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Notascarbohidratos
Notascarbohidratos
MONO Y DISACRIDOS SOLUBILIDAD: MUY SOLUBLES EN AGUA MENOS SOLUBLES EN ETANOL ALGO SOLUBLES EN ETANOL CON AGUA CALIENTE INSOLUBLES EN SOLVENTES ORGNICOS (EXCEPTO PIRIDINA)
PREPARACIN DE LA MUESTRA
PIGMENTOS.- PUEDEN INTERFERIR CON LAS REACCIONES. EXISTEN MUCHAS MANERAS DE ELIMINARLOS (E.G. CARBN O SALES DE PLOMO) ACETATO DE PLOMO BSICO.INTERFERIR CON LOS MTODOS POLARIMTRICOS.
PREPARACIN DE LA MUESTRA
ACETATO DE PLOMO NEUTRO.FORMA PREFERENTE DE USO. SE UTILIZA COMO UNA SOLUCIN ACUOSA SATURADA. SE ELIMINA EL EXCESO AADIENDO YA SEA OXALATO DE SODIO O POTASIO.
PREPARACIN DE LA MUESTRA
DESPROTEINIZACIN LAS PROTENAS INTERFIEREN CON LAS DETERMINACIONES REDUCTORAS Y COLORIMTRICAS. EL USO DE TCA (CIDO TRICLOROACTICO) ES DEMASIADO FUERTE PARA DESPROTEINIZAR SI LA MUESTRA EN SOLUCIN CONTIENE DISACRIDOS O FRUCTOSA.
DESPROTEINIZACIN DE LA MUESTRA
MTODOS ACEPTABLES: a) ADASE ETANOL O ACETONA AL 70% (v/v). LA MAYORA DE LAS PROTENAS COAGULARN Y SE PODRN FILTRAR O CENTRIFUGAR.
DESPROTEINIZACIN DE LA MUESTRA
b) PRECIPITACIN CON METALES PESADOS BAJO CONDICIONES ALKALINAS. EJEMPLO: LA SOLUCIN CARREZ PRECIPITA PROTENAS, ABSORBE ALGUNOS COLORES, Y ROMPE EMULSIONES.
PROCEDIMIENTO
SE AADE A LA MUESTRA LQUIDA SOLUCIN CARREZ I (HEXACIANOFERRATO DE POTASIO, K4[Fe(CN)6]3H2O), SE AADE A LA MUESTRA SOLUCIN CARREZ II (SULFATO DE ZINC (ZnSO47 H2O), Y SOLUCIN DE NaOH. SE ENFRA, SE DILUYE A UN VOLUMEN DETERMINADO Y SE FILTRA.
MTODOS QUMICOS
REACCIONES DEL H2SO4 Y CARBOHIDRATOS CIDO FENOL SULFRICO FUNDAMENTO.FUNDAMENTO.- PROVIENE DE LOS PRODUCTOS DE REACCIN Y DEGRADACIN DEL CIDO Y EL AZCAR.
AZCAR + LKALI
SOLUCIN DE FEHLING
FUNDAMENTO DOS SOLUCIONES : SOLUCIN A: SULFATO DE COBRE CRISTALINO SOLUCIN B: TARTRATO DE SODIO Y POTASIO (O CITRATO DE SODIO) + HIDRXIDO DE SODIO (O HIDRXIDO DE POTASIO O CARBONATO DE SODIO)
SOLUCIN DE FEHLING
FUNDAMENTO EL CITRATO O TARTRATO EVITA LA PRECIPITACIN DEL HIDRXIDO CPRICO EL LKALI ENOLIZA A LOS AZCARES Y PROVOCA SU ROMPIMIENTO EN FRAGMENTOS REACTIVOS QUE PUEDEN OXIDARSE INMEDIATAMENTE: Cu++ (CPRICO) ES REDUCIDO A Cu+ (EL IN CUPROSO)
SOLUCIN DE FEHLING
FUNDAMENTO A MEDIDA QUE LOS IONES Cu++ SE REDUCEN POR LOS FRAGMENTOS DE AZCAR, LOS IONES Cu+ SE COMBINAN CON LOS IONES HIDROXILO PARA FORMAR HIDRXIDO DE COBRE (DE COLOR AMARILLO, Cu+).
SOLUCIN DE FEHLING
FUNDAMENTO EL CuOH REDUCIDO PIERDE H2O EN PRESENCIA DE CALOR PARA DAR COMO RESULTADO XIDO CUPROSO INSOLUBLE (Cu2O)
SOLUCIN DE FEHLING
FUNDAMENTO LA DETERMINACIN DEL COBRE REDUCIDO SE PUEDE LLEVAR A CABO POR GRAVIMETRA, VOLUMETRA, O POR MTODOS ELECTROLTICOS. EL PESO DEL Cu2O SLO ES APLICABLE A MUESTRAS RELATIVAMENTE PURAS.
LA DETERMINACIN DEL Cu2O PUEDE SER GRAVIMTRICA, PERO ES GENERALMENTE MEJOR TITULAR EL XIDO CUPROSO. ESTO SE PUEDE REALIZAR MEDIANTE UNO DE LOS SIGUIENTES MTODOS (SE LLEVAN MUCHO TIEMPO):
Cu(NO3)2
(TRIIODURO)
S4O6-2 + 3 IINCOLORO
Azcar Oxidante + CU+ (Cu2O) CU+1(red) CU+1(oxi) AsMo (ox) AsMo (red) Es de un fuerte color azul
Reactivos para el Mtodo de Somogy i y Nelson para azcares reductores Reactivo de Somogy i
NaCO3 - Carbonato de sodio NaHCO3 Bicarbonato de Sodio KaNaC4H4O6 Tartrato de Sodio Potasio CuSO45H2O Sulfato de Cobre
Reactivo de Nelson
(NH4)6Mo7O24 - Molibdato de amonio Na2HAsO7H2O Arsenato de Sodio H2SO4 cido Sulfrico
MTODO FLUORIMTRICO
FUNDAMENTO ESTE MTODO ES POSIBLE CUANDO LOS COMPUESTOS ABSORBEN RADIACIN A LONGITUD DE ONDA CORTA Y LUEGO EMITEN RADIACIN A UNA LONGITUD DE ONDA MS LARGA.
MTODOS ENZIMTICOS
INFORMACIN GENERAL REQUIEREN DE UN EXTRACTO NEUTRO O CIDO LIBRE DE ALCOHOLES Y METALES PESADOS (NO SE PUEDEN USAR SALES DE PLOMO PARA CLARIFICAR LOS EXTRACTOS)
FUNDAMENTO
GLUCOSA EXISTEN KITS QUE CONTIENEN LOS SIGUIENTES REACTIVOS PARA LA DETERMINACIN DE GLUCOSA: BUFFER, o DIANISIDINA 2HCl (CROMGENO REDUCIDO) CATALASA GLUCOSA OXIDASA
REACCIONES
GLUCOSA OXIDASA
H 2O 2
H 2O + O 2
REACCIONES
GLUCOSA + ATP
G6P + NADP+
G6P-DH
HK
G6P + ADP
GLUCONATO-FOSFATO + NADPH + H+
EL NADPH FORMADO EN ESTA REACCIN ES ESTEQUIOMTRICO CON LA CANTIDAD DE GLUCOSA Y SE MIDE MEDIANTE EL AUMJENTO EN ABOSROBANCIA A 334, 340 365 nm.
INVERSIN ENZIMTICA.
A pH DE 4.6 LA SACAROSA ES HIDROLIZADA POR LA ENZIMA FRUCTOSIDASA (INVERTASA) A GLUCOSA Y FRUCTOSA:
SACAROSA + H2O
-FRUCTOSIDASA
GLUCOSA + FRUCTOSA
EL CONTENIDO DE GLUCOSA ES CALCULADO DE LA DIFERENCIA DE CONCENTRACIONES DE GLUCOSA ANTES Y DESPUS DE LA INVERSIN ENZIMTICA
CROMATOGRAFA DE GASES
FUNDAMENTO LOS AZCARES SON COMPUESTOS POLIHIDROXI UNIDOS FUERTEMENTE POR HIDRGENO YA SEA A AGUA O A ELLOS MISMOS EN CRISTALES. POR TANTO, TIENEN PUNTOS DE FUSIN MUY ALTOS (200-300C)
POLARIMETRA FUNDAMENTO
LA RADIACIN SE COMPORTA COMO SI TUVIERA UN COMPONENTE ELCTRICO Y UNO MAGNTICO. ACTAN COMO SI ESTUVIERAN DISPUESTOS EN NGULOS RECTOS UNO CON RESPECTO AL OTRO. HAY MILLONES DE RAYOS QUE PROVIENEN DE LA FUENTE LUMINOSA. LA DIRECCIN DE LOS COMPONENTES ELCTRICOS Y MAGNTICOS ES PURAMENTE ALEATORIA, AS QUE SE TIENE RADIACIN NO POLARIZADA.
POLARIMETRA FUNDAMENTO
SI SE PUEDE HACER QUE TODOS LOS RAYOS TENGAN ORIENTADOS SUS COMPONENTES ELCTRICOS Y MAGNTICOS EN LA MISMA DIRECCIN, LA RADIACIN SER POLARIZADA EN PLANO. ESTO SE PUEDE LOGRAR MEDIANTE EL USO DE UN FILTRO POLARIZADOR.
POLARIMETRA FUNDAMENTO
CUANDO LA LUZ POLARIZADA BRILLA EN UNA MOLCULA ASIMTRICA (UN COMPUESTO QUE NO PUEDE PRODUCIR UNA IMAGEN AL ESPEJO). LA LUZ ES ROTADA. ESTO ES LLAMADO COMPUESTO PTICAMENTE ACTIVO (e.g. GLUCOSA). SI UN COMPUESTO TIENE SIMETRA LA LUZ POLARIZADA NO SER AFECTADA.
POLARIMETRA FUNDAMENTO
EL SEGUNDO FILTRO ES ROTADO MANUALMENTE PARA COMPAGINAR VISUALMENTE LAS SOMBRAS DE UN COLOR. ESTO ROTA AL RAYO DE LUZ POLARIZADA DE REGRESO A SU POSICIN ORIGINAL. SE MIDE EL GRADO DE ROTACIN REQUERIDO.
MAGNITUD DE LA ROTACIN
DEPENDIENTE DE: LA LONGITUD DE ONDA DE LA LUZ UTILIZADA. LONGITUD DE LA CELDA NATURALEZA DE LA SUBSTANCIA ACTIVA Y SU CONCENTRACIN TEMPERATURA
POLARMETROS vs SACARMETROS
POLARMETRO: USA LUZ MONOCROMTICA Y LEE EN GRADOS ANGULARES (SE DEBE RELACIONAR CON LA CONCENTRACIN DE AZCAR). SACARMETRO: USA LUZ BLANCA Y LEE LA CONCENTRACIN DE AZCAR DIRECTA.
CONSIDERACIONES GENERALES
ANTES DE EMPEZAR UNA SECUENCIA DE SEPARACIN DE PROTENAS PARA SU PURIFICACIN SE DEBE CONOCER: SU PESO MOLECULAR, SU PUNTO ISOELCTRICO, SUS PROPIEDADES DE SOLUBILIDAD, SU TEMPERATURA DE DESNATURALIZACIN, ALGUNA CARACTERSTICA QUE LA DISTINGA DE LAS DEMS PROTENAS.
PROCEDIMIENTOS
SALADO (SALTING OUT) LAS PROTENAS TIENEN PERFILES DE SOLUBILIDAD NICOS EN SOLUCIONES DE SAL NEUTRAS. LAS BAJAS CONCENTRACIONES DE SALES NEUTRAS AUMENTAN LA SOLUBILIDAD DE LAS PROTENAS.
PROCEDIMIENTOS DILISIS
FUNDAMENTO SE UTILIZA PARA SEPARAR MOLCULAS EN SOLUCIN MEDIANTE EL USO DE MEMBRANAS SEMIPERMEABLES QUE PERMITEN EL PASO DE PEQUEAS MOLCULAS PERO NO DE LAS GRANDES.
DILISIS PROCEDIMIENTO
LA SOLUCI PROTICA ES COLOCADA EN UN TUBO O BOLSA DE DILISIS QUE SE AMARRA O SUJETA POR UN EXTREMO. EL OTRO EXTREMO SE SELLA O AMARRA UNA VEZ QUE SE HA COLOCADO LA MUESTRA Y SE COLOCA EL TUBO O BOLSA EN UN GRAN VOLUMEN DE AGUA O BUFFER (GENERALMENTE 500 A 1000 VECES MS GRANDE QUE LA CANTIDAD DE MUESTRA EN EL TUBO O BOLSA DE DILISIS.
DILISIS FUNDAMENTO
LOS SOLUTOS DE BAJO PESO MOLECULAR DIFUNDEN FUERA DEL TUBO DE DILISIS. EL BUFFER O AGUA DIFUNDE HACIA ADENTRO DEL TUBO. LA SOLUCIN PROTICA DE ADENTRO DEL TUBO A MENUDO ES DILUIDA DURANTE LA DILISIS DEBIDO A DIFERENCIAS EN FUERZA OSMTICA ENTRE LA SOLUCIN Y EL AGUA O BUFFER DE LA DILISIS
FORMACIN DE LA CUAJADA
SE BASA EN LA ACIDIFICACIN DE LA LECHE MEDIANTE ENZIMAS PROTEOLTICAS. LAS ENZIMAS ACTAN EN UN RANGO PTIMO DE 36-39C. SE SUELEN UTILIZAR UNA MEZCLA DE QUIMOSINA Y PEPSINA DE CERDO CON UNA ENZIMA COAGULADORA OBTENIDA DE UN HONGO.
FORMACIN DE LA CUAJADA
LA ENZIMA INICIA EL PRIMER PASO EN LA CONVERSIN DE LAS MICELAS DE FOSFOCASEINATO DE CALCIO DISPERSAS EN FORMA COLOIDAL EN EL QUESO. LAS MICELAS DE CASENA EN LA LECHE PUEDEN DESESTABILIZARSE POR LA ENZIMA QUIMOSINA. STA ES EL INGREDIENTE ACTIVO EN LAS GOTAS O TABLETAS DE CUAJO.