gow-Mac modelo 69-350

Descripcin
Todos los controles de operacin del modelo 69-350 estn localizados en la parte frontal del aparato (figura 1.7).
11
Figura 1.7 Cromatgrafo de gases Gow-Mac.
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1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16.
Puerto de inyeccin para la columna "A" Control de ajuste del flujo de la columna "A" Control de temperatura del puerto de inyeccin Control de temperatura del detector Control de temperatura de la columna Sistema analgico de medicin Selector de medicin Control de encendido del cromatgrafo Control de cambio de polaridad Control de encendido del detector Control de ajuste del cero Control de atenuacin Control de la corriente del detector Control de ajuste de flujo de la columna "B" Puerto de inyeccin para la columna "B" Tapa del horno del cromatgrafo
Uso del cromatgrafo

1. Verifique que todos los controles estn apagados y siga las instrucciones, en funcin de los parmetros a utilizar en cada una de las prcticas de cromatografa de gases. Abra la llave del tanque que contiene el gas acarreador y verifique que la presin se encuentre entre 500 y 2 300 lb/in2, en caso de ser menor a 500 lb/in2, reprtelo al profesor. La presin de entrada del gas al cromatgrafo debe ser de 30 lb/in2. Mida la velocidad del flujo de salida de las columnas utilizando un flujmetro de burbuja que tenga una disolucin de jabn al 3 %.
2.
3.
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Flujo del gas del cromatgrafo
Marcas de calibracin _ Disolucin jabonosa PERA
Burbuja
Figura 1.8 Medidor de flujo. La metodologa es la siguiente: conecte la manguera del flujmetro a la salida de la columna donde se quiere ajustar el flujo. Presione ligeramente el bulbo lleno de disolucin jabonosa, para formar las burbujas que sern arrastradas por el gas. Mida el tiempo en segundos, desde la marca cero hasta la diez del aparato y calcule el flujo utilizando la siguiente ecuacin: 600 Flujo = tseg Con base en el resultado y utilizando el control correspondiente (columna "A" o "B") ajuste el flujo requerido. Ajuste los controles de temperatura y de inyeccin (tanto de la columna como del detector). Fije la corriente de este ltimo. Verifique que el registrador tenga papel y tinta para un buen funcionamiento, encindalo y seleccione la velocidad de corrimiento. Para su buen funcionamiento el cromatgrafo requiere aproximadamente de 2 horas para que se estabilice la lnea base. Durante este tiempo se puede preparar la muestra, limpiar la jeringa y ajustar el cero. Ajuste del cero: el atenuador del cromatgrafo debe marcar infinito (nmero 12 de la figura 1.7). Con el control de cero del graficador, coloque la plumilla donde desee la lnea base. Ponga el control de la
4. 5.
6.
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7.
8. 9.
atenuacin del cromatgrafo en la posicin 1. Coloque el atenuador en la posicin 256 y el cero con el control del cromatgrafo. Inyeccin de la muestra. Se debe tener cuidado al introducir la j eringa, si sta es de una capacidad de 5 o 10 |il, tanto el mbolo como la aguja son muy delgadas y se doblan fcilmente. Debe colocarse la jeringa en posicin perpendicular con respecto al cromatgrafo e introducirla en el puerto de inyeccin de la columna. Efectuar la inyeccin con fuerza, para asegurar que la muestra entre en la columna. Con el fin de evitar contaminaciones, se debe enjuagar la jeringa cuando menos cinco veces con el disolvente adecuado. Debe limpiarse inmediatamente despus de usarla, para prevenir que la muestra se seque y queden residuos en la jeringa o el mbolo. Si los picos de la muestra se salen de escala, incremente la atenuacin y corra nuevamente su sistema. Una vez terminado el trabajo cromatografa) disminuyalas temperaturas de la columna, inyector y detector, y apague la corriente de este ltimo. Cuide que el flujo del gas contine hasta que la temperatura de la columna descienda hasta 50 C o menos. Cierre l paso del gas acarreador y limpie lajeringa.
Precauciones en el manejo del detector de conductividad trmica
a)
b) c)
Para evitar que se queme el filamento del detector, verifique que el gas acarreador fluya a travs del cromatgrafo, antes de encender el detector. Apagar la corriente del filamento, antes de abrir el sistema, para evitar que ste se oxide. La velocidad de flujo del gas portador debe permanecer constante.
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Metodologa para las prcticas de qumica analtica II

1. 2. Los alumnos deben cubrir totalmente las nueve prcticas de este manual. Cada alumno debe elaborar una bitcora, en la cual, adems de anotar todas las observaciones de la prctica en cuestin, realizar las siguientes actividades: Dibuj ar un diagrama de bloques de la prctica que se va a realizar. Anotar las propiedades fsicas, qumicas y txicas de cada uno de los reactivos mencionados en el protocolo de la prctica (investigados previamente en la biblioteca). Realizar los clculos necesarios para la preparacin de las disoluciones mencionadas en la prctica, tomando como base 100 mi de disolucin.
Prevencin de accidentes en el trabajo con sustancias qumicas*

1. 2. Al manipular sustancias corrosivas ser obligatorio el uso de equipo personal de proteccin. La transferencia de lquidos, especialmente los corrosivos o txicos, debe hacerse con ayuda de pipeta y propipeta. Queda estrictamente prohibido usar las pipetas succionando con la boca. Al poner en contacto sustancias que reaccionan violentamente o al calentar lquidos en tubos de ensayo o frascos, la cara deber apartarse para que no sea alcanzada por posibles proyecciones. Se deben usar anteojos protectores o careta de plstico. Nunca vierta agua sobre cido sulfrico concentrado. Todas las operaciones con sustancias voltiles debern hacerse en la campana de extraccin. Queda estrictamente prohibido probar cualquier sustancia qumica. Las sustancias susceptibles de generar perxidos (THF, ter, etc.) debern ser verificadas peridicamente.
3.
4. 5. 6. 7.
* Las normas de seguridad indicadas en esta parte fueron extradas del Instructivo sobre elfuncionamiento interno y operativo para regular el uso de los servicios e instalaciones de los laboratorios de docencia de la UAM, aprobado por el Consejo Acadmico en su sesin 133.
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Prctica 1
Anlisis cualitativo de cromatografa de gases (dos columnas)

Introduccin
Conocer y utilizar la cromatografa de gases es hoy en da un aspecto primordial, tanto en la industria como en el campo cientfico. La elaboracin de productos alimenticios o farmacuticos necesita de un buen control de calidad, y muchas de las tcnicas utilizadas para esto requieren de la precisin del anlisis cromatogrfico. Uno de los primeros problemas en cromatografa es la seleccin de la fase estacionaria o tipo de columna a utilizar. Existe una gran variedad de fases lquidas disponibles para la cromatografa de reparto gas-lquido. Para resolver este problema es necesario considerar que un soporte polar retendr ms fuertemente un soluto polar y que, por lo tanto, las sustancias menos polares saldrn con mayor rapidez de la columna, presentando tiempos de retencin ms cortos. En esta prctica se corrobora tal criterio, ya que son separados compuestos de diferente polaridad corrindolos en una columna polar como la Carbowax 20 M. Posteriormente se efecta la misma separacin, pero utilizando la columna DC-200 no polar.
Objetivo
El alumno aprender a utilizar el cromatgrafo de gases Gow-Mac, modelo 69-350, para el anlisis cualitativo de mezclas y observar la diferencia de separar una misma muestra en dos columnas de diferente polaridad.
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Manual de prcticas de qumica analtica I
Materiales y reactivos
Cromatgrafo de gases Medidor de fluj o de burbuj a Cronmetro Jeringa para cromatografa de gases de 50 mi 5 tubos de ensayo de 10 x 150 mm con tapn de baquelita 5 vasos de precipitados de 50 mi 5 pipetas volumtricas de 1 mi Propipeta n-pentano Tetrahidrofurano 2-butanona n-propanol
En la parte terica de este captulo se encuentran las instrucciones de operacin del cromatgrafo Gow-Mac, modelo 69-350 (p. 27).
Normas de seguridad
Maneje los disolventes con cuidado en un lugar ventilado, utilice propipetas para hacer la mezcla. Asegrese de que no haya mecheros prendidos y coloque letreros para indicar que est trabajando con disolventes. Cuando trabaje con el cromatgrafo, asegrese de que se encuentre presente el profesor del laboratorio, quien le ayudar y brindar asesora sobre el buen manejo del equipo.
Procedimiento
1. Mezcle un mililitro de cada uno de los siguientes disolventes: n-heptano, tetrahidrofurano, 2-butanona y n-propanol. Guarde la mezcla en un recipiente cerrado.
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Anlisis cualitativo de cromatografa de gases
2.
Las condiciones del cromatgrafo deben ser las siguientes:

Temperatura de la columna Flujo del gas Corriente del detector 130C 80 ml/min. 200 mA (si el gas es helio) 100 mA (si el gas es nitrgeno)
3.
4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.
Tome en cuenta que el equipo requiere al menos de tres horas de calentamiento previo, con el fin de estabilizar la temperatura de la columna, el flujo del gas acarreador y la corriente del detector, y para que todo esto se refleje en una lnea base estable. Verifique el flujo del gas en las dos columnas, utilice un medidor de burbuja como se indica en la figura 1.8. Trabaje primero con la columna de Carbowax. Fije el atenuador en 4 y ponga a funcionar el graficador a una velocidad de 2.5 cm/min. Con una jeringa de 50 fil, mida 3 \ de n-heptano y adicione otros 10 |Lil de aire. Inyctelos en la columna y enjuague la jeringa. Marque el punto de inyeccin en la carta, as como la informacin relacionada con la muestra inyectada. El primer pico que debe eluir es el pico de aire, seguido por el pico del n-heptano. Repita los pasos 5 y 6 con los otros tres componentes y, por ltimo, inyecte la mezcla de los disolventes. Baj o las mismas condiciones de trabaj o, repita todo el proceso utilizando la columna DC-200. Cambie la polaridad del sistema para que los picos salgan en el mismo sentido que con la columna polar.
Tratamiento de datos experimentales

Mida y tabule todos los tiempos y volmenes de retencin de todas las corridas. Con la ayuda de los tiempos de retencin de las sustancias puras, identifique los componentes de la mezcla en los cromatogramas de las dos columnas.
35
Calcule el nmero de platos tericos "n" y AEPT para cada columna, utilizando los datos del n-heptano. Calcule el porcentaje de cada componente de las mezclas, utilizando el mtodo de normalizacin (por reas).
Cuestionario
i. 2. 3. En qu se basa la cromatografa de gases? Cmo puede medirse la eficiencia de una columna? Qu se entiende por cromatografa lquido-lquido y cromatografa gaslquido? Qu ventajas tiene la programacin de temperatura en la cromatografa de gases? Se puede hacer esta programacin en un cromatgrafo de gases con detector de conductividad trmica? Justifique su respuesta. Explique cules son las ventajas y desventajas de las columnas capilares y las columnas empacadas. Con base en los siguientes datos, obtenidos con el empleo de una columna de ftalato de dodecilo, realice los ejercicios que se piden.
Compuesto Acetona Butanona 3-pentanona Acetilcetona Vr(ml) 21.5 58.0 145.0 400.0
a) b)
Calcular el nmero de platos tericos "n" y AEPT para cada compuesto. Calcular el porcentaje de cada componente, utilizando el mtodo de normalizacin.
36
Prctica 2
Factor de respuesta en cromatografa de gases
Introduccin
El uso de estndares internos es necesario en el anlisis cuantitativo. La sensibilidad de los detectores de conductividad trmica difiere de un compuesto a otro, ya que depende de la conductividad trmica del analito. A menor conductividad trmica, mayor es la respuesta para una cantidad dada de compuesto. Por lo tanto, debe medirse unfactor de respuesta emprico para cada sustancia que se somete a un anlisis cuantitativo. El factor de respuesta F est definido por la relacin:
[P]
\ApJ
Objetivo
El alumno efectuar el anlisis de cromatografa de gases para conocer el factor de respuesta con el n-heptano, empleando como estndar interno al n-pentano.
Cromatgrafo de gases Medidor de fluj o de burbuj a
37
Cronmetro Jeringa para cromatografa de gases de 50 mi 2 tubos de ensayo de 10 x 150 mm con tapn de baquelita 2 vasos de precipitados de 50 mi 2 pipetas volumtricas de 1 mi Propipeta n-pentano n-butano
Normas de seguridad
Los compuestos a trabajar son muy voltiles y flamables, trabaje en un rea ventilada y lejos de fuentes de calor. Tome en cuenta las reglas de seguridad de la prctica 1.
Procedimiento
1. 2. Prepare en tubo de ensayo una disolucin estndar, mezclando un mililitro de n-heptano con otro de n-pentano. Ajuste las condiciones del cromatgrafo con base en los siguientes datos:
Columna Gas acarreador Flujo del gas Temperatura Atenuacin Corriente del detector Velocidad de la carta DC-200 Helio 60 ml/min. 90 C 4 200 mA 2.5 cm/min.
3. 4. 5.
Verifique que la lnea base se encuentre estable. Inyecte 3 (il de la disolucin estndar, repita por triplicado. Solicite al profesor la muestra problema e inyecte 3 \9 repita por triplicado.
38
Factor de respuesta en cromatografa de gases

Mida y tabule todos los tiempos y volmenes de retencin de todas las corridas. Con base en las reas y concentraciones de la disolucin patrn, calcular el factor de respuesta para el n-heptano, utilizando el n-pentano como estndar interno. Calcular la concentracin del n-heptano en la muestra problema, utilizando el factor de respuesta y las reas del segundo grupo de cromatogramas.
Cuestionario
1. 2. Explicar qu se entiende por factor de respuesta. Esta tcnica para el clculo del factor se puede utilizar con otros detectores como el de ionizacin de flama o el de captura de electrones? Cmo se seleccionan las temperaturas para el inyector, la columna y el detector? Problema: Para la cuantificacin de una muestra comercial del antimicrobiano metil parabeno, se utiliz la tcnica del factor de respuesta usando el propil parabeno como estndar interno. Se corrieron las muestras en un cromatgrafo con detector de ionizacin de flama, columna capilar BP5 con pelcula de 0.5 |Lim, temperatura inicial de 160 C y un gradiente de 15 C/min. La temperatura final fue de 280 C. Para el clculo del factor se utilizaron 0.98 mmol de metil parabeno y 0.75 mmol de propil parabeno. Se obtuvieron las siguientes alturas respectivas: 180 y 165 mm. Una segunda corrida cromatogrfica es utilizada para cuantificar la muestra comercial. Se mezcla el problema con 1.2 mmol de propil parabeno. Las alturas resultantes fueron 150 mm para el metil y 160 mm para el propil parabeno. Calcular la concentracin del metil parabeno en la muestra comercial.
3.
4.
39
Bibliografa
Baugh, P. J. (editor). 1993. Gas Chromatography A Praetical Approach. IRL Press, Gran Bretaa. Bens, E. 1961. "Adsorption Characteristics of Some Gas-Liquid Chromatographic Supports."Anal Chem., 33:178, California. Brewer, S. 1987. Solucin de problemas de qumica analtica. Ed. Limusa, Mxico. Ewing, G. W. 1979. Mtodos instrumentales de anlisis qumicos. Ed. Me Graw Hill, Mxico. Giddins, J. C. y R. A. Keller (eds.). 1965. Advances in Chromatography. Vol. 1:199, USA. Giddins, J. C. y R. A. Keller (eds.). 1971. Advances in Chromatography. Vol. 4:333, USA. Harris, D. C. 1992. Anlisis qumico cuantitativo. Grupo Editorial Iberoamrica, Mxico. Meloan, C. F. y R. M. Kiser. 1973. Problemas y experimentos en anlisis instrumental. Ed. Reverte, Mxico. Miller, J. M. y R. L. Harmon. 1978. Elementary Theory ofGas Cromatography. Gow-Mac Instrument Co., USA. Operator }s Manual Gas Chromatograph, Model 69-350.1989. Gow Mac Instrument Co., USA. Pecsok, R. L. 1981. Mtodos modernos de anlisis qumico. Ed. Limusa, Mxico.
40
Bibliografa
Rowan, R. Jr. 1961. "Prediction of Retention Temperatures in Programmed Temperature Gas Chromatography. A Descriptive Equation and Computacional Method." Anal. Chem., 33:510-515, Nueva Jersey. Storch de Garca y Asensio, J. M. 1975. Fundamentos de la cromatografa de gases. Alhambra, Espaa.
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Captulo 2
CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN
Introduccin
La cromatografa de lquidos de alta resolucin en los pasados diez aos ha incrementado su importancia en muchas de las reas del anlisis, tanto a nivel investigacin como a nivel industrial. Muchas de las tcnicas de control de calidad de frmacos, alimentos, aditivos y contaminantes ya se estn efectuando conHPLC. Hace ms de 80 aos que se conoce la cromatografa de lquidos, pero slo a partir de 1967 los avances tecnolgicos permitieron desarrollar un proceso cromatogrfico para trabajar con altas presiones. Este proceso de ninguna manera sustituye a la cromatografa de gases, slo es un complemento para el anlisis de componentes que no toleran una fase mvil gaseosa o temperaturas muy elevadas. De hecho, presenta las siguientes ventajas frente a la cromatografa de gases: Tiene una difusin mnima en la fase mvil, debido a la rapidez del anlisis. No tiene efectos negativos por calor, ya que generalmente se realiza a temperatura ambiente o ayudado por un calentador de columnas a temperaturas menores de 100 C. La muestra no se destruye, por lo que se puede recuperar para un uso posterior.
La cromatografa de lquidos es una tcnica de separacin que utiliza una fase mvil lquida, es ideal para la separacin de macromolculas de inters biolgico y de compuestos inicos, ya que no depende de la volatilidad o estabilidad trmica de los componentes. Se puede utilizar para separar protenas, aminocidos, lpidos, cidos nucleicos. Otras aplicaciones industriales son el anlisis de pesticidas, aceites, polmeros, antioxidantes, anlisis de agua, contaminantes, sabores, colorantes, etc. La cromatografa de lquidos se basa en la solubilidad de los compuestos: hay que escoger el disolvente o la mezcla de disolventes apropiados para llevar a la muestra a travs del sistema, tambin hay que tomar en cuenta que los compuestos se adsorben en menor o mayor
medida en la fase estacionaria y que gracias a las altas presiones con las que se mueve la fase mvil, se puede obtener una rpida separacin de los componentes de una mezcla. La cromatografa de lquidos se puede clasificar en cuatro tipos, dependiendo de su uso:
Cromatografa de lquido-slido
En este caso, la separacin depende de la afinidad de la muestra hacia la fase slida o lquida. Si la muestra es muy afn a la fase estacionaria (compuesta por partculas slidas pequeas) el tiempo de retencin ser mayor. El solvente utilizado se conoce como eluyente y tambin influye de manera importante en la separacin: si la muestra es ms afn a la fase lquida, los tiempos de retencin sern ms cortos. La tabla 2.1 muestra una lista de disolventes segn su capacidad para eluir solutos. La seleccin de la fase mvil influye directamente en la separacin de las muestras. Los solventes pueden ser de naturaleza orgnica o acuosa. Existen muchas caractersticas que debe tener una buena fase mvil, entre las ms importantes se encuentran: no alterar la columna ni su naturaleza, disolver la muestra, ser de baja viscosidad y, una vez terminada la separacin, debe permitir la recuperacin del soluto de manera simple (Watty, 1989). En la cromatografa lquido-slido existen dos subdivisiones que estn en funcin de su conformacin: la fase normal y la fase inversa. Para l^fase normal se requiere de una fase estacionaria polar, por lo tanto, la fase mvil debe ser no polar. Los empaques que se pueden utilizar en fase normal son diol, slica y amino, entre otros. En \difase inversa se necesita un empaque no polar y una fase mvil polar. Los empaques ms comunes para la fase reversa son: ODS (C18), octyl, dimetil, etc. Otra variacin de este tipo de cromatografa se conoce como fase ligada (bondedphase), que consiste en enlazar con el soporte de slica compuestos que aumenten su carcter no polar (C2, C6, C8, Clg). En funcin del tamao de la cadena de hidrocarburos que se haya unido, los tiempos de retencin de los solutos que eluyan en estas columnas, tendern a aumentar, pues se retendrn ms fuertemente.
46
Cromatografa lquida de alta resolucin
Tabla 2.1 Lista de disolventes.

Disolvente ndice de polaridad 0.62 5.10 5.80 2.70 3.90 1.60 4.10 0.20 3.50 3.10 7.20 4.80 4.40 6.20 2.80 0.00 0.00 5.10 0.00 4.00 3.90 4.00 2.40 1.00 9.00 2.50 Longitud de onda de corte nm 230 330 190 280 215 263 245 200 225 235 268 215 260 210 220 200 200 205 200 210 210 215 285 273 200 290 Solubilidad en agua % p/p 100 100 100 0.18 7.81 0.08 0.815 0.01 0.81 1.6 100 100 8.7 100 6.89 0.0003 0.001 100 0.004 100 100 100 0.051 0.11 100 0.018
cido actico Acetona Acetonitrilo Benceno N-butanol Tetracloruro de carbono Cloroformo Ciclohexano 1,2-dicloroetano Cloruro de metileno Dimetil sulfxido Dioxano Acetato de etilo Etanol Dietilter Heptano Hexano Metanol Pentano N-propanol Iso-propanol Tetrahidrofurano Tolueno Tricloroetileno Agua Xileno
47
Cromatografa de intercambio inico

Consiste en cambiar iones de la fase estacionaria por iones que se encuentran disueltos en la fase mvil. Aniones como el sulfito -SO3~ o cationes [N-(CH3*)3+] se unen covalentemente con la fase estacionaria: los iones de soluto, de carga opuesta a los de la fase estacionaria, son atrados por fuerzas electrostticas (la fase mvil es un lquido, figura 2.1). Se puede efectuar cromatografa de intercambio inico no solamente en HPLC, sino tambin en capa fina, en columna y en papel impregnado de resina. En este mtodo la separacin depende de las variables: fuerza inica, capacidad de carga de la columna y del pH durante el proceso de separacin. El procedimiento deriva de la cromatografa de lquido-slido, y se utiliza en la separacin de aminocidos, en anlisis de trazas, en la separacin de metales por formacin de complejos, etc. Las resinas utilizadas en las columnas pueden estar o no polimerizadas. En el mercado existen resinas intercambiadoras catinicas, tipo cido fuerte o dbil, e intercambiadores amnicos tipo base fuerte o dbil. Tambin hay geles de intercambio inico, que se utilizan para separar molculas pequeas con pesos moleculares menores a 500. La tabla 2.2 muestra ejemplos de columnas de intercambio inico comerciales, mencionando el tipo de iones que puede retener, el pH de trabajo y la presin mxima a la que pueden ser utilizadas.
Aniones mviles mantenidos cerca de los cationes unidos covalentemente a la fase estacionaria
Figura 2.1 Cromatografa de intercambio inico (resina de intercambio aninico, slo los aniones pueden ser atrados hacia ella).
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Tabla 2.2 Columnas para HPLC de intercambio inico.

Columna Syn Chropac SAX Fuertemente aninica Syn Chropac WAX Dbilmente aninica Syn Chropac SCX Fuertemente catinica TSKcatinica Soporte Slica pH 2a8 Presin mx. 5 000 psi
Slica
2a8
5 000 psi
Slica
2a8
5 000 psi
Resina
2a12
200 psi
Cromatografa de exclusin molecular

Con este mtodo las molculas se separan por su tamao y conformacin: si el peso molecular les permite adentrarse en la red del gel y/o si la molcula es globular, la retencin ser mayor, comparada con una molcula de peso superior al de la capacidad del gel o con una molcula de conformacin irregular (figura 2.2). Las aplicaciones de esta tcnica son amplias, ya que permite separar muestras con pesos moleculares entre 700 y ms de 150 millones, particularmente aquellas de inters bioqumico. Tambin es muy utilizada para la separacin de polmeros (tabla 2.3). Los soportes utilizados pueden ser de gel de slice unido a compuestos que aumentan su carcter hidroflico, como las columnas Biosep-SEC-S; o pueden ser polmeros como los de la serie PolysepGFC-P (poliestireno, polihidroximetacrilato, estireno-divinilbenceno, etc.). En el mercado de la cromatografa de exclusin molecular existe un gran nmero de columnas que permiten seleccionar el intervalo de fraccionamiento que se requiera (Phenomenex, 1994).
49
Manual de prcticas de qumica analtica
Molculas grandes son excluidas
Molculas pequeas penetran el gel
Figura 2.2 Cromatografa de exclusin molecular. Tabla 2.3 Columnas comerciales para la exclusin molecular.
Columna Styagel HR 0.5 Styagel HT 4 Styagel HMW7 Rango PM 0 a 1 000 5 000 a 600 000 500 000 a 1x10
8
Aplicaciones Aditivos, fenoles, epxidos, urea PM intermedio PM alto
Cromatografa de afinidad
Se basa en la interaccin especfica que existe entre un soluto de una mezcla y un sitio activo presente en el gel de la fase estacionaria de la columna. Las interacciones estn relacionadas ms con las caractersticas estructurales que con la carga, tamao, solubilidad u otras propiedades que se aprovechan en otros tipos de cromatografa. Ejemplos de aplicaciones son la relacin sustrato enzima y la relacin antgeno anticuerpo (Day y Underwood, 1989). Una mayor fuente de informacin sobre los mtodos cromatogrficos se puede encontrar en los excelentes libros: Harris, 1992; Pecsok, 1981.
50
Operacin del cromatgrafo de alta resolucin (HPLC)

El HPLC consta de cuatro partes: el sistema de bombas encargado de mantener constante el flujo de la fase mvil; el sistema de inyeccin que permite introducir la muestra a trabaj ar; la columna que tiene la funcin de separar los componentes de la muestra y el sistema de deteccin de los solutos eluidos, el cual manda una seal al sistema de registro.
Sistema de bombas
Este sistema es un componente importante del cromatgrafo de lquidos, el cual requiere de una bomba de alta presin, comnmente de un mximo de 6 000 psi. La presin es necesaria para mover las partculas del soluto entre la fase estacionaria de la columna. Una bomba para cromatografa de lquidos debe tener un flujo continuo y libre de pulsaciones. Existen dos tipos de sistemas de elucin: uno donde el disolvente no cambia de composicin durante el proceso de aislamiento, conocido como elucin socrtica, y otro que requiere de un gradiente para mejorar la separacin de los componentes en una mezcla (elucin por gradiente). Las bombas con pistones sincronizados son las ms empleadas en los sistemas de HPLC. Un pistn siempre bombea disolvente, mientras el otro se llena. Este arreglo proporciona un flujo relativamente libre de pulsos o pulsaciones. Pueden evitarse muchos problemas con las bombas si se cuidan los solventes utilizados: no deben tener un pH muy bajo ni formar precipitados con facilidad. En columnas convencionales de 5 mm de dimetro interno y con flujos entre 1 y 2 ml/min, pueden resultar presiones de 400 bar, dependiendo de la longitud de la columna, el tamao de partcula y el disolvente. El sistema de bombas debe de mantenerse en ptimas condiciones si se quiere tener reproducibilidad en las corridas cromatogrficas.
51
Figura 2.3 Control del sistema de bombas del HPLC
Figura 2.4 Sistema de bombas del HPLC
52
Operacin del sistema de bombas (figuras 2.3 y 2.4): Se enciende el aparato con el botn rojo de la parte inferior derecha (nmero 8 de la figura 2.4). La parte frontal consta de (figura 2.3): 1. Pantalla digital para conocer la presin del sistema, la cual est dada en libras por pulgada cuadrada (psi). El nmero que aparece en la pantalla debe multiplicarse por 10, a fin de obtener la presin verdadera. Botones que fij an la presin mnima y mxima de trabaj o durante el proceso de separacin. Se recomienda establecer la presin baja en cero psi y la mxima en 3 500 psi. El valor mximo depende del tipo de columna a utilizar y de la viscosidad del disolvente o mezcla de ellos. Si durante el proceso de separacin la presin del sistema rebasa estos valores, el sistema de bombas se apaga automticamente. Standby. Permite que el motor se apague y el sistema elctrico siga funcionando. Reset. Botn que reenciende las bombas y restablece elflujo y la presin del sistema. Led. Foco rojo que indica el apagado de las bombas y que el flujo del sistema tiende a cero. Control de fluj o. Consta de tres diales rotatorios individuales y permite preseleccionar el flujo del sistema en ml/min. El flujo debe incrementarse poco a poco (de dcima de mi en dcima de mi). Una lectura de 070 indica un flujo de 0.70 ml/min. Vlvula de purga. Permite la purga hidrulica del sistema. Botn de encendido o apagado.
2.
3. 4. 5. 6.
7. 8.
Sistema de deteccin de solutos eluidos

Existen diferentes tipos de detectores utilizados en la cromatografa de lquidos, los hay defluorescencia,ndice de refraccin, conductividad elctrica, de UVvisible, arreglo de diodos, etc. El tipo UV-visible es el ms ampliamente distribuido como detector en HPLC, la mayora de los compuestos tienen cuando menos alguna absorbancia en las regiones del UV o el visible. El fundamento cuantitativo de estas
53
Figura 2.5 Control del sistema de deteccin de solutos eluidos.
6 7
Figura 2.6 Detector UV-visible.
54
determinaciones se encuentra en la ley de Lamber y Beer, la cual relaciona la absorbancia del soluto con su concentracin (c, en moles/1) y la longitud del paso del haz de luz (b): A = 8be. Los detectores de los equipos actuales tienen una mayorflexibilidadque los espectros comunes, ya que pueden reportar valores menores de 0.001 unidades de absorbancia.
Operacin del sistema de deteccin
Se enciende el aparato con el botn rojo de la parte inferior derecha. La parte frontal (figuras 2.5 y 2.6) consta de: 1. 2. 3. Pantalla. Permite leer hasta diezmilsimas de unidades de absorbancia. Botn de polaridad. Sirve para cambiar la seal de salida del sistema de registro. Botn de corte (short switch). Conecta o desconecta las terminales positiva y negativa nulificando la seal del integrador o registrador. Este efecto es lo mismo que si se mandara una seal de cero volts al registrador, permitiendo ajustar el cero independientemente del ajuste hecho en el registrador o integrador. Mark. Este botn permite producir una marca en la carta y se utiliza generalmente para indicar el momento de la inyeccin de la muestra. Auto cero. Este botn permite definir la lnea base y tiene un intervalo de 0.7 UA (unidades de absorbancia). Cuando la lmpara parpadea indica que la seal de salida de la lnea base excede el intervalo de trabajo del auto cero. Pantalla indicadora de la longitud de onda seleccionada. Control de seleccin de longitud de onda. Ajusta la longitud de onda de trabajo entre 190 y 700 nm con incrementos de 0.2 nm. Intervalo de unidades de absorbancia (AUFS, Absorbance Units Full Scale). Cuenta con doce posiciones diferentes que seleccionan la sensibilidad de las unidades de absorbancia. Botn de control. Consta de seis posiciones que se pueden seleccionar y observar en la pantalla:
4. 5.
6. 7. 8.
9.
55
SE {Sample Energy). La pantalla reporta la energa UV de la celda de la muestra problema. RE (Reference Energy). Reporta la energa UV de la celda de referencia. AU (Absorbance Units). Se observan la unidades de absorbancia presentes en la muestra problema. Zero, cantidad en unidades de absorbancia que el aparato toma como cero. DLV(Deuterium Lamp Voltage). Reporta el voltaje de la lmpara de deuterio. DLC {Deuterium Lamp Current). Reporta la corriente del filamento de la lmpara en miliamperios, una lectura de 300 es ideal y de 285 a 315 es aceptable.
10.
Tiempo de respuesta. Son cinco posiciones que seleccionan los diferentes tiempos de respuesta: 0.05 sea, respuesta rpida que provoca picos angostos y mucho ruido en la lnea base. 0.10 sea, respuesta rpida con ruido ligeramente menor que la anterior. 0.50 sea, ms rpida que la respuesta normal y con ruido ligeramente mayor de lo normal. 1.00 sea, respuesta normal con picos angostos y una cantidad pequea de ruido. 5.00 sea, respuesta lenta para una supresin mxima del ruido.
Operacin del integrador SP4400

Es un equipo que permite interpretar la seal mostrando no slo el cromatograma, sino tambin un reporte completo con los tiempos de retencin, las reas y sus porcentajes. Si se requiere, tambin proporciona informacin sobre las condiciones bajo las cuales se corri el sistema y cuenta con programas para hacer clculos con patrones externos e internos (figura 2.7).
56
Figura 2.7 Integrador
Figura 2.8 Vista parcial del teclado del integrador.
57
Dentro de las ventajas que tiene utilizar un integrador, se encuentran los mtodos numricos que permiten realizar diferentes tipos de clculos, como los siguientes: a) Mtodo numrico cero: MN = 0. Es un mtodo de porciento de rea usado cuando los resultados de concentracin no son necesarios. Este mtodo no utiliza factores de respuesta del detector y de esta manera no requiere de calibracin. Una vez que el dilogo de rutina termina, se selecciona el mtodo en el reporte, el cual incluye todos los picos del cromatograma identificados por orden de elucin. Los nombres de los componentes no son generalmente utilizados. Mtodo numrico uno: MN = 1. Es el ms utilizado en cromatografa de gases, en particular cuando todos los componentes de la muestra son conocidos. Es muy similar al mtodo cero, con excepcin de que las reas (o altura) de los picos son corregidos por factores de respuesta, calculados previamente en una corrida con sustancias patrn de concentracin conocida. Mtodo numrico dos: MN = 2. Requiere la utilizacin de estndares internos para cuantificar de manera exacta los componentes de una mezcla. Es de uso comn en anlisis de compuestos farmacuticos, aditivos alimentarios, etc. La concentracin del estndar interno debe ser ligeramente mayor, pero no pasar de un factor de 10, con respecto a los componentes de inters en una mezcla.
b)
c)
Descripcin del teclado (figura 2.8)

Backspace: borra datos previos moviendo el cursor hacia atrs. LCD status: Presenta un cuadro en pantalla donde indica el canal (C/z), archivo (FI\ nmero de inyecciones en ese archivo (Biri), la velocidad de la carta (Cs), atenuacin (Atteri), tiempo de corrimiento (Runtime), nivel (Level) y capacidad de memoria. Inj/endA: Tecla que se debe oprimir en el momento de efectuar la inyeccin en la columna "A". Shift inj/endA: Detiene el desarrollo del cromatograma sin dar el reporte del mismo.
58
A tem Se usa para verificar la atenuacin en cualquier momento del proceso cromato grfico. Cuando se presiona, aparecen en la pantalla los valores numricos vlidos para cambiarla. Entre parntesis aparece el valor que se est utilizando. Chart speed: Se utiliza para verificar la velocidad de la carta en cualquier momento del proceso cromatogrfico. Cuando se presiona, aparecen en la pantalla los valores numricos vlidos para cambiarla. Entre parntesis aparece el valor que se est utilizando. Se recomienda usar velocidad 2 para cromatogramas con pocos picos y 2 o 4 para cromatogramas ricos en picos. PTeval: No debe utilizarse durante la corrida. Normalmente se observa su valor antes de inyectar nuevamente la muestra, ya que un valor menor a 250 indica que ya no hay residuos de soluto del anlisis anterior pasando por el detector.
Metodologa para el manejo del HPLC

1. Preparacin del disolvente y la muestra a analizar. Ambos deben ser filtrados en membranas de 0.4 |um, para evitar que las impurezas entren y contaminen la columna. El disolvente debe ser grado HPLC. Revisar que el sistema de entrada y salida de los disolventes estn sumergidos en sus respectivos recipientes. Encender el sistema de bombas (nmero 8 de la figura 2.4). Ajustar el flujo oprimiendo los botones respectivos (nmero 6 de la figura 2.3) del sistema de bombas. Seleccione la longitud de onda con base en el sistema a separar, moviendo el dial correspondiente (nmero 7 de la figura 2.6). Al igual que el cromatgrafo de gases, el HPLC requiere de un tiempo (20 a 30 minutos) para que se estabilicen las condiciones de trabajo. Encender el integrador y ajustar la velocidad de la carta y la atenuacin, presionando primero la tecla Chart speed del teclado del integrador y posteriormente la tecla Atten (figura 2.8). Se puede elegir entre una serie de valores que van desde 0.5 hasta 4 096 en incrementos geomtricos para la atenuacin. Si en una primera corrida los picos
2. 3. 4. 5.
6.
59
7. 8.
rebasan la escala del integrador, se puede aumentar la atenuacin al valor prximo, de manera que los picos reduzcan a la mitad su tamao (siempre y cuando se utilicen las mismas condiciones de separacin). Verifique el valor del PT evaluation: debe ser como mximo de 250. Inyecte la muestra con una jeringa de 50 jal con aguja sin punta, mida la cantidad establecida en el manual de prcticas de la muestra a correr e introduzca la jeringa en la vlvula de inyeccin. El mecanismo de inyeccin de la muestra (figura 2.9) es de dos posiciones: carga y descarga. Presione el mbolo para que la muestra pase a la tubera de acceso (loop). Mueva la palanca a la posicin de descarga para que la muestra sea llevada a la columna, el lquido contenido en el loop ser desplazado hacia la columna. El movimiento debe ser rpido para evitar una cada brusca de presin que desconecte el sistema de bombas. Posteriormente oprima la tecla inj/endA del integrador. Terminado el tiempo de corrimiento vuelva a presionar la tecla inj/end A, el integrador le dar un reporte completo de su sistema separado.
60
Flujo Jeringuilla Hacia la columna
Flujo I
Unin
Alojamiento de muestras
Exceso de inyeccin CARGAR INYECTAR
Figura 2.9 Vlvula de inyeccin para cromatgrafo de lquidos de alta resolucin.
61
Prctica 3
Cuantificacin de una muestra problema de anisaldehdo (mtodo del patrn interno)
Introduccin
El funcionamiento de un comatgrafo de alta resolucin empieza con el sistema de bombas de alta presin, el cual impulsa el disolvente a travs de todo el sistema. La muestra es inyectada por medio de una microj eringa, el volumen es de unos cuantos microlitros para que la resolucin de los picos sea buena y la separacin sea ms rpida. Una vez en la columna, se realiza la interaccin soporte-soluto-disolvente, lo cual permite la separacin de los componentes de la muestra. El detector est compuesto por una microcelda en forma de "Z", a travs de la cual fluye la disolucin; es excelente para que los compuestos no se mezclen y el flujo sea rpido. Por ltimo, en el integrador, la absorbancia es convertida en seal elctrica y as es reproducida como cromatograma. En la cromatografa de lquidos de particin existen dos grupos de trabajo, el ms frecuente se conoce como cromatografa de fase inversa, en ella la fase estacionaria tiene un carcter no polar y se eluye con un disolvente polar. El segundo grupo es la cromatografa de fase normal que utiliza un soporte polar y un disolvente no polar. El sistema de elucin puede ser isocrtico o por gradiente y el detector ms comn es el uv-visible, aunque tambin es utilizado el de ndice de refraccin. La cuantificacin de una muestra problema por medio de un estndar interno se puede efectuar con la elaboracin de una curva estndar, la cual debe ser hecha mnimo con tres puntos. En el laboratorio se debe tener especial cuidado
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sobre las condiciones de separacin, en cuanto a volumen inyectado, flujo y composicin de la fase mvil. La curva se desarrollar en funcin de la relacin de alturas o reas de los picos del compuesto entre las del estndar (ver captulo 1: Clculos en cromatografa). En las abscisas se coloca la relacin de la concentracin del soluto entre la concentracin de la sustancia patrn. La concentracin de la muestra problema se interpola de la curva patrn.
Objetivo
El alumno aprender a utilizar el cromatgrafo de lquidos de alta resolucin para cuantificar una muestra problema de anisaldehdo, utilizando el mtodo del patrn interno.
Cromatgrafo de lquidos de alta resolucin Columna Spherisorb ODS C]810 mm Filtros de tefln de 0.4 mm Jeringa de 50 mi, con aguja para HPLC 5 frascos viales de 5 mi con tapa 2 pipetas volumtricas de 1 mi Anisaldehdo Acetonitrilo Tolueno Muestra problema con anisaldehdo
Normas de seguridad
Al preparar la mezcla acetonitrilo agua y acetonitrilo tolueno debe hacerlo en la campana de extraccin. Revise su bitcora para recordar que el acetonitrilo es venenoso y flamable, que debe evitar respirar sus vapores y que puede causar irritacin en la piel.
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Cuantificacin de una muestra problema de anisaldehdo
Procedimiento
1. Las condiciones de funcionamiento del cromatgrafo deben ser las siguientes:
Columna Spherisorb Dimensiones Presin mxima Fase mvil Flujo 2. 3. 10ODS10jim 250 x 4.6 mm 3 500 psi acetonitrilo/agua (50:50) 0.8 ml/min
Prenda y acondicione el cromatgrafo dejando que el sistema se estabilice. Prepare las siguientes mezclas de anisaldehdo y tolueno:
Compuesto Anisaldehdo Tolueno Corrida 1 0.07 M 0.05 M Corrida 2 0.05 M 0.05 M Corrida 3 0.03 M 0.05 M
4. 5. 6.
Filtre por membranas de 0.4 jom: a) La mezcla de acetonitrilo agua, b) cada una de las mezclas patrn y c) la muestra problema. Solicite al profesor la muestra problema que contiene 0.05 M de tolueno como estndar interno, mida 2 |il e inyctelos. Repita por triplicado la determinacin.

Con las concentraciones y las alturas de los picos del patrn externo, elabore una curva patrn como la que se muestra en la figura 2.10.
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ALTURA S ALTURA P
[SOLUTO S] [SOLUTO P]
Figura 2.10 Curva patrn. La concentracin de la muestra problema se calcula a partir de sustituir el valor de la altura del anisaldehdo (altura S) en la mezcla problema en la relacin: ALTURAS ALTURA P La altura "P" es la altura del tolueno, el valor de esta relacin se interpola en la curva patrn y el valor de la grfica es sustituido en la siguiente relacin, para obtener la concentracin del soluto de la muestra problema: SOLUTO S SOLUTO P
Cuestionario
1. Mencione tres diferencias, en cuanto a su aplicacin, entre la cromatografa degasesyelHPLC. Describa los cuidados experimentales que se deben tener para: a) los disolventes a utilizar como fase mvil, b) la muestra problema a separar o cuantificar.
2.
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Cuantifcacin de una muestra problema de anisaldehdo
Indique usted qu fase estacionaria, qu fase mvil y qu detector seran los indicados para efectuar una buena separacin de las siguientes mezclas: a) de carbohidratos, b) de aminocidos y c) de protenas. Para conocer el contenido de anfetamina en un preparado farmacutico comercial, se utiliza como estndar interno la metanfetamina y se efectan tres corridas cromato grficas. Con base en estos datos construya una curva patrn y calcule la concentracin de una muestra problema de anfetamina que dio una altura de 123 mm.
Corrida Frmaco Anfetamina Metanfetamina Conc. 0.6 0.6 1 Altura 30 38 Conc. 1.2 0.6 2 Altura 60 38 3 Conc. 1.8 0.6 Altura 98 38
Conc.= concentracin en mM.
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Prctica 4
Separacin y cuantificacin de una muestra de antocianinas (mtodo del patrn externo)
Introduccin
La cromatografa de lquidos de alta resolucin ha tenido un gran auge en los ltimos 20 aos, se ha utilizado como tcnica para separar, identificar y preparar sustancias en muchas reas. Actualmente estos equipos se combinan con el banco de memoria de una computadora, lo que ofrece una mayor facilidad en la identificacin de compuestos. Una aplicacin actualizada es la separacin e identificacin de antocianinas, tanto en uvas como en vinos tintos. A pesar de tener el vino tantos aos de historia, an no se conoce qu ocurre con sus compuestos durante el aejamiento. El color es uno de los atributos ms importantes del vino y es determinante en la evaluacin sensorial. En las uvas tintas est dado por el contenido de antocianinas y en las uvas blancas por los flavonoles. Existen en las uvas tintas 14 antocianinas, de las cuales cinco se encuentran en mayor proporcin: malvidina, petunidina, cianidina, peonidinay delfidina (Reyes etal., 1992). Las antocianinas son pigmentos de color rojo, azul y violeta. En condiciones acidas, el color rojo predomina; en presencia del ion bisulfito (HSO~3 ) reaccionan y se decoloran, esta reaccin es reversible. El color de los vinos tintos se debe principalmente a las antocianinas libres (estos compuestos tienden a polimerizarse casi de manera inmediata desde que son estrujadas), y a pigmentos polmeros formados durante el tiempo de afiejamiento del vino, por condensacin de antocianinas con otros compuestos flavonoides y proba-
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blemente aldehidos. El color de los vinos tintos depende del pH, el contenido de SO2? de los pigmentos polimricos y los taninos. El uso de equipos como el HPLC permite la separacin de las antocianinas en vinos tintos y stas aparecen como picos discretos.
Objetivo
El alumno utilizar el cromatgrafo de lquidos de alta resolucin para separar y cuantificar una muestra de antocianinas, utilizando el mtodo del patrn extemo.
Cromatgrafo de lquidos de alta resolucin Columna Spherisorb ODS Clg 10 mm Filtros de tefln de 0.4 mm Papel filtro WhatmanNo. 1 Jeringa de 50 mi, con aguja para HPLC 4 tubos de ensayo con tapa de rosca Mortero con pistilo Pipeta graduada de 10 mi Clorhidrato de malvidinamonoglucsido cido frmico Acetonitrilo Metanol HC1 (concentrado)
Normas de seguridad
Cuide que al preparar las mezclas acetonitrilo agua y acetonitrilo tolueno se haga en la campana de extraccin.
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Separacin y cuantifcacin de una muestra de antocianinas
Recuerde que el acetonitrilo es venenoso,flamabley que causa irritacin en la piel. Se debe evitar respirar sus vapores. Maneje con cuidado el cido frmico y evite el contacto con la piel, ya que es corrosivo.
Procedimiento
1. Extracto a partir del hollejo de la uva: lavar y quitar el hollej o a 10 uvas tintas, colocando ste en un mortero limpio. Adicionar 10 mi de metanol y presionar suavemente con el pistilo contra el hollejo para obtener una disolucin muy colorida. El extracto es prefiltrado con papel Whatman No. 1, antes de filtrar con membranas Millipore de 0.45 |Ltm. El extracto se guarda en un tubo de ensayo limpio y con tapn de rosca. Se protege de la luz y debe utilizarse a la brevedad. Las condiciones de funcionamiento del cromatgrafo deben ser: Columna Spherisorb 10 ODS 10 |jm Dimensiones 250 x 4.6 mm Presin mxima 3 500 psi Fase mvil. Se utiliza un gradiente de elucin con dos disolventes: Disolvente A, cido frmico al 40% Disolvente B, acetonitrilo Gradiente inicial: 25 % solvente A 6 minutos despus incremente el disolvente B a 23 %. 8 minutos despus incremente el disolvente B a 50 %. 5 minutos despus incremente el disolvente B a 95 %. Flujo 0.7 ml/min NOTA: verifique que tanto las muestras como los disolventes de la fase mvil se filtren en membranas Millipore de 0.45 |jm. 3. 4. Prenda y acondicione el cromatgrafo, permitiendo que se estabilice el flujo y la columna. Se inyectan 2 (il del extracto colorido. Reptalo por triplicado.
2.
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5.
Para elaborar la curva patrn con el clorhidrato de malvidin 3monoglucsido, se preparan cuatro diferentes concentraciones 25,50, 100 y 150 mg/1 en metanol con 1 ml/1 de HC1 concentrado. Se inyectan en la columna por separado, los volmenes de inyeccin deben ser de 214,1. Ajuste la atenuacin para que los picos no rebasen la escala del integrador.

Con las concentraciones y las alturas de los picos del patrn externo, elabore una curva patrn como la de la figura 1.6. Calcule el coeficiente de correlacin. Con la altura de los picos del extracto de uva en el cromatograma interpole los datos en la curva patrn. Con el valor verdadero (dato proporcionado por el profesor) calcule la precisin y exactitud y discuta sus resultados.
Cuestionario
1. Qu influencia pueden tener los siguientes cambios sobre el cromatograma obtenido en esta prctica? a) Utilizar una columna C-8 en lugar de una C-18. b) Disminuir el flujo de la fase mvil. c) Hacer una elucin isocrtica (en lugar de una por gradiente) en condiciones de disminucin del flujo de la fase mvil. 2. Qu puede suceder si, por descuido, no se filtra el extracto de materia colorante y se inyecta en el cromatgrafo?
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Separacin y cuantificacin de una muestra de antocianinas
3.
Se puede confiar en un cromatograma que fue obtenido durante una corrida que present fuertes variaciones en la presin de las bombas? Qu puede ocasionar este comportamiento? Qu otros sistemas de deteccin son de uso frecuente en los cromatgrafos de alta resolucin? Mencione brevemente tres aplicaciones directas de la cromatografa lquida de alta resolucin, mencionando adems tipo de columna, fase mvil que se podra utilizar y el detector adecuado.
4.
5.
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Bibliografa
Brewer, S. 1987. Solucin de problemas de qumica analtica. Ed. Limusa, Mxico. Dallas, C. y O. Laureano. 1994. "Effects of pH, Sulphur Dioxide, Alcohol Content, Temperature and Storage Time on Colour Composition of a YoungPortugueseRedTable Wine". J.Scl Food Agrie. 65:477-485. Ewing, G. W. 1979. Mtodos instrumentales de anlisis qumicos. Ed. Me Graw Hill, Mxico. Harris, D. C. 1992. Anlisis qumico cuantitativo. Grupo Editorial Iberoamrica, Mxico. Len, R. 1982. Libro bsico para cromatografa de lquidos. LDC/Milton Roy, USA. Meites, L. (editor). 1963. HandbookofChemistry. Me Graw Hill, USA. Operator's Manual. 1993. SpeetroMonitor 3200 Variable Wavelength Detector. Thermo Separation Products, USA. Operator'sManual. 1993. ConstaMetric 3200 Fluid Metering Pump. Thermo Separation Products, USA. Pecsok, R. L. y L. D. Shields. 1987. Mtodos modernos de anlisis qumico. Ed. Limusa, Mxico. Reyes-Dorantes, A., M. L. Escamilla-Hurtado y J. R. Verde-Calvo. 1992. Enologa Vol I. Elaboracin de vinos de mesa. Universidad Autnoma Metropolitana Iztapalapa, Mxico. Watty, M. 1989. Qumica analtica. Ed. Alhambra Mexicana, Mxico.
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Captulo 3
ESPECTROFOTOMETRIA
I. VISIBLE ULTRAVIOLETA Introduccin

Los usos analticos de la espectrofotometra en la zona del visible ultravioleta son muchos y muy variados. El objeto de este captulo es hacer mencin de algunas de estas aplicaciones, y que el alumno ponga en prctica los conocimientos adquiridos en la teora sobre la ley de Lambert y Beer. Cuando un compuesto o ion capaz de absorber luz es colocado en una celda en un espectrofotmetro, cierta cantidad de luz monocromtica ser absorbida por dicho compuesto y el resto saldr de la celda para ir a incidir sobre el fototubo que la detectar. Este comportamiento es aprovechado para conocer la concentracin de los compuestos. La transmitancia, T, de una disolucin se define como la fraccin de la intensidad o de la fuerza de la luz incidente, Po, que se transmite verdaderamente a travs de la disolucin. En donde P es la intensidad de la luz que sale de la muestra.
T = Po
T = 100 \Po)
La absorbancia, A, de una disolucin es la luz que absorbe, no la que se transmite, y se define como:
A = - logT = log
La ley de Beer (tambin conocida como la ley de Bouguer-Beer o de Lambert y Beer) establece que: a una longitud de onda dada, la absorbencia es proporcional a la concentracin de la especie absorbente en una disolucin, como lo indica la siguiente ecuacin.
A = zbc
En donde b es el recorrido del haz de luz en la celda, c es la concentracin (moles/1) y la constante de proporcionalidad es la absortividad molar, e. Su valor numrico depende de las unidades que se usen para expresar b y c. Si b est dada en cm y c en moles por litro, se le denomina coeficiente de extincin molar o absortividad molar y recibe el smbolo de e. Si la concentracin se da en g/1, solamente se llama coeficiente de extincin o absortividad y su smbolo es "a" (para obtener mayor informacin sobre esta ley se pueden leer los trabajos de Hughes, 1952,Liebhafsky, 1953,yLykos, 1992).
Desviaciones de la ley de Beer

Una gran cantidad de compuestos absorbentes siguen bastante bien la ley de Beer en soluciones diluidas, pero en algunas sustancias las absorbancias varan en forma no lineal respecto de la concentracin. Este comportamiento se conoce como "desviacin de la ley de Beer". Para trabajar estos sistemas se requiere una curva de calibracin, trazada con valores de muestras de concentracin conocida, de este modo se puede conocer el intervalo de concentraciones en el cual la relacin es lineal. Se debe tomar en cuenta que las desviaciones con respecto a esta ley pueden tener causas diversas: por muestras muy concentradas o muy diluidas, por variacin del equilibrio qumico de la sustancia que absorbe y por limitaciones del instrumento utilizado. Para tener el mnimo de problemas con las desviaciones, se recomienda trabajar en el intervalo de concentraciones de 10'2 M a 10'6 M. Si se utiliza una tcnica poco reconocida, hay que cuidar el equilibrio qumico poniendo especial atencin en la fuerza inica y en el pH del sistema, ya que hay muchos compuestos cromforos o quelatos que presentan equilibrios parciales, en estos casos hay que agregar un exceso de ligando para desplazar el equilibrio hasta la formacin del complejo con mayor nmero de coordinacin. Tambin existen problemas causados por los equipos, como las radiaciones reflejadas dentro del aparato que llegan al detector, los cambios de sensibilidad del detector y lasfluctuacionesen la corriente elctrica que provocan cambios en la intensidad de la radiacin y por ende modificaciones en la lectura registrada. Un dato muy importante es que las mediciones espectrofotomtricas slo son confiables con valores intermedios de absorbancia, aproximadamente entre 0.187 y 0.824; o en % de T, entre 15 y 65; si se requiere, se puede ampliar
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Espectrofotometra
esta escala hasta 80% de 7, pero entonces se aumenta el error fotomtrico (valores de absorbancia para un espectro de un solo haz, utilizando la grfica de Ringbom. Servicios Centrales de Instrumentacin, 1983).
Celdas
La celda es un depsito transparente especialmente diseado para contener la disolucin de prueba o el disolvente de referencia (blanco) durante los estudios espectrofotomtricos. Existen celdas o cubetas de diversos tamaos y formas apropiadas para los diferentes tipos de espectros comerciales (figura 3.1). Las celdas ms comunes para medir espectros en la regin del visible-ultravioleta estn fabricadas con cuarzo y tienen un paso de luz de 1.0 cm. Las celdas de vidrio ptico son apropiadas slo para mediciones en la regin del visible, ya que absorben la radiacin ultravioleta. Generalmente las celdas son cuadradas con dos lados esmerilados, pero las hay cilindricas en forma de tubo de ensayo para ser utilizadas en el Spectronic 20. Tambin existen las celdas de flujo que permiten la circulacin continua de una disolucin a travs de la cubeta. Son tiles para medir la absorbancia de disoluciones que fluyen de una columna cromatogrfica. Tambin existen las celdas trmicas con recirculacin de agua o algn lquido que fluye en una camisa para mantener el contenido de la celda a la temperatura deseada. Las caractersticas de transmisin de las celdas en varias longitudes de onda son funcin de los materiales de fabricacin. Por ejemplo, el vidrio pyrex transmite en el intervalo de los 320 a los 2 500 nm. La figura 3.2 muestra las zonas de absorcin de los materiales ms comnmente empleados en la fabricacin de celdas. Se pueden utilizar vidrios o plsticos especiales en la regin del visible.
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Celda cilindrica para flujo constante
Celda normal con tapa
Microcelda tpica con tapa
Celda cuadrada para flujo constante
Figura 3.1 Diferentes tipos de celdas para espectrofotometria.
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Espectro fotometra
200
250
300
350
400 nm
1. Spectrosil 2. Slice fundido 3. Cuarzo fundido
4. Vitreosil grado IR 5. Vidrio ptico especial 6. Vidrio
Figura 3.2 Espectro de transmisin para materiales utilizados en la fabricacin de celdas.
Resulta conveniente contar con una marca en el lado donde incida la luz, de manera que la celda pueda siempre ser orientada en la misma posicin para permitir la reproducibilidad de los resultados.
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1
7. Control de longitud de onda 2. Control de ajuste de 0% de transmitancia o de absorbancia 3. Control de cero y de encendido 4. Portaceldas
Figura 3.3 Espectrofotmetro Spectronic 20.
Operacin del espectrofotmetro Spectronic 20

Descripcin
El Spectronic 20 (figura 3.3) se enciende girando el control del cero, de la perilla izquierda, en el sentido de las manecillas del reloj. El aparato se calienta
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7. Control de longitud de onda 2. Control de ajuste de 0% de transmitancia o de absorbancia 3. Control de cero y de encendido 4. Portaceldas
Figura 3.3 Espectrofotmetro Spectronic 20.
Operacin del espectrofotmetro Spectronic 20

Descripcin
El Spectronic 20 (figura 3.3) se enciende girando el control del cero, de la perilla izquierda, en el sentido de las manecillas del reloj. El aparato se calienta
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2.
3.
4.
5.
6. 7.
Evite el uso de agentes limpiadores que sean abrasivos, corrosivos o que produzcan coloracin de las superficies. Por ningn motivo las limpie con un escobilln. Enjuague las celdas cuando menos tres veces con pequeas porciones de la disolucin de prueba antes de tomar la lectura. Evite usar solamente agua destilada, ya que esto produce un efecto de dilucin sobre la muestra a medir. Cuando introduzca la celda en el compartimento de muestras, limpie el tercio inferior de la celda con papel especial para lente (nunca use servilletas, pauelos o la bata), y asegrese que las paredes no muestren fibrillas adheridas o manchas. Evite producir rayaduras en las superficies de las celdas, colquelas dentro del portaceldas con la lnea indicadora alineada con su respectiva gua Mantenga cerrada la tapa del compartimento de muestras mientras realiza las mediciones, ya que esto restringe la entrada de luz parsita. Al finalizar todas las mediciones, enjuague con el disolvente puro. Si las celdas estn muy sucias o si presentan depsitos difciles de remover, use una mezcla de cido clorhdrico 3 N y alcohol etlico absoluto 1:1. Aplique un ltimo enjuague con etanol o metanol grado espectroscpico y deje secar al aire.
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Prctica 5
Desarrollo de un mtodo espectrofotomtrico
Introduccin
Para la cuantificacin de sustancias que pueden absorber la luz que las atraviesa, las tcnicas espectrofotomtricas son confiables y de fcil manejo. Adems, no slo sirven para calcular la cantidad de soluto presente en una disolucin, sino tambin se pueden utilizar para identificar sustancias de manera cualitativa. Cuando se realiza un proyecto de investigacin, se puede requerir el desarrollo de un mtodo espectrofotomtrico para cuantificar algn soluto o quizs el producto de una reaccin, que tengan la cualidad de absorber la luz. Para conseguir esto se necesita: a) Conocer la longitud de mxima absorbancia del compuesto, que se obtiene haciendo un barrido en la regin del espectro de absorcin de inters. La preparacin de una curva de calibracin con disoluciones de concentracin conocida. Conocer la curva permite verificar si la ley de Lambert y Beer se cumple en el intervalo de trabajo. Conocer si hay interferencias entre los reactivos, si las reacciones involucradas son estables en las condiciones de trabajo y si hay reproducibilidad en los resultados experimentales.
b)
c)
Tome en cuenta que la absorcin de la energa radiante en las regiones espectrales del visible y del ultravioleta, depende principalmente del nmero de
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arreglos de los electrones de las molculas o iones absorbentes. En sustancias inorgnicas se presenta una absorcin selectiva, cuando un nivel energtico electrnico incompleto se halla cubierto o sobrepuesto por un nivel de energa completo, normalmente formado por valencias de coordinacin con otros tomos. En las molculas orgnicas la absorcin selectiva est relacionada con la localizacin de los electrones en la molcula. Los compuestos completamente saturados no muestran una absorcin selectiva en las regiones del visible y en las accesibles del ultravioleta lejano. Las dobles ligaduras conjugadas producen absorcin con mayores longitudes de onda. Si la molcula es muy grande, la absorcin entrar en la regin del visible y presentar color, tal como sucede con la molcula del (3 caroteno (Ewing, 1979).
Objetivo
El alumno aprender a utilizar un espectrofotmetro (Spectronic 20) y a implementar una metodologa para la cuantificacin de compuestos que absorben la luz en la regin del visible.
Espectrofotmetro Spectronic 20 2 celdas para el espectro 3 matraces aforados 100 mi 5 matraces volumtricos de 25 mi 3 vasos de precipitados de 100 mi 3 pipetas graduadas de 5 mi Vidrio de reloj Agitador de vidrio Balanza analtica Esptula Piseta con agua destilada NH4Fe(SO4)2*12H2O H2SO4 concentrado 1,10-fenantrolina CH3COONa
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Normas de seguridad
Tome en cuenta los puntos 2, 3 y 4 del apartado "Prevencin de accidentes en el trabajo con sustancias qumicas", que se encuentra en el captulo 1. Para preparar soluciones diluidas de cido sulfrico es recomendable: a) Enfriar el recipiente que contenga agua en un bao de hielo. b) Agregar el cido al agua en porciones pequeas, dejando que ste resbale por la pared del recipiente. c) Agitar despus de cada adicin de cido regresando el recipiente al bao de hielo.
Procedimiento
1. Metodologa para encontrar la longitud de mxima absorbancia del complejo hierro-fenantrolina: se obtiene haciendo un barrido en la regin del espectro de 400 a 620 nm. Preparacin de disoluciones: Disolucin estndar del hierro (III). Preparar 100 mi de disolucin 1.8 x 10-3MdeNH4Fe(SO4)2 12H2O en disolucin de H2SO4 0.1 N. Disolucin de 1,10-fenantrolina alO.l % (p/p) en agua. Preparar 100 ml Acetato de sodio 2 M. Preparar 100 ml. Coloque 5 ml de disolucin estndar de Fe (III) en un matraz volumtrico de 100 ml. Adicione 10 ml de disolucin de acetato de sodio para mantener el pH entre 3 y 5. Verifique con papel pH. Adicione 10 ml de 1, 10-fenantrolina y diluya hasta la marca de aforo con agua destilada. Deje transcurrir 10 minutos para que se desarrolle el color rojo anaranjado. Mida la absorbancia a intervalos de 10 nm, de 400 a 620 nm. En cada longitud de onda ajuste la transmitancia a cero y cien porciento, use un blanco que contenga acetato de sodio y 1,10-fenantrolina.
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2.
La preparacin de una curva de calibracin con disoluciones de concentracin conocida permite verificar si la ley de Lambert y Beer se cumple en el intervalo de trabajo. Curva estndar. Prepare en matraces volumtricos de 25 mi una serie de disoluciones que contengan 1,2,3,4 y 5 mi de la disolucin estndar de Fe (III). Agregue 10 mi de disolucin de acetato de sodio, 10 mi de 1,10-fenantrolina y diluya hasta la marca con agua destilada. Mdase la absorbancia de estas disoluciones en la longitud de onda seleccionada.
3.
Adems se requiere conocer si hay interferencias entre los reactivos, si las reacciones involucradas son estables en las condiciones de trabajo y si hay reproducibilidad en los resultados experimentales. Solicite al profesor una muestra problema de Fe (III) y mida la absorbancia. Realice por triplicado la determinacin.

Con los resultados del punto 1, construya una grfica de longitud de onda en funcin de la absorbancia. Determine la longitud de onda de mxima absorbancia para el complejo 1,10-fenantrolina de hierro (III) que ha de emplearse. Muestre al profesor de laboratorio la longitud de onda seleccionada, antes de proceder al anlisis cuantitativo. Construya una grfica de la absorbancia en funcin de la concentracin (moles/1). Compruebe en qu intervalo la ley de Lambert y Beer se cumple. Determine la concentracin de la muestra problema y exprsela en molaridadyenppm. Calcule el coeficiente de extincin molar del complejo colorido. Calcule la cantidad de mM por mi necesarios para dar una absorbancia de 1.0.
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Cuestionario
i. Explique cules son las desviaciones que pueden presentarse en la aplicacin de la ley de Beer. Cules son los cuidados que se deben tener con las celdas del espectrofotmetro? Cules son los factores que se deben tomar en cuenta para la determinacin espectrofotomtrica de iones inorgnicos por formacin de complejos? Una disolucin de permanganato de potasio 1.28x10"4 M tiene una transmitancia de 0.5 a 525 nm, en una celda de 1.0 cm. a) Qu absorbancia tiene esta disolucin? b) Si la concentracin fuese el doble, cul sera la absorbancia y la transmitancia? c) Qu concentracin correspondera a una transmitancia de 0.75 en esta celda? El cobalto (II) forma fcilmente un complejo de color azul cuando reacciona con el tiocianato. El procedimiento es el siguiente: se prepara una disolucin de tres partes de acetona por una de disolucin acuosa al 50% de NH4SCN. Esta disolucin se agrega a un matraz que contiene Co (II), el complejo resultante es de color azul intenso. Se prepararon las siguientes disoluciones y se efectu la lectura a 620 nm:
Co, ppm 3.0 6.0 9.0
2.
3.
A
0.10 0.21 0.32 0.42
12.0
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Se tomaron 4.0 mi del lquido que sala de una columna de separacin y se diluyeron hasta 100 mi con acetona y NH4SCN. La absorbancia medida a 620 nm fue de 0.25. Cul fue la concentracin del cobalto, en ppm, en el matraz de 100 mi que contena la muestra? 6. Se tienen 20 mi de disolucin con 3.0 mg de hierro (II) formando un complejo con la 1,10-fenantrolina. La absorbancia de la disolucin es de 0.45 en una celda de 1 cm a 515 nm. Calcule el % de Ty el coeficiente de extincin molar del complejo.
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Prctica 6
Determinacin por espectrofotometra de la concentracin de cobalto y nquel en una mezcla Introduccin
Frecuentemente es preciso analizar mezclas de dos o ms sustancias. A veces es posible hacerlo a travs de determinaciones espectrofotomtricas simultneas, en lugar de efectuar las separaciones fsicas o qumicas necesarias para analizar los componentes puros por separado. Se conocen varios mtodos para determinar las concentraciones de sistemas con dos o ms compuestos, el ms conocido requiere de establecer los picos de absorcin de cada componente y que cada uno de ellos se encuentre prcticamente libre de absorciones de los otros compuestos, adems, se debe considerar que las absorbancias de cada uno son aditivas. Existe otro mtodo para sistemas en los cuales las curvas de absorcin se traslapan, de manera que requieren un barrido de las dos longitudes de onda. En este caso de debe utilizar la metodologa propuesta por Blanco et al. (1989), en la cual se establece una correlacin lineal que permite con base en la pendiente y la ordenada al origen conocer las concentraciones de mezclas binarias. En esta prctica se utilizar el primer mtodo para casos en que las longitudes de onda de mxima absorbancia no se traslapan. En la determinacin de la concentracin de dos (o ms) sustancias hay que tener cuidado, ya que los pequeos errores experimentales se suman rpidamente. Un error en la lectura de absorbancia en una longitud de onda puede disminuir la precisin en el resultado final.
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Objetivo
El alumno aplicar sus conocimientos sobre espectrofotometra para la cuantificacin de una mezcla de dos compuestos.
Espectrofotmetro Spectronic 20 2 celdas para el espectro 2 matraces aforados 100 mi 2 matraces volumtricos de 25 mi 2 vasos de precipitados de 100 mi 2 pipetas graduadas de 5 mi Vidrio de reloj Agitador de vidrio Balanza analtica Esptula Piseta con agua destilada Co(NO3)2 6 H2O Ni(NO3)2 6H 2 O
Normas de seguridad
Tome en cuenta el apartado "Prevencin de accidentes en el trabajo con sustancias qumicas", que se encuentra en el captulo 1.
Procedimiento
1. Preparar las siguientes disoluciones: a) 100 mi de Co(NO3)2 6 H2O 0.09 M. b) 100 mi deNi(NO3)2 6 H2O 0.09 M.
92
Determinacin de la concentracin de cobalto y nquel en una mezcla
2.
3. 4.
Verificar que las longitudes de onda de mxima absorbancia no se sobrepongan, haciendo un barrido de 50 nm, de 10 en 10 nm, para cada valor. El Co(NO3)2 tiene un mximo de absorcin en 510 nm y el Ni(NO3 )2 lo tiene en 395 nm. Medir la transmitancia del nitrato de cobalto y del nitrato de nquel en 510y395nm. Medir la absorbancia de una mezcla problema en 510 y 395 nm.

A partir de los porcientos de transmitancia calcule los valores de absorbancia para cada longitud de onda. Si se hacen varias determinaciones, tome el promedio. Con estos datos calcule los coeficientes de extincin molar de los dos iones en las dos diferentes longitudes de onda. Calcule la concentracin molar de cada componente. Para obtener mejores resultados efecte los clculos conservando tres cifras despus del punto decimal. Reporte los resultados en molaridad y en mg de Ni/ml y mg de Co/ml.
Cuestionario
1. Qu diferencia existe entre la fuente de radiacin de los espectrofotmetros de la regin ultravioleta y los de la regin visible? Calcule la concentracin de cada uno de los colorantes en la siguiente mezcla analizada por espectrofotometra. Una disolucin 0.02 M de un colorante rojo produce una absorbancia de 0.8 a 515 nm y de 0.15 a 635 nm. Una disolucin 0.03 M de un segundo colorante azul tiene una absorbancia de 0.2 a 515 nm y de 1.0 a 635 nm. Una mezcla de ambos colorantes dio una absorbancia de 0.55 y 0.825 a 515 y 635 nm, respectivamente.
2.
93
Calcule la concentracin de una disolucin que contiene Fe (III), a partir de la siguiente tcnica: A un mi de disolucin con hierro se le adicionan acetona, disolucin de tiocianato de amonio y agua hasta 100 mi. La determinacin se lleva a cabo con una celda de 2 cm. La absorbancia en 480 nm fue de 0.75. El coeficiente de extincin molar fue de 14 000. Una disolucin que contiene una mezcla de AMP y GMP da una absorbancia de 0.621 en 260 nm y de 0.214 en 280 nm. Calcule la concentracin de AMP y GMP, si los coeficientes de absorcin molar (en litros mol"1 cm"1) en estas longitudes de onda son:
AMP 260 nm 280 nm GMP 260 nm 280 nm 0.0154 0.0025 0.0117 0.077
AMP = Adenosin mono fosfato GMP= Glucosa mono fosfato
Las medidas fueron hechas con una celda de 1 cm de longitud de paso ptico.
94
Espectrofotometra
II. TURBIDIMETRIA
El mtodo turbidimtrico se fundamenta en el fenmeno de que la luz, al pasar a travs de un medio con partculas dispersas, con un ndice de refraccin diferente al del medio, disminuye su intensidad debido a la dispersin. Instrumentalmente se detecta la intensidad de la luz transmitida por el medio, o sea, la luz no dispersada. La turbidimetra es muy similar a la colorimetra, en cuanto que ambas se basan en la medicin de la luz transmitida por un medio y emplean aparatos similares. La intensidad de la luz que se dispersa en cualquier ngulo es funcin de la concentracin de las partculas dispersantes, de su tamao y forma, de la longitud de onda y de la diferencia entre los ndices de refraccin de las partculas y el medio. La dispersin total de un determinado nmero de partculas (suponiendo que no haya interacciones de dispersin mltiple), est dada por la suma de las dispersiones individuales, mientras que la absorbancia del sistema es directamente proporcional a la concentracin de partculas (Willard, 1974). Es importante tomar en cuenta que la relacin entre la intensidad de la luz dispersa y la concentracin no es simple, por lo que este tipo de determinaciones deben tener un carcter emprico. La luz no es realmente absorbida por la disolucin, sino que se dispersa en todas direcciones y no llega al detector. La absorcin aparente o turbidancia obedece a una ecuacin anloga a la ley de Beer en un intervalo limitado de concentraciones. = kbc "A " es la absorbancia aparente o turbidancia (Ewing, 1978, utiliza la letra S como smbolo de turbidancia) Po es la potencia radiante del haz de luz incidente P es la potencia del haz de luz emergente k es una constante b es el recorrido del haz de luz en la celda c es la concentracin de la disolucin
95
El valor de k se determina empricamente con una serie de patrones (Harris, 1992). Esta ecuacin es vlida slo para suspensiones muy diluidas, porque a medida que la concentracin aumenta, una mayor proporcin de la luz dispersa encuentra su camino hacia la fotocelda de medida a travs de una dispersin mltiple (Ewing, 1978). La ecuacin de la absorbancia aparente se puede transformar en:
UT
- rb
"T" es la transmitancia de la disolucin turbia T es el coeficiente de turbidez y es igual a 2.303 k. Prcticamente cualquier espectrofotmetro puede utilizarse en turbidimetra: se mide la fraccin de la luz dispersada (la transmitancia), la cual es independiente de la intensidad de la fuente luminosa. La turbidimetra aplicada a titulaciones no es muy precisa, debido a que la deteccin del punto final depende del tamao de las partculas. Sin embargo, la sensibilidad es muy buena, por ejemplo, los sulfates pueden determinarse hasta el orden de partes por milln. En cuanto a la seleccin de la longitud de onda, sta no es crtica; sin embargo, si la disolucin a trabajar contiene un soluto colorido, adems del componente turbio, es preferible escoger una regin de longitudes de onda de mnima absorcin. En cambio, si el componente turbio es el que absorbe, deber trabajarse en la regin donde se presente la longitud de onda de mxima absorbancia.
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Prctica 7
Cuantificacin turbidimtrica de sulfatos
Introduccin
La aplicacin de tcnicas turbidimtricas es amplia, aunque en los ltimos aos ha sido desplazada por la aplicacin de otros mtodos instrumentales ms sensibles. Actualmente an existen procedimientos en el rea de farmacia y alimentos que la siguen utilizando. Por ejemplo, en la industria de vinos y tambin en la de aguardientes la transparencia y brillantez son caractersticas importantes de la calidad de estos productos. La presencia de materiales suspendidos, aun en cantidades tan pequeas que resultan invisibles al embotellar, producirn un sedimento visible y desagradable despus de cierto tiempo. La calidad de las aguas para procesos industriales y la transparencia del agua para la alimentacin de calderas, son otros ejemplos tpicos de aplicaciones comunes. Hay tcnicas donde la turbidez en la muestra se desarrolla en condiciones controladas. La reaccin de precipitacin debe efectuarse con rapidez y las partculas formadas deben ser de baja solubilidad y de tamao pequeo. La adicin de agentes tensoactivos o de coloides protectores es til, ya que favorece el tamao de las partculas, promueve la nucleacin a expensas del crecimiento de los cristales y aumenta lareproducibilidad de la tcnica. Se pueden presentar problemas con la exactitud del mtodo, pues se encuentra limitado por la falta de reproducibilidad de la forma fsica del precipitado o, una vez formado, por la inestabilidad del mismo.
97
Objetivo
El alumno utilizar una tcnica turbidimtricapara la cuantificacin de una muestra problema de sulfates.
Espectrofotmetro Spectronic 20 2 celdas para el espectro Matraz aforado de 500 mi Matraz aforado de 200 mi 4 matraces aforados de 250 mi 4 matraces Erlenmeyer de 500 mi 2 vasos de precipitados de 100 mi 2 pipetas graduadas de 5 mi Vidrio de reloj Agitador de vidrio Balanza analtica Esptula Piseta con agua destilada Na2SO4 NaCl HC12M BaCL
Normas de seguridad
Tome en cuenta los puntos 2, 3 y 4 del apartado "Prevencin de accidentes en el trabajo con sustancias qumicas", que se encuentra en el captulo 1. Para preparar soluciones diluidas de cido clorhdrico es recomendable hacerlo en la campana de extraccin.
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Cuantifcacin turbidimtrica de sulfatos
Procedimiento
1. 2. 3. Disolucin estndar de sulfatos. Prepare 500 mi de sulfato de sodio anhidro con 200 ppm. Disolucin de NaCl al 20 % (p/p) en HCl 2 M. Prepare 200 mi. Prepare 4 disoluciones de 250 mi, con las siguientes concentraciones, para elaborar la curva patrn: 25, 50, lOOy 150ppm. Agregue 25 mi de la disolucin de NaCl en HCl 2 M a cada dilucin, antes de llevar a la marca de aforo. Trasvase cada una de las diluciones a un matraz Erlenmeyer de 5 00 mi y adicione 1.0 g de BaCl2 a cada sistema. Agite muy bien y mida la transmitancia, utilizando como blanco la disolucin patrn a 3 5 5 nm. Solicite al profesor del laboratorio una muestra problema y mida su transmitancia.
4.
5.

Trace la grfica de transmitancia en funcin de la concentracin (mg/1). Interpole el dato de transmitancia en la grfica y determine la concentracin de la muestra problema.
Cuestionario
1. Cul es la diferencia entre una determinacin turbidimtrica y una efectuada por nefelometra? Investigue dos aplicaciones directas de la turbidimetra dentro de algn proceso de elaboracin o de control de calidad de inters para usted. Para medir la cantidad defluoruroen una muestra de agua de una ciudad, se utilizaron dos litros de agua a la cual se le adicionaron 0.5 g de nitrato
2.
3.
99
de calcio. Se agit y la disolucin se evapor hasta 150 mi. Se midi la transmitancia resultando de 55 %. La tabla muestra las concentraciones utilizadas en la curva patrn y los datos de transmitancia obtenidos. Calcule usted la concentracin del fluoruro del agua citadina.
Concentracin ppm "A" 0.04 0.10 0.30 0.52
12
25 50 110
100
Bibliografa
Bibliografa
Blanco, M. et al 1989. "A Simple Method for Spectrophotometric Determination of Two-Components with Overlapped Spectra". J. Chem. Educ. 66:178-180. Bosh-Reig, F. etal 1991. "Development of the H-point Standar-Aditions Method for Ultraviolet Visible Spectroscopic Kinetic Analysis of TwoComponents System". Anal Chem. 63:2424-2429. Brewer, S. 1987. Solucin de problemas de qumica analtica. Ed. Limusa, Mxico. Cope, V. W. 1978. "Determination of the Performance Parameters of Spectrophotometer, and Advanced Analytical Experiment". J. Chem. Educ. 55:680-681. Dean, J. A. 1989. Manual de qumica. Tomo IV: Espectroscopia. Me Graw Hill, Mxico. Espectrofotometra UV-visible. 1983. Servicios Centrales de Instrumentacin y Laboratorios, S. A., Mxico. Ewing, G. W. 1979. Mtodos instrumentales de anlisis qumicos. Ed. Me Graw Hill, Mxico. Garca, V. Y. M. 1988. Equilibrio qumico aplicado a la qumica analtica. Ed. Diana, Mxico. Hughes, H. A. et al 1952. "Suggested Nomenclature in Applied Spectroscopy". Anal Chem. 24: 1349-1354. Koltoff, I. M. y E. B. Sandel. 1969. Quantitative Chemical Analysis. The Macmillan Company, USA.
101
Liebhafsky, H. A. y H. G. Pfeiffer. 1953.J. Chem. Educ. 30:450. Lykos, P. 1992. "The Beer-Lambert Law Revisited a Development Without Calculus"../ Chem. Educ. 69: 730-732. Meloan, C. F. y R. M. Kiser. 1973. Problemas y experimentos en anlisis instrumental. Ed. Reverte, Mxico. Operator 's Manual. 1987. Spectronic 20 Series. Spectrophotometers Milton Roy, USA. Pecsok, R. L. 1973. Mtodos modernos de anlisis qumico. Experimentos. Ed. Limusa, Mxico. Pecsok, R. L. y L. D. Shields. 1987. Mtodos modernos de anlisis qumico. Ed. Limusa, Mxico. Watty, M. B. 1989. Qumica analtica. Ed. Alhambra, Mxico. Willard, H. H. et al. 1981. Mtodos instrumentales de anlisis. Ed. Cecsa, Mxico.
102
Captulo 4
MTODOS ELECTROQUMICOS
Introduccin
Los mtodos electroqumicos abarcan una amplia variedad de tcnicas, basadas en los diferentes fenmenos que se llevan a cabo dentro de una celda electroqumica. Todas las mediciones elctricas bsicas, como la corriente, las resistencias y el voltaje, se han empleado solas o en combinacin para propsitos analticos. Los mtodos electroqumicos se clasifican en: 1. Potenciometra. Utiliza de manera directa la ecuacin de Nernst, midiendo el potencial de los electrodos no polarizados bajo condiciones de corriente igual a cero (sin aplicacin de corriente). Voltametra y polarografia. Estos mtodos se usan para estudiar la composicin de disoluciones electrolticas diluidas utilizando curvas de corriente-voltaje. La polarografia se refiere a las aplicaciones del electrodo de goteo de mercurio. Conductimetra. Se emplean dos electrodos inertes idnticos, y se mide el recproco de la resistencia que es la conductancia. Cronopotenciometra. En esta tcnica se hace pasar una corriente conocida a travs de la disolucin y se registra el potencial de los electrodos en funcin del tiempo. Coulombimetra. Involucra dos tcnicas: a) La coulombimetra de corriente constante, que mantiene una corriente de este tipo durante todo el perodo de la reaccin. En este caso se debe agregar un exceso de un regulador de oxidorreduccin para que el potencial no aumente a un valor que permita la realizacin de otra reaccin no deseada, b) Las separaciones de potencial controlado o electrogravimetra. Se pueden lograr separaciones cuantitativas por medio de una oxidacin o reduccin electroltica y medir la sustancia separada por coulombimetra o gravimetra: se mantiene un potencial de electrodo constante y se detecta en forma continua el potencial del electrodo de trabajo en comparacin con un electrodo de referencia.
2.
3. 4.
5.
Los mtodos de cronopotenciometra, coulombimetray las separaciones de potencial controlado no se estudian en el curso de Qumica analtica II, pero si existe inters acerca de estos mtodos, en la bibliografa de este captulo se pueden encontrar referencias sobre el tema. Todos los mtodos electroqumicos se caracterizan por su alto grado de selectividad y precisin.
Celdas electroqumicas
Existen dos tipos de celdas: la galvnica y la electroltica. La primera es aquella en que una reaccin de oxidorreduccin espontnea genera una corriente elctrica (Harris, 1992). Si se suministra energa elctrica a una celda, con una fuente de poder, entonces recibe el nombre de celda electroltica.
Electrodos de referencia
Un electrodo de referencia tiene un potencial conocido y constante, estn constituidos por una hemicelda interna de referencia, que puede ser de plata, cloruro de plata o de calomel (cada uno de ellos con su respectivo valor de potencial estndar); tienen un electrlito de puente salino y un pequeo canal en la punta del electrodo, a travs del cual fluye muy lentamente el electrlito, permitiendo el contacto con los otros componentes de la celda.
Electrodos de calomel
Tienen un elemento no atacable, como el platino, el cual est en contacto con mercurio, cloruro mercuroso (calomel) y con una disolucin neutra de cloruro de potasio (de concentracin conocida) que se encuentra saturada con calomel.
106
Mtodos electroqumicos
HgCUs)
2Hg(\) + 2CI-
Existen tres versiones de este electrodo: el electrodo de calomel saturado (ECS), en donde la disolucin de KCl es 4.2 N (figura 4.1), y los electrodos que tienen 1.0 N o 0.1 N de la disolucin de KCl. Estos ltimos se prefieren porque alcanzan sus potenciales de equilibrio ms rpidamente y porque dependen menos de la temperatura que el de tipo saturado. Los valores para estos tres electrodos a 30 C son: Electrodo de calomel saturado (ECS) = 0.241 V Electrodo de calomel normal (ECN) = 0.280 V Electrodo de calomel dcimo normal = 0.335 V Si requiere mayor informacin sobre los valores de potencial de los electrodos de referencia, consulte el Lange s Handbook ofChemistry o el Handbook Analytical Chemistry
Figura 4.1 Electrodo de referencia de calomel saturado.
107
Electrodos de plata-cloruro de plata

El electrodo contiene un alambre de plata recubierto con una capa de cloruro de plata y sumergido en una disolucin de cloruro de potasio (de concentracin conocida), la cual tambin est saturada con cloruro de plata. AgCl (s) + e~ 4 E = 0.222 V E (saturado con KC1) = 0.197 V Ag (s) + Cl-
Electrodo de vidrio combinado de pH

Es el ms utilizado en el anlisis qumico cuantitativo, y est clasificado entre los electrodos selectivos de iones. En la parte interna del electrodo de vidrio hay un alambre de plata con un extremo sumergido en una disolucin de HC10.1 M (figura 4.2). El bulbo de la parte inferior del electrodo est fabricado con un vidrio de composicin especial. La superficie interior de esta membrana de vidrio est en contacto con la disolucin de HC10.1 M, y la superficie externa, con la disolucin cuyo pH se va a determinar. En las dos superficies la membrana de vidrio absorbe agua, formando una capa de gel. La zona del electrodo que responde a las variaciones de pH es la membrana delgada de constitucin y construccin especial, ya que presenta una red de silicato con tomos de oxgeno cargados negativamente, los cuales se encuentran disponibles para coordinarse con cationes monovalentes, en particular el Na+. Esta membrana tiene un espesor aproximado de 0.1 mm. En estudios realizados con tritio (3H) como trazador radioactivo, se ha demostrado que los iones hidrgeno no atraviesan la membrana de vidrio del electrodo de pH. Las dos caras de la membrana estn en equilibrio con H+, y los iones Na+ transportan las cargas a travs de la membrana. La diferencia de potencial entre los electrodos de plata, cloruro de plata interno y externo depende de la concentracin del ion cloruro en el compartimento de cada electrodo, as como de la diferencia de potencial que existe entre las caras de la membrana.
108
Como la concentracin del cloruro es constante en cada compartimento, y la concentracin de H+ es fija en la parte interna de la membrana de vidrio, el nico factor que provoca un cambio en la diferencia de potencial es la variacin del pH de la disolucin del analito en la parte externa de la membrana del electrodo (Harris, 1992). Un electrodo combinado de vidrio llega a responder en forma muy cercana a lo indicado por la ecuacin de Nernst. Es por esto que cada cambio de una unidad de pH en un analito da como resultado un cambio de potencial de 59.16mV.
Unin reemplazable
Electrodo de Ag
Proteccin de la membrana de vidrio
Membrana d e vidrio
Figura 4.2 Vista parcial de un electrodo de vidrio combinado. Calibracin del electrodo de vidrio
Un electrodo de pH debe calibrarse antes de ser utilizado. Para ello existen en el mercado muchas disoluciones patrn de pH. Se recomienda calibrar el electrodo y el potencimetro con una disolucin reguladora o de preferencia con dos, seleccionadas de manera que el pH del problema se site dentro del intervalo de las disoluciones patrn. El procedimiento de calibracin de cada potencimetro puede variar con la marca y el modelo, por lo que es recomendable la lectura de los instructivos de cada aparato en particular.
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A continuacin se describe el uso y manejo del potencimetro, se explica como calibrar en dos puntos el medidor de pH Conductronic modelo 20 y el potencimetro de campo, Conductronic 10, modelo muy abundante en los laboratorios de docencia de la Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud.
Operacin del potencimetro Conductronic modelo 20 o modelo 10

Descripcin
1. El o los electrodos se enjuagan con agua destilada y se secan suavemente con papel absorbente. Cuide de no frotar el electrodo (sobre todo si el cuerpo es de vidrio) porque esto produce electricidad esttica en la superficie del vidrio. Medir la temperatura de la disolucin cuyo pH se desea conocer y ajustar el dato en el potencimetro con el botn correspondiente. Sumergir el electrodo en una disolucin reguladora de pH 7 y dejar que alcance su equilibrio (entre 30 y 60 segundos). Se ajusta el aparato al valor de pH de la disolucin amortiguadora. Para realizar una lectura correcta, el electrodo de vidrio se debe sumergir en una disolucin de pH desconocido hasta una profundidad tal que la unin reemplazable (figura 4.2), situada en la parte inferior, se encuentre por debajo del nivel del lquido. Esto permite que los dos electrodos de plata midan la diferencia del potencial entre las caras interna y externa de la membrana de vidrio. Colocar el selector de funciones del potencimetro en standby y sacar el electrodo de la disolucin, enjuagndolo con agua destilada; secarlo y sumergirlo en una segunda disolucin amortiguadora de pH diferente (si se trabaja en intervalos cidos, la segunda disolucin puede ser de pH 4, si es en la zona bsica, el amortiguador puede ser de pH 10). Se vuelve a mover el selector de funciones del potencimetro de standby a pH y se hace la lectura. Si el electrodo responde siguiendo la ecuacin
2. 3.
4.
110
de Nernst, el potencial debe variar en 0.05916 V por cada unidad de pH a 25 C. Si el valor de pH de esta segunda solucin no coincide con la lectura, sta se ajusta con el botn de temperatura. Los modelos Conductronic 20 digitales tienen un tercer botn de "pendiente", ajuste con l.
Cuidados
Cuando el electrodo no se usa se debe guardar en una disolucin acuosa, de manera que la capa del gel hidratado no se seque. Si el electrodo ya est seco, se reactiva sumergindolo en agua durante varias horas. Los electrodos de vidrio se desgastan poco a poco, adems de ensuciarse fcilmente con el mal uso, esto hace que la composicin del vidrio cambie, provocando que la respuesta del electrodo se vuelva lenta o errnea; cuando el problema ya es muy grave, ni siquiera se puede estandarizar. Si esto sucede se recomienda un lavado con HC16 M y luego enjuagar con agua destilada. Si el lavado no funciona, reporte el electrodo con su profesor o a la Coordinacin de Laboratorios para que procedan a un lavado ms riguroso con bifluoruro de amonio, NH4HF2, al 20 % p/p. Precaucin: este compuesto provoca quemaduras en la piel y disuelve el vidrio, por lo que se debe preparar en vaso de precipitados de plstico (Nalgen). El electrodo se sumerge en la disolucin durante un minuto, disolviendo un poco de la membrana de vidrio y exponiendo una superficie nueva. Enseguida se enjuaga el electrodo con abundante agua destilada y se calibra nuevamente (Harris, 1992).
111
Prctica 8
Determinacin potenciomtrica de constantes de ionizacin
Introduccin
El mtodo potenciomtrico consiste en la medicin de la diferencia de potencial entre el electrodo indicador y el electrodo de referencia, en diferentes intervalos, durante el transcurso de una valoracin. Un potencial de electrodo corresponde aun proceso de equilibrio y durante su medicin no debe alterarse, porque de otro modo el potencial obtenido ser incorrecto. Los dos tipos principales de electrodos usados en el trabajo potenciomtrico son: a) b) De referencia: Su potencial no se afecta al cambiar la composicin de la disolucin que se estudia. Indicador o de medicin: Su potencial depende de la concentracin de uno de los iones en la disolucin.
Aunque se dispone de innumerables sistemas de electrodos, se recomiendan los descritos en la tabla 4.1, porque proporcionan el mayor intervalo de utilidad (Meloan,1973).
Objetivo
El alumno aprender la instalacin y el uso de una celda para la determinacin potenciomtrica de las constantes de ionizacin.
113
Tabla 4.1 Electrodos de referencia y medicin.

Sistema cido base acuoso cido base no acuoso Red-ox orgnico Red-ox inorgnico Precipitacin, ion Ag Precipitacin metales pesados Referencia Calomel Ag-AgCI Ni W Indicador Vidrio Vidrio Pt Pt Ag Metal pesado
Hg 2 so 4
Calomel
Potencimetro Electrodo combinado de vidrio para medir pH 2 matraces aforados de 100 mi 4 vasos de precipitados de 100 mi Pipeta volumtrica de 20 mi Piseta con agua destilada Vidrio de reloj Esptula Balanza analtica Agitador de vidrio Bureta de 50 mi Soporte universal Pinzas para bureta Parrilla con agitacin magntica Agitador magntico cido tartrico NaOH Disolucin amortiguadora de pH 4 y 7
114
Determinacin potenciomtrica de constantes de ionizacin
Normas de seguridad
Tome en cuenta los puntos 2, 3 y 4 del apartado "Prevencin de accidentes en el trabajo con sustancias qumicas", que se encuentra en el captulo 1. Para el manejo del NaOH es necesario el uso de lentes de seguridad y guantes de neopreno, nitrilo o vinilo. Siempre debe manejarse en la campana y no deben utilizarse lentes de contacto al trabajar con este compuesto. Recuerde que es irritante y corrosivo y que puede causar dao al tracto respiratorio, piel y ojos.
Procedimiento
1. Prepare las siguientes disoluciones: 100 mi de cido tartrico 0.1 M. 100 mi de hidrxido de sodio 0.1 M, estandarizado. 2. Calibre el medidor de pH, provisto del electrodo combinado de vidrio, con las dos disoluciones amortiguadoras. Retire y lave muy bien los electrodos con agua destilada. Vierta 20 mi del cido tartrico en un vaso de 100 mi y aada 3 0 mi de agua destilada. Sumerja el electrodo en la disolucin y ajuste la agitacin con una barra magnticay una parrilla con agitacin magntica, de manera que no golpee los electrodos. Con una bureta agregue disolucin de NaOH en proporciones de 1 mi, salvo cerca del punto de equivalencia, donde se han de agregar porciones de 0.1 mi. Mida el pH despus de cada adicin de sosa y realice la determinacin por triplicado.
3.
4.
115

Trace la grfica de los valores de pH en funcin de los mi de NaOH. Con base en el pH de cada punto de equivalencia, obtenido grficamente, calcule Kax y Ka2 para el cido tartrico y compare con los valores reportados en la literatura. Explique cualquier diferencia que pueda encontrarse.
Cuestionario
1. Qu caractersticas debe tener un electrodo para que pueda utilizarse como electrodo indicador en un potencimetro? Qu son los electrodos de referencia? Qu es una celda galvnica y cmo se representa? Una celda preparada de la siguiente manera: Pt, H2(l atm), HA (0.15 M) // KC1 sat, Hg2Cl2, Hg, dio un potencial de 0.575 v. Calcular la constante de ionizacin del cido.
2. 3. 4.
116
Prctica 9
Titulacin potenciomtrica del ferrocianuro con cerio
Introduccin
El curso de la reaccin de titulacin potenciomtrica se sigue, midiendo con un potencimetro la concentracin de una o de varias especies. En esta prctica se estudia la titulacin del Fe (II) con el Ce (IV), en donde la variacin de las concentraciones durante la titulacin es la siguiente: Fe2+ Inicio Agregado A.P.E. P.Eq. D.P.E. Co XCo Co(l-X) + Ce4+ Fe3+ + Ce3+
eCo eCo
Co(X-l)
XCo
XCo
sCo sCo
Co Co
Co Co
A.P.E. antes del punto de equivalencia P. Eq. punto de equivalencia D.P.E. despus del punto de equivalencia s valor pequeo de concentracin debido al equilibrio reversible Co concentracin inicial de [Fe2+] X relacin de la concentracin del [Fe2+]/[Ce3+]
117
En el inicio slo se tiene Fe2+, de manera que el valor de potencial no se puede calcular tericamente. Antes del punto de equivalencia (A.P.E.) se encuentran las cuatro especies (Fe2+? Ce4+, Fe3+, Ce3+), y aunque la cantidad de Ce4+ es muy pequea, el valor de potencial se puede medir en estos puntos utilizando la ecuacin de Nernst y el par: Fe 37Fe2+. En el punto de equivalencia (P. Eq.) los reactivos se terminan y el valor del potencial est dado por la ecuacin:
E=
Despus del punto de equivalencia (D.P.E.), la especie que impone el valor del potencial es el reactivo titulante Ce 47Ce3+.
Mtodos para determinar el punto de equivalencia

Existen varios mtodos para la determinacin del punto de equivalencia, se describen los tres ms utilizados: 1. El mtodo ms simple se aplica principalmente a las valoraciones de cidos y bases fuertes, donde hay cambios muy grandes de pH en el punto final. Se traza la grfica de pH en funcin de los mililitros de disolucin valorante, como se muestra en la figura 4.3, se escoge el punto medio en el pH como punto de equivalencia y finalmente se baja una lnea perpendicular a la lnea base. El punto de interseccin con sta es el volumen gastado. Mtodo de la primera derivada: Este segundo mtodo es ms preciso y es aplicable en todos los casos de neutralizacin. Se traza la grfica de los valores de ApH/Aml, en funcin de los mi de disolucin valorante. Se obtiene una curva como la que se muestra en la figura 4.4.
2.
118
pH
1
11 /i / |
/!
'j
mi de disolucin valorante
Figura 4.3 Mtodo grfico para obtener el volumen en el punto de equivalencia.

ApH Aml
mi de disolucin valorante
Figura 4.4 Mtodo de la primera derivada.
119
Mtodo de la segunda derivada: Consiste en trazar la grfica de los valores de A2pH/A2ml en funcin de los mi de valorante, como se observa en la figura 4.5. El punto de equivalencia en la segunda derivada es numricamente igual a cero, pues el valor de la ordenada pasa con gran rapidez de un nmero positivo a uno negativo (Willard, 1981).
A 2 pH A 2 ml
mi de disolucin valorante Figura 4.5 Mtodo de la segunda derivada.
Objetivo
El alumno efectuar una titulacin potenciomtrica redox, para el estudio experimental de la curva de valoracin del ferrocianuro de potasio con nitrato crico amoniacal.
120
Potencimetro Electrodo de vidrio para medir pH Electrodo de referencia de calomel normal 3 matraces aforados de 100 mi 3 vasos de precipitados de 100 mi Pipeta volumtrica de 20 mi Piseta con agua destilada Vidrio de reloj Esptula Balanza analtica Agitador de vidrio Bureta de 50 mi Soporte universal Pinzas para bureta Parrilla con agitacin magntica Agitador magntico Ferrocianuro de potasio trihidratado Nitrato crico amoniacal HCl concentrado Disolucin reguladora pH 4 Disolucin reguladora pH 7
Normas de seguridad
Tome en cuenta los puntos 2, 3 y 4 del apartado "Prevencin de accidentes en el trabajo con sustancias qumicas", que se encuentra en el captulo 1. Para el manejo del HCl es necesario el uso de lentes de seguridad y de guantes de neopreno. Siempre debe manej arse en la campana y no deben utilizarse lentes de contacto al trabajar con este compuesto. Recuerde que es irritante, corrosivo y que puede causar dao al tracto respiratorio, piel y ojos.
121
Procedimiento
1. Prepare las siguientes disoluciones: 100 mi de ferrocianuro de potasio trihidratado 0.1 M. 100 mi de nitrato crico amoniacal 0.1 M en HCl 1 M. lOOmldeHCllM. 2. 3. 4. Empleando el aparato de la figura 4.6, instale su sistema de titulacin. Calibre el potencimetro. Vierta 20 mi de disolucin de ferrocianuro de potasio en un vaso de precipitados de 100 mi. Agregue 20 mi de HCl 1 M, para cubrir los electrodos. Titule con la disolucin de cerio con adiciones de 1 mi hasta cerca del punto final, alrededor del cual debern hacerse adiciones de 0.1 mi. Efecte la titulacin por triplicado.
Potencimetrro
Electrodo indicador
Electrodo de calomel saturado
Figura 4.6 Titulacin potenciomtrica.
122

Trace las grficas de: a) Potencial (E, V) en funcin de los mi de disolucin de cerio. b) La primera derivada en funcin de los mi de disolucin de cerio. c) La segunda derivada en funcin de los mi de disolucin de cerio. Con base en los resultados calcule la concentracin del hierro (II). Utilizando las grficas, encuentre el punto de equivalencia empleando el mtodo de la segunda derivada.
Cuestionario
1. Enumere las condiciones experimentales que se requieren para la titulacin potenciomtrica del vanadio (II) con permanganato de potasio. Investigue cmo se representa una celda galvnica para la siguiente reaccin, segn la IUPAC: Sn4+ + Fe2+ Sn2++ Fe3+
2.
en concentraciones Sn4+ 0.2 M y Fe2+ 0.2 M. 3. Se titulan 50 mi deFe 2+ 0.12 M con una disolucin de Ce 4+ 0.12 M. La titulacin se efecta potenciomtricamente con electrodos de platino y calomel saturado. Con base en los siguientes datos, encuentre el volumen en el punto de equivalencia, empleando una grfica de equivalencia contra el volumen del titulante, una grfica de la primera derivada y una grfica de la segunda derivada.
123
V mi de Ce adicionado 12.5 25.0 37.5 45.0 47.5 48.5 49.5 49.55 49.7 49.8 49.9 50 50.1 50.2 50.3 50.4 50.4 51 55 62.5 75
E(v) 0.496 0.524 0.552 0.58 0.559 0.613 0.641 0.644 0.655 0.665 0.683 0.944 1.205 1.22 1.233 1.24 1.24 1.263 1.305 1.328 1.346
124
Bibliografa
Bibliografa
Bates, R. G. 1973. Determination ofpH. Theory andPractice. Ed. Wiley and Sons, USA. Brewer, S. 1987. Solucin de problemas de qumica analtica. Ed. Limusa,. Mxico. Campbell, M. L. y B. A. Waite. 1990. "The Ka Vales of Water and the Hydronium ion for Comparison with other Acids". J. Chem. Educ. Vol. 67, No. 5:386-388. Ewing, G. W. 1979. Mtodos instrumentales de anlisis qumicos. Ed. Me GrawHill, Mxico. Garca, V. Y. M. 1988. Equilibrio qumico aplicado a la qumica analtica. Ed. Diana, Mxico. Harris, D. C. 1992. Anlisis qumico cuantitativo. Ed. Iberoamrica, Mxico. Instrucciones de operacin del medidor depH Conductronic modelo 10. 1990. Conductronic, S.A., Mxico. Instrucciones de operacin del medidor de pH Conductronic modelo 20. 1989. Conductronic, S.A., Mxico. Koltoff, Y. M. y E. B. Sandel. 1969. Quantitative Chemical Analysis. The Macmillan Company, USA. Meites, L. (editor). 1963. HandbookofChemistry. Me Graw Hill, USA. Meloan, C. F. y R. M. Kiser. 1973. Problemas y experimentos en anlisis instrumental. Ed. Reverte, Mxico. Nakagawa, K. 1990. "Amodified Graphical Method for Acid-base Equilibria". J. Chem. Educ, Vol. 67, No. 8: 673-676.
125
Pecsok, R. L. y L. D. Shields. 1987, Mtodos modernos de anlisis qumico. Ed. Limusa, Mxico. Satsuo, K. y K. Onoyama. 1991. "Lead-Selective Membrane Electrode using Methylene bis (diisobutyldithiocarbamate) Neutral Carrier", Anal Chem. 63:1295-1298. Stapanian, M. y R. Metcalf. 1990. "State-of-the-art pH Electrode Quality Control for Measurements of Acidic, Low Ionic Strength Waters". J. Chem. Educ. Vol. 67, No. 7: 623-626. Watty, M. B. 1989. Qumica analtica. Ed. Alhambra, Mxico. Willard, H. H., L. L. Merrit Jr, y J, A. Dea. 1981. Mtodos instrumentales de anlisis, Cecsa, Mxico.
126
Manual de prcticas de qumica analtica II se termin de imprimir en febrero de 1999 en Grupo Grfico. La edicin consta de 1 000 ejemplares.
Alberto Reyes Dorantes estudi en la Facultad de Qumica de la UNAM la licenciatura de qumico farmacutico bilogo, orientacin en Tecnologa de Alimentos. Posteriormente realiz estudios en viticultura y enologa en la Universidad Politcnica de Madrid, y estudi la maestra en Biologa en la Facultad de Ciencias de la UNAM. Ingres a la UAM-Iztapalapa en 1980 como profesor investigador de tiempo completo, y ha impartido cursos de Qumica de Alimentos, Anlisis de Alimentos y Alimentos Fermentados. Actualmente imparte el curso de Enologa en la licenciatura de Ingeniera de los Alimentos. Ha colaborado como asesor y director en proyectos de investigacin para la obtencin de vinos de mesa, vinos especiales y fabricacin de licores. Actualmente, en colaboracin con estudiantes de la licenciatura en Ingeniera de los Alimentos, se dedica a aislar, seleccionar y caracterizar cepas naturales de la familia Streptococcaceae para inducir la fermentacin malolctica en vinos tintos de la zona vincola del estado de Zacatecas, Mxico. Frida P. Malpica Snchez realiz sus estudios de licenciatura en la Universidad Autnoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa, Divisin de Ciencias Bsicas y de la Salud, obteniendo el ttulo de Ingeniera en Alimentos. Comenz como profesora-investigadora en este mismo plantel en 1993, colaborando en diferentes proyectos de investigacin para la obtencin de vinos de mesa y especiales y la fabricacin de licores, as como en la elaboracin de notas de curso de temas relacionados con la qumica analtica, por ejemplo: espectroscopia infrarroja, potenciometra y cromatografa lquida de alta resolucin. As mismo, ha impartido los cursos de Microbiologa General y de Alimentos y Laboratorios de Qumica Analtica I y II, as como la materia de Enologa. Ha sido responsable de convenios establecidos entre la industria privada y la UAM-I para el desarrollo de diferentes investigaciones, que adems de su importancia intrnseca permiten a estudiantes o pasantes de la licenciatura realizar su servicio social, a la vez que establecen un mayor vnculo con la industria alimentaria. La licenciada Malpica imparte actualmente el laboratorio de la materia de Enologa.
Este manual va dirigido a todas las personas interesadas en conocer los principios y fundamentos del anlisis instrumental. Las tcnicas actuales de control de calidad se basan en gran parte en la cromatografa de gases. La industria en general requiere de personal capacitado en el manejo de cromatgrafos no slo de gases sino tambin de lquidos de alta resolucin. En este manual se encontrarn los fundamentos de ambas tcnicas, as como prcticas para el uso del anlisis cualitativo y cuantitativo en las cuales se manejan las tcnicas de uso comn en patrones internos y externos. En cuanto al anlisis espectral, se lleva de la mano al lector para que pueda hacer un anlisis completo, desde la seleccin de la longitud de onda de mxima absorcin hasta la cuantificacin de una muestra problema. En resumen, este libro puede ser utilizado por alumnos de cualquier licenciatura cuyos programas de estudio manejen la cromatografa de gases y de lquidos, la potenciometra y la espectrofotometra. Por su parte, los profesionales de la educacin encontrarn en l un apoyo para manejar estos temas no slo en la parte prctica sino tambin en su parte terica, adems de contar con buenas y actualizadas referencias bibliogrficas.
N.E. 0726 $65.00 9 789706 543639
Manl. prct. qumica anal. II Libros da Texto UAM-Iztapalapa Librera

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Cuidado de la edicin y correccin de estilo: Ma. Guadalupe Olvera Arellano

Primera impresin: 1999

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Soluto absorbido en la superficie de la fase estacionaria

Figura 1.1 Cromatografa de adsorcin.

Tabla 1.1 Columnas capilares comerciales.

HP Hewlett Packard Columnas capilares, soporte; A12O3

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Figura 1.2 Cromatografa de reparto.

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Componentes importantes de un cromatgrafo de gases

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Tabla 1.2 Fases estacionarias lquidas de uso comn en cromatografa de gases.

60/250 40/200 0/250

* I a IV de menor a mayor polaridad.

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Tabla 1.3 Conductividad trmica.

* unidades de la conductividad trmica cal cnrr2 seg^2/C crrr1

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Nmero de platos tericos en una columna (n)

Altura equivalente de un plato terico (AEPT)

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Clculo del rea de un pico con forma de tringulo

Punto de inflexin (parte ms inclinada de la curva)

Figura 1.3 Cromatograma ideal

Frmula para calcular el rea de un tringulo:

A = rea h = altura b = longitud de la base

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Figura 1.4 Resolucin entre dos picos cromatogrficos. V

1/2 (Wx + W2)

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Normalizacin o porcentaje por reas

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[S] = concentracin del soluto [P] = concentracin del patrn

hs = altura del soluto hp = altura del patrn internos.