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Revisin

La pared celular de los hongos y el mecanismo de accin de la anidulafungina

Jos Pontn
Departamento de Inmunologa, Microbiologa y Parasitologa, Facultad de Medicina y Odontologa, Universidad del Pas Vasco, Leioa, Vizcaya

Resumen

La pared celular de los hongos es una estructura con gran plasticidad que protege a la clula de diferentes tipos de estrs ambiental, entre los que destacan los cambios osmticos. Adems, la pared celular permite la interaccin con el medio externo ya que algunas de sus protenas son adhesinas y receptores. Algunos de sus componentes tienen una alta capacidad inmunognica. La pared celular es una estructura caracterstica de los hongos y est compuesta por glucanos, quitina y glicoprotenas. Al no estar presentes los componentes de la pared celular fngica en el ser humano, esta estructura es una diana excelente para la terapia antifngica. La anidulafungina, como el resto de las equinocandinas, acta sobre la -1,3-D-glucano sintetasa inhibiendo la formacin del -1,3-D-glucano y produce, segn el tipo de hongo, un efecto fungicida o fungisttico. Anidulafungina, Equinocandinas, Hongos, Mecanismo de accin, Pared celular

Palabras clave

The fungal cell wall and the mechanism of action of anidulafungin

Summary The fungal cell wall is a structure with a high plasticity that protects the cell from different types of environmental stresses including changes in osmotic pressure. In adition to that, the cell wall allows the fungal cell to interact with its environment, since some of its proteins are adhesins and receptors. Some of its components are highly immunogenic. The structure of the fungal cell wall is unique to the fungi, and it is composed of glucan, chitin and glycoproteins. Since humans lack the components present in the cell walls of fungi, this estructure is an excellent target for the development of antifungal drugs. Anidulafungin, like the rest of echinocandins acts on -1,3-D-glucan synthase inhibiting the formation of -1,3-D-glucan and causing, depending on the type of fungus, a fungicidal or either a fungistatic effect. Anidulafungin, Echinocandins, Fungi, Mechanism of action, Cell wall

Key words

La pared celular de los hongos es una estructura con gran plasticidad, que da la forma a la clula, controla la permeabilidad celular y protege a la clula de los cambios osmticos. Adems de estas importantes funciones, constituye el lugar de interaccin con el medio externo, localizndose en ella las adhesinas y un gran nmero de receptores que tras su activacin, desencadenarn una compleja cascada de seales en el interior de la clula.

Direccin para correspondencia: Dr. Jos Pontn Departamento de Inmunologa, Microbiologa y Parasitologa Facultad de Medicina y Odontologa. Universidad del Pas Vasco Barrio Sarriena s/n 48940 Leioa, Vizcaya, Espaa Tel.: +34 946012855 Fax: +34 946013495 E-mail: jose.ponton@ehu.es
2008 Revista Iberoamericana de Micologa Apdo. 699, E-48080 Bilbao (Spain) 1130-1406/01/10.00

Dada su localizacin en el exterior de la clula, la pared es el primer lugar de interaccin con el hospedador, jugando un papel muy importante en el desarrollo de la accin patgena fngica [6,21,26]. Algunos componentes de la pared son muy inmunognicos y estimulan un gran nmero de respuestas celulares y humorales durante la infeccin. Componentes de la pared celular como los -glucanos y los mananos, as como los anticuerpos dirigidos contra ellos son de utilidad diagnstica al detectarse en pacientes con infeccin fngica invasora [23]. Otros componentes como los mananos y las manoprotenas son potentes inmunomoduladores. La pared celular es una estructura esencial para los hongos y su eliminacin o los defectos en su formacin tienen efectos profundos en el crecimiento y la morfologa de la clula fngica, pudiendo causar la muerte celular por lisis. Dado el papel vital que la pared celular juega en la fisiologa de la clula fngica, puede considerarse el taln de Aquiles de los hongos y por tanto, una diana muy importante para la accin de los frmacos antifngicos [11]. La pared es una estructura especfica de la clula fngica y es muy diferente de la pared de las clulas vegetales, compuesta fundamentalmente de celulosa. La pared

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fngica est compuesta bsicamente de polisacridos y protenas. Entre los polisacridos destacan la quitina, el glucano y el manano o el galactomanano. Las protenas generalmente estn asociadas a polisacridos formando glicoprotenas. Todos estos componentes estn asociados entre s dando lugar a una estructura rgida que se esquematiza en la figura. Glicoprotenas. Las protenas representan el 30-50% del peso seco de la pared fngica en los hongos levaduriformes y el 20-30% del peso seco de la pared de los hongos filamentosos. La mayora de las protenas estn asociadas a glcidos por enlaces O o N, formando glicoprotenas. Las protenas de la pared tienen diversas funciones, participando en el mantenimiento de la forma celular, interviniendo en los procesos de adhesin (Als y Hwp1), protegiendo a la clula de sustancias extraas, participando en la absorcin de molculas, transmitiendo seales al citoplasma y sintetizando y remodelando los componentes de la pared [3]. Quitina. La quitina se sintetiza a partir de N-acetil glucosamina por la enzima quitin sintasa, que deposita los polmeros de quitina en el espacio extracelular prximo a la membrana citoplsmica. El contenido en quitina de la pared fngica vara segn la fase morfolgica del hongo. Representa el 1-2% del peso seco de la pared celular de las levaduras mientras que en los hongos filamentosos puede llegar al 10-20%. El contenido de quitina en la pared de las hifas de Candida albicans es tres veces ms alto que el de las levaduras [7] mientras que el contenido en quitina de las fases miceliales de Paracoccidioides brasiliensis y Blastomyces dermatitidis es 25-30% del de la fase levaduriforme [13]. Dada su importancia en la estructura de la pared, la sntesis de la quitina es una buena diana para la accin de los antifngicos. Aunque se han descubierto algunos agentes que interfieren con la sntesis de quitina (nikomicinas y polioxinas), todava no se ha comercializado ningn antifngico que utilice este mecanismo de accin. Glucano. El glucano es el polisacrido estructural ms importante de la pared y representa el 50-60% del peso seco de esta estructura. La mayora de los polmeros de glucano estn compuestos de unidades de glucosa con uniones -1,3 (65-90%), aunque tambin hay glucanos con enlaces -1,6 (en Candida pero no en Aspergillus), -1,4, -1,3 y -1,4. El -1,3-D-glucano es el componente estructural ms importante de la pared, al que se unen covalentemente otros componentes de esta estructura (Figura). El -1,3-D-glucano se sintetiza por un complejo de enzimas situado en la membrana plasmtica, denominadas glucano sintetasas. Estas enzimas catalizan la formacin de cadenas lineales de glucano compuestas por aproximadamente 1.500 residuos de glucosa unidos por enlaces -1,3. En estas cadenas, cada 40-50 residuos de glucosa se unen nuevas unidades de glucosa por enlaces -1,3 para dar lugar a una estructura ramificada. Estas ramificaciones pueden unirse a otros glucanos, a la quitina o a las manoprotenas, proporcionando a la pared una gran resistencia mecnica esencial para mantener la integridad celular (Figura). Los genes que codifican la -1,3-D-glucano sintetasa fueron identificados inicialmente en Saccharomyces cerevisiae y se denominan FKS1 y FKS2 [8,28]. Actualmente se conoce anlogos de estos genes en varias especies de Candida, Aspergillus, Cryptococcus y Pneumocystis. FKS1 codifica una protena de la membrana citoplsmica de 215 kDa que es la subunidad principal de la glucano sintetasa (Figura). La disrupcin de los genes FKS1 o FSK2 produce mutantes con un crecimiento lento y una

pared defectuosa [8,19]. Sin embargo, la eliminacin simultnea de los dos genes es letal [2, 19]. La actividad de la -1,3-D-glucano sintetasa se encuentra regulada por el ciclo celular y est bajo el control del gen RHO1, que interacta no solo con las protenas Fks sino con la proten quinasa C, un regulador de la cascada MAP (mitogen-activated protein). Rho1p se activa por la protenas Rom1 y Rom2 y esta ltima a su vez se activa por las glicoprotenas de la pared celular Wsc1 y Mid2 (Figura). La disrupcin del gen RHO1 es letal. Mecanismo de accin de la anidulafungina. Las equinocandinas son lipopptidos que incluyen equinocandina B, aculeacina A, cilofungina, anidulafungina, caspofungina y micafungina [27]. El mecanismo de accin antifngica de todas es comn y se basa en la produccin de daos en la pared celular al unirse a la -1,3-D-glucano sintetasa (Fks1p) responsable de la sntesis del -1,3-D-glucano. Esta accin resulta fungicida para Candida y fungisttica para Aspergillus. El tratamiento con equinocandinas produce el hinchamiento y la lisis celular en las zonas de crecimiento de la pared, as como la activacin de los genes relacionados con la biosntesis de la pared [29]. Las alteraciones en la pared celular de los hongos causadas por las equinocandinas podran exponer el -1,3-D-glucano en la superficie celular y por tanto este componente podra interactuar con el receptor para el -glucano dectina-1, activando la secrecin de citocinas por las clulas de la inmunidad innata [30]. Las equinocandinas tambin son activas contra Pneumocystis jirovecii pero no actan contra Cryptococcus, Fusarium, zigomicetos y Scedosporium. La resistencia a las equinocandinas es por el momento excepcional y se estn empezando a caracterizar los genes implicados en este proceso. Utilizando una biblioteca de mutantes delecionados de S. cerevisiae, Markovich et al. [17] estudiaron la hipersensibilidad o la sensibilidad reducida a caspofungina y observaron que los genes relacionados con una sensibilidad aumentada a caspofungina (4-8 veces) estaban relacionados con la funcin de la membrana plasmtica y la pared celular, especialmente en la ruta de integridad PKC, la sntesis de manano, quitina y ergosterol, las funciones de la vacuola y el transporte y el control general de la transcripcin. Por el contrario, los genes relacionados con la disminucin de la sensibilidad (4 veces) estaban relacionados con la funcin de la pared, la transduccin de seales y la funcin de las vacuolas. Se identificaron 52 genes cuya delecin condujo a una hipersensibilidad a caspofungina y 39 genes cuya delecin dio lugar a una sensibilidad reducida a caspofungina [16]. El mecanismo de resistencia a las equinocandinas mejor estudiado es la alteracin del gen FSK1 [9,15,20]. Los aislamientos clnicos con una sensibilidad disminua frente a caspofungina que presentan mutaciones en el gen FKS1 tienen una glucano sintetasa que es menos susceptible a caspofungina y necesitan una mayor cantidad de antifngico para controlar la infeccin renal en un modelo animal de candidiasis que los aislamientos sin mutaciones en el gen FKS1 [22]. Las mutaciones incluyen sustituciones de aminocidos en una regin de la Fsk1 denominada HS1 (hot-spot 1, Phe641-Pro649). En S. cerevisiae se han observado las sustituciones F639I, V641K, D646Y, mientras que en C. albicans se han descrito las sustituciones S645F, S645P, S645Y. Los aislamientos clnicos de C. albicans de pacientes que no respondieron al tratamiento con caspofungina tenan una sustitucin en la Ser 645 de la regin HS1 de la Fsk1. Estos aislamientos son por el momento muy infrecuentes y las mutaciones en la regin HS1 slo se han observado en cepas resistentes de C. albicans y Candida krusei [12,22]. Se ha descrito otra regin de la

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Figura. Esquema de la pared celular de S. cerevisiae y C. albicans. Los polisacridos de la pared estn representados en diferentes colores: quitina (rojo) -1,3-D-glucano (verde), -1,6-D-glucano (azul) y mananos (negro). La protenas estn representadas por rectngulos de color naranja. Las subunidades de la -1,3-D-glucano sintetasa en la membrana plasmtica estn coloreadas en verde.

Mecanismo de accin de la anidulafungina Pontn J Tabla. Resistencia cruzada a las equinocandinas en aislamientos clnicos de Candida albicans con mutaciones en Fks1. Las pruebas de sensibilidad se realizaron segn el protocolo M27A2 del CLSI. [24]. Caspofungina CMI (g/ml) 0,125 4,0 16,0 16,0 16,0 4,0 4,0 16,0 16,0 Micafungina CMI (g/ml) 0,016 2,0 2,0 2,0 2,0 1,0 1,0 16,0 16,0 Anidulafungina CMI (g/ml) 0,016 0,5 0,3 0,5 0,5 0,5 0,5 2,0 2,0

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Cepa C. C. C. C. C. C. C. C. C. albicans albicans albicans albicans albicans albicans albicans albicans albicans ATCC90028 M85 M86 M89 NR3 M195 M196 C31 C41

Mutacin Silvestre S645F S645P S645Y S645Y S645F S645F S645P S645P

Fsk1 denominada HS2 que tambin se ha relacionado con la disminucin de la sensibilidad a caspofungina en C. albicans y C. krusei, aunque est menos estudiada que la HS1 [22]. Las cepas de C. albicans con sensibilidad disminuida a caspofungina tambin muestran una sensibilidad reducida a micafungina y anidulafungina, lo que sugiere la existencia de una resistencia cruzada (Tabla). Las CMI fueron ms altas para caspofungina (4 a >16 g/ml) y micafungina (1-16 g/ml) que para anidulafungina (0,5-2 g/ml). La resistencia a las equinocandinas demostrada en C. albicans tambin se observa en otras especies del gnero Candida como Candida glabrata, Candida guilliermondii, C. krusei, Candida parapsilosis, Candida tropicalis y Candida dubliniensis [12,14]. La existencia de mutaciones en las regiones HS1 y HS2 de la Fks1 tambin pueden estar relacionadas con la menor sensibilidad intrnseca a las equinocandinas que presentan C. parapsilosis y C. guilliermondii (CMI 0,5-8 g/ml) [10]. Algunos hongos como Cryptococcus neoformans, Fusarium spp. Scedosporium spp. y los zigomicetos son resistentes a las equinocandinas (CMI >16 g/ml) [25,31]. El mecanismo de resistencia no parece estar relacionado con la Fks1, ya que caspofungina inhibe la actividad de la glucano sintetasa de estas especies. Es por tanto probable que existan mecanismos de resistencia a las equinocandinas alternativas a las mutaciones en Fks1 [24]. Como era de esperar por su mecanismo de accin, no se han observado resistencias cruzadas entre equinocandinas polienos y azoles [1]. Expectativas Dado el carcter esencial y sus componentes especficos, la pared de los hongos es una diana muy importante para los antifngicos. Los primeros antifngicos que se han desarrollado con un mecanismo de accin que

afecta a la estructura de la pared son las equinocandinas. Estos antifngicos han mostrado un amplio espectro de actividad y una ausencia de resistencia cruzadas con otros antifngicos. Es por tanto previsible que en el futuro se diseen nuevos frmacos de la misma familia que mejoren la actividad de los actuales. Adems del -1,3-D-glucano, la pared celular tiene otras dianas interesantes que pueden ser utilizadas en el futuro. En este sentido las glucosil transferasas de la pared que realizan las uniones entre los distintos componentes de la pared pueden ser una diana excelente y los antifngicos que actuasen sobre ellas tendran un efecto similar al de la penicilina con la pared celular bacteriana. Adems la HSP90, la Als3 y el manano pueden ser la diana de anticuerpos que ayuden a combatir la infeccin por Candida y otros hongos. Actualmente se est estudiando la utilidad del tratamiento en pacientes con un anticuerpo recombinante (Mycograb) contra la HSP90 [18] y se ha demostrado que los anticuerpos contra la Als3, el -glucano y el manano son protectores en modelos animales [4,5,32].

Este trabajo ha sido parcialmente financiado por los proyectos PI040556 (Fondo de Investigacin Sanitaria del Ministerio de Sanidad) e GIC07/123-IT-264-07 del Departamento de Educacin, Universidades e Investigacin del Gobierno Vasco-Eusko Jaurlaritza.

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