Terapia Celular Con Celulas Madre y Medicina Regenerativa

TERAPIA CELULAR CON
CLULAS MADRE Y
MEDICINA REGENERATIVA
Terapia celular con

clulas madre y
medicina regenerativa
Dr. Gerardo Martn Gonzlez Lpez
Presidente de la Sociedad Internacional de Terapia Celular
con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y Antienvejecimiento, S. C.
Dr. Dolores Javier Snchez Gonzlez

Vicepresidente Operativo de la Sociedad Internacional de Terapia Celular
Dr. Carlos Armando Sosa Luna

Vicepresidente Administrativo de la Sociedad Internacional de Terapia Celular
Editorial
Alfil
Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Todos los derechos reservados por:
E 2009 Editorial Alfil, S. A. de C. V.
Insurgentes Centro 51A, Col. San Rafael
06470 Mxico, D. F.
Tels. 55 66 96 76 / 57 05 48 45 / 55 46 93 57
email: alfil@editalfil.com
www.editalfil.com
ISBN 9686077504023
Primera edicin, 2009
Direccin editorial:
Jos Paiz Tejada
Editor:
Dr. Jorge Aldrete Velasco
Revisin editorial:
Irene Paiz, Berenice Flores
Diseo de portada:
Arturo DelgadoCarlos Castell
Dibujos:
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Impreso por:
Impresiones Editoriales FT, S. A. de C. V.
Calle 15 Manz. 42 Lote 17, Col. Jos Lpez Portillo
09920 Mxico, D. F.
Diciembre de 2008
Esta obra no puede ser reproducida total o parcialmente sin autorizacin por escrito de los editores.
Los autores y la Editorial de esta obra han tenido el cuidado de comprobar que las dosis y esquemas teraputicos sean correctos y compatibles
con los estndares de aceptacin general de la fecha de la publicacin. Sin embargo, es difcil estar por completo seguros de que toda la informacin proporcionada es totalmente adecuada en todas las circunstancias. Se aconseja al lector consultar cuidadosamente el material de instrucciones e informacin incluido en el inserto del empaque de cada agente o frmaco teraputico antes de administrarlo. Es importante, en especial,
cuando se utilizan medicamentos nuevos o de uso poco frecuente. La Editorial no se responsabiliza por cualquier alteracin, prdida o dao que
pudiera ocurrir como consecuencia, directa o indirecta, por el uso y aplicacin de cualquier parte del contenido de la presente obra.
Autores
Dr. Gerardo Martn Gonzlez Lpez

Presidente de la Sociedad Internacional de Terapia Celular con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y Antienvejecimiento, S. C. Mdico cirujano militar (Escuela Mdica Militar). Maestro en Ciencias Biomdicas en el rea de
morfologa y embriologa (Escuela Militar de Graduados de Sanidad). Jefe de la Seccin de Investigacin y Doctrina
Militar de la Escuela Mdico Militar. Profesor titular de Anatoma Humana y Embriologa de la Escuela Mdico
Militar, Universidad del Ejrcito y Fuerza Area Mexicanos. Especialista en reproduccin in vitro (Escuela Militar
de Graduados de Sanidad, Hospital Central Militar y Clnica de Especialidades de la Mujer). Maestra en Terapia
Celular, Medicina Regenerativa y Antienvejecimiento. Instituto Tecnolgico de Estudios Superiores de Monterrey.
Ganador del Premio Nacional a la Creatividad en Investigacin 2007 (Cmara Nacional de la Industria Farmacutica). Ganador del XIV Premio Nacional de Investigacin en el rea indita bsica 2003 (Fundacin GlaxoSmith
Kline).
Dr. Dolores Javier Snchez Gonzlez
Vicepresidente Operativo de la Sociedad Internacional de Terapia Celular con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y Antienvejecimiento, S. C. Maestro en Ciencias Biomdicas en el rea de morfologa e histologa (Escuela
Militar de Graduados de Sanidad). Doctor en Ciencias de Investigacin en Medicina (Escuela Superior de Medicina
del Instituto Politcnico Nacional). Profesor titular de Biologa Celular y Tisular de la Escuela Mdico Militar, Universidad del Ejrcito y Fuerza Area Mexicanos. Profesor de la Asociacin Nacional de Medicina y Patologa Esttica, A. C. Jefe del Laboratorio de Biologa Celular y Tisular de la Escuela Mdico Militar. Miembro del Sistema
Nacional de Investigadores CONACYT (Investigador Nacional Nivel I). Socio Fundador del Colegio Mexicano de
Clulas Madre y Medicina Regenerativa, A. C. Colegiado titular del Colegio Nacional de Mdicos Militares, A. C. Ganador del XIV Premio Nacional de Investigacin en el rea indita bsica 2003 (Fundacin GlaxoSmithKline).
Dr. Carlos Armando Sosa Luna
Mdico cirujano militar (Escuela Mdico Militar). Especialista en Medicina Integral y de Urgencias (Escuela Militar
de Graduados de Sanidad/Hospital Central Militar). Maestro en Ciencias Biomdicas en Farmacologa y Profesor
titular de Farmacologa de la Escuela Mdico Militar, Universidad del Ejrcito y Fuerza Area Mexicanos. Jeje de
la subseccin de Evaluacin Educativa, Seccin Pedaggica de la Escuela Mxico Militar. Profesor de la Asociacin
Mexicana de Neurologa y Psiquiatra, A. C. Presidente de la Asociacin Mexicana de Amigos de Pacientes Esquizofrnicos, A. C. Ex presidente de los Jvenes Inventores de la Asociacin Nacional de Inventores, A. C. Fundador
de la Asociacin Nacional de Jvenes Inventores, A. C. Ex secretario de la Sociedad Mexicana de Salud Mental,
S. C. Ganador del Premio Nacional de los Proyectos Creativos, Cientficos y Tecnolgicos de la Juventud 1996 y
1997. Expositor nacional en el Museo Tecnolgico (CFE), Tecnologa 97 (CANACINTRA) y en PLAZA INN.
VI
(Autores)
Contenido
Captulo 1.
Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Captulo 2.
Medicina regenerativa y biologa del desarrollo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
37
Captulo 3.
Biologa celular y molecular de las clulas madre . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
61
Captulo 4.
Manejo de las clulas madre en el laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
81
Captulo 5.
La terapia celular en la prctica mdica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
103
Captulo 6.
Terapia celular y bioingeniera de tejidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
149
Captulo 7.
Terapia celular y neurorregeneracin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
187
Captulo 8.
Terapia celular en el sistema cardiovascular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
245
Captulo 9.
Aspectos inmunolgicos de la terapia celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
271
Captulo 10. Entorno actual de las clulas madre . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
319
ndice alfabtico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
349
VII
VIII
(Contenido)
Agradecimientos
Dolores Javier Snchez Gonzlez
Por su colaboracin en la captura y revisin de textos:

Dr. Ismael Vsquez Moctezuma,
Q. C. Claudia Mara Martnez Martnez,
BSc. Marisol Nez Snchez y
M. en C. Dairo Jess Orjuela Henry.
IX
(Agradecimientos)
Captulo
Historia de la terapia celular

y de la medicina regenerativa
HISTORIA DE LA TERAPIA CELULAR
como medicina regenerativa. Se puede decir que es un

tratamiento biolgico basado en los conocimientos de
la teraputica quirrgica, mdica y de rehabilitacin,
constituyndose como el nuevo paradigma en los tratamientos, y es en la actualidad el ms avanzado de la medicina (medicina del siglo XXI). A diferencia de la teraputica que ofrecen las especialidades mdicas
modernas, la terapia celular aborda al organismo de manera integral. Este paradigma qued en el olvido en las
ltimas dcadas del siglo XX por la necesidad de formar
especializaciones mdicas y quirrgicas, pero la sociedad anhela recuperarlo en el modelo del mdico general, quien se ha identificado con la especialidad de Medicina Familiar e intenta recuperar el prestigio del cual
gozaba anteriormente por el simple hecho de ser mdico.
A diferencia de la teraputica farmacolgica (regulacin de las funciones o eliminacin de infecciones) o
quirrgica (reseccin, reparacin o trasplante), la tera-
E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.
Introduccin
En un episodio de la mitologa griega, Zeus castiga a
Prometeo por revelar el conocimiento del fuego a la humanidad. Ello dio lugar a que Prometeo fuese encadenado a una piedra y Zeus enviaba todos los das a un
guila a comerle el hgado. A pesar de esto, el hgado de
Prometeo se regeneraba diariamente permitindole sobrevivir. Con este ejemplo, los cientficos, investigadores y mdicos de hoy esperan ver realizado el legendario
concepto de regeneracin. En el mbito de la nueva medicina regenerativa y antienvejecimiento, la terapia celular emplea clulas madre con el propsito de restaurar
lo perdido o daado en las clulas envejecidas, as como
tambin en los tejidos enfermos del organismo, utilizando innovadoras tcnicas cientficas.
La terapia celular o celuloterapia1 surge de la efectividad teraputica por administracin de clulas nuevas,
liofilizadas o hidrolizadas provenientes de tejidos sanos
controlados, por medio de inyecciones parenterales y
locales. Adquiere importancia cuando se considera que
su accin no se basa en productos de sntesis qumica,
por lo general ajenos al organismo humano, sino en elementos celulares de mdula sea, de cordn umbilical
y de placenta, los cuales son similares o comunes en todas las especies superiores y pueden contribuir a la curacin de los enfermos. La terapia celular surge de las
relaciones interdisciplinarias con la teraputica mdica
1.
Da 151
Figura 11. Clulas madre derivadas de endotelio en verde

fluorescente (marcados con protena GFP) al da 151 de
aplicadas como terapia celular, donde se observa que han
regenerado la pared vascular coronaria afectada. Experimentos in vivo en ratn que muestran la capacidad de las
clulas madre de integrarse y diferenciarse en el tejido del
hospedero.
Zelluoterapie (en alemn).
(Captulo 1)
Desarrollo humano
Oocito fecundado
3 das
mrula
5 a 7 das
blastocisto
Clulas madre Clulas madre

embrionarias Embrionarias
(ESC)
totipotenciales
Embriones
de 4 semanas
Clulas madre
de tejido fetal
pluripotentes o
multipotentes
Embriones
de 6 semanas
Clulas germinales
primordiales
pluripotenciales
(EGC)
Infante
Adulto
Clulas madre Clulas madre de

carcinoma
de adulto
pluripotentes y embrionario (ECC)
multipotentes pluripotentes
Clulas madre de cordn

umbilical y clulas madre
de placenta pluripotentes
o multipotentes
Figura 12. Origen de las clulas madre (stem cells): habitualmente la terapia celular emplea clulas madre embrionarias (ESC)
del cordn umbilical y del adulto. Teratocarcinoma (tumor de clulas germinales).
pia celular tiene la capacidad de regenerar los tejidos daados restableciendo la salud y la vitalidad al organismo
enfermo, proporcionando a los trillones de clulas elementos teraputicos eficaces, ya sea por el contenido
biomolecular en el interior de las clulas o bien integrndose al tejido para diferenciarse en los sitios daados o lesionados (figura 11). Diversos experimentos
de biologa celular indican que cada clula est dotada
de una capacidad de autoorganizacin. La clula constantemente disminuye y reconstruye su propia materia
y adems es capaz de lograr una estrecha unin con
otras clulas del mismo tipo para formar tejidos especficos y, a partir de stos, rganos. Esta capacidad de activacin de las clulas est dentro de ellas mismas. sta
es una de la razones para preferir la terapia celular con
clulas madre extradas de diversos tejidos tanto de
humanos como de animales, aunque tambin existe la
posibilidad de obtener clulas madre (stem cells) adultas provenientes de la mdula sea, sangre umbilical o
perifrica y de tumores. Esto es posible ya que las clulas humanas y animales estn formadas con DNA,
RNA, molculas de protenas, carbohidratos y lpidos.
La teora celular ha permitido comprender que todas las
clulas de los organismos vivos tienen las mismas estructuras y las mismas funciones elementales: no hay diferencias entre las clulas humanas y las clulas animales.
En la actualidad, en el nivel III de la medicina regenerativa y antienvejecimiento, la terapia celular aplica clulas madre (stem cells) humanas de diferente origen
embrionario, de cordn umbilical, de adulto, etc. (figura
12), as como clulas y sustancias derivadas de rganos
de otros organismos jvenes o de humanos por biotecno-
loga de DNA recombinante, tales como insulina, eritropoyetina, etc. (medicina regenerativa de nivel I y II).
En Europa, la terapia celular ya se aplicaba desde
hace ms de dos siglos y hoy en da su uso es ms frecuente, formando parte del arsenal teraputico de la medicina regenerativa y antienvejecimiento, la cual presenta una tendencia exponencial en su desarrollo. Por
ejemplo, en la actualidad existen ms de 30 frmacos
(teraputica biolgica) basados en las protenas y pptidos humanos y de animales. Ejemplos de estas terapias
son los modernos frmacos inmunomoduladores como:
interferones, factores estimuladores de colonias, factores de crecimiento, inmunoglobulinas, albmina y factores de transferencia. Estos ltimos han revolucionado
la industria de la salud con patentes que permiten su extraccin en grandes cantidades a partir de calostro bovino, huevo, liofilizados de leucocitos humanos y de cocodrilos, muchos de los cuales han sido aceptados para
su venta en EUA bajo la regulacin de la Food and Drug
Administration (FDA) o bajo el esquema de nutracuticos, en Mxico, Rusia y la Unin Europea.
La importancia de la terapia celular, medicina regenerativa y antienvejecimiento en la actualidad se deduce al
considerar la siguiente declaracin de la Asociacin Mexicana de Industriales Farmacuticos, A. C. (AMIF):2
De las enfermedades existentes, tan slo 30% pueden
curarse; en cuanto al 70% restante, slo se pueden combatir sus sntomas o se est casi indefenso ante ellas.
Esta declaracin es un excelente reflejo del limitado
2. Principales diarios de la capital aparecieron todos los das
durante la semana del 28 de julio al 2 de agosto de 1986.
Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa
Teraputica actual
Reseccin
Trasplante
Quirrgica
Reparacin
Mdica
Farmacolgica
Biolgicas
Nutracutico
Psicolgica
Fsica
Terapia celular
Medicina regenerativa y
antienvejecimiento
Radioterapia
Rehabilitacin
Otras
Figura 13. Cuadro sinptico del progreso de la teraputica mdica a travs del tiempo (t). Snchez GDJ, Gonzlez LGM y Sosa
LCA.
alcance de la teraputica actual3 en la medicina (figura

13). La declaracin anterior tambin explica el xito
de la medicina alternativa y naturista, orientacin actual
que est afectando a la medicina del siglo XXI; esto se
debe a que existe una gran demanda de servicios y productos que ofrecen salud a individuos sanos y enfermos.
Los pacientes del siglo XXI estn examinando con
mente ms abierta nuevos horizontes en la curacin de
sus enfermedades, de manera que existe un crecimiento
acelerado en la aplicacin de medicinas alternativas
(homeopata, acupuntura, medicina natural, etc.) que no
siempre ofrecen resultados tan satisfactorios y honestos
como la medicina alpata. Si se considera que este grupo de profesionistas est aumentando y ofreciendo servicios con los ms estrictos criterios de tica profesional, aplicando terapias alternativas que los pacientes
perciben ms eficaces para resolver sus dolencias y enfermedades crnicodegenerativas, hoy en da representan un verdadero reto para el profesional que presta
servicios de atencin a la salud. Sin embargo, la terapia
celular no debe ser clasificada como parte de la medicina alternativa o naturista, ya que se trata de la evolucin a un nivel ms avanzado de la medicina alpata,
por lo que debe ser clasificada como medicina cientfica de frontera y ha sido sustentada por diversos descubrimientos cientficos aportados por notables mdicos e investigadores, entre ellos varios premios Nobel
(cuadro 11), cuyos resultados teraputicos pueden ser
calificados hoy en da por algunos profesionales y especialistas de la medicina alpata como de ciencia ficcin, imposibles o milagrosos. A pesar de ello, el Presupuesto del Gobierno Federal Mexicano en materia de
Salud es de 25 000 millones de pesos anuales; de stos,
3.
Habitualmente referida como alpata.
70% se destinan a la atencin mdica de las enfermedades crnicodegenerativas, seguido de 10% para el tratamiento de las infecciones y 20% para el resto de las
enfermedades y padecimientos.4
Tambin hay evidencia de esfuerzos cientficos para
adquirir experiencia clnica en terapia celular. Por ejemplo, en un peridico5 se public la noticia de que en el
Hospital Infantil Federico Gmez, de la Ciudad de
Mxico, se haba realizado un trasplante de clulas de
pncreas de origen porcino en 10 nios, reducindose el
tratamiento con insulina en 65% y sealndose de manera responsable que con este mtodo no se esperaba lograr la curacin total de la diabetes mellitus, pero s la
regeneracin, revitalizacin y rejuvenecimiento del
pncreas, con la intencin de mantener estable la enfermedad durante el mayor lapso posible y la regeneracin
natural de los tejidos que se realiza durante la divisin
celular, diferenciacin y crecimiento de clulas madre
(clulas satlites en el msculo) que se encuentran disgregadas en los diversos rganos del organismo. Con el
advenimiento del cultivo celular y de la disposicin de
bancos de lneas celulares, hoy en da es posible trasplantar clulas madre o tejidos jvenes liofilizados que
reemplacen las clulas faltantes, as como las molculas
bioactivas necesarias, para iniciar una regeneracin de
los tejidos existentes. Cuando estos insumos son insuficientes se trasplantan clulas (terapia celular con clulas madre) con la intencin de sustituir el nmero y funcin de las clulas enfermas o envejecidas. El
descubrimiento de las clulas madre adultas y las clulas madre embrionarias ha elevado la capacidad de la te4.
Secretario de Salud Jos ngel Crdova Villalobos. 9 de

octubre del 2007.
5. Reforma, jueves 20 de julio de 2000.
(Captulo 1)
Cuadro 11. Ganadores del Premio Nobel en Fisiologa y Medicina que han contribuido
en el desarrollo de la terapia celular
2007
2002
1999
1997
1996
1994
1993
1990
1989
1987
1983
1980
1962
1960
1955
1946
1931
1926
1920
1919
1913
1912
1910
1909
1908
1906
Mario Capecchi, Oliver Smithies y Sir Martin Evans por sus trabajos sobre clulas madre y manipulacin gentica en
modelos animales
Sydney Brenner, H. Robert Horvitz, John E. Sulston por su investigacin sobre el fenmeno de la apoptosis con los
nemtodos C. elegans
Gnter Blobel por descubrir que las protenas tienen seales intrnsecas que gobiernan su transporte y situacin en la
clula
Stanley B. Prusiner por el descubrimiento del prin como partcula infecciosa proteica
Peter C. Doherty, Rolf M. Zinkernagel por sus descubrimientos sobre la respuesta inmunitaria de las clulas frente al
ataque de organismos infecciosos
Alfred G. Gilman y Martin Rodbell por descubrir las protenas G y su participacin en la transduccin de seales intracelulares
Richard J. Roberts, Phillip A. Sharp por su trabajo sobre los intrones, fragmentos de DNA que no tienen nada que ver
con la informacin gentica. Pudieron describir que la informacin depositada en un gen no estaba dispuesta de
manera continua, sino fraccionada
E. Donnall Thomas, Joseph E. Murray por sus descubrimientos acerca del trasplante celular y de rganos en el tratamiento de enfermedades humanas. Thomas fue pionero del trasplante de mdula sea y de la terapia celular
J. Michael Bishop, Harold E. Varmus, pues con sus hallazgos se pudo comprender la produccin de tumores malignos
a partir de cambios que se producen en genes normales de una clula, que no slo son producidos por virus, sino
que tambin pueden ser producidos por radiaciones, sustancias qumicas, etc.
Susumu Tonegawa por su descubrimiento del fundamento gentico de la formacin de los anticuerpos
Barbara McClintock por su trabajo con los transposones
Baruj Benacerraf, Jean Dausset, George D. Snell por sus descubrimientos acerca de estructuras de la superficie celular determinadas genticamente que regulan las reacciones inmunolgicas (sistema HLA)
Francis Harry Compton Crick, James Dewey Watson, Maurice Hugh Frederick Wilkins por el descubrimiento de la
estructura del DNA
Sir Frank Macfarlane Burnet, Peter Brian Medawar por sus descubrimientos sobre la tolerancia inmunolgica adquirida
Axel Hugo Theodor Theorell por sus trabajos sobre los procesos bioqumicos de las enzimas
Hermann Joseph Muller, autor de notables estudios acerca de la accin de los rayos X como productores de mutaciones y de la accin de las radiaciones sobre las clulas
Otto Heinrich Warburg por sus investigaciones sobre el citocromo en la respiracin celular
Johannes Andreas Grib Fibiger por sus investigaciones sobre la hiptesis inflamatoria en la etiopatogenia del cncer
Schack August Steenberg Krogh por establecer el mecanismo que regula el intercambio gaseoso en la respiracin y
descubrir la fisiologa de los vasos capilares
Jules Bordet por el hallazgo de un factor bactericida presente en el suero de la sangre de los mamferos, conocido
como complemento
Charles Robert Richet por descubrir la anafilaxia
Alexis Carrel por trabajos sobre sutura vascular y trasplante de vasos sanguneos y rganos
Albrecht Kossel por sus investigaciones en biologa celular sobre protenas y cidos nucleicos
Emil Theodor Kocher por sus trabajos sobre la fisiologa, patologa y ciruga de la glndula tiroides
Ilya Ilyich Mechnikov y Paul Ehrlich por sus estudios sobre las clulas del sistema inmunitario
Camillo Golgi y Santiago Ramn y Cajal por sus investigaciones sobre las clulas del sistema nervioso
rapia celular a una medicina regenerativa y antienvejecimiento del nivel I (liofilizados de clulas provenientes
de glndulas y tejidos fetales de animales) al nivel III,
en donde se utilizan clulas madre de origen humano,
las cuales tienen tres importantes capacidades:
1. La de autorreproducirse fuera y dentro del organismo.
2. La de migrar al sitio de enfermedad, envejecimiento, dao o lesin, fenmeno conocido como
trofismo (figura 14).
3. La de diferenciarse en clulas especializadas que

conforman los tejidos, fenmeno conocido como
transdiferenciacin.
Se requieren estas tres caractersticas para poder regenerar un tejido u rgano lesionado o enfermo. Cuando
la clula madre llega al sitio de lesin, este microambiente dirige a la clula para que se diferencie en clulas
especializadas que conforman el tejido circundante; de
esta manera la clula madre (figura 15) activa sus
mecanismos intracelulares permitiendo la transforma-
Piel
Hgado
Lesin
Lesin
Clulas madre
(exgenas o
terapia celular)
Inyeccin intravenosa
de clulas madre
Regeneracin
Vasos sanguneos
Hepatocitos
Lesin
Clulas madre
(exgenas o
terapia celular)
Factores de crecimiento
y diferenciacin
Clulas madre
(endgenas)
Intestino
cin en endotelio, neurona, miocito, fibroblasto, etc.

Existe adems otra explicacin terica. En biologa es
bien conocida la existencia de la herencia vertical (de
padres a hijos) y la horizontal (de un organismo hermano a otro); este ltimo mecanismo ha sido evidenciado
de manera experimental en organismos procariontes
(bacterias), de manera que una bacteria resistente a un
antibitico, ante la presencia o junto a una bacteria que
no posee el gen de resistencia al antibitico, lo adquiere
(herencia horizontal).
Esta transferencia de material gentico (DNA y
RNA) se realiza a travs de crculos de cidos nucleidos
llamados plsmidos que pueden ser inyectados de una
bacteria a otra por estructuras de la pared bacteriana llamadas pilis. Sin embargo, en los organismos eucariontes (como lo son las clulas del cuerpo humano), esta herencia horizontal no se haba observado ni demostrado
experimentalmente. En experimentos del laboratorio de
los autores, el Dr. Snchez Gonzlez DJ y el Dr. Vzquez Moctezuma descubrieron la herencia horizontal en
clulas de la piel, demostrando la transferencia de material gentico de una clula a otra. En su nueva hiptesis,
a la que han llamado: SnchezGonzlezSosa, es la
herencia horizontal la que puede explicar cmo las clulas madre, al entrar en contacto ntimo con las clulas
circundantes, pueden transferir material gentico nuevo
(DNA y RNA) a las clulas envejecidas y enfermas, o
bien el DNA y el RNA del tejido circundante pueden ser
adquiridos por las clulas madre para obtener la informacin necesaria que les permita sobrevivir, una vez
diferenciadas, a la identificacin como clulas extraas
por las clulas del sistema inmunitario, mecanismo que
tambin puede explicar los experimentos in vitro, en

donde se ha observado la capacidad de las clulas madre
para revertir las caractersticas malignas de las clulas
neoplsicas.
La terapia celular y los nutracuticos (alimentos funcionales o suplementos nutricionales) van a desplazar
y/o coadyuvar con las terapias o medicamentos en la
medicina del siglo XXI. Por ejemplo, las tcnicas de liofilizacin estn permitiendo ofrecer clulas, protenas y
pptidos de origen natural para su administracin por
va enteral o parenteral. El desarrollo de implantes
Integracin
Humoral
Vaso sanguneo
Figura 14. La inyeccin endovenosa de clulas madre de origen embrionario y adulto ha mostrado la capacidad de trofismo y
transdiferenciacin intrnseca que les permite a stas llegar al lugar en donde el organismo ms las requiere (lesin), ya que los
tejidos daados liberan factores de crecimiento y diferenciacin que les indica el sitio que tiene que ser regenerado.
Clulas madre
Estructura
Metablico
Fisico
Neural
Paracrina
Regeneracin
Figura 15. La clula madre ingresa a la circulacin por

inyeccin endovenosa, intramuscular o local. Al llegar al sitio de la lesin, el microambiente de la clula le da direccin
a la diferenciacin, para que sea igual a la del tejido hospedero, debido a diferentes estmulos estructurales, endocrinos, metablicos, fsicos, neuronales y paracrinos.
como vlvulas cardiacas porcinas, glndulas y rganos

de embriones de oveja o inyecciones celulares de tejidos
embrionarios y adultos, es hoy en da una realidad. Las
terapias mdicas ms avanzadas se basan en tratamientos biolgicos que aplican protenas y pptidos, obtenidos de organismos o cultivos celulares de organismos
vivos controlados con y sin biotecnologa recombinante
de DNA. El campo de la farmacologa se est enriqueciendo al cambiar el paradigma de molculas pequeas
extradas de plantas, y despus sintetizadas en laboratorio, por la bsqueda de clulas, pptidos y protenas con
actividad biolgica con ayuda de la protemica y el proyecto del genoma humano. Durante el siglo XXI estn
en pleno desarrollo la investigacin de alimentos con
propiedades medicinales, los llamados alimentos funcionales y nutracuticos. Sin embargo, sin lugar a dudas
es la inminente investigacin cientfica con clulas
madre y su aplicacin clnica como terapia celular en la
medicina regenerativa y antienvejecimiento la que verdaderamente regenera a las enfermedades crnicodegenerativas y a los ancianos, siendo primicias y representantes de la revolucin en la salud y la longevidad
que habr de suscitarse. Definitivamente, con este enfoque vanguardista en la aplicacin mdica de la terapia
celular con clulas madre (stem cells) tanto de origen
embrionario como adultas, puede percibirse su importancia si se considera que el cuerpo humano est formado por trillones de clulas, las cuales son reemplazadas por otras tantas; es decir, en todos los aparatos y
sistemas (a excepcin de las clulas nerviosas y musculares)6 estn en continua renovacin, unas a mayor velocidad, como en el tubo digestivo, piel y sangre, y otras
con ms lentitud, como las del hueso y el hgado.
En los modelos experimentales en los que el hgado
es incapaz de sostener la vida del organismo, la inyeccin de 1 000 hepatocitos aislados (terapia celular de
medicina regenerativa de nivel II) permite que ese hgado daado, que ocasionara la muerte por insuficiencia
heptica, se regenere, formando cmulos celulares
iguales a los descritos en el modelo de hepatectomas
parciales, y restablece finalmente la masa heptica original salvando la vida. Modelos matemticos han permitido calcular que un solo hepatocito da origen a 1.7
x 1010 clulas despus de slo 34 divisiones celulares.
Por ejemplo, un hgado de rata normal contiene 3 x 108
clulas, y un hepatocito en estas condiciones podra generar unos 50 hgados en una rata. Puede imaginarse la
capacidad que tiene una clula madre para regenerar
6. La reparacin e hipertrofia de los tejidos musculares y ner-
viosos dependen de los depsitos asilados en los tejidos de

clulas troncales o madre son conocidas como satlite.
(Captulo 1)
todos los tejidos, lo que se conoce como medicina regenerativa de nivel III.
Se calcula que en el interior del cuerpo humano mueren cada segundo unos 50 millones de clulas que son
reemplazadas por otras tantas. Sin embargo, al enfermar
o envejecer disminuye la calidad y cantidad de clulas,
por lo que es necesaria la sustitucin, para que clulas
jvenes reemplacen a las viejas que se han vuelto imperfectas (medicina antienvejecimiento); es esta reposicin de clulas o constituyentes celulares, con clulas o
derivados bioactivos de ellas, procedentes de organismos jvenes, el fundamento de la medicina regenerativa y antienvejecimiento si adems se considera que las
personas de edad avanzada se tornan cada vez ms vulnerables a enfermedades, y sufren debilitamiento natural de sus defensas antioxidantes y de su sistema inmunitario; entonces la terapia celular se convierte en el
mejor tratamiento antienvejecimiento.
Terapia celular
Existen por lo menos tres tcnicas diferentes de terapia
celular:
1. Terapia con clulas frescas: en un tiempo no mayor de 45 min a 3 h se deben remover las clulas
del embrin, el feto, el cordn umbilical, la placenta o los rganos que se necesite preparar en
suspensin e inyectarlas al paciente. Es el mtodo
original y as se trabaj durante aos, hasta que la
tcnica produjo otras alternativas igualmente
efectivas.
2. Terapia con clulas congeladas (criopreservacin): despus de obtenido el material celular se hace
una congelacin rpida (criognica) a temperaturas
de hasta 196 _C logrando conservar ntegros la
vitalidad y el poder teraputico, as como la esterilidad del medio, por periodos de meses o aos.
Como referencia recurdese cmo el esperma humano y animal se congelan con un mtodo similar
para inseminacin ulterior durante largos periodos.
3. Terapia con clulas desecadas (liofilizados): el
producto es desecado por el mtodo de liofilizacin, conservando as el material celular biolgico
intacto durante aos. Es un mtodo prctico que
permite el manejo, transporte y control ms convenientes. Las clulas producidas se elaboran bajo
las ms modernas condiciones tcnicas y su reputacin y calidad son reconocidas por los ministerios de salud de pases tan estrictos en sus normas
de calidad como Suiza y Alemania.
Cuadro 12. Indicaciones de la terapia celular

Revitalizacin general y reactivacin de la salud
S Deterioro fsico con disminucin de la vitalidad (envejecimiento cronolgico)
S Agotamiento fsico, psquico o ambos (andropausia y menopausia)
S Secuelas de enfermedad u operacin
S Depresin, estrs emotivo (sndrome general de adaptacin)
S Envejecimiento prematuro y desgaste de varios sistemas y rganos: cerebro, corazn, circulacin, pulmones, hgado, riones, aparato digestivo (celulitis, arrugas, canas, pecas, insuficiencia renal crnica, EPOC, Alzheimer, insuficiencia vascular
crnica, divertculos, etc.)
S La revitalizacin general puede usarse en todas las edades (envejecimiento biolgico)
Disfuncin de las glndulas del sistema endocrino
S Hipotiroidismo
S Trastornos menstruales
S Obesidad por trastornos glandulares (sndrome metablico)
S Trastornos en los hombres (disfuncin erctil)
S Diabetes mellitus
S Hipertrofia prosttica benigna
Enfermedades crnicodegenerativas
S Cardiopata coronaria e insuficiencia cardiaca Hernias discales
S Hipotensin e hipertensin arterial Parlisis faciales
S Secuelas de accidente vascular cerebral Hipoacusia
S Enfermedad pulmonar obstructiva crnica
S Desrdenes digestivos crnicos
S Insuficiencia y cirrosis heptica
S Enfermedad de Parkinson
S Arteriosclerosis Insuficiencia cardiaca
S Insuficiencia vascular cerebral
S Osteoartrosis (enfermedad articular degenerativa)
S Osteoporosis (desmineralizacin sea)
S Anemias
S Trastornos mentales por deterioro cerebral e intelectual (esquizofrenia y demencias)
Enfermedades del sistema inmunitario
S Baja resistencia y susceptibilidad a infecciones Apoyo al tratamiento de quimioterapia y radioterapia en linfoma, leucemias y mieloma mltiple
S Artritis reumatoide
S Lupus eritematoso Vitligo
S Esclerodermia, psoriasis
S Asma bronquial
Trastornos de paciente en edad peditrica
S Retraso en el crecimiento de origen hipofisario
S Subdesarrollo de rganos sexuales
S Sndrome adiposogenital
S Parlisis cerebral infantil
S Mongolismo (sndrome de Down)
S Debilidad mental moderada, por hipoxia o secuelas posencefalitis o meningitis
S Pubertad tarda
S Retraso en la consolidacin de fracturas o en el cierre de las heridas
S Otras
Todas las investigaciones bsicas y pruebas clnicas emplean preparaciones congeladas o desecadas.
Los siguientes aspectos deben ser considerados durante la aplicacin de una terapia celular:
1. Es indispensable establecer un diagnstico que

sea correcto para obtener xito en la terapia celular; por ello, y para fines prcticos, es un requisito
establecer categoras e indicaciones donde se haya

Cuadro 13. Contraindicaciones
para la terapia celular
S En el embarazo
S Todos los estados infecciosos
S Todas las enfermedades agudas y las crnicas en evolucin acelerada
S Las afecciones orgnicas descompensadas (arritmias,
cirrosis, neuropatas, insuficiencia renal aguda, edema
agudo del pulmn)
S Algunas enfermedades endocrinas por hiperfuncionamiento (enfermedad de Basedow), ya que al estimular,
el efecto sera indeseable
S Casos en que el hipofuncionamiento glandular es muy
severo (necrosis hipofisaria, Adisson por destruccin
de la suprarrenal) y donde el recurso ideal es la sustitucin hormonal
S Estados de deterioro fsico y mental tan severos que
no existan reservas orgnicas para responder al estmulo regenerativo (enfermos en estado crtico y terminal)
S En los procesos recientes de vacunacin o de aplicacin de sueros
2.
3.
4.
5.
6.
probado una mayor efectividad cientfica y clnica

(cuadro 12).
Es una teraputica biolgica cuyo objetivo es estimular, activar, reparar, regenerar y sustituir clulas de los rganos insuficientes, deficientes o daados por condiciones patolgicas, aprovechando
las capacidades residuales del organismo.
Es un tratamiento que emplea clulas provenientes
de otros organismos (animales y humanos) en
ocasiones pueden ser obtenidas del mismo, que
van a ser integradas a los tejidos del organismo
destinatario, en contraste con los tratamientos farmacolgicos que emplean sustancias qumicas,
las cuales actan por cortos periodos mientras son
eliminadas por los procesos fisiolgicos y el metabolismo. Las molculas qumicas extraas (frmacos) generalmente presentan reacciones secundarias y efectos txicos al ser introducidas en el
organismo.
La terapia celular tiene efectos de larga duracin
al promover reacciones de autorregeneracin, ya
que en el caso de las clulas madre, stas tienen la
capacidad de replicarse, migrar y diferenciarse en
el sitio del dao, fenmeno biolgico que sucede
de manera natural en todos los organismos vivos.
La mayor parte de las clulas inyectadas actan teraputicamente en un periodo de dos a tres semanas.
Los resultados precoces no se deben a las clulas
propiamente dichas, sino a la bioactividad y el me-
(Captulo 1)
tabolismo de protenas solubles contenidas en la

base o en el vehculo.
7. El manejo de las clulas madre debe ser bajo protocolos estrictos, puesto que son muy sensibles a
sustancias qumicas, toxinas, rayos X, temperaturas elevadas y parsitos intracelulares.
Conforme aumente el nmero de pacientes tratados y se
profundice ms la investigacin se ampliarn las nuevas
categoras e indicaciones para la terapia celular. Cabe
sealar que los ltimos esfuerzos se orientan a la terapia
del cncer (se ha observado que las clulas madre en
cultivo al estar junto a una clula tumoral tienen la capacidad de revertir el proceso de transformacin maligna),
el tratamiento de otros problemas tan difciles como la
esclerosis mltiple y el SIDA, donde se han obtenido resultados preliminares muy alentadores. Sin embargo,
tambin existen situaciones en las cuales por el momento no se recomienda su aplicacin (cuadro 13).
Para ejemplificar el gran desarrollo que est teniendo
esta nueva teraputica en medicina, baste sealar que en
la actualidad existen en el mundo ms de 5 000 mdicos
que la utilizan y estn inscritos en la Sociedad Internacional de Terapia Celular con sede en Alemania, la cual
se dedica al estudio y divulgacin de todos los avances
para tal fin. Esta asociacin realiza congresos en Europa
con un elevado nivel acadmico y cientfico; tiene un
importante respaldo financiero, ya que colabora con
institutos como el Rockefeller de Nueva York, el cual
brinda apoyo a centros internacionales de investigacin
como el Centro Internacional de Mejoramiento de Maz
y Trigo, sede de la Revolucin Verde en Mxico y dependiente de las Naciones Unidas (FAO). El doctor Paul
Weiss de este Instituto concluye que: la clave que permite explicar los efectos regenerativos observados en
diferentes rganos especficos despus de inyectar clulas son los factores bioactivos contenidos de forma inherente en la clula en s. En Mxico, los autores fundaron la Sociedad Internacional para la Terapia Celular
con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y el Antienvejecimiento S. C. (SITECEM), con fines de investigacin, tratamiento y enseanza.
HISTORIA DE LA TERAPIA CELULAR
Desde los orgenes ms antiguos de la medicina surgi

el principio de que la ingestin o trasplante de rganos
de origen animal posea un efecto curativo. El papiro de
Evers, de Egipto, menciona la preparacin de rganos

animales. En la India, en 1400 a.C. se recomendaba la
ingestin de testculos de tigre como revitalizante. El
griego Aristteles y el latino Plinio hablaban de la
accin curativa del extracto de rganos. Los chinos usaban la placenta humana como fortificante. Paracelso en
el siglo XVI dijo: el corazn cura al corazn, el rin
cura al rin.
El notable avance de la medicina cientfica7 se inici
hace varios siglos; sin embargo, los logros ms importantes se han registrado en los siglos XIX, XX y XXI.
Este progreso histrico ha repercutido en la manera en
que se desarrolla la terapia celular en la prctica mdica.
En la primera dcada del siglo XXI los paradigmas culturales estn cambiando, de manera que los jvenes y
los adultos en la tercera y cuarta dcada de vida estn
buscando estilos de vida ms saludables (baby boomers). Y parece ser que la terapia celular es una de las
respuestas a esta demanda de la sociedad. No es aventurado pensar que la terapia celular permitir reducir el
obstculo actual que existe entre la teraputica convencional y el mdico del siglo XXI, y podr ofrecer ms
y mejores servicios de salud con base en esta innovadora teraputica. De esta manera, la terapia celular est
contribuyendo cada da a que las personas puedan vivir
ms tiempo y tener una calidad de vida saludable.
A fines del siglo XIX, Brown Sequar en 1899 us extractos glandulares por va subcutnea y Voronoff adquiri fama al implantar testculos de mono. En el siglo
XX, en 1912, hacen su aparicin los premios Nobel con
Alexis Carrel, quien demostr por primera vez el efecto
regenerador que se observa con la aplicacin de clulas
provenientes de un organismo joven a uno ms viejo, y
dijo la siguiente frase clebre: La esperanza de la
humanidad est basada en la prevencin de las enfermedades degenerativas y mentales, pero no en el alivio
de los sntomas. Este eminente mdico francs aport
a la experimentacin en ciruga el concepto de trasplante al realizar aloinjertos en animales, con los cuales
obtuvo numerosos xitos, aunque se produjeron rechazos en los xenoinjertos (rganos de individuos de diferente especie).
Notable mdico y cirujano, el Dr. Alexis Carrel tambin demostr la inmortalidad de un rgano o tejido en
vida artificial (in vitro), ya que durante 27 aos mantuvo
latiendo el corazn de un pollo dentro de un recipiente
con suero fisiolgico, al que le agregaba todos los das
los fluidos filtrados de otro corazn de pollo. Durante
1912 a 1939 Alexis Carrel demostr con sus experimen7. Ciencias biomdicas: Histologa, Embriologa, Fisiologa,
Farmacologa, Embriologa, Inmunologa, Biologa Molecular, Bioqumica, etc.
tos el paradigma de la terapia celular: Los rganos envejecidos recobran rpidamente su vigor si se les agrega un extracto de otro rgano similar.
Otro mdico que contribuy incansablemente en su
investigacin y difusin fue el destacado Dr. Paul Niehans,8 de nacionalidad suiza, quien trat a un paciente
con extirpacin de tiroides y paratiroides; no teniendo
la posibilidad de implantarlas, las tritur y se las inyect
al paciente, desapareciendo el cuadro de tetania que presentaba el paciente. En 1931 Niehans descubre la terapia celular; durante el procedimiento quirrgico se suscit una situacin crtica, ya que la glndula paratiroides
se da y el paciente presentaba convulsiones fuertes y
su estado de salud era muy grave. Niehans no tena
tiempo de ejecutar el injerto quirrgico de la glndula
entera. Usando un catter, Niehans aplic clulas de la
paratiroides obtenida de un ternero. El xito de esta terapia realizada por Niehans para abandonar el trasplante
quirrgico de las glndulas intactas es que actualmente
slo se implantan por medio de inyecciones.
En 1937 Niehans fue motivado por el gran neurocirujano y neuroendocrinlogo Cushing para que se implantaran por primera vez clulas del cerebro de animales
muy jvenes, sobre todo del hipotlamo y la hipfisis.
En 1948 Niehans ampli la terapia celular con clulas
de hgado, pncreas, riones, corazn, duodeno, timo y
bazo. Estas clulas eran aplicadas a sus pacientes con
inyecciones que contenan clulas recientemente obtenidas (congeladas) o liofilizados reconstituidos (polvo
seco de las clulas) derivados de los diferentes rganos
y glndulas de embriones y ovejas jvenes.
En 1949, el Papa Po XII, paciente del Dr. Niehans,
se someti a terapia celular y antes de morir, el Papa
Juan Pablo II tambin se someti al mismo procedimiento, pero ya estaba muy enfermo, por ello no se pudo
revertir a tiempo su enfermedad. Actualmente existe
una reconocida clnica en Suiza que lleva su nombre y
la cual contina aplicando terapia celular con liofilizados e investigando al respecto (medicina regenerativa
de nivel II). Hoy en da est disponible en forma comercial el tratamiento derivado de la amplia experiencia de
la prestigiada clnica de Niehans en Suiza. Este tratamiento de terapia celular incluye 3 frascos mpula de 8
mL con 500 mg y se conoce como vacuna antivejez,9
la cual se acompaa de 1 frasco con 45 cpsulas de 200
mg.10 Esta terapia celular contiene diversos activos bio8. Paul Niehans naci en Schweizer Arzt el 21 de noviembre
de 1882 y muri el 1 de septiembre de 1971. Es considerado

el padre de la terapia celular (life cell therapy or older cell
therapy).
9. VHumacell.
10. VCeluplacell.
10
lgicos de origen natural: 500 mg de extracto de hipfisis de oveja negra, 500 mg de extracto de timo de oveja
negra, 500 mg de extracto de placenta. Adems contiene inductores para la estimulacin de la hormona humana del crecimiento, con base en una combinacin de
aminocidos de origen natural (Lglutamina, Lpiroglutamato, Larginina, Llisina, 2tirosina, glicina,
cido aminobutrico11 y acetilL carnitina); adems
contiene: coenzima Q10, bioestimulina, enzimas esenciales, clorhidrato de seleginina,12 melatonina de origen
recombinante y otros componentes. La va de administracin es subcutnea. Se toma 0.5 mL de cada mpula
hasta completar un volumen de 1.5 mL para inyectarlo
debajo de la piel en la regin del abdomen o brazo. Para
un tratamiento de medicina antienvejecimiento esta
dosis se aplica en personas de 30 a 50 aos de edad
durante 16 das consecutivos, acompaada de dos cpsulas de 200 mg diariamente por va oral. Se recomienda que este tratamiento se realice cada ao y la terapia
se mantiene tomando dos cpsulas al da durante todo
el ao. Cuando la terapia celular para el antienvejecimiento se requiere en personas mayores de 50 aos de
edad se debe aplicar un esquema doble, es decir, en lugar de aplicarla durante 16 das se aplica durante 32 das
consecutivos y se contina con la toma de dos cpsulas
durante todo el ao.13 Sin embargo, el tratamiento que
nosotros ofrecemos (en la SICETEM) es la alternativa
ms moderna de terapia celular con clulas madre alognicas que existe en el mundo. Tambin se desarroll
en Suiza y los resultados clnicos de regeneracin son
espectaculares.
El descubrimiento de las clulas madre (stem cells)
viene a revolucionar el concepto de terapia celular desarrollado por la Clnica de Niehans en Suiza. El trabajo
cientfico pionero lo inicia Robert Edwards, que siendo
todava alumno de doctorado en Edimburgo, con el antecedente de haber sido miembro del ejrcito britnico,
inicia su trabajo cientfico bajo la direccin del profesor
Conrad Waddington, eminente embrilogo, bajo la supervisin directa de Alan Beatty.14 Edwards RG enfoc
su tema de tesis en la embriologa del ratn. Durante su
doctorado estudi los conceptos avanzados en gentica
y biologa celular con su maestro Waddington, destacndose los conceptos de silenciacin de genes y la
canalizacin (modelo de diferenciacin celular),
11. GABA.
12. Deprenil.
13. www.mxpharmaceuticgroup.com.
14. El Dr. Gerardo Gonzlez es embrilogo,
el Dr. Javier
Snchez es bilogo celular y el Dr. Luna es farmaclogo;
pioneros de la terapia celular con clulas madre en Mxico
y fundadores de la SITECEM.
(Captulo 1)
introducindose en el conocimiento cientfico de la epigentica; Edwards RG admiraba a su brillante maestro

Waddington y destaca cmo investigaba los mecanismos genticos de la evolucin biolgica de las especies
y se haca brillantes preguntas de investigacin, como
por qu las aves prehistricas (Archaeopteryx) haban
perdido el gen que expresa la dentadura, el que ha evolucionado hasta nuestros das como pico, y cmo al trabajar con embriones de Drosophila melanogaster (mosca
de la fruta) descubre que la elevacin de la temperatura
de incubacin de los huevos tiene la capacidad de modificar la expresin de los genes que forman los ojos en la
mosca de la fruta, sustituyndose por la formacin de
piernas en el mismo lugar donde habitualmente se
encuentran los ojos.
En 1950 Waddington relacion a Edwards con Charles Thibault, quien trabajaba en las nuevas tcnicas de
fertilizacin artificial en animales con fines agropecuarios. Con este entrenamiento cientfico, Edwards RG
tuvo el deseo de trabajar con clulas madre de origen
embrionario, con el propsito de aplicarlas en problemas de ndole mdica. El primer problema que Edwards
resolvera fue la esterilidad humana, motivo por el cual
su primer esfuerzo se dirigi a lograr la fertilizacin in
vitro de los humanos. Edwards realiz la maduracin de
oocitos humanos in vitro, los cuales requirieron 37 h y
no 12, como se haba ensayado previamente en los ratones empleados por Thibault, Dauzier, Austin, Chang y
Yanagimachi.
Durante la ruta crtica de su investigacin, Edwards
recibi en 1963 una carta de un bioqumico de Glasgow
llamado John Paul que haba seguido sus estudios e
intentaba conseguir las lneas celulares de embrin de
ratn fertilizado in vitro; surgi as una colaboracin
para trabajar juntos durante un ao hasta obtener un
embrin en crecimiento in vitro. Este experimento pretenda obtener clulas hematopoyticas y neuronales en
cultivo en cajas de Petri y este ambicioso trabajo era tan
extenso que invitaron a colaborar a Robin Cole.
Durante el ao sabtico Edwards RG observ el comportamiento de los cultivos de las lneas celulares de
embriones de conejo obtenidos por fertilizacin in vitro
(FIV); ste fue el hallazgo ms importante de la terapia
celular, ya que ha permitido obtener clulas madre o
troncales de origen embrionario. Cuando la masa celular interna del blastocisto era disgregada ocurra un
cambio, el cual no se suscitaba cuando se mantena intacta. Cuando lograron separar las clulas de la masa celular interna del blastocisto y las pusieron en cultivo celular en cajas de Petri, observaron ante sus atnitos ojos
cmo las clulas embrionarias se transformaban (diferenciacin, concepto de canalizacin de Waddington)
11
Fertilizacin in vitro
Da 0
vulo fertilizado
Da 3
Las clulas madre

pluripotenciales se
derivan de la masa
celular interna
Clulas totipotenciales
Masa celular
interna
Blastocele
Da 5
Blastocisto
3 lneas celulares principales
Trofoecteodermo
Clulas madre
Caja de Petri
Cultivo de
clulas madre
Figura 16. Hallazgo de Edwards RG y col. Las clulas madre de origen embrionario se derivan de la masa celular interna del
blastocisto.
en cada tejido del cuerpo como sangre, neuronas y msculo. Robert Edwards refiere que la primera publicacin sobre clulas madre humanas en EUA, hecha por
Thomson en 1995, es una copia fiel de la biologa del
desarrollo segn Edwards publicada 35 aos antes
(figura 16).
Como profesor del doctorado en ciencias en Cambridge, Edwards fue director de tesis de diversas investigaciones. En su intento por demostrar que las clulas
madre de origen embrionario obtenidas de la masa celular interna de blastocistos al ser aplicadas en blastocistos de otros ratones llevaban genes distintos al del receptor, Edwards RG lo ofreci como tema de doctorado
a Richard Gardner y ste acept. Trabajaron juntos para
establecer los procedimientos operativos correctos para
manipular los blastocistos y decidieron cortar los pequeos pedazos de trofoectodermo de los blastocistos
de conejo. Los tejidos cortados fueron marcados para
identificar la cromatina del sexo y poder diferenciar los
embriones masculinos (negativos) de los embriones
femeninos (positivos).
Richard Gardner descubri la formacin de quimeras
en los descendientes del donador y la clula extraa
haba colonizado virtualmente cada tejido del cuerpo.
Este trabajo fue el precursor de los nuevos conceptos
para aplicar la recombinacin del gen a los embriones
de mamferos,15 trabajo pionero que sera precursor
muchos aos despus del Premio Nobel en Fisiologa y

Medicina 2007 (figura 17).
15. Introduccin de un gene por microinyeccin y recombinacin homloga en ratn (Capechi, 1980).
Figura 17. Formacin de quimeras de Richard Gardner y

Edwards RG.
Marcando clulas madre en ratn

El blastocisto
se implanta
en el tero
de le madre
Marcan las clulas
madre en blastocisto
Ratones
quimmricos
que nacen
de la madre
vulo
vulo
Espermatozoide
Ratones que expresan

el gen marcado
Ratn normal
12
En un comunicado de prensa del 8 de octubre de

2007, el Instituto Karolinska de Estocolmo inform que
el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina 2007 se otorgaba a Mario Capecchi (Universidad de Utah, EUA),
Oliver Smithies (Universidad de Carolina del Norte,
EUA) y Martin J. Evans (Universidad Cardiff, Reino
Unido) por sus descubrimientos sobre los principios
para introducir modificaciones genticas especficas en
el ratn utilizando para ello clulas madre embrionarias. El trabajo de estos investigadores reuni dos ideas:
la recombinacin homloga (Capecchi, Smithies) y las
clulas madre (Evans), lo que llev a la creacin de una
tecnologa poderosa: modificacin de genes especficos
por recombinacin homloga en el ratn. Actualmente
esta tecnologa se aplica en prcticamente todas las
reas de la biomedicina, desde la investigacin bsica
hasta el desarrollo de nuevas terapias.
La investigacin de Capecchi y Smithies se enfoc
en la recombinacin de molculas homlogas de DNA,
es decir, entre molculas cuya secuencia de nucletidos
es muy similar. La historia de este descubrimiento se
inici hace ms de 50 aos, cuando J. Lederberg, Premio Nobel en 1958, descubri que la bacteria Escherichia coli tena sexo, por lo cual poda recombinar informacin gentica como los guisantes de Mendel, las
moscas de Morgan y en general como los organismos
con sexo. Lederberg demostr, por ejemplo, que la
transferencia de DNA (herencia horizontal) por conjugacin de una bacteria donadora (macho), capaz de sintetizar el aminocido histidina (fenotipo His+) a una bacteria receptora (hembra) que no lo sintetiza (His), poda
generar clulas hembra His+. Es decir, el gen silvestre de
la bacteria donadora haba reemplazado por recombinacin homloga al gen mutado de la bacteria hembra.
En el decenio de 1965 a 1975, A. J. Clark y otros investigadores identificaron los principales genes y la funcin
de sus productos (RecA, RecBC, RecFOR, RuvABC) en
la recombinacin homloga. En 1966 Capecchi inicia su
investigacin sobre la traduccin de protenas en Escherichia coli. En 1973 Capecchi incursiona en el mundo de los
eucariotes y publica un artculo en el que describe un procedimiento para aislar clulas mutantes de ratn. Capecchi
quiso demostrar si se poda usar la recombinacin homloga, tal como se usaba en Escherichia coli, para modificar
un gen especfico en clulas de mamfero.
Este descubrimiento desencaden una avalancha de
experimentos para descifrar a nivel molecular esta clase
de recombinacin. En esos aos el enfoque molecular
no era posible en organismos multicelulares, pero s lo
era en un organismo unicelular sencillo, fcil de cultivar
y que permita analizar 100 o ms millones de clulas
en un experimento.
(Captulo 1)
Los mecanismos moleculares de la recombinacin

homloga se conocan en bacterias, pero no en eucariotes, incluyendo a los unicelulares como la levadura, por
lo que su propuesta se consider poco probable. En
Inglaterra, la solicitud de un donativo de Evans, quien
trabajaba con clulas madre embrionarias de ratn, tambin fue rechazada. En 1977 R. Axel public en la revista Cell que clulas en cultivo deficientes de la enzima
timidina cinasa (tk) recuperaban la actividad normal de
la enzima si se les introduca el gene tk del virus del herpes (terapia gnica). El mtodo de Axel era poco eficiente, as que Capecchi consider que si se aumentaba
la eficiencia y se diseaba un mtodo de seleccin positivanegativa sera posible aislar clulas recombinantes
de mamfero.
En 1980 Capecchi publica un artculo donde describe
un mtodo muy eficiente para introducir por microinyeccin en el ncleo molculas de DNA, y en 1982 publica en Mol Cell Biol la primera evidencia de que por
recombinacin homloga en el genoma de la clula de
mamfero se poda integrar un gen introducido por microinyeccin. En 1985 Smithies y en 1986 Capecchi publican artculos donde describen una metodologa muy
eficiente que les permiti, por recombinacin homloga, manipular genticamente clulas de mamfero en
cultivo. Capecchi dise una combinacin de seleccin
positiva (resistencia al antibitico NeomicinaR) y negativa (no correccin de una mutacin del gen tk cromosmica) que permite identificar las clulas con el cambio gentico deseado. El diseo consiste en construir
una molcula de DNA vector (molcula de DNA que se
microinyecta en el ncleo de las clulas) que contiene
un gen de resistencia al antibitico neomicina flanqueado de regiones homlogas al gen blanco y adems
al gen para tk. Este gen se localiza en una regin distante
del genoma y por lo tanto no interviene en la recombinacin. La clula receptora del vector tiene un gen tk
mutado. La clula en la que el producto de recombinacin es el correcto adquiere resistencia al antibitico,
pero no corrige su deficiencia de tk. Esta clase de mutacin en la que el gen queda inactivado por la insercin
de un gen seleccionable se conoce como knockout. Capecchi conoca el trabajo con clulas madre de Evans y
el de recombinacin homloga de Smithies, y ellos estaban familiarizados con el de Capecchi, incluso ste pas
dos semanas en Inglaterra con Evans aprendiendo a cultivar clulas madre y a generar ratones a partir de ellas.
El camino estaba claro para Capecchi, Smithies y
Evans: las clulas de mamfero podan ser modificadas
por recombinacin homloga, estas modificaciones podan realizarse en clulas madre embrionarias de ratn
y as generar, por cruzas especficas posteriores, ratones
Mario Capecci
Universidad de Utah,
en Salt Lake City, UT.
Intituto Mdico Howard Hughes; EUA.
Foto: Tim Roberts/PR Newswire, HHMI.
Oliver Smithies
Universidad de Carolina del
Norte, en Chapel Hill, NC,
EUA. Foto: Sacanpix/Dan
Sears, Chapel Hill, NC, EUA.
homocigotos con genes modificados. En 1989 los ratones knockout, que portan mutaciones que inactivan a
genes especficos, entran en esta historia, la cual termina en octubre de 2007, para iniciar otra que ser contada en un futuro.
Volviendo al trabajo pionero de los estudiantes de
doctorado de Edwards RG, Barry y Bavister decidieron
inseminar una docena de oocitos humanos. Estos experimentos permitieron estudiar el proceso por el cual el
espermatozoide ingresa en la zona prelcida del oocito y
pudieron describir cmo se lleva a cabo la penetracin en
el espacio perivitelino, entrando finalmente al vulo, culminando con la fecundacin y la formacin de dos proncleos. Emplearon adenina marcada con radiocarbono
14 y el grupo de Edwards RG pudo medir la migracin
de los espermatozoides en los testculos y el epiddimo.
Richard Gardner, alumno de Edwards durante este
tiempo, logr obtener la primera quimera en ratn y se
practic la fertilizaron de embriones humanos in vitro.
En el Hospital General Oldham, del Distrito de Lancashire, el Dr. Patrick, colaborador de Edwards RG, por
laparoscopia extraa oocitos humanos de las pacientes
que eran estimuladas con HMG y HCG. La gran mayora de los vulos obtenidos por Patrick lograron fertilizarse in vitro y muchos desarrollaron blastocisto; uno de
los vulos fecundados creci despus de haber salido
del cascarn de su zona pelcida. Edwards seala que
su morfologa y su crecimiento eran maravillosos, la
clula y la estructura nuclear eran totalmente normales.
Sin embargo, ninguno logr implantarse. Esta terrible
fase de fracasos por establecer embarazos con la transferencia a teros de los embriones humanos fertilizados
in vitro pas inadvertida hasta entonces ante la hostigadora prensa amarillista.
13
Martin Evans
Cardiff University, Reino Unido.
Foto: The Press Association
Limited, Limited.
El arduo trabajo pionero de Edwards RG y Patrick

Steptoe con la tcnica de FIV finalmente fue coronado
con el primer beb de tubo de ensayo, Louise Brown,
que naci el 25 de julio de 1978 en Oldham, Inglaterra,
en medio de una intensa controversia biotica (cuadro
14) por la seguridad y moralidad del procedimiento.
Aunque exista una verdadera oposicin, la difusin y
el desarrollo cientfico continuaron en todo el mundo.
El 3 de octubre de 1978 nace en la India el segundo nio
de probeta, Kanupriya Agarwal, gracias al trabajo cientfico del mdico Subhash Mukhopadhyay, que acab
suicidndose en Calcuta en 1981 por la frustracin y
reprimenda con que fue insultado en lugar de recibir
reconocimiento por tan notable logro de parte de su Gobierno, que le impidi asistir a conferencias internacionales. En Melbourne, Australia, el 23 de junio de 1980
nace el tercer beb de probeta, Candice Reed, gracias al
esfuerzo de los cientficos Carl Wood, Alan Trounson
e Ian Johnston. En 1981 se produce el primer tratamiento de FIV exitoso en EUA (Elizabeth Jordania Carr)
bajo la direccin de los doctores Howard Jones y Georgeanna Seegar Jones en Norfolk, Virginia. Desde
entonces la FIV ha ido creciendo en popularidad y se calcula que 1% de todos los nacimientos son concebidos
hoy en da in vitro; se cree que 115 000 han nacido tan
slo en EUA. En la actualidad, en Dinamarca, el porcentaje de nios nacidos despus de FIV o inyeccin de
esperma intracitoplasmtico (ICSI) es de 4%.
Finalmente, el mtodo FIV de Edwards RG qued
completamente desarrollado para superar muchos problemas de esterilidad, sobre todo cuando la afeccin se
localiza en las trompas de Falopio. Tambin ha tenido
xito para resolver otros problemas de esterilidad. Los
progresos en la FIV permitieron tambin el desarrollo
14

Cuadro 14. Dilemas bioticos que surgieron
con la fertilizacin in vitro (FIV)
Desvo del mtodo natural de la concepcin

Creacin de vida en el laboratorio
Fertilizacin excesiva de embriones innecesarios
Desecho de embriones excedentes
Ambiente antinatural para los embriones
Uso de tecnologa no probada
Elevado costo para muchos
Mercantilismo de recursos mdicos
Creacin artificial de embriones que permite la criopreservacin, la cual es considerada como un limbo
Exposicin de embriones a sustancias antinaturales
Destruccin de embriones durante la investigacin
Posibilidad de crear embriones para propsitos mdicos
Posibilidad de seleccionar los embriones
Posibilidad de modificar embriones genticamente
Facilitacin de la idea de que los embriones son artculos
Los premios financieros para los doctores de FIV
Considerar la esterilidad como una enfermedad y no
como un sntoma, el cual debe ser tratado como un
problema de ndole mdica
Separar el modelo tradicional madrepadre
tecnolgico de la introduccin intracitoplasmtica por

microinyeccin de un espermatozoide (ICSI), lo que ha
permitido resolver la esterilidad de origen masculino.
La tcnica actual de FIV incluye la estimulacin ovrica con diversos medicamentos y hormonas, la cual se
inicia al tercer da de la menstruacin, y consiste en un
rgimen de frmacos especializados que estimulan el
desarrollo de folculos mltiples en los ovarios. En la
mayora de las pacientes se emplean gonadotropinas
inyectables o anlogos de la FSH siempre bajo supervisin estricta de las concentraciones, hormonas como el
estradiol y seguimiento por ultrasonido ginecoobsttrico. Por lo general se aplican inyecciones durante 10
das. La ovulacin endgena se bloquea con el uso de
agonistas de la GnRH o antagonistas de GnRH para la
recuperacin del oocito que luego habr de ser fertilizado in vitro. Se emplea anlogo de la hormona LH que
ocasiona la ovulacin unas 36 h despus de la inyeccin; los oocitos se recuperan con una tcnica transvaginal que por ultrasonido gua una aguja que atraviesa la
pared vaginal para alcanzar los folculos de los ovarios;
el lquido folicular es aspirado para ser enviado al laboratorio en donde sern aislados e identificados los oocitos. El procedimiento de recuperacin de oocitos de la
futura madre toma unos 20 min y suele hacerse bajo
sedacin consciente o anestesia general. De ser necesario, cuando la esterilidad depende del futuro padre, los
(Captulo 1)
oocitos recuperados son inyectados con el procedimiento de ICSI. Para tal efecto los laboratorios de FIV despojan a los oocitos de las clulas circundantes para obtener
una mejor fertilizacin in vitro. Tambin el semen obtenido del futuro padre es preparado para la fertilizacin
in vitro quitndole las clulas inactivas y el fluido seminal. La fertilizacin in vitro se realiza en un tubo de ensayo en donde se incuban el esperma y el oocito en una
proporcin de aproximadamente 75 000:1 en medios
apropiados para cultivo celular durante 18 h (figura 18).
Cuando el oocito finalmente ha sido fertilizado mostrar los dos proncleos. En situaciones clnicas donde
la cuenta de espermatozoides es baja, un solo espermatozoide es inyectado directamente en el huevo empleando la tcnica de ICSI. El vulo fertilizado pasa a un medio de crecimiento especial durante aproximadamente
48 h hasta que el huevo haya alcanzado la divisin en 6
a 8 clulas.
El embrin de 8 clulas (figura 19) es graduado por
embrilogos expertos que juzgan su calidad. Tpicamente, son transferidos al tero los embriones que han
alcanzado de 6 a 8 clulas tres das despus de la recuperacin. En algunos programas de FIV, como los desarrollados por espaoles, ingleses, estadounidenses y australianos, se emplean embriones que se mantienen en
cultivo celular prolongado, llegando a la fase de blastocisto. El traslado de embriones en fase de blastocisto ha
mostrado una tasa ms elevada de embarazos.
La transferencia de embriones al tero de la madre se
realiza por medio de un catter plstico delgado, que
pasa por su vagina y crvix.
Pueden pasarse varios embriones al tero para incrementar las oportunidades de implantacin y embarazo.
El nmero de embriones transferidos al tero depende
Figura 18. Fotografa de varios oocitos rodeados de espermatozoides durante una fertilizacin in vitro.
15
Figura 19. Imgenes de clulas totipotentes de los embriones de 8 clulas (a la izquierda) y de la mrula con clulas madre
multipotentes (a la derecha).
del nmero disponible, la edad de la mujer, su estado de

salud y otros factores de diagnstico. En pases como el
Reino Unido, Australia y Nueva Zelanda, el nmero de
embriones est limitado a un mximo de dos, excepto en
circunstancias raras, para evitar embarazos mltiples.
Una vez que la madre ha recibido la transferencia de
embriones, tiene que esperar dos semanas antes de regresar a la clnica para realizarse pruebas de embarazo
convencionales.
Durante este tiempo puede recibir hormonas como la
progesterona para apoyar el embarazo en el tero favoreciendo la implantacin. Muchos programas de FIV
proporcionan este tipo de medicamentos adicionales
como parte de su protocolo.
Las proporciones de xito son de cerca de 15% durante cada ciclo de FIV, aunque la competencia y la estandarizacin de la tcnica han incrementado la proporcin a 50% por ciclo. Los factores que determinan las
proporciones de xito son la edad de la paciente, la calidad de los oocitos y espermatozoides, el tiempo de duracin de la esterilidad, el estado de salud del tero y el
grado de especializacin mdica.
Una prctica comn de los programas modernos de
FIV con la finalidad de incrementar la proporcin de
xito de embarazo es aumentar el nmero de embriones
transferidos, lo que incrementa el riesgo de embarazos
mltiples, asociado con mayor nmero de complicaciones obsttricas.
La aplicacin generalizada de FIV a escala mundial
permiti el desarrollo de tcnicas de criopreservacin de
oocitos, embriones y bancos de clulas madre a 196 _C.
Como durante los procedimientos de FIV se generan
mltiples embriones, las pacientes pueden optar por
congelar los que no le son transferidos al tero. Los
embriones se ponen en nitrgeno lquido y se conservan

durante mucho tiempo.
Se calcula que tan slo en EUA existen 500 000 embriones congelados. La ventaja de esta tecnologa es que
las pacientes que no conciben durante el primer ciclo de
transferencia al tero pueden utilizar otros embriones,
que se han mantenido en congelacin, para intentar una
nueva transferencia en el tero en un tiempo subsecuente, evitando el ciclo completo de FIV. La ventaja es
que si el embarazo se llevara a cabo con xito, la pareja
podra iniciar otro embarazo trasladando al tero un embrin en criopreservacin. La criopreservacin se aplica tambin en la preservacin de diferentes tipos de clulas; en el caso de la FIV, los oocitos pueden ser
congelados sin haber sido fertilizados, lo cual es conveniente en mujeres que necesariamente van a ser sometidas a esquema de quimioterapia para tratar algn padecimiento o enfermedad y tambin para aqullas que
pretenden embarazarse despus de la menopausia.
Tambin existe la posibilidad de criopreservar el
tejido ovrico. Como se seal anteriormente, estas tcnicas han sido revolucionarias, puesto que permiten a la
mujer conservar durante ms tiempo su funcin reproductiva (medicina antienvejecimiento). El lmite natural > 45 aos de edad de la reproduccin en la mujer est
cambiando y la teraputica contra el cncer (radioterapia y quimioterapia) cuenta con una alternativa para
preservar la paridad de mujeres jvenes y adultas.
Mientras que la menopausia mostraba ser una barrera
natural para la concepcin, la FIV est permitiendo a
algunas mujeres embarazarse a los 50, 60 y 70 aos de
edad. Las mujeres posmenopusicas son preparadas
con medicamentos hormonales para que sus teros de
manera apropiada reciban embriones de oocitos dona-
16
Figura 110. Microfotografa con microscopia electrnica

de barrido de clulas madre.
dos o previamente criopreservados. Por consiguiente,

aunque estas mujeres no tengan identidad gentica con
el nio, s tienen un eslabn biolgico a travs del embarazo y el parto (matriz sustituta). En muchos casos el padre gentico del nio es el compaero de la mujer. Esto
ha demostrado que despus de la menopausia el tero es
totalmente capaz de llevar a cabo su funcin.
En el ao 2001 una francesa recibi la atencin del
periodismo mundial por haberle propuesto a la esposa
de su hermano servirles de tero sustituto, para que pudieran tener un hijo con la sangre del hermano, empleando la FIV con un oocito donado por un banco de
criopreservacin y fertilizado con el esperma del hermano. Algunos vieron esta propuesta como una decorosa forma de incesto; otros pensaron que el nio podra
desarrollar un trastorno psicolgico al crecer y comprender la forma como haba sido concebido y nacido
en el vientre de su ta, y que su madre lo haba abandonado como clula donada, y que no tendra la ms remota posibilidad de conocer a su madre biolgica.
Otros inconvenientes pueden ocurrir durante los procesos de FIV, como el riesgo latente de que haya confusiones en el laboratorio, lo que podra originar acciones
legales contra el proveedor de FIV, ocasionando adicionalmente demandas legales de compleja solucin al tratar de alegar y comprobar el derecho de paternidad. Un
ejemplo de lo anterior fue el caso de una mujer de California que recibi el embrin de otra pareja y a quien se
le notific este error despus del nacimiento de su hijo.
Tambin, existen objeciones religiosas; la ms impor-
(Captulo 1)
tante es la oposicin de la Iglesia Catlica Romana, que

se opone de manera total a los procedimientos de FIV,
prohibiendo todos los casos y abogando que la esterilidad forma parte del llamado de Dios para adoptar nios.
No puede negarse que en la sociedad internacional
existe preocupacin por el desecho de embriones durante los procesos de FIV. El catolicismo, otras religiones
y sectas en el mundo consideran que todos los embriones son vidas humanas y tienen los mismos derechos
que las personas nacidas; por consiguiente, este procedimiento corre el riesgo de ser considerado como inaceptable. Estas presiones sociales y religiosas han
hecho que algunos gobiernos exijan que los programas
de FIV operen bajo pautas voluntarias, como en EUA,
mientras que en otros pases los programas estn siendo
sujetos a regulaciones que limitan muchos aspectos de
prctica clnica de la FIV.
Entre estas regulaciones estn, por ejemplo, limitar
el nmero de oocitos que pueden fertilizarse, limitar el
nmero de embriones que pueden transferirse, evitar el
uso de tcnicas de criopreservacin, regular el uso de
terceras personas para asistir la reproduccin (teros en
renta y donacin de oocitos) y regular las tcnicas para
realizar pruebas o intervenciones en los embriones. El
ejemplo ms grave ocurri en 2004 en la legislacin de
Italia, ya que el gobierno italiano considera hoy en da
como un delito la criopreservacin de embriones humanos, as como la realizacin de diagnsticos de periimplantacin, adelantos cientficos desarrollados por el
esfuerzo y el talento cientfico de Edwards RG y su
equipo de colaboradores.
Edwards RG describe la emocin que vivi al conocer los resultados de los experimentos de Peter Hollands
(otro de sus estudiantes de doctorado) al estar investigando las clulas madre embrionarias (figura 110)
obtenidas de la masa celular interna del blastocisto:16
Ante mis ojos ocurra otro milagro; los ratones irradiados tuvieron la capacidad de colonizar el hgado, bazo
y mdula sea en 48 h, los marcadores fueron detectados en la sangre de los ratones destinatarios de cuatro a
cinco das despus. Era maravilloso, las clulas madre
haban salvado a los ratones irradiados de la muerte:
estaban llenos de vida! Adems, Edwards RG destaca el hecho de que estos experimentos no evidenciaron la presencia de cncer y las clulas madre no fueron
rechazadas por el husped. Ellos observaron el fenme16. Constituyndose como fuente actual de clulas madre
pluripotenciales (Embrionic Stem Cells; ESC) que conforman una masa de 50 a 150 clulas en el interior del blastocisto, ste se forma en el periodo de preimplantacin
embrionaria, el que ocurre habitualmente 4 a 5 das despus
de que un oocito ha sido fecundado por el espermatozoide.

no de trofismo en donde las clulas madre no necesitaron ser dirigidas por una implantacin especfica en el
sitio del dao, ya que las clulas emigraron directamente a los rganos daados, regenerando los tejidos y
rganos daados por la irradiacin en los ratones. Estas
situaciones asombrosas se han encontrado en muchas
investigaciones similares.
El trabajo cientfico est enfocado en resolver los
problemas de la radiobiologa clnica (radiooncologa),
especficamente sobre la radiosensibilidad que existe en
las clulas cancerosas y las clulas normales. James
Edgar Till y Ernest McCulloch, en Toronto, utilizaron
la metodologa de inyectar clulas17 de la mdula sea
en ratones irradiados. Ellos observaron ndulos en el
bazo de los ratones, estos ndulos aparecan en proporcin al nmero de clulas inyectadas de mdula sea
(medicina alpata); dieron a esos ndulos el nombre de
colonias del bazo (spleen colonies) y posteriormente
especularon sobre su origen. Estos experimentos realizados en el Ontario Cancer Institute del Princess Margaret Hospital desde 1961 culminaron con la demostracin de la existencia de las clulas madre adultas (stem
cells) en 1963 (figura 111). La reflexin de la importancia de este trabajo resulta de considerar cmo pudieron las clulas madre en el bazo sobrevivir en colonias
al reconocimiento de los linfocitos y clulas NK18
debido a que no expresan molculas de reconocimiento
antignico como el complejo mayor de histocompatibilidad, permitindoles pasar inadvertidas al reconocimiento antignico del sistema inmunitario.
Cuando la terapia celular emplea tejidos y clulas de
embriones o fetos, el principal problema sera el rechazo del organismo a los elementos extraos. En este caso
las clulas embrionarias o fetales han demostrado ser
muy compatibles y no son alergnicas en el periodo gestacional. Adems, el nmero de cromosomas es similar
al humano cuando se trata de cerdos y ovejas.
En seres humanos y animales, el feto (criatura no
nacida) todava no ha desarrollado actividad inmunolgica por s mismo y es de hecho un implante tolerado por
la madre, pues de otro modo sera rechazado. Cuando se
emplean tejidos animales de recin nacidos, algunas
glndulas como los testculos, los ovarios, las suprarrenales y la hipfisis, no son activas o son demasiado pequeas, por ello se usan las de animales jvenes en caso
de terapia con especies de mamferos superiores.
Cabe sealar que cuando la terapia celular emplea
liofilizados de xenoinjertos, los animales deben cumplir
17
con condiciones rigurosamente establecidas que incluyen la supervisin cuidadosa por parte de mdicos veterinarios y vigilados bajo estricta cuarentena (seis semanas) antes de recuperar los tejidos para su uso. Toda la
preparacin de las clulas e implantes de tejido se debe
realizar bajo las ms estrictas medidas de asepsia y antisepsia en laboratorios muy especializados.
El Dr. Stein explica: Lo descubrimos marcando las
clulas con istopos, inyectndolas en los cuerpos de las
ovejas preadas que pasaron al feto sin causarle dao.
Inyectamos estas clulas en otros animales mediante un
contador Geiger y seguimos la direccin que tomaba la
clula. En un principio usamos fosfuros, yoduros y sulfuros; actualmente aminocidos, materia base de las
protenas. Descubrimos que las clulas procedentes de
un rgano especfico terminaban, en efecto, en el rgano especfico correspondiente.
A pesar del avance cientfico, la evidencia emprica
ha rechazado la explicacin terica y todava es difcil
hablar de la efectividad de la terapia celular demostrada
en experimentos y casos clnicos que han aceptado recibir terapia celular, sobre todo de los que resultan de
introducir clulas madre de origen humano embrionario
o clulas de embriones de diferentes especies (xenognico) o de individuos de la misma especie (alognico),
encontrando que las clulas no se pierdan en el organismo destinatario y brindando adems resultados teraputicos asombrosos.
Finalmente Leonard Hayflick, considerado por algunos como el padre de la medicina regenerativa y antienvejecimiento, y sus colaboradores evidenciaron experimentalmente la efectividad de la terapia celular al
trasplantar clulas recientes, liofilizadas o hidrolizadas
provenientes de tejidos embrionarios sanos controlados,
17.
18.
Terapia celular.
Natural Killer, asesinas naturales, respuesta inmunitaria
natural.
Figura 111. Micrografa de barrido de una clula madre.
18
a travs de inyecciones parenterales. Ellos reconsideraron que si estas clulas fueran reconocidas por el sistema
inmunitario al ser fagocitadas por los macrfagos, seran
trasladadas a los rganos y tejidos blanco por los mecanismos de migracin durante la inflamacin, liberando
las biomolculas revitalizantes presentes en las clulas
jvenes y necesarias en las clulas envejecidas, daadas
o enfermas (RNAm, DNA no lesionado, muchas protenas antioxidantes y reparadoras de DNA, como la telomerasa); ellos tambin emplearon istopos radioactivos.
Esta teora refuerza una de la hiptesis del equipo de investigacin de los autores19 de la existencia de una herencia horizontal en clulas animales, que a travs de un
transporte especial como el de vesculas permite transferir DNA, RNA, pptidos y protenas que devuelven la
capacidad funcional a la clula destinataria.
En la actualidad est creciendo el desarrollo de tecnologa que permite identificar las clulas madre multipotenciales20 formadoras de las clulas sanguneas (HSC21);
stas pueden aislarse del mismo individuo, o de los bancos
de sangre y de mdula sea, empleando la tecnologa de
citometra de flujo de alta velocidad, marcando las clulas
con anticuerpos monoclonales22 (sorting). La proporcin
aproximada es 1 clula madre sangunea por cada 15 000
clulas madre de la mdula sea.
La importancia histrica de todas las aportaciones
anteriormente sealadas es la evidencia experimental
que hace factible hoy en da la aplicacin de la terapia
celular como parte de la prctica mdica. Hoy ms que
nunca sta es posible gracias a la gran expansin que
han tenido los programas de FIV, los cuales no han
podido ser frenados por la oposicin religiosa, social y
legal; tambin ha habido un notable crecimiento en la
aparicin a nivel internacional de bancos de clulas y tejidos, semejantes a los convencionales bancos de sangre
y semen, de los cuales se pueden obtener clulas madre
de origen embrionario, ya que fueron obtenidas por donacin. sta se ha facilitado ms que la donacin de rganos para programas de trasplante debido al gran xito
19. Hiptesis SnchezSosaGonzlez.
20. Son clulas madre encontradas en el adulto; pueden for-
mar un nmero limitado de tipos celulares, cuando no se ha

dado ningn estmulo para su diferenciacin; es decir,
cuando han crecido in vitro. El trmino pluripotenciales debe
distinguirse de multipotenciales, ya que el primero significa
que pueden diferenciarse en todos los derivados celulares
de: ectodermo, endodermo y mesodermo. stas incluyen
cada uno de los ms de 250 tipos celulares en el cuerpo
humano adulto.
21. Del ingls (Hematopoietic) Stem Cells, procedentes de
mdula sea.
22. FACs highspeed sorters. Esta tcnica conocida como
citometria de flujo separa las clulas en suspensin.
(Captulo 1)
que han tenido en Europa los programas FIV. La gran

cantidad de oocitos fertilizados y sin fertilizar tambin
ha permitido desarrollar en medios de cultivo lneas
celulares en bancos criognicos europeos de los que se
pueden obtener clulas madre embrionarias y adultas de
humanos. stas estn siendo tipificadas molecularmente con tcnicas de FAC de alto flujo.21 De esta manera,
ya se pueden obtener clulas madre semiespecializadas
(lneas de estirpes celulares especficas) que pueden ser
utilizadas de manera especfica en la terapia celular.
MEDICINA REGENERATIVA
La era de la medicina regenerativa es un hecho que se

hace ms evidente a principios de este siglo XXI como
resultado del gran adelanto en el conocimiento biomdico, que ha llevado rpidamente al desarrollo de nuevas terapias que emplean el conocimiento multidisciplinario e interdisciplinario de las ciencias y la tecnologa
involucrando nuestra capacidad actual de modificar y
conocer los genes, clulas, tejidos y organismos.
En contraste con la mayora de las especialidades
mdicas convencionales, la medicina regenerativa ofrece la aplicacin de clulas (terapia celular) y sustancias
provenientes de organismos vivos que permitan regenerar con rapidez y eficiencia los tejidos envejecidos o lesionados. La genmica ha permitido conocer alrededor
de 6 000 protenas humanas de las ms de 200 000 que
se considera que existen y an son desconocidas. El
advenimiento de la automatizacin en laboratorios con
robots ha incrementado la capacidad de generacin de
resultados; hoy se emplean mtodos de hibridacin in
situ y de reacciones en cadena de la polimerasa (PCR).
Existe la tendencia a fabricar microarreglos, microprocesadores con sensores bioelectrnicos que permiten la
identificacin y cuantificacin en masa de miles de
muestras de suero, sangre, orina, etc., hacindose realidad el estudio sistematizado del universo de las protenas (proteoma humano). Con las tcnicas avanzadas de
biologa molecular y bioqumica no se puede obtener
protenas en forma pura; esto es posible por la biotecnologa recombinante, que permite insertar genes que
expresan protenas humanas en plsmidos de microorganismos, los cuales se reproducen en cultivo y pueden
sintetizar grandes cantidades de protenas de origen
humano. Esta biotecnologa es conocida como DNA
recombinante.
En los ratones de Capecchi, Smithies y Evans, mejor
conocidos como knockout, se emple la tecnologa de
Edwards RG para bloquear genes y evitar la expresin

de protenas especficas en estos mamferos; esto est
permitiendo disear experimentos que permiten conocer los efectos de la deficiencia en la expresin de protenas, orientando el conocimiento funcional de los
genes y pudiendo diferenciar los genes que no codifican
protenas intrones de los que s codifican protenas
exones (son los que estn involucrados en la traduccin y transcripcin de protenas).
La integracin de estas tcnicas est permitiendo que
la evaluacin de la funcin de protenas sea ms sencilla. Estas tcnicas han propiciado el nacimiento de una
nueva ciencia, la protemica. Gracias a este desarrollo se est pudiendo entender los efectos medicinales
(propiedades funcionales)23 que se describen con la
ingesta de ciertos alimentos ricos en protenas (hongos,
plantas medicinales, soya, polisacridospptidos derivados del arroz, factores de transferencia derivados de
la yema, huevo y calostro bovino, lactoserum, etc.),
apareciendo conceptos nuevos en la teraputica farmacolgica: los nutracuticos, que estn incrementando
el arsenal teraputico de la medicina regenerativa.
Hoy en da se pueden reconocer por lo menos cuatro
niveles en la teraputica que integra la medicina regenerativa:
S Nivel I. Aplicacin de sustancias humanas o de
animales, algas, hongos, plantas y bacterias (pptidos, protenas, genes y otras biomolculas) con
fines teraputicos.
S Nivel II. Aplicacin de clulas y tejidos con fines
teraputicos (terapia celular, liofilizados e ingeniera de tejidos).
S Nivel III. Aplicacin de clulas madre de origen
embrionario y adulto (terapia celular con clulas
madre).
S Nivel IV. Aplicacin de nuevos materiales (nanotecnologa, prtesis, robtica binica, biologa
molecular, etc.).
Medicina regenerativa de nivel I

El primer nivel de la medicina regenerativa involucra la
aplicacin de sustancias y nutrientes que favorecen o
mejoran la regeneracin celular. Se han empleado protenas humanas, animales y vegetales. El conocimiento
de los genes de exones no est permitiendo elaborar
nuevos frmacos y productos nutracuticos.
23. Para valorarlos ms all de las caractersticas nutricionales de la alimentacin con stos.
19
Cada ao, a travs de modelos matemticos se predice la cepa que puede ocasionar una epidemia de influenza, de ah se seleccionan los determinantes antignicos con los que se elaborarn las nuevas vacunas. El
avance ms reciente que intenta prevenir el cncer cervicouterino es el desarrollo de la vacuna contra el HPV
(virus del papiloma humano). Estas vacunas son elaboradas aplicando biotecnologa de DNA recombinante.
Se estn agregando nuevos medicamentos a la terapia
biolgica con pptidos y protenas humanas; ejemplos
de este arsenal farmacolgico recombinante son: la
insulina humana, los interferones, la hormona del crecimiento, la eritropoyetina, factores estimuladores de
colonias, etc. Estas protenas humanas tienen efecto teraputico al sustituir las deficiencias de produccin o
concentracin sangunea de los pacientes. La ventaja de
inyectar protenas recombinantes es generar menos autoanticuerpos contra ellas; por ejemplo, la insulina en
un principio era extrada de cerdos y bovinos, ya que la
mayora de los pacientes con diabetes mellitus insulinodependientes (tipo 1) corran el riesgo de morir de hiperglucemia y cetoacidosis si no se les aplicaba la insulina.
Hoy en da la insulina humana recombinante es el ejemplo ms elocuente de la medicina regenerativa de nivel
I; su principal aplicacin clnica es regular las concentraciones de glucosa sangunea y compensar el catabolismo producido por la deficiencia de la produccin de
insulina por las clulas B del pncreas (figura 112).
La eritropoyetina humana recombinante estimula la
produccin de eritrocitos y ha sido utilizada para cometer fraude en las competencias atlticas y olmpicas,
el cual puede pasar inadvertido en las pruebas antidopaje; ya que stas no tienen la capacidad, sensibilidad y
especificidad necesarias para detectar si un deportista
ha recibido o no eritropoyetina humana recombinante,
que se suele encontrar de forma normal en el cuerpo
humano. La eritropoyetina est indicada en personas
anmicas y en quienes padecen de insuficiencia renal
crnica. Esta teraputica biolgica ha mostrado tener
efectos nefroprotectores y regenerativos en los glomrulos y estimular las clulas madre de la mdula sea.
Caso especial son los pacientes con cncer, que pueden
padecer anemia por la toxicidad que producen la quimioterapia y la radioterapia en la mdula sea ocasionando trastornos hematolgicos, siendo los ms frecuentes la anemia normocrmica y la normoctica, y las
anemias graves que se producen en procesos neoplsicos agresivos como el mieloma mltiple, en el que es
necesario emplear grandes dosis (25 000 a 50 000 UI).
Existen varios tipos de interferones humanos recombinantes: los interferones alfa se usan para tratar las
infecciones crnicas por hepatitis y cncer, su principio
20

Pncreas
Islotes de Langerhans
Clulas B
Vaso
sanguneo
Fibra muscular
Insulina
Glucosa
Figura 112. La diabetes mellitus tipo 1 es una enfermedad

ocasionada por la destruccin de las clulas b (B) ubicadas
en los islotes de Langerhans del pncreas que ocasiona la
acumulacin de glucosa en los vasos sanguneos.
es estimular el sistema inmunitario para eliminar el

virus. El interfern b se emplea de manera experimental
para tratar de reducir las placas de esclerosis sobre la
sustancia blanca cerebral en la esclerosis mltiple. El
principio de esta teraputica es que esta protena humana inmunomodula al sistema inmunitario que de manera
errnea reconoce al tejido cerebral rico en mielina ocasionando dficit neurolgicos focalizados en las regiones del cerebro y la mdula espinal. En algunos pacientes han disminuido los sntomas.
Es probable que surjan muchas otras protenas recombinantes humanas que sean registradas para su aplicacin mdica. Muchos frmacos modernos estn basados en las biomolculas humanas: enzimas, hormonas,
anticuerpos y genes. Muchos de stos estn en fase de
investigacin y algunos probndose en la clnica. Por
ahora son slo el principio de lo que se volver una revolucin de largo alcance. Los frutos del Proyecto del
Genoma Humano se irn integrando al esfuerzo internacional consolidado por los gobiernos y las organizaciones privadas.
Otro notable avance de la medicina regenerativa de
nivel I es el uso de sustancias de origen biolgico, natural y recombinante, por estar clasificadas como nutracuticos por su nula toxicidad, ya que se derivan de las
protenas de la yema de huevo, calostro bovino y mangostn o, en su defecto, tienen menor capacidad de acti-
(Captulo 1)
var clulas del sistema inmunitario natural (NK), las

cuales tambin se encuentran en ampolletas con polvo
liofilizado de las sustancias obtenidas de dializados de
leucocitos humanos o de animales para su aplicacin
por va parenteral. Estos productos han sido desarrollados en EUA en forma de cpsulas, logrando contener
concentrados en polvo que se emplean con comodidad
sin correr los riesgos inherentes a la ingestin de frmacos xenobiticos (figura 113). Estas biomolculas de
origen natural que permiten elevar el sistema inmunitario, factores de transferencia (transfer factors), fueron descubiertas en 1949 por el trabajo pionero del
mdico militar (US Navy) H. Sherwood Lawrence (figura 114); poco a poco han venido introducindose en
la prctica mdica hospitalaria y de especialidad.
Lawrence observ que al inyectar un extracto de leucocitos provenientes de una persona previamente infectada con tuberculosis a una persona hasta el momento
no infectada, se otorgaba una inmunidad al nuevo organismo receptor; esta capacidad le permita escapar de la
terrible infeccin por micobacterias. Una unidad internacional (UI) de factor de transferencia equivale a la
sustancia que se asla en cada 2 000 leucocitos huma-
Porcentaje de la actividad de las clulas

asesinas naturales (NK) sobre el control basal
Noni (Morinda citrifolia) 15%
Aloe vera 15%
Bovine colostrum 23%
Cordyceps formula 28%
Shitake 42%
Echinacea 43%
IP6 49%
Transfer factor classic 103%
Transfer factor classic 204%
Transfer factor plus 248%
Jugo de Mangostn 400%
Figura 113. Grfica comparativa que muestra el efecto
sobre la activacin funcional de clulas NK en ensayos in
vitro con diferentes nutracuticos de uso comn. Obsrvese
la considerable respuesta que se obtiene con los factores de
transferencia (transfer factor 4 life researches) y el mangostn (Xango), que superan al hexafosfato de inositol
(IP6), compuesto que se consideraba lder para fortalecer
el sistema inmunitario, el cual es utilizado en pacientes con
infecciones por el virus del VIH y que presentan sndrome
de inmunodeficiencia adquirida.
21
1
5
2
Citocinas y
molculas
bioactivas
Figura 114. A la izquierda el retrato del Dr. Lawrence y a la derecha un esquema de los factores de transferencia formados por
400 aminocidos unidos a RNA con un peso molecular de 5 000 a 10 000 kDa (Kirkpatrick CH: Structural nature and functions
of transfer factors. Ann N Y Acad Sci 1993;685:362368), algunas asociadas con la familia de transferrinas. La hiptesis ms
actual es que estas molculas activan algunos receptores de superficie en las clulas T (1), los cuales transportan la molcula
del factor de transferencia que se piensa que funciona como molcula de enseanza inmunolgica o mensajero inteligente. (2,
3), el cual permite una estimulacin modulada de la liberacin de diversas citocinas que estimulan el sistema inmunitario de
manera ordenada (4), fenmeno observado especficamente en macrfagos, NK y linfocitos T (5).
nos. Los mecanismos de accin de los factores de transferencia no son del todo conocidos (figura 115). Sin
embargo, se ha demostrado in vitro que el incremento
en la activacin de macrfagos por un aumento en la
100
90
97%
80
88%
70
60
69%
50
55%
40
30
20
10
liberacin de citocinas como la interleucina1 incrementa la capacidad de quimiotaxis de los leucocitos, y

sobre todo se incrementa la funcionalidad de las clulas
asesinas naturales (natural killer), mejor conocidas
como clulas NK. Estudios subsecuentes demostraron
que las frmulas nutracuticas de combinar factores de
transferencia de origen bovino, yema de huevo con liofilizados (Shitake) e IP6 superaban la activacin lograda por el estndar de oro para la activacin de leucocitos
del sistema inmunitario, la interleucina2 (IL2); estos
estudios in vitro han permitido desarrollar cpsulas nutracuticas disponibles comercialmente con potencia
para elevar el sistema inmunitario que no tiene precedente alguno ni puede ser alcanzada con los frmacos
(xenobiticos) inmunomoduladores disponibles en la
teraputica convencional, ya que se han obtenido porcentajes de activacin de NK de hasta 437% superiores
al nivel de activacin del control (4lifeR y XangoR).
0
48 h
Figura 115. Grficas comparativas que muestran los
resultados de los primeros experimentos in vitro al comparar
el concentrado de factor de transferencia clsico. A. (obtenido del calostro bovino), transfer factor advanced B. (obtenido del calostro bovino y yema de huevo) y transfer factor
plus advanced. C. (obtenido de calostro bovino, yema de
huevo adicionado con polvo liofilizado de hongos e IP6) D.
Medicina regenerativa de nivel II

En contraste con el gran avance de la medicina regenerativa de nivel I, actualmente no se cuenta con nutracuticos genricos que permitan tener ampolletas con liofilizados de clulas humanas para su aplicacin en terapia
celular (figura 116). Sin embargo, el nivel II de la medicina regenerativa se caracteriza por la aplicacin cl-
22
Figura 116. Futuro de la terapia celular?
nica de clulas del cuerpo humano o de animales jvenes. Para ello estas clulas se hacen crecer en medios de
cultivo en laboratorios especializados para alcanzar el
nmero suficiente, obtener lneas purificadas y analizadas para que puedan ser finalmente introducidas en los
pacientes que las requieran.
La medicina regenerativa de nivel II se ha desarrollado con la llamada ingeniera de tejidos, que ha propiciado una revolucin en la ciruga reconstructiva que
busca proveer de tejidos de clulas formadoras de piel
para injertos que permiten la reconstruccin de partes
del cuerpo ampliamente daadas. La ingeniera de tejidos puede tomar dos vertientes: la primera involucra el
desarrollo de biotecnologa que intenta construir fuera
del cuerpo rganos y tejidos combinando clulas humanas con materiales apropiados, empleando andamios o
estructuras que les proporcionen un apoyo. La segunda
involucra propiamente la terapia celular, cultivando
clulas recientes o criopreservadas en medios de cultivo
para laboratorio, para que luego sean inyectadas en los
tejidos que necesiten ser reparados.
En la actualidad el nivel II emplea liofilizados, clulas recientes y congeladas, que pueden provenir de un
cultivo celular del mismo paciente (autoinjerto), de otro
paciente humano (clulas madre adultas) (aloinjerto) o
de animales superiores como cerdos y ovejas (xenoinjerto). Cuando las clulas son inyectadas de manera sistmica, como ya se ha sealado, tienen la capacidad de
migrar y encontrar por s mismas los sitios dnde el
cuerpo ms las necesita (figura 12). La medicina regenerativa de nivel II puede beneficiarse y potencializarse
(Captulo 1)
con la teraputica del nivel, ya que muchas sustancias

humanas son mezclas de protenas que facilitan la diferenciacin, mitognesis, trofismo y migracin de las
clulas; caso especfico son los factores de crecimiento
y adresinas.
El progreso en la ingeniera de tejidos est enfocado
en el diseo de tejidos para el reemplazo de rganos, necesidad que se est incrementando por el envejecimiento natural de la poblacin. Las personas ms viejas tienen necesidades de reemplazar msculos enfermos o
estropeados, huesos, cartlagos, nervios, rganos del
aparato digestivo, piel, clulas del cerebro. El secreto
del cultivo y crecimiento de tejidos de reemplazo se relaciona con el diseo de sistemas de redes que sirven de
andamios intrincados donde las clulas puedan fusionarse y crecer. Varias sustancias naturales y sintticas
estn demostrando ser valiosas para crear las estructuras de andamios naturales que semejan las estructuras
estrmicas de los rganos en su estado natural.
En la regeneracin natural del hgado, la arquitectura
heptica se restablece siguiendo una secuencia determinada. Por ejemplo, pocos das despus de la hepatectoma se observan acmulos de hepatocitos como resultado de su activa proliferacin. Luego, los procesos de
desdiferenciacin que ocurren en algunos hepatocitos
se transforman en clulas madre monopotenciales que
comienzan a migrar penetrando en estos acmulos y
producen diferentes tipos de laminina, de manera que
eventualmente los hepatocitos se reacomodan para formar las placas hepticas tpicas del hgado maduro. Los
capilares de los acmulos, revestidos de la membrana
basal capilar, cambian a la estructura sinusoidal con
escasa matriz y son revestidos de las clulas fenestradas
y hay presencia de clulas de Kupffer.
El proceso ha sido repetido con docenas de hepatectomas sucesivas sin que se observen signos de agotamiento. La capacidad clonognica del hepatocito tambin parece ilimitada. En modelos en que el hgado es
incapaz de sostener la vida del animal, 1 000 hepatocitos aislados inyectados en ese hgado (terapia celular)
crecen formando acmulos iguales a los descritos en el
modelo de hepatectomas parciales, y restablecen finalmente la masa heptica original salvando la vida del animal. Modelos matemticos permiten calcular que un
solo hepatocito da origen a 1.7 x 1010 clulas al cabo de
un mnimo de 34 divisiones celulares. Como un hgado
de rata normal contiene 3 x 108 clulas, un hepatocito en
estas condiciones puede generar unos 50 hgados de rata
(figura 117).
Estudios con cultivos de clulas hepticas han mostrado que bajo el estmulo del factor de crecimiento de
los hepatocitos (HGF) y del factor de crecimiento epi-

Estado quiescente de la clula
madre en la fibra muscular
23
Lesin de la fibra
muscular (miotrauma)
mioncleo
Autorrenovacin
Activacin de las clulas

madre y proliferacin
Regeneracin del ncleo central

de la fibra muscular
Trofismo por quimiotaxis
a la fibra lesionada
Fusin de la clula madre a la
fibra muscular (hipertrofia)
Transdiferenciacin de las clulas madre
en fibras musculares (hiperplasia)
Figura 117. Esquema de clulas satlite. Depsitos naturales de clulas madre en el msculo esqueltico, responsable de la
hipertrofia en los atletas y fisicoculturistas.
drmico (EGF), los hepatocitos sufren primero un proceso de desdiferenciacin (clulas ovales) y luego uno
de rediferenciacin para formar ya sea hepatocitos maduros o estructuras semejantes a ductos biliares.
Esto muestra que los hepatocitos no son clulas diferenciadas terminalmente, lo que es inesperado dada la
gran complejidad de las funciones de un hepatocito maduro. Incluso ms espectacular que esto es la capacidad
de los hepatocitos de proliferar mientras mantienen
simultneamente sus funciones esenciales: regulacin
de la glucosa, sntesis de protenas, secrecin de bilis y
biodegradacin de toxinas. Estas funciones se mantienen incluso si slo queda un tercio del rgano y 90% de
las clulas residuales estn proliferando. Esta actividad
se debe a la interaccin de diversos eventos complejos
como la regulacin de la matriz, la disolucin y luego
la resntesis de los diferentes dominios de membrana
especializados del hepatocito, y a la alineacin y coordinacin de unos 150 cromosomas en cada mitosis.
Esta regeneracin tambin sucede de manera natural
en mayor o menor grado en prcticamente todos los rganos de nuestro cuerpo. De hecho, a lo largo de la vida
vamos perdiendo clulas producto del envejecimiento
o del dao producido por infecciones, sustancias qumicas, traumatismos, etc., las cuales son reemplazadas con
nuevas clulas, lo que permite que los tejidos y rganos
continen funcionando de manera adecuada. Las clulas encargadas de esta regeneracin natural son las
clulas madre (satlites) localizadas en los diferentes
rganos del cuerpo. Estas clulas madre tienen la capacidad de autorregenerarse, es decir, de mantenerse en un
nmero constante, y la capacidad de transformarse en
clulas maduras especializadas (parnquima), reponiendo as las que se van perdiendo (figura 117).
Cuando el dao de un tejido u rgano es muy severo,
los mecanismos de reparacin natural son insuficientes
y no son capaces de compensar la gran prdida de clulas ocasionada por la lesin o enfermedad, llevando muchas veces al reemplazo por clulas no especializadas
en el tejido (estroma) que ocasionan fibrosis (cicatriz)
y haciendo que el tejido u rgano no funcione adecuadamente.
Qu dispara la respuesta regenerativa? Cmo se regulan las diferentes etapas de la respuesta regenerativa?
Cmo se detiene el proceso? stas son las preguntas de
la investigacin en desarrollo. La hiptesis de disparo de
la respuesta regenerativa es que existen seales mitognicas producidas por elementos que aparecen rpidamente en la sangre y son llevadas a los hepatocitos o
sitios de lesin remanentes y estimulan la proliferacin.
Aun cuando el tejido heptico sea trasplantado a sitios
extrahepticos, aumenta la sntesis de DNA despus de
la hepatectoma. En experimentos en los que las ratas son
unidas a travs de una circulacin parabitica se ha
demostrado que al hacer la hepatectoma en una de ellas,
el hgado de la otra tambin se regeneraba, observndose
el efecto mximo cuando la hepatectoma es total.
Existen factores de crecimiento involucrados de manera directa en la respuesta mitognica y una serie de
otros factores que actuaran indirectamente, pero cuya
presencia es indispensable para generar los estmulos
mitognicos apropiados.
Entre los primeros estara el factor de crecimiento de
los hepatocitos (HGF), que aumenta rpidamente luego
24
de la hepatectoma, el factor de crecimiento epidrmico

(EGF) y el factor de crecimiento transformadora
(TGFa). HGF y TGFa se produciran en los mismos
hepatocitos y EGF en las glndulas de Brunner en el
duodeno, llegando al hgado a travs de la circulacin
portal. Junto a stos hace falta la presencia de otros sistemas de seales que aparecen como necesarios para la
produccin de estos factores, o bien para que stos produzcan sus efectos, por ejemplo citocinas, insulina y
noradrenalina.
Las citocinas, especialmente la IL6 y TNFa, secretadas por las clulas de Kupffer, aparecen como especialmente importantes en los mecanismos iniciales de
la regeneracin. La insulina, si bien no tiene efectos mitognicos directos sobre los hepatocitos, es indispensable para que las seales mitognicas acten apropiadamente. De igual modo, la noradrenalina tampoco acta
como mitgeno, pero amplifica la accin de HGF y
EGF a travs de la activacin del receptor adrenrgico
a1 y, adems, induce la secrecin de EGF por parte de
las glndulas de Brunner en el duodeno.
Hay compaas que estn empleando clulas humanas para hacer piel artificial, un producto que ha mejorado la atencin mdica y el cuidado de las vctimas de
quemaduras. Hoy en da existe la tecnologa que permitir preparar terapia celular despus de cultivar una
biopsia de las propias clulas de los pacientes. En algunos laboratorios los cientficos han logrado formar
vasos a partir de clulas de la sangre, se ha podido cultivar msculo cardiaco, crnea, tubo digestivo, sistema
urogenital, hgado y rin. Mdicos especializados en
ciruga y trasplante estn empezando a implantar estos
nuevos tejidos en los pacientes.
Los trasplantes de sangre (transfusiones sanguneas)
y de mdula sea son los paradigmas con los que se tiene
ms experiencia en el campo clnico; ambas teraputicas se han utilizado por varias dcadas para regenerar el
tejido destruido por la quimioterapia y la radioterapia.
Hoy en da es posible obtener de bancos de sangre y de
mdula sea, clulas madre o troncales (stem cells)
adultas, las cuales son separadas por mtodos de citometra de flujo elevado.
Los hematlogos y los onclogos obtienen aspirados
y biopsias de mdula sea para rescatar con el trasplante
a los pacientes tratados; despus de la inyeccin endovenosa las clulas emigran a los sitios que sean convenientes en el interior de los huesos, para multiplicarse
y restaurar con nuevas clulas sanguneas el espacio intravascular. La terapia celular con clulas madre adultas
es la frontera de la medicina regenerativa de nivel II, ya
que las clulas madre tienen la capacidad de tomar dos
(Captulo 1)
caminos: una clula sigue indiferenciada para mantener

el clon y la colonia de la clula multipotencial, mientras
que otras clulas tienen la capacidad de diferenciarse en
muchos tipos celulares, en clulas del sistema nervioso,
tejido hematopoytico, miocardio, corazn, clulas endoteliales, pncreas (clulas b), hgado, hueso, trofoblasto y otros tejidos celulares.
La principal causa de muerte en Mxico son las enfermedades cardiovasculares, sobre todo por infarto al
miocardio. Los avances en la ciruga de derivacin y la
angioplastia percutnea de las coronarias con colocacin de endofrulas cardiacas han mejorado sobre todo
la sintomatologa de la angina estable e inestable. Sin
embargo, no siempre tienen la capacidad de restaurar la
funcin, sobre todo en infartos al miocardio que evolucionan a la dilatacin ventricular e insuficiencia cardiaca. La terapia celular con cardiomiocitos previene el
adelgazamiento cardiaco y la dilatacin ventricular.
La era de la cardiomioplastia celular se inici con el
Dr. Menasche en Pars. En un estudio clnico fase I, de
pacientes referidos para una ciruga de derivacin con
infartos extensos se obtena una biopsia muscular de la
cual se aislaban mioblastos que eran cultivados de forma externa y que fueron inyectados alrededor del infarto en el tiempo quirrgico de la derivacin. Diez pacientes, en un periodo de uno a dos aos posteriores a la
ciruga de derivacin y a la terapia celular, se encontraron libres de sntomas coronarios y mejoraron la funcin cardiaca de forma general, la cual fue evaluada en
el ecocardiograma, lo que sugiri una restauracin de la
funcin en la zona infartada. Los estudios de medicina
nuclear con PET24 mostraron viabilidad en la regin del
infarto en zonas que no estaban presentes en el periodo
preoperatorio. Dos pacientes murieron, uno por choque
cardiognico y el otro 17 meses despus por un evento
vascular cerebral de tipo isqumico; en las autopsias se
observ que los mioblastos estaban engarzados en la
regin del infarto, demostrndose la viabilidad del trasplante de clulas. Aunque las clulas se encontraron
entre los miocitos, no presentaban la caracterstica de
sincronizacin del latido debido a que no expresaban
conexiones. En cuatro pacientes aparecieron arritmias
y se requiri implante de desfibriladores y el uso de
amiodarona. En la actualidad este procedimiento de
cardiomioplastia celular requiere la inyeccin de 800
millones de mioblastos.
Estudios ms actuales estn demostrando que la regeneracin celular del miocardio infartado proviene de
la diferenciacin de clulas madre residentes en el mio24.
Tomografa por emisin de positrones.

A. Clulas madre inyectadas en
miocardio infartado en el
ventrculo
Clulas madre
embrionarias y
adultas
Las clulas madre

regeneran el
tejido infartado
Infarto
Alognico
25
B. Clulas madre humanas

inyectadas en la vena
caudal de rata
Las clulas madre inducen formacin

de vasos sanguneos en el interior del
msculo infartado
Nuevos
vasos
Clula madre
Infarto
Xenognico
Figura 118. Terapia celular con clulas madre adultas en la lesin e intravenosas en los modelos de isquemia miocrdica.
cardio (semejantes a las satlites del msculo estriado)

y de las provenientes de la mdula sea. Por desgracia
este proceso puede no bastar para prevenir la insuficiencia cardiaca en los infartos masivos y en los pacientes
con cardiomiopatas (figura 118).
En la medicina regenerativa de nivel II los pacientes
reciben medicinas que permiten activar las clulas madre
propias del organismo, se aplica la vacuna antienvejecimiento y de ser necesario se aplican clulas cultivadas, o
bien se extraen clulas madre de un donador o paciente.
Est en investigacin si es necesario el tratamiento inmunosupresor, por ejemplo usar esteroides para prevenir
rechazo o reacciones por la introduccin de clulas extraas. Hasta el momento no se suele utilizar como en el
caso de la ciruga de trasplante. Poco a poco se establecern los bancos de tejidos que incluyan la tipificacin de
las caractersticas inmunes de las clulas, como la tipificacin de los tipos sanguneos y los grupos Rh, y hasta
del sistema mayor de histocompatibilidad, como se hace
en los bancos de rganos para trasplante.
Medicina regenerativa de nivel III

El rasgo distintivo del nivel III es utilizar terapia celular
con clulas madre de origen embrionario y adulto
(figura 118). Estas clulas pueden diferenciarse en los
ms de 250 tipos celulares que constituyen el cuerpo de
un ser humano y presentan una gran tolerancia inmunolgica por el organismo destinatario, es decir, presentan
una respuesta de rechazo inmunolgico mnima o nula.
Hoy en da existen bancos de clulas madre de origen
embrionario, de cordn umbilical y adultas, las cuales
estn disponibles en forma de lneas celulares con diferentes grados de diferenciacin (ectodermo, mesodermo y endodermo), lo que permite dirigir, de ser necesario, el tipo de tratamiento de conformidad al tejido
blanco enfermo o lesionado que se desee regenerar.
Estas clulas tienen la capacidad de multiplicarse in
vitro y una vez que estn dentro del organismo, de
migrar y dividirse en el sitio de la lesin. Las clulas madre de origen embrionario, al ser obtenidas del interior
de blastocisto humano, provienen de un sistema biolgico hermtico libre de microorganismos infecciosos,
priones, etc.; adems, su maquinaria nuclear e intracelular (DNA, RNA, ribosomas y dems organelos) se
encuentran como la de un automvil recin salido de la
agencia, es decir, totalmente nuevas, lo que incluye sistemas de defensa, regeneracin, mitosis y diferenciacin celular intactos, no afectados por el envejecimiento ni la enfermedad: se encuentran en su mxima
capacidad, ofreciendo ventajas adicionales a la terapia
celular con clulas madre de origen adulto o del mismo
paciente, ya que estas ltimas tienen telmeros acortados y su DNA ha estado sujeto durante ms tiempo al
impacto del ambiente y el tiempo. Su grado de mitog-
26

Telmeros
A
(Captulo 1)
Telomerasa
B
Proceso de regeneracin
de la longitud de los telmeros
Antes
Ncleo
Cromosomas
DNA
terminal
Templete de RNA
Telomerasa
C
Telomerasa
D
DNA
nuevo
No hay
telomerasa
DNA
polimerasa
Despus
Figura 119. Diferencias en el tamao de los telmeros y actividad de la telomerasa entre las clulas madre embrionarias (A)
y las adultas (B). Las clulas madre embrionarias mantienen intacta la maquinaria de reparacin del DNA y el RNA, ya que expresan telomerasa; los telmeros son ms largos y estn menos envejecidos (C); mientras que los telmeros de las clulas madre
adultas son ms cortos y las clulas han envejecido, no expresan telomerasa, lo hacen de forma insuficiente (D).
nesis y diferenciacin est, por lo tanto, ms disminuido

(figura 119).
Nuevos conceptos de la biologa del desarrollo, definidos en los ltimos 20 aos, han apoyado y ampliado
viejos principios que datan de finales del siglo XIX a
inicios del XXI sobre la capacidad regenerativa y de
reparacin tisular de determinadas poblaciones celulares. La utilizacin de clulas derivadas de estas poblaciones con el propsito de regenerar o sustituir clulas
daadas o defectivas y lograr restaurar o establecer la
funcin tisular requerida constituye la base de la terapia
de trasplante celular propuesta para diversas enfermedades crnicas y defectos genticos, asociados con la
afectacin o prdida de tipos celulares especficos.
Estas clulas, cuyo potencial regenerativo o generativo
es apreciado en la actualidad por su indiscutible valor teraputico, se denominan clulas madre. Una clula madre
debe ser clonognica, capaz de autorrenovacin ilimitada
por divisiones asimtricas y bajo condiciones experimentales adecuadas, as como de generar clulas diferenciadas
de virtualmente cualquier tipo de tejido. Esta ltima cualidad, conocida como plasticidad de diferenciacin, distingue a las clulas madre pluripotentes con capacidad de
diferenciarse al cruzar las fronteras de lnea, tejido e
incluso capa germinal, de los precursores o progenitores
tisulares, que aseguran el recambio celular slo dentro de

los lmites de su propio tejido de origen.
La combinacin de las propiedades de clonogenicidad, autorrenovacin (con el carcter vinculado de expansin extensiva in vitro) y plasticidad convierte a las
clulas madre en excelentes herramientas de procedimientos de reconstitucin tisular, cuyo ejemplo ms
exitoso es el trasplante de mdula sea en el tratamiento
de leucemias y linfomas.
En otras enfermedades humanas, la reconstitucin de
los tejidos daados o defectuosos mediante el trasplante
de clulas madre podra ser tambin una intervencin
curativa. Una importante limitacin para la posible
reconstitucin de rganos slidos ha sido la disponibilidad restringida de clulas madre con capacidad de generar clulas diferenciadas que funcionen con la misma
eficiencia que las clulas especficas del tejido que
deben reemplazar.
Con el propsito de lograr el suficiente nmero de
clulas diferenciadas y funcionales en los trasplantes
celulares, son objeto de intenso estudio dos grandes grupos de clulas madre: las clulas madre embrionarias y
las adultas. Ambos tipos de clulas parecen retener una
memoria colectiva del complejo proceso de desarrollo
a travs del cual son construidos los tejidos especficos.

Recientemente se han logrado dos importantes avances
en el desarrollo de la terapia con clulas madre embrionarias: la derivacin de clulas madre embrionarias humanas
a partir de un blastocisto clonado, as como la derivacin
y caracterizacin de nuevas lneas humanas de clulas
madre embrionarias. Sin embargo, el uso clnico de las
clulas madre embrionarias ha estado en ocasiones limitado por razones ticas y restricciones polticas.
En los ltimos aos se han identificado clulas madre
pluripotentes en muchos tejidos del organismo adulto,
incluidos algunos con muy baja capacidad regenerativa,
como el tejido nervioso. Entre estas clulas madre adultas, el uso de aqullas derivadas de mdula sea y sangre
perifrica es especialmente atractivo por su accesibilidad y aparente plasticidad in vivo. La posibilidad de
generar tejido no linfohematopoytico a partir de clulas madre de sangre perifrica se sugiri inicialmente
por la presencia de hepatocitos y clulas epiteliales cutneas e intestinales derivadas del donante en receptoras
de trasplantes de clulas madre adultas alognicas, aunque en este caso no se estudi la funcin de las clulas
generadas.
Hoy en da son una realidad los ensayos clnicos en
los que se demuestre la recuperacin de una funcin
orgnica eficiente y sostenida tras el trasplante de clulas madre.
La diabetes mellitus tipo 1 (DM1) es, sin duda, la
enfermedad endocrinometablica que ha recibido ms
atencin por parte de clnicos y bilogos que exploran
la utilidad teraputica de las clulas madre. Ya es posible revertir esta enfermedad crnica, que resulta de la
destruccin selectiva de las clulas b de los islotes de
Langerhans, mediante su reemplazo por clulas diferenciadas que secreten insulina bajo regulacin fisiolgica. El alotrasplante de islotes puede restaurar la normoglucemia sin emplear insulina en pacientes con DM1
de larga evolucin.
Varios estudios recientes en modelos animales apoyan la factibilidad de generacin de clulas b funcionales a partir de clulas madre embrionarias y adultas, y
se ha demostrado la reversin de diabetes inducida experimentalmente con el uso de clulas productoras de
insulina derivadas de clulas madre embrionarias.
Tambin se ha propuesto emplear clulas madre embrionarias obtenidas despus de transferencia del ncleo de clulas somticas autlogas o progenitoras autlogas de clulas, cuya fuente en el hombre an est por
definirse. Estudios recientes indican que la mdula sea
puede ser una fuente de progenitores de clulas pancreticas que tienen la capacidad de expansin ex vivo y
diferenciacin in vivo, y por lo tanto ser til para el trasplante autlogo en pacientes diabticos.
27
En cualquier caso, el xito a largo plazo del trasplante

de clulas madre en la DM1 depender de la posibilidad
de restaurar y mantener una masa funcional eficiente de
clulas en un individuo cuya respuesta autoinmune selectiva contra estas clulas, mediada por clulas T, caus inicialmente la enfermedad. En receptores de alotrasplantes de islotes se describe este riesgo de diabetes
autoinmune recurrente. Por lo tanto, deben evaluarse
paralelamente modos seguros y efectivos de control de
la respuesta autoinmune que eviten la destruccin progresiva de las clulas regeneradas. En este sentido se
han explorado algunas formas de induccin de tolerancia en ensayos preclnicos.
En algunos pacientes con diabetes mellitus tipo 2,
con profunda deplecin de la masa funcional de clulas
pancreticas se utiliza el trasplante de clulas madre sin
el riesgo antes mencionado de respuesta autorreactiva.
En este caso, las clulas precursoras trasplantadas logren su diferenciacin final in vivo y producen clulas
funcionales en cantidad suficiente para restaurar el control euglucmico.
Las clulas madre embrionarias, como su nombre lo
indica, se derivan de los embriones, especficamente de
oocitos fertilizados in vitro (FIV), donados con propsitos de investigacin para tratamiento mdico firmando
una hoja de consentimiento informado para donadores,
y no se derivan de huevos fertilizados en la mujer. Los
embriones de donde se obtienen las clulas madre embrionarias humanas tienen tpicamente de cuatro a cinco
das de edad, constituidos por una esfera microscpica
formada por clulas llamadas blastocistos. El blastocisto incluye tres estructuras: el trofoblasto, que es la
capa de clulas que rodean al blastocisto; el blastocele,
que es la cavidad sin sustancia dentro del blastocisto, y
la masa celular interna, que es un grupo de unas 30 clulas en un extremo del blastocele. Esta masa celular interna se separa del trofoblasto para cultivar aqullas,
que se dividen y se extienden encima de la superficie
interior de las cajas de cultivo celular.
Las investigaciones de ingeniera de tejidos de la medicina regenerativa del nivel II desarrollaron tecnolgicamente la colocacin, sobre la superficie de la caja de
cultivo celular, de una lmina de clulas embrionarias
de ratn que recibieron tratamiento especial para no
entrar en mitosis. Esta capa de clulas es conocida como
capa alimentadora. La razn de tener esta capa es proporcionar una superficie adherente a las clulas de las
masas celulares internas. Las clulas alimentadoras liberan nutrientes en el medio de cultivo. Recientemente,
otros cientficos han inventado nuevas tecnologas que
permiten a las clulas madre embrionarias de origen
humano crecer sin necesidad de la capa de clulas de ali-
28
(Captulo 1)
Blastocisto
Masa celular interna
Clula madre
embrionaria
Clula
madre
Suspensin de clulas madre
marcadas con anticuerpos y
marcadores fluorescentes
Receptores
Membrana plasmtica
FACS
Factores de
transcripcin
Lser
Activacin
Activacin
Se someten a un flujo de presin

y campo electromagntico
Sealizacin
Autorrenovacin
Bloqueo
autorrenovacin
Las clulas generan

una carga elctrica que
les permite ser separadas
(sorting)
Grfica de FACS
Intensidad
fluorescente
Anlisis de clulas madre

B
Figura 120. A. Vas de sealizacin que estn investigndose en clulas madre embrionarias. B. Tecnologa para obtener clulas madre adultas a partir de mdula sea y sangre perifrica por citometra de flujo de alta velocidad (FACssorting), que separa
las clulas madre marcadas por su carga elctrica negativa.
mentacin. Durante los siguientes das, las clulas de la

masa celular interna proliferan y empiezan a apiarse en
el plato de cultivo. Cuando esto ocurre, estas clulas se
separan con suavidad y vuelven a sembrarse en nuevas
cajas con nuevos medios de cultivo. Este proceso de
reimplantacin de clulas se repite muchas veces y
durante muchos meses. Cada ciclo es conocido como
subcultivacin de clulas; despus de seis meses o ms,
las 30 clulas originales de la masa interna del blastocisto donado se multiplicaron para alcanzar millones de
clulas madre embrionarias que pueden aplicarse en la
terapia celular. Hoy en da, estas clulas pueden adquirirse en bancos que han establecido lneas celulares, las
cuales se congelan en medios especiales de criopreservacin y pueden enviarse a otros laboratorios para continuar su cultivo celular, realizar experimentacin y
aplicar terapia celular a pacientes.
Una ventaja de utilizar lneas celulares de estos laboratorios es que estas clulas madre de origen embrionario humano fueron sometidas a diversas pruebas. Estos
ensayos incluyen la testificacin de su capacidad de crecimiento en los procesos de subcultivacin durante muchos meses, lo que permite garantizar que las clulas
sean capaces de autorrenovarse a largo plazo cuando se
apliquen en el paciente. Adems, expertos cientficos en
embriologa y morfologa inspeccionan los cultivos a
travs de diversas tcnicas de microscopia para ver que
las clulas se encuentren saludables y continen en su

estado de indiferenciacin.
En EUA los Institutos Nacionales de Salud (NIH) estn desarrollando tcnicas especficas para determinar
la presencia de marcadores de superficie que slo se encuentran en este tipo de clulas indiferenciadas (figura
120). Otras pruebas importantes en desarrollo consisten en localizar la presencia de la protena Oct4, tpica
de las clulas indiferenciadas, la cual funciona como
factor de transcripcin, mientras sigue creciendo el conocimiento sobre el genoma humano. Hoy en da se
sabe que Oct4 ayuda en el proceso de encendido, activacin de genes, y participa en los procesos de diferenciacin celular y desarrollo embrionario. Otro mtodo es
el examen microscpico de cromosomas, que permite
evaluar si existe dao cromosmico o si el nmero de
cromosomas ha cambiado. Cuando se descubre que no
existen mutaciones genticas en las clulas, las clulas
pueden seguir el proceso de subcultivacin y criopreservacin. Otros controles de calidad son la descongelacin y reimplantacin, sometiendo a pruebas de diferenciacin clulas madres embrionarias humanas para
conocer si su capacidad pluripotencial se conserva, permitiendo a las clulas diferenciarse de manera espontnea en los medios de cultivo celular. Tambin se pueden
manipular las clulas para dirigir el tipo especfico e inyectar las clulas madre a ratones inmunodeprimidos

para corroborar el supuesto riesgo de formacin de tumores benignos llamados teratomas, los cuales pueden
originarse cuando se emplean clulas madre derivadas
de teratomas, lo que no se recomienda para su aplicacin clnica de terapia celular.
El genoma humano es un conjunto de instrucciones
de material gentico existentes en las clulas del cuerpo
humano. La gran molcula de DNA que compone el genoma est repartida en 23 pares de cromosomas. Todas
las clulas se formarn a partir de la primera que se form en el momento de la fecundacin, al fusionarse el
gameto del padre con el de la madre. A partir de stas,
una clula madre embrionaria totipotencial dar origen
a los ms de 100 trillones de clulas que forman un organismo adulto, todas con idntica carga gentica, de tal
manera que cada par de cromosomas es idntico. Microscpicamente los cromosomas tienen la apariencia
de un ovillo. Por lo tanto, el genoma humano comprende el conjunto de genes que integran el patrimonio biolgico de cada individuo y contienen las claves de la
herencia. Su conocimiento permite entender los procesos de transmisin de todo tipo de caractersticas.
El Proyecto Genoma Humano (PGH) ofrece herramientas jams imaginadas por los investigadores, como
prevenir y curar enfermedades hereditarias que causan
30% de mortalidad infantil, pero a la vez desencadena
una compleja discusin tica, en que se involucran
diversas esferas de la sociedad que tratan de llegar a un
consenso de enfoques ante el avance de la ciencia.
Ya se han usado clulas madre embrionarias con xito para tratar lesin y enfermedad en los animales, incluyendo lesiones del cordn espinal en las ratas. Tambin
ha sido prometedor en roedores de modelos experimentales de enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson. Las clulas madre embrionarias humanas pueden sobrevivir en el pncreas de ratn y tienen la
capacidad de aumentar la secrecin de insulina, por lo
que el ratn resiste el ataque del sistema inmunitario
para poder revertir la diabetes mellitus. Naturalmente,
clulas madre embrionarias humanas empleadas en la
terapia celular tienen mejores efectos equivalentes en
los pacientes humanos.
En caso de que las clulas madre embrionarias de origen humano, obtenidas de las lneas celulares de los
bancos, ocasionen una hipottica reaccin inmune al
inyectarse en el paciente, existira entonces la posibilidad de emplear una nueva tcnica biolgica poderosa
conocida como trasplante nuclear, utilizado en 1997
para producir a Dolly, la oveja clonada.
El trasplante nuclear permite producir clulas madre
embrionarias de origen humano genticamente idnticas a la muestra que se obtenga del cultivo celular del
29
paciente, eliminando as la supuesta dificultad de incompatibilidad. Esta tcnica evitara la clonacin de

animales, que ha sido limitada por la biotica en algunos
pases. Existe otra tcnica que permite, a travs de un
choque elctrico, iniciar la mitosis del oocito, proceso
llamado partenognesis que evita la fertilizacin por el
espermatozoide. Este embrin es implantado en un tero y la descendencia es un clon genticamente idntico
al animal que proporcion el ncleo original. Pero si el
objetivo es derivar las clulas madre embrionarias, la
transferencia nuclear permitira extraer clulas madre
embrionarias de animales con ncleos de paciente.
El experimento de clonacin con Dolly demostr dos
puntos importantes: uno fue la posibilidad de reprogramar una clula adulta para que sus descendientes puedan convertirse en cualquier otro tipo de clula en el
cuerpo. Tambin se demostr con Dolly que ese trasplante nuclear puede rejuvenecer las clulas, mientras
que al poner en retroceso su reloj interior se comportaran de manera similar a las clulas jvenes nuevas,
proceso que podra usarse para regenerar el envejecimiento de las clulas humanas.
Sin embargo, la principal limitante de la medicina
regenerativa de nivel III es la oposicin de ciertos sectores de la sociedad, que arguyen dilemas bioticos. La
administracin del presidente George W. Bush en EUA
ha restringido el apoyo federal para la investigacin de
clulas madres embrionarias humanas a un pequeo
nmero de lneas celulares que han quedado legalmente
establecidas y que pueden ser empleadas para la terapia
celular con fines mdicos. Ya que el trasplante nuclear
podra usarse para hacer un clon humano, algunas personas se oponen al uso de esta tcnica, incluyendo su
empleo con fines teraputicos y reproductivos. La
administracin Bush ha sido presionada por sectores de
la sociedad para prohibir cualquier uso de trasplante
nuclear que incluya el crear tejidos que igualen los de
un paciente. Mientras que estas oposiciones polticas se
invierten en EUA, en pases como Mxico hay la oportunidad de avanzar en la medicina regenerativa de nivel
III investigando y aplicando terapia celular con clulas
madre embrionarias de origen humano. La oposicin de
algunos sectores de la sociedad para usar clulas madre
de origen humano se deriva de la consideracin de que
estos embriones tempranos, los que en realidad son
todava una esfera de clulas (blastocistos), son destruidos para recuperar la masa interna de clulas de las que
se derivan las lneas de clulas madre, sin considerar
que en esta fase temprana de desarrollo el embrin humano es microscpico, formado por un acmulo de menos de 100 clulas, las cuales no han formado rganos
como el corazn, cerebro o sistema nervioso. Por lo tan-
30
to, estas clulas son incapaces de sentir dolor o sufrimiento. Los programas de FIV disponen de miles de
embriones donados en procesos semejantes a los de donacin voluntaria, como la donacin de sangre o de rganos para ciruga de trasplante. Muchas mujeres y
hombres son donadores deseosos de ofrecer un embrin
destinado a la disposicin de clulas madre embrionarias que permitiran sanar a enfermos y ancianos.
Medicina regenerativa de nivel IV

El paradigma del nivel IV de la medicina regenerativa
es la ciencia de los nuevos materiales, y el rpido progreso de esta ciencia est permitiendo el diseo de materiales a escala atmica y molecular. La nanotecnologa
permite mayor precisin, lo cual hace que los implantes
se integren ms fcilmente en los tejidos, como si se tratara de nuestras propias clulas. Se vislumbra el desarrollo de dispositivos microscpicos que funcionen con
estructuras producidas por ingeniera a escala atmica
(nanotecnologa) que sern capaces de introducirse en
el cuerpo sin ocasionar rechazo. Estos desarrollos proporcionarn al paciente viejo o enfermo la capacidad de
restaurar de manera inconcebible clulas y tejidos. De
hecho, la ciencia ficcin espera que ellos superen las
capacidades naturales del cuerpo. Las implicaciones de
la nanotecnologa sern una realidad a largo plazo. Las
aplicaciones mdicas llevarn a la medicina regenerativa a un lugar ms all de lo que ahora se puede lograr.
El campo de la nanotecnologa tardar en madurar,
pero ya se pueden discernir sus principios ms tempranos. Los mdicos ortopedistas actualmente utilizan
suturas e implantes de acero inoxidable para sustituir las
articulaciones de la cadera; los cirujanos cardiovasculares sustituyen las vlvulas del corazn con vlvulas
mecnicas en aleaciones especiales de acero y emplean
vasos sintticos de silicn y dacrn para reemplazar
segmentos de vasos sanguneos obstruidos por placas
de ateroma o que han formado aneurismas; los otorrinolaringlogos estn permitiendo que miles de personas
recuperen el sentido de la audicin implantando ccleas
artificiales en el odo interno.
Qu clase de sustancia puede integrarse en los tejidos del cuerpo humano? La respuesta es sorprendentemente simple: cualquier clula o material que persista
en el cuerpo y no llame la atencin del sistema inmunitario. Esta pregunta ya est siendo resuelta con las investigaciones clnicas de nivel II. Al aplicar clulas
madre en pacientes, debe reconocerse que el estmulo
ms importante al escribir la primera edicin de este
libro ha sido la experiencia clnica de los autores, al ha-
(Captulo 1)
ber aplicado clulas madre de origen embrionario y

adulto en ms de 1 000 pacientes que presentaban diversas enfermedades crnicas degenerativas incurables,
con resultados sorprendentemente benficos, y en ninguno de ellos se ha presentado hasta el momento reaccin de rechazo de tipo inmunolgico. Ese sistema de
defensa, compuesto de las clulas especializadas de
sangre y anticuerpos, rechazar materiales que reconozca como qumicamente diferentes de los componentes
naturales del cuerpo. Aun as, aceptar aqullos qumicamente similares y aceptar algunos materiales que no
se parezcan a nuestros componentes con tal que no lleven ninguna bandera roja qumica con la cual llamen la
atencin.
El diseo actual de implantes, dispositivos y prtesis
se hace con base en que los materiales con los que estn
fabricados tengan la capacidad de no producir rechazo
inmunolgico. Estos materiales actualmente son cuidadosamente seleccionados. Los experimentos han identificado a varios que incluyen ciertas aleaciones de metales mezcladas con minerales y metales, materiales
naturales y plstico con la capacidad de ser absorbidos
por el cuerpo, como aqullos que son actualmente empleados en las suturas sintticas que se emplean en ciruga (Vicryl, catgut crmico y simple).
Los recientes logros de la micromecnica y la electrnica han permitido disear dispositivos y prtesis con
marcapasos con desfibriladores implantados, prtesis
robticas inteligentes que permiten sustituir las funciones de las extremidades superiores e inferiores al estar
conectadas al sistema nervioso perifrico del paciente.
Existen actualmente riones y corazones artificiales que
han permitido realizar la ciruga de trasplante.
MEDICINA ANTIENVEJECIMIENTO
Finalmente, la medicina regenerativa puede encaminarse al antienvejecimiento. Difcilmente la teraputica

convencional con frmacos qumicos puede detener el
proceso natural del envejecimiento. Sin embargo, la
medicina regenerativa puede frenar o enlentecer los
cambios fsicos que se observan durante el envejecimiento del cuerpo humano. Despus de todo, son las
sustancias bioactivas de nuestro organismo y sus clulas
las que dirigen nuestro desarrollo, mantienen y reparan
nuestros cuerpos. Las hormonas del crecimiento humano de origen recombinante pueden promover el crecimiento del msculo y aumentar la regeneracin de la
piel. Las arrugas y la atrofia muscular representan una

diferencia importante en la calidad de vida que, desafortunadamente, cambia mientras envejecemos.
La medicina antienvejecimiento no puede emplear
una sola medicina o tratamiento que pueda limitar este
proceso. La medicina regenerativa de nivel I para el
antienvejecimiento emplear las sustancias que permitan fortalecer el sistema inmunitario, como los factores
de transferencia y la alimentacin con lactosuero, antioxidantes, hormonas y factores de crecimiento que en
combinacin permitan fortalecer los huesos, reparar
cartlagos y una extensa variedad de propsitos mdicos.
La medicina antienvejecimiento no es un solo procedimiento y no necesariamente est indicada nicamente
para los ancianos, por lo que pueden establecerse programas en todas las edades, en especial en la vida adulta
(ms de 30 aos de edad). Este programa incluye la disminucin de factores estresantes y nocivos (noxas). Por
ejemplo, sabemos actualmente que el estrs emocional
es un factor importante que incrementa el riesgo de
muerte prematura. Los factores emocionales provocan
desgaste fsico y mental (sndrome general de adaptacin), la propensin a enfermedades de diverso tipo y,
por consiguiente, envejecimiento acelerado.
Si se considera que en la vida moderna existen mltiples factores ambientales que afectan negativamente las
condiciones de salud de la poblacin, se comprender
por qu muchas personas preocupadas por mejorar su
estado de salud son ejecutivos, artistas, profesionales y
todos aqullos sometidos a trabajo excesivo y presiones
fsicas y emotivas, y se someten a diferentes procedimientos de medicina regenerativa en los que se incluye
la terapia celular.
En este libro, el concepto de medicina antienvejecimiento estar integrado a la aplicacin combinada de
terapia celular con clulas madre, con una dieta biomdica antienvejecimiento (alimentos funcionales como
el lactosuero ms restriccin calrica y disminuir en >
60% la ingestin de caloras), suplementada adems
con nutracuticos que incrementan la capacidad del sistema inmunitario y antioxidante (jugos antioxidantes ricos en xantonas y factores de transferencia), adems de
la inmunizacin convencional extendida (contra neumococo, influenza, virus del papiloma humano, etc.),
as como la adquisicin de hbitos saludables de vida
que incluyen el control del estrs, ejercicio aerbico,
combinado con periodos de reposo y la eliminacin de
vicios nocivos para la salud como tabaquismo, etilismo,
promiscuidad, etc., debido a que el envejecimiento y
otros procesos patolgicos autoinmunes disminuyen las
defensas, lo cual tambin puede observarse por el efecto
secundario del empleo de frmacos inmunosupresores
(corticosteroides y otros factores nocivos). Adems,
31
debe considerarse la gran cantidad de pacientes con sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA); en estos
pacientes ocurre un envejecimiento acelerado, adems
de que existe una mayor susceptibilidad a infecciones recurrentes, intoxicaciones, heridas no cicatrizantes, enfermedades autoinmunes y mayor incidencia de cncer.
Adems de la regeneracin de tejidos por terapia celular con clulas madre (medicina regenerativa de nivel
II), el paradigma adicional al que se refiere la medicina
antienvejecimiento implica reforzar el sistema inmunitario y las defensas antioxidantes. La importancia del
sistema inmunitario est implicada en que ste es el responsable de:
1. La defensa contra las enfermedades causadas por
virus, bacterias, parsitos y hongos.
2. El reconocimiento de las clulas propias del organismo.
3. La proteccin contra el cncer.
4. Los mecanismos reparadores de errores en las divisiones celulares.
En una primera aproximacin, la terapia celular (medicina regenerativa de nivel II) puede emplear liofilizados
derivados de extractos celulares del sistema reticuloendotelial fetal o clulas madre embrionarias previamente
dirigidas a la diferenciacin del sistema inmunohematolgico como revitalizador preventivo de los trastornos de mayor relevancia en la vejez. La mayora de los
cientficos reconocen que el mejor tratamiento contra el
cncer y las enfermedades crnicodegenerativas que
se presentan durante el envejecimiento consiste en mantener en ptimas condiciones el sistema inmunitario.
Las preparaciones especficas con liofilizados de
clulas para revitalizacin y clulas madre especficas
para regenerar el sistema inmunitario han demostrado
en el campo experimental un efecto regenerador de tejidos en general, acompaado de un efecto inmunoestimulante benfico. Estas teraputicas tambin han tenido aplicacin en los casos de retraso en el desarrollo
somtico o psquico en nios si se considera que no se
dispone de recursos teraputicos convencionales para
estas situaciones clnicas, los cuales ni siquiera existen
en los grandes centros hospitalarios y de investigacin.
Por lo tanto, se considera como alternativa vlida utilizar la medicina regenerativa y antienvejecimiento en
los casos de sndrome de Down, Turner, mongolismo,
oligofrenia y trastornos del crecimiento. Algunos investigadores como Feldman han reportado una evidente
aceleracin del desarrollo en la esfera fsica, intelectual
y social, mejora en el coeficiente de inteligencia, tono
muscular e interrelacin con los dems. De particular
inters fue comprobar que adems se disminuan las
32
enfermedades intercurrentes y que las medidas psicopedaggicas en los nios con retraso mental resultaban
tambin mucho ms eficaces. Los mejores resultados
estn en relacin directa con un inicio temprano y de
preferencia antes de la pubertad. Si bien en casos especficos el reemplazo hormonal puede estar indicado, no
debe emplearse como un paradigma de la medicina del
antienvejecimiento como frecuentemente se confunde;
as como los tratamientos alternativos y de medicina
ciruga esttica.
La estructuracin de un tratamiento de medicina regenerativa y antienvejecimiento requiere diagnstico y
planeacin mdica personalizada, pero en trminos
generales el procedimiento se enfocara en tratar al organismo enfermo o envejecido con clulas madre o extractos celulares fetales correspondientes de rganos sanos. Sin embargo, como es comn que un rgano afecte
a todo el sistema o aparato al que pertenece, se deben incluir varios tipos de clulas, elaborando un esquema individual para los requerimientos del paciente.
El protocolo de la SICETEM es el siguiente:
1. En principio se debe obtener un diagnstico clnico con base en una historia clnica completa,
complementada con mtodos de laboratorio y gabinete habituales, para determinar si el paciente es
apto para la terapia celular.
2. En seguida se elaborar un esquema de tratamiento individualizado segn los requerimientos y las
condiciones particulares del paciente.
3. Es norma que en una sola sesin se apliquen simultneamente 1 o 2 implantes o inyecciones diferentes bajo las ms estrictas normas de higiene
y asepsia.
4. Se debe buscar que el material que se aplique sea
lo menos doloroso; esto es posible, ya que cuando
se emplea la va parenteral por lo general se emplean productos biolgicos naturales cuya composicin corresponde al pH y osmolaridad de los tejidos y lquidos del organismo del paciente.
5. El paciente debe guardar reposo de 1 a 2 min en el
consultorio con evaluacin de sus signos vitales.
6. El paciente debe alimentarse con la dieta biomdica antienvejecimiento posterior a la terapia celular, ya que provee abundantes protenas, e instruye al paciente a evitar el consumo de grasas y
azcares, pues son irritantes y pueden afectar la
migracin celular.
7. El mdico entrega al paciente una serie de indicaciones por escrito para que las lleve a cabo despus
de la terapia celular.
(Captulo 1)
8. En algunos casos puede haber una ligera elevacin

de temperatura por unas horas o das; se llama fiebre de absorcin o crisis curativa y no representa
ningn riesgo y debe ser notificada al mdico.
9. En algunos tratamientos puede haber un ligero enrojecimiento (eritema) y dolor (inflamacin) alrededor de los sitio de regeneracin.
Las clulas madre que ingresan permiten suplementar
los tejidos envejecidos y estmulos inductores de regeneracin, ya que son el depsito natural del material gentico necesario que sustituir al material gentico perdido por enfermedad o por envejecimiento celular, y son
transportadas a los rganos afines por un principio llamado organotropismo. Los productos celulares sanos y
activos penetran en clulas de rganos deficientes o envejecidos que de este modo retoman sus tendencias normales reactivadas, ya que la replicacin celular peridica es parte vital de los seres vivos. Las clulas
organoespecficas se reparten y son asimiladas por los
rganos correspondientes en los lugares donde el tejido
est afectado, por un tropismo gentico (se demostr la
organoespecificidad con un marcaje de clulas con istopos radioactivos y por medios inmunolgicos).
Las clulas que no logran ser incorporadas a los tejidos son rodeadas por anticuerpos que las inactivan y
luego son eliminadas por el sistema inmunitario. Segn
lo expuesto, las fagocitadas por macrfagos adquieren
importancia en la medida en que el proceso favorece la
recepcin del material intracelular til para la revitalizacin y el aumento de la resistencia celular de las propias clulas envejecidas del paciente. Las clulas son
como microesferas o microliposomas naturales que al
ser digeridas por los leucocitos liberan elementos de la
medicina regenerativa de nivel I (enzimas, polipptidos, DNA, RNA y sustancias orgnicas bsicas), y son
trasladadas e incorporadas mediante vesculas a las clulas respectivas, o sea a sus homlogas. Recordando
los principios enunciados por la hiptesis de Snchez
Vzquez en lo que a herencia horizontal entre clulas se
refiere, en el laboratorio de los autores se ha podido observar mecanismo de transporte de DNA y RNA entre
una clula y otra.
Qu efectos puede sentir el paciente? Despus de la
terapia celular, generalmente suceden tres fases:
S Primera fase: ocurre en las primeras horas y das;
los elementos celulares activos son absorbidos en
la corriente sangunea e inducen mejora a corto
plazo que se desvanece en los das siguientes.
S Segunda fase: se denomina de silencio teraputico. Puede durar de 3 a 10 das despus del im-
plante, corresponde al periodo que requieren los

elementos celulares para la adaptacin e integracin a las clulas del organismo husped. En este
periodo el paciente usualmente no percibe mejora
aparente (aunque algunos la reportan desde periodos tempranos).
S Tercera fase: es el estado de revitalizacin o reactivacin de funciones; se inicia en 3 a 6 semanas
y dura de 4 a 12 meses. Durante este periodo el objetivo teraputico buscado es notorio, hay sobre
todo renovada vitalidad, capacidad funcional y
mayor mejora en las condiciones generales. La
reactivacin de la salud se manifiesta con aumento
del apetito, aumento de peso, desaparicin de la
debilidad, incremento de la capacidad fsica y
mental, un mejor estado de nimo. Cuando el problema es orgnico, es evidente la mejora de la
funcin de dichos rganos. El efecto final puede
y debe durar de varios meses a varios aos, dependiendo del autocuidado y de los estilos de vida
saludables. Es importante seguir las prescripciones de grageas, dieta y medicamentos que cada paciente necesita.
La pregunta obligada con respecto a la terapia celular
sera: Es efectiva en 100% de los casos? La experiencia
clnica actual de los autores es que s es efectiva, aunque
la proporcin en el porcentaje de mejora, regeneracin
y antienvejecimiento o rejuvenecimiento va a depender
del tratamiento temprano y oportuno en cada uno de los
pacientes, en la aplicacin continuada y sostenida de las
clulas madre, ya sean de origen embrionario o adultas,
ya que el envejecimiento se inicia desde el momento de
la concepcin. De qu depende el xito? Como con
todo tratamiento mdico, depende del diagnstico oportuno, temprano y correcto, de la indicacin teraputica,
pero sobre todo de la capacidad residual, fisiolgica,
bioqumica y anatmica del organismo enfermo, envejecido, con discapacidad funcional, para reaccionar de
manera positiva a un estmulo rejuvenecedor, revitalizador y reactivador. Desafortunadamente, en ciertos casos el cuerpo humano establece un balance negativo,
que rechaza sistemticamente los estmulos teraputicos de diversa ndole, lo que sobrepasa los lmites de la
intervencin mdica. Produce efectos nocivos o reacciones alrgicas? La vasta experiencia reportada internacionalmente no seala dao de ningn tipo ni reacciones alrgicas en los pacientes receptores. Actualmente
se considera como inofensivo e inocuo. El riesgo estriba
en personas que sin seguir las normas de produccin
correctas pueden transmitir alguna enfermedad de origen animal o producir una reaccin alrgica. En estos
33
casos el problema no radica en la terapia celular, sino en

las personas carentes de escrpulos, seriedad y honestidad que las ponen a la venta. De qu depende su prestigio? De su aplicacin durante ms de 50 aos de trabajos de ndole experimental clnica y de biologa celular
por miles de profesionales, discpulos del Dr. Niehans,
que han formado la Sociedad Internacional de Terapia
Celular con sede en Alemania. Sus tratamientos y publicaciones han sido autorizados y reconocidos por las
autoridades de salubridad en pases con tica mdica
muy elevada, como Suiza, Francia y Alemania, que no
slo la aprueban, sino que fomentan el desarrollo de esta
ciencia teraputica que requiere una gran preparacin
por quienes la aplican. Aquellos mdicos que la niegan
o la rechazan lo hacen porque la ignoran, pero sa es una
limitante de los hombres, no de la ciencia. Cmo ha podido extenderse fuera de Suiza? Fue el desarrollo de clulas congeladas y secas (criopreservacin y liofilizacin) lo que primero permiti a los mdicos hacer uso
de la terapia celular. Con estas preparaciones el mdico
es independiente del proceso quirrgico, y sus requisitos para obtener el material, las clulas, estn a su disposicin en cualquier momento. Las preparaciones de clulas congeladas se conservan por un periodo de
mxima eficiencia y seguridad de seis meses y las clulas liofilizadas no tienen caducidad, ya que son desecadas. Cul ser la actitud de su mdico tratante cuando
le pidan su opinin acerca de la terapia celular? Es muy
lgico que los pacientes pregunten a sus mdicos acerca
de este tipo de tratamientos; las respuestas sern variables y dependern del criterio y la calidad humana y profesional del mdico. Aqullos que hayan estudiado la
tcnica aun cuando la practiquen externarn en su mayora opiniones favorables. nicamente los que la desconocen o han tenido informacin vaga o de medios
poco confiables respondern (si son sinceros) que no
pueden opinar acerca de algo que desconocen, o bien al
basarse en su temor por reconocer la ignorancia, la rechazarn sistemticamente, llegando incluso a condenarla. Desafortunadamente, el cuerpo mdico en su
mayora est mal informado de la importancia, seriedad
y posibilidades de este mtodo de gran auge en Europa.
Debe considerarse adems que la geriatra en Mxico
est en sus inicios y eso en parte es la razn por la cual
existe un desconocimiento generalizado al respecto. Sin
embargo, el conformismo, la negacin, el rechazo sistemtico a lo que se ignora y las actitudes prepotentes de
desprecio no son actitudes cientficas que correspondan
a un buen mdico.
Para los mdicos deseosos de ampliar sus horizontes
existen artculos, libros y una serie de informacin a su
disposicin. El grupo pionero de cientficos y maestros
34
miembros del Cuerpo Mdico Militar del Ejrcito y

Fuerza Area Mexicanos, Dr. Gerardo Gonzlez Lpez,
Dr. D. Javier Snchez Gonzlez y Dr. Carlos Armando
Sosa Luna, tienen la esperanza de que con esta publicacin pionera se inicie la difusin y desarrollo de la terapia celular en Mxico con alcance internacional, para
(Captulo 1)
que ocupe su merecido lugar como herramienta cientfica disponible en la lucha por lograr la curacin de
mltiples enfermedades que hoy por hoy no tienen una
teraputica adecuada, con la esperanza de que el sufrimiento que la enfermedad y el envejecimiento, confieren no sea ms.
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Captulo
Medicina regenerativa
y biologa del desarrollo
INTRODUCCIN
fundamentalmente en las clulas epidrmicas, de la mucosa oral y del tracto respiratorio, clulas sanguneas,
pelo, uas, tejido muscular, piel y tejido seo. Los nuevos conocimientos sobre las clulas madre han abierto
una nueva era que ofrece al hombre la posibilidad de influir teraputicamente en la regeneracin de rganos y
tejidos. Uno de los campos de la medicina que ms expectativas ha levantado en los ltimos aos es la terapia
celular con clulas madre. El aislamiento de clulas madre embrionarias humanas, la aparente e inesperada potencialidad de las clulas madre adultas y el desarrollo
de la terapia gnica nos lleva a imaginar un futuro esperanzador para una importante cantidad de enfermedades
actualmente incurables. Existe otra subpoblacin de clulas con una capacidad limitada y circunscrita de autorrenovacin, las clulas en trnsito, intermedias entre las
clulas madre verdaderas y sus derivados diferenciados.
Los rganos reproductores masculinos del ser humano se clasifican en rganos reproductores internos y externos. Los internos comprenden: testculos, epiddimos,
conductos deferentes y las glndulas sexuales anexas
(glndulas bulbouretrales, vesculas seminales y la prstata). Los genitales externos comprenden el pene y el
escroto. El saco escrotal contiene los testculos, epiddimos y conductos deferentes. Es una bolsa recubierta de
piel con una cavidad revestida de mesotelio que se contina con la cavidad peritoneal a travs del conducto inguinal. Los testculos producen las clulas sexuales o
gametos (funcin exocrina) y los espermatozoides y la
hormona sexual masculina, la testosterona (funcin
endocrina), hormona responsable de la produccin de
espermatozoides, del crecimiento y funcin de los rganos sexuales secundarios y de los caracteres masculinos. Los testculos se localizan por fuera del abdomen,
Los seres vivos mantienen cierta capacidad de regeneracin. Entre los nuevos mtodos para mejorar las caractersticas y propagacin de las plantas estn las tcnicas de regeneracin de plantas in vitro, que incluyen la
organognesis y la embriognesis somtica, que da la
posibilidad de formar las llamadas semillas artificiales. En el campo de la zoologa tambin se ha observado la capacidad regenerativa de algunos animales, entre
ellos las planarias, las hidras, las estrellas de mar y los
crustceos. Muchos vertebrados han perdido, al menos
de manera significativa, la potencialidad regenerativa
de la mayor parte de sus tejidos y rganos. Sin embargo,
algunos han retenido una notable capacidad regenerativa, entre ellos los peces telesteos, los urodelos (salamandras y tritones) y otros tipos de anfibios.
Los quelonios, cocodrilos y serpientes han perdido
en general la capacidad de regenerar partes perdidas.
Los lagartos tienen la posibilidad de regenerar la cola.
Las guilas rejuvenecen cada 7 aos al cambiar su pico
y denudar todo su plumaje, que se regenera por completo; para ello construyen nidos sobre rocas o grandes alturas mientras pasa el tiempo que dura este proceso regenerativo y de antienvejecimiento. Los mamferos
tienen tambin limitaciones, ya que no pueden regenerar extremidades, rganos y tejidos de la misma forma
que lo hacen algunos animales inferiores. Sin embargo,
hay excepciones, entre ellas los ciervos, el delfn y algunos tipos de ratones, como los de la lnea MRL. El ser
humano expresa slo algunos procesos regenerativos fisiolgicos o ante algunas lesiones, que se manifiestan
37
38
en conjunto pesan unos 40 g y estn rodeados de una

cpsula de tejido conectivo, la tnica albugnea, recubierta en su parte externa por una capa de mesotelio que
se extiende hacia el interior del mediastino testicular
que diverge en tabiques radiales: los tabiques testiculares, que a su vez dividen el tejido glandular en unos 250
lobulillos testiculares de forma piramidal. Cada lobulillo contiene varios tbulos seminferos contorneados
(250 mm de dimetro y 50 cm de largo) y son la parte
productora de espermatozoides del testculo. El intersticio que rodea los tbulos seminferos contiene clulas
epitelioides, clulas intersticiales o de Leydig con funcin endocrina. Estn revestidos por un epitelio estratificado especializado productor de espermatozoides que
contiene clulas de sostn o de Sertoli. stas son cilndricas y se extienden desde la membrana basal hasta la
superficie luminal del epitelio: las clulas espermatognicas incluyen espermatogonias, espermatocitos primarios, espermatocitos secundarios, espermtides y espermatozoides. Los tbulos seminferos se continan cerca
del mediastino testicular en los tbulos rectos, que a su
vez forman un sistema laberntico de canales en el mediastino: la rete testis. Los tbulos seminferos estn
rodeados por una membrana basal y por tres o cuatro capas de clulas mioides. Por dentro de la membrana basal
estn revestidos por el epitelio productor de espermatozoides o seminfero que contiene dos tipos principales
de clulas: las de sostn y las espermatognicas, que se
dividen en cinco tipos: espermatogonias, espermatocitos primarios, espermatocitos secundarios, espermtides y espermatozoides. Las clulas de Sertoli junto con
las espermatogonias son las nicas que estn en contacto con la membrana basal. Son cilndricas, con numerosas prolongaciones laterales delgadas en forma de rbol
de Navidad y fagocitan el citoplasma excedente liberado por los espermatozoides al terminar la diferenciacin. Durante la proliferacin y diferenciacin de las
clulas espermatognicas se desplazan a lo largo de las
caras laterales de las clulas de Sertoli, hacia la superficie libre del epitelio. Las prolongaciones laterales estn
unidas mediante contactos oclusivos que forman la base
estructural de la barrera hematotesticular. Las clulas
de Sertoli tienen capacidad de producir estrgenos y
adems tienen la funcin de sostener mecnicamente y
proteger las clulas espermatognicas y de nutrirlas.
Tambin sintetizan la protena ligadora de andrgenos
(ABP) que fija la testosterona. Producen inhibina, que
frena la sntesis de la hormona foliculoestimulante
(FSH). Adems se encargan de la sntesis del factor de
regresin de Mller durante la vida fetal e intervienen
en la liberacin de los espermatozoides maduros. Las
clulas de Sertoli son estimuladas por la FSH y por la
(Captulo 2)
testosterona secretada por las clulas de Leydig en el intersticio. En el tejido intersticial ubicado entre los tbulos seminferos estn las clulas intersticiales o clulas
de Leydig, que representan la parte endocrina del testculo ya que sintetizan y secretan la hormona masculina
testosterona. Las clulas de Leydig se encuentran en
grupos pequeos muy irrigados por capilares; son activas en la diferenciacin inicial del feto masculino y
luego sufren un periodo de inactividad que comienza a
los 5 meses de vida fetal. La hormona luteinizante (LH)
estimula el desarrollo de las clulas de Leydig, su produccin y secrecin de testosterona al lquido intersticial, muy abundante en los testculos. En los testculos
de ratones adultos existen clulas madre multipotentes
capaces de originar todos los tipos celulares del organismo.
Los rganos sexuales femeninos se dividen en externos e internos. Los externos comprenden: monte de Venus, labios menores, labios mayores, glndulas vestibulares y cltoris. Los internos comprenden: ovarios,
trompas uterinas, tero y vagina. El tamao y la estructura microscpica de estos rganos cambian mucho con
la edad; son relativamente pequeos, permanecen en
reposo funcional hasta la pubertad en la cual tiene lugar
el crecimiento de la mama, cambios de la forma corporal, aparicin del vello pbico y axilar; estos cambios
culminan con la menarca. El primer flujo menstrual o
menarca tiene lugar a los 13 aos de edad aproximadamente; despus de ella, a lo largo de toda la vida reproductora los ovarios y el endometrio sufren cambios cclicos cada 28 das.
TESTCULOS
Las espermatogonias son el punto de partida de la espermatognesis, desde las espermatogonias ms tempranas
hasta los espermatozoides maduros. Las primeras clulas sexuales aparecen en la cuarta semana de la vida fetal
en la pared endodrmica del saco vitelino, desde donde
migran al primordio testicular. Antes de la pubertad se
encuentran en los tbulos seminferos en estado de reposo. En la pubertad comienzan a proliferar por divisiones meiticas para renovar de manera constante la poblacin de espermatogonias.
Hay dos tipos de espermatogonias:
1. Las espermatogonias A tienen el ncleo redondo
y uno o dos nucleolos localizados sobre la cara interna del nucleolema. Son clulas madre que sufren
Medicina regenerativa y biologa del desarrollo
mitosis. Algunas permaneces como tales y otras se

diferencian a espermatogonias B por mitosis.
2. Las espermatogonias B con ncleo redondo y un
solo nucleolo central. Despus de la ltima mitosis de las espermatogonias B, se diferencian a espermatocitos primarios.
Los espermatocitos primarios se desplazan en direccin
luminal y se encuentran en la capa celular ms cerca de
la luz. Entran en seguida en la primera divisin meitica, por lo que el nmero de 46 cromosomas de doble estructura (DNA 4n) se reduce a 23 cromosomas de doble
estructura (DNA 2n) del espermatocito secundario. La
profase de la primera divisin meitica es muy prolongada y se extiende durante unos 22 das. Los espermatocitos secundarios se forman a partir de los espermatocitos primarios, por la primera divisin meitica. Son
mucho ms pequeos que los espermatocitos primarios
y pasan rpidamente a la segunda divisin meitica, su
ncleo es redondo y contiene grumos de cromatina
gruesos. Los 23 cromosomas de doble estructura (DNA
2n) de estas clulas se reducen a 23 cromosomas de estructura sencilla (DNA 1n) en las espermtides y espermatozoides. Las espermtides aparecen despus de la
segunda divisin meitica a partir de los espermatocitos
secundarios y tienen un nmero haploide de cromosomas 23 (DNA 1n).
La espermatognesis comprende la espermacitognesis, que es el paso de espermatogonia a espermatocito
primario, y la espermiognesis o diferenciacin de una
espermtide recin formada a espermatozoide. La duracin de la espermatognesis en el hombre es de 74 das.
El espermatozoide maduro tiene 60 mm de longitud en
el humano. Su cabeza es aplanada, puntiaguda y mide
4.5 mm de largo por 3 mm de ancho por 1 mm de espesor.
El casquete acrosmico que cubre los dos tercios anteriores del ncleo contiene hialuronidasa, neurominidasa, fosfatasa cida y una proteasa similar a la tripsina llamada acrosina. Estas enzimas son necesarias para la
penetracin de la membrana pelcida del vulo. La cola
del espermatozoide est subdividida en cuello, pieza intermedia, pieza principal y pieza terminal. El cuello
contiene los centriolos y el origen de las fibras gruesas.
La pieza intermedia es de 7 mm de longitud y contiene
mitocondrias dispuestas en forma helicoidal alrededor
del complejo axonmico. La pieza principal mide unos
40 mm de longitud y la pieza terminal corresponde a los
ltimos 5 mm del flagelo, slo compuesta por el complejo axonmico. Los espermatozoides abandonan los tubos seminferos para incorporarse a:
1. La rete testis.
39
Despus, a los conductillos eferentes.

Luego pasan al epiddimo.
Se continan por el conducto deferente.
Posteriormente ingresan al conducto eyaculador.
Para continuar hacia la uretra prosttica, membranosa y peneana.
7. En la eyaculacin son depositados en las inmediaciones del canal cervical femenino para que se
produzca el proceso de fecundacin.
2.
3.
4.
5.
6.
La prstata es la glndula sexual accesoria ms grande

del hombre. Mide unos 2 x 3 x 4 cm de espesor, largo y
ancho respectivamente; pesa alrededor de 20 g. Se compone de unas 40 glndulas tubuloalveolares que se
vacan en unos 20 conductos excretores independientes;
a su vez stos desembocan en la uretra a ambos lados del
folculo seminal. Las glndulas estn incluidas en un
estroma compuesto en su mayor parte de clulas musculares lisas, separadas por hebras de tejido conectivo. El
parnquima de la prstata del adulto est dividido en
cuatro zonas anatmica y clnicamente distintas:
1. Zona perifrica: corresponde a la zona de glndulas prostticas principales y constituye 70% del tejido glandular de la prstata.
2. Zona central: contiene alrededor de 25% del tejido
glandular y es resistente tanto a los carcinomas
como a la inflamacin.
3. Zona transicional: contiene glndulas mucosas.
4. Zona periuretral: contiene glndulas mucosas y
submucosas.
La secrecin prosttica aporta de 20 a 30% del contenido seminal, un lquido lechoso muy fluido que contiene
cantidades importantes de fosfatasa cida prosttica, fibrinolisina, enzimas proteolticas, protenas, zinc, cido
ctrico y antgeno prosttico especfico. El semen contiene lquido alcalino y espermatozoides del testculo y
productos de secrecin del epiddimo, conducto deferente, prstata, vesculas seminales y glndulas bulbouretrales. El promedio del volumen del semen emitido
por eyaculacin es de 3 mL y cada mL contiene en promedio 100 millones de espermatozoides; de stos, cerca
de 20% son morfolgicamente anormales y 25 % carecen de movilidad.
En las semanas 3 a 4 del desarrollo prenatal es posible
reconocer a las clulas germinales primordiales (CGP)
o gonocitos, originadas de clulas endodrmicas de la
porcin posterior del saco vitelino, cerca de la alantoides, aunque se ha mencionado su origen ectodrmico y
su migracin posterior al endodermo del saco vitelino.
Las CGP son clulas grandes, de ncleo grande y nucleolo prominente, con reaccin positiva a fosfatasa
40
alcalina. Migran por movimientos ameboideos debido

a estmulos quimiotcticos a lo largo de la pared del saco
vitelino hacia las crestas urogenitales, procedentes del
mesodermo intermedio, para constituir los cordones sexuales primarios. La migracin de las CGP est regulada por gradientes de laminina y fibronectina. La fibronectina deja de expresarse en la membrana basal del
testculo adulto. Las CGP migratorias proliferan en respuesta a factores mitognicos como: factor inhibidor de
la leucemia y factor de crecimiento de los mastocitos.
El evento crucial y definitivo en la formacin del testculo a partir de una gnada bipotencial e indiferenciada
es la organizacin de los cordones sexuales (semana 6,
aproximadamente), que contienen los componentes celulares necesarios para su diferenciacin en testculo:
a. Cresta o epitelio germinal que formar las clulas
de Sertoli.
b. Mesnquima urogenital que originar las clulas
de Leydig, clulas mioides, fibroblastos, capilares
sanguneos y linfticos, y sustancia intercelular
del parnquima.
c. Clulas germinales primordiales, precursoras de
los espermatozoides.
Las CGP son clulas madre precursoras de los gametos
maduros; la fusin de stos produce un cigoto totipotente. Las clulas madre embrionarias de ratn pueden contribuir a la lnea germinal de ratones quimricos. Si se
inyectan clulas madre cultivadas de una raza de ratn
en el interior de un embrin normal (blastocisto) de otra
raza, dichas clulas madre podran dar origen a cualquier tipo de tejido del adulto. Los ratones en los que
hay tejidos procedentes de dos razas distintas se denominan quimeras, y en algunas quimeras las clulas reproductivas proceden de las clulas madre introducidas
en el blastocisto. Si se manipulan clulas madre por ingeniera gentica y se transfieren a un blastocisto, podrn obtenerse ratones quimeras en los que parte de los
tejidos estn alterados genticamente. Si las clulas
madre manipuladas contribuyen a la lnea germinal, el
rasgo gentico modificado en el ratn quimera se transmite a la descendencia, constituyndose entonces una
lnea de ratones transgnicos. Los ratones transgnicos,
incluidos los denominados K.O. (genticamente anulados, es decir, con un gen mutante introducido por recombinacin homloga), son actualmente una herramienta valiosa en biologa y en el diseo de modelos de
enfermedades humanas.
Para el final de la diferenciacin testicular aumenta
el nmero de CGP. Entre 1 000 y 2 000 CGP colonizan
las crestas genitales, en donde pierden su capacidad
(Captulo 2)
migratoria y se multiplican por mitosis hasta alcanzar

varios millones. Estas clulas se asocian con elementos
celulares originados por crecimiento del epitelio celmico para formar los cordones sexuales primarios. Al
trmino del segundo mes, los cordones penetran en el
mesnquima subyacente, se agrupan en la rete testis y
pierden contacto con el epitelio superficial. Durante la
vida fetal los cordones testiculares primitivos estn conformados por CGP dispersas separadas de la membrana
basal, en proliferacin entre las clulas de soporte precursoras de las clulas de Sertoli. Los gonocitos proliferan en la cresta genital durante la fase de migracin temprana; una vez que se rodean por clulas de Sertoli cesa
su divisin y permanecen quiescentes hasta la mitad del
periodo fetal. Las clulas de Sertoli de los cordones seminferos son ms numerosas y pequeas; adems, las
clulas de Sertoli fetales son insensibles a los andrgenos y no maduran. Entre las semanas 8 y 12 aparecen las
clulas intersticiales o de Leydig. Bajo la influencia de
la hormona gonadotropina corinica (HGC) y la hormona luteinizante (LH), las clulas de Leydig sintetizan
testosterona y androstenediona, responsables de la virilizacin. Despus de las semanas 17 a 18 las clulas de
Leydig experimentan una involucin gradual y slo reaparecen en la pubertad, cuando estimulan la espermatognesis. Ciertas protenas, como la hormona inhibidora
de los conductos de Mller y la inhibina, producidas por
la clula de Sertoli, inhiben la meiosis espermtica en
el feto.
La diferenciacin sexual se determina en el momento
de la fecundacin, ya que un cigoto XY est destinado
a ser varn. En el cromosoma Y se localiza un gen determinante del sexo masculino y se denomina factor de
diferenciacin testicular (TDF) o gen Sry (regin sexual del cromosoma Y), localizado en una pequea porcin del brazo corto, cercana al centrmero del cromosoma Y (Yp11.3). Este gen codifica una protena
nohistona de 223 aminocidos perteneciente a la familia de protenas que contienen una regin fijadora de
DNA muy conservada de 59 aminocidos llamada high
mobility group box. En 1993 se demostr que la protena
codificada por el Sry reconoce de manera especfica los
promotores de los genes de la hormona inhibidora de los
conductos de Mller y de la aromatasa, lo que confirma
que regula genes blanco de la cascada de diferenciacin
testicular normal. El desarrollo del testculo a partir de la
cresta genital est dirigido por el Sry y su expresin
induce a la gnada indiferenciada hacia la organognesis testicular.
Con el envejecimiento masculino los conductos seminferos involucionan gradualmente, de tal suerte que
entre los 50 y los 80 aos de edad la produccin de es-

permatozoides se reduce 30%. En el periodo senil, muchos de los conductos presentan atrofia extensa, con clulas de Sertoli pero ausencia de espermatogonias. Las
espermatogonias tipo A son las ms sensibles a la edad
avanzada y decrecen aproximadamente 65% entre la
tercera y la octava dcada de la vida. Las clulas de Leydig se reducen a la mitad hacia los 60 aos de edad. De
forma sorprendente y alentadora, la regeneracin que
ofrece la terapia celular con clulas madre a los varones
de edad avanzada es tan contundente que se ha observado recuperacin fisiolgica de la capacidad sexual y
reproductiva.
OVARIOS
Los ovarios miden de 2.5 a 5 cm de largo, de 1.5 a 3 cm

de ancho y de 0.6 a 1.5 cm de grueso; uno de sus bordes,
el hilio, est unido por el mesovario al ligamento ancho.
Estn recubiertos por el mesotelio peritoneal. Tienen la
funcin de producir gametos y de sintetizar hormonas
esteroideas como los estrgenos, que se encargan del
crecimiento y la maduracin de los rganos reproductores, as como de la acumulacin de tejido graso, y los progestgenos, que preparan al tero para el embarazo y a
las glndulas mamarias para la lactancia. Durante el ciclo
menstrual son de color rojo grisceo con surcos o cicatrices posteriores a rupturas de folculos. El ovario tiene
una corteza que rodea a la mdula. En el tejido conectivo
de la corteza estn incluidos los folculos que contienen
a las clulas sexuales o gametos, los ovocitos. Cuando un
folculo alcanza la madurez se rompe para dejar libre al
ovocito. La mdula est formada por tejido conectivo
laxo y por una masa de vasos sanguneos tortuosos, vas
linfticas y nerviosas. El ovario est recubierto por una
lmina continua de epitelio plano cuboideo, el epitelio
germinal, y por debajo del epitelio germinal hay una capa
de tejido conectivo denso, la tnica albugnea. Los folculos estn incluidos en el estroma de la corteza por
debajo de la tnica albugnea, contienen un nico ovocito y la capa de tejido circundante. De acuerdo con su
estado de madurez se clasifican en:
1. Folculos primordiales (35 mm): compuestos de
un nico ovocito y una capa de clulas foliculares
aplanadas, presentan en su citoplasma abundantes
mitocondrias y gotas de lpidos.
2. Folculos primarios (100 mm): crecen independientemente de las gonadotropinas y contienen al
41
ovocito y una capa de clulas foliculares. Estos folculos estn inmediatamente por debajo de la tnica albugnea. A medida que el ovocito se agranda, las clulas foliculares se hacen cbicas o
cilndricas bajas, y por divisiones mitticas dan
origen a un epitelio estratificado de clulas de la
granulosa. Entre el ovocito y las clulas granulosas de su alrededor se desarrolla un espacio donde
se acumula un material amorfo que envuelve a las
microvellosidades y se condensa poco a poco para
formar la zona pelcida, una capa glicoproteica.
La zona pelcida se considera producto de las clulas de la granulosa. Las clulas del estroma circundante se distribuyen en una capa concntrica
que forma la teca folicular.
3. Folculos secundarios (200 mm): se componen
del ovocito, la zona pelcida y las clulas de la granulosa circundantes, las cuales conforman el cmulo oforo. La teca se divide en teca interna
(muy vascularizada) y externa. Las clulas epitelioides contienen en su citoplasma gotas de lpido
necesarias para la sntesis de hormonas esteroides
(estrgenos) en el retculo endoplasmtico liso. El
folculo empieza a presentar una cavidad semilunar llena de lquido claro y viscoso, la cual forma
el antro folicular. Este lquido es rico en cido hialurnico, pero adems contiene un pptido pequeo llamado inhibidor de la maduracin ovoctica
que las clulas de la granulosa secretan hacia el
lquido antral y que en la fase dictioteno detiene al
ovocito.
4. Folculo terciario o maduro (de de Graaf) (15 a
20 mm): el ovocito junto con su zona pelcida y
la corona radiada se van liberando de su insercin
en el cmulo oforo en preparacin para la ovulacin. La teca del folculo alcanza su desarrollo
mximo en el folculo maduro. Las clulas de la
teca interna son las principales responsables de
elaborar los precursores esteroides de las hormonas sexuales femeninas, los estrgenos. La funcin endocrina de la teca interna est en concordancia con su rico plexo capilar. La teca externa no
parece tener ninguna funcin secretora.
En un principio el crecimiento de los folculos es independiente de FSH y LH. Durante el crecimiento de los
folculos tiene lugar el proceso de maduracin dependiente de gonadotropinas. Algunas clulas de la granulosa poseen receptores para FSH y de la teca interna poseen receptores para LH; al activarse interrumpen su
divisin y se diferencian en clulas productoras de hormonas esteroides. Las clulas de la teca interna son esti-
42
muladas por LH, para la sntesis del andrgeno androstenediona a partir de colesterol. El proceso de maduracin
del ovario se inicia en el embrin e incluye dos etapas
de diferenciacin: la de gnada bipotencial y la sexual
de clulas germinales. La diferenciacin de la gnada
bipotencial se refiere a la de los elementos somticos y
se manifiesta en el desarrollo de las clulas foliculares.
A diferencia del varn, los fenmenos finales de la maduracin de las clulas germinales slo se producen a
partir de la pubertad y hasta la menopausia. An no se
comprende la regulacin del inicio del dimorfismo
sexual, aunque se sugiere que en la mujer est predeterminada de manera autnoma. Las influencias hormonales del eje hipotlamohipfisisovario se manifiestan
por primera vez en la pubertad. Las hormonas foliculoestimulante (FSH) y luteinizante (LH) aparecen a los
dos meses de gestacin, antes de que la diferenciacin
celular hipofisaria concluya. El ovario est constituido
por clulas somticas y germinales. Las clulas somticas se generan a partir del mesodermo intermedio o urogenital. Las crestas genitales de la pared dorsal del
embrin producen una sustancia quimiotctica, el telofern, que atrae a las clulas sexuales primitivas. La formacin de las crestas genitales requiere la funcin de los
genes: WT1 y SF1 (factor esteroidognico1). Las
clulas del epitelio gonadal se multiplican y forman los
cordones sexuales primarios que se proyectan hacia la
regin medular de la gnada en desarrollo. Las CGP
proceden de la pared caudal del saco vitelino y alantoides, migran hacia la cresta gonadal con movimientos
ameboides a razn de 50 mm/h. Son atradas hacia las
crestas gonadales por factores desconocidos entre los
cuales se han identificado el factor de crecimiento fibroblstico (FGF) y el factor de crecimiento transformante
beta uno (TGFb1). Estas clulas inducen la diferenciacin, desarrollo y organizacin del ovario, y pierden sus
caractersticas migratorias al llegar a la cresta gonadal.
Entre las semanas 7 y 8, las ovogonias de las primeras
generaciones alcanzan la regin medular y se rodean de
clulas procedentes del epitelio celmico en el interior
de los cordones sexuales primarios. Las generaciones
subsecuentes de ovogonias permanecen en la regin
cortical en el interior de los cordones sexuales secundarios, donde se multiplican activamente, pierden la organizacin cordonal y se agrupan en nidos de ovogonias.
Los periodos de crecimiento y maduracin del ovocito
se dividen en tres fases: fetal, prenatal y posnatal, cada
una constituida por lapsos de actividad y quiescencia. El
periodo de multiplicacin slo tiene lugar en la etapa
prenatal. En la etapa fetal inmediata o temprana (segundo a quinto mes) las ovogonias se reproducen por mitosis (periodo de multiplicacin), lo que provoca que su
(Captulo 2)
poblacin aumente de unos cuantos miles a 7 millones;

muchas de estas clulas degeneran y se atrofian. Hacia
el quinto mes, las ovogonias inician su periodo de crecimiento, en el que los ovocitos primarios alcanzan un
dimetro aproximado de 25 mm y se rodean de clulas
planas del epitelio celmico denominadas clulas foliculares o granulosas; la combinacin de los dos tipos
de clulas constituye el folculo primordial. Las clulas
germinales inician el periodo de maduracin en grupos
debido a la presencia de puentes citoplsmicos que las
conectan entre s y les confieren una organizacin sincicial. La formacin de folculos unilaminares y su organizacin final se produce por desaparicin de los puentes intercelulares al final de la profase de la meiosis I;
cada ovocito se rodea de clulas foliculares; los componentes celulares y extracelulares del estroma ovrico
crecen alrededor de los ovocitos, circundan y aslan los
folculos primarios que les confieren forma esferoidal.
En el ser humano, las ovogonias continan proliferando hasta el tercer mes de desarrollo fetal. Despus se
inicia la replicacin de DNA y la ovogonia entra en
meiosis (ovocitos primarios, con DNA 4n). Entre el tercero y el sptimo mes de gestacin se encuentran ovogonias en proliferacin junto con ovocitos primarios en
el ovario fetal. Durante este periodo de desarrollo los
ovocitos estn en diferentes fases de la profase meitica
(leptoteno, cigoteno y paquiteno temprano). Despus
del sptimo mes un pequeo grupo de ovocitos alcanza
el paquiteno tardo y el diploteno temprano. La meiosis
no contina y los ovocitos son bloqueados en diploteno
tardo, y simultneamente algunos involucionan. Los
cambios meiticos se producen slo en el ncleo; la organizacin del citoplasma permanece inalterada. Existen algunas evidencias que sugieren que la red embrionaria a nivel mesonfrico secreta posiblemente un
factor difusible que desencadena el proceso de meiosis
y acta sobre las clulas germinales femeninas. El primer bloqueo meitico se debe al efecto obstructivo del
epitelio folicular que circunda los ovocitos durante las
etapas tardas del periodo fetal; provoca que el periodo
de maduracin del ovocito se extienda slo hasta la
etapa de diploteno o dictioteno de profase I. Al final de
la proliferacin mittica, la ovogonia entra en profase
de meiosis I y simultneamente algunas involucionan.
En el feto femenino la meiosis se inicia en el cuarto mes.
Al nacimiento existen en ambos ovarios 700 000 folculos, de los cuales persisten 40 000 en la pubertad. Durante las primeras etapas de la embriognesis, hasta el
estadio de mrula, ambos cromosomas X son eucromticos y activos. La inactivacin de un cromosoma X
sucede en forma heterognea y se inicia a partir de una
regin cromosmica especfica denominada centro de
inactivacin (XIC) (banda Xq13), sin la cual el embrin

muere. El locus XIST que transcribe el alelo localizado
en el cromosoma X inactivo codifica para un RNA que
se retiene en el ncleo y rodea al cromosoma X inactivo.
La inactivacin se observa primero en trofoblasto, despus en epiblasto y finalmente en la masa celular interna. Inicialmente este proceso no se produce al azar, ocurre de preferencia en el X de origen paterno en las etapas
de blastocisto temprano. La inactivacin en clulas que
originan el embrin ocurre ms tarde (blastocisto tardo); en stas el bloqueo es aleatorio y se establece un
patrn permanente en clulas somticas, es decir, una
vez inactivado el X materno o paterno en una clula,
este mismo cromosoma se inactivar en las clulas descendientes. Sin embargo, en el cromosoma X inactivo,
el extremo distal del brazo corto (Xp22) permanece
activo y es esencial para un desarrollo fenotpico normal; adems existen genes que escapan a la inactivacin
y estn situados a lo largo del cromosoma X, aunque la
mayora se localizan en regiones seudoautosmicas y
en Xp11.
Esta distribucin indica que la inactivacin es un fenmeno regional, donde bloques enteros de genes estn
regulados de manera coordinada. Varios de estos genes
tienen un homlogo funcional en el cromosoma Y. Posiblemente la falta de inactivacin en mujeres asegura la
expresin gnica similar en varones y mujeres; a este
grupo pertenecen los genes localizados en la regin seudoautosmica Xp (PAR1). Para la maduracin ovrica
definitiva es necesaria la presencia de dos cromosomas
X normales. Esto se evidencia en los casos de sndrome
de Turner (45XO) y en las disgenesias gonadales puras
(46XX), en los cuales los folculos primordiales se identifican en la infancia temprana, aunque disminuyen
rpidamente hasta agotarse. El tejido germinal es sustituido gradualmente por tejido conectivo en la pubertad,
originando un remanente ovrico sin folculos y sin actividad endocrina.
Ovulacin
La ovulacin es el proceso por el cual el ovocito secundario es liberado del folculo de de Graaf. Las causas de
la ovulacin son las siguientes:
1. Aumento del volumen y de la presin del lquido
folicular.
2. Protelisis enzimtica de la pared folicular por
plasmingeno activado y colagenasa.
3. Depsito de glicosaminoglicanos que van conformando la zona pelcida.
43
4. Contraccin de la teca externa provocada por las

prostaglandinas que el ovocito libera.
Antes de la ovulacin el flujo sanguneo se detiene en
la superficie ovrica; todo esto forma un montculo en
la superficie que se conoce como estigma. Por ltimo se
rompe el estigma y el lquido folicular fluye dentro de
la cavidad junto con el ovocito y la corona radiada. La
induccin de la ovulacin se debe a una importante liberacin de LH. Con la ovulacin contina la divisin y
de nuevo se detiene en la metafase de la segunda divisin meitica; slo en caso de que el espermatozoide fecunde al ovocito se contina con la divisin. El hipotlamo (ncleos supraptico y paraventricular), a travs
de la hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH),
controla la funcin de adenohipfisis (clulas basfilas)
para la sntesis de hormonas foliculoestimulante (FSH)
y luteinizante (LH) que actan sobre varios folculos
primordiales. Las clulas foliculares poseen receptores
para FSH y las clulas tecales, para LH; ambos tipos inician una serie de cambios citolgicos que concluyen en
la mayora de los casos con la maduracin de un solo
folculo. El crecimiento folicular hasta la formacin de
cuatro capas de clulas granulosas es independiente del
control hormonal; a partir de esta etapa, la maduracin
folicular no progresa sin la accin de FSH y LH, necesarias para asegurar la sntesis adecuada de esteroides. La
zona pelcida es una red de protenas sintetizadas y
secretadas por el ovocito para cubrirse a s mismo. En
humanos la zona pelcida est compuesta de tres tipos
de glicoprotenas (ZP1, ZP2 y ZP3). La ZP2 y la ZP3
estn involucradas en el proceso de fertilizacin. La cabeza del espermatozoide se une al oligosacrido O del
ZP3 mediante la enzima galactosiltransferasa b 14 localizada en la cabeza espermtica, y finalmente al oligosacrido N del ZP3, los cuales favorecen que el espermatozoide penetre la zona pelcida. Despus de la
penetracin del espermatozoide, la zona pelcida modifica sus protenas y se vuelve inpermeable a la penetracin espermtica.
La ovulacin constituye el trmino de la fase folicular. Las clulas del folculo roto, los fibroblastos de la
teca interna y los capilares se transforman por proliferacin, vascularizacin y acumulacin de lpidos en
cuerpo lteo, que sobrevive entre 14 " 2 das en condiciones normales, excepto en el embarazo, en el cual permanece por espacio de tres meses. Existen dos tipos de
clulas en el cuerpo amarillo: las clulas grandes de procedencia tecal, que aseguran la secrecin bsica de progesterona los primeros das, y que al poco tiempo degeneran debido a la saturacin de sus receptores a LH, y
las clulas pequeas sensibles a hormona gonadotropi-
44
na corinica (HCG), que aseguran la secrecin de progesterona en caso de embarazo. Este periodo se conoce
como fase lutenica y dura unos 14 das. Hacia la mitad
de esta fase, la secrecin de LH declina, el cuerpo amarillo involuciona para transformase en cuerpo blanco y
aumenta la secrecin de prostaglandinas y citocinas en
el estroma endometrial, lo que provoca cambios degenerativos en las glndulas endometriales, estroma y vasos uterinos, que progresan hasta necrosis y sangrado.
En caso de haber fecundacin el cuerpo lteo crece hasta alcanzar de 2 a 3 cm y mantiene la actividad secretora
durante el primer trimestre del embarazo (cuerpo lteo
del embarazo), antes de iniciar la transformacin en
cuerpo albicans.
tero
Se ubica en el centro de la cavidad pelviana y termina
en la vagina, es un rgano hueco de forma de pera y
gruesas paredes, pesa de 40 a 50 g y mide 8 x 5 x 2.5 cm.
Las partes que lo constituyen son:
1. Cuerpo: representa dos tercios y una parte es ms
angosta y cilndrica.
2. Fondo: comprende la porcin superior en forma
de cpula.
3. Cuello: conforma el tercio restante.
La pared se compone de tres capas:
1. El endometrio, que es la mucosa del tero.
2. El miometrio, que es la capa muscular.
3. El perimetrio, que en su mayor parte es peritoneo.
El endometrio se subdivide en un estrato basal y uno
funcional; este ltimo es el que se desprende en cada
menstruacin.
La capa basal genera una nueva capa funcional en el
siguiente ciclo. Las modificaciones histolgicas del endometrio durante el ciclo menstrual se dividen en tres
fases:
1. Fase folicular o proliferativa: ocurre el crecimiento folicular del ovario y la secrecin de estrgenos. Crece el espesor del endometrio hasta mediar 3 mm.
2. Fase lutenica o secretora: el endometrio crece
de espesor hasta mediar de 6 a 7 mm debido a la
secrecin de progesterona (y estrgenos) proveniente del cuerpo lteo. En esta etapa las glndulas
adquieren un aspecto aserrado por el edema.
(Captulo 2)
3. Fase de la menstruacin: corresponde al desprendimiento de la capa funcional del endometrio;

despus de un da de periodos definidos de isquemia se produce la destruccin de las paredes de las
arterias espiraladas y la sangre y los restos endometriales necrticos son eliminados por la vagina.
La regin del endocrvix tiene de 3 a 5 mm de espesor
y forma pliegues; el epitelio es cilndrico alto compuesto por clulas secretoras y algunas clulas ciliadas,
se transforma en cilndrico alto y produce mucina. La
secrecin es muy viscosa, pero hacia el momento de la
ovulacin el moco cervical se licua, es ms fluido y
puede ser penetrado con facilidad por los espermatozoides. La mucosa de la porcin vaginal o exocrvix es lisa
y est revestida de epitelio plano estratificado con clulas ricas en glucgeno.
En el embrin mamfero, la formacin de los linajes
extraembrionarios, el trofoectodermo y endodermo primitivo, precede a la diferenciacin de las clulas que
formarn al feto. Las clulas del endodermo primitivo
dan lugar a las capas del endodermo del saco vitelino,
mientras que las descendientes del trofoectodermo formarn la porcin del trofoblasto de la placenta. Las clulas madre embrionarias se multiplican por divisin
celular asimtrica y simtrica segn el entorno y el
momento del desarrollo en el embrin. En las clulas
pluripotentes el factor de transcripcin Oct 3/4 es un
regulador restringido a los embriones tempranos, pertenece a la familia de POU germinal, y a las clulas del
carcinoma embrionario, la clula germinal embrionaria
y las clulas madre embrionarias. La expresin in vivo
de Oct 3/4 es esencial para el desarrollo inicial de la
capacidad pluripotencial en la masa interna. Si la expresin de Oct 3/4 se elimina en las clulas madre embrionarias, la renovacin cesa y se dispara un proceso poco
ortodoxo de diferenciacin. En vez de formar los derivados embrionarios normales de la clula madre, endodermo y mesodermo, las clulas se diferencian en trofoblasto. Parece que esta restriccin de desarrollo por Oct
3/4 puede ser necesaria para la manifestacin pluripotencial. De esta manera, Oct 3/4 acta en parte como
control que evita la diferenciacin celular en trofoblasto.
La placenta es un rgano temporal que tiene por funcin la nutricin del embrin y del feto durante el embarazo; se encuentra slo en mamferos. Los tabiques placentarios dividen la placenta en 15 a 20 lobulillos o
cotiledones, y cada cotiledn tiene 2 o 3 vellosidades
con sus ramificaciones. Hacia el cuarto mes la placenta
se compone de dos partes:
1. La parte fetal incluye el corion frondoso y la placa
corinica.

2. La parte materna incluye la decidua basal comprimida por la placa de la decidua.
La placenta madura es un discoide y tiene un dimetro
de unos 20 cm y un espesor central de alrededor de 2.5
cm. El peso promedio es de 500 g. Se observan de 15 a
20 cotiledones cubiertos por una delgada capa de decidua basal.
La decidua se forma por accin de los estrgenos y
progesterona, contiene abundante glucgeno, se elimina en el parto y se compone de tres regiones:
1. Decidua basal: capa compacta de clulas grandes
fijada a la placa corinica, que se encuentra por
debajo del sitio de implantacin y que representa
la parte materna de la placenta.
2. Decidua capsular: cubre el polo abembrionario.
3. Decidua parietal: incluye el resto de la mucosa del
cuerpo uterino.
La membrana placentaria es el tejido fetal que separa la
sangre materna de la fetal. Las vellosidades corinicas
terciarias tienen un ncleo de tejido conectivo vascularizado recubierto de trofoblasto en su parte externa,
hacia el espacio intervelloso. El trofoblasto que recubre
las vellosidades se compone de sincitiotrofoblasto y citotrofoblasto. La membrana placentaria se compone, en
consecuencia, de seis capas:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Sincitiotrofoblasto.
Citotrofoblasto.
Membrana basal subyacente.
Tejido conectivo del ncleo de la vellosidad.
Membrana basal alrededor del capilar fetal.
Endotelio del capilar.
La placenta ejerce las funciones de respiracin, nutricin, excrecin e inmunolgica para el feto. Sintetiza
colesterol, cidos grasos y glucgeno, sobre todo en las
etapas tempranas del embarazo; el intercambio de sustancias a travs de la placenta tiene lugar, casi con exclusividad, por los mismos mecanismos de la absorcin
que existe en el intestino delgado, es decir, difusin simple, difusin facilitada, transporte activo y endocitosis.
El sincitiotrofoblasto produce las hormonas placentarias, aunque la progesterona puede ser sintetizada por
el citotrofoblasto. La glucoprotena GCH en estado purificado tiene actividad biolgica indistinguible de la
accin de la LH. La somatomamotrofina corinica
humana (HCS) o lactgeno placentario humano
(HPL) tiene efecto lactgeno y estimulante sobre el crecimiento, ya que est muy relacionada con la hormona
45
de crecimiento, inhibe la insulina de la madre y aumenta

la glucosa en sangre. La progesterona es producida por
la placenta y es necesaria para mantener el embarazo;
hacia fines del cuarto mes se sintetiza en cantidades suficientes para ejercer tal efecto, momento en el cual disminuyen las funciones del cuerpo lteo de la gestacin.
Los estrgenos son producidos en cantidad creciente
durante el embarazo, para alcanzar un nivel mximo
poco antes del parto, cuando se observa una brusca cada de la produccin estrognica placentaria. Los estrgenos son muy importantes para la regulacin endocrina de la implantacin, modifican las mamas en el
embarazo y su disminucin brusca en el parto induce un
fuerte aumento en la secrecin de prolactina.
GLNDULAS MAMARIAS
La glndula mamaria (del griego mastos y del latn

mamma) es un cuerpo glandular tubuloacinar compuesto, ubicado entre abundante grasa y tejido conectivo,
que se origina a partir de la sexta semana de vida embrionaria. En la mujer, la glndula mamaria alcanza su
completo desarrollo en la pubertad y en relacin con el
embarazo. Se extienden en sentido vertical de la segunda a la sexta costilla y en sentido horizontal de la lnea
paraesternal a la lnea axilar media, con una prolongacin en la parte superoexterna, llamada cola, que llega a la axila a travs de un agujero de la fascia axilar
conocido como foramen de Langer. En el hombre permanece atrfica durante toda la vida.
Las glndulas mamarias son glndulas sudorparas
apocrinas modificadas, de situacin subcutnea, que estn colocadas en la regin anterior del trax a ambos lados del esternn; en la vida intrauterina se forman de las
lneas mamarias desde la axila hasta la regin inguinal.
Hacia la mitad de la vida fetal se forman 20 botones
secundarios y antes del nacimiento se ramifican un par
de veces. Cada uno representa el primordio de un lbulo
mamario de tejido conectivo laxo, que rodea un conducto y sus ramificaciones. Al nacer, las mamas son de
mayor tamao que en la primera infancia y la secrecin
papilar recibe la denominacin de leche de brujas; esto
se debe a estrgenos producidos por la placenta. Los
verdaderos alveolos secretores se desarrollan hasta el
embarazo.
Los lbulos estn separados de manera incompleta
por tejido conectivo interlobular denso y grasa; cada
lbulo contiene una glndula independiente con un conducto galactforo con desembocadura propia en la papi-
46
la. El conducto galactforo est revestido de epitelio de

dos capas con clulas basales cbicas y superficiales
cilndricas. En la desembocadura el epitelio se transforma en escamoso, a nivel de la areola el conducto se ensancha y forma el seno lactfero que sirve como reservorio de leche; la abertura sobre la papila mide 0.5 mm
de dimetro y se distingue a simple vista.
Entre los espacios de las porciones parenquimatosas
hay tejido graso, que confiere su redondez al rgano.
Las ramas de los conductos galactforos forman conductos interlobulares revestidos de epitelio cilndrico
simple; este epitelio se transforma en cbico en los conductos excretores intralobulares ms pequeos. Entre el
epitelio y la membrana basal se encuentran las clulas
mioepiteliales (corresponden a las clulas mioepiteliales de las glndulas sudorparas y salivales); las ramificaciones dicotmicas del conducto galactforo estn
rodeadas de tejido conectivo laxo muy celular sin grasa.
Cada lbulo se compone de numerosos lobulillos que
reciben un nico conducto terminal, el cual se ramifica
en forma irregular en conductillos intralobulares. El
conducto terminal con el lobulillo correspondiente representa la unidad funcional de la mama o unidad ductolobulillar terminal (unidad lobulillar ductal), que
mide menos de 1 mm en la mama en reposo y est revestido de dos tipos de clulas: la epitelial dispuesta hacia
la luz y las clulas mioepiteliales.
Durante la gestacin ocurre una serie de alteraciones
hormonales significativas. El cuerpo lteo y la placenta
producen grandes cantidades de estrgenos y progesterona. La secrecin de lactgeno placentario humano y
la somatotropina corinica humana secretadas por la
placenta, asociadas a grandes cantidades de estrgenos
y progesterona, producen aumento e induccin de la actividad secretora de la mama. El efecto ms significativo se observa en los lbulos, el nmero de acinos se aumenta y conforme avanza el embarazo se acumula
material secretor y gotas de grasa en las clulas epiteliales, las clulas mioepiteliales se atenan y el estroma
interlobulillar se reduce por la expansin del lbulo. En
la segunda mitad del embarazo, los alveolos se ensanchan y adquieren luz; contienen una secrecin eosinfila rica en protenas: el calostro.
En el ciclo secretor las luces alveolares se llenan de
leche; el mecanismo de secrecin es distinto para las
protenas y las grasas. Las protenas de la leche y la IgA
se sintetizan en el RER y se empaquetan en el aparato
de Golgi en vesculas redondas, que se liberan del pice
de la clula por exocitosis, es decir, por secrecin merocrina. La grasa de la leche es sintetizada en el REL y
aparece como pequeas gotas de lpido cerca de esa estructura. Las gotas migran hacia la zona apical y se fu-
(Captulo 2)
sionan para formar gotas ms grandes; vacuolas lipdicas visibles con el microscopio ptico son secretadas
por secrecin apocrina. El inicio de la secrecin de
leche se debe a la secrecin de prolactina por la pars distalis hipofisaria.
El brusco aumento en la secrecin de la leche despus del parto se debe al descenso de la concentracin
plasmtica de estrgenos (que contrarrestan los efectos
de la prolactina). El mantenimiento de la secrecin de
leche depende de la continua accin de prolactina sobre las clulas glandulares. La prolactina es secretada en
mayor cantidad durante la lactancia porque la estimulacin sensitiva del pezn por la succin del lactante desencadena una gran secrecin de esta hormona. El vaciamiento de la leche de los alveolos ocurre por el reflejo
de bajada de la leche o de eyeccin lctea por la oxitocina liberada por la neurohipfisis; esta hormona induce la contraccin de las clulas mioepiteliales. Entre
las succiones se acumula leche en los alveolos y en los
conductos excretores. La prolactina inhibe la ovulacin
al mantener niveles muy bajos de estrgenos y progesterona, ya que inhibe la secrecin de la hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH). Cuando finaliza la
lactancia, la produccin de leche termina muy pronto,
dado que se interrumpe la estimulacin de la secrecin
de prolactina por reflejo neurohormonal. Las clulas
epiteliales degeneran y muestran intensa actividad autofagoctica. Los macrfagos del tejido conectivo circundante fagocitan estas clulas degeneradas y paulatinamente disminuye el tejido glandular, hasta quedar
reducido a unos escasos conductillos en cada lobulillo.
Sin embargo, despus del embarazo la glndula siempre
queda ms desarrollada. Las mamas reciben la influencia de las modificaciones de los niveles hormonales
ovricos durante cada ciclo menstrual. Las modificaciones hormonales en la menopausia causan la regresin o
involucin de los componentes glandulares de la mama
y su reemplazo por tejido adiposo y tejido conectivo. La
involucin comienza en la periferia, con atrofia y degradacin de los tejidos glandulares, e incorpora porciones
cada vez ms centrales del parnquima. En la edad avanzada el tejido adiposo desaparece por completo.
Embriognesis
Es durante el periodo embrionario y el desarrollo fetal
cuando el ndice de la produccin de nuevas clulas aumenta en cantidad en comparacin con el tamao de
ellas y del organismo. El cigoto formado tras la fecundacin de un vulo por un espermatozoide es una clula
capaz de generar un nuevo individuo completo. Se trata,
pues, de una clula totipotente capaz de producir un espcimen completo con todos sus tejidos. En la fertilizacin se fusionan el ovocito y el espermatozoide. Durante esta etapa se llevan a cabo varios procesos:
a. Penetracin de la corona radiada por los espermatozoides (capa ms externa del complejo ovular)
mediante la accin de enzimas (hialuronidasa,
proteinasa cida, acrosina, arilaminidasa, arilsulfatasa, colagenasa, esterasa, fosfolipasa, galactosidasa, glucuronidasa, neuraminidasa, proacrosina, etc.) y los movimientos flagelares activos de
los espermatozoides.
b. Anclaje a la zona pelcida y su penetracin mediante la participacin de las glucoprotenas ZP1,
ZP2 y ZP3. ZP2 y ZP3 polimerizan en filamentos
largos y se unen a intervalos mediante puentes cruzados de ZP1. Los espermatozoides se unen
mediante la membrana plasmtica de sus cabezas
a las molculas ZP3 (O ligandos oligosacridos). Este fenmeno inicia la reaccin acrosmica
y la liberacin de enzimas participantes.
c. Reaccin acrosmica, paso masivo de Ca++ a travs de la membrana plasmtica de la cabeza del espermatozoide, entrada de Na+ y salida de H+, elevacin del pH intracelular. En el momento de
hacer contacto los gametos, el espermatozoide se
une por la regin ecuatorial de la cabeza. Las molculas de la membrana plasmtica del espermatozoide se ligan a integrina alfa 6 beta 1 de la superficie del vulo. Las membranas plasmticas de
ambas clulas establecen continuidad, la cabeza y
la pieza intermedia del espermatozoide se introducen en el vulo. Una vez que ha entrado el espermatozoide, el citoplasma inicia la reaccin cortical, que consiste en cambios bioqumicos y
estructurales en membrana celular, citoplasma y
ncleo del ovocito.
d. Bloqueo rpido de la polispermia. Despolarizacin
elctrica de la membrana plasmtica del vulo.
e. Bloqueo lento de la polispermia. Propagacin de
una oleada de Ca++ a partir del sitio de unin del
espermatozoide. Entre los cambios citoplsmicos
est el aumento de densidad en la periferia del
ovocito debido a exocitosis de grnulos citoplsmicos (enzimas hidrolticas y polisacridos) hacia
el espacio perivitelino. Esta sustancia no es degradada por las enzimas acrosmicas del espermatozoide, impide la polispermia y constituye la membrana de fertilizacin. Los productos secretorios
de los grnulos corticales se han asociado con la
47
hidrlisis de las molculas ZP3. Otras reacciones

del ovocito que participan en la fertilizacin son:
secrecin de aglutininas, que fijan los espermatozoides que no participaron en la fecundacin. Finalmente, el proncleo masculino se descondensa, el ovocito termina la meiosis II y libera el
segundo cuerpo polar; los proncleos se fusionan
(singamia) y se restablece el nmero diploide de
cromosomas. Los centrolos introducidos por el
espermatozoide divergirn hacia los polos de la
clula y se iniciar la segmentacin; la cola, las
mitocondrias y dems componentes del espermatozoide sern absorbidos y eliminados por el ovocito. El DNA mitocondrial proviene exclusivamente del ovocito. Aumenta bruscamente el
metabolismo y se inicia la fase de segmentacin.
En esta segmentacin se observa la divisin mittica sucesiva del cigoto sin crecimiento celular
durante la interfase. A causa de represin proteica,
las clulas resultantes son menores que la clula
materna y el embrin en conjunto no supera el
tamao de la clula inicial (cigoto). La segmentacin contina hasta que se restablece la correlacin del ncleo y el citoplasma caracterstica de la
especie. Despus se reactiva la sntesis de protenas. Entre los das primero y cuarto del desarrollo embrionario, la clula original va dividindose
en varias clulas ms. Durante las primeras divisiones el embrin es una esfera compacta (mrula).
Cada una de estas clulas se separa del resto y es
capaz de producir un individuo completo; por ello,
son tambin clulas totipotentes. La primera divisin en el humano se realiza al cabo de 24 a 30 h.
El destino prospectivo de las clulas no est totalmente determinado. La blastulacin se presenta a
partir de las primeras divisiones donde se forman
dos tipos de blastmeras: oscuras y claras. Las claras se segmentan con mayor rapidez para situarse
alrededor de las oscuras. Las clulas claras originan el trofoblasto; las oscuras, el embrioblasto y
dems rganos extraembrionarios.
A partir del cuarto da comienza una primera especializacin: en el desarrollo embrionario humano se produce
un blastocisto. El blastocisto est formando por dos tipos de clulas y una gran cavidad interior:
S Capa externa: forma la placenta y las envolturas
embrionarias con una capa superficial que dar
origen al trofoblasto.
S Masa celular interna: formar todos los tejidos
del cuerpo humano. Se denomina embrioblasto.
48
Las clulas madre de un blastocisto ya no son totipotentes, puesto que una sola de estas clulas ya no es capaz
de generar un individuo completo. Las clulas de la
masa celular interna del blastocisto son pluripotentes
(del latn plures, que significa muchos o varios). Sin
embargo, aunque las clulas de la masa celular interna
del blastocisto son clulas multipotentes, no son en s
mismas clulas madre dentro del embrin, porque no se
mantienen indefinidamente como tales in vivo, sino que
se diferencian sucesivamente en los diversos tipos celulares durante la fase intrauterina. Lo que ocurre es que
cuando se extraen del embrin y se cultivan in vitro bajo
ciertas condiciones, se convierten en clulas inmortales dotadas de esas dos propiedades, la autorrenovacin y la pluripotencia. Es importante destacar que para
que una clula madre pueda considerarse como pluripotente tiene que cumplir las siguientes condiciones:
1. Una nica clula debe ser capaz de diferenciarse
de progenitores especializados procedentes de
cualquier capa embrionaria.
2. Demostrar la funcionalidad in vitro e in vivo de las
clulas en las que se ha diferenciado. In vivo la
multipotencia se manifiesta cuando al incorporar
clulas madre en blastocistos, stas pueden formar
cualquier tejido u rgano. In vitro pueden contribuir con las seales adecuadas a diferentes lneas
celulares de las tres capas germinales embrionarias: mesodermo, endodermo y ectodermo. ste es
el campo donde ms se est investigando actualmente, por su relevancia para la clonacin teraputica.
3. Que se produzca un asentamiento claro y persistente de stas en el tejido blanco, tanto en presencia como en ausencia de dao en los tejidos en los
cuales se transplanta.
En esta etapa se forma un macizo celular correspondiente al polo embrionario (embrioblasto) y una cavidad originada por la coalescencia de pequeos espacios
llenos de lquido desde la etapa de mrula tarda (blastocele), adems del adelgazamiento y diferenciacin inicial del polo embrionario en una capa unicelular (trofoblasto). En la gastrulacin el embrin se divide en dos
reas: opaca (perifrica) y pelcida (central). La primera se divide a su vez en un rea vasculosa (interna),
que contiene islotes sanguneos en desarrollo, y un rea
vitelina (externa).
En el rea pelcida se observa una banda oscura, el
cuerpo del embrin en desarrollo, que no ha presentado
plegamientos y est en etapa de disco plano o disco bilaminar.
(Captulo 2)
Las clulas madre embrionarias pueden ser obtenidas a partir de las primeras etapas de formacin del embrin cuando el vulo fecundado es una esfera compacta
o mrula; stas son entonces precursores totipotenciales
con capacidad de proliferar indefinidamente in vitro.
Las clulas madre pluripotentes individualmente son
capaces de formar cada una de las tres capas primarias
germinales, adems de clulas germinales. Estas clulas
se obtienen de la masa celular interna del blastocisto y
del epiblasto antes de la implantacin. Despus de la
implantacin el epiblasto se ampla para generar el sustrato celular para la gastrulacin y la formacin del embrin. Una vez que la gastrulacin comienza, las clulas
del epiblasto (a menudo llamadas ectodermo primitivo
o embrionario en esta etapa) se diferencian progresivamente en mesodermo definitivo, endodermo y ectodermo.
Las clulas del epiblasto son muy plsticas y su renovacin y diferenciacin estn reguladas segn el contexto embrionario. Esta capacidad de acomodar clulas
adicionales proporciona el fundamento en el cual se
producen fetos quimricos. El primer reporte acerca del
aislamiento de clulas madre embrionarias provenientes de blastocistos humanos data de 1994, cuando se
determin que estas clulas in vitro se diferencian de
manera espontnea en estructuras multicelulares conocidas como cuerpos embrionarios, que contienen elementos de las tres capas germinales a partir de las cuales
se pueden formar varios tipos de clulas, como cardiomiocitos, neuronas y progenitores hematopoyticos,
entre otros. Las clulas madre embrionarias (derivadas
del blastocisto) y las clulas embrionarias germinales
(derivadas posimplantacin del blastocisto) son similares en muchos aspectos; ambos tipos de clulas son capaces de replicarse y dividirse en cultivos por largos periodos sin mostrar alteraciones cromosmicas, adems
expresan una serie de marcadores caractersticos de
progenitores totipotenciales que facilitan su identificacin; sin embargo, las clulas madre embrionarias derivadas del blastocisto y las clulas germinales difieren
del tejido de donde provienen y de su comportamiento
in vivo, ya que las clulas madre embrionarias son capaces de generar teratomas mientras que las clulas germinales humanas no.
La lnea primitiva aparece en el plano medio sagital
desde el extremo caudal hasta la parte media del disco
embrionario, donde se ubica el nodo primitivo o de Hensen. Inmediatamente posterior se localiza una amplia
fosa primitiva, que se contina con un angosto surco
primitivo localizado en el plano medio sagital de la lnea
primitiva y limitado por pliegues. La formacin inicial
de la lnea primitiva se debe probablemente a la rpida
migracin de clulas hacia el plano medio sagital; las

clulas migrantes se deslizan a travs de la lnea primitiva y se extienden en una capa por debajo del epiblasto
y hacia los lados para formar el mesodermo intraembrionario. A la altura de la fosa primitiva se sita un
grupo de clulas que originan la notocorda, que se extiende en sentido ceflico por debajo del ectodermo.
El mesodermo prolifera con rapidez, excepto en los
extremos ceflico y caudal del disco germinativo, donde el epiblasto y el hipoblasto permanecen unidos para
formar las lminas procordal y cloacal, respectivamente. A ambos lados del proceso ceflico y a lo largo del
nodo y la fosa primitiva se observa una zona densa provocada por el engrosamiento del ectodermo para formar
la placa neural. En algunos especmenes se observan los
pliegues neurales semejantes a dos lneas gruesas paralelas a la notocorda. Posteriormente aparecen los somitas justo antes del nodo de Hensen y la lnea primitiva.
Representan el inicio de la subdivisin del mesodermo
paraxial. A medida que la lnea primitiva inicia su regresin, aparecen nuevos somitas en secuencia anteroposterior. El nmero de somitas es el criterio ms confiable
para determinar la edad de embriones jvenes.
El disco embrionario ha comenzado a plegarse hacia
la regin ventral y el cuerpo inicia el cierre progresivo
mediante los pliegues cefalocaudal y lateral. El proceso
ceflico sobresale en parte por encima del preamnios.
La placa neural contina su proliferacin y constituye
una depresin longitudinal en la parte ceflica del embrin (surco neural).
Los bordes laterales siguen aproximndose hasta
fusionarse (tubo neural). Esta fusin se inicia en la regin destinada al cuello y progresa en direccin craneal
y dorsal.
El endodermo del pliegue ceflico se abre en el intestino anterior; sus mrgenes laterales pueden ser visibles
detrs del borde ceflico anterior. Si se enfoca cuidadosamente, por debajo del tubo neural se identifica una
banda angosta: la notocorda. Esta estructura est directamente debajo del piso del tubo neural, entre el infundbulo del diencfalo (por delante) y la lnea primitiva
(por detrs). El extremo anterior de la notocorda induce
la diferenciacin del sistema nervioso central.
El mesodermo intraembrionario se divide en tres regiones: somtico o paraxil, paralelo al tubo neural y a
ambos lados del mismo, del que se originan huesos, cartlagos, ligamentos y msculo esqueltico; intermedio
o urogenital, adyacente y externo con respecto a los somitas, constituye una franja de tejido alargado en sentido cefalocaudal del que derivan los sistemas urinario y
genital, y lateral, que se caracteriza por delaminarse y
constituir dos hojas (parietal y visceral); de esta ltima
derivan el sistema cardiovascular, el pericardio, la pleu-
49
ra y el peritoneo. El espacio entre ambas hojas origina

el celoma intraembrionario.
Las clulas del carcinoma embrionario tienen varias
caractersticas distintivas. Son capaces de la diferenciacin de multilinaje (en las tres capas germinativas); esta
capacidad se conserva por las clulas aisladas clnicas
que funcionan como clulas madre pluripotentes. Las
clulas madre embrionarias pueden producir teratomas,
tumores que contienen tipos celulares de mesodermo,
ectodermo y endodermo. En contraste con las clulas
del carcinoma embrionario, las clulas madre embrionarias se comportan estables en su capacidad de integracin en el embrin y de producir quimeras viables. Las
clulas madre embrionarias producen una progenie diferenciada funcional en todos los tejidos y rganos. La
incorporacin celular en la embriognesis confirma no
solamente que las clulas madre embrionarias son pluripotentes, sino que tambin demuestra que pueden responder apropiadamente a las seales de desarrollo para
la proliferacin, diferenciacin, migracin y remodelacin. Las clulas madre embrionarias no son capaces de
generar un blastocisto; por ello no se deben describir
como totipotentes.
Posturas internacionales
en terapia celular
Los sectores conservadores y retrgrados de la ONU
pretenden prohibir la clonacin humana en todas sus
formas, argumentando que atentan contra la vida y la
dignidad humanas. En el mundo an existe un pensamiento conservador para prohibir la investigacin en la
medicina regenerativa. La prohibicin de la clonacin
teraputica y la postura conservadora que presiona con
frenar en Mxico la investigacin con clulas madre de
una naciente lnea de investigacin que ya se cultiva en
varios pases desarrollados obligan a la comunidad
cientfica mexicana a permanecer en la incertidumbre
legislativa y a continuar rezagados de los avances cientficos y legislativos de los pases progresistas. El discurso de los grupos conservadores sostiene que el embrin humano es un ser que debe ser protegido por la ley
a partir de la concepcin. Aqu se encuentra el primer
punto de confusin: ellos manejan el trmino concepcin homologndolo al de fertilizacin del ovocito.
Es claro que en la Biblia tal homologa no existe, puesto
que cuando fue escrita se ignoraba por completo el proceso de fertilizacin del ovocito humano. La idea sagrada de concepcin deriva del hecho de que la mujer concibe (es consciente) que est embarazada, es decir, ella
sabe que lo est por los sntomas correspondientes, que
50
ya eran del conocimiento de la comunidad de aquel entonces. Ahora, gracias a la investigacin cientfica, se
sabe que los sntomas del embarazo corresponden a los
cambios hormonales que ocurren despus de la implantacin del blastocisto en el tero (matriz) de la mujer.
Como la homologacin de concepcin y fertilizacin es
muy reciente, los grupos conservadores tendrn que reconocer que se trata de una interpretacin actualizada
del concepto bblico original; tal actualizacin se deriva
de la investigacin cientfica y no de una verdad revelada en el sentido teolgico. De manera que conceptos
derivados de la ciencia son tambin aprovechados por
quienes histricamente han intentado limitar el desarrollo del pensamiento cientfico.
Respetando la idea bblica original de concepcin en
trminos de la reproduccin humana, debera aceptarse
que el inicio del desarrollo humano sera a partir de la
implantacin. El periodo comprendido entre la fertilizacin del ovocito y su implantacin en el tero es de 7 a
10 das. A partir de este momento, el cuerpo de la futura
madre inicia una serie de adaptaciones para nutrir al embrin, nica va para proseguir su desarrollo en la matriz. Antes de implantarse, sin embargo, el ovocito fertilizado se desarrolla de manera independiente hasta
transformarse en una esfera hueca, todava microscpica, llamada blastocisto, de unas 130 a 150 clulas. Se
calcula que entre 20 y 50% de los ovocitos fertilizados
son eliminados gracias a un mecanismo biolgico de
proteccin que evita la implantacin de blastocistos con
algn dao que provocara malformaciones en el feto
despus de la implantacin. Sin embargo, en aqullos
que escapan a la vigilancia temprana, las alteraciones se
hacen evidentes en el desarrollo fetal y con frecuencia
en el recin nacido. La eliminacin natural de embriones antes de la implantacin no es percibida por la mujer, de manera que al no ser consciente del microaborto que le ha ocurrido no tiene sentimiento de culpa.
Tampoco lo tiene cuando, de manera consciente, evita
la fertilizacin del ovocito abstenindose de tener relaciones sexuales en el periodo ovulatorio, nica manera
de controlar la fertilidad autorizada por la Iglesia Catlica. Como en el caso del proceso de fertilizacin, el
conocimiento del ciclo menstrual y su regulacin hormonal son productos de la investigacin cientfica y no
verdades reveladas a grupos particularmente seleccionados. Aunque el ovocito humano es la nica clula capaz
de originar a un ser humano de forma natural no inducida, la probabilidad de que esto ocurra es asombrosamente pequea. De alrededor de 6 millones de ovocitos
que inician su desarrollo en cada ovario, slo cerca de
400 llegan a ser expulsados por el proceso de ovulacin,
1 cada 28 das durante la vida reproductiva de la mujer.
(Captulo 2)
Ms an, de los pocos que llegan a ser fertilizados,

varios son eliminados antes de la implantacin, por causas naturales. De esta forma, el potencial de cada ovocito para formar a un ser humano se reduce a ciertas probabilidades. Slo 1 en 1 milln de ovocitos que inician
su desarrollo en los ovarios podra llegar a formar a un
ser humano.
Los ovocitos humanos, al igual que los de muchas
otras especies de mamferos, son capaces de iniciar el
desarrollo, incluso hasta la etapa de blastocisto, sin ser
fertilizados por un espermatozoide, lo que se conoce
como partenognesis. Es decir, los ovocitos por s mismos son responsables del desarrollo hasta la etapa de
blastocisto, lo cual hace difcil sostener que en este
periodo ya se est ante la presencia de un ser humano
con identidad gentica nica. Si el ovocito por s mismo
puede alcanzar la etapa morfolgica de blastocisto,
dicha etapa previa a la implantacin depende de la capacidad que tienen los ovocitos para iniciar el desarrollo
y no de la aportacin gentica del espermatozoide. De
hecho, esa capacidad del ovocito (no del embrin) es la
que se aprovecha en la clonacin teraputica para la
transferencia de ncleos de clulas somticas. En contraste con la clonacin reproductiva, la meta de la clonacin teraputica no es clonar a un ser humano, sino clonar las clulas de un paciente con el fin de mejorar su
calidad de vida.
El blastocisto contiene dos tipos celulares: las clulas
trofoblsticas formarn parte de la placenta y las clulas
de la masa celular interna formarn al embrin y sus
membranas protectoras. En esta etapa se est entonces
frente a un conglomerado de clulas y slo algunas de
ellas tienen la capacidad de formar al embrin propiamente dicho. Nada, fuera de su posicin en el blastocisto, permite entrever la presencia de un ser humano en
esas clulas. Es importante mencionar que desde el punto de vista gentico, todas las clulas heredan una copia
de los genes del ovocito fertilizado, incluyendo las que
formarn la parte fetal de la placenta y las membranas
(amnios y corion) que son desechadas despus del parto. Aceptando que la identidad individual de cada ser
humano est en la copia nica de DNA adquirida
durante la fertilizacin, a nivel molecular las diferencias entre individuos de la misma especie son mnimas.
Los genes humanos son apenas 1% diferentes de los de
otras especies de primates y tenemos 95% de genes similares a los de los ratones. Respecto a la identidad de nuestra particular copia de DNA que tal vez pudiera tomarse
como parte de nuestra dignidad individual, millones de
clulas con idnticas copias de DNA que identifican al
individuo mueren normalmente en el organismo todos
los das.

En este sentido, resulta absurdo defender la identidad
de un ser humano en trminos de su DNA caracterstico,
de sus clulas o de los procesos que controlan el desarrollo embrionario. De manera que por las razones
expuestas y muchas otras no mencionadas, es claro que
la naturaleza biolgica de la vida humana es similar a la
de los dems seres vivos. Defender la dignidad humana
basndose en pretendidos argumentos embriolgicos
revelados carece de seriedad cientfica. La dignidad humana no es un problema biolgico, ms bien parece la
arena en donde sacerdotes, telogos, polticos y grupos
de poder sacan partido llevando agua a su molino y engaando a la gente con informacin falsa o no sustentada de la verdad del rigor cientfico, retrasando el beneficio de la investigacin y la teraputica en este campo
tan prometedor de la medicina regenerativa, al obstaculizar la utilizacin de las clulas madre embrionarias.
Debido precisamente a estas posturas reactivas con
respecto a las clulas madre embrionarias, se han estudiado otras fuentes de clulas madre que no tengan restricciones bioticas ni religiosas. En este contexto, las
espermatogonias de ratones adultos conservan la capacidad de diferenciarse en diversos tipos celulares, y sus
perspectivas para aplicacin en terapia celular son prometedoras. En contraste con las ovogonias en los ovarios fetales, las espermatogonias de los testculos siguen
proliferando hasta la muerte del individuo. En condiciones normales, la funcin de las espermatogonias progenitoras es la produccin de espermatozoides mediante
el proceso de espermatognesis. El nicho tisular donde se lleva a cabo la espermatognesis son los tubos seminferos, constituidos por clulas germinales en diversas etapas de maduracin y las clulas de Sertoli que las
sustentan. Adems del contacto fsico, las espermatogonias requieren mltiples factores elaborados por las clulas de Sertoli para la diferenciacin de espermatozoides. De manera que hasta ahora no ha sido posible
reproducir el proceso completo de espermatognesis a
partir de espermatogonias aisladas in vitro. En la literatura existen varios estudios que reportan la proliferacin in vitro de espermatogonias aisladas; sin embargo,
su mantenimiento es limitado y pronto mueren por apoptosis.
Aprovechando la tecnologa de ratones transgnicos,
K. Guan y col. desarrollaron un protocolo que permiti
demostrar la presencia de clulas madre multipotentes
entre las espermatogonias aisladas de ratones adultos.
El gen Stra8 se expresa en las espermatogonias antes de
iniciarse el proceso de espermatognesis. Empleando el
promotor del gen Stra8 acoplado al gen de la protena
verde fluorescente (GFP), los autores generaron ratones
transgnicos en cuyos testculos las espermatogonias
51
expresan la GFP de manera especfica. Adems de ser

detectadas con facilidad mediante el microscopio de
fluorescencia, tambin es posible separarlas con el citofluormetro de flujo (FACS). Al cruzar los ratones
Stra8PVF con ratones transgnicos Rosa26 que expresan la enzima LacZ en todas sus clulas, obtuvieron
dobles transgnicos con clulas marcadas susceptibles
de ser separadas e identificadas por sus marcadores
celulares correspondientes. Al cultivar las clulas
(somticas y germinales) obtenidas de los testculos de
ratones dobles transgnicos (Stra8PVF x LacZ), los
investigadores lograron en dos semanas poblaciones
celulares enriquecidas con espermatogonias verdes.
A continuacin, con el equipo FACS separaron las clulas verdes y las sometieron a diversos procedimientos
encaminados a estudiar su plasticidad. Tres de esos procesos demostraron la enorme potencialidad de las espermatogonias aisladas con el protocolo implementado
por los autores:
1. Al cultivarlas en condiciones estndar establecidas para el mantenimiento de clulas madre embrionarias, los investigadores demostraron que las
espermatogonias son capaces de generar derivados celulares de las tres capas embrionarias: ectodermo, mesodermo y endodermo.
2. Los experimentos in vivo demostraron que las
espermatogonias verdes fluorescentes inyectadas
en los tubos seminferos de ratones privados de
sus propias espermatogonias fueron capaces de
colonizar los tubos y llevar a cabo el proceso de espermatognesis.
3. Al microinyectar espermatogonias verdes en la
cavidad de blastocistos (embriones preimplantados) se desarrollaron embriones quimricos cuyos
tejidos mostraron clulas con el marcador verde
en casi todos los rganos, incluyendo las gnadas.
Al nacer, algunos ratones quimricos contenan
clulas germinales verdes, con lo cual qued demostrada la enorme potencialidad de las espermatogonias del ratn y la eficiencia del procedimiento empleado. De esta forma se demostr que
en los testculos de ratones adultos existen clulas
madre multipotentes capaces de originar todos los
tipos celulares del organismo. Sin embargo, queda
todava un largo camino antes de que un protocolo
similar pueda desarrollarse para su aplicacin en
la medicina regenerativa para seres humanos. Primero hay que demostrar que en los tubos seminferos del hombre tambin existen espermatogonias troncales multipotentes. Por razones obvias
no se pueden generar individuos transgnicos para
52

experimentar, por lo que habra que intentar identificarlas en biopsias de testculo, tcnica por dems muy invasiva.
Relacin entre el vulo

y el espermatozoide
Los componentes de la capa externa que rodean al vulo
cambian la permeabilidad a los iones de la membrana
plasmtica del espermatozoide. Estos cambios forman
parte esencial de la comunicacin necesaria entre los
gametos para que ocurra la fecundacin y se genere un
nuevo individuo. Los componentes del vulo regulan la
motilidad del espermatozoide e inducen la reaccin
acrosmica, reaccin que se requiere para que el espermatozoide pueda fusionarse con el vulo. Al igual que
todas las clulas, el espermatozoide posee canales inicos de membrana. Estos canales son protenas que atraviesan la membrana y tienen dominios que forman un
poro que permite el paso eficiente de los iones a travs
de ella. Un solo canal inico es capaz de catalizar el paso
de 107 o 108 iones/seg. El espermatozoide es una clula
diferenciada terminal muy pequea e incapaz de sintetizar protenas, de tal manera que sus canales inicos se
sintetizan durante la espermatognesis. Las clulas espermatognicas, particularmente los espermatocitos en
paquiteno, son ms grandes que el espermatozoide y es
ms fcil hacer registros electrofisiolgicos de pinzamiento zonal de membrana (patch clamp) con fines de
investigacin. Los canales de Ca2+ dependientes de voltaje estn formados por varias subunidades: a1 contiene
el poro, el sensor de voltaje y se asocia con las subunidades auxiliares a2d y b. Adems de transcritos para las
subunidades a1A, C, E, 1G y H, que codifican para
varios tipos de Ca2+ voltajedependientes, se han encontrado los cuatro tipos de transcritos para b en las clulas
espermatognicas y en el espermatozoide maduro. La
calmodulina modula las corrientes de Ca2+ tipoT que
tienen estas clulas y el espermatozoide maduro. Estas
corrientes fluyen a travs de canales de Ca2+ tipoT que
participan en la reaccin acrosmica. Tambin se ha
caracterizado un canal selectivo para K+ muy sensible
al bloqueo por Ba2+. Este canal es un rectificador
entrante (Kir) modulado por el pHi. Experimentos in
vitro, con espermatozoides maduros, que miden potencial de membrana y reaccin acrosmica sugieren que
este canal participa en la capacitacin espermtica, la
cual es un proceso de maduracin que debe sufrir el espermatozoide en el tracto genital femenino para poder
fecundar al vulo.
(Captulo 2)
Desarrollo sexual embrionario

La reproduccin sexual se basa en la existencia de individuos fisiolgica y morfolgicamente diferentes. La
diferenciacin sexual es el proceso que lleva al establecimiento de tales diferencias. En vertebrados, la diferenciacin sexual se inicia en las gnadas, primordios
embrionarios a partir de los cuales se desarrollan ovarios y testculos en hembras y machos, respectivamente.
Uno de los eventos biolgicos ms importantes que ocurren durante el desarrollo de un ovario o un testculo a
partir de una gnada indiferenciada es el control del inicio de la meiosis embrionaria (consta de dos divisiones
del ncleo de las clulas sexuales, con una sola divisin
longitudinal de los cromosomas. Cada clula hija recibe
la mitad del nmero de cromosomas de la clula progenitora, manteniendo la constancia del nmero de cromosomas en cada especie). Tanto la meiosis como la
fertilizacin (unin del huevo y el espermatozoide)
constituyen la base necesaria para la reproduccin de
organismos sexuados. Con el proceso de meiosis, los organismos adquieren combinaciones ventajosas de genes,
lo que nos da la variabilidad de caractersticas que nos
hacen nicos. Sin embargo, la meiosis tambin puede ser
el marco de una fuente de enfermedades cromosmicas.
Las clulas germinales (predecesoras de ovocitos y
espermatozoides en hembras y machos, respectivamente) llevan a cabo la meiosis. Aunque este proceso es
fundamentalmente el mismo en ambos sexos, existen
diferencias cronolgicas entre la meiosis de hembras y
machos. La diferencia ms evidente se da en etapas muy
tempranas del desarrollo, cuando en las gnadas indiferenciadas de hembras, las clulas germinales (CG) inician la meiosis, mientras que en los machos las CG no
la inician. Este dimorfismo sexual en la conducta de las
CG es el resultado de una sustancia que inhibe la meiosis producida por otro tipo celular presente en la gnada
indiferenciada de los machos (clulas somticas). De
esta manera, es vlido sugerir que todas las CG tienen
un potencial de diferenciacin hacia hembra, independientemente de su sexo gentico. A menos que lleguen
a la gnada masculina, su comportamiento sera dirigido hacia el inicio de la meiosis. Sin embargo, la nica
evidencia que sostiene a esta hiptesis es el hallazgo, en
fetos de macho, de clulas germinales que inician la
meiosis fuera del testculo, en tanto que las ubicadas en
el interior del testculo fetal no la inician.
La cepa de ratn (D4/XEGFP) acarrea un transgn
que expresa la protena verde fluorescente (GFP) unida
al cromosoma X. Dicha cepa se utiliza como marcador
de CG de hembra. Se ha utilizado con xito la tcnica
de separacin celular magntica para lograr aislar las

CG provenientes de embriones fluorescentes. De esta
manera se puede detectar la ubicacin de las CG por
microscopia de fluorescencia y confocal. Las CG aisladas y fluorescentes se mezclan con clulas somticas de
machos no transgnicos y se cultivan para su posterior
anlisis. De forma interesante, las CG que expresan la
protena verde fluorescente son capaces de formar parte
de los cordones testiculares, interactuar con clulas somticas del testculo e iniciar la meiosis. Esto sugiere
que las CG XX se encuentran determinadas para iniciar
la meiosis desde la etapa de gnada indiferenciada, y
que la sustancia que previene la meiosis secretada por
clulas somticas de macho slo tiene efecto inhibidor
sobre las CG de los machos, quiz debido a que en las
CG XY existen receptores para algn factor secretado
por las clulas somticas que inhibe el inicio de la meiosis. Las CG XX, al no expresar estos receptores, no responden a la sustancia inhibidora de meiosis. Tambin se
ha demostrado la participacin de genes autosmicos en
la diferenciacin sexual, lo que descarta la accin exclusiva de cromosomas sexuales. Los gonadosomas presentan, en sus brazos cortos, genes con funcin autosmica, entre los cuales se encuentran, en ambos
cromosomas sexuales (X y Y): 9q33, 10q, 11p13 (WT
1), 17q24 (SOX 9), Xp21 (regin DSS, gen DAX 1),
Yp11.3 (regin SRY, gen TDF). Ambos embriones,
masculino y femenino, tienen primordios comunes, indiferenciados, con tendencia inherente a feminizarse
salvo que se presente una interferencia activa por factores masculinizantes. La gnada se diferencia en ovario
a menos que las gnadas embrionarias indiferenciadas
sean desviadas por el TDF. De algn modo los genes
que determinan la masculinidad causan la persistencia
de la regin medular, de la que se formarn los tbulos
seminferos. En la mujer este tejido entra en regresin
y la proliferacin de la capa cortical forma la sustancia
del ovario.
Se ha localizado el locus DSS (dosis sensible de reversin sexual) en individuos con fenotipo femenino,
por lo que se ha propuesto que junto con el gen DAX1
(ambos ubicados en el cromosoma X) actan como eslabones en la formacin de ovario y testculo. Los testculos de un feto masculino en desarrollo imponen su masculinidad sobre los estados neutro o femenino mediante
la sntesis de testosterona. En un feto masculino castrado, existan o no ovarios, el sexo secundario o fenotpico corresponder a un producto femenino, y en casos
de ausencia de testosterona o insensibilidad a ella se
producir el sndrome de feminizacin testicular, con
genitales externos femeninos. En la semana 6 existen
dos pares de sistemas de conductos genitales masculino
y femenino: los conductos de Wolf o mesonfricos, que
53
alcanzan la cloaca destinada a convertirse en el seno

urogenital, y los conductos de Mller o paramesonfricos originados de una invaginacin del epitelio celmico, los cuales se abren en un extremo en la cavidad celmica y descienden por la porcin de los conductos de
Wolf, los cruzan y se unen en la lnea media para formar
el canal terovaginal cuya extremidad caudal cerrada
alcanza el conducto de Mller en la cara posterior del
seno urogenital.
En el hombre el conducto de Wolf se diferencia en
epiddimo, conducto deferente, ampolla del conducto y
vescula seminal; en la mujer desaparece casi en su totalidad. En la mujer, el conducto de Mller se convierte
en trompas de Falopio, tero, crvix y parte de la vagina. La actividad estimulante del testculo fetal sobre el
conducto de Wolf es androgenodependiente; la actividad inhibitoria sobre el de Mller depende de un factor
sintetizado por las clulas de Sertoli. La estimulacin
del epiddimo y del conducto deferente o de las trompas
de Falopio y del tero es un fenmeno local no controlado por hormonas circulantes, sino dependientes de su
cercana a la gnada. Por otra parte, la masculinizacin
de los genitales externos es provocada por andrgenos
circulantes. La masculinizacin de los genitales externos es secundaria a la presencia de andrgenos circulantes, apareciendo uretra y prstata (seno urogenital),
pene (tubrculo genital) y escroto (rodetes genitales).
En la mujer: vestbulo, dos tercios inferiores de la vagina y labios menores (seno urogenital), cltoris (tubrculo genital) y labios mayores (rodetes o tumefacciones
genitales).
Terapia celular con clulas madre

La terapia celular representa una de las opciones teraputicas ms importantes para detener y muchas veces
curar padecimientos crnicos para los que no existe
solucin con la medicina convencional. Para la realizacin de todas las investigaciones la histologa ha estado
relacionada con el desarrollo tecnolgico. En la actualidad los conocimientos histolgicos constituyen bases
inevitables para el desarrollo vertiginoso de las ciencias
mdicas, muy particularmente en todas las investigaciones relacionadas con la terapia celular. La utilizacin
de esta tcnica teraputica muestra resultados alentadores para la solucin de mltiples enfermedades o la mejora clnica de otras; uno de los rganos donde se evidencia el xito es el corazn: los resultados de estudios
experimentales donde se inyectaron clulas madre humanas en miocardio deteriorado de un extenso grupo de
ratas mostraron, cuando se compararon estos animales
54
con un grupo control, una mejora significativa tanto

clnica como tisular. Expertos alemanes, pioneros en el
uso de esta tcnica en humanos, han llevado a cabo ensayos controlados en pacientes con infarto de miocardio
y han comprobado cmo la terapia celular mejora de
manera significativa la funcin, la irrigacin y el metabolismo de la zona infartada. Estas investigaciones evidenciaron que los enfermos que recibieron terapia celular autloga con clulas de su mdula sea tuvieron
mejor consumo de oxgeno, capacidad para el ejercicio
y aporte sanguneo de sus miocardios comprometidos
por falta de riego coronario. Adems, se ha demostrado
que el trasplante de mioblastos (clulas progenitoras
procedentes de msculos de las piernas) en las reas daadas del corazn de muchos pacientes que ya han recibido esta terapia es algo factible y seguro. El temor a que
procedimientos de esta naturaleza eleven el riesgo de
arritmias muy serias parece estar disminuyendo. Con la
elevada incidencia de pacientes que padecen insuficiencias cardiacas que ya existe en casi todo el mundo,
muchos expertos confan en que las terapias regenerativas del miocardio disminuyan la escasez de donantes
que existe para trasplante cardiaco, adems de que
existe un grupo de desventajas, desde las reacciones de
rechazo hasta problemas eticomorales presentes en los
trasplantes de rganos que tendran su solucin en este
tipo de tratamiento. La terapia celular con clulas madre
constituye un mtodo poco agresivo de tratamiento y es
muy espectacular en sus resultados de regeneracin celular y orgnica. Se consideran clulas madre aquellas
clulas dotadas simultneamente de la capacidad de
autorrenovacin y de originar clulas hijas comprometidas en determinadas rutas de desarrollo, sin perder sus
propiedades, que se convertirn finalmente en tipos celulares especializados que pueden dar lugar a otro tipo
de clulas y tejidos.
Las clulas madre se pueden desarrollar en cualquier
tipo de las 250 clases diferentes de clulas corporales:
por ejemplo, en clulas cardiacas, en clulas intestinales
o en clulas cutneas. En este sentido, se pueden sustituir clulas atrofiadas o muertas por clulas madre:
como una panacea, las capaces de todo debern llenar
de nueva vida las zonas enfermas del organismo. Actualmente ya es posible obtener clulas madre que se
mantienen como tales en cultivos en el laboratorio, y
que bajo determinados estmulos pueden conducir a poblaciones de clulas diferenciadas, como se ha estado
haciendo en el grupo de investigacin de los autores
(SITECEM). Existen dos tipos bsicos de clulas madre:
1. Clulas madre embrionarias: se obtienen ya sea
de fetos abortados o de vulos fertilizados que han
(Captulo 2)
sobrado de una fecundacin in vitro (FIV). Son

tiles para propsitos mdicos o de investigacin
porque pueden producir clulas para casi todos los
tejidos del cuerpo.
2. Clulas madre adultas: no son tan verstiles para
propsitos de investigacin porque son especficas para ciertos tipos de clulas, como sangre,
intestinos, piel y msculos. El trmino clula madre adulta puede confundir porque tanto los nios
como los adultos las tienen.
Existen muchas reas de la medicina en las que la investigacin de clulas madre tiene una repercusin significativa. Por ejemplo, hay una diversidad de enfermedades y lesiones en las cuales las clulas o el tejido de
paciente se destruyen y deben ser reemplazados por un
trasplante de tejido o de rganos. Las clulas madre pueden generar un nuevo tejido en estos casos y hasta curar
enfermedades para las cuales actualmente no existe una
teraputica adecuada. Entre las enfermedades en las que
se han obtenido avances revolucionarios estn la enfermedad de Alzheimer y la de Parkinson, diabetes, lesiones de la mdula espinal, cardiopatas, enfermedades
con eventos cardiovasculares, artritis, cncer, quemaduras, enfermedades autoinmunitarias, etc. Las clulas
madre tambin pueden ser usadas para obtener una mejor comprensin de cmo funciona la gentica en las
etapas iniciales del desarrollo celular. Esto puede ayudar a entender por qu algunas clulas se desarrollan
anormalmente y conducen a anomalas congnitas y
cncer, con lo cual se pueden desarrollar estrategias
para prevenir algunas de estas enfermedades. Las clulas madre tambin se utilizan para probar y desarrollar
frmacos. Debido a que se pueden utilizar clulas madre
para crear cantidades ilimitadas de tejido especializado,
se pueden realizar pruebas para determinar la reaccin
de los frmacos en estos tejidos especializados antes de
probarlos en animales o en seres humanos.
Recientemente el gobierno ingls permiti la investigacin con embriones humanos para obtener clulas
madre. Se suele utilizar un proceso semejante al usado
en la clonacin animal: se toma un vulo al cual se le
extrae el material nuclear; se extrae el ncleo de una
clula adulta del individuo por clonar y luego se transfiere el ncleo extrado de la clula adulta al vulo. A
partir de aqu hay un cigoto artificial que podr, tras su
desarrollo embrionario, crecer hasta convertirse en un
individuo clnico, genticamente idntico al individuo
del que se extrajo la clula adulta. Si en las primeras
fases del desarrollo del embrin se extraen las clulas de
la masa celular interna del blastocisto y se logra especializarlas, podr obtenerse obtener cualquier tejido para

trasplante. Entre los contenidos histolgicos fundamentales necesarios para la fundamentacin de esta terapia
estn: caractersticas histolgicas de los tejidos bsicos
del organismo; conocimientos bsicos de los diferentes
modelos celulares; caractersticas histolgicas de la
mdula sea como rgano hematopoytico; interpretacin de conceptos como divisin celular, potencialidad
celular, diferenciacin celular, clula madre o indiferenciada; caractersticas histolgicas del aparato cardiovascular; elementos bsicos de angiognesis; papel
de algunas clulas en la remodelacin tisular.
Mientras que los tratamientos con medicamentos dejan de trabajar despus de que sus componentes se han
disuelto por el proceso metablico del cuerpo, la terapia
celular con clulas madre tiene un efecto mucho ms
prolongado, porque estimula al cuerpo a curarse y revitalizarse a s mismo. Las clulas madre constituyen entonces una interesante alternativa de investigacin,
sobre todo por el potencial teraputico cada vez ms
descifrado por los investigadores. Los cientficos dedicados a la terapia celular sustentan que sta funciona de
la misma forma que un trasplante de rgano, donde se
provoca que las clulas cansadas funcionen como clulas nuevas y esta nueva informacin se mantenga por
ms tiempo. Sin embargo, cuando se discute sobre temas como la clonacin y ahora sobre clulas madre, es
importante considerar las implicaciones ticas que su
manipulacin conlleva y no desconocer que en el campo
de la biologa de las clulas madre queda an mucho por
hacer. En Europa la efectividad de la terapia celular es
ampliamente aceptada. Por ejemplo, en Alemania hay
ms de 5 000 investigadores que aplican este tratamiento. Entre los mtodos de salud de mayor auge en la
dcada actual, la terapia celular ocupa un lugar destacado; esta denominacin significa el empleo de clulas
madre con fines teraputicos. Aunque ya se sabe que
pertenece a los procedimientos ms antiguos de la medicina, no es sino hasta 1958 que se funda la Asociacin
Internacional de Investigacin de la Terapia Celular,
con sede en Frankfurt (Alemania), que tiene pleno reconocimiento ante la OMS. El organismo adulto dispone
de mecanismos para renovar o regenerar tejidos y rganos daados, a partir de la multiplicacin de clulas
diferenciadas originadas de clulas madre. La morfognesis embrionaria y fetal utiliza estos mecanismos para
obtener una homeostasis celular fisiolgica. En el individuo adulto existe una poblacin escasa de clulas
madre indiferenciadas en todos los tejidos y rganos.
Estas clulas adultas troncales intrnsecas son capaces
de diferenciarse para regenerar el tejido u rgano en el
que yacen, pero su eficacia reparadora es muy limitada
por su escaso nmero. Por esta circunstancia, con el im-
55
plante de clulas madre se obtiene un beneficio teraputico considerable. Existen dos tipos de terapia celular:
la terapia celular heteroplstica se refiere al uso de clulas madre embrionarias, mientras que la terapia celular
autoplstica se basa en el uso de clulas madre del propio individuo.
Se ha demostrado plasticidad potencial de las clulas
madre adultas contenidas en la mdula sea en: msculo
cardiaco, msculo esqueltico, clulas endoteliales, hgado, adipocitos, osteocitos, condrocitos, neuronas, clulas gliales, clulas epiteliales, epidrmicas y secretoras de hormonas. Se ha demostrado experimentalmente
que las clulas madre adultas, procedentes de la mdula
sea animal y administradas sistemticamente, son capaces de salir del sistema circulatorio, invadir un rgano
isqumico y diferenciarse en neuronas, clulas endoteliales o cardiomiocitos para reducir el dficit neurolgico y mejorar la contractilidad miocrdica en modelos
de isquemia en el cerebro y el corazn, respectivamente. Las clulas madre implantadas pueden permanecer
indiferenciadas y sintetizar factores angiognicos y de
crecimiento como protenas de la familia del factor de
crecimiento para fibroblastos (FGF), que impedirn la
extensin de la lesin isqumica favoreciendo la angiognesis e inhibirn, adems, la muerte por apoptosis.
Los datos experimentales apoyan el inters cientfico de
la medicina regenerativa empleando clulas madre
adultas autlogas (terapia celular autoplstica) o clulas
madre adultas alognicas (terapia celular heteroplstica). Hasta ahora, los estudios preliminares en humanos que emplean clulas madre adultas demuestran que
esta terapia carece de efectos secundarios (edema o
transformacin celular). Adems, el empleo de clulas
madre adultas como terapia regenerativa en diferentes
situaciones patolgicas humanas tiene las ventajas, en
contra de lo que sucede con el terico uso futuro de clulas madre embrionarias humanas, de no necesitar ningn tratamiento inmunosupresor y evita, adems, cualquier problema tico y religioso.
Al principio se pensaba que las clulas madre adultas
estaban predeterminadas a diferenciarse a un tipo celular procedente de su mismo tejido de origen o al menos
de su misma capa embrionaria; sin embargo, esta idea
ha sido reevaluada por varios grupos de investigadores
cuyos estudios sugieren que las clulas madre adultas
son capaces de diferenciarse funcionalmente a clulas
especializadas procedentes de capas embrionarias distintas de las de su origen (plasticidad); incluso, algunos
de estos grupos han sido capaces de probar la pluripotencialidad de clulas madre adultas procedentes de la
mdula sea o sistema nervioso central. Esta capacidad biolgica propia de estas clulas adultas se funda-
56

Mdula sea
Hematopoytica
Mesenquimales
Ovales
Laterales
MAPC
Figura 21. Poblaciones de clulas madre presentes en la

mdula sea (clulas madre del adulto).
menta en su capacidad de alterar drsticamente su fenotipo en respuesta a los cambios del microambiente donde
se desarrollan. La plasticidad fue reconocida por primera
vez en estudios realizados en progenitores derivados de
la mdula sea, donde se observaron cambios en el fenotipo en clulas inmaduras bajo condiciones controladas
que simulaban microambientes diferentes al medular.
Los mecanismos moleculares que llevan a los cambios de linaje celular dentro del sistema hematopoytico
estn siendo estudiados. Sin embargo, los resultados
ms recientes acerca de la plasticidad de las clulas madre adultas contradicen el dogma sobre la diferenciacin de las clulas madre restringidas a su tejido de origen. Las evidencias obtenidas tanto in vivo como in
vitro muestran que las clulas madre adultas, originadas
de un tejido determinado, tienen la capacidad de producir clulas con una expresin genotpica caracterstica
de otros tejidos cuando se transfieren a un microambiente diferente al original. De manera muy particular
se ha prestado atencin a la capacidad de las clulas madre adultas de la mdula sea de producir clulas con
propiedades muy similares a hepatocitos, neuronas y
cardiomiocitos.
Existen cuatro modelos que explican los posibles
mecanismos que llevan a las clulas madre adultas a
diferenciarse a clulas de un tejido diferente al original
en respuesta a cambios del microambiente o procesos de
reparacin tisular:
1. El primer modelo es el que corresponde al conocido convencionalmente sobre diferenciacin celular, en el que una clula progenitora restringida hacia un solo linaje da origen a clulas de su misma
estirpe.
(Captulo 2)
2. El segundo modelo se refiere a la capacidad que

tienen las clulas madre adultas de diferenciarse
en progenitores ms activos en el ciclo celular que
pueden dar origen a su vez a clulas de linajes celulares diferentes.
3. En el tercer modelo de transdiferenciacin, las
clulas madre de un tejido particular bajo condiciones de un microambiente diferente al original
adquieren la capacidad de generar clulas de muy
diversos linajes.
4. El ltimo modelo hace referencia a la capacidad
de las clulas maduras para desdiferenciarse y rediferenciarse a clulas del mismo tejido que le dio
origen a un tejido diferente.
Las clulas madre adultas ms estudiadas hasta ahora
son las que se derivan de la mdula sea; all se han
identificado por lo menos tres grupos: clulas madre estromales mesenquimatosas, clulas madre hematopoyticas, poblacin colateral y clulas progenitoras adultas multipotentes (MAPC) (figura 21).
Las clulas madre estromales son capaces de diferenciarse a tejidos mesodrmicos funcionales y constituyen un modelo muy til en aplicaciones clnicas en enfermedades, tanto en terapia celular regenerativa como
en terapia gnica. Las clulas madre adultas identificadas en mdula sea son clulas madre hematopoyticas,
responsables de la renovacin constante de las clulas
sanguneas.
Las clulas madre hematopoyticas aparecen en el
embrin entre la tercera y la cuarta semana de gestacin;
estas clulas migran desde el saco vitelino hasta el hgado y el bazo, y por ltimo llegan a la mdula sea a travs de la circulacin fetal durante el segundo y el tercer
trimestre de gestacin. Estas clulas han sido aisladas
de sangre perifrica y mdula sea; tienen la capacidad
de autorrenovarse y diferenciarse en dos grupos progenitores hematopoyticos: progenitor mieloide y progenitor linfoide, los cuales a su vez se diferencian hacia
linajes de clulas sanguneas especializadas. El proceso
de movilizacin de las clulas madre hematopoyticas
est caracterizado por la migracin y la tendencia selectiva de estas clulas a retornar a la mdula sea. La capacidad de autorrenovacin de las clulas madre hematopoyticas est regulada por un complejo mecanismo en
el cual estn involucrados el microambiente medular,
citocinas estimuladoras e inhibidoras, as como tambin
la matriz extracelular. Estas interacciones estn mediadas por molculas de adhesin celular, las cuales se expresan en las clulas madre hematopoyticas, clulas
endoteliales y clulas del estroma medular. Durante el
desarrollo embrionario, las clulas madre hematopoy-
ticas que van a dar lugar a las clulas sanguneas migran

desde el hgado fetal hacia la mdula sea a travs de los
vasos sanguneos; una vez all reinvaden este tejido con
altos niveles de clulas maduras e inmaduras, las cuales
son liberadas nuevamente a la circulacin, mientras que
una pequea cantidad de clulas madre indiferenciadas
se mantienen dentro de la mdula sea produciendo de
forma continua clulas maduras e inmaduras de linaje
mieloide y linfoide.
Las clulas madre hematopoyticas son la base biolgica de los trasplantes de mdula sea para pacientes
que padecen de patologas como leucemias y aplasias
medulares. Sin embargo, la obtencin de donantes compatibles con el receptor y los costos que implican estos
procedimientos han creado la necesidad de buscar fuentes alternas para la obtencin de clulas madre hematopoyticas, como la sangre de cordn umbilical (SCU).
En humanos, la afortunada novedad ha consistido en
reconocer la existencia de clulas madre pluripotentes
en otros tejidos y rganos adultos, con la suficiente flexibilidad como para generar clulas con diferentes linajes con caractersticas y funciones especializadas como
miocitos, neuronas y hepatocitos. En un individuo adulto hay tejidos en los que algunas de sus clulas se dividen activamente, pero en otros no. Entre los que se dividen estn la mdula sea y la piel; en ellos se encuentran
clulas madre de la mdula sea y de la piel. Estas clulas se reproducen y generan clulas especializadas de
sangre y de piel, respectivamente. En otros tejidos se
han encontrado tambin clulas madre especializadas,
capaces de reproducirse y de generar tejidos especializados. Estas clulas madre especializadas son muy
escasas y difciles de aislar. Al principio se pens que las
57
clulas madre especializadas podan generar clulas especializadas del mismo tipo; sin embargo, se ha observado que pueden llegar a generar clulas con una especializacin diferente de la original. As, clulas madre
neuronales de la mdula espinal han producido diferentes tipos de clulas sanguneas. Estudios en ratas han
obtenido clulas hepticas partiendo de clulas madre
de mdula espinal. Cada da surgen nuevos ejemplos de
clulas madre adultas que producen clulas especializadas diferentes de las esperadas. Esto demuestra que las
clulas madre presentes en el individuo adulto son mucho ms flexibles de lo que se pensaba. De aqu se derivan grandes expectativas de terapias innovadoras. Parece que las clulas madre adultas tienen un gran
potencial y quiz ms facilidades que las clulas madre
embrionarias, puesto que se pueden partir de clulas del
propio individuo y, por lo tanto, tienen la misma carga
gentica. Adems, evitan las controversias ticas de
manipular y destruir embriones.
Se ha demostrado que las clulas madre hematopoyticas pueden contribuir a la homeostasis de tejidos no
hematopoyticos. Las investigaciones sobre este tema
se han realizado en general mediante la evaluacin del
quimerismo que se puede producir en determinados rganos cuando se realiza un trasplante alognico de mdula sea o de clulas madre hematopoyticas extradas
de sangre perifrica despus de su movilizacin por medio de un factor estimulador. En algunos trabajos tambin se han utilizado como material de estudio casos en
que se ha hecho un trasplante de rgano. En ambas situaciones, donantes y receptores eran de sexo diferente,
lo que permita usar el cromosoma Y como marcador
para identificar la existencia de quimerismo en tejidos
Clula madre
con receptor
para quimocina
Quimocina
Integracin,
transdiferenciacin
y regeneracin
Zona de tejido daado
Figura 22. Mecanismo propuesto para explicar la migracin de las clulas madre a tejidos lesionados. La capacidad de las clulas madre adultas para, en determinadas situaciones, adquirir caractersticas de clulas especficas de otros tejidos se ha atribuido a un proceso calificado como plasticidad celular.
58
de casos femeninos. En los trasplantes de clulas hematopoyticas los donantes eran siempre masculinos,
mientras que una situacin inversa se us en los casos
de trasplantes de rganos, ya que el rgano trasplantado
siempre provena de una donante. En los trasplantes
experimentales de clulas hematopoyticas practicados
en ratones, en la hembra receptora se observaron clulas
con el marcador masculino en diferentes localizaciones,
que incluan msculo esqueltico y cardiaco, neuronas,
hepatocitos, clulas endoteliales, alveolos pulmonares,
bronquios, tracto digestivo y piel. Tambin se pudieron
comprobar en humanos diferentes porcentajes de clulas con el marcador masculino en diferentes sitios de la
receptora, que incluan osteoblastos, hepatocitos, epitelio gastrointestinal, cardiomiocitos, piel y clulas de
Purkinje. En los trasplantes de rganos tambin se ob-
(Captulo 2)
serv quimerismo en el rgano femenino trasplantado;

as, en el trasplante heptico se encontraron hepatocitos
con el marcador masculino y en los corazones trasplantados, cardiomiocitos con el marcador Y procedente de
clulas del receptor masculino. Todos estos datos sugieren que las clulas procedentes de la mdula sea pueden llegar a travs de la circulacin a los tejidos no
hematopoyticos, donde pueden adquirir caractersticas de las clulas del tejido donde se implanten. Las
lesiones tisulares pueden originar cambios en el microambiente de un rgano determinado y desempear
una importante funcin en la atraccin de las clulas
madre circulantes. Una posibilidad sera la produccin
en la zona daada de quimocinas especficas, las cuales
atraen a las clulas madre dotadas de receptores que les
permitan unirse con ellas (figura 22).
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60
(Captulo 2)
Captulo
Biologa celular y molecular

de las clulas madre
INTRODUCCIN
La apoptosis es la muerte celular programada o suicidio

celular controlado genticamente; el envejecimiento celular que causa apoptosis tambin es programado. Esta
forma de muerte es diferente de la muerte no apoptsica
o por necrosis. La apoptosis tiene un papel importantsimo en el desarrollo embriolgico de prcticamente
todos los tejidos y rganos. En la apoptosis es posible
distinguir diversas fases: fase D1, en la que se produce
la expresin de nuevos genes y protenas que inducen la
siguiente fase, o fase F, donde se produce la fragmentacin del DNA y previa de la fase D2, donde finalmente
se produce la fragmentacin de la clula en los denominados cuerpos apoptsicos. El rasgo caracterstico de la
muerte celular por apoptosis son las membranas celulares intactas aunque la clula se est destruyendo por
dentro. Las clulas apoptsicas son eosinfilas con HE.
La apoptosis es inducida por p53 a travs de la transcripcin de genes como Bax. Otros inductores de apoptosis son FAS/APO1/CD95. Se trata de dos anticuerpos monoclonales capaces de inducir la muerte celular
programada y dirigidos contra los antgenos Fas y
APO1, que en realidad son el mismo y corresponden
a receptores de membrana de los factores de necrosis tumoral (FNT) y de crecimiento nervioso (NGF). El ligando especfico de Fas, FasL, es una protena de membrana. Fas se expresa en muchos tejidos y en particular
en los linfocitos, donde induce la apoptosis una vez terminada la respuesta inmunolgica.
NFkb es un factor de transcripcin que produce la
induccin de diversos genes celulares (citocinas y sus
receptores) y que podra tambin desempear un importante papel en la apoptosis. Cuando NFkb produce
heterodmeros p50/p52 se genera la activacin de la
Las clulas madre pasan a travs de una secuencia regular de crecimiento y divisin llamada ciclo celular, el
cual es la secuencia cclica y ordenada de procesos en
que la clula crece y se divide en dos clulas hijas. Consiste en interfase, mitosis y citocinesis. El lapso requerido para completar un ciclo celular es el de regeneracin.
Las clulas que no se estn dividiendo no pertenecen a
este ciclo, sino que estn fuera, en fase G0. La duracin
del ciclo celular vara segn la estirpe celular, siendo la
duracin media del ciclo completo de unas 24 h. El ciclo
celular se divide en cuatro fases o cuatro estados metablicos distintos que se denominan G1, S, G2 (interfase)
y M (mitosis). La mitosis o periodo de divisin o fase
M puede durar desde pocas horas hasta varios das, dependiendo del tipo de clula y de factores externos
como la temperatura y los nutrimentos disponibles; a su
vez se divide en dos sucesos:
1. Mitosis o divisin nuclear (cariocinesis): es la divisin celular en que una clula madre se divide en
dos clulas hijas idnticas. Esta fase se divide en
profase, metafase, anafase y telofase. En mitosis
es donde se visualizan los cromosomas al microscopio al ser paralizados con colchicina. Tiene una
duracin promedio de 1 h.
2. Citocinesis o divisin citoplasmtica para generar
dos clulas hijas: habitualmente, pero no siempre,
la citocinesis acompaa a la mitosis en una secuencia coordinada de procesos.
61
62
transcripcin de Bcl2, pero no cuando se generan homodmeros p50/p50 que reprimen su expresin.
La activacin de endonucleasas es dependiente de
Ca++ y Mg++ y genera la digestin enzimtica (endonuclelisis) y, por lo tanto, los fragmentos de DNA. En
este sentido es importante el papel de las enzimas fijadoras de calcio, como la calmodulina, que a travs de la
activacin de la adenilatociclasa causan un aumento de
AMPc y de la actividad proteincinasa que generan la
muerte celular.
(Captulo 3)
cromosmico de una especie es mantenida por la mitosis. Las molculas y estructuras citoplasmticas aumentan en nmero; en la fase S los cromosomas se duplican
y en la fase G2 comienza la condensacin de los cromosomas y el ensamblado de las estructuras especiales
requeridas para la mitosis y la citocinesis. Durante la
mitosis, los cromosomas duplicados son distribuidos
entre los dos ncleos hijos, y en la citocinesis se divide
el citoplasma, separando la clula materna en dos clulas hijas (figura 31).
Fase o intervalo G1
MITOSIS
La interfase es el periodo durante el cual la clula crece,

replica su DNA y se prepara para la siguiente divisin.
Este periodo est comprendido entre divisiones celulares y es la fase ms larga del ciclo celular, ocupando casi
95% del ciclo. Consta de varias fases (G1, S y G2).
A excepcin de los gametos (del griego gametes, esposo, y gamete, esposa), cada clula somtica de un individuo posee un nmero idntico de cromosomas (46
sencillos o 23 pares en el ser humano). De cada progenitor proviene un miembro del par. Cada miembro del par
se denomina homlogo y as el ser humano tiene 23 pares de homlogos. El nmero original de cromosomas
de una clula se denomina nmero diploide (del griego
di, doble, y ploos, pliegue). La continuidad del nmero
G (del ingls gap, intervalo) es la primera fase del ciclo

celular en que existe crecimiento celular con sntesis de
protenas y de RNA. En esta fase tienen lugar las actividades de la clula: secrecin, conduccin, endocitosis,
etc. Comenzando a partir de la citocinesis de la divisin
anterior, la clula hija es pequea y posee un bajo contenido de ATP resultante del gasto efectuado en el ciclo
anterior, por lo que en este periodo se produce la acumulacin del ATP necesario y el incremento de tamao
celular. Es el periodo que trascurre entre el fin de una
mitosis y el inicio de la sntesis de DNA. En esta fase la
clula es diploide o 2n; tiene una duracin de entre 6 y
12 h y durante este tiempo la clula duplica su tamao
y su masa debido a la continua sntesis de todos sus componentes como resultado de la expresin de los genes
que codifican las protenas responsables de su fenotipo
particular. Es el periodo que ms variacin de tiempo
La clula duplica su tamao

Clulas Fase G
1
hijas
Se separan
los dos juegos
de cromosomas
Fase S
Divisin
clular
Mitosis
El citoplasma
se divide
Duplicacin del DNA (4n)

y protenas asociadas
Fase G 2
Los cromosomas
empiezan a condensarse
Figura 31. Esquema del ciclo celular. La divisin celular se compone de mitosis o divisin del ncleo y citocinesis o divisin del
citoplasma. La mitosis ocurre despus de completarse las tres fases preparatorias que constituyen la interfase: fase G1, S y G2.
Biologa celular y molecular de las clulas madre

presenta, pudiendo durar das, meses e incluso aos. Las
clulas que no se dividen nuevamente (como las neuronas y las del msculo esqueltico) pasan toda su vida en
este periodo, que en estos casos se denomina G0.
Intervalo S o fase S
Es la fase de sntesis o replicacin del DNA y es la segunda fase del ciclo. Comienza cuando la clula adquiere el tamao suficiente y el ATP necesario. Con la
duplicacin del DNA el ncleo contiene el doble de protenas nucleares y de DNA que al principio. Tiene una
duracin de unas 6 a 8 h (figura 32).
Fase G2
Es el tiempo que transcurre entre la duplicacin del
DNA y el inicio de la mitosis. Dado que el proceso de
sntesis consume gran cantidad de energa, la clula entra nuevamente en un proceso de crecimiento y adquisicin de ATP que proporcionar energa durante el proceso de mitosis. En esta fase contina la duplicacin de
protenas y RNA, y el contenido de DNA es tetraploide
Organismo diploide
unicelular
Organismo diploide
multicelular
Fecundacin
Mitosis
Gametos
haploides
Cigoto
diploide
Mitosis
Mitosis
Mitosis
Organismos
diploides
Organismo
diploide
Figura 32. Esquema de la divisin celular. A. Organismos

unicelulares. La divisin celular es una verdadera reproduccin, ya que por este mecanismo se producen dos clulas
hijas. B. Organismos multicelulares. stos derivan de una
sola clula o cigoto que da origen al organismo completo por
medio de divisiones mltiples y repetidas.
63
o 4n. Si se observa al microscopio, se perciben cambios

en la estructura celular que indican el principio de la
divisin celular. Tiene una duracin de entre 3 y 4 h.
Los organismos multicelulares se derivan de una sola
clula o cigoto. Las divisiones mltiples de sta y sus
descendientes determinan la formacin, desarrollo y
crecimiento del individuo. Sin embargo, en organismos
unicelulares la divisin celular es en realidad una verdadera reproduccin, ya que por este proceso se producen
dos clulas hijas idnticas a la clula progenitora.
La mitosis es el proceso de separacin de cromosomas y divisin de las clulas eucariotas, clulas somticas (clulas no germinales) que llevan la copia del material gentico. Este proceso asegura que cada clula que
nace de otra tenga los mismos datos genticos que la
clula madre. La mitosis cumple la funcin de distribuir
los cromosomas duplicados de tal modo que cada nueva
clula obtenga una dotacin completa y similar a la clula madre y a su clula hermana de cromosomas. La
capacidad de la clula para llevar a cabo esta distribucin depende del estado condensado de los cromosomas
durante la mitosis y del acoplamiento de microtbulos
denominado huso mittico. En los estadios tempranos
de la mitosis, cada uno de los cromosomas consiste en
dos copias idnticas, llamadas cromtidas, que se mantienen unidas por sus centrmeros. Al mismo tiempo se
organiza el huso, cuya formacin se inicia a partir de los
centrosomas. Tanto en las clulas animales como en las
vegetales, el entramado del huso est formado por fibras
que se extienden de los polos al ecuador de la clula.
Otras fibras estn unidas a las cromtidas al nivel de los
cinetocoros (protenas asociadas con los centrmeros).
La profase finaliza con la desintegracin de la envoltura nuclear y la desaparicin de los nucleolos. Durante
la metafase (del griego meta, despus), las cromtidas,
dirigidas por las fibras del huso, se mueven hacia el centro de la clula. Al final de la metafase se disponen en el
plano ecuatorial. Durante la anafase (del griego ana, en
oposicin) se separan las cromtidas hermanas y migran
a los polos opuestos. Durante la telofase (del griego telos,
finalizacin) se forma una envoltura nuclear alrededor de
cada grupo de cromosomas, el huso comienza a desintegrarse y los cromosomas se desenrollan para entrar nuevamente a interfase. El plano de la divisin celular se
establece en la fase G2 tarda del ciclo celular, cuando los
microtbulos del citoesqueleto se reorganizan en una
estructura circular conocida como banda de preprofase.
Aunque esta banda desaparece al comenzar la profase,
determina la ubicacin futura del ecuador y de la placa
celular. Los microtbulos de la banda se reensamblan
luego en el huso, en una zona clara que se origina alrededor del ncleo en el curso de la profase (figura 33).
64
(Captulo 3)
Simtrico
A
Clula
madre
Asimtrico
Cromosomas
condensados
C
B
Cromatina
Clulas
hijas
Clula madre
Clulas diferenciadas
Figura 33. En la interfase, los cromosomas son visibles dentro del ncleo slo como delgadas hebras de material filamentoso
llamado cromatina. Por medio del proceso de mitosis los cromosomas se distribuyen de tal manera que cada nueva clula obtiene
la mitad del material gentico. A. Cuando comienza la mitosis, los cromosomas condensados, que ya se duplicaron durante la
interfase, se hacen visibles bajo el microscopio ptico. Finalmente, la divisin celular mittica produce dos clulas hijas genticamente idnticas a la clula original. 1. Mitosis. 2. Profase. 3. Metafase. 4. Anafase. 5. Telofase. 6. Citocinesis. B. Fisin binaria
en bacterias: este mecanismo de reproduccin celular es asexual, y se muestra una bacteria dividindose por la mitad (citocinesis). C. Divisin celular asimtrica de las clulas madre.
MEIOSIS
Su nombre deriva del griego meiosis, reduccin, y

meion, menor. Es un proceso de reduccin cromosmica a la mitad pero sin perder la informacin gentica que
mantiene los rasgos estructurales y funcionales del organismo. En la meiosis I (etapa reduccional) se reduce
el nmero diploide (4n) de cromosomas a la mitad o
haploide (2n), pero aun los cromosomas son dobles. En
la meiosis II (etapa ecuacional) se mantiene el nmero
cromosmico haploide (del griego palos, nico) conseguido en la etapa anterior, pero los cromosomas son
simples (1n). La n significa 23 cromosomas simples.
La meiosis proporciona, a travs de la reproduccin
sexual, una variabilidad gentica gracias al sobrecruzamiento, y la reduccin evita que en la fecundacin haya
un alto nmero de cromosomas con el mismo material
gentico que el de las clulas progenitoras, lo que les da
ventaja gentica a los organismos superiores que se perpetan por reproduccin sexual.
En las clulas germinales, la meiosis es el proceso de
divisin celular en el que se forman los gametos haploides a partir de las clulas germinales diploides. En la fecundacin, los gametos (vulos y espermatozoides) haploides se fusionan, restablecindose en el cigoto el
nmero diploide. Las clulas somticas son diploides
durante casi todo el ciclo de vida, mientras que los ga-
metos son haploides. Los errores en la meiosis son responsables de las principales anomalas cromosmicas.
La meiosis tiene una primera divisin reduccional,
meiosis I o primera divisin meitica, y una segunda divisin ecuacional, meiosis II o segunda divisin meitica. Entre estas dos etapas consecutivas no existe la
etapa S, por lo que no se duplica el material gentico,
sino que se reduce. A partir de una clula 4n se obtienen
cuatro clulas 1n. En la especie humana, a partir de cada
espermatocito primario diploide se forman, en el hombre, cuatro espermtides haploides, que posteriormente
se diferencian en cuatro espermatozoides (figura 34).
Por otra parte, en la mujer cada ovocito primario diploide formar un solo ovocito haploide; los ncleos haploides restantes forman los cuerpos o corpsculos
polares que se desintegran (figura 35).
Control del ciclo celular

En el ao 2001, Paul M. Nurse, Leland H. Hartwell y R.
Timothy Hunt obtuvieron el premio Nobel de Medicina
y Fisiologa por haber descubierto las ciclinas y las cinasas dependientes de ciclinas o CDC (CDK, por sus siglas en ingls). La regulacin del crecimiento y de la
divisin celular es muy compleja. La divisin celular se
activa por las seales de transduccin intracelulares que
a su vez han sido puestas en marcha por la estimulacin

de los factores de crecimiento sobre sus receptores. El
ciclo celular est bajo un control gentico muy estricto
en el que interviene un complejo entramado de genes y
protenas que aseguran la normal proliferacin y divisin celular.
Una de las caractersticas que definen a las clulas tumorales es su capacidad para entrar en el ciclo celular
y progresar bajo condiciones en las cuales una clula
normal estara en periodo quiescente G0. La regulacin
del ciclo celular es fundamental para mantener el equilibrio homeosttico entre crecimiento celular, diferenciacin, supervivencia y muerte celular. En el adulto algunas clulas estn continuamente entrando en ciclo
celular; tal es el caso de las clulas hematopoyticas que
estn convenientemente activadas por los factores de
crecimiento, pero otras pasan largo tiempo en periodo
G0, como las clulas hepticas (de 1 a 2 aos), e incluso
toda la vida, como ocurre con las neuronas.
Puntos de restriccin del ciclo celular

El ciclo celular est finamente regulado. Esta regulacin ocurre en distintos momentos y puede involucrar
la interaccin de diversos factores; entre ellos la falta de
nutrimentos y los cambios en temperatura o pH pueden
hacer que las clulas detengan su crecimiento y su divisin. Cuando las clulas normales cesan su crecimiento
por diversos factores, se detienen en un punto tardo de
la fase G1, denominado punto de restriccin R o priEspermatocito
primario
despus de la
replicacin
de DNA
DNA 4n y
46 cromosomas
dobles
Meiosis I
DNA 2n y 23
cromosomas
dobles
Ovocito primario
despus de la
replicacin de
DNA
65
DNA 4n y 46
cromosomas
dobles
Meiosis I
DNA 2n y 23
cromosomas
dobles
Ovocito
secundario
Meiosis II
Ovocito
maduro
(22 + X)
DNA 1n y 23
cromosomas
dobles
Cuerpos polares
(22 + X)
Figura 35. Esquema de la meiosis en la mujer. Cada ovocito primario diploide 4n formar un solo ovocito haploide 1n;
los ncleos haploides restantes formarn los cuerpos o corpsculos polares que se desintegran.
mer punto de control del ciclo celular. En algunos casos,

antes de alcanzar el punto R, las clulas pasan de la fase
G1 a un estado especial de reposo, llamado G0, en el cual
pueden permanecer durante das, semanas o aos. Una
vez que las clulas sobrepasan el punto R, siguen necesariamente a travs del resto de las fases del ciclo y luego se dividen.
El punto de restriccin G2M se presenta al final de
la fase G2, en la que la clula debe comprobar dos condiciones antes de proseguir: que ha duplicado la masa celular para dar lugar a dos clulas hijas y que ha completado
la replicacin del DNA una sola vez (tetraploide o 4n).
El punto de restriccin M regula la fase de mitosis.
Slo permite continuar con la divisin celular si todos
los cromosomas estn alineados sobre el huso mittico
y ste est intacto (figura 36).
Espermatocito
secundario
CICLINAS
Meiosis II
(22 + X)
DNA 1n
y 23
cromosomas
simples
(22 + Y)
Espermtides
Figura 34. Esquema de la meiosis en el hombre. A partir

de cada espermatocito primario diploide 4n se obtienen cuatro espermtides haploides 1n, que posteriormente se diferenciarn en cuatro espermatozoides.
Las ciclinas son una familia de protenas que, como lo

indica su nombre, son sintetizadas y destruidas durante
una determinada fase del ciclo celular. Hasta la fecha se
han descrito las siguientes ciclinas: A, B1, B2, C, D1,
D2, D3, E, F, G1, G2, H, I, K, T1 y T2. Todas ellas contienen una regin comn conocida como secuencia
ciclina (cyclin box), de 150 aminocidos, que es un dominio relativamente conservado y responsable de la
unin y activacin de las CDC. Las mutaciones en esta
regin inhiben tanto la unin como la activacin. Las
66
Punto de
restriccin R
CDC 4/6 + ciclina D
CDC2 + ciclina E
Punto de
control G1
CDC2 + ciclina A
(Captulo 3)
cin del DNA. As, el complejo ciclina A/CDC2 parece

tener un papel en el control de la elongacin de la sntesis de DNA.
MUERTE CELULAR
PROGRAMADA (APOPTOSIS)
En la apoptosis pueden diferenciarse varias fases:

Punto de
control G1
Punto de
control G2
CDC2 + ciclina B/A
Figura 36. Modelo del motor CDCciclina durante el ciclo

celular en clulas eucariotas y de los puntos de restriccin. El
punto de restriccin R se manifiesta en la fase G1. El punto
de restriccin G2M se presenta al final de la fase G2. El
punto de restriccin M se ubica en la mitosis y slo permite
continuar con la divisin celular si todos los cromosomas
estn alineados sobre el huso mittico y ste est intacto.
ciclinas C, D y E (o ciclinas de G1) son protenas de vida

corta que funcionan principalmente durante la fase G1
y en la transicin de G1S, siendo destruidas por la va
de la ubicuitina.
Cinasas dependientes de ciclina (CDC)

Las cinasas anexan un grupo fosfato a las protenas. Las
CDC y las ciclinas son las principales controladoras del
ciclo celular, provocando que la clula pase de G1 a S o
de G2 a M. Las CDC son una familia de protenas cinasas que se unen a ciclinas especficas y son activadas por
ellas. Hasta la fecha se han descrito al menos nueve
CDC: CDC2 (tambin llamada CDC1, p34 o FPM, factor promotor de la fase M o factor promotor de la maduracin y que est formado por la CDC y las ciclinas que
desencadenan la progresin del ciclo celular, como
ciclina B), CDC2, CDC3, CDC4, CDC5, CDC6,
CDC7, CDC8 y CDC9. Las CDC4, CDC5 y CDC6 forman complejos con las ciclinas de la familia D y funcionan durante la fase G0/G1 del ciclo.
Una de las funciones de los complejos ciclina
D/CDC4 es fosforilar la protena del retinoblastoma
(Rb) y activar as la expresin de genes necesarios para
la entrada en la fase S. La CDC2 puede unirse tambin
a miembros de la familia de la ciclina D, pero ms
comnmente se asocia con las ciclinas A y E, y est
implicada en el inicio de la fase S, es decir, en la replica-
1. Efectora: adopcin sin retorno del compromiso

hacia la muerte. Se caracteriza por el aumento en
el contenido de calcio (Ca++) intracelular, que origina la activacin de ciertos grupos enzimticos
(endonucleasas y proteasascaspasas), junto con
cambios en el citoesqueleto celular, produciendo
cambios en el tamao y forma celular.
2. Degradativa: se degradan los cidos nucleicos y
hay ms cambios en la membrana celular. Los
cuerpos apoptsicos son fagocitados por macrfagos, impidiendo la salida del contenido celular al
exterior y evitando inflamacin. En esta fase se activan las endonucleasas que se encargan de fragmentar el DNA; adems, se producen cambios
marcados en el citoesqueleto y se condensa la cromatina.
3. Limpieza: los macrfagos (clulas fagocticas
que captan partculas extraas como polvo y carbn) eliminan todas las clulas apoptsicas, sin
que eso afecte al tejido circundante, atrados por
ligandos especficos; en el caso de los epitelios, las
clulas vecinas fagocitan los cuerpos apoptsicos
(figura 37).
Necrosis y apoptosis
En el organismo son comunes dos formas de muerte celular: necrosis y apoptosis. Las caractersticas morfolgicas de ambas permiten, en la mayora de los tejidos,
establecer claras diferencias. En la apoptosis destacan
las alteraciones morfolgicas del ncleo frente a las del
citoplasma, a la inversa de lo que ocurre en la necrosis
en general. A diferencia de la apoptosis, la necrosis es
una forma de muerte celular que resulta de un proceso
pasivo, accidental, y que es consecuencia de la destruccin progresiva de la estructura con alteracin definitiva de la funcin normal en un dao irreversible. Este
dao es desencadenado por cambios ambientales como
isquemia, temperaturas extremas y traumatismos. En la

Enzimas lticas
Prdida de
microvellosidades
y uniones
Cuerpo
apoptsico
Cambios nucleares
Fragmentacin
67
Cuerpo
apoptsico
Fagocitosis
Figura 37. Esquema de la apoptosis o muerte celular programada. Este proceso celular es dependiente de energa; al realizarse
de manera controlada, no afecta a las clulas vecinas. A. Cuando comienza este proceso, se sintetizan enzimas lticas y se producen cambios estructurales, lo que se llama cebamiento. B. Las clulas pierden contacto con sus vecinas, su citoplasma y su ncleo
se retraen y los cromosomas se fragmentan. C. Se forman los fragmentos apoptsicos por fragmentacin celular; el ncleo tambin se fragmenta. D. Las clulas vecinas fagocitan los cuerpos apoptsicos.
necrosis se observan numerosas clulas vecinas sometidas a este proceso, que cubren una extensin variable
con desintegracin. La destruccin de la membrana
celular permite el escape al exterior de elementos txicos que provocan un proceso inflamatorio que tendr
efecto nocivo en el organismo segn la extensin del
proceso y la cromatina sufre una dispersin irregular
(figura 38).
FAMILIAS DE MOLCULAS
RELACIONADAS CON LA APOPTOSIS
Receptores de muerte
Las molculas implicadas en el proceso de apoptosis
que se han mantenido a lo largo de la evolucin desarrollan un programa de apoptosis iniciado por seales que
provienen del interior celular. Cuando la clula es potencialmente peligrosa para el sistema donde est integrada, se pone en marcha la maquinaria de apoptosis
para eliminarla.
Los mamferos han desarrollado mecanismos para
llevar a cabo esta forma de apoptosis, que es especialmente importante en el sistema inmunitario. En la apoptosis instructiva tienen un papel fundamental los receptores de muerte, situados en la superficie de la clula, y
que reciben la seal de ligandos de muerte especficos
para cada uno de ellos. Los receptores pueden dar la
seal directamente a las caspasas en pocos segundos, disparando as el programa de apoptosis.
Los receptores de muerte pertenecen a la superfamilia del receptor del factor de necrosis tumoral (en espaol, FNT, y en ingls, TNF) (TNFR1), cuyos miembros
tienen en comn un dominio extracelular rico en cistena. Otro rasgo comn a todas estas molculas sealadoras de apoptosis es la presencia de una secuencia
situada en su dominio intracitoplasmtico, que servira
para acoplar al receptor con el resto de la maquinaria
apoptsica. La va de receptores transmembrana establece conexiones con el espacio extracelular, recibiendo seales proapoptsicas desde el exterior y de las clulas adyacentes. Existen dos familias de receptores de
muerte (figura 39):
Apoptosis
Plasmalema
intacto
Normal
Fragmentos
apoptsicos
Fuga de
material
nocivo
Necrosis
Fragmentacin
del plasmalema
Figura 38. Apoptosis y necrosis (esquema comparativo).

Centro, clula normal. A la derecha, signos de necrosis; a
la izquierda, cambios celulares de apoptosis con cuerpos
apoptsicos y conservacin de organelos hasta estadios
avanzados del proceso.
68

FasL
TNF
Mitocondria
Apoptosis
TNFR1
Fas
TRADD
FADD
Cas8
Citocromo C
Caseff
DNosa
Degradacin
de protenas
Muerte
celular
Figura 39. Esquema de la va de receptores transmembrana. Se muestran las dos familias de receptores de
muerte: protena CD95 (APO1/Fas) y receptor 1 del factor
de necrosis tumoral (TNFR1). Estas vas establecen conexiones con el espacio extracelular recibiendo seales proapoptsicas desde el exterior y activan el sistema de caspasas efectoras (Caseff) para inducir la apoptosis.
1. Protena CD95 (APO1/Fas).

2. Receptor 1 del factor de necrosis tumoral (TNFR1).
Familia de las caspasas

En el mecanismo molecular que controla la apoptosis actan varios agentes, de los cuales uno de los ms importantes y mejor estudiados es el complejo cisteinoasprtico, proteasas denominadas caspasas. Se han descrito 11
caspasas en clulas humanas que provocan una degradacin proteica bien definida hasta llegar a la formacin de
cuerpos apoptsicos. Algunas caspasas son iniciadoras y otras efectoras del proceso cataltico, y actan
sobre endonucleasas, que son las responsables directas
de la fragmentacin del DNA. La cadena de activacin
por corte proteica tiene sucesivos cortes dependientes de
la ubicacin del cido asprtico que se repite en la estructura de la enzima. Se han descrito hasta 40 sustratos en
la catlisis, proceso que en clulas cultivadas demora entre 30 y 40 min. La activacin de las caspasas, que existen
en calidad de procaspasas inactivas, se produce por diversas vas en que participan varios complejos moleculares.
La apoptosis se desarrolla por

vas dependiente e independiente
de caspasas
La muerte independiente de caspasas puede resultar del
estmulo causado por la permeabilizacin de la mem-
(Captulo 3)
brana lisosomal (LMP) con la subsiguiente liberacin

de catepsinproteasas. La va dependiente de caspasas
tiene dos rutas principales:
a. La va intrnseca involucra a MOMP, la cual resulta en el ensamblaje del complejo de activacin
de caspasas a travs de caspasa 9 y Apaf1 (el apoptosoma).
b. La va extrnseca involucra la estimulacin de
miembros de la familia de los receptores de TNF,
CD95 (Fas)Apo1, TRAIL (receptores de muerte).
Existen dos vas de sealizacin de apoptosis donde interviene la mitocondria en el panorama de muerte celular:
1. La primera es por medio de MOMP (mitochondrial outer membrane permeabilization), que ocasiona la creacin de un poro formado por las protenas de la familia de Bcl2, Bax y Bak, activadas
por su dominio BH3 en respuesta a una seal de
apoptosis, resultando en la liberacin de protenas
del espacio intermembrnico de la mitocondria incluyendo a citocromo C, Smac/DIABLO y Omi/
HtrA2. El citocromo C activa a APAF1, la cual
se oligomeriza y forma el apoptosoma, el cual activa a la caspasa 9. La caspasa 9 activa a las caspasas ejecutoras. El inhibidor de las caspasas (IAP)
bloquea la funcin de la caspasa 9 y es bloqueado
por Smac y Omi.
2. La segunda ruta de muerte celular es desencadenada por especies reactivas de oxgeno (ERO) que
cambian la permeabilidad de la membrana interna, provocando edema y ruptura de la matriz; este
tipo de muerte provoca un proceso semejante a la
muerte por necrosis. Mientras que las evidencias
indican que estas dos rutas de apoptosis a travs de
la mitocondria son distintas, se cree que puede haber superposicin entre ellas.
APOPTOSOMA
En todos estos sistemas, el complejo formado por receptores, adaptadores y procaspasa 9 se denomina apoptosoma. Es la formacin de este complejo lo que da lugar
a la activacin de la procaspasa 9. En el caso de Apaf1,
para llevar a cabo el proceso de formacin de este apoptosoma es necesaria la presencia de ATP y de citocromo
C. De esta manera, la liberacin de citocromo C por
parte de la mitocondria puede mediar la activacin de la
procaspasa 9.
69
Cuadro 31. Marcadores de superficie de las clulas madre pluripotentes

Tipo de clula
Antgeno
SEA1
SSEA3
SSEA4
TRA160
TRA181
GCTM20
CD9
Osteopontino
PECAM1
(CD31)
28 clulas
Mrula
MCI
Trofoblasto
hECC
hESC
++
++
+++
++
+
+
+
+
+
+
++
+
+
+
+
+
+
++
+++ = muy alta expresin; ++ = alta expresin; + = expresin; = sin expresin (espacios en blanco); MCI = masa celular interna; hECC = clulas
de carcinoma embrionario; hESC = clulas madre embrionarias humanas.
Clulas madre embrionarias (ESC)

Todas las clulas que conforman al organismo humano,
incluyendo las clulas madre del adulto (ASC), provienen de las clulas madre embrionarias (ESC). Estas
clulas expresan antgenos embrionarios estadioespecficos (SSEA), fosfatasa alcalina y gran cantidad de telomerasa. En los mamferos, las clulas de la masa celular
interna son pluripotenciales. Despus de la implantacin,
las clulas pluripotenciales se restringen al epiblasto del
embrin. Las clulas del epiblasto son autorrenovables
y pluripotentes hasta el periodo de gastrulacin, cuando
de manera progresiva se diferencian en las tres capas
germinativas y sus derivados (cuadro 31).
La adquisicin y el mantenimiento de la capacidad
pluripotente de las ESC del ratn requieren el efecto
aditivo del factor inhibitorio de la leucemia (LIF) y de
la protena morfognica de hueso (BMP). Las protenas
BMP inducen la expresin de genes inhibitorios de la
diferenciacin por medio de la transcripcin de factores
Smad. LIF activa STAT3, de este modo STAT3 activa
los factores transcripcionales de homeodominio OCT4
y Fox D3. Un factor transcripcional que recientemente
se identific y que es independiente de LIF/STAT3 es
Nanog, muy importante para la pluripotencialidad y autorrenovacin de las ESC tanto en ratones como en humanos.
Las ESC dan lugar a las capas germinativas del embrin conocidas como ectodermo, mesodermo y endodermo, y se pueden obtener en cultivo celular (figura
310).
Todos los tejidos diferenciados del adulto derivan de
estas tres capas. A medida que avanza la ontognesis,
las clulas de las capas germinativas se diversifican de
manera progresiva en patrones espaciales especficos
para controlar la morfognesis. De manera ms avanzada en el desarrollo, la diversificacin precede a la determinacin de cada clula progenitora del fenotipo celular en cada tejido. Las clulas madre se dividen para
amplificar la cantidad de clulas progenitoras, las que
finalmente se diferencian a clulas funcionales. El sistema nervioso es un tejido derivado del ectodermo, y los
sistemas urogenital, musculoesqueltico y cardiovascular de manera primaria son derivados mesodrmicos.
La piel, el aparato digestivo y el respiratorio se forman
de componentes derivados del ectodermo, el mesodermo y el endodermo, mediante vas de sealizacin complejas dependientes de Ca2+ y citocinas (figura 311).
B
Trofoblasto
C
Anticuerpos
Complemento
MCI = Masa
celular
interna
E
Cultivo
Figura 310. Obtencin de lnea celular de clulas madre
(ES) por inmunociruga. A. Blastocistos. B. Incubacin con
anticuerpos. C. Incubacin con complemento. D. Lisis del
trofoblasto. E. Cultivo de las clulas de la MCI.

Citocinas
Canal de Ca2+
Ca2+
Receptor de citocinas
Fosforilacin de
protenas
Apoptosis
Expresin gnica
Proliferacin
Diferenciacin
Figura 311. Vas de sealizacin en la proliferacin y diferenciacin de las clulas madre.
Los cultivos de ESC humanas se establecieron a partir de blastocistos humanos congelados que provienen
de fertilizacin in vitro y que se utilizan para reproduccin asistida y a partir de clulas germinativas primordiales de embriones de cinco a nueve semanas de edad.
Para crear ESC, la masa celular interna (MCI) se re-
(Captulo 3)
mueve del blastocisto y se disocian las clulas, que se

cultivan sobre una capa de fibroblastos alimentadores.
En la actualidad ya es posible obtener clulas madre
pluripotenciales a partir de clulas madre del adulto,
mediante el proceso de desdiferenciacin. Las clulas
madre crecen al adicionarse el factor FGF2 para el humano; este factor mantiene a las clulas en un estado indiferenciado (figura 312).
Despus de que estas clulas son desprovistas del factor
FGF2, se siembran a alta densidad en cultivo en suspensin en medio con metilcelulosa; las clulas se diferencian en cuerpos embrioides que contienen precursores
de los tejidos derivados de cada capa germinal. Los
cuerpos embrioides se transfieren a condiciones de cultivo que facilitan la adhesin a un sustrato. Aqu las clulas crecen y se diferencian en diversos tipos celulares
especficos. En el grupo de investigacin de los autores
se han establecido protocolos que permiten llevar a
estas clulas hacia la diferenciacin de neuronas, cardiomiocitos, condrocitos, clulas pancreticas, etc.
(figura 313). A partir de ESC cultivadas se han caracterizacin los mecanismos moleculares de la pluripotencialidad, que son:
Flujo de
diferenciacin
Ectodermo
70
Clulas madre
Clulas madre de
carcinoma embrionario
del adulto
Cerebro y nervios
Piel
Glndulas
Cigoto
Teratomas
Sangre
Clulas madre
pluripotenciales generadoras
de todos los tipos de
clulas especializadas
Feto
Endotelio
Mesodermo
Cultivos de
clulas madre
Adulto
Blastocisto
Rin
Corazn
Hueso
Masa celular
interna
Clulas madre
embrionarias germinales
Clulas madre
embrionarias
Figura 312. Origen de las clulas madre humanas pluripotentes; actualmente se obtienen desdiferenciando clulas
madre adultas.
Endodermo
Msculo
Clulas germinales
primordiales (PGC)
Pncreas
Hgado
Figura 313. Potencial regenerador de las clulas madre

generadas en cultivos celulares.

1. La influencia de algunos factores extracelulares
sobre la pluripotencialidad y la autorrenovacin
(ligandos, citocinas y receptores).
2. Vas de sealizacin activadas en clulas pluripotenciales (como las vas JakSTAT y cascadas de
cinasas tipo ERK).
3. Programas genticos transcripcionales que operan
en las clulas pluripotenciales.
4. La funcin y regulacin gentica durante el desarrollo temprano del embrin.
Oct4
Oct4
Sox2
Nanog
71
Oct4
FoxD3
Rex1
Fgf4
Uf1
Control de la transcripcin
Fbx15
Las ESC se cultivan en una capa de fibroblastos que secretan el factor LIF, tambin conocido como factor que
inhibe la diferenciacin o factor inhibidor de leucemia.
Este factor pertenece a la familia de interleucina 6, que
incluye a la misma IL6, a la oncostatina M, al factor
neurotrfico ciliar (CNTF) y a la cardiotrofina 1. Estos
factores actan en muchas clulas, por lo que se dice que
tienen un efecto pleiotrpico y son capaces de mediar,
dependiendo del tipo celular, la proliferacin y la diferenciacin, o ambas funciones.
Estos procesos son regulados por diferentes factores
que inducen el crecimiento y la diferenciacin e incluyen factores solubles y aqullos anclados en la membrana celular y componentes de la matriz extracelular.
Existen citocinas que actan sobre la va de la superfamilia de receptores para citocinas y que se caracterizan
por activar cinasas de tirosina no receptoras de la familia janus cinasa (JAK) que fosforilan residuos de tirosina en el receptor y tambin activan a la familia de
molculas que pertenecen a transductores de seales y
activadores de la transcripcin (STAT). Esta va participa de manera destacada en la autorrenovacin de las
clulas madre embrionarias del ratn, lo anterior inducido por el factor inhibitorio de la leucemia (LIF, factor
Tbn
Tdgf1
Clula madre
pluripotencial inmortal
Ehox
hGDF3
Figura 314. Factores de trascripcin responsables de perpetuar la pluripotencialidad de las clulas madre en cultivos
celulares.
que se utiliza en los protocolos de propagacin de clulas madres embrionarias de ratn). La va descrita tambin participa en otras vas de transduccin de seales
activadas por medio de otros receptores, como el receptor tipo cinasa de tirosina (RTK), receptores acoplados
a protenas G, receptor para el factor transformante beta
y receptores tipo Wnt (figura 314). Entre los factores
que mantienen a las ESC indiferenciadas y multiplicndose est el LIF, que proviene de clulas fibroblsticas
embrionarias alimentadoras, adems de otros factores
de transcripcin (cuadro 32 y figura 315).
Cuadro 32. Factores de transcripcin y marcadores de pluripotencialidad

Tipo de clula
Antgeno
28 clulas
Mrula
ICM
Trofoblasto
hECC
hESC
Oct4
Sox2
Fgf4
Utf1
Rex1
FoxD3/gnesis
TDGF1/cripto1
Nanog
Taube nuss
hGDF3
Fbx15
++
++
+++
++
+
+
+
+
+
+
++
+
+
+
+
+
+
++
++, alta expresin; +, expresin; +/, baja expresin; espacios en blanco, desconocido. MCI = masa celular interna; hECC = clulas de carcinoma
embrionario humano; hESC = clulas madre embrionarias humanas.
72

ECM
LIF
ECM
FGF
Wnt
gp130/LIFR
PI3K
FGFR
BMPR1
Stat3
Stat3
Integrinas
GSK3
PI3K
?
ASmad
Stat3
Akt
Stat3
m = murino
h = humano
Oct4
Membrana
celular
JAK
JAK
beta
catenin
BMP4
ECM
Integrinas
(Captulo 3)
Nanog
myc
m/hESC
SOCS
myc
mESC
CoSmad
Id
hESC
mESC
Ncleo
Figura 315. Mapa de las vas de sealizacin que regulan la autorrenovacin de las clulas madre pluripotenciales.
CITOCINAS INVOLUCRADAS EN LAS

VAS DE SEALIZACIN DE LAS ESC
La superfamilia de receptores para citocinas comprende

protenas transmembrnicas que pueden formar homodmeros o heterodmeros, e incluso formar oligmeros
o la unin de uno o ms ligandos. La unin de ligando
a estos receptores genera cambios conformacionales en
la regin intracelular del receptor y provoca el reclutamiento o la activacin de cinasas de tirosina de la familia JAK (JAK1, JAK2, JAK3 y Tyk2), o ambos. El receptor activado fosforila residuos de tirosina en las
molculas cinasas y en la regin citoplsmica del mismo receptor; lo anterior forma los sitios de anclaje para
los integrantes de la familia STAT (STAT1, STAT2,
STAT3, STAT4, STAT5a, STAT5b y STAT6) y para otras
protenas con dominios homlogos a SRC 2 (SH2).
Las interacciones anteriores que suceden en la parte
interna o citoplsmica de los receptores activados promueven la formacin de homodmeros STAT que viajan
al ncleo y se unen a secuencias promotoras (elementos
de unin a STAT) que regulan genes. Es posible que los
receptores de citocinas, en lugar de activar la va de protenas STAT, se involucren en estimular las vas de la
protena cinasa activada por mitgenos (MAPK) y la de
cinasa de fosfatidil inositol 3 fosfato (PI3K).
El final de la sealizacin por citocinas se realiza por
varios mecanismos: las fosforilaciones se pierden por la
accin de fosfatasas llamadas fosfatasas SH2 (SHP2),

que tambin son reclutadas a la parte interna del receptor; la actividad transcripcional de STAT es inhibida por
el factor inhibidor de STAT activado (PIAS). Recientemente se han descubierto otros mecanismos de regulacin negativa, como la seal de supresin de citocinas
(SOCS) (cuadro 33).
La autorrenovacin de clulas madre

embrionarias depende de las citocinas
Austin Smith y col. aislaron la glicoprotena soluble que
inhibe la diferenciacin de las clulas madre y establecieron que la autorrenovacin depende de seales paracrinas de clulas alimentadoras (fibroblastos) sobre las
que se siembran las clulas madre en cultivo. Se caracteriz el factor LIF que se utiliza en la autorrenovacin
de las clulas madre, el cual es parte de la familia de las
interleucinas tipo IL6, que incluye a la misma IL6,
IL11, a la oncostatina M, al factor neurotrfico ciliar,
a la cardiotrofina 1 y a la citocina semejante a la cardiotrofina. Estas citocinas tienen efectos pleiotrpicos en
diferentes tipos celulares y activan genes blanco involucrados en la supervivencia, apoptosis, proliferacin,
diferenciacin y supresin de la diferenciacin.
El factor LIF se une con su receptor (LIFR) de baja afinidad y con el receptor gp130; este complejo es indispensable para la activacin de las vas JAKSTAT y MAPK,
como se ha demostrado en ratones mutantes (cuadro 34).
73
Cuadro 33.
Clase 1
GenBank
NM_002701
NM_003212
LO7335
NM_003240
AL558479
BF510715
NMN_009556
Unigene
Hs.2860
H2.75561
Hs816
Hs.25195
Hs. 125359
Hs.1755
Hs.335787
Class II
Gen
Oct3/4
TDGF1
Sox2
Lefty A
Thy1
FGF4
Rex1 (ZFP42)
SSEA3
SSEA4
TRA160
TRA181
TRA254
GCTM2
Marcadorers moleculares de las hESC en estadios indiferenciados de pluripotencialidad. Los de clase I estn bien caracaterizados, mientras que
los de clase II son antgenos de superficie que se estn caracterizando.
El problema principal en el cultivo de las clulas pluripotenciales madre es mantener la autorrenovacin inhibiendo la diferenciacin. Lo anterior se ha logrado
manteniendo las clulas con medio de cultivo sin suero,
que contiene componentes que sustituyen al suero y factor de crecimiento fibroblstico 2 que se ha visto que
mantiene a las clulas en proliferacin con pocos eventos de diferenciacin. Amit y col. demostraron que las
ESC pueden mantenerse con los factores FGF2, TGF
beta, LIF y con una matriz de fibronectina extracelular.
La ausencia de los factores que son miembros de la
familia de IL6, la eliminacin de la capa de fibroblastos alimentadores y la inactivacin de las protenas
STAT3 llevan a las ESC a diferenciarse.
Las evidencias de estudios en la expansin de clulas
madre hematopoyticas sugieren que el control de diferenciacin proviene de la concentracin de citocinas del
microambiente, de tal forma que cuando disminuyen
puede inducirse la diferenciacin y cuando aumentan se
favorece la autorrenovacin.
Otro factor de transcripcin importante para mantener
la pluripotencialidad es Oct 3/4; un incremento de dos
veces su expresin induce la formacin de endodermo
primitivo y mesodermo. Hace poco tiempo, un grupo de
investigacin descubri que la protena con dominios
homeo llamada Nanog es otra clave en la regulacin de
la pluripotencialidad. En los embriones en el estadio de
preimplantacin se ha observado que se requiere la expresin de este factor para la formacin de las clulas
del epiblasto. De este modo Nanog es capaz de restrin-
gir el potencial de diferenciacin generado por Oct 3/4.

Tanto Oct 3/4 como Nanog son importantes para
mantener la identidad de las ESC LIF en combinacin
con BMP4 (protena de morfognesis de hueso 4) es capaz de mantener la pluripotencialidad y capacidad de
autorrenovacin de las clulas madre pluripotenciales.
La funcin de BMP es inducir la expresin de un factor
inhibitorio de la diferenciacin Id por medio de la va de
las protenas Smad, y LIF y Oct4 mantienen la pluripotencialidad (figura 316).
Vas de transduccin de seales en las

clulas madre pluripotenciales humanas
Las clulas madre pluripotenciales humanas (ChESC)
se derivan de la masa celular interna (MCI) en los das
5 a 8 del estado de blastocisto o mrula embrionarios
(figura 317). Estas clulas tienen un cariotipo estable,
se renuevan y tienen un gran potencial para diferenciarse en clulas de las tres capas germinativas, tanto in
vitro como in vivo. Las hESC representan una esperanza
como fuente de clulas para la terapia celular, para el
desarrollo de frmacos y como modelos del desarrollo
temprano del humano.
Para obtener las hESC es necesario aislar la MCI a
partir del trofoectodermo por medio de la inmunociruga (que con anticuerpos elimina clulas ajenas a la
MCI) o por aislamiento mecnico. Las clulas se cultivan sobre una capa de fibroblastos embrionarios de ra-
Cuadro 34.
Gene
LIF
LIFR
gp130
STAT3
OCT4
Ratones mutantes
Desarrollo a trmino y frtiles entre 25 y 30%
Mueren a los 25 das de nacidos
Mueren a los 12 das de nacidos
Desarrollan blastocisto sin MCI
Desarrollo hasta blastocisto
Expresin de la embriognesis
Trofoectodermo y membranas extraembrionarias
MCI y tejido extraembrionario
MCI y tejido extraembrionario
Diferentes tejidos embrionarios
Mrula, MCI y clulas germinales primordiales (CGP)
74

Accin de las citocinas en el desarrollo
Fertilizacin
Recin nacido
(MEC), como fibronectina y matrigel. Sin embargo, estas combinaciones de sustratos se complementan con
suero o con clulas alimentadoras, que tienen el problema de una posible contaminacin con patgenos de otra
especie. Recientemente se ha ensayado un sistema de
cultivo libre de clulas alimentadoras de otra especie,
resolvindose el problema al derivar clulas alimentadoras de las mismas clulas madre pluripotenciales humanas. Tambin se pueden mantener hESC indiferenciadas
en suero humano usando medios en el desarrollo de clulas alimentadoras autlogas.
Adulto
Factores de autorrenovacin y
marcadores de pluripotencialidad de las
clulas madre pluripotenciales humanas
Ncleo
Oct4
Stat3
Blastocisto
Gastrulacin
12.5
gp130
LIFR
LIF
Organognesis
Figura 316. Citocinas y vas de sealizacin en el desarrollo. LIF y Oct4 matienen la pluripotencialidad y la autorrenovacin de las clulas madre.
tn que mantiene, por medio de factores de crecimiento,

indiferenciado el cultivo de clulas embrionarias. Sin
embargo, esto representa un problema porque con el uso
de otra especie en el cultivo de clulas humanas se corre
el peligro de contaminacin con virus o patgenos
extraos (figura 310).
Para solucionar lo anterior se ha probado con una
combinacin de componentes de la matriz extracelular
Mrula
Ectodermo
Blastocisto
Pluripotente
ESC
MCI
Clulas
germinales
Mesodermo
CBP
EGC
Endodermo
In vitro
Ectodermo
Mesodermo
Se conocen en la actualidad muchos marcadores de pluripotencia y autorrenovacin que se describen en los

cuadros 32 y 35.
Marcadores de superficie celular

Las hESC indiferenciadas se pueden caracterizar por la
expresin de marcadores de superficie como el antgeno
especfico de estadio embrionario (SSEA) 3 y 4, por el
Cuadro 35. Marcadores de

autorrenovacin y pluripotencia
de las hESC y mESC
Antgeno
Cigoto
Totipotente
(Captulo 3)
Endodermo
Multipotente
Progenitor
rganos
In vitro
Figura 317. Potencialidad y capacidad de diferenciacin y
regeneracin de las ESC obtenidas de la MCI de un blastocisto in vitro o in vivo.
SSEA1
SSEA3
SSEA4
TRA160
TRA181
TRA249
TRA254
GCTM2
Fosfatasa alcalina
Telomerasa
TRF1
TRF2
Nanog
Oct3/4
Sox2
Rex1
Foxd3
Dppa5/Esg1
FGF4
hESC
mESC
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+ (variable)
+ (variable)
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+

antgeno de rechazo tumoral (TRA) y por el marcador
tumoral de clula germinal (GCTM). Una caracterstica
comn a las clulas ESC de humano y de ratn es la alta
expresin de la enzima fosfatasa alcalina.
Nanog, Oct3/4 y Sox2
Niveles de Oct3/4
Elongacin
Translocacin
Nanog es un factor de transcripcin tipo secuencia hometica, esencial en el mantenimiento de la masa celular interna in vivo y en las ESC in vitro. Nanog est presente en la MCI y en las poblaciones celulares mESC y
hES indiferenciadas y se regula a la baja cuando existe
diferenciacin. En el ratn, la eliminacin de Nanog genera una diferenciacin del endodermo primitivo. Al
analizar clulas pluripotenciales manipuladas por eliminacin de genes se deduce que Nanog es capaz de mantener la pluripotencia al suprimir la expresin de los factores transcripcionales Gata4/Gata6/Cdx. No se conocen
por completo los mecanismos involucrados en la regulacin de Nanog. Sin embargo, se sabe que posee un
efecto pivote en la transcripcin de los factores Oct3/4 y
Sox2, que tienen regiones de unin muy cercanas a la
regin promotora de Nanog (figura 316 y cuadro 35).
Oct3/4 es un factor de transcripcin de dominios
POU que regula genes al unirse a la secuencia octamrica repetida AGTCAAAT dentro de la regin promotora de los mismos. El factor transcripcional Oct3/4
acta en conjunto con el factor Sox2, un miembro de la
familia Sox de factores transcripcionales con box HMG
(secuencia aminoacdica caracterstica de estos factores
transcripcionales), que se unen a regiones cercanas a los
repetidos octmeros de Oct3/4. Estos factores tienen
una funcin importante en la autorrenovacin y son expresados en concentracin elevada en las lneas de clulas ESC.
Endodermo y
mesodermo
1.5
1.0
75
Clulas madre
pluripotenciales
(ESC)
0.5
Trofoectodermo
Figura 318. La prdida de Sox2 tambin contribuye al desarrollo del endodermo extraembrionario. Se cree que el
complejo OctSox puede regular regiones promotoras de
Fgf4, Utf1 y Fbx15.
Elongacin
Figura 319. Perpetuidad de la longitud de los telmeros

por la telomerasa en cada ciclo celular. Los telmeros contienen secuencias repetidas del hexanucletido TTAGGG.
TR = RNA de la telomerasa; TERT = trascriptasa reversa de
la telomerasa.
Las variaciones en la expresin de estos factores

influyen en el destino de las clulas ESC; por ejemplo,
los incrementos en Oct3/4 promueven la formacin de
endodermo y mesodermo (figura 318) y si baja la
expresin de stos se promueve la aparicin del trofoectodermo.
TELOMERASA
Los telmeros son secuencias de DNA que protegen los

extremos de los cromosomas eucariticos manteniendo
estabilidad y evitando la fusin entre cromosomas y la
prdida de informacin. Estas estructuras tienen la
secuencia hexanucleotdica bsica TTAGGG repetida
en serie que sobresale del cromosoma y se pliega sobre
s misma formando una estructura de asa en T. En las
clulas somticas los telmeros se acortan con cada
divisin celular. Eventualmente los telmeros se acortan tanto que alcanzan un tamao crtico y las clulas
entran en senescencia o en apoptosis. Las clulas y tejidos con capacidad de autorrenovarse y que proliferan
rpidamente superan este problema por medio de la
expresin de la enzima telomerasa. La telomerasa est
formada de dos subunidades: una transcriptasa reversa
y un componente de RNA telomerasa que porta una secuencia de RNA molde (figura 319).
Las clulas madre pluripotenciales humanas expresan elevadas concentraciones de la enzima telomerasa
y de su actividad que disminuyen durante la diferenciacin. As, se considera la expresin de la telomerasa
76
Figura 320. Va de sealizacin de LIF/ERK. Esta va

recluta las cinasas JAK que activan la va STAT3 e induce
la transcripcin.
como un marcador de indiferenciacin en las hES, lo

que tambin les confiere la propiedad de inmortalidad
cuando se mantienen en cultivo celular.
Factores extrnsecos de autorrenovacin
de las clulas madre embrionarias
La seal de LIF
En 1981 el grupo de Martin y col. aisl de la MCI de
blastocistos murinos una poblacin de clulas ES que
mantuvieron sobre cultivos de clulas alimentadoras
STO/MEF (clulas de fibroblasto murino/fibroblastos
embrionarios murinos). Sin embargo, cuando las clulas se pasaban a un plato de cultivo cubierto de gelatina,
las clulas sufran diferenciacin, lo que sugera que las
clulas alimentadoras producan factores necesarios
para mantener la autorrenovacin prolongando la proliferacin de las mESC.
Estas observaciones fueron apoyadas por los hallazgos de Smith y col. en 1987, que fueron capaces de mantener indiferenciadas mESC en ausencia de clulas alimentadoras al utilizar medio de cultivo condicionado a
partir de clulas de hgado de rata bfalo. Los anlisis
del medio condicionado identificaron un factor de 20 a
35 KDa polipeptdico que llamaron DIA (actividad
inhibitoria de diferenciacin).
Posteriormente se vio que el DIA se sustitua sin problemas con el factor LIF (factor inhibitorio de la leucemia mieloide), el cual es similar al DIA en estructura y
funcin. El LIF es un miembro de la familia de las citocinas IL6 y se une a un receptor que forma un complejo
de dos protenas transmembrnicas que son LIFRb y
gp130. La unin de LIF a su receptor genera el reclutamiento de protenas JAK cinasas por debajo de la mem-
(Captulo 3)
brana y activa la va de sealizacin de STAT3 e induce

la expresin de genes que participan en la autorrenovacin (figura 320).
Diferentes factores se han implicado en la regulacin
de la va de LIF, entre los que se incluye al factor trombopoyetina de crecimiento megacarioctico (Tpo) que
activa a STAT3, IGF2 y CD9. No existe a la fecha evidencia que involucre a la va de sealizacin de LIF con
Nanog/Oct3/4/Sox2 y viceversa. LIF es esencial para el
mantenimiento de las mESC en un estado indiferenciado in vitro. Sin embargo, otros factores del suero como
BMP tambin estn involucrados en el mantenimiento
de la autorrenovacin de las mESC. Tambin se ha visto
que la unin de LIF a su receptor inicia seales antagnicas a la autorrenovacin, por ejemplo la activacin de
la va de ERK que promueve la diferenciacin.
Despus de la estimulacin de la protena transmembrnica gp130, la protena SHP2 unida al receptor es
fosforilada y recluta un complejo formado por la protena 2 de unin a factor de crecimiento (Grb2) y a la
protena SOS (hija de seven less), que es un factor intercambiador de nucletidos de guanina. El reclutamiento
de SOS en la membrana (por debajo de la misma) activa
a la protena G Ras, con el reclutamiento de la protena
Raf. De esta manera, RAF es fosforilado y activa una
cascada formada por cinasas que fosforilan una tras otra
MAPK/ERK cinasas (MEK); los factores transcripcionales activados se translocan al ncleo e inician la transcripcin de genes asociados con la diferenciacin (figura 320).
El balance entre las vas de LIF y ERK tiene una importante funcin en la regulacin de la autorrenovacin
y determina el destino de las mESC indiferenciadas. El
receptor LIFRb y gp 130 tambin se expresan en las lneas de hESC; se ha reportado la activacin de la va de
STAT por el LIF humano. Sin embargo, esto no es suficiente para mantener la pluripotencia in vitro; se ha visto que Nanog, Oct3/4 y TRA son regulados de manera
negativa cuando se activa la va dependiente de gp 130.
Va de transduccin de seales de TGFb

La va de TGFb est involucrada en un amplio rango de
decisiones del destino celular y otros procesos celulares
(p. ej., proliferacin celular, diferenciacin y apoptosis)
tanto en el periodo embrionario como en el estado adulto. Hay dos ramificaciones de la seal de TGFb implicadas en el proceso de autorrenovacin en las ESC: la va
TGFb/nodal/activina y la va de la BMP (protena morfogentica de hueso), que ms adelante se abordan.
77
Va de transduccin de seales
TGFb/nodal/activina
Esta va, que depende de la seal de TGFb, involucra la
activacin de Smad2/3, la cual es fosforilada y forma
complejo con coSmad4 antes de que se transloque al
ncleo. La regulacin negativa depende de Smad 7, que
es inhibitoria (figura 321). La importancia de la activacin de Smad2/3 en la autorrenovacin de las hESCs se
ha demostrado de manera reciente.
Va de nodal
En vertebrados, nodal es un inductor del mesodermo y
endodermo involucrado en la determinacin de los ejes
derecho e izquierdo en los embriones de ratn, pollo y
rana. La sobreexpresin de nodal activa el desarrollo del
mesodermo en embriones de pollo, Xenopus, pez cebra
y ratn. Diferentes investigaciones han relacionado a
nodal en la autorrenovacin de clulas madre embrionarias de ratn y humano. Se supone que nodal en ratn
tiene una importante funcin en la formacin del epiblasto y en la expresin de marcadores de pluripotencialidad. En las hESC, nodal se expresa a la baja cuando se
inicia la diferenciacin. La sobreexpresin de nodal
inhibe la diferenciacin a neuroectodermo de las hESC,
induce la formacin de endodermo visceral y mantiene
los marcadores de pluripotencialidad (figura 322).
Va de sealizacin de activina
Las activinas se aislaron en 1986 a partir del fluido folicular de porcino y se consideraron como protenas go-
Figura 322. Va de sealizacin de Nodal. Las familias

Lefty (leftright determinatio factor) y cerberus (CerbS) la
bloquean.
nadales involucradas en la sntesis y secrecin de hormona pituitaria estimulante del folculo (FSH). Ahora
se sabe que la sntesis de activinas no est restringida tan
slo a los ovarios y a los testculos. De hecho, las activinas estn presentes en un amplio rango de tejidos y rganos incluyendo placenta, mdula sea, bazo y algunas
regiones del cerebro, donde actan como factores de
crecimiento o citocinas paracrinas y autocrinas. Las
activinas tienen un amplio rango de funciones biolgicas que incluyen la diferenciacin del endodermo a partir de las hESC, inhibicin de la diferenciacin neuronal
en clulas P19 de carcinoma embrionario de ratn, y
participan en asociacin con BMP4 en la diferenciacin
del mesodermo en mESC. Tambin la activina participa
en la diferenciacin de las clulas b a partir de precursores pancreticos humanos.
Recientemente se han detectado activinas en el medio condicionado provenientes de las clulas fibroblsticas embrionarias de ratn, lo que las ha relacionado
con un mecanismo de autorrenovacin de las clulas
madre embrionarias. Sin embargo, en la actualidad no
se ha elucidado lo anterior, los genes blanco de la va de
la activina. Las activinas son protenas homodimricas
miembros de la superfamilia de las TGFb que interactan con los receptores para activina y que posteriormente activan la va de Smad 2/3. Es posible que las activinas tambin interacten con otras vas, como la de Wnt.
Va de sealizacin de la protena
morfogentica de hueso (BMP)
Figura 321. Va de sealizacin de TGFb. Esta va activa
Smad 2/3, que se fosforila y transloca al ncleo con Smad4.
Las protenas BMP pertenecen a la superfamilia de las

TGFb (figura 323). Hay cuatro receptores para BMP:
BMP1a (ALK2, ALK), BMP1b y BMPRII. La seal se
78
Figura 323. Va de sealizacin de BMP. Los sistemas

Cordina y Noggin bloquean esta va.
inicia por la unin del factor BMP al receptor heterodimrico formado por BMPRIa y BMPRII, que lleva a la
activacin de Smad1/5/8 que forman un complejo heterogneo con Smad4 antes de ser translocados al ncleo.
Los mecanismos de regulacin negativa de esta va provienen de Smad7 y de los supresores de la seal de citocinas (SOCS). La va de las BMP termina con la expresin de factores Id (inhibidor de la diferenciacin).
Va de sealizacin de FGF y PI3K

La familia de factores de crecimiento de FGF es capaz
de iniciar un amplio margen de respuestas celulares
(Captulo 3)
como proliferacin, migracin, diferenciacin, interrupcin del ciclo celular y autorrenovacin de las ESC.
Esta funcionalidad tan diversa se puede explicar por la
naturaleza promiscua de los factores FGF en su interaccin con sus receptores, as como por la presencia de
diferentes isoformas de receptores para FGF que son generadas por procesamiento alternativo de los genes FGF.
FGF2 es un componente esencial para el mantenimiento de las hESC in vitro. Hay reportes que sugieren
que FGF promueve la autorrenovacin de las hESC al
antagonizar con la va de las BMP por la inhibicin de
Smad1 y el bloqueo resultante de la diferenciacin. Esta
regulacin antagnica de BMP por FGF puede no ser un
fenmeno unidireccional.
La seal mediada por FGFPI3K/AKT puede estar
sujeta a regulacin por BMP2, la cual inhibe la degradacin de la protena supresora de tumores, PTEN, que es
un efector negativo de PI3K.
Va de WNT/bcatenina
La va de Wnt (wingless, nombre proveniente de un mutante de la mosca Drosophila sin alas) est involucrada
en la proliferacin y determinacin del destino celular.
Las alteraciones en la regulacin de esta va llevan a carcinognesis, como en el cncer de colon. En ausencia de
la seal de Wnt, la protena citoplsmica bcatenina se
asocia, para ser destruida, con el complejo formado por
axina, sintetasa de glucgeno cinasa 3b y la protena
adenomatosispoliposis del colon (APC). Al unirse a
Figura 324. Va de sealizacin de Wnt. Cuando Wnt se une a Frz, se activa Dsh, que inhibe la destruccin del complejo. La
Bcatenina acta como un coactivador transcripcional del factor de la clula T (TCF).

este complejo, la catenina es fosforilada y despus unida a ubiquitina, que la lleva al proteasoma para su degradacin. La va que se conoce comienza por la unin de
Wnt con el receptor Frizzled (Frz), lo que activa, por debajo de la membrana, a la protena Dishevelled (Dsh)
que inhibe la destruccin del complejo. A partir de sta,
un in, la protena b catenina se acumula en el citoplas-
79
ma y se transloca al ncleo, donde acta como un coactivador transcripcional del factor de clulas T (TCF, tambin conocido como factor potenciador linfoide LEF).
La va de Wnt esta relacionada con la autorrenovacin de las clulas madre del epitelio intestinal, de las
clulas madre de la piel y de las clulas madre embrionarias humanas (figura 324).
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Captulo
Manejo de las clulas madre

en el laboratorio
INTRODUCCIN
radiaciones ultravioleta para impedir el crecimiento de

los microorganismos.
La primera lnea celular de origen tumoral que se logr

cultivar con xito en el laboratorio se obtuvo de Henrietta Lacks y se llam HeLa. Esta paciente falleci en
1951 en el Hospital de la Universidad Johns Hopkins,
en Baltimore. Sin embargo, en todo el mundo se utilizan
sus clulas para realizar mltiples trabajos de investigacin biomdica. Debido a que son clulas cancergenas
obtenidas de cncer cervical, son inmortales, porque al
igual que las clulas madre tienen la enzima telomerasa
activa que les permite mantener intactos sus telmeros.
La obtencin y el cultivo a largo plazo de clulas madre
embrionarias (ESC) requieren medios y equipo especializados. Se han establecido procedimientos para obtener clulas madre, por ejemplo por disociacin manual (cortando), que requiere un estereomicroscopio
costoso y una cmara de flujo de laminar.
Como se puede ver, hace falta una visin global de
cmo establecer y equipar un laboratorio para manejo
de clulas madre humanas, as como manuales de procedimientos estandarizados de operaciones prcticas
para mantener la asepsia y proteger las clulas de contaminacin microbiana. El diseo fsico adecuado de un
laboratorio para cultivos especializados de clulas madre facilitar el trabajo en l: se elige un lugar exclusivo
para los procedimientos, con mnimo flujo de trfico; se
prefiere sin ventanas porque con ello se evitan corrientes de aire y variaciones de la temperatura, o contaminacin por microorganismos debido a los pequeos flujos
de aire por una ventana mal cerrada, as como equipo de
EQUIPO
La siguiente lista de lo que se exige para equipar un

laboratorio para la propagacin a largo plazo de clulas
madre pluripotenciales humanas contiene nicamente
lo esencial.
S Campanas de flujo laminar clase II o III de biotecnologa con luces de UV localizadas de preferencia adyacentes a las cmaras de cultivos celulares;
cmaras de cultivo celular con conductos de flujo
areo hacia el exterior del edificio para facilitar
desinfeccin y facilitar la circulacin de aire. Es
mejor si los sistemas de aire acondicionado se localizan en el propio cuarto de cultivo, y se debe
aumentar tanto como sea posible la distancia entre
los conductos de circulacin area y las cmaras
de cultivo, pues con ello se reduce el riesgo de contaminacin con partculas o microorganismos.
Equipo mnimo
S Pipetas P2, P10, P20, P100, P200, P1000, P5000
con capacidad de 2 mL a 5 mL con sus respectivos
portapipetas.
S Sistema de vaco con trampa para lquidos.
81
82
Colocar los instrumentos de laboratorio al alcance de la

mano. Como precaucin adicional se incluye un vaso
con soluciones desinfectantes (benzal, etanol, etc.) para
limpiar utensilios en todo momento. Los tubos deben
asegurarse contra cadas y el piso deber ser limpiado
con etanol, y usar un filtro entre el cultivo y la persona
que trabaje en el laboratorio para evitar contaminacin.
S Campana de flujo laminar equipada con sistema
de bioseguridad nivel II o superior con control de
temperatura en el rea completa donde se trabaje
con los cultivos celulares. Esto es til al manipular
clulas madre, para lo cual se requiere un brazo
robtico y un dispositivo para evitar contaminacin.
S Incubadoras para cultivos celulares, preferentemente con cuatro a seis compartimientos individuales por cada incubadora, para limitar el flujo areo y las fluctuaciones de temperatura y humedad.
S Microscopio invertido de contraste de fase y fluorescencia equipado con lentes objetivos 4x, 10x,
20x, 40x, 63x y 100x para clulas, equipado con
cmara digital integrada para documentar clulas
y si es posible computadora con programa analizador de imgenes, para poder determinar cualquier
cambio morfolgico en los cultivos.
Organizacin y tcnica asptica

1. Una cmara digital, computadora y software para
medir tamao y forma de las colonias.
2. Termos de diferentes capacidades para almacenar
nitrgeno lquido.
3. Refrigeradores y congeladores para almacenar
factores de crecimiento, medios de cultivo, suero
y materiales lbiles. De ser posible, tener crioprotectores y congeladores para criopreservacin en
rampas de temperatura, como los utilizados en
procedimientos de fertilizacin asistida.
4. Centrfuga para separacin celular.
5. Mechero de Bunsen para preparar el material de
vidrio y las agujas para manipular colonias de
clulas madre.
6. Recipientes diversos para trabajo en laboratorio
de cristalera y aluminio, como el frasco de Dewar.
7. Planta elctrica de emergencia para alimentar las
incubadoras de cultivo de tejido, congeladores y
otro equipo importante.
8. Un rea adyacente fuera del laboratorio (exclusa)
para cambio de ropa y zapatos y lavado de manos,
as como un almacn para material estril y un rea
(Captulo 4)
donde esterilizar el material de trabajo. Se debe trabajar con niveles adecuados de nitrgeno lquido
para evitar la prdida del material criopreservado.
9. Procurar que el ambiente del laboratorio sea estril, minimizando as el riesgo de contaminacin de
los cultivos celulares. Es necesario que con esta
tecnologa slo trabaje el personal mnimo indispensable.
A continuacin se listan las sustancias requeridas para
formar un medio de cultivo libre de suero: Nacetilcistena, cido oleico, albmina, cido ascrbico, biotina,
progesterona, putrescina, acetato de retinol, catalasa, sulfato cprico, etanolamina, galactosa, glutatin reducido,
HEPES, hidrocortisona, insulina, cido linoleico, piruvato sdico, selenita sdica, enzima superxido dismutasa, acetato de tocoferol, transferrina, triiodotironina,
trolox, vitamina B12, sulfato de zinc y antibiticos.
Tcnica asptica
La contaminacin de bajo nivel puede permanecer no
detectada por largos periodos, sobre todo si las clulas
madre han crecido en medios con antibiticos. Los modelos de crecimiento de clulas anormales suelen ser un
buen indicador de contaminacin, as como los cambios
en turbidez, color y el pH de los medios de cultivo, para
lo cual se debe medir el pH de forma peridica. Los medios de cultivo para clulas madre son ricos en nutrientes requeridos para la divisin celular, por esta razn son
propicios para el rpido crecimiento bacteriano o fngico. Ciertas contaminaciones son visibles (p. ej., con
hongos, donde se observa la turbidez y los sedimentos),
no as los micoplasmas y otros agentes contaminantes,
para lo cual se recomienda, adems de los cuidados normales, contar con mtodos adicionales que detecten
cualquier cambio en el crecimiento del cultivo, en la coloracin o en el pH del medio.
Cmo reducir el riesgo de contaminacin

Los siguientes procedimientos reducen el riesgo de contaminacin bacteriana, fngica y por micoplasma:
S Limpiar la campana de flujo laminar, las incubadoras y cmaras de aislamiento, y esterilizar toda
el rea de laboratorio, de preferencia con una mezcla de etanol a 70% incluyendo todos los materiales posibles.
S Procurar que todos los materiales que ingresen en
el laboratorio sean estriles antes de ponerlos en
Manejo de las clulas madre en el laboratorio

el rea de trabajo. Programar la desinfeccin de
toda el rea con solucin de etanol a 70% para controlar la calidad de los cultivos de clulas madre.
Limpiar cada mes las incubadoras de cultivo de tejido, estableciendo el ciclo descontaminacin/esterilizacin. Asegurarse de limpiar todos los empaques de las puertas de las incubadoras para
evitar el crecimiento de hongos. Tambin, cada
tres meses eliminar todos los consumibles y reactivos que no se utilizaron, porque se pueden contaminar con esporas fngicas o bacterias. Esterilizar
en autoclave o por medio de radiacin UV todos
los instrumentos de laboratorio antes de utilizarlos.
vos para detectar algunas otras seales de contaminacin microbiana, como enlentecimiento de la proliferacin, cambios en la morfologa y muerte de las clulas.
Recomendaciones para el manejo celular

Organizar el rea de trabajo para no tener que pasar las
manos sobre los medios de cultivo. Antes de aspirar las
clulas de diferentes medios de cultivo se deber tomar
la precaucin de cambiar la punta de la pipeta; en general, existen dos paradigmas en el cultivo celular (figura
41).
Manejo de lneas celulares

para terapia celular
REALIZACIN DE CULTIVOS
CELULARES
Despus de un minucioso lavado y desinfeccin de manos y haberse vestido con material estril, verificar que
todos los instrumentos de laboratorio estn igualmente
estriles. Tener a la mano una solucin desinfectante.
Posteriormente verificar los sistemas de flujo laminar y
usar el filtro de aire para evitar contaminacin. Slo
despus de estos procedimientos puede considerarse
que se trabaja en condiciones de seguridad biolgica
clase II como mnimo. Para cultivar tejidos es recomendable utilizar medios de cultivo enriquecidos con antibiticos slo en ocasiones muy justificadas y por cortos
periodos, para evitar daar permanentemente las clulas. Desde luego, cuando se usen medios de cultivo libres de antibiticos, debern tomarse en consideracin
los parmetros mencionados para detectar rpidamente
una contaminacin. Observar con regularidad los cultiE Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.
83
Sin duda alguna la seleccin adecuada de una lnea celular de clulas madre es determinante para una buena respuesta en la aplicacin clnica de la terapia celular o
para realizar un buen trabajo de investigacin; por ello
es necesario tomar en cuenta los siguientes factores:
En padecimientos cronicodegenerativos existen daos muy importantes en rganos blanco. Para la aplicacin de una terapia celular alognica deben usarse ESC
por su capacidad pluripotencial o ASC desdiferenciadas
a linajes multipotenciales como mnimo, e incluso pluripotenciales, como se ha reportado recientemente en
las revistas de ciencia ms prestigiosas. Si la fuente de
clulas para aplicacin de la terapia celular es autloga,
no hay problema del potencial celular de las ASC; sin
embargo, se les debe dar la capacidad adecuada con un
medio de cultivo especialmente diseado para que su
plasticidad y capacidad de diferenciacin a clulas
especializadas sea ptima.
Si no se cuenta con instalaciones de laboratorio con
las caractersticas mencionadas y un riguroso control de
N2/B27 medio + FGF2
N2 medio + FGF2
Sustrato
poco adhesivo
A
Neuroesferas
Cultivo
Cultivo disociado
5 x 105 clulas/mL
N2/B27
Laminina1
Figura 41. Los dos paradigmas del cultivo celular. A. neuroesferas. B. Disgregacin.
84
calidad y tecnologa de punta, se pueden adquirir o importar clulas madre que provengan de un laboratorio
de prestigio y con un control de calidad estricto.
Normalmente se envan las clulas en criopreservacin a 196 _C en nitrgeno lquido, es decir, se adicionaron medios crioprotectores para protegerlas de la
formacin de cristales de agua mientras se logran temperaturas de congelacin por medio de rampas descendentes de temperatura. Para conservarlas es necesario
bajarlas gradualmente de temperatura ambiente a 4 _C,
despus a razn de 1 _C/min; la temperatura se disminuye con una cmara de precongelacin a 80 _C y finalmente se almacenan a 196 _C dentro de un tanque
isotrmico con nitrgeno lquido. Hay muestras que han
sido criopreservadas y se encuentran viables despus de
20 aos, pero en teora las clulas madre deben durar
hasta 5 000 aos en criopreservacin.
Comnmente, cuando se reciben las clulas en contenedores para clulas criopreservadas, se tienen que revisar
minuciosamente para detectar contaminacin, observar
cambios del medio como turbidez, color e incluso olor.
Deben manejarse estos criopreservados con tcnica estril y preparar los medios bsicos para agregar la celularidad a temperatura de refrigeracin para no afectar la
criopreservacin celular y evitar lisis celular, ya que
esto puede condicionar un aumento de lipopolisacridos y una reaccin febril y de malestar general en el paciente.
Se deben montar las lneas celulares destinadas a regeneracin celular en una base enriquecida con oligoelementos, aminocidos y antioxidantes, en proporcin
1:10 segn sea la medida del contenedor, de preferencia
en una solucin fisiolgica. Ante problemas de patologas no relacionadas con diabetes mellitus pueden usarse soluciones glucosadas por periodos cortos porque la
glucosa favorece el desarrollo microbiano. Es preciso
que las clulas madre preparadas para terapia celular no
permanezcan mucho tiempo en medios de cultivo. En
ocasiones slo es necesario utilizar medios de cultivo
como el factor de crecimiento fibroblstico beta (FGFb)
con Lglutamato y despus realizar el procedimiento de
criopreservacin con medios que contengan glicerol. Al
seleccionar la lnea celular para utilizarla en algn padecimiento especfico es necesario considerar que en la
mayora de problemas cardiovasculares y hematolgicos se pueden utilizar clulas madres somticas, es decir, obtenidas del torrente sanguneo o de mdula sea
del propio individuo. stas, despus de un procedimiento de marcaje de molculas de superficie (anticuerpos
vs. CD34), se separan por citometra de flujo de alta
velocidad y pueden administrarse al paciente de manera
local, regional o sistmica. Por su gran compatibilidad
(Captulo 4)
inmunitaria no representan problema para el receptor y

se ha demostrado la induccin de regeneracin amplia
con este tipo de terapia celular autloga.
Por otra parte, en el lupus eritematoso sistmico
(LES) los resultados son sorprendentes. Sin embargo,
en alopecia areata y en problemas de origen andrognico es necesario utilizar clulas con caractersticas plurimultipotenciales, con lo que garantizan excelentes resultados. Los problemas hepticos, del tubo digestivo y
osteoarticular responden tambin de manera sorprendente con la aplicacin con clulas madre plurimultipotenciales. Para la aplicacin de la terapia celular en fase
experimental de las ESC11 es necesario revisar la legislacin local vigente y conocer cules son los procedimientos de manejo de los blastocistos humanos reconocidos, sobre todo si se trata de donaciones de estos
embriones, y contar con todos los permisos que establece la legislacin local, as como con lneas celulares de
bancos reconocidos en todo el mundo y con registro
vigente.
Manejo de lneas celulares

para terapia celular
Es preciso que cuando el paciente es estudiado y se confirma el diagnstico, se decida la lnea celular adecuada
que se aplicar en la terapia celular, para lo cual en experiencia de los autores existen varios principios:
Si el padecimiento es de origen cardiovascular, las
clulas madre deben ser manejadas en cultivo con FGFb
y Lglutamato; en caso de obtenerse de otro laboratorio
o banco celular, se mantendrn a temperatura de congelacin, para no perder la criopreservacin. Despus se
prepara el medio de cultivo base a temperatura de semicongelacin, 2 o 3 _C; esta base debe ser rica en oligometales, aminocidos y factores inductores de diferenciacin que inducen el avance de las fases del ciclo
celular G1 y G2 volviendo competentes a las clulas con
una respuesta y velocidad mayores que la diferenciacin en estas estirpes celulares. Se recomienda una
sesin semanal de aplicacin de terapia celular durante
un periodo de cinco semanas como mnimo, lo que
constituye un ciclo de tratamiento, aunque para ciertos
casos, como enfermedades cronicodegenerativas, neurolgicas, vitligo, etc., se pueden requerir de dos a cuatro o cinco ciclos de tratamiento para obtener resultados
ptimos de regeneracin.
Si el padecimiento es de origen osteoarticular, las
clulas madre se lavan con solucin salina isotnica a
1.
La aplicacin de terapia celular con ESC se realiza en

algunos pases de Europa, Amrica, etc.

temperatura de semicongelacin para no afectar la criopreservacin y luego se incluyen en una base rica en
K28 y un derivado procanico D2 e inductores del ciclo
celular inicial, para lograr la competencia necesaria y
una diferenciacin ms rpida. Si el padecimiento es de
origen nervioso se utilizan medios de tipo GAAMA II
y se enriquecen con inductores del ciclo celular tardo,
con los cuales se han demostrado resultados excelentes.
Clulas madre en el lquido

amnitico humano (AFSC)
Desde la dcada de 1970 un estudio de microscopia
electrnica report la presencia de clulas madre entre
los diversos tipos celulares que proliferan en cultivos
obtenidos a partir de lquido amnitico humano (Priest
et al.: Origin of cells in human amniotic fluid cultures:
ultrastructural features. Lab Invest 1978;39:106109).
Aunque varios estudios posteriores reafirmaron la veracidad del hallazgo, un reporte reciente que empleaba
tecnologa de punta lo confirm de manera concluyente. Paolo de Coppi y col., del Instituto de Medicina
Regenerativa de la Universidad Wake Forest y del Hospital de Nios de la Escuela de Medicina de la Universidad de Harvard (Isolation of amniotic stem cell lines
with potential for therapy. Nature Biotech 25:100106),
aislaron cantidades significativas de clulas madre del
lquido amnitico humano y de ratn (AFSC, por las
siglas en ingls de amniotic fluid derived stem cells),
aprovechando la presencia de la protena cKit en la
membrana de estas clulas.
Al cultivarlas encontraron que se dividen cada 36 h
y no mostraban signos de envejecimiento (reduccin de
telmeros o modificacin cromosmica) ni diferenciacin espontnea aun despus de 250 ciclos de divisin
en cultivo, criterio que refuerza su carcter de clulas
madre. Las clulas AFSC poseen caractersticas que las
distinguen de las ESC obtenidas a partir de embriones,
las clulas madre germinales (GSC) que dan origen al
vulo o los espermatozoides y las clulas madre hematopoyticas (HSC) que dan lugar a las clulas sanguneas, de manera que su origen ontognico es todava
desconocido.
Con el propsito de demostrar la pluripotencia de las
clulas AFSC, los investigadores emplearon diversos
mtodos experimentales. Agregaron al medio de cultivo mezclas de factores inductores, permisivos, inhibidores o todos, pudiendo dirigir la diferenciacin de las
clulas AFSC hacia derivados de las tres capas germinativas embrionarias. Por ejemplo, en presencia de glice-
85
rol, factor de crecimiento de hepatocitos, dexametasona, FGF, insulina, transferrina y selenio, se indujeron las
clulas AFSC para diferenciarse como hepatocitos. Con
el empleo de otras mezclas de factores ya establecidas
para conducir o facilitar la diferenciacin de diversos
tipos celulares, los autores reportan haber logrado la diferenciacin de miocitos, neuronas, endotelios, adipocitos, osteocitos y clulas productoras de insulina. La
posibilidad de que pudiera tratarse de poblaciones de
clulas madre heterogneas se descart con el empleo
de retrovirus como marcadores de linaje celular. Los
autores lograron demostrar que, a partir de una clula
AFSC o un grupo pequeo de ellas, fue posible derivar
tambin los seis tipos celulares previamente encontrados con el total de clulas AFSC.
Por otra parte, dos tipos de experimentos indican el
potencial teraputico de las clulas AFSC. Algunas
clulas se encauzaron in vitro hacia el linaje ectodrmico neurognico y se implantaron en ventrculos laterales del cerebro de ratones recin nacidos. Aunque las
clulas AFSC de humano se distribuyeron en varias
regiones del cerebro, parecen haber sobrevivido slo
durante dos meses. Una explicacin probable es que se
trata de un implante entre especies diferentes, donde la
permanencia no es posible. El otro experimento fue con
clulas mesenquimticas osteognicas derivadas de
AFSC. Despus de propiciar la diferenciacin de tejido
seo en cultivo, se hizo un trasplante subcutneo en ratones inmunodeprimidos. A las 18 semanas fue evidente la produccin de hueso promovido por las clulas
AFSC humanas en el ratn.
Las clulas AFSC, a diferencia de las clulas madre
embrionarias (ESC), no parecen ser tumorognicas y su
pluripotencialidad parece ubicarse entre las clulas
ESC y las ASC. Pueden obtenerse con relativa facilidad
por medio de amniocentesis de rutina, biopsias de vellosidades corinicas prenatales e incluso a partir de biopsias de placentas a trmino. Ser posible entonces establecer bancos de muestras congeladas como los de
cordn umbilical ya existentes, de gran utilidad para
una posible terapia celular autloga en la vida posnatal.
CLONACIN DE MAMFEROS
El xito con la clonacin de la oveja Dolly en 1996 demostr que los ncleos de clulas no germinales tomados de individuos adultos repiten el desarrollo embrionario al ser trasplantados a un ovocito. A partir de
entonces se abri un gran debate internacional por te-
86
mor a que el desarrollo de una tecnologa de clonacin

en mamferos con fines reproductivos pudiera usarse algn da para la clonacin de seres humanos. Al margen
de las discrepancias ticas y filosficas iniciadas con la
clonacin de Dolly, es indudable que la investigacin ha
avanzado y los resultados experimentales obtenidos en
diferentes especies de mamferos se discuten tambin
en mbitos de la ciencia y la biotecnologa.
La aplicacin potencial de la clonacin teraputica
en la medicina y la implementacin de la clonacin
reproductiva en la industria agropecuaria siguen despertando el inters de un creciente nmero de investigadores. Asimismo, en el terreno de la investigacin bsica, la clonacin de Dolly atrajo a nuevos grupos de
investigadores para aplicar metodologas moleculares y
avanzar en la solucin de algunos problemas del desarrollo planteados por la embriologa clsica.
Aunque el avance ha sido mucho ms lento que el esperado por algunos optimistas, el reciente nacimiento
de la yegua Prometea2 contradice en cierta medida a los
investigadores que opinaban que la prctica de la clonacin aplicada a grandes especies estaba todava a varios
lustros de distancia. Cesare Galli, del laboratorio de
Tecnologa Reproductiva en Cremona, Italia, report
recientemente en Nature (2003;424:635) el nacimiento
de un sobreviviente de los 17 embriones implantados en
varias madres receptoras. El exitoso embrin que lleg
a trmino result ser hembra y lo ms asombroso es que
la madre que la gest y actualmente se encarga de amamantarla es su propia hermana gemela. Esto es diferente
a lo que ocurri con la oveja Dolly, cuyo nacimiento requiri la contribucin de tres ovejas (la donadora del ncleo, la donadora del ovocito y la subrogada en cuyo
tero se gest).
Los resultados previos obtenidos con la clonacin de
mamferos han sido en general costosos e ineficientes.
Aunque es indudable que existe la posibilidad de reproducirlos por clonacin, es evidente que la tecnologa
empleada requiere una optimizacin especfica para
cada grupo.
La diversidad celular en el desarrollo embrionario
depende de la expresin diferencial del genoma del individuo. Dicha expresin depende a su vez de procesos
de regulacin de complejidad creciente conforme el desarrollo avanza. Al inicio, la regulacin parece depender esencialmente de factores presentes en el citoplasma del ovocito cuya funcin es regular la divisin
y posiblemente el destino temprano de las primeras
2.
La yegua Prometea es producto de la transferencia del

ncleo de una clula somtica tomada de la piel de la misma
yegua que la pari.
(Captulo 4)
clulas. Despus, la regulacin de la expresin diferencial del genoma embrionario depende del contexto intercelular con patrones de sealizacin de corto, mediano y largo alcance. El conocimiento fino del control que
armoniza la expresin del genoma en los diferentes niveles de organizacin es sin duda la meta ms clara de
la moderna embriologa molecular o biologa del desarrollo.
A pesar del significativo progreso iniciado en 1953
por Watson y Crick con el descubrimiento de la conformacin molecular del DNA y el haber completado recientemente la secuencia de bases que integran al genoma humano, quedan grandes interrogantes en la
biologa. Los factores maternos en el citoplasma del
ovocito colaboran con el ncleo de una clula somtica
proveniente de un individuo adulto, que se introduce en
l. La reprogramacin del genoma del ncleo trasplantado requiere cambios en la conformacin molecular de
la cromatina (DNA y protenas) que permitan el acceso
de los factores reguladores de origen materno. As, el
estudio de los factores del ovocito responsables tanto de
los cambios en la conformacin de la cromatina como de
los implicados en la regulacin positiva o negativa de los
genes del ncleo transferido representa el actual reto para
abordar la clonacin con bases cientficas.
Una de las principales limitantes para avanzar en el
conocimiento de la clonacin de mamferos es la dificultad para obtener los ovocitos. Al respecto, un grupo
multinacional encabezado por H. Shler, en la Universidad de Pensilvania, report haber obtenido por primera
vez la diferenciacin de ovocitos in vitro a partir de
clulas madre embrionarias (Sciencexpress, mayo de
2003). Aprovechando la expresin especfica del gen
Oct4 por parte de las clulas germinales primordiales
(CGP, precursoras de ovocitos o espermatozoides), los
investigadores generaron una lnea de ratones transgnicos que expresan el gen de la protena verde fluorescente (GFP) utilizado como gen reportero. A partir de
estos animales se obtuvieron ESC pluripotentes que
fueron cultivadas en el laboratorio. Aunque al inicio del
cultivo todas las clulas madre derivadas del epiblasto
embrionario expresan la protena Oct4, conforme avanza el tiempo de cultivo las clulas tienden a diferenciarse en diversos tipos (msculo, hueso, vasos sanguneos,
neuroblastos, etc.), y slo las germinales primordiales
(CGP) y sus descendientes (ovocitos o espermatozoides) mantienen su expresin.
Mediante ingeniera gentica, Shler y su grupo eliminaron los dos promotores del gen Oct4 que se activan
en el epiblasto y conservaron al promotor de las clulas
germinales. Al expresarse de manera simultnea con el
gen de la GFP, las clulas germinales fluorescentes

pudieron aislarse y someterse a diversas condiciones de
cultivo. Se demostr que las clulas fluorescentes repiten en cultivo las diversas etapas de desarrollo hasta llegar a la de ovocito maduro, tal como ocurre en el ratn
intacto. Lo ms sorprendente de este estudio fue la activacin partenogentica (desarrollo embrionario espontneo sin fecundacin) de los ovocitos desarrollados en
cultivo. Los blastocistos (etapa en la que el embrin se
implanta en el tero) que se generan son muy similares
a los embriones normales. Producir ovocitos in vitro a
partir de lneas celulares bien caracterizadas es una
fuente de fcil acceso para la identificacin de los factores necesarios tanto en la regulacin inicial del desarrollo normal como de aqullos involucrados en la reprogramacin del genoma de los ncleos trasplantados
para la clonacin reproductiva o teraputica.
Se han manejado tres enfoques de la clonacin: el
primero tiene que ver con los xenotrasplantes. El empleo de rganos de cerdo para sustituir al limitado nmero de donantes humanos lo report un equipo de
investigadores coreanoestadounidenses en la revista
Science (2002;295:1089). Con el fin de evitar el rechazo
inmunitario de los trasplantes se inactiv (knock out) el
gen de la a1,3 galactosiltransferasa, enzima responsable de la produccin de residuos de un azcar que forma
parte de glucoprotenas de la superficie celular de las
clulas porcinas que provocan la reaccin aguda de
rechazo. El gen mencionado fue inactivado en clulas fetales de cerdo cultivadas. Despus, los ncleos se transfirieron a vulos enucleados de la misma especie, iniciaron su desarrollo in vitro y se implantaron en una madre
nodriza, donde terminaron su desarrollo. Un macho y
tres hembras supervivientes a la manipulacin resultaron sanos y listos para reproducirse con el fin de generar
una cepa de animales para continuar la investigacin.
El segundo enfoque se realiz en ratones. Los investigadores del instituto Advanced Cell Technology en
Worcester, Massachusetts, reportaron ser los primeros
en curar la inmunodeficiencia en una cepa de ratones.
Primero clonaron ratones transfiriendo ncleos de clulas epiteliales de la cola de animales inmunodeficientes
a vulos enucleados obtenidos de hembras normales y
se desarrollaron en el laboratorio hasta blastocisto.
Disociando la masa celular interna (grupo de clulas
que forman el embrin), se generaron clulas madre a
las que se les corrigi el defecto gentico causante de la
inmunodeficiencia. Al inyectar estas clulas madre a los
animales inmunodeficientes donadores de los ncleos
se inici la regeneracin de linfocitos capaces de generar anticuerpos.
Finalmente, el tercer enfoque es el de generar rganos a partir de clulas de animales clonados. Se trata
87
de un trabajo en bovinos en el que investigadores, tambin del Advanced Cell Technology de Massachusetts,
dicen haber reconstruido un rin a partir de clulas madre embrionarias de bovino. Se tomaron clulas de la
piel de la oreja de una vaca, se cultivaron e individualmente se fusionaron con vulos para generar blastocistos. Se obtuvieron clulas madre de la masa celular interna y aqullas que se diferenciaron como clulas
renales fueron cultivadas en una estructura tridimensional que permite la formacin de una estructura semejante a un rin. Lo importante es que al trasplantar estas
formaciones renales a la vaca donadora de los ncleos
clonados no hubo rechazo y se recuper buena parte de
la funcin renal. En la metodologa descrita previamente de clonacin teraputica, tambin llamada terapia
por trasplante nuclear, se requiere en todos los casos un
vulo que inicie su desarrollo hasta la etapa de blastocisto y a partir del cual se obtengan las clulas madre
empleadas en los diferentes procedimientos.
Ratones partenognicos
con capacidad reproductiva
Las clulas de mamfero son diploides, contienen un
juego de genes y cromosomas heredado del padre y otro
de la madre. En algunos casos, la expresin de un gen
depende de si su origen es paterno o materno. Por ejemplo, el gen que codifica al factor2 de crecimiento
(Igf2), parecido a la insulina, se requiere durante el crecimiento prenatal. Los ratones que no lo expresan nacen
con un tamao que es la mitad de la talla normal. Slo
la copia paterna de Igf2 se transcribe y si un ratn tiene
mutado el gen paterno, nace con talla reducida, mientras
que si la copia materna es la mutada, su crecimiento es
normal.
Otro ejemplo de la importancia de la combinacin
adecuada en la expresin de genes de ambos padres est
documentado en experimentos que han generado embriones de ratn que contienen cromosomas slo de la
madre o slo del padre.
En embriones que slo tienen cromosomas derivados
de la madre, los tejidos extraembrionarios que se requieren para el soporte del embrin se desarrollan poco
y como resultado el embrin muere despus de su implantacin en el tero, mientras que los embriones que
slo tienen cromosomas del padre muestran un crecimiento lento, pero los tejidos extraembrionarios se desarrollan mejor. De manera que, sin tomar en cuenta la
diferencia obvia de los cromosomas sexuales, los genomas maternos y paternos no son equivalentes, sino que
acarrean una marca o huella que conduce a la expre-
88
sin gnica diferencial en el embrin, fenmeno llamado impronta genmica, que est regulado por modificaciones epigenticas, que son modificaciones en el
patrn de expresin de un gen que se heredan de una clula a otra y que no involucran cambios en la secuencia
del DNA.
En abril de 2004 Tomohiro Kono, bilogo de la Universidad de Agricultura de Tokio, y col. publicaron en
la revista Nature (2004;428:860864) resultados experimentales que muestran que la expresin diferencial de
genes paternos y maternos es un candado fundamental
para la reproduccin partenogentica en los mamferos.
La partenognesis es un proceso en el cual un ovocito
se desarrolla y se convierte en embrin sin necesidad de
ser fecundado por un espermatozoide. Este proceso es
comn en numerosas especies de insectos, nemtodos
y plantas, pero nunca se ha observado de manera natural
en los mamferos.
Se han hecho varios intentos en ovejas y ratones, pero
los resultados no haban sido satisfactorios, ya que los
embriones obtenidos por partenognesis no progresaban y moran en las primeras etapas del desarrollo. Los
investigadores fusionaron en esta ocasin ovocitos de
ratn (dos juegos de genoma de origen materno), uno
inmaduro proveniente de ratonas recin nacidas y otro
completamente maduro, con el fin de evaluar si se desarrollaban embriones viables.
La idea es que manipulando la impronta genmica se
podra controlar la expresin de genes que son sujetos a
este tipo de regulacin. En los estadios tempranos de
maduracin del ovocito, el genoma no ha sido modificado epigenticamente y por lo tanto no ha adquirido la
huella materna, de modo que se podrn transcribir algunos genes que slo se expresan cuando son heredados
por el padre. Los ovocitos inmaduros tenan otra caracterstica: se obtuvieron de ratonas a las que se les haba suprimido el gen H19, el cual est sujeto a impronta genmica y slo se expresa la copia materna y de manera
alternativa con el gen Igf2; es decir, si H19 se transcribe,
el Igf2 materno no, por lo que este ltimo slo se manifiesta a partir de la copia paterna. Adems de H19, los
cientficos removieron DMD, una regin que favorece la
actividad de H19 en el cromosoma materno. Con estas
manipulaciones los investigadores pretendan mimetizar
la prdida de la actividad paterna de H19.
Al combinar el genoma de los ovocitos de estas ratonas con ovocitos maduros de ratonas normales los resultados fueron inesperados y sorprendentes: nacieron dos
ratonas aparentemente normales, vivas, una de las cuales se desarroll hasta la madurez y tuvo descendencia.
Tambin demostraron que no slo cambiaron la actividad de H19 e Igf2, sino que el cambio en la regulacin
(Captulo 4)
de estos dos genes modific la actividad de muchos

otros genes regulados por impronta genmica, expresndose de manera normal en estos dos ratones. A pesar
de que las dos ratonas que nacieron vivas representan
apenas 0.54% (2 de 371) de los embriones logrados por
estos mtodos, este trabajo demuestra que la impronta
genmica es una de las barreras principales para la partenognesis natural en mamferos, por lo que la participacin del padre en la reproduccin es fundamental.
Clonacin teraputica humana

Desde el primer cultivo exitoso de clulas madre embrionarias pluripotenciales humanas en 1998, la investigacin a este respecto se ha intensificado por la posibilidad de aprovechar estas clulas capaces de proliferar y
diferenciarse hacia cualquier tipo de especializacin o
tejido con fines teraputicos. La investigacin en este
campo es controvertida debido a que algunas veces es
necesario que se destruyan los blastocistos humanos
(etapa embrionaria entre el quinto y sptimo da del desarrollo). Muchas legislaciones incluyen una ley de proteccin al embrin que prohbe su manipulacin de no
ser en su propio beneficio. Sin embargo, existe la posibilidad de generar blastocistos, a travs de tcnicas de
clonacin, para obtener clulas madre.
La clonacin teraputica ofrece la posibilidad de obtener clulas madre embrionarias que despus de su diferenciacin hacia tejidos especficos ayudarn a evitar las
incompatibilidades inmunitarias si el ncleo de la clula
somtica proviene del paciente que ser tratado con estas
clulas. Sin embargo, existen en los tejidos clulas madre
adultas autorrenovables que podran ser utilizadas para el
mismo propsito y cuya obtencin es ticamente aceptable. Adems, los doctores Bert Vogelstein, de la Universidad Johns Hopkins, Bruce Alberts, presidente de la
Academia Nacional de Ciencias de EUA y Kenneth
Shine, presidente del Instituto de Medicina de ese pas,
en un artculo del 15 de febrero de 2002 en Science
(295:1237) proponen que se deje de usar el trmino clonacin teraputica, ya que crea confusin y es conceptualmente inexacto. Argumentan que, en lenguaje cientfico, clonacin significa producir copias de entidades
biolgicas, ya sea un gen, una clula o un organismo.
Sin embargo, para el pblico en general el vocablo
clonacin se refiere al procedimiento de transferencia
de ncleos de una clula somtica a un ovocito al que se
le ha eliminado su propio ncleo. Dicho procedimiento
de transferencia nuclear puede ser utilizado para propsitos que no son necesariamente la produccin de una
copia o clona de un organismo, entre ellos la generacin

de clulas madre embrionarias para investigar su posible uso en el reemplazo de tejidos enfermos de pacientes
o para estudiar el efecto de enfermedades genticas sobre la diferenciacin celular. Por ello, consideran desafortunado el empleo del trmino clonacin teraputica para referirse a la produccin de clulas madre
potencialmente tiles en terapias celulares regenerativas, ya que el objetivo no es hacer una copia idntica del
paciente, sino crear tejidos compatibles con los suyos.
Tambin les preocupaba que la interpretacin equvoca de este trmino influyera al Senado de EUA a
aprobar una ley que prohibiera cualquier transferencia
de ncleos somticos en humanos, impidiendo as una
variedad de experimentos de importancia mdica y ticamente aceptables. Proponen la expresin trasplante
nuclear, que consideran ms precisa, para designar la
investigacin sobre las clulas madre, que claramente la
diferenciara de la clonacin reproductiva de humanos
(que de acuerdo con la Academia Nacional de Ciencias
de EUA debera prohibirse) y ayudara al pblico a
comprender que son distintas.
En muchos casos, las clulas madre trasplantadas no
solamente son capaces de dirigirse hacia el tejido requerido, sino tambin de reemplazar a clulas daadas. La
investigacin realizada con clulas madre adultas por su
procedencia no representa un problema tico, y sobre
ellas hay una mayor experiencia, tanto de su potencial
diferenciacin como de su uso teraputico. Se tiene mucha experiencia con las clulas madre provenientes de
la mdula sea, que en su ambiente normal generan los
diferentes tipos de clulas sanguneas. Es singularmente importante el trasplante de clulas hematopoyticas
en pacientes con leucemia y para la reconstruccin de
la mdula sea en pacientes con otro tipo de tumores
que son sometidos a quimioterapia o radioterapia.
Estas clulas madre adultas tienen la capacidad de
generar no slo clulas sanguneas, sino un mayor nmero de clulas especializadas. Se ha visto que en animales con distrofia muscular, el trasplante de clulas
madre de mdula sea de ratones sanos da origen a clulas en su esqueleto y msculo cardiaco que s producen
distrofina. Tambin se han derivado, a partir de clulas
madre hematopoyticas, clulas epiteliales en pulmones, intestino y piel. Otros investigadores han aislado
clulas madre humanas de tejido graso removido quirrgicamente que en cultivo pueden generar clulas de
hueso, msculo y cartlago adems de adipocitos, aunque no se ha demostrado que en las clulas obtenidas a
partir de la grasa no se encuentren algunos otros tipos
de clulas madre.
En otros experimentos con animales se demostr que
los factores de crecimiento neuronal provocaban que las
89
clulas madre hematopoyticas se diferenciaran hacia

clulas neurales, lo que muestra una plasticidad mesodrmica a ectodrmica. En ratones, las clulas madre de
msculo han sido capaces de reconstituir la hematopoyesis. Asimismo, a partir de clulas madre del hgado se
pueden desarrollar clulas musculares de corazn, y
clulas del hgado a partir de clulas madre sanguneas,
lo que demuestra que las clulas madre adultas tienen
una pluripotencialidad similar a las embrionarias. Otra
posible fuente de clulas madre son los cordones umbilicales de recin nacidos. Su conveniencia para trasplantes en pacientes con leucemia ha sido bien documentada con miles de casos. Una desventaja es el
limitado nmero de clulas que pueden obtenerse de
cada cordn umbilical.
En ratas se ha demostrado que las clulas madre de
cordn umbilical se han logrado diferenciar en neuronas
y que han sido implantadas de manera exitosa, curando
algunos problemas neurolgicos. Actualmente se estn
aplicando en humanos las investigaciones de tratamiento
de enfermedades congnitas realizadas con clulas
madre en modelos animales bajo el concepto de terapia
celular. En la actualidad es posible utilizar la sangre de
cordn umbilical para regenerar el cerebro. Al inyectar
sangre de cordn umbilical en ratas de laboratorio ancianas, investigadores de la Universidad de Florida (EUA)
han hallado mejoras en el microentorno de la regin del
hipocampo del cerebro de los animales y un subsecuente
rejuvenecimiento de las clulas madre progenitoras nerviosas. Los resultados de su estudio se publicaron en la
edicin digital de BMC Neuroscience en 2008.
La neurognesis de las clulas cerebrales desciende
drsticamente a medida que aumenta la edad, en su mayor parte por un empobrecimiento del microambiente
cerebral, coment Alison Willing, una de las autoras
del estudio. El aumento en la neurognesis que conseguimos parece deberse a un descenso de la inflamacin. Antes de este estudio, otra investigacin de la
USF descubri que reduciendo la neuroinflamacin en
ratas ancianas mediante el bloqueo de la sntesis de la
citocina proinflamatoria IL1 se poda recuperar cierto
descenso de la neurognesis asociada con la edad y mejorar la funcin cognoscitiva. La sangre de cordn umbilical tiene un potencial similar para reducir la inflamacin y para restaurar algunas de las capacidades
perdidas de las clulas madre progenitoras.
En este estudio el nmero de clulas proliferativas
aument en las 24 h siguientes a la inyeccin de sangre
de cordn umbilical y este aumento se mantuvo al menos durante 15 das siguiendo un tratamiento sencillo.
La inyeccin de clulas de sangre del cordn umbilical
puede reducir la neuroinflamacin. Nuestros resultados
90
apuntan a la posibilidad de que una terapia celular podra convertirse en un acercamiento efectivo para mejorar el microambiente del cerebro anciano y restaurar
algunas habilidades perdidas.
El reporte en la revista Sciencexpress (12 de febrero
de 2004) de un equipo coreano de la Universidad Nacional de Sel reactiv la polmica sobre la clonacin de
embriones humanos. A diferencia del grupo denominado Raeliano, que report varios embarazos con fetos
clonados e incluso el nacimiento de un beb, el equipo
coreano de Sel public sus logros con seriedad y rigor
cientfico. Sin embargo, en un anuncio sorpresivo y bajo
la atencin de la comunidad cientfica mundial, el cientfico coreano se retract de las declaraciones acerca de
la clonacin humana y fue castigado por su gobierno.
Con el nacimiento de la oveja Dolly en Edimburgo en
1996 y la obtencin de clulas madre embrionarias a
partir de blastocistos humanos fertilizados in vitro en
1998, se abri la innovadora corriente de investigacin
ya citada de la clonacin teraputica, donde se toma el
ncleo de una clula de algn tejido adulto y se transfiere al interior de un ovocito enucleado. Si este procedimiento de reconstruccin del cigoto tiene xito, se
inicia el desarrollo hasta la etapa de blastocisto en el laboratorio, pero se detendr a menos que sea trasplantado al tero receptivo de una hembra.
Mientras que de la clonacin teraputica se pretende
obtener clulas pluripotenciales de la masa celular
interna del blastocisto que puedan multiplicarse indefinidamente en el laboratorio, en la clonacin reproductiva el blastocisto implantado en el tero desarrollar un
embrin ntegro que al nacer contendr la rplica del
genoma del individuo donador del ncleo transferido.
Cabe aclarar, sin embargo, que la identidad es menor
que la de los gemelos univitelinos o idnticos, quienes
comparten genoma y citoplasma del mismo ovocito debido a que las mitocondrias tambin tienen su propio genoma, que se hereda slo por va materna.
Empleando tcnicas de ingeniera gentica en clulas
madre derivadas de blastocistos clonados pueden corregirse mutaciones en genes identificados como responsables de padecimientos en pacientes con alteraciones
genticas. Al menos en ratones, este procedimiento ha
sido realizado con relativo xito al aliviar la deficiencia
de linfocitos causada por la mutacin del gen Rag2 (Tsai
et al.: Dev Cell 2002;2:707). Como suele suceder en la
investigacin cientfica, adems de los resultados tericamente esperados en este trabajo se obtuvieron otros
resultados que abren nuevas incgnitas sobre la complejidad de los procesos de diferenciacin celular.
La introduccin de genes manipulados en laboratorio
en el ncleo celular para su posible incorporacin al
(Captulo 4)
genoma es azarosa y requiere un nmero considerable

de clulas para aumentar su eficiencia. As pues, es necesario tener lneas celulares de blastocistos clonados
que adems de ser pluripotentes mantengan una elevada
capacidad de multiplicarse en el laboratorio. La pluripotencia se refiere a la capacidad de una clula de dividirse y dar origen a diversas estirpes celulares (linajes).
En el desarrollo normal, slo el ovocito es totipotente,
porque en la primera etapa del desarrollo origina tanto
clulas del trofoblasto (que formarn la placenta) como
clulas de la masa celular interna (que formarn el embrin). Estas ltimas son separadas para la obtencin de
clulas madre consideradas pluripotentes, porque
aunque pueden diferenciarse en diversos linajes celulares del embrin, no pueden hacerlo como clulas trofoblsticas.
Adems de hacerlo en ratones, en bovinos tambin se
ha logrado establecer lneas de clulas madre embrionarias clonadas. Sin embargo, hasta ahora los esfuerzos
para obtenerlas en monos y humanos haban sido infructuosos (Simerly et al.: Science 2003;300:297). Es
en este marco donde se ubica la polmica y el fraude del
equipo coreano ya mencionado. En marzo de 2004 investigadores de la Universidad Nacional de Sel asombraron a la comunidad cientfica internacional al lograr
la primera derivacin de clulas madre embrionarias
humanas (hESC) con la tcnica de transferencia nuclear, mejor conocida como clonacin teraputica
(Science, 12 de marzo de 2004:1669).
Sin embargo, en aquella ocasin los investigadores
coreanos encabezados por los doctores W. S. Hwang y
S. Y. Moon recibieron severas crticas tanto por la cuestionable validez de sus resultados como por la supuesta
falta de tica en la obtencin del material biolgico.
Brevemente, el protocolo del equipo de la Universidad
Nacional de Sel consisti en la obtencin de 242 ovocitos de los ovarios de 16 mujeres voluntarias bien informadas de los objetivos de la investigacin. Una vez
extrados los ovocitos, se cultivaron en un medio que les
permiti madurar. Del grupo original de ovocitos se seleccionaron 176 que lograron madurar in vitro. El criterio fue la eliminacin del primer cuerpo polar y su
detencin en metafase II despus de la primera divisin
meitica.
En esta etapa de maduracin el ovocito es expulsado
del folculo ovrico por el proceso de ovulacin y
junto con las clulas foliculares del cumulus oophorus
es depositado en la regin proximal del oviducto, donde
normalmente espera ser fertilizado por un espermatozoide. A los 176 ovocitos maduros se les hizo la transferencia nuclear previa extraccin de sus cromosomas
detenidos en metafase II. La primera innovacin de la

tcnica coreana fue extraer los cromosomas por extrusin a travs de una pequea perforacin de la membrana y comprimiendo suavemente el ovocito.
En reportes anteriores, la extraccin de los cromosomas se haba hecho por succin con una micropipeta.
Hay que hacer notar que tanto el aparato cromosmico
extrado del ovocito como el ncleo transferido se mencionan errneamente como DNA por la mayora de
los medios de divulgacin cientfica. Lo que en realidad
se ha hecho hasta ahora con las tcnicas de clonacin es
manipular un complejo molecular complejamente estructurado (la cromatina) que incluye, adems del
DNA, diversas protenas y otros factores del ncleo celular cuya funcin todava se desconoce.
La transferencia nuclear hecha por el equipo coreano
se realiz por fusin elctrica del ovocito con la clula
somtica donadora siguiendo un protocolo similar al de
otros grupos. Es probable que aqu haya un punto dbil
del reporte del grupo de Sel, ya que emplearon como
donadoras nucleares clulas foliculares del cumulus que
acompaan al ovocito en el momento de la ovulacin.
Aunque los autores muestran evidencias que sugieren el
origen somtico de los ncleos clonados, la posibilidad
de que se trate de lneas celulares procedentes de blastocistos partenogenticos no puede descartarse por completo. No obstante, los autores aportan datos que, aunque dudosos, son una variante del protocolo para la
transferencia nuclear a ovocitos humanos.
Establecen un tiempo ptimo para reprogramar el
genoma del ncleo trasplantado, un nuevo mtodo para
activar al cigoto reconstruido y un medio de cultivo para
optimizar su desarrollo hasta blastocisto. Quiz cierta
parte de la metodologa empleada y propuesta pueda ser
reproducida o modificada para afinar dicho procedimiento. El proyecto fue realizado por 14 investigadores
y ha soportado las crticas al trabajo publicado en al
menos dos vertientes, las de la comunidad acadmica y
las del pblico en general. Para la primera, en caso de
que tenga algo de cierto, esta investigacin representa
slo un avance ya esperado con base en los resultados
previos obtenidos por otros grupos en varias especies de
mamferos. Adems, la necesidad de optimizar un protocolo particular para cada especie es bien conocida y
el xito, adems de una buena organizacin y capacidad
del equipo, dependa de tener un nmero adecuado de
ovocitos humanos para que los resultados fueran estadsticamente significativos.
Desde el punto de vista biotico representa un problema grave desperdiciar tantos ovocitos para este fin y
por ello es muy discutido el uso de tantos ovocitos humanos. Se comenta que el haber conseguido a 16 mujeres voluntarias para iniciar el estudio con 242 ovocitos
91
fue la principal ventaja que tuvo el equipo de la Universidad de Sel sobre los grupos de investigacin competidores que trabajan en pases con ms restricciones
legales y culturales. En el trabajo mencionado, el grupo
coreano obtuvo una sola lnea de hESC a partir de 242
ovocitos donados por 16 mujeres voluntarias. En cambio, en una investigacin posterior (Science 2005;308:
1777) obtuvieron 11 lneas a partir de 185 ovocitos.
En el segundo reporte establecen importantes mejoras tcnicas, adaptando las nuevas condiciones experimentales a la singularidad biolgica de las clulas
humanas, en contraste con los experimentos previos en
los que se haba empleado una tcnica similar a la reportada para la clonacin de especies animales. Adems, en
el trabajo anterior, los investigadores coreanos haban
transferido ncleos de clulas foliculares a ovocitos de
la misma mujer, por lo que se plante la posibilidad de
que la nica lnea de hESC obtenida en aquella ocasin
fuera producto de la activacin partenogentica del
ovocito y no derivada de la clonacin del genoma del
ncleo transferido.
En el segundo reporte existe un notable incremento
en la eficiencia en trminos del nmero de ovocitos empleados por lnea de hESC obtenida (10 veces mejor),
y demuestran sin ambigedad que las lneas de hESC se
derivan de los ncleos transferidos. Adems, en el
segundo trabajo el grupo coreano transfiri ncleos de
clulas de la piel tomadas de pacientes de edades y sexos
diferentes.
En todos los casos se obtuvieron hESC con la misma
identidad inmunitaria del paciente donador del ncleo
(complejo mayor de histocompatibilidad). Qued demostrado as que en humanos, al igual que en otros mamferos, es posible obtener hESC por transferencia nuclear (TN) sin importar la edad ni el sexo de los
pacientes. Los ncleos transferidos por el equipo coreano corresponden a pacientes que sufren padecimientos
donde la regeneracin o incluso la curacin definitiva
pudiera ser la clonacin teraputica: hipogamahipogama globulemia congnita, dao de la mdula espinal
y diabetes juvenil. Las 11 lneas de hESC derivadas crecen normalmente en el laboratorio, sin alteraciones cromosmicas (aneuploidias), conservan su pluripotencia
(capacidad para diferenciar diversos tipos celulares) y
mantienen la identidad de su DNA con la del paciente
donador.
Desde el punto de vista embriolgico esta investigacin es trascendente, al haber logrado la derivacin de
hESC a partir de clulas originadas de las tres capas embrionarias primarias: clulas hematopoyticas de origen mesodrmico, clulas neurales de origen ectodrmico y clulas pancreticas de origen endodrmico. En
92
este contexto se est ya en el umbral del empleo teraputico de las hESC derivadas por transferencia nuclear
(hESCTN). Tambin se hace necesario vigilar la estabilidad fisiolgica de las hESCTN, ya que son clulas
cuyo genoma es ajeno al citoplasma heredado del ovocito empleado como receptor del ncleo transferido.
Al menos dos organelos celulares heredados del citoplasma del cigoto reconstruido debern mantener un
equilibrio armnico con el genoma del ncleo transferido: las mitocondrias y los centriolos heredados del
ovocito y el espermatozoide, respectivamente. Durante
el desarrollo normal todos los linajes celulares que forman los tejidos heredan copias de esos organelos que
mantienen la capacidad de autorreplicarse. La heteroplastia de las mitocondrias y la homoplastia de los centriolos en las hESCNT representan una desviacin del
desarrollo normal que pudiera influir en el xito de la
terapia de reemplazo de tejidos daados.
Los factores epigenticos involucrados en el desarrollo normal y la diferenciacin celular controlada estn
en el principio de su exploracin, y su relevancia para
la clonacin teraputica es innegable. El conocimiento
sobre la impronta epigentica (modificaciones reversibles del DNA durante el desarrollo), su borrado, reestablecimiento y estabilidad estn avanzados en modelos
animales. Sin embargo, queda todava por realizar un
estudio similar en humanos en el que se comparen los
cambios epigenticos en las hESC derivadas de ovocitos fertilizados in vitro (conocidas desde hace algunos
aos) con la situacin epigentica de las actuales hESC
derivadas por TN. Por ltimo, a nivel del DNA genmico, falta establecer con precisin las consecuencias
que pudieran tener las posibles alteraciones en el comportamiento del binomio de la inmortalidad telomerasatelmero en las hESCTN de clulas envejecidas
tomadas de individuos posnatales (nios y adultos).
Clonacin reproductiva humana

Con el desarrollo de la biologa molecular y la biotecnologa en menos de 50 aos se descifr la estructura del
DNA, se aprendi su lenguaje y ahora, despus del proyecto del genoma humano, puede leerse la informacin
contenida en los cromosomas.
Por ello, hemos dejado de ser observadores del proceso evolutivo y somos capaces de modificar las instrucciones genticas de plantas, animales y la de nosotros mismos. Esta recin adquirida habilidad ha trado
consigo enormes esperanzas acerca de su utilizacin en
la medicina y en el control de enfermedades como el
cncer, la tuberculosis y la esquizofrenia. Sin embargo,
(Captulo 4)
la posibilidad de que estos conocimientos hagan realidad la clonacin reproductiva humana ha causado una
tecnofobia generalizada.
Como resultado, diversos grupos han pedido una total prohibicin de la clonacin en cualquiera de sus formas, sin importar las razones por las que se pretenda
continuar con este tipo de investigaciones. Los movimientos clonofbicos estn destinados al fracaso, ya
que, nos guste o no, el nacimiento del primer beb clonado puede haber ocurrido ya.
En este siglo XXI se ha instalado de lleno la medicina
regenerativa con su bastin principal, la terapia celular
con clulas madre; tambin estamos entrando de lleno
en la era de los clones, ya que hasta el momento la ciencia ha creado mediante este proceso ovejas, vacas,
gatos, y actualmente existen en el mundo al menos una
docena de laboratorios que tienen la capacidad de clonar
seres humanos. La clonacin humana es algo inevitable;
la curiosidad cientfica, la fama, y la demanda para tal
tecnologa lo garantizan. Sin embargo, es poco probable
que en el futuro este procedimiento est al alcance de
cualquier persona y que nuestras sociedades lleguen a
estar divididas dependiendo del modo en que sus individuos sean concebidos. Las razones de ello son el elevado costo econmico y tico, as como el riesgo que
tendrn que enfrentar las personas interesadas en producir copias de s mismas.
La clonacin no es una ciencia exacta y en promedio
se requieren 100 intentos para obtener el nacimiento de
un organismo sano viable. A esto debe aadirse la posibilidad de invertir mucho dinero y obtener un resultado
no deseado pues, como ocurri al clonar un gato en
2001, el producto puede no ser fsicamente idntico a su
progenitor gentico. En casos como ste la clonacin ha
sido una herramienta muy til, pues ha demostrado que
no somos exclusivamente el producto de nuestros genes, sino de cmo estos se expresan e interaccionan con
nuestro medio ambiente. El clonar una oveja, un gato o
una vaca tiene sus ventajas, pues nadie parece preocupado por evaluar su coeficiente intelectual y compararlo
con sus progenitores. En el caso de un humano esto podra no ser tan trivial, sobre todo si se considera que se
desconoce casi por completo cmo funcionan la memoria y cmo los genes influyen en la inteligencia.
A los futuros padres debe advertrseles tambin de la
posibilidad de que el producto, desde el punto de vista
cognoscitivo, podra no ser una copia de ellos. Y si ste
es el caso, debera aadirse una clusula al contrato de
clonacin en la que se especifique que no podr haber
devolucin del producto si viene defectuoso de origen.
Tambin es probable que la vida de un clon sea muy diferente a la nuestra, en particular con respecto a su

expectativa de sobrevivencia. La oveja Dolly, primer
organismo clonado, falleci vctima de envejecimiento
prematuro o de que naci siendo vieja.
En el caso de la clonacin humana, adems de poner
en peligro a la especie, nuestros valores o la riqueza y
diversidad gentica generada durante millones de aos
de evolucin; el tema sirve de botn a las acciones precipitadas de polticos oportunistas en respuesta a la prensa
internacional. En varios pases, incluido Mxico, se han
tomado medidas legales para prohibir la clonacin y
manipulacin de clulas derivadas de tejidos embrionarios sin conocer a fondo estas tecnologas y quitando la
oportunidad al avance mdicocientfico de poder sanar
enfermedades hasta hoy incurables. Esto retrasar el desarrollo de tcnicas que beneficiaran a millones de personas en todo el mundo. Algunas de las aplicaciones mdicas de esta tecnologa ya se usan en la terapia celular.
Cada ao, miles de personas reciben un tratamiento
con anticuerpos para controlar enfermedades como la
hepatitis, el ttanos y trastornos autoinmunitarios. Sin
embargo, estos anticuerpos son difciles de obtener
mediante las tcnicas utilizadas actualmente y se corre
el riego de contaminacin por patgenos an no descritos, como ocurri con el virus del SIDA. Investigadores
de la compaa Hematech, en Dakota, EUA, estn tratando de convertir vacas en fbricas de anticuerpos humanos mediante una tcnica semejante a la utilizada
para clonar a Dolly. Estos animales produciran leche
enriquecida con estas protenas, que despus de ser
purificadas podran ser utilizadas en seres humanos. De
tener xito, esto revolucionara la produccin de sueros
hiperinmunitarios y de vacunas, disminuyendo los costos de produccin y beneficiando potencialmente a millones de personas.
Otro grupo de investigacin ha clonado cerdos, con
la intencin de modificar la informacin gentica de los
genes que codifican para el MHC para que sus rganos,
como el corazn o los pulmones, sean idnticos a los rganos humanos y puedan ser utilizados en pacientes que
de otro modo moriran esperando un donador compatible.
Recientemente, un grupo de investigadores de Australia aisl clulas madre de cerebros de ratas adultas.
Este mtodo ha mostrado, sin embargo, que slo 1 de
cada 300 clulas del cerebro es progenitora.
De forma interesante, el profesor escocs Ian Wilmut, padre de la oveja Dolly, ya no quiere clonar ms,
sino reprogramar clulas de la piel para obtener clulas
madre pluripotenciales con las mismas propiedades que
las embrionarias, segn anunci en la revista alemana
Bild der Wissenschaft en Stuttgart, donde en una entrevista en la edicin de abril de 2008 seal: He cam-
93
biado de opinin. No es correcto pedir vulos a las mujeres cuando las probabilidades de xito en la clonacin
son tan escasas.
La donacin de vulos representa un riesgo para las
mujeres, aunque sea escaso, recalc el cientfico, que
trabaja en el Instituto Roslin para la Medicina Regenerativa, cerca de Edimburgo. En 2005 Wilmut, quien revolucion la tecnologa de clulas madre al clonar en
1996 la primera oveja del mundo, Dolly, obtuvo el permiso de las autoridades britnicas para clonar embriones humanos con el fin de investigar las causas de la
esclerosis lateral amiotrfica (ELA), una patologa provocada por la degeneracin de las neuronas motoras.
Un grupo de investigadores japoneses liderado por
Shinya Yamanaka, de la Universidad de Kioto, anunci
en noviembre de 2007 que haba reprogramado clulas
drmicas y las haba transformado en clulas madre pluripotentes, semejantes a las que se obtienen de los embriones. Wilmut subray que a partir de ahora quiere
dedicarse a esa tcnica de obtencin de clulas madre,
pues pese a que en un futuro cercano las clulas embrionarias seguirn siendo el sistema de referencia, ms
adelante quedar claro que las reprogramadas son
igual de buenas. Segn la revista cientfica alemana,
Wilmut ya comenz en febrero de 2008 a reprogramar
clulas de la piel de enfermos de esclerosis lateral amiotrfica. Su objetivo es dejarlas cultivar y derivar en neuronas, para estudiar as nuevos tejidos.
Un equipo de cientficos ingleses lograron crear los
primeros embriones hbridos humanoanimales en la
Universidad inglesa de Newcastle. Estos embriones,
desarrollados a partir de la inyeccin de material gentico de clulas epidrmicas humanas en vulos de vaca
enucleados sobrevivieron hasta tres das y forman parte
de una investigacin sobre varias enfermedades. El experimento fue autorizado por la Autoridad de Embriologa y Fertilizacin Humana semanas antes de que la Cmara de los Comunes votara sobre el proyecto de ley de
investigacin embrionaria y fertilidad, muy criticado
por la Iglesia catlica. De acuerdo con la BBC, el organismo regulador, que tiene potestad para conceder licencias en algunos casos, no quera perjudicar la investigacin.
Debido a las presiones, el primer ministro, Gordon
Brown, se vio obligado a conceder la libertad de voto a
los diputados laboristas en los aspectos ms polmicos
de su proyecto de ley, que regula la creacin de embriones hbridos destinados a la investigacin con fines teraputicos. La Iglesia catlica se opone a este tipo de investigaciones porque considera que son un ataque contra
los derechos humanos y pueden dar lugar a monstruosas
aberraciones. Por su parte, los cientficos dicen que la
94
creacin de embriones hbridos con ncleos celulares

humanos en vulos animales (que se utilizaran para
cultivar clulas madre y despus se destruiran, sin llegar a la fase de fetos) compensara la actual escasez de
donaciones de vulos humanos.
Los cientficos de Newcastle utilizaron vulos de
vaca precisamente por la falta de vulos humanos. En
declaraciones a la cadena noticiosa, el profesor John
Burn argument que su investigacin es totalmente
tica ya que, adems de haber sido autorizada, experimenta con un puado de clulas a las que nunca se les
permitir desarrollarse. Tras este primer paso, el equipo de cientficos intentar ahora que este tipo de embriones sobrevivan unos seis das, para poder extraer entonces clulas madre que podran usarse para investigar
tratamientos de enfermedades mediante terapia celular.
Usos potenciales de clulas madre

en la terapia celular
1. El crecimiento de neuronas y clulas gliales para
reparar las lesiones de la mdula espinal que resultan en parlisis de las extremidades.
2. La formacin de clulas musculares cardiacas
para reemplazar el tejido cicatrizal secundario a
infarto del miocardio.
3. El aislamiento de clulas cerebrales que secreten
dopamina para el tratamiento de la enfermedad de
Parkinson.
4. El trasplante de clulas pancreticas para producir
insulina, como tratamiento regenerativo para la
diabetes.
5. El crecimiento y purificacin de clulas de mdula
sea para el tratamiento de leucemias.
6. Terapia de regeneracin celular y de antienvejecimiento.
7. La modificacin gentica de clulas sanguneas
para hacerlas resistentes a la infeccin por virus
del SIDA, inmunomodulacin en el cncer y en
afecciones autoinmunitarias, etc.
8. Otras.
La importancia que tiene continuar el desarrollo de mtodos que permitan el uso de clulas madre es incuestionable. En el mundo existen cerca de 400 millones de
personas cuya vida podra ser salvada, o al menos mejorada sustancialmente, con la terapia celular con clulas
madre, como ya se est haciendo en Mxico.
Pases de primer mundo como Suiza, Gran Bretaa
y EUA han autorizado el uso de clulas madre para la
(Captulo 4)
investigacin con finalidad teraputica. Las autoridades

britnicas aprobaron el uso de embriones de animales
para crear clulas madre humanas. La Autoridad de Fertilizacin Humana y Embriologa decidi aceptar dicha
investigacin, mediante la cual el DNA humano es inyectado en embriones de vacas o conejos a los que se ha
retirado su material gentico. Los proyectos sern decididos caso por caso, ya que esta investigacin es crtica
para descubrir un tratamiento eficaz contra el Alzheimer y el Parkinson, entre otros. Se pretende utilizar embriones de animales porque el suministro de embriones
humanos es limitado y tiene implicaciones ticas.
Sin embargo, el riesgo de producir bebs genticamente modificados podra ser desastroso; por esta razn
y debido a la presin cada vez ms creciente en el
mundo de la aplicacin de la medicina regenerativa,
sera conveniente que la legislacin mundial diera apertura controlada al uso de las clulas madre humanas sin
manipulacin gentica adicional que pudiera desencadenar consecuencias peligrosas, pese al hecho de que
los estudios considerados slo permitirn el desarrollo
de los embriones por unos pocos das hasta la etapa de
mrula o blastocisto.
CULTIVOS DE CLULAS MADRE
Como las clulas madre embrionarias se obtienen de la

mrula o blastocisto, tienen que disociarse tratndolas
con enzimas proteolticas (como la tripsina y la colagenasa) y con agentes como el Ca++, del que depende la
adhesin celular. Para las clulas madre se sigue un protocolo de manejo similar. Los tejidos se disocian mediante agitacin suave, mientras que para separar los diferentes tipos celulares a partir de una suspensin
celular mixta se utilizan varios mtodos que aprovechan
las diferentes propiedades fsicas de las clulas. Por
ejemplo, las clulas grandes pueden separarse de las
pequeas, y las clulas ms densas de las menos densas,
mediante centrifugacin.
Otra estrategia se basa en la tendencia de algunos
tipos de clulas a adherirse con fuerza al cristal o al plstico, lo cual permite separarlas de clulas que se adhieran menos. La tcnica ms desarrollada de separacin
celular se basa en el marcaje especfico de las clulas
madre con anticuerpos acoplados a un colorante fluorescente, y posterior separacin de las clulas marcadas
de las no marcadas mediante un clasificador celular
activado por fluorescencia. Este procedimiento, conocido como seleccin o sorting, se lleva a cabo en un

citmetro de flujo en donde las clulas pasan en fila a
travs de un haz de luz lser, determinndose la fluorescencia de cada clula. Una vez que se han separado y
caracterizado las clulas madre embrionarias, se pueden utilizar citocinas y factores de crecimiento para
inducir su diferenciacin hacia estirpes celulares especficas.
95
caracterizan in vivo: las clulas madre diferenciadas a

fibroblastos secretan colgeno, las clulas derivadas del
msculo esqueltico embrionario se fusionan formando
fibras musculares gigantes que se contraen espontneamente en la caja de cultivo, las clulas nerviosas emiten
axones que son excitables elctricamente y que establecen sinapsis con otras clulas nerviosas, y las clulas
epiteliales forman extensas lminas con muchas de las
propiedades que caracterizan a los epitelios in vivo.
Cultivo celular en cajas

Las clulas madre en cultivo sobreviven, se multiplican
e incluso expresan propiedades diferenciales en condiciones adecuadas. Las clulas madre pueden visualizarse al microscopio o analizarse bioqumicamente, y
tambin se pueden estudiar los efectos de la adicin o
eliminacin de molculas determinadas, como hormonas o factores de crecimiento. Adems, en cultivos mixtos pueden estudiarse las interacciones entre un tipo celular y otro. Los experimentos con clulas madre en
cultivo se denominan in vitro (en vidrio), a diferencia de
los experimentos realizados en organismos intactos o in
vivo (en el organismo vivo).
Los experimentos originales implicaban el cultivo de
pequeos fragmentos de tejido, denominados explantes. Si bien esta tcnica sigue utilizndose, en la actualidad los cultivos se suelen preparar a partir de suspensiones de clulas madre obtenidas por disociacin de
tejidos, como ya se ha dicho. A diferencia de las bacterias y de muchas clulas vegetales, la mayor parte de las
clulas animales no estn adaptadas para crecer en suspensin, de manera que necesitan una superficie slida
sobre la cual crecer y dividirse. En la actualidad este soporte lo constituye la superficie de plstico de una placa
de cultivo. Sin embargo, los distintos tipos de clulas
madre tienen requerimientos diferentes; algunos de
ellos no crecen o no logran diferenciarse a menos que
la placa de cultivo est recubierta de componentes de
matriz extracelular (MEC) como la laminina, el colgeno, la fibronectina, etc.
Los cultivos preparados directamente a partir de los
tejidos de un organismo, con fraccionamiento previo o
sin l, reciben el nombre de cultivos primarios. En la
mayora de los casos las clulas madre de los cultivos
primarios pueden recuperarse de la placa de cultivo y
utilizarse para formar un gran nmero de cultivos
secundarios de clulas madre en vas de diferenciacin.
De esta forma, las clulas madre pueden ser subcultivadas repetidamente durante semanas, meses o aos sin
agotar la fuente de clulas, ya que stas se dividen indefinidamente por su actividad de telomerasa permanente.
Estas clulas muestran in vitro las propiedades que las
Lneas de clulas madre

La mayora de las clulas de vertebrados mueren tras un
nmero finito de divisiones en cultivo: por ejemplo, los
fibroblastos humanos en cultivo sobreviven durante algunos meses, dividindose nicamente entre 50 y 100
veces antes de morir. Esta vida limitada est relacionada
tambin con la vida limitada del humano. Sin embargo,
en cultivo surgen en ocasiones algunas clulas que han
sufrido alguna mutacin que las hace inmortales. Estas
clulas proliferan indefinidamente y pueden propagarse
como una lnea celular inmortal, como es el caso de las
clulas HeLa comentado al principio del captulo. La
extensin de la vida de un cultivo celular in vitro procedente de tejidos u rganos se logr gracias al uso de mltiples medios de cultivo, enriquecidos con sueros y suplementos, que al almacenarse en incubadoras simulan
el microambiente de un organismo vivo. Muchos laboratorios de investigacin en todo el mundo emplean los
cultivos celulares para validar sus mtodos de anlisis
y experimentos.
Los datos derivados de los ensayos en cultivos celulares pueden culminar en la publicacin de un artculo
en una revista especializada, en una patente o en la aplicacin de un tratamiento mdico contra algn padecimiento. Gracias al empleo de los cultivos celulares se
han realizado grandes avances en beneficio de las ciencias biomdicas.
Las clulas HeLa fueron indispensables para obtener
la vacuna de la polio y podran, algn da, ayudar a curar
el cncer. Otro ejemplo son las investigaciones de
George Kehler y Csar Milstein, quienes obtuvieron
anticuerpos monoclonales con especificidad predefinida a partir de la fusin de dos clulas distintas utilizando cultivos celulares. Hoy en da la tecnologa de los
anticuerpos monoclonales es indispensable para el
diagnstico y el tratamiento teraputico de varias enfermedades.
Las principales instituciones internacionales que resguardan y distribuyen cultivos de clulas madre con
propsitos de aplicacin clnica y de investigacin, ade-
96

Mdula
espinal
Aislamiento
celular
Digestin
enzimtica
Filtro de
nailon
Cultivo
Separacin
Mielina y detritus
Gradiente de Percoll
Eritrocitos
Clulas
lavadas
Cultivo
Figura 42. Protocolo de aislamiento de clulas madre de

mdula espinal de adulto. El tejido se somete a digestin
enzimtica y disociacin mecnica. Por filtracin se separan
los fragmentos grandes y la suspensin de clulas. Las
clulas madre se separan con gradientes de densidad de
Percoll, se lavan y se cultivan (adaptado de: Shannon
Macauley).
ms de Suiza y Espaa, son la American Type Culture

Collection (ATCC, en EUA), la European Collection of
Animal Cell Cultures (ECACC, en Inglaterra), Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen
(DSMZ, en Alemania) y el Japanese Collection of
Research Bioresources Cell Bank (JCRB Cell Bank, en
Japn). Estas organizaciones emplean un sistema criognico y genealgico de conservacin y control de calidad de los cultivos celulares con el objetivo de evitar
mantener una lnea celular en cultivo extensivo o continuo cuando no se requiera, para evitar riesgos de contaminacin cruzada con otra lnea celular o microbiana,
y para que no se pierda el genotipo o fenotipo de inters.
De esta manera se garantizan la continuidad y la reproducibilidad de los resultados en la investigacin.
La importancia de manejar cultivos celulares para las
industrias farmacuticas radica en su aplicacin en estudios toxicolgicos. El empleo de modelos animales
(Captulo 4)
para la evaluacin de la respuesta biolgica que incitara

a dicho frmaco en humanos es crucial; no obstante, los
cultivos celulares han brindado un excelente modelo
para el estudio alternativo de citotoxicidad, bioequivalencia, sensibilidad y neutralizacin de frmacos, con
resultados similares o mejores que en un modelo animal. Esto se suma a las nuevas legislaciones de varios
pases que prohben experimentar con animales, como
Alemania, donde se prohbe la obtencin de anticuerpos
monoclonales de lquido asctico de animales. Lo anterior ha obligado a buscar otros mtodos de anlisis.
Los cultivos celulares resuelven estas dificultades
porque permiten validar frmacos a travs de bioensayos como experimentos de ciclo celular, diferenciacin,
proliferacin, inhibicin, motilidad, quimiotaxis,
muerte celular por apoptosis, citotoxicidad y necrosis.
Estos protocolos no slo permiten estudiar la efectividad de los frmacos, sino tambin la actividad biolgica
de diversas protenas naturales, sintticas o recombinantes, como citocinas, quimiocinas, hormonas, receptores, proteasas, molculas de adhesin y anticuerpos.
Tan sobresaliente es el papel que desempean los
cultivos celulares que hoy en da muchas firmas comerciales prestigiadas han implementado estos bioensayos
en sus protocolos para evaluar rpida, reproducible y
confiablemente la actividad biolgica de productos desarrollados por ellos. Tan slo basta mirar la hoja tcnica de un producto para reconocer que se utiliz un cultivo celular para medir la actividad biolgica de su
molcula.
Las lneas celulares obtenidas a partir de clulas cancerosas difieren de las que se obtienen a partir de clulas
normales en varios aspectos; por ejemplo, a menudo las
lneas de clulas cancerosas crecen sin adherirse a ninguna superficie y proliferan en una placa de cultivo en
mucha mayor densidad que la de las clulas normales.
A pesar de que todas las clulas de una lnea celular son
muy similares entre s, a menudo no son idnticas. La
uniformidad gentica de una lnea celular puede mejorarse con la clonacin celular, mediante la cual se asla
una nica clula y se le permite proliferar hasta formar
una colonia.
Un clon celular es cualquier poblacin de clulas
derivadas de una nica clula ancestral. Una de las aplicaciones ms importantes de la clonacin celular ha
sido el aislamiento de lneas celulares mutantes con
defectos en determinados genes de manera natural o
inducida. Si la expresin de un gen se elimina de forma
permanente, se denomina expresin knock out, pero si
se introduce un gen extrao supernumerario y funcional
del genoma nativo de forma artificial, se denomina
expresin transgnica (figura 42).
INMUNOLOCALIZACIN
PARA PROTENAS
Los marcadores de las clulas madre pueden identificarse mediante anticuerpos especficos con un sistema
de revelado adicional, lo que permite visualizar las clulas en el microscopio de luz en el caso de la inmunohistoqumica, o con un microscopio de fluorescencia o con
focal mediante la tcnica de inmunofluorescencia. Las
clulas madre en suspensin tambin pueden identificarse, clasificarse y separarse mediante citometra de
flujo o por seleccin de clulas.
Sistema avidinabiotina
La avidina es una glicoprotena derivada del huevo con
afinidad extremadamente elevada (afinidad constante >
1015 M1) para la biotina. Muchas molculas de biotina
pueden acoplarse a una protena, permitiendo a la protena biotinilada unirse a ms de una molcula de avidina. Si la biotinilacin se realiza en condiciones ptimas, la actividad biolgica de la protena puede
conservarse. Por los enlaces covalentes con que se une
la avidina con diferentes ligandos, como fluorocromos,
enzimas o marcadores, el sistema avidinabiotina puede utilizarse para estudiar una amplia variedad de estructuras biolgicas.
Este sistema ha demostrado ser particularmente til en
el descubrimiento y localizacin de marcadores celulares
especficos, molculas de superficie, antgenos, glucoconjugados y cidos nucleicos, empleando anticuerpos
biotinilados, lectinas o sondas de cidos nucleicos. El
mtodo ABC, o mtodo del complejo preformado, es
una variante del sistema avidinabiotina. Despus de la
aplicacin de un anticuerpo primario o secundario biotinilado se agrega un complejo preformado entre avidina
y una enzima biotinilada. El sistema de avidinabiotina
proporciona la mayor sensibilidad en fluorescencia y en
la deteccin basada en enzimas, versatilidad que permite un intercambio fcil o la introduccin de marcadores mltiples, y la habilidad de localizar o descubrir
antgenos difciles de ver o de medir con otras tcnicas.
Inmunohistoqumica con peroxidasa

Despus de obtener clulas madre de su sitio natural,
por ejemplo las de origen epidrmico ubicadas en el es-
97
trato basal o las cultivadas in vitro, se inhibe la peroxidasa endgena por incubacin con una solucin de metanol
y perxido de hidrgeno a 30% (34 mL de metanol y 6
mL de H2O2) durante 2 h en un vaso de Coplin. Despus
de lavar con alcohol de 96%, agua y amortiguador salino
de fosfatos (PBS), se bloquean los sitios libres antignicos con suero a 3% en PBS/Triton 0.3% por 30 min. Posteriormente se decanta el exceso y se aplican los anticuerpos primarios contra los antgenos blanco a una
dilucin 1:100 en la solucin de bloqueo. Se incuba toda
la noche en cmara hmeda a 4 _C. Despus de este
tiempo, las laminillas se lavan dos veces en agitacin de
100 revoluciones por minuto (rpm) con PBS y se agregan
los anticuerpos secundarios: antirratn, conejo, cabra o
humanos biotinilados dirigidos contra los anticuerpos
primarios correspondientes a una dilucin 1:200 en la
solucin de bloqueo y se dejan incubar por 1 h a temperatura ambiente en agitacin de 20 rpm; luego se lava nuevamente dos veces en agitacin de 100 rpm con PBS. Las
preparaciones se colocan nuevamente 30 min en la cmara
hmeda en contacto con el complejo avidinabiotina en
PBS. La reaccin antgenoanticuerpo se detecta empleando una solucin que contiene 40 mL de H2O2 a 30%,
ya que es el sustrato de la enzima peroxidasa, 1 mg del cromgeno diaminobencidina (DAB) que funciona como
aceptor de electrones, disuelto en 1 mL de PBS. Despus
de 15 min de exposicin a esta solucin, las laminillas se
lavan con agua corriente, se contratien con hematoxilina
de Harris, se deshidratan y se montan con resina sinttica
y cubreobjetos de 25 x 25 a 50 mm del nmero 1. Posteriormente se observan al microscopio adecuado.
Inmunohistoqumica
con fosfatasa alcalina
Despus de obtenidas las clulas madre, se lavan con
amortiguador salino de fosfatos (PBS), se bloquean los
sitios libres antignicos con suero a 3% en PBS/Triton
0.3%, por 30 min. Posteriormente se decanta el exceso
y se aplican los anticuerpos primarios, por ejemplo, monoclonal IgG1 de ratn antiantgeno blanco, a una dilucin 1:100 en la solucin de bloqueo. Se incuba toda la
noche en cmara hmeda a 4 _C. Terminado este tiempo, las laminillas se lavan dos veces en agitacin de 100
rpm con PBS y se agregan 50 mL de anticuerpo secundario cabra antirratn y anticonejo acoplado a fosfatasa alcalina y se deja incubar por 1 h a temperatura ambiente
en agitacin de 20 rpm; luego se lavan de nuevo dos
veces en agitacin de 100 rpm con PBS.
La reaccin antgenoanticuerpo se detecta con 100 mg
del cromgeno rojo rpido en naftol solucin y amorti-
98
guador Tris ms levamisol para inhibir fosfatasa alcalina endgena. Despus de 15 min de exposicin a esta
solucin, las laminillas se lavan con agua corriente, se
contratien con hematoxilina de Harris y se montan con
glicerol o resina de montaje hidrosoluble y cubreobjetos
de 25 x 25 a 50 mm del nmero. Despus de sellar las
preparaciones permanentemente con esmalte de uas o
cemento ahulado, se observan al microscopio y se toman fotografas.
Inmunofluorescencia
Esta tcnica se realiza para observar y analizar los marcadores de las clulas madre en microscopios de fluorescencia (epifluorescencia) o microscopios confocales. Despus de lavar las clulas madre con agua y PBS,
se bloquean los sitios libres antignicos para evitar pegado inespecfico con suero a 3% en PBS/Triton X100
a 0.1% por 30 min. Posteriormente se decanta el exceso
de la solucin y se colocan los anticuerpos primarios
contra los antgenos blanco a una dilucin 1:100 en cmara hmeda, y se dejan incubando toda la noche a temperatura ambiente.
Terminado este tiempo, las laminillas se lavan tres
veces con PBS y se agregan los anticuerpos secundarios
acoplados a fluorocromos (FITC, cianina 5 o Cy5,
TRITC, etc.) contra los anticuerpos primarios correspondientes a una dilucin 1:100, y se dejan incubar por
50 min en la cmara hmeda oscura; luego se vuelven
a lavar tres veces con PBS, se montan en los cubreobjetos con la resina de montaje hidrosoluble y se sellan con
cemento ahulado o esmalte de uas. Despus se observan con el microscopio adecuado para fluorescencia.
Hibridacin in situ (ISH)

Esta tcnica se aplica a la deteccin de secuencias especficas de cidos nucleicos, ya sea de RNA o de DNA,
a nivel del ncleo o citoplasma. La conjuncin entre las
tcnicas histolgicas y el marcaje de sondas de cidos
nucleicos ha permitido identificar las clulas involucradas en el proceso que se estudia en el contexto de un tejido. Las ventajas del uso de la ISH sobre otras tcnicas
es muy amplia; se pueden utilizar tejidos fijados con
formaldehdo e incluidos en parafina y almacenados durante aos, a diferencia de la mayora de las tcnicas que
estudian la expresin celular y utilizan tejido fresco. La
ISH es una herramienta muy poderosa para identificar
la expresin de genes especficos de las clulas madre
(Captulo 4)
mediante la identificacin de su mRNA. La ISH tambin puede identificar clulas de cualquier estirpe celular
que expresen genes especficos (mRNA), para detectar
qu tipo de clulas estn infectadas con microorganismos patgenos y estudiar caractersticas intrnsecas del
genoma, identificacin de genes (DNA), sexo o alteraciones cromosmicas. Incluso se pueden evaluar de manera semicuantitativa y cualitativa las caractersticas y
niveles de expresin de genes en particular. Por un lado
se puede tener abundancia de material biolgico almacenado por aos sin detrimento en la estructura y calidad de los cidos nucleicos, y por otro se utilizan algunas clulas madre obtenidas de los cultivos in vitro o
cantidades minsculas del tejido (cortes de 3 a 5 mm).
El procedimiento de la ISH involucra una serie de
pasos que se pueden resumir como sigue: las clulas
madre se colocan en laminillas recubiertas de molculas
cargadas que permiten una unin fuerte entre la clula
y la superficie del vidrio, como el silano y la Poli
LLisina. Despus de garantizar la completa hidratacin de las clulas madre se realiza la permeabilizacin,
la cual se logra al tratar la muestra con la enzima proteinasa K a muy baja concentracin (1 a 5 mg/mL) o pepsina; con estas enzimas se digieren estructuras proteicas
que estorban el paso de sondas marcadas hacia el citoplasma o el ncleo celular.
Despus se realiza el proceso de prehibridacin o
bloqueo de sitios que potencialmente podran generar
uniones inespecficas entre la sonda que va a utilizarse
y las secuencias de RNA o DNA existentes en las clulas. Se utiliza una solucin de prehibridacin que entre
sus componentes utiliza tambin DNA fraccionado de
esperma de salmn. La funcin de estos fragmentos de
DNA desnaturalizado en cadena sencilla es unirse a los
sitios inespecficos para evitar que la sonda se enlace en
secuencias incorrectas.
El siguiente paso es el de la hibridacin, en la cual
una sonda especfica se une a una secuencia complementaria, ya sea en el citoplasma o en el ncleo. Con los
tratamientos previos a la hibridacin se logra que las
clulas madre sean permeables a la sonda, que por lo
general es una secuencia de DNA de cadena sencilla de
20 a 50 bases.
En este paso es crucial calentar la muestra a 80 _C
(temperatura de desnaturalizacin) para permitir la desnaturalizacin de estructuras secundarias de RNA y que
la sonda se una a la secuencia complementaria. Este
paso se contina a 37 a 45 _C durante 24 h para permitir
que la sonda sature los sitios de unin en el citoplasma
celular. Al finalizar el paso anterior se deben eliminar
el exceso de sonda y algunas uniones inespecficas, para
lo cual se realizan lavados hipertnicos que eliminan la

sonda no incorporada. Los lavados se realizan a una
astringencia tal que se eliminan el exceso de sonda y las
uniones falsas entre la sonda y secuencias inespecficas.
Finalmente se monta la preparacin (montaje de la
preparacin); si se utiliz una sonda marcada con molculas fluorescentes, se coloca sobre la muestra una sustancia que conserva la fluorescencia, como la resina de
montaje VECTASHIELDR. Se cubre la preparacin
con un cubreobjetos y se sella con esmalte para uas
transparente. El procedimiento que se acaba de describir se denomina ISH directa, ya que la sonda utilizada
emite por s misma la seal fluorescente. Pero si la
sonda contiene estreptavidina, se puede usar un anticuerpo secundario biotinilado con su respectivo paso de
revelado con diaminobencidina (DAB) para utilizar
microscopia de luz, ya que la DAB tiene un color caf
tabaco caracterstico.
En este caso la tcnica se denomina ISH indirecta, ya
que utiliza un sistema de revelado adicional que reacciona con la sonda. Cuando se evala la expresin de
genes se debe considerar que en el ambiente, en la piel
del experimentador, en el aire exhalado y en prcticamente todas las superficies existen las enzimas RNAasas que pueden degradar los mRNA del tejido que se va
a analizar; por lo tanto, todo el material de laboratorio
que se utiliza para esta tcnica debe descontaminarse a
fin de eliminar estas enzimas RNAasas. Para tal efecto,
antes de iniciar la hibridacin se hornea a 300 _C por 4
h todo el material de metal y de vidrio; el agua que se
utiliza se trata con dietilpirocarbonato (DEPC), que elimina la actividad de las RNAasas, y se debe trabajar en
condiciones adecuadas de biologa molecular utilizando campana de flujo laminar, mechero de Bunsen, gafas, bata, cubrebocas, guantes, etc.
Aspectos bioticos
sobre las clulas madre
El pblico en general, como siempre, est confundido
por las declaraciones hechas por lderes religiosos y
polticos que de buena o mala fe aprovechan la difusin
realizada por los medios masivos de comunicacin. En
el concepto del grupo de investigacin de la AMMR
(Asociacin Nacional de Medicina Regenerativa), la
polmica trasciende la posibilidad de una discusin
cientfica, situndose en el plano de las creencias desarrolladas por las diversas idiosincrasias. En Mxico,
con una mayora de catlicos, result polticamente
ventajoso para muchos diputados votar por la prohibi-
99
cin de cualquier forma de investigacin en clonacin

humana. Se argumenta que la vida humana es sagrada
y que su dignidad como tal se inicia en el momento de
la fecundacin.
Es obvio que la transferencia nuclear a un ovocito
enucleado en el laboratorio est lejos de ser una fecundacin en su sentido original. Sin embargo, se dice que
si el cigoto artificialmente reconstruido tiene potencialidad para desarrollarse como ser humano, la defensa
de su derecho a nacer no debe distinguirse de la defensa
que se hace para cualquier individuo que se desarrolla
normalmente. Aunque planteado as el argumento parece vlido, lo que en realidad se est defendiendo es la
potencialidad del ovocito para desarrollarse como ser
humano.
Desde el punto de vista biolgico, el ovocito ovulado
del ovario humano cada 28 das es potencialmente un
ser humano. Si voluntariamente se evita su fecundacin
con mtodos de abstinencia, ritmo biolgico, dispositivos mecnicos o frmacos, se estar interfiriendo conscientemente con la potencialidad del ovocito para
desarrollarse como ser humano. Adems, cualquier clula somtica del cuerpo humano tiene la potencialidad
de convertirse en un ser humano al contener el genoma
completo.
De alrededor de 400 ovocitos ovulados por una mujer
durante su vida reproductiva, slo algunos cumplen con
su potencialidad en el sentido descrito para desarrollarse como seres humanos. Para lograrlo, los ovocitos
requieren pasar por una compleja seleccin natural (factores biolgicos) y, en el caso de la especie humana,
tambin por una seleccin cultural (factores psicolgicos, culturales, sociales, econmicos, etc.). El concepto
de potencialidad del ovocito para desarrollarse como
un individuo adulto en trminos biolgicos es esencialmente probabilstico. En cambio, si se maneja el mismo
concepto en trminos ticos, tal vez sea posible distinguir la diferencia en la intencionalidad de la clonacin reproductiva y la teraputica. En la primera se busca reproducir a un individuo con una rplica del genoma
del donante del ncleo transferido. Al respecto, los resultados hasta ahora obtenidos con animales unifican a
la mayora de la comunidad cientfica, que todava no
recomienda este tipo de clonacin en seres humanos.
En la clonacin teraputica, en cambio, la intencin
es obtener clulas clonadas de un paciente donador, capaces de regenerar tejidos daados por factores genticos o traumticos. Es indudable que los avances de la investigacin en esta rea van a continuar con o sin la
aprobacin de los grupos actualmente opositores. Aunque costosa, la tecnologa de clonacin teraputica se
establecer a mediano plazo como una alternativa mdi-
100
ca de rutina, y las leyes prohibitivas actualmente vigentes en varios pases, incluido Mxico, tendrn que ser
revisadas y modificadas en beneficio de la poblacin en
(Captulo 4)
general, ya que las enfermedades hasta ahora incurables, como la diabetes, pueden regenerarse de forma
alentadora con la terapia celular con clulas madre.
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(Captulo 4)
Captulo
La terapia celular en la prctica mdica
INTRODUCCIN
Las clulas madre pueden diferenciarse en otras y regenerar tejidos. La estrategia funciona, pero nadie sabe
cmo, ni por qu. Para amortizar todo el potencial que
tiene la terapia celular habr que entender sus mecanismos y la clave parece estar en la biologa celular. Para
empezar, habr que descifrar qu ocurre dentro del ovocito para que su ncleo se reprograme. Este conocimiento es un paso previo antes de poder dirigir con precisin la diferenciacin de una clula en otra.
La teora de regeneracin con clulas madre propone que las clulas madre son liberadas en forma natural por la mdula sea y otros depsitos naturales. En
condiciones favorables de salud el nmero de clulas
madre que alcanzan el torrente sanguneo y viajan a los
tejidos que tienen mayor necesidad de reemplazo de clulas se mantiene constante para prevenir enfermedades, debilitamiento y daos mayores en los organismos.
Sin embargo, cuando un rgano est sujeto a lesiones o
enfermedades, este rgano dispara compuestos que
emiten una seal para que las clulas madre sean liberadas de sus estados de quiescencia para ser liberadas a la
circulacin; sin embargo, el nmero de clulas madre
disponibles en circulacin no es suficiente para resolver
el problema, establecindose la insuficiencia, dao o
enfermedad en el organismo.
La terapia celular con clulas madre1 se origin en el
trabajo cientfico enfocado en resolver los problemas de
la radiobiologa clnica (radiooncologa), especficamente de la radiosensibilidad que existe en las clulas
En el siglo XIX August Weismann estableci que los organismos multicelulares estaban formados por dos tipos
de clulas: las somticas y las germinales. Mientras que
las primeras desaparecen cuando el individuo muere, las
segundas persisten cuando el individuo tiene descendientes. Aunque la idea de la inmortalidad del plasma
germinal postulada por Weismann en el contexto de
aquellos tiempos y de que la recin creada teora celular
parecera obsoleta, es evidente que el investigador alemn intuy la existencia de factores persistentes que son
transmisibles entre una generacin y otra. La clonacin
de la oveja Dolly abri de nueva cuenta la necesidad de
conceptualizar el desarrollo en trminos de un sistema
multicelular donde la regulacin de la expresin gentica fuera ms all de la secuenciacin del DNA. No
obstante, en la actualidad es posible manipular las clulas in vitro con relativa facilidad, lo cual las desva de
su destino original y las obliga a mostrar su potencial
plasticidad fuera de su nicho original.
Fue el prembulo al concepto actual que se tiene de
las clulas madre o stem cells, el cual seala que:
son aquellas clulas capaces de multiplicarse de
manera indefinida en el laboratorio y susceptibles de
diferenciarse en diversos tipos celulares tanto in vivo
como in vitro. La reciente factibilidad de poder generar clulas germinales a partir de clulas madre somticas sugiere que la clsica distincin entre las clulas
somticas y las germinales habra desaparecido en trminos del concepto biolgico de inmortalidad propuesto por Weismann.
1. Tratamiento en que se administra o induce a las clulas

madre (stem cells) para que se diferencien en el tipo celular
especfico que se necesita para reparar clulas daadas o
sustituir a las que se destruyeron en los tejidos (Del ingls:
cellbased therapies y regenerative medicine).
103
104
(Captulo 5)
% Clulas madre en circulacin
130
Figura 51. Clulas asesinas naturales (NK) en bazo de

ratn. Las flechas sealan las clulas NK detectadas con
inmunohistoqumica con fosfatasa alcalina para NK. 400 X.
cancerosas2 y las clulas normales. Este trabajo pionero

fue realizado por James Edgar Till y Ernest McCulloch
en Toronto y sus experimentos involucraban la metodologa de inyectar clulas de la mdula sea en ratones
irradiados. Observaron ndulos en el bazo de los ratones; los ndulos aparecan en proporcin al nmero de
clulas de mdula sea inyectadas. Dieron a esos ndulos el nombre de colonias del bazo3 (spleen colonies)
y posteriormente especularon sobre su origen. Estos experimentos realizados desde 1961 en el Ontario Cancer
Institute del Princess Margaret Hospital culminaron en
la demostracin de la existencia de las clulas madre
(stem cells) en 1963. Las clulas madre del bazo sobreviven al reconocimiento de los linfocitos y las clulas
NK4 (figura 51) porque no expresan molculas de
reconocimiento antignico como el complejo mayor de
histocompatibilidad. Esto ha permitido que los experimentos de terapia celular con la introduccin de clulas
madre de diferentes especies (xenognicos) o individuos de la misma especie (alognicos) no se pierdan,
brindando resultados teraputicos prometedores.
Las clulas madre inyectadas endovenosamente no
son detectadas por el sistema inmunitario y posteriormente se identificaron las clulas madre multipotencia-
Las clulas cancerosas ms agresivas se comportan

como las clulas tronco. Si los cnceres son causados por
las clulas tronco afectadas, los estudios sobre la capacidad de diferenciacin de una clula pueden conducir a las
nuevas herramientas que podran reconocer tempranamente a los tumores y destruirlos con eficacia.
3. Spleen colonies.
4. Natural killer: asesinas naturales (respuesta inmunitaria
natural).
Control
p < 0.003
121%
120
110
100
90
0
30
60
Minutos
90
120
Figura 52. FACs highspeed sorters. Esta tecnologa permite identificar y separar clulas madre provenientes de mdula sea o de la sangre perifrica del paciente. Con ello se
realizan estudios clnicos como ste que muestra un incremento de 30%* de clulas madre despus de la terapia en
pacientes humanos. Los voluntarios descansaron una hora
antes de establecer niveles de lineamiento base. Despus de
haber tomado las primeras muestras de sangre, los voluntarios tomaron PxP StemEnhance vs. placebo. Luego, las
muestras de sangre fueron tomadas en 30, 60 y 120 min despus de tomar la materia consumible. El nmero de las clulas madre que circulaban fue cuantificado a travs de un anlisis de las muestras de sangre usando el mtodo de activacin fluorescnica para la seleccin celular (FACS). (*Un
incremento de 25 a 30% de clulas madre circulando en el
cuerpo est dentro del rango fisiolgico y no constituye un
dao al organismo. La cantidad de mdula sea activa llega
aproximadamente a 2 600 g (5.7 lbs), con aproximadamente
1.3 trillones de clulas en la mdula. Un incremento de 25 a
30% en las clulas madre en circulacin corresponde aproximadamente a 3 millones de clulas, equivalente a 0.0003%
de las clulas madre presentes en la mdula sea.)
les5 formadoras de las clulas sanguneas de origen

adulto (HSC6); stas pueden aislarse actualmente empleando la tecnologa de citometra de flujo de alta velocidad, marcando las clulas con anticuerpos monoclo5.
2.
Terapia
Son clulas madre encontradas en el adulto; pueden formar una cantidad limitada de tipos celulares cuando no se
ha dado ningn estmulo para su diferenciacin; es decir,
cuando han crecido in vitro. El trmino pluripotenciales debe
distinguirse de multipotenciales, ya que el primero significa
que pueden diferenciarse en todos los derivados celulares
del ectodermo, endodermo y mesodermo. stas incluyen
cada uno de los ms de 250 tipos celulares en el cuerpo humano adulto.
6. Del ingls: hematopoietic stem sells procedentes de mdula sea.
105
Cuadro 51. Descripcin de las caractersticas que definen a las clulas madre
Caractersticas
Autorrenovacin
Estado de indiferenciacin
Pluripotentes
Integracin en el desarrollo
embrionario
Proliferacin indiferenciada
in vitro
Diferenciacin in vitro
Formacin de teratomas
Descripcin
Estas clulas son capaces de proliferar y producir clulas idnticas renovndose a s mismas
Estas clulas no son especializadas y son iguales a las clulas de la masa celular interna
del blastocisto
Bajo ciertas condiciones estas clulas pueden diferenciarse y generar ciertas lneas celulares
Estas clulas permiten desarrollar animales quimricos cuando son integradas en estadios
tempranos del embrin, mrula y blastocisto, pudiendo expresar diferentes genotipos y
fenotipos (mosaicismo)
Bajo ciertas condiciones de cultivo celular estas clulas pueden proliferar manteniendo
lneas celulares estables e indiferenciadas
Al remover ciertas citocinas del cultivo celular y ciertos medios de cultivo celular, las clulas
forman cuerpos embrioides (estructuras esfricas similares a los blastocistos)
Algunos tipos de clulas madre, sobre todo las derivadas de teratomas, producen tumores
benignos (teratomas) cuando son inyectadas subcutnea o intraperitonealmente en ratones inmunosuprimidos
nales7 (sorting). La proporcin es: 1 clula madre sangunea por cada 15 000 clulas madre de la mdula sea
(figura 52). El crecimiento de las empresas dedicadas a
la criopreservacin de sangre de cordn umbilical representa una especie de nuevo seguro mdico, ya que con
esto se asegura una fuente de clulas madre para un trasplante autlogo en el futuro en caso de ser necesario.
Despus del descubrimiento de las clulas madre8
(cuadro 51) por Till y McCulloch en 1961 se fueron
exponiendo las propiedades que caracterizan a la clula
madre y la definen como tal: capacidad de proliferar sin
diferenciarse durante periodos prolongados, en principio durante el tiempo de vida del rgano del que procede. Adems, las clulas madre tienen la capacidad de
diferenciarse hasta formar clulas maduras y funcionales. Una clula madre es capaz de generar clulas maduras existentes en distintos tejidos maduros. Tambin las
clulas madre tienen la capacidad diferenciadora in
vivo; en otras palabras, una clula madre es capaz, una
vez injertada en un animal de experimentacin, de diferenciarse hacia clulas maduras y funcionales. Otro
concepto importante es el de pluripotencialidad y multipotencialidad. Aunque estos trminos y otros similares
se han utilizado con cierta ambigedad, al hablar de
clulas madre pluripotenciales se habla de clulas con
las caractersticas antes descritas capaces de diferenciase in vitro e in vivo a tejidos derivados de cualquiera
de las otras capas embrionarias: ectodermo, mesodermo
y endodermo.
7. FACs highspeed
8. Stem cells.
sorters.
Las clulas madre embrionarias humanas obtenidas

de la masa celular interna del blastocisto o de la cresta
gonadal fetal han demostrado la capacidad de diferenciarse a tejidos de diferentes orgenes embrionarios tanto
tanto somticos como clulas germinales. Su capacidad
proliferativa es prcticamente ilimitada, en parte gracias a que expresan actividad telomerasa. En un principio, aunque siempre se consider su enorme potencialidad, existen numerosos obstculos para su utilizacin
clnica. Surgi el concepto de que las clulas madre embrionarias podran inducir la formacin de teratomas al
ser infundidas en animales de experimentacin (tumores benignos), mientras que el control de su diferenciacin tambin es complejo. Adems de las clulas madre
pluripotenciales, existen las clulas madre multipotenciales. Tanto en animales de experimentacin como en
el ser humano se han identificado clulas madre en diferentes tejidos, como en cerebro, hgado, msculo, mdula sea, epidermis y epitelio gastrointestinal.9 Estas
clulas son capaces de proliferar durante tiempos prolongados, pero su capacidad diferenciadora se limita en
general a los tejidos existentes en los rganos de los cuales se derivan y por ello se llaman clulas madre multipotenciales.
Recientemente diversos estudios han indicado que
las clulas madre de origen embrionario son capaces de
generar tejidos que se derivan de una capa embrionaria
9. Seale
P, Rudnicki MA: A new look at the origin, function,

and stemcell status of muscle satellite cells. Dev Biol
2000;218(2):115124. Uchida N, Buck DW, He D et al.:
Direct isolation of human central nervous system stem cells.
Proc Natl Acad Sci USA 2000;97(26):1472014725.
106
(Captulo 5)
Blastocisto
Origen: derivado de la
preimplantacin o
periimplantacin del
embrin
Clulas madre
embrionarias (ESC)
Autorrenovacin: las clulas

pueden dividirse
haciendo copias de s
mismas durante largos
periodos de tiempo antes
de diferenciarse
Pluripotenciales: las clulas

madre embrionarias pueden
crecer en clulas de las tres
capas germinales manteniendose
en cultivos celulares por
largo tiempo
Las tres capas germinales y un ejemplo de tipo celular derivado
Ectodermo:
neuronas tcnicas
de Golgi
Mesodermo:
corpsculo de Hassal
y linfocitos T
HyE
Endodermo:
hepatocitos en la vena
central, tcnica de Wilder
Figura 53. Versatilidad y capacidad de transdiferenciacin de las clulas madre de origen embrionario.
diferente (ectodermo, mesodermo y endodermo).10 Este

concepto se ha denominado versatilidad de las clulas
madre o capacidad de transdiferenciacin. Aunque
demostrar la capacidad transdiferenciadora de una clulas exige la utilizacin de criterios estrictos y muchos de
los trabajos publicados no cumplen estos requisitos, la
existencia de esta propiedad por parte de algunas poblaciones celulares est aceptada. As, por ejemplo, se ha
10.
Anderson DJ, Gage FH, Weissman IL: Can stem cells

cross lineage boundaries? Nat Med 2001;7(4):393395. Alison MR, Poulsom R, Jeffery R et al.: Hepatocytes from non
hepatic adult stem cells. Nature 2000;406(6793):257.
Lagasse E, Connors H, AlDhalimy M et al.: Purified hematopoietic stem cells can differentiate into hepatocytes in vivo.
Nat Med 2000;6(11):12291234. Makino S, Fukuda K,
Miyoshi S et al.: Cardiomyocytes can be generated from
marrow stromal cells in vitro. J Clin Invest 1999;103(5):
697705. Mezey E, Chandross KJ, Harta G et al.: Turning
blood into brain: cells bearing neuronal antigens generated
in vivo from bone marrow. Science 2000;290(5497):
17791782. Orlic D, Kajstura J, Chimenti S et al.: Bone
marrow cells regenerate infarcted myocardium. Nature
2001;410(6829):701705.
demostrado que clulas obtenidas de mdula sea (mesodermo) son capaces de generar tejido heptico (endodermo) o tejido neuronal (ectodermo) in vivo. Tambin
las clulas madre aisladas del SNC son capaces de producir clulas especializadas como las hematopoyticas,
entre otras (figura 53).
El descubrimiento de marcadores para identificar las
clulas madre (cuadro 52) permiti identificarlas y a
la vez separarlas en dos grandes grupos (cuadro 53).
Ello fue posible gracias al desarrollo de diferentes tcnicas, como el ya mencionado FAC y tcnicas de inmunohistoqumica. Los marcadores de superficie son protenas especializadas con azcares localizadas en la
membrana citoplasmtica; las ms utilizadas para las
tcnicas FACs sorters son: SSEA1 o CD15, FAL o trisacrido 3fucosilNacetillactosamina. Los factores
de transcripcin son protenas que se unen al DNA nuclear y ayudan en el encendido y apagado de genes
especficos; entre stos la ms conocida es la protena
Oct4 (factor de transcripcin de la familia POU), que se
expresa en las lneas celulares totipotenciales y pluripo
107
Cuadro 52. Principales marcadores moleculares para clulas madre

Marcador
CD133
CD34
ckit
CD30
Gnesis
GCNF
Oct4
SSEA1
Sca1
SCF
Caractersticas
Protena de superficie de clulas madre nerviosas que dan origen a gla y neuronas
Protena de superficie de las HSC
Protena de superficie de las clulas de la mdula sea
Protena de superficie de las clulas madre pluripotenciales
Factor de transcripcin expresado por las ESC durante su estado de indiferenciacin
Factor de transcripcin expresado por las clulas madre pluripotenciales
Factor de transcripcin esencial para el establecimiento y mantenimiento de clulas madre totipotentes y pluripotenciales
Glucoprotena expresada por las clulas madre pluripotenciales durante el periodo temprano del desarrollo
embrionario
Protena de superficie presente en las clulas de mdula sea BMSC
Protena de membrana que se incrementa durante la proliferacin de las clulas madre presentes en ESC y
HSC
tenciales, en las clulas madre embrionarias (ESC) y en

algunas lneas germinales inmortales (EG).
El advenimiento del estudio y comprensin de las clulas madre ha permitido tambin el surgimiento de una
nueva era, la de la medicina regenerativa, que consiste
en aprovechar los mecanismos naturales de renovacin
celular para reparar los tejidos daados. Las clulas madre11 se definen como clulas indiferenciadas, con la
capacidad de autorrenovarse ante determinadas seales
y de especializarse para realizar una funcin concreta
(Shihabudidn et al., 1999). Dependiendo del tipo de
clulas madre y de su capacidad de generar estirpes celulares diferenciadas, pueden ser totipotentes/pluripotentes o multipotentes, pero todas las clulas madre son
capaces de generar uno o ms tipos de clulas diferenciadas (cuadro 51). Gran parte de los estudios con clulas
madre se han realizado en ratones y humanos (cuadro
52); estos estudios han permitido conocer que estas clulas surgen durante el desarrollo embrionario.
Desde 1998 el grupo de Thomson12 se adelant al dar
a conocer los hallazgos que ms tarde reclamara el grupo britnico encabezado por Evans RG (padre de la fertilizacin in vitro o FIV), quienes demostraron la posibilidad de obtener clulas madre pluripotenciales a
partir de la capa celular de la masa interna del blastocisto humano. Numerosos estudios comenzaron a demostrar la gran capacidad proliferativa y diferenciadora de
estas clulas y sus potenciales aplicaciones en el tratamiento de enfermedades humanas como la diabetes, la
enfermedad de Parkinson y la insuficiencia cardiaca.13
11. Del tallo, troncales, progenitoras, etc.
12. Thomson JA, Itskovitz EJ, Shapiro SS,
Waknitz MA,
human blastocysts. Science 1998;282(5391):11451147.
Indudablemente, la utilizacin de clulas derivadas de

embriones o fetos humanos conlleva una serie de problemas tanto ticos como cientficos que propiciaron la
bsqueda de otras alternativas, y ms concretamente la
posibilidad de la utilizacin de clulas madre obtenidas
a partir de tejidos adultos.14
Sin embargo, este nuevo concepto en la medicina no
slo ha planteado nuevas posibles vas teraputicas de
estudio, como las llamadas terapias celulares, sino que
tambin ha abierto sin duda la caja de Pandora que
exige no slo un debate cientfico sino tico por parte de
la sociedad en general.
Concepto de medicina regenerativa nivel II y nivel
III: en este ltimo caso aborda la terapia celular aplicando clulas madre o induciendo su proliferacin dentro y fuera del organismo, para luego introducirlas por
va endovenosa, subcutnea, intramuscular, etc. Hoy en
da es posible el nivel III de regeneracin, ya que la tecnologa de la que se dispone permite mantener las clulas madre en crecimiento durante muchos aos en cajas
para cultivo (SICETEM).
Estas clulas madre pueden mantenerse en reservorios de criopreservacin que permiten conservar su ca13. Jackson KA, Majka SM, Wang H et al.: Regeneration of
ischemic cardiac muscle and vascular endothelium by adult
stem cells. J Clin Invest 2001;107(11):13951402. Kondziolka D, Wechsler L, Goldstein S et al.: Transplantation of
cultured human neuronal cells for patients with stroke. Neurology 2000;55(4):565569. Schuldiner M, Yanuka O, ItskovitzEldor J et al.: From the cover: effects of eight growth factors on the differentiation of cells derived from human embryonic stem cells. Proc Natl Acad Sci USA 2000;97(21):
1130711312.
14. Krause DS, Theise ND, Collector MI et al.: Multiorgan,
multilineage engraftment by a single bone marrowderived
stem cell. Cell 2001;105(3):369377.
108
(Captulo 5)
Cuadro 53. Comparacin de las caractersticas de las clulas madre de origen embrionario y adulto
Clula madre
de origen embrionario
Clula madre
de origen adulto
S**
No
+++
S
"
No
No
+++
No
++
S
++
S
S
++
S
Riesgo de formacin de teratomas (tumores

benignos de clulas germinales) in vivo*
Capacidad proliferativa
Pluripotencialidad
Control de la diferenciacin
Terapia celular autloga
Acortamiento de telmeros
Expresin de telomerasa
Riesgo de infecciones intracitoplasmticas
* Ratones atmicos inmunosuprimidos.

** Clulas madre germinales (EG) y clulas madre de los teratomas y teratocarcinomas.
pacidad para formar diferentes tipos de clulas que van

del msculo hasta la sangre, y potencialmente se pueden
diferenciar en cualquier tipo celular que constituye el
cuerpo.
La proliferacin de clulas madre de origen adulto o
embrionario en bancos de clulas es una promesa de
salud humana, ya que permite que su suministro sea casi
ilimitado. Esto es posible porque estas clulas madre
tienen la capacidad de autorrenovarse in vitro manteniendo su estado de indiferenciacin, lo que permite
extender su aplicacin en la prctica mdica, la cual ir
creciendo con el paso del tiempo y se ir diversificando,
ya que sus aplicaciones en la prctica mdica abarcan
fines clnicos especficos de la terapia celular nivel III
hasta la formacin de rganos in vitro (ingeniera de
tejidos) como fuente de reemplazo de rganos para trasplante. Tambin se han considerado como modelos de
experimentacin que faciliten la investigacin en farmacologa y toxicologa.
Otra fuente humana de clulas madre pluripotenciales con el mayor potencial teraputico y que pueden emplearse en la prctica mdica son las de origen embrionario (embrionic stem cells, ESC) y que se han obtenido
de la masa celular interna del blastocisto, conformada
por 50 a 150 clulas (figura 54). ste se forma en el periodo de preimplantacin embrionaria, que ocurre habitualmente de cuatro a cinco das despus de que un oocito ha sido fecundado por el espermatozoide.
Las clulas madre provenientes de los bancos fueron
obtenidas por donacin de las pacientes que recibieron
LIV (fertilizacin in vitro) despus de obtener el xito
(hijo nacido); con estos procedimientos los blastocistos
fueron criopreservados e iban a ser desechados por un
procedimiento similar al de la donacin de rganos. Estos blastocistos fueron donados para investigacin mdica, de donde se han obtenido millones de clulas madre embrionarias de origen humano, sin necesidad de
recibir nuevas donaciones de blastocistos. En noviembre de 2006 los cientficos argentinos Ester Polak y Jos
Cibelli activaron por primera vez vulos humanos sin
requerir espermatozoides, lo que podra permitir obtener clulas madre sin formar embriones, de manera que
hoy en da la formacin de blastocisto puede generarse
a partir de la donacin de un oocito, el cual inicia la formacin del blastocisto mediante una descarga elctrica
Figura 54. Mrula y blastocisto en el periodo de preimplantacin embrionaria. A. Mrula. B. Blastocisto temprano. C. Blastocisto tardo con zona pelcida. D. Expulsin
de la zona pelcida (hatching).

(partenognesis)15 sin necesidad de la fertilizacin por
un espermatozoide.
inmortales dotadas de las dos propiedades ya mencionadas: autorrenovacin y pluripotencia, caractersticas

importantes para poder ser utilizadas en terapia celular.
TERAPIA CELULAR CON

CLULAS MADRE
Clulas madre germinales (EGC)

Se localizan en la cresta germinal del feto, lugar donde
se produce la diferenciacin de la lnea germinal (no se
recomienda utilizar este tipo de clulas en la terapia
celular por el posible riesgo de que formen teratomas o
tumores benignos de clulas germinales al ser inyectadas
en los pacientes.) La terapia celular con este tipo de clulas slo se ha ensayado en animales. El uso de estas clulas debe estar contraindicado en pacientes inmunosuprimidos. Sin embargo, podra ser de utilidad en algunas
circunstancias de esterilidad o terapia gnica en un futuro
no muy lejano, o para la investigacin sobre los efectos
teratognicos y toxicolgicos de los nuevos frmacos.
La terapia consiste en introducir clulas madre de diversos orgenes y tipos, las cuales pueden provenir de tejidos recientes, ser criopreservadas despus de que se han
cultivado en medios celulares, o bien liofilizadas, donde
la clula muere pero se conservan sus constituyentes
bioactivos. Estas clulas madre pueden provenir de animales superiores (bovinos, ovinos, etc.): terapia celular
xenognica, o bien provenir de humanos: terapia celular
alognica. Tambin pueden provenir del mismo paciente, de manera que se trata de una terapia celular autloga.
Diferentes orgenes de las clulas madre

Clulas madre de origen embrionario
Este grupo a su vez se subdivide en tres tipos:
109
Clulas madre embrionarias (ESC)

Se derivan de la masa celular interna del embrin en el
estadio de blastocisto y son totipotentes/pluripotentes.
A partir de ellas y despus de muchas divisiones celulares surgirn las que formarn parte del tejido especializado. Sin embargo, aunque las clulas de la masa celular
interna del blastocisto son pluripotentes, no son en s
mismas clulas madre dentro del embrin, porque no se
mantienen indefinidamente como tales en condiciones in
vivo, sino que se diferencian sucesivamente en los diversos tipos celulares durante la fase intrauterina. Lo que
ocurre es que cuando se extraen del embrin y se cultivan
bajo ciertas condiciones in vitro, se convierten en clulas
15. La partenognesis (del griego parQenoz parthenos = vir-
gen + genesiz gnesis = generacin) es una forma de reproduccin basada en el desarrollo de clulas sexuales femeninas no fecundadas, que se da con cierta frecuencia en platelmintos, rotferos, tardgrados, crustceos, insectos, anfibios y reptiles, ms raramente en algunos peces y excepcionalmente en aves. La partenognesis fue descubierta por
Charles Bonnet. Jan Dzierzon fue el primero en descubrir la
partenognesis de los znganos de las abejas. Puede interpretarse tanto como reproduccin asexual o como sexual
monogamtica, puesto que interviene en ella una clula sexual o gameto.
Clulas madre de los teratomas

y teratocarcinomas
Se localizan en las gnadas en forma de tumoracin.
Las clulas diferenciadas del tumor se forman a partir
de clulas madre pluripotentes de carcinoma embrionario que se derivan, a su vez, de clulas primordiales germinales del embrin (posimplantacin). Son tumores
que contienen una gran variedad de tipos celulares que
incluyen desde clulas musculares, cartlago, hueso,
epitelio, neuroectodermo primitivo hasta estructuras
ganglionares y epitelio glandular. Es decir, se derivan de
las tres capas embrionarias que tiene un embrin (endodermo, mesodermo y ectodermo). Se han cultivado clulas diferenciadas del tumor y se ha comprobado que
mantienen capacidad pluripotencial. Uno de los experimentos ms espectaculares fue que despus del tratamiento de una lnea celular de un tumor testicular con
cido retinoico, las clulas se diferenciaron a clulas
nerviosas (figura 55) (no es recomendable que este
tipo de clulas se empleen en la terapia celular, por el
posible riesgo de que formen teratomas o tumores benignos al ser inyectadas en los pacientes). La terapia
celular con este tipo de clulas slo se ha ensayado en
animales. La aplicacin de estas clulas debe estar contraindicada en pacientes inmunosuprimidos. Sin embargo, podra ser de utilidad en algunas circunstancias
de ingeniera de tejidos, generacin en los proyectos de
investigacin biomdica, tal vez como implantes para el
tratamiento de la alopecia andrognica.
Clulas madre de origen adulto (ASC)
Derivadas de las clulas embrionarias, poseen capacidad multipotencial a lo largo de la vida del tejido; es de-
110
(Captulo 5)
Masa celular
interna
Fertilizacin
Blastocisto
ESC
Embrin
y
feto
EG
Teratocarcinoma y
feratomas
ASC
Clulas madre
pluripotentes y multipotentes
Figura 55. Clulas madre de origen embrionario y adulto. Esquema reproducido de la publicacin: Peter JD, John G: The end
of the beginning for pluripotent stem cells. Nature 2001;414:9297.
cir, son capaces de originar clulas especializadas de un

rgano concreto en el embrin y tambin en el adulto.
El ejemplo ms claro de este tipo celular es el de las clulas madre de la mdula sea, capaces de generar todos
los tipos celulares de la sangre y del sistema inmunitario. Aunque desde hace tiempo se conoce la existencia
de dichas clulas en los diferentes tejidos, en los ltimos
aos diferentes autores han identificado estas clulas
que provienen de la mdula sea y que, como la sangre
o la epidermis, presentan un gran ndice de proliferacin. An ms sugerente es que algunas de ellas presentan la suficiente flexibilidad o plasticidad como para
generar clulas especializadas de otros linajes (fenmeno de transdiferenciacin). Esto ha supuesto una sorpresa alentadora, ya que aumenta la perspectiva de obtener a largo y mediano plazo terapias celulares sin los
problemas ticos que conducen a la destruccin de embriones congelados.
Son preguntas clave cmo, cundo y por qu una clula madre en un tejido adulto empieza a diferenciarse.
Existen dentro del nicho o hbitat celular mltiples
mecanismos que producen tanto seales internas como
externas que permiten que se produzcan divisiones
simtricas y asimtricas, y que darn juego al mantenimiento de las propias clulas madre, como el inicio de
la diferenciacin celular. Esto se produce a partir de factores de trascripcin que actan en genes especficos
(figura 56).
Con la experiencia clnica de haber aplicado terapia
celular con clulas madre multipotentes alognicas a
una poblacin de ms de 1 000 pacientes, una dosis

aproximada de 106 clulas divididas en dos vas endovenosa e intramuscular cada siete das (SICETEM), los
autores se han atrevido a elaborar una teora que trata de
explicar con base cientfica cmo la introduccin de
clulas madre alognicas de origen humano acta en los
organismos enfermos y envejecidos, observndose un
efecto teraputico evidente tanto para el paciente como
para los mdicos, el cual se hace evidente desde la primera aplicacin (efecto inmediato) y puede observarse
hasta en un periodo de 15 a 6 meses (efecto mediato).
Algunos pacientes pueden presentar sntomas leves
asociados transitorios.
La hiptesis SnchezGonzlezSosa dice: Cuando las clulas madre alognicas ingresan a la circulacin
ocurren varios acontecimientos:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Tropismo y colocacin.
Integracin.
Transdiferenciacin.
Reclutamiento de clulas madre endgenas.
Reparacin.
Regeneracin.
La divisin celular asimtrica est siempre presente en todas las fases ya mencionadas, es decir:
antes, durante y despus de la reparacin y regeneracin del sitio afectado.
El mecanismo de accin de la terapia celular con clulas

madre puede ser adems estudiado en dos sentidos:

1. Efecto inmediato y mediato (tiempo de regeneracin).
2. Efecto directo e indirecto. El directo ocurre por integracin celular y el indirecto es debido a las citocinas que liberan las clulas madre.
Terapia celular con clulas madre

en la prctica mdica
En el cuadro 54 se presenta el nmero aproximado de
personas que tan slo en EUA requieren terapia celular
con clulas madre para curar, regenerar, detener o revertir la enfermedad y la investigacin de las mismas
(Wobus AM et al., 2005).
Las clulas madre se han aislado de diferentes fuentes: de medula sea, de clulas de tumores (figura 55)
de organismos jvenes y adultos. Hoy en da incluso se
cuenta con clulas madre provenientes de la sangre del
cordn umbilical, las cuales pueden reforzar la terapia
Clulas madre
pluripotenciales
Clulas madre
neurales
Divisin celular asimtrica
Clulas progenitoras
especficas de lnea
Tejidos
diferenciados
Neuronas
Neuronas
Astrocitos
Neuronas
Astrocitos
Clulas
gliales
Tejido adulto
Figura 56. Posibles orgenes de las clulas madre adultas.
Reproduccin tomada de la publicacin: Peter JD, John G:
The end of the beginning for pluripotent stem cells. Nature
2001;414:9297.
111
Cuadro 54. Personas afectadas por

enfermedad crnica degenerativa en los EUA
que requieren de terapia celular con clulas
madre*
Diagnstico
Enfermedades cardiovasculares
Enfermedades autoinmunitarias
Diabetes
Osteoporosis
Cncer
Enfermedad de Alzheimer
Enfermedad de Parkinson
Quemaduras
Lesiones de la mdula espinal y
parlisis
Anomalas congnitas
Total
Nmero de personas
afectadas
58 millones
30 millones
16 millones
10 millones
8.2 millones
4 millones
1.5 millones
0.3 millones
0.25 millones
150 000 por ao
128.4 millones
* Physiol Rev 2005;85:635678.
celular con clulas madre autlogas que hasta el momento han sido ensayadas y tienen un gran potencial
para tratar con xito muchas enfermedades. Sin embargo, existe una falsa controversia por supuestos problemas de ndole biotica y tcnica, que ensombrecen la
prctica mdica de la terapia celular con clulas madre
de origen humano.
Por desgracia existe un temor infundado sobre la supuesta respuesta deletrea que puede aparecer al aplicar
la terapia celular, motivo por el cual hay un importante
auge en los procedimientos de terapia celular con clulas madre autlogas de origen humano. La respuesta
ms temida es la enfermedad de injerto contra husped,
la cual se origin al considerar errneamente el trasplante de mdula sea alognico como equivalente al
trasplante alognico de clulas madre.
Esta racionalizacin generalizada ha etiquetado a la
terapia celular con clulas madre como posible generadora de un supuesto rechazo de las clulas madre para
el husped y una posible respuesta injerto contra
husped; esta prejuiciosa aseveracin ha condicionado
en muchas ocasiones que personas e incluso mdicos
consideren que la terapia celular con clulas madre alognicas no sea un hecho factible. Sin embargo, hoy en
da ya son muchas las evidencias y experimentos cientficos que han demostrado lo contrario, haciendo de la
terapia celular con clulas madre humanas tanto en su
concepto alognico como autlogo, y aplicndola por
diversas vas (parenteral, endovenosa, intramuscular y
local), una de las teraputicas ms plausibles para la
prctica mdica del siglo XXI. La recomendacin
actual para la terapia celular con aplicacin en la prc-
112
tica mdica son las ESC, las clulas madre de cordn

umbilical y las clulas madre de adulto. Debern estudiarse las clulas madre EG, ECC y de teratoma, cuya
aplicacin en la prctica mdica podra permitir el descubrimiento de efectos teratognicos de las nuevas
innovaciones farmacolgicas y otros usos cientficos
(ver la figura 12, en el Captulo 1).
En la dcada pasada surgi una descripcin molecular de las interacciones aloinmunitarias y el proceso de
la recuperacin inmunitaria que conduca a la tolerancia. Esta seguridad en la prctica mdica puede ser
explicada por el trabajo experimental realizado en 2003
por el grupo de Barrett AJ. Despus del trasplante alognico de clulas madre en un receptor antignicamente
distinto, confiere un efecto teraputico contra el rechazo injerto contra husped. El Dr. Juan Barrett y col.
describieron la base celular y molecular de la alorrespuesta; est emergiendo un mapa detallado de la recuperacin inmunitaria celular postrasplante y destaca la
importancia de linfocitos postmicos en los primeros
meses crticos que siguen al trasplante de clulas madre.
Posteriormente la profesora Anne Dickinson y col.
describieron polimorfismos genticos extraHLA que
determinan la naturaleza de la reconstitucin inmunolgica despus del trasplante alognico de clulas madre
(SCT). Otros trabajos han demostrado el papel inmunomodulador de las clulas madre tanto autlogas como
alognicas, de manera que aun las clulas madre no histocompatibles pueden suprimir la activacin de linfocitos. Las clulas madre suprimen fuertemente la inmunidad celular del husped al inhibir la proliferacin del
linfocito T, en una restriccin inmunolgica dependiente
de la dosis. El trasplante alognico de clulas madre en
pacientes con osteognesis imperfecta incrementa la
formacin de osteoblastos en 2%, lo que demuestra que
los precursores mesenquimticos presentes en la mdula sea tienen efecto teraputico real. Las clulas madre
tienen el potencial de inhibir la proliferacin de los linfocitos T a travs de vas inmunosupresoras mediadas por
CD8; esto permite el trasplante alognico sin rechazo.
La eficacia y seguridad de las clulas madre se
obtiene tambin de la experiencia en el trasplante de
mdula sea con fines de restauracin o regeneracin de
las clulas daadas o perdidas por enfermedades o lesiones. El ejemplo de esta teraputica es el reemplazo de
las clulas perdidas por la quimioterapia oncolgica en
las leucemias (requiere terapia celular con el trasplante
de mdula sea). El llamado trasplante de mdula sea
es en realidad un trasplante de progenitores hematopoyticos (clulas madre adultas muy diferenciadas).
Estos progenitores hematopoyticos se pueden obtener
de tres formas:
(Captulo 5)
a. Extrayendo mdula sea de los huesos que la contienen.

b. Movilizando los progenitores hematopoyticos de
la mdula sea a la sangre perifrica y obtenindolos mediante un procedimiento conocido como
afresis.
c. Tambin del cordn umbilical.
Todos estos procedimientos tienen como objetivo final
obtener los progenitores hematopoyticos multipotentes, clulas madre de origen adulto, que tengan la mayor
capacidad de implantarse en la mdula sea de un paciente, y dar lugar a un nuevo sistema inmunitario y hematolgico sano. El trasplante de progenitores hematopoyticos es un procedimiento rutinario en la prctica
mdica mediante el cual se intercambia la mdula sea
de un paciente por una mdula sea nueva, ya sea del
mismo paciente (trasplante autlogo) o de otra persona
(trasplante alognico).
Los antgenos leucocitarios humanos (HLA, acrnimo en ingls de human leukocyte antigen) son antgenos
formados por molculas que se encuentran en la superficie de casi todas las clulas de los tejidos de un individuo, y tambin en los glbulos blancos (o leucocitos) de
la sangre. HLA es el nombre que recibe el complejo mayor de histocompatibilidad en humanos. Cumplen con
la funcin de distinguir lo propio de lo ajeno y aseguran
la respuesta inmunitaria, capaz de proteger al organismo de algunos agentes extraos que generan infecciones. Ese conjunto de molculas y las formas en que
son transmitidas de padres a hijos constituyen un sistema tambin denominado de histocompatibilidad (de
histo, tejido) o de individualidad (para diferenciar lo
propio de lo ajeno), el denominado sistema HLA. Su
descubrimiento ha permitido a la medicina dar un salto
especfico en las posibilidades de xito de un trasplante,
abriendo un camino prometedor cuyo gran escollo haba sido el rechazo. En la dcada de 1970, ya descubierto el sistema HLA se pudo comprender mejor el fenmeno del rechazo y de la enfermedad del injerto contra
el receptor, y trasplantar con menos inconvenientes, segn criterios de compatibilidad.
Tambin se ha podido descubrir la conexin entre determinados perfiles HLA y una mayor frecuencia de enfermedades autoinmunitarias como el lupus eritematoso sistmico, la miastenia gravis y el sndrome de
Sjgren, u otras como la espondilitis anquilosante y la
enfermedad celiaca. Existen lugares estratgicos en el
sistema HLA que sirven para examinar si una persona
puede ser compatible con otra en caso de injerto: HLA
A, HLAB, HLAC, HLADR y HLADQ. El tipo de
molcula antgeno presente en A, B, C, DR y DQ es lo

HLAA
HLAB
113
c
d
HLADR
HLAB
A
HLADR
HLAA
ac
C
ad
bc
bd
Figura 57. A. Se ilustra la convencin utilizada en los dibujos para representar los haplotipos del sistema HLA. B. Se ilustra la
manera en que los hijos heredan la mitad de haplotipos de cada progenitor. C. Se ilustra cmo los hijos podrn heredar cualquiera
de las cuatro combinaciones del material gentico transferido por los padres con base en el sistema HLA.
que determina la posibilidad de aceptacin del tejido

(rgano o mdula sea) de un donador por parte del organismo de un receptor.
El trasplante alognico tiene a su vez distintas variedades segn el donador y la similitud del sistema HLA.
Cuando el donador es un hermano gemelo univitelino
se denomina trasplante singnico; cuando el donador es
un familiar HLA idntico se llama trasplante alognico
de hermano HLA idntico; cuando el donador es un familiar que comparte un solo haplotipo del sistema HLA
se conoce como trasplante haploidntico y el donador es
un familiar cualquiera (padre, madre, hermanos, primos...) que comparte slo la mitad de los genes implicados en el sistema HLA; cuando el donador es un donador no emparentado se denomina trasplante de donador
no emparentado. Es importante reconocer de qu tipo de
trasplante se habla, ya que tanto la utilidad como los
resultados varan de unos a otros. Para llevar a cabo este
procedimiento (muy costoso, por cierto), es necesario
realizar un acondicionamiento en el que se usan diversos frmacos (en general quimioterapia), radioterapia o
ambos tratamientos; se destruye la mdula sea del paciente y en el caso de un trasplante alognico se genera
un estado de inmunosupresin para evitar el rechazo de
los progenitores hematopoyticos forneos que se infundirn al paciente. El trasplante de progenitores hematopoyticos se usa para tratar diversos tipos de enfermedades: aplasia de mdula sea, enfermedades
hereditarias, leucemias, linfomas e inmunodeficiencias, entre otras enfermedades (figura 57).
Para que dos personas sean compatibles, los antgenos presentes en cada uno de esos lugares deben ser
idnticos o tener ciertas coincidencias. Esto se detecta
por medio de un anlisis de sangre en el que la muestra
es sometida a varias tcnicas de laboratorio y puede incluir el anlisis de cido desoxirribonucleico (DNA).
Los antgenos se identifican por un nmero y pueden

ser enormemente variados. Se conocen ms de 300 para
el lugar A, alrededor de 500 para B, ms de 150 para C,
400 para DR y ms de 50 para DQ. Como la investigacin es permanente, esos nmeros aumentan todo el
tiempo.
El DNA transmitido de padres a hijos est en el cromosoma del ncleo de las clulas de todo el organismo,
incluidos los glbulos blancos de la sangre. Est qumicamente constituido por un encadenamiento de elementos bsicos que se podran comparar con las letras de un
abecedario. Esos elementos bsicos o letras qumicas se
combinan en palabras que constituyen un texto organizado que transmite un mensaje. En ese texto se pueden
reconocer diferentes partes o secciones, denominadas
genes. El DNA se hereda de los padres en una combinacin peculiar para cada hijo. Los genes del sistema HLA
se transmiten casi siempre en bloque. Cada bloque se
denomina haplotipo. El padre aporta un haplotipo (mitad del genotipo) y la madre otro, dando origen al genotipo HLA, perfil gentico propio del nuevo ser. Es este
perfil (o huella gentica) el que debe coincidir en los
lugares estratgicos para que dos tejidos se acepten. En
el sistema HLA, el material gentico se transmite de
padres a hijos segn lo explica el cuadro 55.
Sistema HLA
Madre
Haplotipo A
Padre
Hapotiplo B
Haplotipo C
Haplotipo D
Hijos
Combinacin 1
Combinacin 2
Combinacin 3
Combinacin 4
Genotipo
ac
Genotipo
ad
Genotipo
bd
Genotipo
bc
114
Los hijos podrn heredar cualquiera de estas cuatro

combinaciones del material gentico transferido por los
padres. En la figura 57 se pueden apreciar los dos haplotipos del padre a y b y los dos de la madre c y d: cul
heredar cada hijo depender del azar. Existen 50% de
posibilidades de que dos hermanos compartan un solo
haplotipo, 25% de que no compartan ninguno y 25% de
que coincidan en ambos haplotipos. Las personas con
genotipo ac, ad, bc y bd descienden de progenitores que aportan los haplotipos a y b, por un lado, y c y
d, por otro, ya que un individuo est siempre constituido
por material gentico proveniente de los seres que le
dieron la vida.
Cualquiera de las cuatro combinaciones posibles indica que ese ser proviene de los mismos padres, pero
slo ciertas coincidencias en la combinacin heredada
hacen que un hermano sea compatible con otro dentro
del sistema HLA. Segn el tipo de trasplante, receptor
y donador debern compartir uno o dos haplotipos.
Sin embargo, el sistema HLA se aplica en trasplante
de mdula sea. En la prctica mdica de los autores con
terapia celular aplicando clulas madre alognicas no
ha sido necesario realizar una tipificacin del donador
de las clulas madre ni del husped. Esto hace que la terapia celular sea una tcnica innovadora, si bien es
cierto que pueden obtenerse clulas madre de la mdula
sea y que un trasplante de mdula sea podra requerir,
para un mejor resultado, una tipificacin de HLA al realizar lavados de las biopsias obtenidas de la mdula sea
del fmur y ser suspendidas en medio de Eagles modificado de Dubeco (DMEM), enriquecido con 10% de suero fetal bovino, y despus de realizar una seleccin de
clulas madre hematopoyticas y las clulas madre
mesenquimatosas. El rechazo de trasplante con clulas
madre se vuelve casi nulo. Para separar estas clulas se
emplean paquetes comerciales que utilizan perlas magnticas. En stas vara el tipo de anticuerpos que se utilicen para marcar las clulas inmunolgicamente. Esto ha
facilitado que el estudio biolgico de las clulas madre
de origen adulto (ASC) sea el ms extenso y se ha efectuado en estudios bsicos desde ratn hasta humano.
Tanto en las enfermedades neurodegenerativas como
en el Parkinson se pretende usar clulas madre de origen
embrionario (ESC) que son capaces de generar neuronas dopaminrgicas in vitro al ser tratadas con factores
neurotrficos (Gonzlez LGM et al., 2007). En las que
se pretende regenerar el corazn despus de un infarto
del miocardio (IAM) es necesario aislar o utilizar clulas
madre cardiacas de origen adulto. El IAM corresponde
a la principal causa de muerte en Mxico, y si bien los
avances en la ciruga de bypass y la angioplastia percutnea de las coronarias con colocacin de stents cardiacos
(Captulo 5)
han mejorado la sintomatologa de la angina estable e

inestable, no siempre tienen la capacidad de restaurar la
funcin sobre todo en IAM, que evoluciona a dilatacin
ventricular e insuficiencia cardiaca congestiva (ICC).
La terapia celular con lneas celulares de cardiomiocitos previno el adelgazamiento cardiaco y la dilatacin
ventricular. Este tipo de terapia celular se denomin cardiomioplastia celular y el pionero fue el Dr. Menasche,
en Pars. En su estudio clnico fase I, algunos pacientes
referidos para una ciruga de bypass con infartos extensos eran sometidos a una biopsia muscular, de la cual se
aislaban mioblastos que eran cultivados de forma externa (terapia celular, medicina regenerativa nivel II) y que
fueron inyectados alrededor del infarto en el tiempo
quirrgico del bypass. En un periodo de uno a dos aos
despus de la ciruga de bypass y la terapia celular, 10
pacientes se encontraron libres de sntomas coronarios
y mejoraron la funcin cardiaca de forma general, la
cual fue evaluada en el ecocardiograma, lo cual sugiri
una restauracin de la funcin en la zona infartada.
Los estudios de medicina nuclear con tomografa por
emisin de positrones (PET) y tomografa por emisin
de fotn nico (SPECT) mostraron viabilidad en la
regin del infarto en zonas que no estaban presentes en
el periodo preoperatorio. Murieron dos pacientes, uno
por choque cardiognico y otro 17 meses despus por un
accidente vascular cerebral de tipo isqumico. En las
autopsias se observ que los mioblastos se encontraban
engarzados en la regin del infarto, demostrndose la
viabilidad del trasplante de clulas. Aunque las clulas
se encontraban entre los miocitos, no presentaban la
caracterstica de sincronizacin del latido porque no
expresaban uniones estrechas (gap junctions). Presentaron arritmias 4 pacientes y requirieron implante de
desfibriladores y amiodarona. En la actualidad este procedimiento de cardiomioplastia celular requiere una inyeccin de millones de mioblastos.
Hasta hace poco se aceptaba que no se renovaban las
neuronas despus de un dao por isquemia o por algn
otro trauma. Aunque desde 1960 existan ya informes
de la plasticidad cerebral y algunos de ellos incluso
apuntaban hacia la posibilidad de que nuevas clulas
nerviosas eran formadas en mamferos adultos, este conocimiento no fue aplicado sino hasta la dcada de
1990, mientras la investigacin mdica se centraba en
la limitacin del dao una vez ocurrido. Las recientes
investigaciones de terapia celular estn tratando de averiguar qu clulas pueden dar origen a las nuevas neuronas y podran ser cultivadas y administradas para restaurar la funcin del cerebro. Al igual que en el miocardio,
al parecer existen algunos remanentes de clulas madre
en las neuronas adultas, y algunas de estas clulas adul-

tas todava retienen la capacidad de generar neuronas y
neuroglias.
Estos resultados son muy interesantes, porque hacen
pensar que las clulas madre en el cerebro establecen un
mecanismo que permite la regeneracin. Por desgracia,
estas nuevas neuronas son generadas slo en algunos
sitios del cerebro, como el hipocampo. Adems, se est
conociendo la forma de identificar y aislar clulas madre nerviosas, as como de profundizar en los proceso
de diferenciacin y regeneracin de las clulas nerviosas muy especializadas. Hoy en da se han identificado
en el adulto clulas madre nerviosas (NSC) en gran variedad de localizaciones del cerebro. Los precursores
neuronales cultivados en la zona ventricular y subventricular forman colonias llamadas neuroesferas.
Se ha demostrado que los cultivos de neuroesferas
contienen clulas del sistema nervioso perifrico y son
capaces de diferenciarse en neuronas y clulas de la gla.
En la sustancia blanca subcortical del cerebro adulto se
han identificado clulas madre parcialmente diferenciadas que dan origen a la gla; estas clulas se han aislado
por medio de flujometra de alta velocidad activada por
fluorescencia, ya sea por transfeccin de protena verde
fluorescente o por marcaje de clulas con anticuerpos.
Estas clulas aisladas al ponerse en cultivo celular han
dado origen a oligodendrocitos y en menor cantidad a
neuronas. Los autores de esta publicacin (Gonzlez
Lpez GM, SnchezGonzlez DJ y SosaLuna CA),
basndose en los resultados clnicos que han obtenido
con la aplicacin de la terapia celular con clulas madre
alognicas multipotenciales, tienen la alentadora esperanza de que la aplicacin endovenosa e intramuscular
de clulas madre nerviosas permita resolver problemas
tan complejos como la esquizofrenia, entre otros. Hasta
el momento los avances ms importantes se han realizado con los modelos experimentales de enfermedades
neurodegenerativas como la enfermedad de Parkinson,
la enfermedad de Huntington, la enfermedad de Lou
Gehrig (mejor conocida como esclerosis lateral amiotrfica) y las lesiones del sistema nervioso central
secundarios a isquemia o trauma.
Sin embargo, las aplicaciones en la prctica mdica
de la terapia celular con clulas madre que ms repercusin pueden tener en Mxico son en la diabetes mellitus,
que suele subdividirse en dos grandes enfermedades: la
DM1 (dependiente de insulina), caracterizada por un
proceso autoinmunitario de destruccin de las clulas
productoras de insulina que provoca la falta de esta hormona, y la DM2 (no dependiente de insulina), que representa 90% de los casos diagnosticados. Su aparicin
se debe a la combinacin de la resistencia a la accin de
115
la insulina por parte de los tejidos perifricos y una alteracin de la funcin de la clula pancretica.
La disfuncin parece ser el resultado de la incapacidad de las clulas b para producir y secretar insulina
cuando aumenta la demanda de sta. La diabetes afecta
a 4 a 5% de la poblacin mundial, aunque la cantidad de
individuos que la padecen aumenta con mucha rapidez,
sobre todo en los pases desarrollados. Es la alteracin
metablica ms frecuente entre los humanos y conduce
tambin a la aparicin de complicaciones secundarias
como retinopata, neuropata y alteraciones cardiovasculares. En un estudio poblacional realizado por el Consejo
Asesor sobre la Diabetes, en Catalua (1997), se observ
que la prevalencia de la enfermedad conocida es de 6.7%
y que aumenta en relacin con la edad, de manera que la
prevalencia de DM2 global (conocida y no conocida) es
de 10.3 en la poblacin de 30 a 89 aos de edad.
En la actualidad, para los dos tipos de diabetes existen terapias que resultan insatisfactorias porque no ofrecen curacin de la enfermedad, y en la mayora de los
casos no podrn evitar la aparicin de las complicaciones secundarias asociadas a ella. El trasplante de islotes
pancreticos ha sido sin duda una ventajosa estrategia
para restaurar la masa de clulas funcionales en los
pacientes diabticos y poder as conseguir la normoglucemia; no obstante, presentan limitaciones por el rechazo
del injerto y el nmero de pncreas necesarios para la
obtencin de una cantidad ptima de islotes (al menos
dos donadores/pacientes). Esto comporta la necesidad de
identificar nuevas terapias genticas, por ejemplo, la
obtencin de clulas productoras de insulina a partir de
clulas pluripotentes. Sin embargo, es necesario profundizar en el conocimiento de los mecanismos moleculares
de la propia clula b que se intenta reestablecer. La viabilidad de esta nueva estrategia celular depende principalmente de tres importantes prerrequisitos:
S Identificacin de clulas pluripotenciales o de
unas clulas progenitoras pancreticas que tengan
la capacidad de autorreplicarse y generar clulas
diferenciadas.
S Identificacin de las seales proliferativas que
permiten expandir, de manera especfica, estos
progenitores pancreticos.
S Identificacin de seales instructivas que induzcan la diferenciacin de estas clulas pluripotenciales o progenitoras en clulas funcionales que
secreten la insulina correctamente procesada, de
manera pulstil, en respuesta a concentraciones fisiolgicas de glucosa.
116
A diferencia de las clulas que provienen del mesodermo

(cardiomiocitos) y las que provienen del ectodermo
(clulas nerviosas), pueden ser diferenciadas espontneamente in vitro las clulas derivadas del endodermo,
entre las que se incluyen las clulas del pncreas, que
requieren la presencia de factores en general desconocidos y que son los que dirigen la diferenciacin celular.
Bsicamente se han sido utilizado dos estrategias de
seleccin para clulas con capacidad de diferenciacin
beta celular:
1. Estrategia de atrapamiento. Las clulas madre
son transfectadas con una construccin que lleva
un gen de resistencia a un antibitico (neomicina),
el cual est bajo el control del gen de la insulina.
De esta manera se seleccionan las clulas que al
diferenciarse activarn slo a dicho promotor;
despus se aade a la construccin un marcador no
txico fcilmente perceptible: la protena verde
fluorescente (GFP), de manera que las clulas
expresan insulina y protena verde, lo que permite
una mejor seleccin de stas. De ese modo se estableci la lnea celular IB/3x99 derivada directamente de un cultivo de clulas ES de ratn, las cuales tienen la capacidad de formar los agregados de
las clulas que secretaron la insulina de una manera dependiente de la glucosa. Para probar la capacidad funcional de estas clulas in vivo, los agregados celulares fueron implantados en el bazo de
ratones. La mayora de los animales tuvieron control de la glucosa sangunea. Sin embargo, 40% de
los trasplantados desarrollaron hiperglucemia a
las 12 semanas. El estudio tambin establece claras dificultades. Varias razones pueden explicar la
prdida de las clulas trasplantadas: prdida de
caractersticas genotpicas en ausencia de la presin selectiva, muerte inducida de la clula quiz
por motivo del nuevo nicho celular, rechazo por
parte del husped al injerto celular y produccin
de tumores.
2. Marcadores selectivos de clulas madre pancreticas. La nestina es una protena filamentosa
que se ha identificado como marcador de clulas
madre del sistema nervioso central. Por existir
muchas similitudes entre ellas y las del pncreas,
Lumelsky propuso la nestina como un marcador
especfico de clula madre endocrina. El protocolo utilizado por estos investigadores demostr
que tras la privacin en el medio de cultivo del leukimia factor inhibitor (LIF) o al suplementar ste
con bFGF, era posible la formacin de agregados
celulares que expresaran no slo insulina sino
(Captulo 5)
tambin glucagn, somatostatina y polipptido
pancretico, hormonas que se encuentran en los
islotes de Langerhans. No se identific ningn
marcador exocrino (amilasa, carboxipeptidasa
A). Los anlisis histolgicos demostraron que los
cmulos celulares tenan caractersticas comunes
con la estructura normal del islote; sin embargo,
slo 50% de las clulas expresaban insulina. Estudios funcionales de secrecin dieron muestras de
respuesta en forma dosisdependiente. La estrategia de seleccionar clulas que expresaran la protena nestina ha sido criticada, aunque numerosas
evidencias podran confirmar que puede ser un
buen marcador, a pesar de que existe un solapamiento en los factores de transcripcin de la neurognesis y la endocrinognesis. Factores clave
nerviosos del bHLH, como neurogenina 12, neuro D y neuro D2, pueden ayudar a activar el gen de
la insulina en una clula neuronal, y son factores
idnticos (Neuro D) o muy similares (Ngn1 o 2) a
esos componentes del bHLH, necesarios para la
funcin y el desarrollo pancreticos de la clula de
la endocrina (Neuro D y Ngn3).
No obstante, el marcador especfico endodrmico

HNF3b se expresa en clulas derivadas de las embrionarias, adems de otros marcadores que deben ser explorados para poder comprender el proceso ntimo de cmo
una clula indiferenciada se transforma en clula con
fenotipo beta.
En el caso del pncreas adulto no hay consenso sobre
el tipo celular que podra ser la verdadera clula madre
pancretica. Se ha descrito que en el pncreas existe un
proceso de neognesis, es decir, de formacin ex novo
de islotes pancreticos, que aumenta en diferentes situaciones tanto en humanos como en modelos animales.
Algunos autores postulan que despus de una pancreatectoma parcial, algunas clulas ductales maduras podran empezar a proliferar y diferenciarse hasta dar origen a una clula con capacidad multipotencial. La
direccin de diferenciacin de estas clulas dependera
de seales externas o morfgenas. En este caso se hablara de clulas madre funcionales de manera parecida a
las que se han descrito en el hgado y en otros tejidos.
Otros autores han descrito la existencia de posibles stem
cells en los mismos islotes pancreticos y han sugerido
que stas son una fuente de nuevas clulas del islote. Por
lo tanto, aunque los experimentos han demostrado que en
el pncreas existe un proceso regenerativo tanto intraislote como extraislote, la deteccin y caracterizacin de
las clulas madre pancreticas est resultando un trabajo
difcil. La falta de unos marcadores claros, as como de

ensayos fiables, ha obstaculizado esta difcil tarea. No
obstante, se sabe que nuevas clulas se generan durante
la vida adulta y que, en parte, provienen de clulas que
estn en el ducto pancretico. Una rigurosa caracterizacin del proceso del desarrollo embrionario del pncreas,
de los mecanismos moleculares de proliferacin y apoptosis de los islotes pancreticos, as como de los posibles
candidatos a clulas madre descritos, tendra que permitir aislar las stem cells adultas pancreticas.
La posibilidad de una expansin y diferenciacin de
estas clulas permite la esperanza de obtener una cantidad suficiente de clulas que ayuden al desarrollo de la
terapia celular. An ms apasionante es la posibilidad
de que a partir de una pequea muestra de tejido del
paciente se pueda aislar y obtener in vitro nuevos islotes
que podran ser trasplantados al propio paciente y de
esta manera evitar problemas de rechazo. Podra decirse
que se est ante una nueva era del conocimiento en el
campo de la medicina regenerativa, ya que es un nuevo
campo interdisciplinario que aplica los principios de
las ciencias biomdicas bsicas y de las ciencias de la
medicina clnica en la obtencin de sustitutos biolgicos para restaurar, mantener o mejorar la funcin tisular en los pacientes enfermos. Mltiples publicaciones
estn marcando el advenimiento de la terapia celular
con clulas madre en la prctica mdica, y tambin
estn apareciendo diversas opiniones de ndole social,
filosfica, religiosa, poltica y tica.
Un conocimiento errneo que se tiene de manera generalizada es la creencia de que todas las clulas madre
tienen la capacidad de formar tumores al ser inyectadas
en los huspedes inmunocomprometidos; este temor se
origin de los experimentos de formacin de teratomas
en ratones inmunodeprimidos en quienes se utilizaron
clulas madre de origen tumoral. Este hecho evit por
algn tiempo que los mdicos consideraran la aplicacin de la terapia celular en la prctica mdica. Sin
embargo, al menos es posible utilizar dos tipos de clulas
madre humanas con ese fin: las clulas madre embrionarias (ESC) obtenidas de la masa interna del blastocisto y
clulas madre adultas (de tejidos posnatales, ASC, mdula sea, sangre adulta o cordn umbilical).
La generacin de ESC es a partir de la masa celular
interna del blastocisto y son las que poseen la mxima
potencialidad para diferenciarse en todos los tipos celulares. La supuesta necesaria destruccin del blastocisto
ha generado ansiedad en la opinin pblica y una interminable discusin en donde se anteponen juicios de
valor entre la necesidad de avanzar en el conocimiento
para salvar vidas y la de curar enfermedades, entremezclndose los derechos individuales de las clulas que
pueden tener el potencial de convertirse en embriones
117
humanos. La importancia teraputica que pudiera llegar

a tener la terapia celular con clulas madre con miras a
sustituir tejidos daados por causas patolgicas o traumticas es el principal argumento de los que propugnan
por la no prohibicin de la investigacin y uso en la
prctica mdica de las ESC humanas.
Dos avances recientes ofrecen la posibilidad de resolver el dilema tico planteado por las ESC y uno es la
derivacin de oocitos a partir de ESC. Aunque en este
caso no se evita la destruccin de un primer blastocisto
fundador, el hecho de poder generar ovocitos a partir de
ESC establecidas como lneas celulares hace innecesaria la destruccin de nuevos embriones. Los ovocitos
obtenidos in vitro representaran una fuente inagotable
para la transferencia nuclear de clulas somticas de pacientes en quienes la terapia regenerativa podra ser la
mejor o nica opcin para su alivio o cura. Es claro que
la alternativa de generar oocitos en el laboratorio tendra tambin aplicaciones en la medicina reproductiva
para casos de infertilidad. Sin embargo, en este caso no
es posible eludir la discusin sobre las implicaciones
ticas de la clonacin reproductiva. La mejor alternativa surgi recientemente con el trabajo pionero de Takahashi y Yamanaka,16 quienes lograron derivar ASC
multipotentes a partir de clulas epiteliales de ratones
adultos a las que trasfectaron slo cuatro genes (Oct3/4,
Sox2, Klf4 y cMyc). En principio, esos cuatro genes
que actan como factores de trascripcin sustituyen a
factores citoplsmicos del ovocito que reprograman
la cromatina del ncleo trasplantado. Los autores denominaron a sus clulas iPS (induced pluripotent stem),
que al ser transferidas a blastocistos normales demostraron su capacidad para diferenciarse en todos los tipos
celulares del embrin, incluyendo clulas germinales.
Mejorando su propia tcnica, el grupo de Yamanaka17
logr demostrar que las clulas germinales derivadas de
iPS son frtiles. Los resultados han sido corroborados
en dos laboratorios diferentes,18 de manera que se trata
de un verdadero avance biotecnolgico.
Sin embargo, deben considerarse al menos dos aspectos antes de dejarse llevar por el entusiasmo despertado por el nuevo hallazgo. Uno es la aplicacin clnica
de la tcnica desarrollada en ratones. El empleo del oncogn cMyc resultara peligroso por su capacidad para
generar un proceso canceroso en humanos. Asimismo,
los autores usaron retrovirus como vehculos transfectantes, lo cual desde luego resultara inadmisible para
transformar clulas humanas con miras a ser trasplanta16. Cell 2006;126:363.
17. Okita et al.: Nature 2007;448:313.
18. Wernig et al.: Nature 448:318, 2007; Maherali et al.: Cell
Stem Cell 2007;1:55.
118
das a pacientes. El otro aspecto es la contribucin al

conocimiento bsico respecto a los mecanismos celulares responsables de reprogramar el genoma de las
clulas de individuos adultos. Las clulas transfectadas
con los cuatro genes se integraron a todos los tejidos al
ser introducidas en blastocistos normales, y su capacidad para diferenciarse dependi de las seales que
haban recibido en el desarrollo del embrin normal.
La utilizacin de clulas madre sanguneas autlogas
(HSC) tiene un verdadero inconveniente; hoy en da el
gran avance de la inmunologa ha esclarecido la fisiopatologa de muchas enfermedades autoinmunitarias y se
sabe que algunas clulas del sistema inmunitario que
atacan a los tejidos propios involucran factores de
riesgo gentico; muchos de estos genes slo se expresan
en las clulas sanguneas. Por lo tanto, la terapia celular
con clulas del cordn umbilical muy posiblemente no
resolvera el problema mdico, ya que estas clulas
poseen el material gentico que implica el riesgo. Estos
avances en las ciencias biomdicas hacen necesario
buscar otras fuentes de obtencin de clulas madre,
como las mismas clulas tumorales o las clulas madre
embrionarias de mamferos superiores como los primates. Se han publicado otras aplicaciones para la salud,
como el estudio toxicolgico de nuevos medicamentos.
La creacin de bancos de HSC, ESC y otras clulas
madre ser cada vez ms un procedimiento rutinario
muy comn gracias al crecimiento de donadores voluntarios y de sangre de cordn umbilical. Cerca de 4 000
a 10 000 muestras independientes permitiran implementar bancos de clulas madre capaces de satisfacer la
demanda para el trasplante clnico o para proteccin
contra accidentes de la radiacin.19 Por lo anterior, el
supuesto inconveniente asociado con el riesgo de histocompatibilidad y el inters econmico han impulsado la
proliferacin de bancos criognicos para aislar y almacenar sangre de cordn umbilical, los que se han encargado de difundir la falacia de la supuesta incompatibilidad alognica de las clulas madre vendiendo a todas
las embarazadas (a priori) la idea de contratos de servicios como programas preventivos que garantizan la donacin autloga por congelacin de clulas madre del
cordn umbilical.
Esta falacia y otras razones tambin han impulsado
el apoyo econmico a la biologa molecular, la cual est
incursionando con la aplicacin de tcnicas de DNA
recombinante y clonacin. Estas hiptesis a priori tambin han impulsado el desarrollo de ensayos clnicos
19. La
demanda puede incrementarse en caso de guerra o

bioterrorismo nuclear o por el uso de armas qumicas o biolgicas con un enfoque en producir dao de la mdula sea.
(Captulo 5)
para tratar enfermedades con clulas madre no embrionarias, es decir, de origen adulto, los cuales han demostrado tener buenos resultados en problemas de ndole
inmunohematolgica, gentica, cncer, diabetes juvenil, Parkinson, ceguera y las lesiones de mdula espinal.
Estos investigadores los han llevado a la prctica mdica y se cuenta con estudios clnicos en fase IIII.
A partir del ao 2001 se incrementaron las publicaciones que refuerzan la terapia celular con clulas
madre embrionarias de origen humano (ESC), lo que ha
fortalecido las evidencias cientficas de su capacidad de
diferenciacin en clulas que pueden ayudar a regenerar
o recuperar la funcin de: sistema nervioso, tejido
hematopoytico, corazn, sistema circulatorio (endotelial), islotes de Langerhans pancreticos (clulas beta),
hgado, hueso, trofoblasto y otros tejidos celulares.
Estos trabajos finalmente han fructificado en la
reciente premiacin que realiz el Instituto Karolinska
de Estocolmo, Suecia, a Sir Martin J. Evans,20 Mario
Capecchi21 y Oliver Smithies,22 galardonados con el
premio Nobel 2007 de Fisiologa y Medicina por su trabajo sobre ESC y que permitieron introducir cambios
genticos especficos con DNA recombinante en ratones (knockout). Estas clulas madre embrionarias poseen telmeros ms largos que las de origen adulto y
estn menos diferenciadas, por lo que su capacidad de
regeneracin es mayor.
Los trabajos referidos con anterioridad y muchos
ms llevaron a los autores de este libro (Gonzlez
Lpez GM, SnchezGonzlez DJ y SosaLuna CA) a
realizar cientos de aplicaciones endovenosas e intramusculares de terapia celular con clulas madre multipotentes de origen alognico en pacientes con enfermedades cronicodegenerativas rebeldes a los tratamientos
convencionales que de forma voluntaria aceptaron recibir el tratamiento de acuerdo con lo establecido en la
normatividad de Helsinki (SITECEM).
20. Naci en 1941 en la Gran Bretaa, ciudadano britnico,
Doctor en Ciencias en la especialidad de Anatoma y
Embriologa, graduado en 1969, University College, Londres, Reino Unido. Director de la Escuela de Biociencias y
Profesor de gentica de los mamferos en la Cardiff University, Reino Unido.
21. Naci en1937 en Italia, ciudadano estadounidense, Doctor en Ciencias en la especialidad de Biofsica graduado en
1967, Harvard University, Cambridge, EUA. Investigador
del Howard Hughes Medical Institute y Profesor Distinguido
en Biologa y Gentica Humana en la Universidad de Utah,
Salt Lake City, EUA.
22. Naci en 1925 en la Gran Bretaa, ciudadano estadounidense, Doctor en Ciencias en la especialidad de Bioqumica
en 1951, Oxford University, Reino Unido, Profesor de Excelencia en Patologa y Laboratorio de Medicina en la Universidad de carolina del Norte en Chapel Hill, EUA.

El Dr. GonzlezLpez opina que desde hace ms de
10 aos se han aplicado clulas madre humanas alognicas sin que se observen reacciones de rechazo inmunolgico, y mucho menos reacciones tan graves como la
de injerto contra husped. Estamos totalmente convencidos de que la terapia celular con clulas madre alognicas puede emplearse en prcticamente cualquier
patologa crnica degenerativa o traumtica dentro del
campo de la medicina regenerativa. Esto se hace evidente, ya que en nuestra experiencia clnica la terapia
celular con clulas madre humanas alognicas nos ha
permitido observar una mejora asombrosa en mltiples
patologas como el vitligo, Parkinson, Alzheimer,
secuelas neurolgicas secundarias a eventos vasculares
cerebrales, esclerosis mltiple, diabetes mellitus, retinitis pigmentaria y neoplasias.
La terapia celular es muy segura, ya que las clulas
reemplazan las clulas faltantes que han muerto en los
tejidos ocasionando la aparicin de los sntomas y signos de las enfermedades; se trata de padecimientos crnicos asociados tambin con el envejecimiento. Sin
embargo, tambin se trata de un fenmeno natural muy
convincente si se observa cmo las clulas madre tienen
la capacidad de modular el sistema inmunitario. El
embarazo es el mejor ejemplo, ya que el sistema inmunitario de la madre en condiciones normales no rechaza
a la mrula, blastocisto en su camino desde la ampolla
de la trompa de Falopio hasta la parte posterior del tero
en el tiempo conocido como ventana de implantacin,
permitiendo el desarrollo del embrin y el feto. Si el sistema inmunitario reconociera las clulas madre, stas
seran destruidas por el sistema inmunitario del husped. Una de las posibilidades teraputicas menos consideradas para la terapia celular con clulas madre es
durante el embarazo; el ambiente gestacional de un feto
permite obtener mejores resultados teraputicos que en
el adulto. El importante avance para el diagnstico prenatal permite hoy en da aislar clulas y DNA fetal a partir de sangre materna. El ambiente prenatal ofrece la va
intracavitaria peritoneal, tolerancia inmunolgica, lo
cual permite el trasplante alognico e incluso xenognico. En promedio, se requieren 10 000 clulas madre
por kilogramo de peso.
La tolerancia inmunitaria se define como la ausencia
especfica de respuesta inmunitaria frente a un antgeno, ya sea propio o extrao, inducida por el contacto
previo con dicho antgeno. Se trata de un estado activo
(no es una simple ausencia de respuesta) dotado de
especificidad y memoria. Esta tolerancia tiene una
importancia capital en el proceso de trasplante de rganos. Los antgenos que inducen este estado de tolerancia
se denominan tolergenos, para distinguirlos de los que
119
provocan respuesta inmunitaria (inmungenos). La tolerancia se puede desarrollar de modo natural, como
cuando un ser en desarrollo se vuelve incapaz de responder a sus propias molculas (autointolerancia).
Cuando este sistema falla, se producen patologas por
autoinmunidad. La tolerancia inducida experimentalmente es un estado de ausencia de respuesta a un antgeno que normalmente sera inmunognico. Para ello,
el antgeno ha de administrarse bajo ciertas condiciones. La tolerancia es un estado adquirido (aprendido),
no innato, que se induce ms fcilmente en linfocitos
inmaduros, cuando no hay seal coestimulatoria, y que
requiere que el antgeno persista para que dicho estado
permanezca. La regeneracin con clulas madre implica tambin a los linfocitos y a una mayor generacin
de linfocitos inmaduros que pueden instaurar estados de
tolerancia inmunolgica.
Segn la experiencia de los autores, en la serie 1 000
casos de pacientes a los que se les aplic terapia celular
en ms de cinco ocasiones con clulas madre alognicas, hasta el da de hoy no se ha observado ninguna reaccin de anafilaxia, que es una reaccin inmunolgica
generalizada del organismo y una de las ms graves y
potencialmente fatales complicaciones, ante el contacto
con un alergeno con el que anteriormente ya haba tenido contacto. Asimismo, no se han observado reacciones
alrgicas a las clulas madre, y aunque la distincin
clara es difcil, la anafilaxia se distingue de la alergia por
la extensin de la reaccin inmunitaria, que habitualmente comprende uno o ms sistemas orgnicos (respiratorio, vascular, cardiaco, etc.). En su serie de casos clnicos, los autores no han observado ningn choque
anafilctico, el cual se suele detectar cuando se utilizan
medios de contraste en radiologa o se aplican algunos
frmacos teraputicos como la penicilina.
En la prctica mdica de la terapia celular con clulas
madre debe evitarse el empleo de anestsicos y bloqueadores neuromusculares, ya que estos frmacos son utilizados extensamente en procedimientos quirrgicos y
suelen usarse de manera simultnea, por lo que la mayora de las veces es difcil determinar cul fue el causante.
Entre los anestsicos generales, la alfadiona y el tiopental son los causantes principales y como anestsico
local, la lidocana. Tambin se debe evitar el uso de frmacos antiinflamatorios del tipo del cido acetilsaliclico, productos utilizados para contraste radiogrfico
(procedimientos como urografas, angiografas, colangiografas, etc.), especialmente aqullos que contengan
derivados del yodo, as como los utilizados por va intravenosa, y el uso de frmacos antibiticos, que son
causa muy frecuente de anafilaxia. Se han identificado
como agentes frecuentes los derivados de la penicilina,
120
las cefalosporinas, las sulfamidas y las tetraciclinas, y

la estreptoquinasa, un tromboltico usado en el tratamiento del infarto agudo de miocardio. Existen otros
frmacos que tambin pueden inducir anafilaxia, aunque con menor frecuencia, como la vitamina B1, derivados del dextrn y el glucagn, entre otros. Cabe mencionar que tericamente cualquier frmaco tiene potencial
alergnico, aunque en la prctica pocos de ellos han
mostrado estar relacionados con relativa frecuencia a la
anafilaxia.
Despus de aplicar cada inyeccin 12 x 106 clulas
madre se debe vigilar durante 5 min si ocurren cambios
que sugieran reaccin anafilctica, como: palidez, diaforesis (sudoracin), prurito (comezn), ronchas y edema generalizado o regional (facial, alrededor de los ojos
o boca), taquicardia (frecuencia cardiaca superior a
90/min), hipotensin (presin arterial sistlica < 90
mmHg) y arritmias ventriculares, manifestadas con pulso dbil, ruidos cardiacos irregulares o dbiles, extremidades fras y sncope (desmayo), edema de glotis/epiglotis o broncoconstriccin severa, manifestando
disnea (respiracin difcil, sensacin de falta de aire),
disfona (alteracin de la voz), estridor (respiracin ruidosa, semejante a un silbido), sibilancias (ruidos semejantes, auscultados con estetoscopio) y cianosis (coloracin azul oscuromorada en labios, uas u otros sitios),
diarrea, vmitos, ansiedad, desorientacin, mareos, parestesias (sensaciones anormales como fro o entumecimiento en las extremidades o la cara), convulsiones y
prdida de la conciencia, en caso de que se presentaran
estos signos y sntomas.
Se deber aplicar clorhidrato de adrenalina por va
intravenosa en una dosis de 0.25 a 1 mg, diluido en 10
mL de suero fisiolgico y aplicado muy lentamente. El
medicamento suele ser bien tolerado. El riesgo de arritmia cardiaca es mnimo comparado con el peligro de no
administrarlo. En las formas menos graves se prefiere
la va intramuscular, incluso subcutnea, de la misma
dosis. Repetir a los 15 min si la mejora no es muy notoria. Administrar oxgeno por puntas nasales, mascarilla
y de ser necesario cnula endotraqueal para atenuar la
hipoxia tisular concomitante al choque. Los corticoides
son muy tiles para prevenir las reacciones tardas. Es
aconsejable la hidrocortisona, 200 mg IV/6 h.
El Dr. Snchez seala que el potente efecto teraputico observado en los pacientes que han recibido su protocolo de terapia celular con clulas madre humanas
alognicas se puede analizar en dos fases: la fase I (inmediata) deriva de los hallazgos obtenidos en los experimentos de Parekkadan y col. del ao 2007, quienes
descubrieron que el lquido derivado de los cultivos de
clulas madre (mesenquimatosas) protege del dao
(Captulo 5)
heptico fulminante a las 36 h en el modelo experimental en ratas con GalN. En la fase II (mediata), en donde
las clulas proliferan, se trasladan por trofismo al sitio
de la lesin o enfermedad, se ponen en contacto con las
clulas del husped que tienen la capacidad de orientar
su diferenciacin; en ese momento puede producirse el
fenmeno de herencia horizontal (hiptesis Snchez
Vzquez), la cual ha sido muchas veces comprobada en
organismos procariotas, ya que en el laboratorio han observado los autores cmo los melanocitos humanos son
capaces de transportar cidos nucleicos en los que se incluye mRNA de una clula eucariota a otra. Esta transferencia gentica horizontal se realiza con vectores y es
el fundamento de la terapia gnica.
Es muy probable que las clulas madre sean el vector
natural ms eficiente para transferir material gentico
nuevo y no enfermo a los tejidos envejecidos y enfermos; esto tambin puede explicar cmo las clulas madre pueden inducir en el husped un efecto teraputico
que puede ser duradero, ya que las clulas madre diferenciadas no son afectadas por el reconocimiento del
sistema inmunitario, ya que comparten protenas antignicas con el husped. Otra explicacin es el fenmeno de mosaicismo, que es la diversidad gentica observada en un mismo individuo, de manera que coexisten
dos o ms poblaciones de clulas con distinto genotipo.
O tal vez un trmino mejor que mosaicismo sea quimerismo, el cual se refiere tambin a la diversidad genotpica en las clulas de un organismo con poblaciones de
clulas con distinto material gentico, pero que proviene de la unin de clulas con dos cigotos distintos,
mientras que en el primer caso son originadas a partir
del mismo cigoto.
Las quimeras y el mosaicismo son compatibles con
la vida. Aunque de manera natural se estudian como
causa de anomala gentica y se consideran como un
error muy temprano en la divisin celular del cigoto,
esta mutacin se transmitir a las clulas derivadas de
las que ha mutado, pero no a las restantes. Esto origina
dos poblaciones de clulas distintas. El mosaicismo
puede afectar a cualquier tejido del individuo.
En el mosaicismo somtico coexisten clulas normales y anormales en un mismo individuo (puede afectar
o no a la lnea germinal). Obviamente, en el caso de la
terapia celular las clulas husped seran las anormales
y las de la terapia celular, las normales. En condiciones
patolgicas la mutacin no puede ser transmitida a la
descendencia a menos que algunas clulas de la lnea
germinal estuvieran afectadas. Sus consecuencias son
que si se produce una mutacin en una clula de la piel,
a nivel gentico se transmitir a las clulas que se deriven de ella, pero no a las restantes. Por lo tanto, a partir

de ese momento coexisten en un mismo sujeto clulas
con distinta informacin gentica. La distribucin de
las clulas es visible sobre todo en la piel, donde forman
patrones conocidos como lneas de Blaschko, tablero de
ajedrez o formas similares a hojas.
En el mosaicismo gonadal la mutacin afecta a una
de las clulas germinales y por lo tanto a una parte de los
gametos (vulos o espermatozoides). Las mutaciones
pueden transmitirse a la descendencia.
El Dr. SosaLuna opina que el fenmeno del mosaicismo inverso permite entender cmo la terapia celular
con clulas madre alognicas de origen humano puede
incrementar el nmero de clulas no afectadas por dao
gentico, crnico o degenerativo. Esta hiptesis no permite sustentar la necesidad de aplicacin de terapia celular con clulas madre alognicas, como en el caso del
sndrome de Down, en donde el dao es generalizado en
todas las clulas y la presencia de mosaicismo es de
buen pronstico clnico, con la intencin de incrementar el nmero de clulas quimricas del individuo que no
presenten la trisoma en el cromosoma 21, adems de
las que ya son normales en el paciente. Casos similares
son los pacientes que padecen el sndrome de la triple X
(con mosaicismo), el sndrome de Turner o el de Klinefelter, en donde pueden coexistir diversos mosaicismos
como el llamado 46/47 mosaico de XY/XXY, ya que
algunas de las clulas del paciente contienen los cromosomas de XY, y algunas contienen los cromosomas de
XXY (la anotacin de 46/47 indica que las clulas de
XY tienen el nmero normal de 46 cromosomas totales
y las clulas de XXY tienen 47 cromosomas totales).
La terapia celular con clulas madre alognicas tal
vez pueda dar origen a un mosaicismo quimrico inverso y funcional. sta puede ser una de las explicaciones
razonables desde el punto de vista farmacolgico, siendo
posible que las clulas madre, una vez diferenciadas en
clulas especializadas e integradas en sitios especficos
del paciente, sobrevivan a la vigilancia inmunolgica.
O cmo explicar que un paciente con vitligo presente
repigmentacin gradual de sus manchas hipocrmicas
y que un paciente con Parkinson deje de temblar y que
un paciente con diabetes mellitus tipo 1 evolucione al
estado normoglucmico sin requerir insulina recombinante humana?
Investigaciones recientes han comprobado el potencial clnico de la aplicacin de ESC en modelos experimentales de diabetes tipo 1, donde las terapias celulares
con clulas madre ESC curaron a los ratones. Los investigadores tambin observaron la tolerancia que permite
un cotrasplante de clulas de los islotes pancreticos
(ratn a ratn) alognicas y xenognicas (humano a
ratn) para reemplazar las clulas b destruidas. Estos
121
resultados fueron muy alentadores, lo que oblig a los

autores a aplicar clulas madre alognicas de humanos
a humanos, no slo en pacientes con diabetes mellitus,
sino en otros que padecan muchas enfermedades autoinmunitarias como la artritis reumatoide, la esclerosis
mltiple, el lupus eritematoso sistmico, la fibromialgia
reumtica, asma y dermatitis atpica, entre otras, obteniendo excelentes resultados.
Se considera que en el futuro muy prximo la terapia
celular que emplea las clulas madre con el genoma
humano intacto es el vector ideal, por lo que la terapia
gnica que emplea vectores virales ser sustituida
como paradigma de tratamiento de la medicina del
siglo XXI. Ya que en caso de requerirse la modificacin
o introduccin de cambios genticos en el organismo,
tendra dos opciones teraputicas: inyectarle al paciente
virus modificados genticamente (terapia gnica) con el
riesgo de infeccin o ponerle una inyeccin con clulas
madre (terapia celular) que podran provenir de manera
natural de otros seres humanos (nativas alognicas) o
del paciente mismo (clulas madre autlogas), las cuales previamente deberan haber sido cultivadas o criopreservadas a partir de la sangre de su cordn umbilical
y transfectadas en un laboratorio de biologa molecular
nivel III con un virus como vector. Esto permite introducir modificaciones en el genoma empleando tcnicas
que convencionalmente son conocidas como de DNA
recombinante. En lo particular, los autores prefieren recibir terapia celular con clulas madre nativas y alognicas.
Algunos de los supuestos problemas que planteaba
la terapia celular alognica, derivados de la generalizacin de las experiencia clnica en los trasplantes de mdula sea, eran los de ndole inmunolgica, de manera
que se crea errneamente que los elementos del sistema
inmunitario del husped acabaran rechazando el injerto
de clulas madre alognicas. Sin embargo, la terapia
alternativa de obtencin, expansin y diferenciacin de
las clulas madre requiere el trasplante de stas con el
supuesto riesgo obvio de un posible rechazo de este
injerto celular. A pesar de tener abundante experiencia
clnica, no se pueden extrapolar los resultados de ambas
tcnicas, ya que las clulas no poseen vascularizacin
(ya que son clulas), a diferencia de los rganos para
trasplante como rin, hgado, pncreas, corazn, etc.
Se requieren tcnicas microquirrgicas avanzadas
para lograr anastomosis de las arterias y venas, de manera que los rechazos agudos a esos trasplantes de rganos se deban al dao por obliteracin de los vasos sanguneos que principalmente ocurren en las arterias
anastomosadas que nutren a los rganos injertados.
Adems, est demostrado que el rechazo de un injerto
122
se debe a la existencia de reconocimiento por parte de

los linfocitos T citotxicos a molculas del complejo de
histocompatibilidad mayor (MHC) clases I y II, expresadas en la superficie celular del endotelio de los vasos
anastomosados, ocasionndose adems isquemia aguda. En el caso de la terapia celular con clulas madre alognicas se trata de microtrasplantes de clulas que no
necesitan ser nutridas a travs de vasos sanguneos o capilares, ya que tienen la capacidad de migrar de manera
similar al proceso, como ocurre en las metstasis. Adems, creen los autores que genera una tolerancia similar,
la cual se potencializa por un fenmeno de tolerancia por
inyecciones repetidas de vacunas antialrgicas.
Adems, si se considera que recientemente se han encontrado niveles bajos de expresin de estas molculas
(MHC) en clulas madre embrionarias humanas (ESC),
aunque tambin stas aumentan al diferenciarse in vitro,
no llegarn nunca a los niveles que se observan en los
rganos enteros injertados. Por la poca o nula experiencia in vivo se conoce poco del poder antignico de
dichas clulas, si bien ciertos estudios ponen de manifiesto que son suficientes los niveles bajos para inducir
una respuesta inmunolgica. No deben olvidarse las
clulas asesinas naturales que intervienen de manera
activa en el incontable nmero de reacciones bioqumicas, fisiolgicas y celulares que conducen al rechazo; no
se ha observado la expresin del MHC de clase II en las
clulas madre. Existen, sin embargo, proyectos de que,
al igual que los de rganos, se creen bancos de clulas
madre isotipadas con el sistema HLA, para de este
modo elegir el isotipo ms adecuado para cada paciente.
Los autores de esta publicacin (GonzlezLpez
GM, SnchezGonzlez DJ y SosaLuna CA) recomiendan que en la prctica mdica todo paciente hombre o mujer que reciba terapia celular con clulas madre
sea considerado como una embarazada en sus primeros 10 das de etapa de desarrollo y por lo tanto deber
recibir una alimentacin balanceada (rica en aminocidos, cido flico, minerales y vitaminas). Los pacientes
varones y mujeres deben evitar exponerse a riesgos teratognicos, por ejemplo la exposicin a infecciones
como el Toxoplasma gondi. En la medida de lo posible
deber evitar la administracin de frmacos. En realidad, hoy en da se dispone de muchos frmacos de los
cuales slo unos cuantos han demostrado ser teratognicos, tanto en experimentacin animal como en estudios
en humanos. Sin embargo, en la inmensa mayora de
ellos la realidad es que se desconocen con exactitud los
posibles riesgos que puede representar su ingestin.
Como regla general, debe sealarse que si no son necesarios, debe evitarse su ingestin durante la terapia
celular con clulas madre.
(Captulo 5)
Hay que sealar que durante la gestacin el periodo

de mayor riesgo para que se produzca una malformacin congnita (teratognesis) son las 10 primeras semanas. Posteriormente se entra en una fase de maduracin
y perfeccionamiento de los rganos en el feto, exceptuando el aparato genital y el sistema nervioso central.
Por lo anterior debe evitarse en lo posible la ingesta de
cualquier medicamento, exponerse a estudios de rayos
X o de medicina nuclear, radioterapia y quimioterapia
al menos durante y despus de las primeras 10 semanas
en las que se haya aplicado la ltima inyeccin con
clulas madre.
Qu medicamentos podran utilizarse durante la terapia celular? Entre los frmacos en los cuales los estudios controlados no han demostrado riesgos o no existen
pruebas de riesgo en la especie humana estn el paracetamol, la doxilamina o dimenidrato, la heparina, la penicilina y cefalosporinas.
Cualquier medicamento, como pueden ser los frmacos antihipertensivos e hipoglucemiantes y anticoagulantes, por va bucal e insulina, debern conservarse
porque son indispensables para el control del padecimiento de base. El tratamiento mdico debe continuar
tal como el mdico lo prescriba y la terapia celular
siempre deber manejarse como un tratamiento complementario.
Los siguientes medicamentos deben evitarse en lo
posible y pueden estar contraindicados durante la terapia celular: acetoexamida, cido etacrnico, cido valproico, altetramina, aminoglucsidos, aminoglutetimina,
aciatropina, barbitricos, benzodiacepinas, busulfan,
carboplatino, carmustina, ciclofosfamida, cisplatino,
citarabina, clorambucil, cloroquina, daunorubicina, dicumarnimos, diurticos, tiacdicos, hetopxido, fenacemida, fenitona, fluxoridina, fludarabina, fluoracilo,
flutamida, triancinolona, hidantoda, hidarubicina, ifosfamida, inhibidores de la enzima de conversin de la
angiotensina, litio, lomustina, melfalan, meprobanato,
mercaptopurina, metimazol, parametadiona, pipobromano, primidona, procarbacina, propiltiuracilo, progestgenos, tetraciclinas, tioguanina, tamoxifeno, trimetadiona, minblastina, vincristina y yoduro potsico.
Los siguientes medicamentos, por ser teratognicos,
estn contraindicados durante la terapia celular y no debern ser tomados por un periodo mnimo de 10 semanas: cido acetohidroxmico, cido quenodeoxiclico,
cido hetacrnico, aminopeptidina, andrgenos, benzofetamina, danazol, derivados de la ergotamina, dietilbresbestrol, estrgenos, etetrinato, goserelina, isotretinona, leuprorelina, lobastina, metotrexato, nafarelina,
penicilamina, plicamicina, quinina, rababirina, trilostano, urofilitrofina, yodo 131.
La lista de medicamentos contraindicados se ir modificando a medida que se conozcan mejor las seales
internas y externas que afectan a las clulas madre. Numerosos estudios bsicos realizados en Drosophila
melanogaster (mosca de la fruta) y ratn han demostrado la existencia de una serie de controles internos que
a modo de reloj marcan a las clulas el nmero de divisiones simtricas antes de empezar el proceso de diferenciacin que dar lugar a una estirpe celular concreta.
A pesar de los pocos conocimientos que se tienen de dichos procesos, los estudios bsicos indican la existencia
de protenas especficas (activadoras/inhibidoras) involucradas en el ciclo celular y el papel importante de la
longitud del telmero (del griego telos, final, y meros,
parte), como los extremos de los cromosomas formados
por regiones repetidas de DNA no codificantes, con funciones muy concretas en la estabilidad molecular. La
cantidad de repeticiones que se encuentran en el telmero es variable incluso en diferentes clulas de un
mismo individuo. Sin embargo, el promedio tiende a ser
constante para cada especie. Por otra parte, la telomerasa
(formada por un complejo protenacidocido) es una
polimerasa producida por las clulas germinales embrinicas que permite la elongacin de los telmeros. Se sabe
que la telomerasa es reprimida en las clulas somticas
maduras, lo que comporta un acortamiento del telmero
al final de cada divisin celular. Cuando la longitud del
telmero alcanza cierto lmite, se interrumpen las mitosis
y quedan las clulas en estadio Go de su ciclo.
Tambin se puede hablar de controles externos: un
conjunto de seales paracrinas y autocrinas entre las clulas madre/hijas y las vecinas; entre ellas se destacan
los factores secretados, que son los ms conocidos, y los
factores de la mdula sea, entre los que se incluyen
numerosas citocinas.
S Interaccin clulaclula por medio de protenas
de membrana.
S Integraciones de las clulas con la matriz extracelular por medio de receptores de membranas integrinas.
En muchos de estos casos la seal externa interacciona
con el receptor de membrana, lo que se traduce en el
interior de la clula como un sinnmero de sealizaciones; es decir, un conjunto de reacciones bioqumicas
(fosforilaciones y desfosforilaciones de protenas) que
finalmente acaba en la activacin y desactivacin de un
grupo de genes. Esto implica que la clula puede cambiar su patrn de expresin, lo que en determinados
casos significa un paso ms en su ruta de diferenciacin,
su proliferacin, e incluso puede significar la muerte
123
celular programada (apoptosis) mientras existe un delicado equilibrio entre estos procesos celulares.
Plasticidad celular y transdiferenciacin

de las clulas madre
Investigaciones actuales ofrecen ms evidencia de que
las clulas madre adultas tienen capacidad pluripotencial en respuesta a un estrs tisular. Existen numerosos
trabajos cientficos que demuestran que la colonizacin
por parte de clulas madre circulantes en sangre perifrica de rganos sometidos a dao tisular tiene la capacidad de regenerar o reparar el tejido daado. Sin embargo, los resultados deben ser cuidadosamente analizados
aunque existen evidencias claras de dichos procesos. El
proceso de transdiferenciacin requiere que una clula
ponga en marcha mecanismos de desdiferenciacin y
rediferenciacin que darn origen a otro tipo celular.
En los ltimos aos ha surgido un nuevo concepto y
es el de la fusin celular. Este fenmeno fue demostrado
recientemente en experimentos realizados con cultivo
de clulas procedentes de la mdula sea con clulas del
corazn, del hgado o nerviosas. La fusin entre estas
clulas provoca un aporte de material gentico nuevo
que podra permitir la sustitucin de las clulas que se
estn degenerando por otras nuevas. Sin embargo, estas
desdiferenciaciones aparentes resultaron en la produccin de clulas hbridas (tetraploides). Dichas aberraciones cromosmicas impiden su utilizacin en algn
tipo de terapia celular. Por otra parte, existen trabajos
que demuestran que los cultivos de clulas madre podran producir cambios en la cintica del ciclo celular o
adhesin celular, alteraciones adquiridas a consecuencia del cultivo. A pesar del desprestigio provocado por
el fraude cientfico de S. Hwang en Corea, los esfuerzos
por avanzar en la derivacin de clulas madre embrionarias humanas (ESC) no se han detenido.
El grupo de Robert Lanza, del Advanced Cell Technology, en Worcester, Massachusetts, acaba de publicar un
artculo en Nature23 que reporta la obtencin de dos
lneas de clulas madre humanas a partir de blastocistos
humanos.
A primera vista parecera una publicacin ms sobre
la derivacin de ESC de las varias reportadas desde la
polmica publicacin de J. Thompson y col., en 1998.24
Sin embargo, en este trabajo reciente, los investigadores
mitigaron la resistencia de los grupos que con tanta vehemencia se oponen a la investigacin en esta nueva
rea de la biomedicina. En los reportes previos la deri23. Klimanskaya et al.: Publicacin en lnea, 23 de agosto de
2006.
24. Science 282:1145.
124
2
Blastocisto
5
Cultivo de clulas madre
Figura 58. Tcnica biotica de clulas madre embrionarias (ESC). 1. El ovocito humano recin fertilizado se cultiva
hasta la etapa de 8 a 10 blastmeros. 2. Con una micropipeta se extrae un blastmero. 3. Por medio de un protocolo
de cultivo se induce su proliferacin para obtener lneas de
clulas madre multipotentes. 4. El embrin operado contina su desarrollo hasta la etapa de blastocisto con apariencia normal. Operaciones similares con fines de diagnstico
gentico prenatal han mostrado la viabilidad de los embriones operados.
vacin de ESC se haca disociando blastocistos (embriones previos a la implantacin) obtenidos de embriones congelados en clnicas de reproduccin asistida.
Aunque el destino de la inmensa mayora de esos embriones es su eliminacin (tarde o temprano), su potencialidad para desarrollar un ser humano en caso de ser
implantados favorece el argumento de que su manipulacin con fines experimentales constituye un atentado a
la dignidad humana y debe ser penalizado.
El reciente trabajo del Advanced Cell Technology fue
realizado con 16 cigotos (vulos fertilizados) humanos
que fueron descongelados y puestos en condiciones de
cultivo, donde iniciaron su desarrollo hasta la etapa de
8 a 10 clulas (blastmeros). De acuerdo con criterios
de calidad, los embriones fertilizados in vitro se clasifican en grados I a V, dependiendo de la divisin armnica de los blastmeros y su grado de fragmentacin.
Para el estudio slo fueron seleccionados embriones de
grados IIII. Por medio de micromanipulacin se extrajo de cada embrin un blastmero que se coloc en condiciones ptimas para su multiplicacin. Por otra parte,
los embriones de los que se extrajeron los blastmeros
continuaron su desarrollo in vitro hasta la etapa de eclosin, de manera similar a los embriones intactos fertilizados in vitro en clnicas de reproduccin asistida
(figura 58).
(Captulo 5)
De acuerdo con un protocolo diseado por los autores, los blastmeros aislados fueron cultivados para su
multiplicacin en presencia de clulas nodrizas de ratn
y humanas. Slo los blastmeros obtenidos de embriones de grados I y II dieron origen a dos lneas de clulas
madre que mantuvieron su estabilidad gentica (cariotipo) durante ms de 18 meses. La expresin de genes
caractersticos de ESC y la demostracin de que no
hubo fusin con clulas empleadas como nodrizas en
los cultivos refuerzan la credibilidad del estudio reportado por el grupo de Lanza.
Un estudio hecho con ratones en el mismo laboratorio25 demostr que los embriones sometidos a un procedimiento semejante al utilizado en humanos se desarrollaron de manera normal y que su porcentaje de
implantacin fue similar al de los embriones intactos.
Es probable entonces que lo mismo ocurra con los embriones humanos a los que se les extrajo uno de sus primeros blastmeros.
De hecho, la extraccin de blastmeros para diagnstico prenatal es ya una prctica establecida en algunas
clnicas de reproduccin asistida equipadas con tecnologa avanzada. En estos casos es posible detectar la presencia de genes de riesgo elevado que en su estado homocigtico pongan en peligro la viabilidad o transmitan
padecimientos congnitos. Los embriones fertilizados
in vitro carentes de genes de riesgo elevado son seleccionados para su implantacin, incrementando as la
probabilidad de un desarrollo normal.
Los autores reportan que sus experimentos se realizaron con cigotos excedentes de mujeres sometidas a
fertilizacin in vitro a las que se les indujo ovulacin
mltiple para aumentar la probabilidad del embarazo.
Las donadoras otorgaron su consentimiento por escrito
despus de haber sido informadas sobre el estudio, de
acuerdo con la normatividad tica de la institucin. Sin
embargo, es poco probable que los grupos opositores a
la investigacin con clulas madre embrionarias humanas aprueben los resultados de Lanza y col.
Por otra parte, el trabajo publicado ha recibido tambin severas crticas por parte de la comunidad cientfica. Aunque no se trata de un trabajo fraudulento como
el de S. Hwang, la manera en que se presenta el estudio
de Lanza y col. es sensacionalista, disminuyendo as la
seriedad y el rigor cientfico de una buena contribucin.
En el reporte no se enfatiz que los 16 embriones empleados para la investigacin finalmente fueron destruidos y que se utilizaron 91 blastmeros y no 16, como se
hubiera esperado si slo se hubiese tomado un blastmero por embrin. El dilema tico entre los partidarios
25.
Cheng Y et al.: Nature 2006;439:416.
Endodermo
Mesodermo
E
Bancos de
lneas
celulares
ADN
recombinante
Endodermo
D1
II) Terapia gnica
Gen teraputico
Clulas madre
embrionarias
E1
125
Vector
viral
F
Procesos de
diferenciacin
celular
in vitro
FAC
D2
E2
Clulas madre
adultas
I)
Expansin
clonal
III) Diferenciacin
identificacin y
purificacin de
lneas celulares
comerciales
Figura 59. Terapia celular. Esquema que representa las fuentes de obtencin de clulas madre para su posterior aplicacin local
o sistmica. A. Representa la fertilizacin del oocito por el espermatozoide, que se puede realizar de manera natural, artificial o
in vitro. B. Representa la mrula con los blastmeros, clulas totipotenciales; esto ocurre a partir del tercer da de la fecundacin.
C. El blastocisto aparece el quinto da posterior a la fecundacin y en su interior se encuentran las clulas madre embrionarias
(ES), que tienen la caracterstica de ser pluripotenciales. D. Clulas madre (D1 de origen embrionario y D2 de origen adulto). E.
Bancos criognicos con diferentes lneas de clulas madre (E1: lneas celulares comerciales de origen embrionario para terapia
celular alognica y xenognica; E2: lneas celulares adultas para terapia celular autloga, alognica y xenognica). F. La terapia
celular requiere que las clulas madre sean cultivadas previamente en diferentes medios de cultivo con tres propsitos: expansin
celular o clonal (I), modificacin gentica con DNA recombinante (II) y para su aislamiento, identificacin y diferenciacin in vitro
(III). Los blancos teraputicos reconocidos a nivel hospitalario ms frecuentes son: 1) miocardio (corazn); 2) mdula sea (sangre); 3) sustancia nigra y estriado (cerebro). Las SC pueden dar origen a diferentes tipos celulares derivados de: i) ectodermo;
ii) mesodermo; iii) endodermo.
del avance cientfico y los grupos tradicionalistas conservadores sigue y seguir por mucho tiempo; sin embargo, la terapia celular es ya una realidad (figura 59).
PROYECTO DEL GENOMA HUMANO
El gran avance para la medicina regenerativa nivel III

se vislumbr con el Proyecto del Genoma Humano y el
desarrollo de la tecnologa del DNA recombinante, y de
manera paralela la tecnologa para el cultivo de clulas
y tejidos y la disponibilidad de marcadores y anticuer-
pos para la identificacin de clulas madre. El genoma

se define como la estructura en secuencia y ordenamiento de todos los cromosomas de una especie. Cada
molcula de DNA se empaqueta en un cromosoma separado, y la informacin gentica total almacenada en
los cromosomas de un organismo constituye su genoma.
El valor C determina la cantidad total del DNA haploide completo y oscila entre 106 pb en el caso de los
micoplasmas hasta ms de 1011 pb en plantas y anfibios.
El genoma humano termin de ser descifrado en junio
de 2000; contiene dos copias de cada cromosoma, una
heredada del padre y otra de la madre, que en conjunto
suman 3.3 x 109 pares de bases nitrogenadas o 3 300
megabases (figura 510). En los cromosomas sexuales
esta regla se repite en las mujeres, que tienen frmula
126
(Captulo 5)
Genoma humano
Genoma mitocondrial
16 569 pb
37 genes
Genoma nuclear*
3 300 Mb
40 000 genes
5%
95%
Genes
DNA
extragnico
nico o modelo
repetitivo
Seudogenes
10%
90%
DNA
DNA no
codificante
codificante
Fragmentos
gnicos
Intrones
2 genes
rRNA
22 genes
tRNA
13 genes
60% nica o
bajo nmero
de copias
40%
moderada
altamente
repetitivas
Transposones
Repetidos
en tndem
Satlite
Repetidos
dispersos
SINE
LINE
Minisatlite Microsatlite
Figura 510. Esquema de la composicin del genoma humano con sus componentes nucleares y mitocondrial. El genoma
humano descifrado en junio del ao 2000 contiene dos copias de cada cromosoma, una heredada del padre y otra de la madre,
que en conjunto suman 3.3 X109 pb o 3 300 megabases. El RNA juega una nutrida y variada actividad, pasa la informacin gentica
a la descendencia en el apagado de genes. * Centrosomas, que ayudan a separar a los cromosomas pareados, as como otros
organelos se replican a su propio momento, sin la gua del DNA.
XX. Sin embargo, en el hombre los cromosomas sexuales son diferentes: el cromosoma sexual Y es aportado
por el padre y el cromosoma sexual X por la madre, de
tal manera que son copias nicas.
Los cromosomas humanos cambian su estructura y
actividad de acuerdo con el estado de la clula en relacin con el ciclo celular: en la fase M o mitosis se condensan y son transcripcionalmente inactivos, pero en la
interfase se descondensan y se vuelven muy activos en
la sntesis de RNA.
Se considera que en los humanos existen alrededor
de 40 000 genes y que slo 10% del genoma codifica
para protenas o para molculas de RNA. Adems de replicarse a s mismo, la funcin principal del genoma
codificante es copiar secuencias de DNA en secuencias
de RNA, proceso denominado transcripcin. El RNA copiado puede ser un premRNA, que luego de ser procesado puede dar lugar a varios mRNA maduros y codificar para una protena o ms de una. El rRNA (ribosomal)
y el tRNA (de transferencia) tambin se transcriben a
partir del genoma. Se dice entonces que cada regin del
DNA que produce una molcula de RNA funcional
constituye un gen.
El Proyecto Genoma Humano (PGH) consisti en secuenciar los 3 300 millones de nucletidos, pares de bases o letras (A, T, G, C) y el mapa de localizacin de los
casi 40 000 genes que lo componen. Se encontr que

hasta 5 000 genes son causantes de enfermedades genticas. Adems, se demostr que los seres humanos compartimos 99.9% del genoma. El restante 0.1% vara entre cada individuo, siendo las variaciones ms comunes
los polimorfismos o cambios de un nucletido simple o
SNP (single nucleotyde polymorphysm). Slo 1 de cada
1 000 bases difiere de un ser humano a otro; hasta el
momento se han identificado cerca de 3.3 millones de
estas diferencias, muchas de las cuales son intrascendentes.
La variacin genmica entre individuos da como resultado que cada miembro de nuestra especie tenga caractersticas genmicas nicas. Cerca de 35% del genoma contiene secuencias repetidas, lo que se conoce
como DNA basura, 25% del genoma humano est casi
desierto (espacios libres entre un gen y otro). Existe al
menos 98% de identidad con el DNA de los chimpancs
y otros primates.
Tambin se encontr que el ser humano tiene slo el
doble de genes que la mosca del vinagre y un tercio ms
que el gusano comn C. elegans. Slo 5% del genoma
codifica protenas, y se calcula que existen unas
250 000 a 300 000 protenas distintas; por lo tanto, cada
gen podra estar involucrado en la sntesis de 10 protenas en promedio.

La siguiente fase, denominada Proyecto Proteoma
Humano (HUPO), representa una nueva fase en el estudio de los genes, tomando en cuenta que las protenas
representan el segundo nivel de expresin gnica (traduccin gnica). El proyecto HapMap consiste en desarrollar un mapa de constitucin gentica de un individuo con respecto a uno de los miembros de un par de
genes allicos (haplotipos) y los SNP especficos que
identifican al genoma humano; su objetivo es explorar
el genoma en relacin con los fenotipos y las variaciones genticas que afectan a la salud y la enfermedad.
Estudios actuales estn demostrando que la regeneracin celular del miocardio infartado proviene de la
diferenciacin de clulas madre residentes en el miocardio y de las provenientes de la mdula sea. Desafortunadamente este proceso puede ser insuficiente para prevenir la insuficiencia cardiaca en los infartos masivos y
en los pacientes con cardiomiopatas.
Las tcnicas de microarreglos, secuenciacin de
DNA y bases de datos son las herramientas para descifrar lo que est ms all de nuestro entendimiento. Qu
se deducir de todo este trabajo? De momento, la tarea
ha aportado una nueva figura, la del bilogo de sistemas, interesado en poner orden a lo que hoy en da sigue
siendo un rompecabezas. El progreso limita la dificultad de trasladar patrones biolgicos a modelos computacionales.
BIOGENRICOS
Cuntas protenas tiene el ser humano?

Con dificultad se han logrado contar los genes. Las protenas se pueden empalmar de diversas maneras y combinarse con numerosos grupos funcionales, haciendo
imposible contar su nmero por ahora.
Durante el ao 2002 la industria biotecnolgica celebr el vigsimo aniversario de la aprobacin del primer
producto biofarmacutico: la insulina. El vencimiento
de las patentes de estos primeros biofarmacuticos
abri la posibilidad de comercializarlos como biogenricos.
Los biogenricos consisten en protenas recombinantes, anticuerpos monoclonales o cidos nucleicos
equivalentes a un teraputico original que se pueden
manufacturar tras la expiracin de las patentes de invencin. Han sido denominados de diferente manera: biosimilares, biocomparables, genricos biofarmacuticos,
127
productos biotecnolgicos libres de patentes (OPBP),

productos clnicos biolgicos similares (adoptado por la
Unin Europea, UE). Sin embargo, el trmino ms usado en la literatura ha sido el de biogenricos. El mercado
de estos nuevos productos podra generar ganancias de
alrededor de los 5 400 millones de dlares para el ao
2008 si se consigue un ambiente regulador favorable
que les permita alcanzar el mercado mundial.
El debate de la aprobacin de estos productos se ha
centrado en establecer la similitud entre el biogenrico y el producto biolgico de referencia. Cuando el
mismo producto es manufacturado por diferentes fabricantes, que es lo que ocurrir con los biogenricos, el
nmero de variables, como la construccin de origen, el
proceso de fermentacin, la purificacin, el envasado y
el almacenaje, podran generar productos que no sean
estrictamente idnticos.
La actividad de un producto biolgico depende de la
secuencia de aminocidos, la estructura tridimensional,
modificaciones postraduccionales como fosforilaciones y glicosilaciones (caractersticas inherentes de la
sustancia), la ruta de administracin, as como el sistema inmunitario del husped; cualquier alteracin puede generar un producto diferente que en consecuencia
tendra que cumplir con las pruebas de seguridad y eficacia de medicamentos.
Los fabricantes han pugnado ante la Food and Drug
Administration (FDA), agencia reguladora de EUA, por
el uso de una ruta abreviada para la aprobacin de los
genricos, establecida en 1982 en el acta HatchWaxman Seccin 505(b)(2). Esta legislacin permite que
una droga obtenga la aprobacin sin ensayos de seguridad y eficacia si su ingrediente activo es idntico a la
droga del innovador y se metaboliza de igual forma. En
esta premisa estaran cayendo los primeros biogenricos: factor estimulante de colonias de granulositos
(GCSF), interferones (INF), hormona de crecimiento
humana (Hg), insulina y eritropoyetina (EPO).
La legislacin en la UE tiene como camino regulador
las Directivas 2003/63/EC y 2004/27/EC a travs de la
Agencia Europea de Evaluacin de Medicamentos
(EMEA), que establece un camino regulador abreviado
basado en la demostracin de la naturaleza similar de
dos productos biolgicos, avalados por la informacin
de estudios preclnicos y clnicos. Hasta ahora ningn
producto biogenrico ha sido aprobado para su venta en
Europa o EUA, pero cualquier proceso de revisin y
aprobacin de productos biogenricos requerira el anlisis profundo del caso, as como el apoyo en estudios clnicos que demuestren la seguridad y eficacia del mismo.
Mientras esperan aprobaciones en mercados occidentales, las compaas de biogenricos estn apuntan-
128
do a pases con barreras regulatorias ms bajas y menos

proteccin intelectual; por ejemplo, Teva Pharmaceutical Industries Ltd. est fabricando hGH, interfern
a2b y GCSF en Lituania y los est vendiendo fuera
de EUA y Europa Occidental. Por otra parte, la compaa Dragon Pharmaceutical Inc., biofarmacutica con
sede en Vancouver e instalaciones en Nanking, China,
est produciendo EPO y llevndola a mercados como
China, India, Egipto, Brasil, Per, Ecuador, Trinidad y
Tobago, Repblica Dominicana y Kosovo. A finales del
ao 2005 se aprob la venta del primer producto biogenrico en Australia: OmnitropeT Sandoz, que es una
versin de la hormona de crecimiento humana, lo que
abre un escenario optimista para diversas compaas
que estn en espera de aprobaciones futuras.
No hay que perder de vista que la produccin de biogenricos puede ser parte importante del crecimiento de
las empresas farmacuticas convencionales en relacin
a la evolucin de los tratamientos de enfermedades en
todo el mundo, en tanto que otras compaas seguirn
invirtiendo en la mejora de formulaciones, vas de administracin, conjugaciones de protenas con polietilenglicol (PEG) de la primera generacin de biofarmacuticos, desarrollando los supergenricos, para poder
mantenerse o competir en este nuevo mercado.
TICA, CIENCIA Y CLULAS MADRE
La comunidad cientfica, al igual que otras comunidades, puede dividirse en conservadores y liberales, pesimistas y optimistas. Sin embargo, por la manera en que
reaccionan ante hallazgos que cuestionan el conocimiento establecido, los cientficos pueden ser crdulos
o escpticos.
La primera reaccin ante la clonacin de la oveja
Dolly en 199726 fue de escepticismo. La teora establecida, varios intentos fallidos e incluso la comprobacin
de un anterior fraude denunciado justificaban la actitud
de los escpticos. No obstante, la posterior clonacin en
serie de ratones por otro grupo en un laboratorio de reconocido prestigio, seguida de la clonacin de varias especies de mamferos en diversos laboratorios, convenci a la gran mayora de investigadores (no a todos) sobre
la veracidad del trabajo de Wilmut y col., generadores de
Dolly, y de que es posible la clonacin de mamferos.
Por otra parte, la derivacin de clulas madre embrionarias (ESC) a partir de blastocistos humanos, pu26.
Wilmut I et al.: Nature 385:810813.
(Captulo 5)
blicada en 1998 por el grupo de J. A. Thomson,27 gener

nuevas expectativas en la comunidad mdica por su probable aplicacin en la denominada terapia celular o regenerativa. Al menos en teora, las ESC son clulas
multipotenciales capaces de multiplicarse indefinidamente en el laboratorio y, lo ms importante, de generar
clulas progenitoras de clulas especializadas para reemplazar tejidos daados. Estudios hechos con ESC de
ratn han demostrado que la teora est bien fundamentada y que vale la pena continuar trabajando en esta
nueva rea de investigacin.
La derivacin de ESC de blastocistos generados por
transferencia nuclear combina las tcnicas de clonacin
con la manipulacin de ESC. En principio, el desarrollo
de esta metodologa ofrece la posibilidad de emplear la
clula de la piel (u otro tejido) de un paciente, transferir
su ncleo a un ovocito, derivar ESC y, a partir de ellas,
inducir la diferenciacin de clulas progenitoras de clulas sanguneas, cardiacas, neurales, clulas beta productoras de insulina, etc. Al injertar al paciente donador
del ncleo las clulas progenitoras, se esperara poder
corregir algn padecimiento degenerativo con un mnimo de rechazo inmunolgico.
Incluso en casos de padecimientos genticos (p. ej.,
algunas formas de leucemia, asma y diabetes) sera posible corregir el gen daado con ingeniera gentica
en las ESC poseedoras del propio genoma del paciente
y curar su padecimiento con una terapia de reemplazo
celular. Algunos estudios preliminares realizados en ratones han mostrado la factibilidad de la teora y sugieren
a los optimistas que el empleo de ESC clonadas puede
llegar a ser una realidad para la terapia celular regenerativa del futuro. Sin embargo, como los resultados aun en
animales de laboratorio son todava modestos, el escepticismo de los investigadores pesimistas sigue siendo
grande.
La noticia sobre el fraude cientfico cometido por el
grupo de W. S. Hwang, de la Universidad de Sel, cay
como balde de agua fra sobre los optimistas respecto a
la clonacin teraputica. La publicacin de junio de
200528 del grupo coreano indicaba haber logrado derivar 11 lneas de ESC humanas clonadas de pacientes con
diversos padecimientos. De haber sido cierto, los investigadores coreanos se habran adelantado aos a sus competidores de otros pases. De hecho, no fueron pocas las
solicitudes de investigadores provenientes de todo el
mundo para realizar estancias en tan avanzado laboratorio.
Cmo fue posible que una persona o un grupo de investigadores cometieran tan grave falta? Los fraudes
27.
28.
Science 282:11451147.
Science 308:17771783.

cientficos, por desgracia, no son raros ni recientes; la
historia registra buen nmero de ellos. Por fortuna, la investigacin cientfica ha avanzado a travs de la investigacin honesta, y el evidente desarrollo de la ciencia
contempornea demuestra con creces el predominio numrico de los buenos investigadores.
El trmino buen investigador conlleva al menos
dos acepciones:
1. El que hace bien la investigacin (original, creativo, dedicado, etc.).

2. El que interpreta y reporta sus resultados con honestidad (sin prejuicios ideolgicos o comerciales,
intereses polticos, conflicto de intereses, etc.).
El caso de W. S. Hwang y algunos de sus colaboradores
muestra cmo un equipo con gran capacidad tecnolgica y abundantes recursos humanos puede ser vctima
de su propia ambicin al pretender engaar a la comunidad cientfica internacional. En contraste con la actividad puramente poltica, en la que se puede engaar a la
mayora el tiempo suficiente para detentar el poder o
enriquecerse, la actividad cientfica fraudulenta borra
por completo el prestigio mal habido. Al retirarse, los
polticos de dudosa honestidad suelen vivir bien aun sin
poder; en cambio, los cientficos deshonestos pierden
para siempre el respeto y la credibilidad de sus colegas.
A pesar de la oscuridad a la que fue sumergido el
prestigio de la investigacin biomdica coreana por
culpa del fraude de W. S. Hwang, la actitud de la comunidad cientfica coreana es digna de elogio. No fue un
comit extranjero, sino un comit coreano de expertos
el que se encarg de demostrar la falsedad de los resultados reportados en la publicacin sospechosa de fraudulenta. Predomin la bsqueda de la verdad cientfica
como valor sin fronteras (tal como es) sobre un nacionalismo mal entendido que, en ltima instancia, slo
habra dado un prestigio efmero a la ciencia coreana.
Es indudable que la imagen de la ciencia que proyectan los medios masivos de comunicacin al pblico
en general es de vital importancia. El tema de la clonacin humana activ la reaccin de grupos conservadores opuestos a la investigacin en ESC humanas. Aunque es difcil predecir el efecto negativo que pudiera
tener la extensa difusin del caso coreano, por el momento existe una cierta confusin que parece haber fortalecido la posicin de los grupos conservadores. Es
posible que haya disminuido el inters de algunos investigadores jvenes por las ESC.
Asimismo, puede haber una influencia negativa sobre los encargados de financiar proyectos sobre ESC.
Sin embargo, es de esperarse que la investigacin en
129
esta rea del conocimiento vaya a continuar con pasos

ms slidos y cautelosos, de manera que tarde o temprano se establecer con rigor y seriedad hasta dnde podr
llegar la aplicacin mdica del conocimiento bsico
sobre la biologa de las ESC animales y humanas.
CLULAS MADRE, CLONACIN

Y LEGISLACIN
El 8 de marzo de 2005 la Asamblea General de la Organizacin de las Naciones Unidas (ONU) adopt una
declaracin que pide a los Estados miembros prohibir
todas las formas de clonacin que sean incompatibles
con la dignidad y la proteccin de la vida humanas. La
declaracin (aprobada con 84 votos a favor, 34 en contra
y 37 abstenciones) se da como resultado de la profunda
divisin que el tema haba producido entre los Estados
miembros a travs de dos propuestas previas, una claramente restrictiva, encabezada por Costa Rica y respaldada por EUA, y la otra, ms permisiva, encabezada por
Blgica, que haba sido secundada por pases como
Espaa, Francia, Inglaterra, Alemania y Mxico. El
asunto verdaderamente controvertido se refiere a la clonacin teraputica y a la investigacin con clulas humanas de origen embrionario, ya que la prohibicin
sobre la clonacin reproductiva es generalizada.
Al respecto de la votacin del ao 2005, sorprende de
forma positiva que la representacin mexicana haya
modificado diametralmente su posicin anterior en
apoyo de la propuesta que abra espacios para realizar
investigacin sobre el potencial teraputico de las clulas madre de embriones humanos, lo que puede salvar
millones de vidas.
Afortunadamente, la declaracin de la ONU no es de
observancia obligatoria para los pases miembros y permite a las legislaciones nacionales definir sus propias
normas tomando en cuenta valores culturales, filosficos y religiosos locales. En consecuencia, el debate se
transfiere a los mbitos nacionales, lo que significa que
si la comunidad cientfica mexicana pretende que su
opinin sea tomada en cuenta por nuestros legisladores,
habr de realizar una labor de cabildeo ante los distintos
grupos parlamentarios. En este sentido, una de las principales instancias cientficas que pueden coordinar, formalizar e impulsar nuestras opiniones es la Academia
Mexicana de Ciencias, por lo que se recomienda estar
al pendiente de las noticias de un comit formado ex
profeso.
Una legislacin demasiado restrictiva dejar a Mxico al margen de los avances teraputicos que segura-
130
mente se darn en pases que permitan las investigaciones, en detrimento de nuestro desarrollo mdico y
cientfico. Una legislacin demasiado permisiva podra
no ser aceptable para otros actores sociales del debate,
que tambin pretenden ser escuchados. La legislacin
mexicana debera autorizar las investigaciones por comits cientficos y ticos que garanticen su calidad cientfica y su buen procedimiento, as como el requisito de
una carta de consentimiento informado de los padres
biolgicos a quienes pertenecen los embriones mantenidos en almacenamiento. En este sentido podra ser semejante a la aprobada por varios pases europeos.
Se entiende la clonacin como cualquier proceso del
cual resulte la creacin de una copia gentica idntica
o cercana a lo idntico de una molcula de DNA, clula,
planta, animal o ser humano o, en otras palabras, el proceso de produccin de organismos genticamente
idnticos. La clonacin ocurre de manera natural y los
gemelos idnticos son el ejemplo clsico de este evento;
sin embargo, la clonacin que nos interesa es aqulla
que puede ser generada en el laboratorio utilizando
embriones humanos que podran dar origen a seres
humanos. Desde el punto de vista del Derecho, la clonacin humana con fines reproductivos prcticamente no
tiene partidarios y est prohibida y condenada en todo
el mundo. El documento internacional que hace patente
ese rechazo es la Declaracin Universal de la UNESCO
de 1997, que prohbe expresamente un tipo de clonacin
humana, la que pudiera realizarse con fines reproductivos. Por otro lado, se debate intensamente respecto a la
legitimidad de la clonacin teraputica, la cual tiene
como objetivo obtener clulas madre genticamente
idnticas a las de un paciente, a fin de utilizarlas en su
curacin, aunque para su obtencin se requiera utilizar
un embrin.
La investigacin con clulas madre embrionarias se
encuentra en el centro del debate tico debido a que, por
un lado, stas tienen un enorme potencial para reemplazar clulas, crear y regenerar cualquier tejido, as como
establecer terapias para tratar diversas enfermedades y,
por el otro, porque su obtencin requiere que se emplee
un embrin. Clonar es una accin reproductiva, independientemente del fin que se le d al producto de tal
reproduccin, como ocurre en la clonacin teraputica,
o dejarlo crecer y nacer, como sucede en el caso de la
clonacin reproductora. Mxico se ha mantenido al
margen de reglamentar expresamente sobre este tema,
ya que ni en la Ley General de Salud ni en las disposiciones reglamentarias se hace mencin del proceso de la
clonacin en ninguna de sus facetas.
El 2 de diciembre de 2003 la Cmara de Diputados
aprob la minuta con proyecto de decreto por la que se
(Captulo 5)
adiciona una fraccin V al artculo 5_, y un artculo 7_

bis al Captulo I del Ttulo Segundo de la Ley de los Institutos Nacionales de Salud, turnndose para sus efectos
constitucionales a la Cmara de Senadores. A travs de
este proyecto se creaba el Instituto Nacional de Medicina Genmica, y el artculo 7_ bis estableca lo siguiente:
Artculo 7_ bis. El Instituto Nacional de Medicina
Genmica tendr las siguientes atribuciones:
I. Realizar estudios e investigaciones clnicas, epidemiolgicas, experimentales, de desarrollo tecnolgico
y bsicas en las reas de su especialidad, para la comprensin, prevencin, diagnstico y tratamiento de las
enfermedades, rehabilitacin de los afectados, as como
promover medidas de salud, y en ningn caso podrn
ser sujetos de investigacin las clulas madre humanas
de embriones vivos, o aqullas obtenidas por trasplante
nuclear.
La aprobacin de esta minuta constituye el primer intento en Mxico para regular la clonacin teraputica.
Pero de la revisin de este proyecto por parte de la
Cmara de Senadores result la eliminacin de la ltima
parte de este precepto legal. Los senadores integrantes
de las Comisiones Unidas de Salud y Seguridad Social,
de Ciencia y Tecnologa y de Estudios Legislativos del
Senado eliminaron esta parte con el siguiente argumento: La medicina genmica no tiene que ver con la
clonacin humana, con la manipulacin de embriones,
con la manipulacin de clulas madre ni con la reproduccin asistida. Es por ello que se considera necesario
retirar del proyecto original de la minuta turnada por la
H. Cmara de Diputados la redaccin establecida en la
ltima parte del inciso primero del artculo 7_ bis de la
Ley de los Institutos Nacionales de Salud. De las
tareas pendientes del Poder Legislativo est el generar
un marco jurdico que permita el respeto a los individuos
a decidir conocer o no su propia informacin genmica.
Suprimida la prohibicin con base en estos argumentos, es claro que el Poder Legislativo dej para un mejor
momento la regulacin de la clonacin, por lo que Mxico sigue siendo parte del grupo de pases que no tienen
una legislacin especfica al respecto. En palabras de la
doctora Marcia Muoz, del Instituto de Investigaciones
Jurdicas: La ausencia absoluta de normas sobre la clonacin les ha concedido a estos pases el adjetivo de
parasos genticos, por la posibilidad de realizar la clonacin reproductiva.
Ante este vaco jurdico, los diputados y senadores
del Partido Accin Nacional sometieron una iniciativa
para adicionar los artculos 100Bis y 100Ter y reformar el artculo 465 de la Ley General de Salud, para prohibir la clonacin humana en todas sus formas, inicia-

tiva que fue turnada a las Comisiones de Salud y de
Ciencia y Tecnologa de la Cmara de Diputados el 30
de junio de 2004, la cual establece lo siguiente:
Artculo nico. Se adiciona un artculo 100 Bis y
100 Ter y se reforma el artculo 465 de la Ley General
de Salud, para quedar como sigue:
Artculo 100Bis. Queda prohibida la investigacin,
manipulacin o intervencin que tenga como fin realizar
cualquier tipo y forma de clonacin humana, as como la
importacin de productos derivados de la misma.
Se entender por clonacin humana: la reproduccin
asexual a travs de la introduccin de material nuclear
de una clula somtica humana dentro de un ovocito fertilizado o sin fertilizar cuyo ncleo haya sido removido
o inactivado para producir un organismo vivo en cualquier etapa de su desarrollo.
Artculo 100Ter. Se prohbe la creacin de embriones o clulas activadas por cualquier tecnologa, independientemente de la etapa del proceso embrionario humano, que combine de cualquier manera genes de
especies diferentes a la humana.
Artculo 465. Al profesional, tcnico o auxiliar de las
disciplinas para la salud y, en general, a toda persona
relacionada con la prctica mdica que realice actos de
investigacin, manipulacin o intervencin clnica en
seres humanos sin sujetarse a lo previsto en el Ttulo
Quinto de esta ley se le impondr prisin de uno a ocho
aos, suspensin en el ejercicio profesional de uno a tres
aos y multa por el equivalente de cien a dos mil das de
salario mnimo general vigente en la zona econmica de
que se trate. Si la conducta se lleva a cabo con menores,
incapacitados, ancianos, sujetos privados de libertad o,
en general, con personas que por cualquier circunstancia no pudieran resistirse, la pena que fija el prrafo
anterior se aumentar hasta en un tanto ms.
Esta iniciativa sin duda alguna abrir nuevamente las
puertas del debate que sobre la clonacin humana se inici con anterioridad. Cabe recordar que la comunidad
cientfica se haba pronunciado al respecto, emitiendo
sus opiniones: Francisco Bolvar Zapata advierte sobre
el riesgo de inhibir el desarrollo de la ciencia mdica y
la biotecnologa en Mxico si se legisla de manera parcial y miope en materia de clonacin, sin considerar el
potencial extraordinario de esta tecnologa para la solucin de muchos problemas. Para Fernando Cano Valle
es importante retomar posturas que permitan aclarar los
diversos fines con que la clonacin surge y se mantiene.
Asegura que cientficos y legisladores se pronuncian
por la prohibicin o la moratoria indefinida para la
investigacin en clonacin no reproductiva. En palabras de Patricia Ostrosky, es evidente que existen diferentes opiniones acerca de en qu momento se inicia la
131
vida de un ser humano y del uso de las lneas celulares

tronco embrionarias. Sin embargo, ante todos los beneficios potenciales, cabe la pregunta: cun tico es no
utilizarlas?
Ruy Prez Tamayo seala que una prohibicin como
sta pone en riesgo el futuro de la investigacin en Mxico en esta rea, pues representa una lnea de investigacin potencial y extraordinariamente rica y, una vez
ms, nos vamos a quedar a la zaga de los avances que
se vayan a producir. Por ltimo, Luis de la Barreda
Solrzano considera que no debemos renunciar a seguir
avanzando en la ruta de la mejora de la salud y de la
calidad de vida de nuestra especie, ni nos debe paralizar
el temor a lo desconocido, pues afrontando lo ignoto hemos logrado portentos cientficos que nos han beneficiado considerablemente. Pero es preciso que cada paso
sea racional.
Con el propsito de proporcionar a los diputados informacin cientfica confiable sobre las implicaciones
para la salud que tienen la medicina genmica y la experimentacin con clulas madre, investigadores de diversas instituciones acudieron a la Cmara de Diputados.
Mara Teresa Tusi, investigadora de Biomdicas y jefa
de la Unidad Perifrica de Biologa Molecular y Medicina Genmica del Instituto Nacional de Ciencias Mdicas y Nutricin Salvador Zubirn, precis que este
tipo de estudios posibilita el desarrollo de terapias ms
adecuadas para el tratamiento de enfermedades tan importantes como la diabetes, padecimiento que en la actualidad afecta a 8 millones de mexicanos.
Al hablar acerca de esta enfermedad, producida por
un mal funcionamiento del pncreas, indic que constituye un verdadero problema de salud mundial, y uno de
los mtodos para combatirla es mediante el conocimiento de los genes que predisponen a la enfermedad,
as como a travs de la regeneracin de clulas pancreticas (islotes de Langerhans) productoras de insulina.
Los cientficos coincidieron en que el trabajo con clulas madre est pasando por un momento clave en el
mundo y Mxico puede colocarse al mismo nivel que
los pases desarrollados, ya que se trata de un campo relativamente nuevo, con implicaciones muy importantes en
la teraputica y la medicina predictiva y preventiva.
Durante la Convencin Internacional de la Organizacin de las Naciones Unidas, celebrada en 2007 para
discutir la conveniencia o no de permitir la clonacin
humana, se hizo evidente que los delegados en ese organismo estn lejos de representar la opinin de la mayora de los habitantes de sus pases, y su opinin depende
de instrucciones gubernamentales o, en el caso de los
pases ms pobres con gobiernos errticos, la opinin
que expresan es a titulo puramente personal.
132
Los representantes occidentales del llamado Primer

Mundo de ninguna manera forman un frente comn.
Los pases latinoamericanos tampoco se distinguieron
por su unidad de principios e hicieron gala de sus diferencias. No es extrao que el resto de pases de Asia y
frica con las tres cuartas partes de la humanidad y
su diversidad cultural tambin sostuvieran posiciones encontradas.
Los debates se traducen simultneamente a tres idiomas: ingls, francs y espaol, de manera que si algn
delegado no comprende con claridad al menos alguno
de esos tres idiomas, o si habla un idioma raro y difcil
de traducir, queda mal comunicado y puede introducir
confusin en los debates.
Es obvio que en el contexto internacional actual, nadie en su sano juicio va a defender pblicamente la posibilidad de traer a este mundo bebs nacidos empleando
tcnicas de clonacin. El horror instintivo ante la posibilidad de que la biotecnologa llegue a cambiar nuestra
reproduccin sexual por una manera de reproduccin
asexual totalmente ajena a nuestra imagen histrica unifica el rechazo. Algunos representantes de pases industrializados se vieron relativamente magnnimos al apoyar e incluso exhortar a los dems pases a prohibir la
clonacin reproductiva en sus territorios.
El no ver todava una clara ventaja econmica para
llevar a cabo la clonacin reproductiva y conservar el
nmero de sus temerosos votantes explica la posicin
del gobierno estadounidense al frente del grupo ms
conservador. Otros pases industrializados, como el
Reino Unido, Francia y Alemania, asumen una postura
cautelosa y prefieren mantener una moratoria a la clonacin reproductiva hasta que se tengan ms y mejores
elementos cientficos y ticos que permitan reconsiderar la prohibicin en un futuro no muy lejano. Evidentemente, los pases industrializados seran los exportadores
de la tecnologa requerida y sus principales beneficiarios.
Las industrias biotecnolgicas son transnacionales
con matrices en el Primer Mundo y no es difcil predecir
que tendran capacidad para vender el equipo y los reactivos necesarios a clnicas de clonacin reproductiva si
el negocio resultara lucrativo y no hubiera objeciones
legales para implementar aqulla dentro y fuera de su territorio. Toda manipulacin biotecnolgica implica un
riesgo y aunque la clonacin humana nos preocupa ms,
los efectos a largo plazo sobre la naturaleza no implican
mayor riesgo biolgico que otras tcnicas biotecnolgicas que ya se estn utilizando y que son motivo de enconadas discusiones. Al haber unanimidad en acordar la
prohibicin de la clonacin reproductiva, pareca que la
conferencia de Nueva York haba tenido xito, justificando as el gasto que, al menos para los pases ms po-
(Captulo 5)
bres, implica el enviar delegados hasta esa lejana ciudad.

Sin embargo, surgi el fantasma de la llamada clonacin teraputica. Con la oveja Dolly se abri la posibilidad de utilizar el citoplasma del ovocito para reprogramar el genoma (conjunto de genes) de un paciente
y clonar no una rplica del individuo, como en la clonacin reproductiva, sino clulas pluripotentes con copias
del genoma del mismo paciente que en teora no seran
rechazadas al serle trasplantadas. En principio, el valor
teraputico de esta tcnica sera el contar con clulas
ideales para reemplazar tejidos que, por haber sido destruidos, no podran autorregenerarse, como sucede en
lesiones al sistema nervioso central y al corazn, y en
algunos padecimientos degenerativos como la diabetes
tipo 2, la enfermedad de Parkinson, el Alzheimer, etc.
Debido a que la manipulacin para llevar a cabo la
clonacin teraputica es la misma que para iniciar la
clonacin reproductiva, se desencaden una acalorada
discusin entre los delegados: por un lado el grupo encabezado por las delegaciones francesa y alemana,
quienes proponen prohibir la clonacin reproductiva
pero dejar que cada pas legisle sobre la clonacin teraputica, y, por el otro, aquellos delegados empeados en
una prohibicin a nivel internacional de cualquier modalidad de clonacin humana. En este grupo destacaron
los delegados de EUA y Espaa.
Los argumentos de los fervientes defensores de la
prohibicin total se basaban esencialmente en dos frentes: los que argumentan que permitir la clonacin teraputica es abrir la puerta a la clonacin reproductiva y
los que afirman con argumentos morales o religiosos
que el embrin humano es sagrado y nada justifica su
uso con fines experimentales. Desde luego que cuando
se trata de argumentos morales, basados en concepciones religiosas o filosficas, la discusin entre lo que
debe o no debe permitirse corre el riesgo de ser interminable y suele concluir con un apretado consenso que a
muchos dejar insatisfechos.
En la conferencia especial de la ONU se entr durante cinco das en un ciclo de argumentos a favor o en contra de la prohibicin de la clonacin teraputica y desgraciadamente no se logr el consenso. El acuerdo
unnime para prohibir la clonacin reproductiva fue
neutralizado por el desacuerdo sobre la clonacin teraputica y finalmente se propuso continuar la discusin
en una conferencia futura. Como la mayora de los pases todava carecen de una legislacin sobre la clonacin humana y los intentos de mdicos poco escrupulosos para llevarla a cabo son reales, el resultado de la
conferencia de septiembre fue lamentable. La propuesta
francoalemana fue sin duda la ms razonable y resulta
difcil entender la posicin de todo o nada asumida

por varias delegaciones. Ms all de los motivos prcticos y lucrativos que condujeron a la clonacin de Dolly,
es evidente que la posibilidad de emplear una tecnologa
similar para clonar humanos ha desencadenado de
nuevo una discusin semejante a la provocada por Darwin y Wallace en el siglo XIX. Hasta qu lmites somos
los humanos cualitativamente diferentes de otras especies? A partir de qu etapa del desarrollo es ya un ser
humano el embrin? Existen diferencias cualitativas
entre ovocitos, embriones, fetos y nios?
Francisco Bolvar Zapata, investigador del Instituto
de Biotecnologa (IBT) y recientemente nombrado
miembro de la Junta de Gobierno de la UNAM, advirti
del riesgo de inhibir el desarrollo de la ciencia mdica
y la biotecnologa en Mxico si se legisla de manera parcial y miope en materia de clonacin, sin considerar el
potencial extraordinario de esta tecnologa para la solucin de muchos problemas. Consider que la legislacin debe contemplar el fomento a la investigacin
cientfica y a la ciencia, y se pronunci por la participacin de la sociedad en la discusin del uso de las tcnicas de ingeniera gentica para desarrollar organismos
transgnicos, que est ligada al uso de las tcnicas de
ingeniera celular para el desarrollo de la clonacin
celular con propsitos teraputicos.
La clonacin humana est prohibida, pero las tcnicas de clonacin celular deben permitirse... estarn
siempre con nosotros y lo importante es sealar qu
experimentos son adecuados, cules no deben permitirse y qu reglamentacin desarrollar en este sentido,
porque lo importante es no frenar el desarrollo de la
ciencia mdica y la biotecnologa, cuyo potencial es
extraordinario, puntualiz.
Durante su participacin en el coloquio Derecho y
Medicina en 2007, organizado por el Instituto de Investigaciones Jurdicas y la Coordinacin de los Institutos
Nacionales de Salud de la Secretara del Ramo en torno
a la clonacin humana, seal que con la revolucin
biolgica que estamos viviendo, a diferencia de lo que
ocurra hace algunos aos, el conocimiento cientfico
afecta con rapidez la vida humana y en distintos mbitos, lo cual obliga a usar el conocimiento de manera responsable y a sealar los lmites para experimentos que
representan an riesgos muy elevados.
Cientficos y legisladores se pronuncian por la prohibicin o la moratoria indefinida para la investigacin en
clonacin no reproductiva, que se ve como una esperanza de vida para personas con enfermedades genticas,
para desarrollar nuevos frmacos y disminuir el dficit
de rganos para trasplantes con menos riesgo al rechazo. Lo importante es cmo reprogramar clulas adultas
sin clonacin y sin usar embriones para formar tejidos.
133
Estas clulas tienen un enorme potencial para reemplazar clulas, crear y regenerar cualquier tejido, y establecer terapias para tratar diversas enfermedades. Las
lneas celulares tronco embrionarias (LESC) se obtienen
a partir de las clulas que forman la masa interna del blastocisto (estado que dura del cuarto al sptimo da despus
de la fertilizacin del vulo por el espermatozoide), pueden extraerse y cultivarse en el laboratorio para dar origen a otras que, dependiendo de las condiciones, pueden
proliferar in vitro ilimitadamente o diferenciarse en cualquier tipo de clula. Pero ya no pueden formar un embrin y, en contraste con las clulas de los primeros estadios, se les considera slo pluripotenciales.
Conociendo lo que pasa en los sistemas de lneas de
clulas tronco embrionarias (LESC), ms que todos los
tejidos que puedan crearse, lo ms importante ser conocer los mecanismos que regulan esta plasticidad gentica, pues posiblemente tendr ms aplicaciones que
la de trasplante de tejidos, ya que nos permitir manipular las clulas madre que tiene el individuo adulto.
Las LESC pueden utilizarse para estudiar el proceso
de diferenciacin dirigida y contestar cmo se forman
los diferentes tipos celulares, cmo se equivocan y producen malformaciones y cmo conocer e identificar los
mecanismos de teratognesis y de alteraciones genticas y as evitarlos. El conocimiento de la biologa bsica
de la clula pluripotencial establecer el camino para
cientos de aplicaciones clnicas futuras y la creacin de
medicamentos que acten especficamente sobre los
genes para inducir la diferenciacin de las clulas madre
del organismo. Los mtodos para obtener LESC son
poco efectivos; por ejemplo, en un estudio reportado el
ao pasado, 162 vulos donados por 12 voluntarias se
pudieron fertilizar; 50 llegaron al estado de blastocisto
y slo se establecieron 3 LESC.
Aunque la creacin e investigacin de LESC est prohibida en Austria, Francia, Alemania, Irlanda y Noruega,
se permite en Dinamarca, Finlandia, Hungra, Espaa,
Suecia e Inglaterra. En EUA se aprob el financiamiento
con fondos federales slo para la investigacin con las 64
LCE ya existentes, pero se prohibi la creacin de nuevas y cualquier investigacin con embriones humanos.
Las clulas embrionarias representan por su naturaleza la mejor opcin clnica para los pacientes, dado que
poseen el mayor potencial de desarrollo de cualquiera
de las clulas tronco, y adems el establecimiento de
LESC permitir estudiar la biologa bsica de la clula
troncal y los mecanismos de control que en un futuro
cercano lograrn modular la diferenciacin de las clulas troncales en el paciente adulto que lo necesite. Es
evidente, coment, que existen diferentes opiniones
acerca de en qu momento se inicia la vida de un ser hu-
134
mano y del uso de LESC; sin embargo, ante todos los

beneficios potenciales, cabe la pregunta: cun tico es
no utilizarlas?
Por su parte, Luis Covarrubias Robles, del IBT, habl
de las clulas tronco, del control de los procesos regenerativos en mamferos y acerca de la relevancia de la clonacin como parte del proceso cientfico, la cual no
surge de manera espontnea con la finalidad de hacer
copias, quiz primero animales y despus humanas,
sino con un propsito cientfico: responder preguntas de
cmo se transmite la informacin gentica y, si acaso,
producir embriones nonatos para aplicarlos en la clonacin teraputica. Seal que el proceso de clonacin se
realiza ahora en diferentes organismos, como ovejas,
vacas, cerdos y ratones, a partir de clulas adultas, pero
a pesar de estos progresos es un proceso an ineficiente.
La clonacin teraputica es una fusin entre el desarrollo de las clulas troncales y el desarrollo de la clonacin, donde el objetivo de sta no es generar un individuo genticamente similar, sino producir clulas
troncales embrionarias que llevan la informacin gentica de donde provienen. Tambin podemos regenerar
tejidos a partir de clulas tronco especficas de un tejido
de adulto, como del sistema sanguneo en el caso de leucemia. El ponente argument que la clonacin teraputica es relevante porque existen varias clulas tronco
producidas a partir de tejido humano que in vitro muestran las mismas caractersticas que las clulas tronco
embrionarias de ratn, que tienen la amplia capacidad
para diferenciarse y, por lo tanto, son candidatos para
tratar ciertas enfermedades.
Por cuestiones no resueltas hay que hacer un reconocimiento y buscar el mejor provecho de la investigacin
de dichas clulas, pues se ha demostrado en animales que
las clulas troncales embrionarias son susceptibles de
desarrollar cncer. Por otra parte, an queda por analizar si los organismos clonados son sanos, pues la oveja
Dolly ya ha sufrido alteraciones y otros roedores afecciones inmunolgicas. Aunque la clonacin humana
con fines reproductivos no se ha logrado, la sociedad y
la comunidad cientfica la rechazan, pues an falta mucho por hacer y tal vez sea imposible, concluy.
Manuel Ruiz de Chvez, de la Coordinacin de los
INS, se pronunci por permitir la clonacin de clulas
madre con fines teraputicos. Debe permitirse clonarlas para generar tejidos tiles; crear rganos para reemplazar los daados.
Cabe sealar que este coloquio se dio en el marco de
un convenio de colaboracin establecido entre la Coordinacin de los INS y el Instituto de Investigaciones
Jurdicas para el intercambio acadmico vinculado al
desarrollo de la gentica moderna, a la investigacin y
(Captulo 5)
la formacin de recursos humanos de mxima especialidad en el campo y al anlisis de la aplicacin de los

avances cientficos en la atencin de los problemas de
salud que aquejan a la poblacin, y que requieren una
moderna regulacin de acuerdo con los pronunciamientos y la idiosincrasia de la sociedad mexicana y conforme a lo que legisle el Congreso de la Unin.
En Inglaterra, una comisin de la Cmara de los Lores determin que la clonacin humana debe permitirse
bajo estrictas condiciones, lo que permite ahora que
cientficos de ese pas inicien la clonacin de embriones
humanos para la investigacin enfocada al tratamiento
de enfermedades y se establezca el primer banco de
clulas embrionarias en el mundo. La resolucin de la
Comisin fue ampliamente apoyada por la Asociacin
Mdica Britnica. Por otra parte, en EUA, el presidente
George W. Bush inst al Senado de su pas a seguir el
ejemplo de la Cmara Baja del Congreso y votar por la
prohibicin total de los estudios sobre la clonacin
humana. En julio pasado la Cmara de Representantes
del Congreso de EUA aprob un proyecto de ley en el
que se prohbe la produccin de todos los embriones que
sean genticamente idnticos a los de un donador. Muchos en el Senado estadounidense se oponen a usar la
clonacin para crear seres humanos, aunque existe apoyo para la denominada clonacin teraputica, que desarrolla embriones de clulas madre para utilizarlos en
la investigacin de potenciales tratamientos de enfermedades. El Senado est considerando dos proyectos:
uno que prohbe toda investigacin de clonacin humana y otro que prohbe la clonacin reproductiva, pero
permite la clonacin teraputica.
En el ao 2003 el presidente de la Academia Nacional de Medicina (ANM) seal que se debe alentar en
Mxico la clonacin teraputica: clonar para generar tejidos tiles, para hacer crecer nuevos vasos sanguneos
en un corazn afectado, para crear rganos que puedan
reemplazar a los que estn daados, debe ser permitido
y su desarrollo alentarse, no inhibirse, asegur Juan
Ramn de la Fuente, presidente de la Academia Nacional de Medicina en el ao 2003, al inaugurar el ao acadmico 139 de este organismo, en una ceremonia presidida por el Primer Mandatario de la Nacin, Vicente
Fox. Consider que en Mxico, para dar inicio al siglo
XXI, debe permitirse la prctica de algunos tipos de clonacin, pues sus mtodos representan un avance cientfico importante que el pas debe alentar. La posibilidad
de reparar rganos enfermos mediante su regeneracin
biolgica, dijo, representa un formidable avance. Lamentablemente, ms por ignorancia que por mala fe, se
ha desatado una tempestad absurda en torno a la clonacin teraputica, que es distinta a la reproductiva. Al

afirmar que la ciencia es nuestra aliada, no nuestra
adversaria, precis que habr que seguir afinando los
aspectos ticos y legales que permitan un marco adecuado para la operacin correcta de los desarrollos en materia de clonacin. Asimismo, advirti que frenar este
proyecto aduciendo razones econmicas sera un gran
error cuyo costo mucho ms elevado habrn de pagar las
prximas generaciones de mexicanos. El doctor De la
Fuente se refiri tambin a los avances logrados para la
obtencin de nuevos frmacos provenientes del estudio
cada vez ms sistematizado de los genes o de las protenas que de ellos se derivan, los cuales empiezan a mostrar sus beneficios extraordinarios. Se trata de frmacos
ms seguros, poderosos y selectivos, aunque tambin
ms costosos, lo cual constituye un problema serio pero,
so pena de quedar sepultada para siempre en el rezago,
la medicina nunca ms podr ignorar a la biologa molecular. Nada ha sido ni ser tan trascendente como el
desarrollo de las nuevas disciplinas emanadas de la biologa molecular. En este mismo acto, el presidente Fox
asegur a los miembros de la Academia Mexicana de
Ciencias (AMC) que interesaba a su gobierno analizar
temas que afectan al bienestar del pas y del mundo,
como el bioterrorismo y las adicciones, y los invit a
participar en el anlisis del efecto de los programas sociales, as como de las consecuencias ticas de la investigacin mdica y las relaciones entre Medicina y Derecho. Antes de declarar inaugurado el ao acadmico
reconoci la labor de la ANM como pilar de la medicina
en Mxico por promover la investigacin, difusin y
aplicacin del conocimiento, de acuerdo con los criterios ms rigurosos y en apego a valores ticos.
A partir de la clonacin de la oveja Dolly en Escocia
se desencaden una verdadera avalancha de informacin en los medios masivos de comunicacin. Como resultado, la opinin pblica de los pases industrializados
presion a sus gobiernos para legislar sobre el peligro
potencial que implica el desarrollo de una tecnologa
que eventualmente lleve a la clonacin de seres humanos. As, con algunas variantes en la forma, Inglaterra,
la Comunidad Europea, EUA, Canad y Japn prohibieron la clonacin humana con fines reproductivos,
centrando el debate en la imposicin o no de restricciones a la investigacin que pudiera conducir a la clonacin con fines teraputicos en humanos. La importancia
mdica de investigar en esta rea se relaciona con la
posibilidad de obtener clulas pluripotenciales genticamente idnticas al paciente que requiere reemplazar
tejidos irreversiblemente daados. En teora, se podra
tomar el ncleo de una clula del paciente y trasplantarlo al vulo enucleado (sin su dotacin gentica) de
una mujer donadora y permitir que inicie su desarrollo
135
en el laboratorio hasta formar un complejo multicelular

(etapas de mrula o blastocisto, previas a su implantacin en el tero o matriz). Disociando estas primeras
clulas, se podran mantener proliferando y una vez
establecidas las condiciones para conducir su diferenciacin hacia los tejidos que se requiriera reemplazar,
podran trasplantarse sin peligro de rechazo inmunolgico, ya que su genoma nuclear sera igual al del paciente en cuestin.
Sin embargo, quedan todava muchos problemas por
resolver antes de intentar llevar a cabo experimentos de
clonacin teraputica. Las condiciones para conducir
a esas primeras clulas embrionarias hacia su diferenciacin de manera controlada todava se desconocen.
Experimentos clsicos de embriologa demostraron que
la mayora de las clulas embrionarias pierden gradualmente su pluripotencialidad conforme avanza el desarrollo y siguen caminos conducentes a su diferenciacin
como clulas especializadas (neuronas, fibras musculares, fibroblastos, etc.). Otras clulas, en cambio, conservan cierto rango de pluripotencia y dan origen a diversos tipos celulares aun en el individuo adulto. A estas
clulas se las ha denominado en castellano clulas
tronco o precursoras (stem en ingls).
Un ejemplo est en las clulas precursoras del cerebro. Aunque durante mucho tiempo se estableci que
las neuronas de la corteza cerebral adulta eran irreemplazables, en 1988 lvarezBuylla (Arturo lvarez
Buylla es un alumno egresado de la licenciatura de Investigacin Biomdica Bsica del IIB, UNAM) y
Nottebohm29 demostraron que grupos de neuronas se
regeneran peridicamente en aves adultas. Cuatro aos
despus, Lois y lvarezBuylla30 demostraron que lo
mismo ocurre en el cerebro de mamferos. Estos trabajos pioneros sobre la existencia de clulas madre en
el cerebro abrieron un nuevo paradigma en la plasticidad del sistema nervioso y su posible aplicacin clnica.
Entre los ms espectaculares estn los resultados obtenidos por Clarke y col.,31 quienes encontraron que las
clulas madre del ratn identificadas por el grupo de
lvarezBuylla conservan la potencialidad para diferenciarse no slo en neuronas, sino tambin en mltiples linajes celulares, como fibras musculares esquelticas y cardiacas, epitelio pulmonar e intestinal, etc.
Otros investigadores han demostrado la capacidad de
las clulas de la mdula sea (que normalmente dan origen a clulas sanguneas) para diferenciarse como neuronas o en vasos que irrigan al corazn. Estos y algunos
29.
30.
31.
Nature 335:353354.
Proc Natl Acad Sci 90:20742077.
Science 2000;288:16601663.
136
manas para investigacin. Los que estn a favor y pertenecen a la comunidad cientfica consideran que resulta
muy limitante restringir la investigacin al uso de las
lneas celulares que cumplen la normatividad aprobada.
Todava se desconoce con precisin el grado de pluripotencia de esas clulas que fueron obtenidas con diversas
metodologas y mantenidas con duracin y condiciones
tambin diversas.
As, proponen la discusin de una legislacin tendiente a permitir el establecimiento de nuevas lneas
derivadas de embriones humanos preimplantados con el
fin de conocer mejor las condiciones ptimas que garanticen su pluripotencia. Por otra parte, el grupo que se
opone a cualquier tipo de manipulacin de clulas embrionarias humanas pertenece en su mayora a comunidades religiosas y sus argumentos giran en torno al valor
sagrado de la vida humana en cualquiera de sus etapas
durante el desarrollo embrionario.
Obviamente, la legislacin recin aprobada en EUA
implica necesariamente el uso de clulas embrionarias
humanas, y el hecho de que no permita obtener nuevas
lneas de clulas madre de embriones obtenidos despus
del 9 de agosto de 2001 no hace menos sagrado el origen
humano de las clulas para cuya investigacin ya existen fondos autorizados por el NIH.
Un tercer frente se ha agregado a la controversia sobre las clulas madre obtenidas de embriones humanos
preimplantados: el grupo que propone que dichas clulas pueden ser sustituidas por clulas madre obtenidas
de individuos adultos, con ello la actual controversia
quedara resuelta. Tomar clulas del paciente, manipularlas en el laboratorio y reintegrarlas al mismo paciente
otros hallazgos recientes se suman a la evidencia de que

hay clulas multipotentes en el individuo adulto capaces de regenerar clulas daadas de otros tejidos. Se reaviva as el debate sobre el empleo experimental de clulas stem obtenidas a partir de embriones preimplantados
que incluiran la clonacin teraputica.
Las legislaciones ms liberales estn en el Reino
Unido y en Japn, donde se aprob la investigacin empleando clulas madre embrionarias obtenidas de embriones humanos preimplantados bajo cierta normatividad. Entre otras normas estn el compromiso del
investigador de no intentar la clonacin con fines reproductivos y de que la mujer donadora apruebe el uso del
embrin con fines teraputicos. En EUA el presidente
Bush aprob financiar la investigacin de clulas madre embrionarias humanas, pero solamente con las lneas establecidas (antes del 9 de agosto de 2001) por
compaas privadas en EUA o generadas en otros pases
(Australia, Israel, la India y Suecia), siempre que renan
ciertos lineamientos, como que las clulas provengan de
embriones extra almacenados en clnicas de reproduccin asistida que hayan sido conservados despus de
que con uno de ellos se logr un embarazo; que los padres donadores hayan otorgado su aceptacin por escrito sobre el uso experimental del embrin (los embriones
preimplantados de reserva se mantienen congelados y
con el tiempo se destruyen), y que en ningn caso se
haya pagado a los padres donadores por el uso de los
embriones para obtener clulas stem.
La iniciativa del presidente Bush ha dejado insatisfechos a la mayora de los miembros de grupos que estn
a favor o en contra del uso de clulas embrionarias hu-
Ciencias bsicas
biomdicas
Observaciones
Biologa celular
u experimentos
in vitro
(Captulo 5)
Estudios clnicos
Fase I, II y III
Formulacin
de mecanismos
hiptesis y
Formulacin
teorias
de hiptesis y
teoras teraputicas
Observaciones
preclnicas
Mecanismos
+
Mecanismos
Resultados
Efectos adversos detectados

Figura 511. La terapia celular se encuentra actualmente en etapa clnica al alcance de cualquier persona y ha superado con xito
los estudios experimentales y preclnicos con animales, donde demostr su potencial efecto regenerativo/curativo.

en principio no implica la destruccin de un ser humano
potencial. Por lo tanto, el grupo que defiende la dignidad
o lo sagrado de la vida humana no se opone a esta lnea
de investigacin. Por otra parte, la obtencin de clulas
madre de adultos es menos complicada que la de las embrionarias y ofrece grandes posibilidades para su estudio.
Todava hay un largo camino por recorrer en la biologa
celular de las clulas madre, pero se sabe que los dos
tipos celulares tomados en diferentes etapas del desarrollo poseen una pluripotencia similar. ste es el principal
argumento de los investigadores que defienden la necesidad de explorar todas las posibilidades metodolgicas a
fin de fundamentar cientficamente la necesidad o no de
emplear clulas madre de embriones humanos preimplantados. De forma alentadora para la medicina clnica,
la terapia celular es ya una realidad despus de dcadas
de estudios preclnicos en animales (figura 511). Por
esta razn, se la considera la medicina del siglo XXI.
LA TERAPIA CELULAR CON CLULAS

MADRE, MEDICINA REGENERATIVA Y
ANTIENVEJECIMIENTO EN LA PRCTICA
MDICA
Con este nuevo enfoque de la medicina con miras a alcanzar el mximo beneficio de salud y longevidad a partir de los conocimientos de vanguardia disponible, muchos enfermos, familiares y personas sanas estn cada
da ms preocupados por preservar o incrementar un
buen estado de salud y muchos estn solicitando los servicios de atencin mdica que brinda la SITECEM (Sociedad Internacional de Terapia Celular con clulas
madre, Medicina Regenerativa y el antienvejecimiento
S. C., tel 22223000). Para ello se requiere solicitar
una consulta mdica previa en donde se valora el estado
de salud, analizando la posibilidad de que sea candidato
para recibir un tratamiento con base en terapia celular
con clulas madre, el cual es el nico tratamiento disponible que puede impactar en forma real o verdadera
sobre el envejecimiento biolgico y el estado de salud
de las personas. Y que quede claro que nunca podr
afectar al envejecimiento cronolgico (edad cumplida
en aos). Sin embargo, desde el punto de vista de calidad de vida y salud, es el envejecimiento biolgico el de
mayor trascendencia, ya que es factible de sufrir una
aceleracin o desaceleracin, la cual se refleja en el
grado de senescencia de las clulas que constituyen los
tejidos de los aparatos y sistemas del cuerpo humano. Si
137
bien hoy en da existen muchas terapias que tienen la

capacidad de modificar la apariencia fsica (medicina y
ciruga esttica errneamente considerada como medicina antienvejecimiento), externa, motivo por el cual
la seguridad y autoestima mejora, tienen un resultado
menos eficiente para mejorar el estado general de salud
y calidad de vida desde el interior del organismo, es decir, puede mejorar artificialmente el envejecimiento
cronolgico al engaar al ojo con la apariencia, pero el
envejecimiento biolgico pobremente se ve modificado, de manera que la insuficiencia cardiaca, renal, arterial, venosa, divertculos, disminucin de la memoria,
fuerza muscular, ereccin, libido, cataratas, atencin,
etc., y muchas funciones continuarn disminuyendo
gradualmente y debilitndose con el pasar de los aos;
obviamente el tiempo puede ser mayor o menor, y los
cambios en la aceleracin dependern de los estilos de
vida que habitualmente se tengan.
El envejecimiento biolgico es afectado por diversos
factores de riesgo, como estilos de vida inadecuados,
factores ambientales como la irradiacin solar y la contaminacin, carga gentica heredada de los padres, etc.
La sociedad actual est cada da ms interesada en mantener, preservar o recuperar la salud y con miras a alcanzar la longevidad. La terapia celular con clulas madre
impacta de forma muy satisfactoria, ya que los pacientes perciben la mejora de su estado de salud y calidad
de vida, motivo por el cual nos recomiendan con sus
conocidos para que acudan a solicitar nuestros servicios; sus testimonios y vivencias son nuestro mejor sistema de difusin. Los mejores resultados se observan en
aquellos pacientes en los que la evolucin de su enfermedad ha sido crnica, sobre todo en los que han recibido mltiples tratamiento, ya sea de ndole convencional, medicina alpata especializada, procedimientos
quirrgicos o de tipo alternativo, esotrico y holstico,
sin haber obtenido los resultados que pudieran satisfacer mnimas expectativas de mejora.
A pesar del gran auge cientfico y tecnolgico, todava los tratamientos mdicos y quirrgicos se hacen
insuficientes, por lo que los protocolos de terapia celular con clula madre desde un enfoque preventivo o
curativo se hacen cada da ms necesarios5 y estn indicados sobre todo en los padecimientos crnicodegenerativos y de ndole geritrica.
Otras enfermedades relacionadas con alteraciones
del sistema inmunitario tambin estn teniendo una tendencia al incremento: las rinitis alrgicas, el asma bronquial, las dermatitis atpicas y en especial el vitligo:
estn alcanzando cada vez ms los primeros lugares en
morbilidad. Por ejemplo, el vitligo ocupa del 2_ al 5_
lugar en las enfermedades que afectan a la piel, con una
138
incidencia internacional de 2%, afectando de manera

preferencial a las mujeres y a pacientes con otros padecimientos autoinmunitarios que se pueden asociar a enfermedades de las glndulas del sistema endocrino
como el pncreas (clulas B) y tiroides. Cabe sealar
adems que la incidencia ms alta para el vitligo se observa en tres pases: India, Japn y Mxico. Como
equipo mdico estamos siendo testigos presenciales de
los excelentes resultados que se obtienen al aplicar terapia celular con clulas madre en casos de enfermedades
incurables o con mala respuesta al tratamiento mdico;
es el caso del vitligo, alopecia areata, dermatitis atpica, psoriasis, etc., que adems han sido rebeldes al tratamiento dermatolgico. Nuestros pacientes estn presentando una gran mejora despus de haber recibido de
5 a 15 sesiones de terapia celular con clulas madre
diseadas en forma especfica para cada enfermedad.
Otros casos excepcionales son los pacientes que estn
presentando sorprendentes mejoras con el tratamiento
de clulas madre para regenerar los tejidos de los enfermos que presentan insuficiencia renal crnica, as como
los pacientes con dolores e inflamaciones crnicas de
tipo osteoarticular y en la columna vertebral, los cuales
son ocasionados por diversos padecimientos como son:
artrosis, osteoartritis, fibromialgia reumtica, artritis
reumatoide, lupus eritematoso sistmico y hernias discales; en todo ello est plenamente indicada y justificada la terapia celular con clulas madre.
Debido a que muchas de las enfermedades y padecimientos con alta incidencia son el resultado de estilos de
vida inadecuados y por tal motivo son susceptibles de
ser prevenidas, tambin ofrecemos cursos y servicios
integrales que incluyen terapias con enfoque biopsicosocial (biolgico, psicolgico y social) tendientes
a modificar y mejorar estilos de vida hacindolos ms
saludable para aumentar el periodo e intensidad en la
regeneracin y antienvejecimiento celular alcanzado
con la terapia celular con clulas madre. Estn diseados para que tanto los pacientes tratados, como sus familiares y personas interesadas incrementen su calidad
de vida y estado de salud en todos los aspectos. En nuestras consultas, asesoras, conferencias, cursos y diplomados ayudamos a las personas en general a estudiar,
aprender y ensear sobre los procesos de envejecimiento y regeneracin biolgica, respondiendo a preguntas
frecuentes como: Qu son y cmo actan las clulas
madre en nuestro cuerpo?, por qu se escucha tanto en
las noticias acerca de clulas madre?, cul es el efecto
que tiene la terapia celular con clulas madre?, cules
son los trabajos cientficos que apoyan las terapias con
base en clulas madre? Qu es lo que sucede con las
clulas madre que llegan a nuestro cuerpo? Por qu es
(Captulo 5)
tan segura la tcnica que desarrollamos de terapia celular con clulas madre? Por qu no es posible que las clulas madre que empleamos para nuestros procedimientos de terapia celular con clulas madre nos lleven a
aberraciones como el cncer o infecciones de transmisin sangunea?, cmo puedo ayudar a incrementar la
regeneracin y duracin de clulas madre en mi circulacin aumentando y manteniendo una salud ptima?
Puedo tomar medicinas mientras estoy recibiendo la
terapia celular con clulas madre? Se puede tratar a
nios con terapia celular con clulas madre? En conclusin, se explican las bases cientficas que fundamentan
nuestros procedimientos de terapia celular con clulas
madre, y cmo podemos ayudar a las clulas madre en
sus funciones de regeneracin, procurando en la medida
de lo posible la longevidad y la sanidad de las enfermedades, reforzando en forma complementaria con la adquisicin de mejores hbitos higinicosalimenticios y
estilos de vida ms saludables que las protegen y alargan su vida media en nuestro cuerpo.
La importancia de la terapia celular con clulas
madre, medicina regenerativa y el antienvejecimiento
radica en que la gran mayora de los padecimientos y
enfermedades que hasta ahora han sido catalogados por
la medicina en nmero aproximado de 30 000, muchas
de ellas no pueden ser prevenidas, ya que su origen y
mecanismo de produccin es todava motivo de investigacin cientfica y los tratamientos disponibles que se
conocen slo son efectivos en 30% de ellas. Por lo anterior los grandes esfuerzos de las ciencias biomdicas
han fructificado con el desarrollo de tratamientos, medicamentos y procedimientos mdicoquirrgicos,
siendo el ms grande conocido como la teraputica del
siglo XXI, la de clulas madre.
La carencia de tratamientos adecuados para la gran
mayora de las enfermedades ha llevado a los mdicos
y cientficos de todo el mundo, a buscar nuevas estrategias, el nuevo paradigma de la medicina es la regeneracin de las clulas y el antienvejecimiento: cmo podemos reparar los tejidos? Y de esta forma se procura la
sanidad y la longevidad de las personas. Durante los
principios de este siglo XXI se estn sustentando las
bases que estn desplegando un gran desarrollo y expansin a escala mundial; la terapia celular, las clulas
madre, la medicina regenerativa y el antienvejecimiento; todos ellos son los principales campos de accin de nuestra sociedad, la cual surge como parte del
esfuerzo cientfico internacional, y para poner en prctica y difundir el cmulo de descubrimientos cientficos, clnicos y experimentales que estn surgiendo en
torno a las clulas madre (stem cells), los avances en el
diagnstico y tratamiento de las enfermedades y los

trastornos y padecimientos que se asociacin con el envejecimiento de las poblaciones, como son: Parkinson,
Alzheimer, diabetes mellitus, cardiopatas, esclerosis
mltiple, artritis, artrosis, osteoartritis, hernias discales,
cncer, enfermedades de la sangre y del sistema inmunitario, etc.
A mediados de 1990, los cientficos de Inglaterra y
EUA hicieron crecer las primeras clulas madre humanas pluripotenciales in vitro, en cajas Petri. Rpidamente otros cientficos en diversas puntos del orbe
tuvieron xito en hacerlas crecer por muchas generaciones y se ha logrado ocasionar su diferenciacin en prcticamente cualquier tipo de clulas, por ejemplo neuronas y gla (clulas del cerebro), miocitos (clulas del
corazn y del msculo), hepatocitos (clulas del hgado), etc. Posteriormente otros grupos de cientficos lograron hacer crecer clulas madre multipotenciales provenientes de la mdula sea y del cordn umbilical
(clulas madre adultas). En un principio el esfuerzo no
tuvo tanto xito, dado que es difcil cultivar este tipo de
clulas madre in vitro por un nmero determinado de
generaciones. Esto condujo a la idea de que las clulas
madre que se haban asilado primeramente de la masa
celular interna del blastocisto tienen mayor potencial
que las clulas madre adultas, ya que son inmortales y
no tienen lmite determinado de generaciones para su
cultivo in vitro. Sin embargo, descubrimientos en los ltimos aos, estn estableciendo que las clulas madre
pluripotenciales y multipotenciales tienen una capacidad comparable para la terapia celular y la medicina
regenerativa.
Muchos estudios cientficos serios han demostrado
que la liberacin de las clulas madre en el torrente sanguneo puede llevar a una salud ptima; los estudios de
Orlic en la biblioteca de NIH y el de Werner y col. concluyen el efecto de mejora con clulas madre en circulacin. A travs del trabajo de Krause se pudo ver que
las clulas madre se convirtieron en clulas funcionales
de la piel, el hgado, colon, intestino, estmago, esfago, riones y pulmones. Segn se ha documentado,
las clulas madre pueden convertirse en clulas del
cerebro, clulas del corazn, clulas del msculo, clulas del pncreas, prcticamente cualquier tipo de clula
en el cuerpo. Esto ha dado origen a la teora de la generacin con clulas madre la cual sustenta que: cuando
las clulas madre son liberadas en la circulacin provenientes de diversos reservorios y migran por el torrente
circulatorio, finalmente van a sustituir o renovar a
aquellas clulas que tienen mayor necesidad de regeneracin o reemplazo. Es el fenmeno de tropismo, que se
refiere al fenmeno de migracin que ocurre cuando las
clulas madre se encuentran en la circulacin y alcanzan
139
el sitio daado o enfermo. Este fenmeno fundamenta

la terapia celular con clulas madre, el cual ocurre debido a que, cuando un rgano est sujeto a estrs o dao,
este rgano dispara molculas con actividad biolgica
que emiten una seal para que las clulas madre liberadas en el torrente circulatorio acudan a regenerar o sanar
el tejido enfermo o lesionado. El rgano lesionado tambin lanza compuestos que favorecen la proliferacin y
diferenciacin de las clulas madre para que se transformen en el tipo de clula especializada que requiere ese
rgano en particular para ser sanado. Entonces las clulas madre que fueron liberadas de la inyeccin siguen el
camino de la concentracin de esos compuestos y dejan
el torrente sanguneo para migrar al rgano en donde
pueden continuar proliferando y comenzando a diferenciarse en clulas de ese rgano en particular; este proceso es conocido con el nombre de transdiferenciacin.
En nuestra experiencia clnica se ha observado que los
efectos de la terapia celular con clulas madre se dejan
sentir generalmente despus de la tercera semana de tratamiento continuo semanal.
DESARROLLO DE LA SITECEM, S. C.
EN MXICO
En Mxico, despus de ms de siete aos de investigacin en laboratorio y tres aos de investigacin clnica,
los tres autores mdicos militares con posgrados en
especializacin mdica y grado acadmico en ciencias
biomdicas han logrado obtener excelentes resultados
clnicos, despus de aplicar la terapia celular con clulas
madre y de evaluarla en ms de 10 centenas de pacientes
con enfermedades crnicodegenerativas. Por ello
decidieron poner a disposicin del pblico en forma de
ejercicio privado de la profesin mdica esta avanzada
teraputica, sobre todo en los pacientes nacionales y
extranjeros que la requieren, con lo que han logrado
materializar el nivel III de la medicina regenerativa y los
primeros avances reales en el tratamiento mdico del
envejecimiento biolgico de las personas.
La terapia celular con clulas madre esta surgiendo
como una especializacin teraputica de la medicina
que est dando esperanza a muchos enfermos, sobre
todo aquellos pacientes que la requieren por presentar
padecimientos crnicos y degenerativos, sin teraputica
eficaz tanto a nivel nacional como en extranjeros. En la
SITECEM S. C. se ha alcanzado el nivel ms avanzado
de esta nueva disciplina, es decir, el nivel III de la medicina regenerativa y el antienvejecimiento biolgico de
las personas.
140
Los mejores resultados de terapia celular con clulas

madre se observan en pacientes con enfermedades cuyos tratamientos a base de medicamentos o cirugas son
muy riesgosos o los resultados obtenidos no han sido
satisfactorios. La terapia celular con clulas madre es
mucho mas avanzada que muchos tratamientos convencionales, ya que la mayora de stos se basan en la prescripcin de medicamentos, que en su gran mayora son
sustancias activas constituidas por molculas extraas
al cuerpo humano (frmacos o xenobiticos), si bien
muchos de ellos son orgnicos y fueron descubiertos de
la extraccin de compuestos y extractos de plantas medicinales, muchos de ellos posteriormente han logrado
ser sintetizados de forma artificial en laboratorios. La
gran mayora de los medicamentos solamente tienen la
capacidad de regular las funciones de los aparatos y sistemas que conforman el cuerpo humano; y en mayor o
menor medida, casi siempre pueden presentar efectos
secundarios e incluso txicos. Por otro lado, el gran
avance de la ciruga durante el siglo XX permiti retirar
y reparar la gran mayora de los tejidos, ahora con procedimientos de invasin mnima (laparoscopia), siendo
el mejor de los casos el xito de los procedimientos de
trasplante de rgano y la implantacin de prtesis mecnicas o de tejidos procedentes de otros donadores (crneas, huesos, piel, etc.). Todos estos avances, como ya
se seal, slo tienen la capacidad de atender la tercera
parte de los padecimientos que estudia la medicina.
Adems, la gran mayora de las enfermedades asociadas
al envejecimiento inician con daos celulares y la prdida de clulas ocasionados por la muerte de las mismas, que constituyen debilitamiento de los tejidos, ocasionando insuficiencia de los rganos que integran los
aparatos y sistemas del cuerpo humano. De forma normal en los individuos jvenes y sanos las clulas madre
recuperan la prdida natural de clulas, ocasionada por
agentes nocivos de diversa ndole; cuando la recuperacin de clulas es insuficiente al dao ocasionado por el
ambiente, estilo de vida, enfermedad o lesin (quemadura, traumas, accidentes, etc.), surgen las enfermedades. La terapia celular con clulas madre es comparable al trasplante de clulas en forma peridica de la
totalidad de clulas que constituyen el cuerpo humano
en contraparte con lo que ocurre con el envejecimiento
biolgico, donde hay una deplecin y senescencia gradual de las clulas que constituyen el organismo ocasionando su debilitamiento generalizado y susceptibilidad
a las enfermedades, cncer e infecciones, el cual es mayor conforme ms pasa el tiempo.
La seguridad de la terapia celular con clulas madre
que aplica la SITECEM radica, a que este es el proceso
natural con el cual los organismos pluricelulares se
(Captulo 5)
regeneran y se reparan. En todos los individuos las clulas madre existen y se encuentran en diversos reservorios, como la mdula sea. Desafortunadamente las
agresiones recibidas con el tiempo se van acumulando
y aunado al proceso de senescencia celular condicionan
un estado de insuficiencia de clulas, el cual gradualmente no puede ser compensado por el proceso natural
antes sealado, ya que esta insuficiencia celular tambin afecta el nmero o la funcionalidad de las clulas
madre en sus reservorios endgenos. La funcin natural
de renovacin celular que realizan las clulas madre va
sufriendo merma, la cual puede ser agudizada en los
procesos patolgicos que originan las enfermedades. La
terapia celular con clulas madre es el tratamiento ms
avanzado e idneo para procurar la salud en muchas
enfermedades. Recientes publicaciones cientficas confirman cada da ms el potencial que tienen las clulas
madre en circulacin para poder llegar a varios rganos
y convertirse en clulas de ese rgano, ayudando a que
ste se recupere y mantenga una salud ptima. Se han
conducido muchos estudios por varios equipos cientficos alrededor del mundo, incluyendo el Instituto Nacional de Salud de EUA (NIH), los cuales establecen claramente que cuanto ms altos sean los niveles de clulas
madre en circulacin, mayor ser la habilidad del
cuerpo para mantener una salud ptima. Una publicacin reciente en el New England Journal of Medicine
informa que el nivel de clulas madre en la sangre fue
uno de los mejores indicadores para la salud cardiovascular. Se ha demostrado que al elevar el nmero de clulas madre en la sangre, esto ocasiona una mejor salud en
muchas maneras. Por las investigaciones de Krause se
pudo ver que las clulas madre se convirtieron en clulas funcionales de la piel, el hgado, colon, intestino, estmago, esfago, riones y pulmones. Las clulas madre tambin pueden convertirse en clulas del cerebro,
clulas del corazn, clulas del msculo, clulas del
pncreas, prcticamente cualquier tipo de clulas en el
cuerpo, segn se ha documentado. Los estudios anteriores ms los de Orlic y Werner y col. sugieren claramente
que el nmero de clulas madre en circulacin son un
factor clave; cuanto mayor sea la cantidad de clulas
madre en circulacin, mayor ser la habilidad del cuerpo de regenerarse. Estos estudios tambin apoyan la
teora del antienvejecimiento biolgico ya que al pasar el tiempo estas clulas se encuentran en menor nmero; tal vez esta disminucin sea la que condicione la
mayor vulnerabilidad, as como caractersticas biolgicas de las personas de ms de 60 aos de edad. Si nosotros inyectamos clulas madre en la circulacin de estos
pacientes sern ms capaces de autorregenerarse, ya
que estas clulas tienen la capacidad de migrar a partir

de la circulacin a los rganos, aparatos y sistemas que
se estn envejeciendo. Las clulas madre al transdiferenciarse en las clulas endoteliales y otras clulas especializadas que conforman los rganos y tejidos del
cuerpo revitalizan al anciano. Esto se ve an ms agudizado cuando por motivo de alguna enfermedad alguna
estirpe celular se encuentra bajo un gran reto o estrs;
tal es el caso de las clulas productoras de insulina
(clulas B del pncreas) y en los pacientes con diabetes
mellitus tipo 2, tarde que temprano el sobreesfuerzo de
trabajo ocasiona su fatiga condicionando la insuficiencia de insulina y el incremento de la glucosa sangunea
caracterstica de esta enfermedad, lo que puede ocasionar aumento de sed, aumento de la frecuencia para orinar y aumento del apetito.
Cuando se aplica una lnea de clulas madre dirigida
a la transdiferenciacin de clulas B y a la regeneracin
de las glndulas endocrinas en pacientes con diabetes
mellitus tipo 2, o aun en pacientes con riesgo de padecerla, la medicina regenerativa puede aplicarse en un
enfoque preventivo para evitar o retrasar el dao a la
salud. Cuando los individuos se encuentran sanos pero
el envejecimiento cronolgico ya tiene un impacto lo
suficientemente grande (lo que ocurre a partir de las tercera a cuarta dcada de vida), la aplicacin de clulas
madre (terapia celular) ocasiona la disminucin e inclusive desaparicin por el paso del tiempo de sntomas y
signos que van apareciendo conforme se va estableciendo el envejecimiento biolgico: debilidad, vulnerabilidad a las agresiones de la piel (arrugas, canas, manchas
en la piel) y en muchas ocasiones la susceptibilidad a las
enfermedades (neumonas, infecciones, enfermedad
pulmonar obstructiva crnica, divertculos, diabetes
mellitus, etc.). Entre ms pronto se detecte esta sintomatologa, ms efectivo ser el resultado regenerativo y de
antienvejecimiento que la terapia con clula madre
pueda ejercer. Cuando los pacientes presentan la sintomatologa anterior es necesario implantar clulas madre
nuevas no envejecidas y disear de acuerdo al diagnstico mdico (diabetes mellitus, cardiopata isqumica,
Alzheimer, Parkinson, divertculos, artrosis, etc.) el
tipo de lnea celular y el nmero de sesiones a utilizar.
Asimismo, se prescriben mejores estilos de vida, los pacientes deben dejar vicios como el alcohol, tabaco, mala
alimentacin y otros estilos de vida inadecuados, los pacientes aprenden a protegerse contra factores ambientales como las irradiaciones y a fortalecer el sistema
inmunitario y antioxidante para hacer frente a la contaminacin y al mismo envejecimiento. Cuntos aos
podemos llegar a vivir? Slo 1 de cada 10 000 personas
cumple 100 aos; sin embargo, tres lneas de investigacin sugieren que la esperanza de vida puede ser mayor
141
que la actual con la restriccin calrica, reduccin del

nivel del IGF1 (factor 1 de crecimiento similar a la
insulina) y proteccin del organismo frente a los radicales libres. Demostrar su utilidad en los humanos puede
llevar aos. Merecer la pena vivir ms? Si el tratamiento antienvejecimiento elimina los achaques de la
edad, sin duda que s vale la pena.
CUESTIONARIO BSICO
DE CALIDAD DE VIDA
La calidad de vida hace referencia a la percepcin que

tiene un individuo de su propio bienestar fsico y mental. Numerosos factores contribuyen a la calidad de
vida, incluyendo los que influyen en lo buena que es
la vida, la felicidad de un individuo y su capacidad para
desenvolverse de manera independiente y disfrutar de
la vida.
La calidad de vida relacionada con la salud
(CVRS) hace referencia a los aspectos afectados por las
enfermedades y su tratamiento. Por ejemplo, el dolor
asociado a una enfermedad y las limitaciones en el funcionamiento que requieren dependencia de la ayuda de
los dems en las actividades habituales de la vida diaria
reducen la calidad de vida de un individuo.
La habilidad de liberar las clulas madre a la circulacin a travs de nuestros protocolos de terapia celular,
medicina regenerativa y antienvejecimiento es de gran
relevancia, ya que las clulas madre en circulacin aparentemente disminuyen al aumentar en edad. De esta
manera, se podra concluir que los nios y bebs tienen
un sistema de clulas madre muy efectivo y no necesita apoyo. Sin embargo, han aplicado terapia celular en
nios menores de 10 aos como apoyo al tratamiento de
quimioterapia y radioterapia en leucemias agudas, as
tambin en pacientes peditricos con sndromes genticos como la trisoma del cromosoma 21 (sndrome de
Down), Turner, etc., y tambin en nios con problemas
del neurodesarrollo, autistas, debilidad mental, parlisis cerebral infantil, dficit de atencin y jvenes con
esquizofrenia. Estamos recibiendo testimonios con informacin acerca de experiencias muy fuertes indicando que la terapia celular con clulas madre podra brindar beneficios significantes para los nios pequeos.
El Dr. Sosa seala: La terapia celular con clulas
madre es la forma ms segura de tratar los daos que
sufre el material gentico que se encuentra en el ncleo
celular y las mitocondrias. Estos daos son uno de los
factores ms relevantes del proceso de envejecimiento
142
(Captulo 5)
Cuestionario bsico de calidad de vida

Para uso de oficina: CR/IDNUM:
Lugar:
Fecha:
Lugar:
Seleccione el que corresponda
1. Pretest
2. Post test
3. Seguimiento
4. Otro
1. En general, cmo dira usted que se encuentra su salud?
1. Excelente
2. Muy buena
3. Buena
4. Considerable
5. Mala
Las siguientes situaciones son acerca de las actividades que usted hara tpicamente en un da normal. Su salud actual le limita
estas actividades? Si es as, cunto?
S, me limita
S, me limita un
No, no me limita
mucho
poco
en lo absoluto
2. Actividades moderadas, como mover una
mesa, empujar una aspiradora, jardinera o caminar a
un paso moderado
3. Subir varios pisos por las escaleras
Durante las pasadas 4 semanas, ha tenido usted alguno de los siguientes problemas con su trabajo u otras actividades diarias
como resultado de su salud fsica?
4. Lleva a cabo menos de lo que usted quisiera?
1. S
2. No
5. Estuvo limitado/a en el tipo de trabajo u otras actividades?

1. S
2. No
Durante las pasadas 4 semanas, ha usted tenido alguno de los siguientes problemas con su trabajo u otras actividades diarias
como resultado de cualquier problema emocional (tal como sentirse deprimido/a ansioso/a)?
6. Lleva a cabo menos de lo que usted quisiera?
1. S
2. No
7. No trabaj o realiz otras actividades tan cuidadosamente como usted acostumbra

1. S
2. No
8. Durante las pasadas 4 semanas, cunto interfiri el dolor con su trabajo normal (incluyendo ambos trabajos: dentro
y fuera de la casa)?
Para nada
Moderadamente
Un poco
Bastante
Extremadamente
Para cada pregunta, por favor d la respuesta que est ms cerca de la manera en que se ha estado sintiendo.
Cunto tiempo de las ltimas
4 semanas?
9. Se ha sentido calmado/a y
tranquilo/a?
10. Tuvo mucha energa?
Todo el
tiempo
La mayora
del tiempo
Un buen
tiempo
Algo de
tiempo
Muy poquito
tiempo
En ningn
momento
11. Se ha sentido triste o

desamparado/a?
12. Qu tanto tiempo interfirieron
sus problemas emocionales o su
estado fsico con sus
actividades sociales
(como visitaramistades
miembros de la familia, etc.)
Entrevistador/a:
Fecha:
Nota: este cuestionario debe aplicarse antes de iniciar la terapia celular y despus de cinco sesiones de clulas madre.

biolgico y la senescencia celular. En los ancianos se
producen un mayor nmero de alteraciones estructurales de los cromosomas (material gentico), los cuales
estn compuestos de cido desoxirribonucleico (DNA).
En los cromosomas de personas que presentan envejecimiento biolgico se observan entrecruzamientos de
DNA y con frecuencia se producen roturas de una sola
cadena; disminuyen las mutilaciones del DNA perdindose las secuencias telmericas en dicho cido nucleico. Tambin al envejecimiento biolgico se suma la
agresin ambiental (en la que se incluyen infecciones
diversas, accidentes, traumatismos y otras enfermedades cuyo origen y fisiopatologa todava no se conoce),
as como la agresin endgena, la cual se divide en las
alteraciones del DNA heredado de nuestros padres, la
cual se asocia con la aparicin de enfermedades crnicodegenerativas como la diabetes mellitus, hipertensin, cncer, etc. Estas agresiones continan con la serie
de impactos nocivos y si bien la estructura primaria de
las protenas no se altera con el envejecimiento del
DNA, las agresiones ambientales y endgenas aumentan los cambios posteriores a la traduccin. Los daos
en las protenas pueden explicarse mejor por una mala
alimentacin (rica en carbohidratos, escasa en aminocidos y protenas) y dao en las mitocondrias, que tambin se deterioran con el tiempo, aunque no siempre lo
hacen de forma constante. Las mitocondrias tambin
sufren de alteraciones del DNA de las mismas que condicionan estados de estrs oxidativo, ocasionan alteraciones en los procesos bioqumicos de desaminacin, oxidacin, entrecruzamiento y glucosilacin no enzimtica.
Las clulas madre que se utilizan para la terapia celular que se ha desarrollado por la SITECEM S. C. contienen DNA intacto, as como sus mitocondrias saludables,
y adems organelos que las constituyen, la solucin
especial en la cual son suspendidas para su aplicacin
paraenteral en los pacientes, as como el mismo citoplasma que constituye a las clulas madre. Contienen
muchas protenas y biomolculas, las cuales incluso
todava no son conocidas o descubiertas, pero que tienen la capacidad potencial de revertir muchos de los
efectos del envejecimiento y de las enfermedades. Por
ejemplo, las clulas madre pluripotenciales son ricas en
la enzima llamada telomerasa, la cual tiene la funcin
de reparar las secuencias telmricas de DNA en los
extremos de los cromosomas del ncleo. La importancia
del acortamiento de los telmeros es que es el marcador
ms importante asociado a la senescencia celular y al
envejecimiento biolgico. Desde el punto de vista de
terapia gnica, podemos considerar que las clulas
madre son el mejor vector, y pueden ser consideradas
como microesferas inteligentes (ya que son organis-
143
mos vivos microscpicos, con la total capacidad de autorreplicacin, as como de tropismo, tienen la capacidad de reconocer y viajar al sitio del dao o lesin, o
enfermedad en donde se pueden autorreplicar, pasar a
una fase de quiescencia celular o entrar en un proceso
de transdiferenciacin. Estas clulas al entrar en contacto con las clulas y estructuras del tejido especializado obtienen la informacin y sealizacin necesaria
que les permite diferenciarse en el tipo celular faltante
o lesionado. Adicionalmente la hiptesis del SITECEM, de los doctores SnchezGonzlezSosa, radica
en considerar a la clula madre como vector de terapia
celular, ya que las clulas madre sanas contienen en su
interior el genoma humano completo y saludable, el
cual, a diferencia de los protocolos de terapia gnica, se
encuentra intacto, y no ha sido modificado o tocado por
manos, tcnicas o instrumentos humanos. El DNA se
encuentra en su estado de indiferenciacin, es decir;
todos los genes que codifican protenas pueden ser
expresados y pueden dar origen a todas las biomolculas, las caractersticas especiales de los ms de 250 diferentes tipos celulares especializados que constituyen los
tejidos del cuerpo humano. Cabe resaltar que en la
SITECEM S. C. se considera que las clulas madre no
(negativo) deben ser modificadas, alteradas o siquiera
tocadas, sobre todo en su maquinaria gentica (DNA),
y nos reservamo la estrategia de protegerlas lo ms posible de todos los agentes nocivos que puedan degenerar
la maquinaria de DNA. Son protegidas contra radiaciones, cambios de temperatura, pH, osmolaridad, agentes
infecciosos, etc. De manera que las clulas que se trasplantan tienen una edad biolgica aproximada de cero
aos (nuevas). Por lo anterior la terapia celular con clulas madre tiene un gran potencial en los padecimientos
que cursan con dao gentico o enfermedades hereditarias, por ejemplo la retinitis pigmentaria, el sndrome de
Down, la diabetes mellitus, hipertensin arterial, etc.
SERVICIOS DE LA SITECEM, S. C.
En la SITECEM se ofrecen en forma privada servicios

profesionales de alta especialidad y vanguardia.
Atencin mdica
Se dirige al pblico en general y se ofrece consulta mdica especializada en regeneracin y antienvejecimiento, que incluye la evaluacin, el diagnstico y el trata-
144
miento con base en la terapia celular, las clulas madre

y los diversos procedimientos de vanguardia que se
estn integrando a este campo del conocimiento cientfico y clnico, dentro del ejercicio privado de la profesin mdica a nivel internacional ofreciendo servicios
sencillos, seguros y con calidez y calidad. De manera
complementaria se ofrecen servicios de: auxiliares dignsticos, terapia hiperbrica, carboxiterapia, ozonoterapia, terapia baritrica, nutricin, psicoterapia y farmacia especializada.
Difusin y educacin
El otro servicio es dirigido a mdicos y personas interesadas a travs de la organizacin internacional de doctorados, maestras, diplomados, posgrados, cursos,
eventos, congresos, foros, seminarios relativos a la terapia celular, clulas madre, medicina regenerativa y el
antienvejecimiento.
Investigacin y desarrollo
Este servicio est dirigido a las empresas y los organismos pblicos y privados, las fundaciones y los pacientes
que se encuentren interesados en el desarrollo de proyectos de investigacin en los que se incluye el desarrollo de terapia celular con clulas madre autlogas o de
sus hijas que han sido criopreservadas en bancos de clulas madre, generalmente provenientes del cordn umbilical o de la mdula sea.
Criopreservacin de clulas
de cordn umbilical
Este sistema se dirige a las mams embarazadas que
desean contar con el servicio de criopreservacin y asilamiento de clulas madre del cordn umbilical de sus
hijos por nacer.
Misin
1. Agrupar, orientar, tratar, asistir mdicamente, investigar cientficamente, capacitar y certificar a
los que ingresen a la sociedad respecto a todo lo
relacionado con la terapia celular, con las clulas
madre, la medicina regenerativa y antienvejecimiento, en todo el mundo.
(Captulo 5)
2. Ofrecer servicios de atencin mdica con calidad

y calidez, basados en la terapia celular con clulas
madre, medicina regenerativa y antienvejecimiento a las personas con diversas enfermedades
como son las crnicas degenerativas y padecimientos asociados al envejecimiento de procedencia nacional y extranjera.
3. Enseanza y capacitacin en materia de salud,
longevidad, terapia celular, clulas madre, medicina regenerativa y antienvejecimiento, a los
socios y personas interesadas a travs de cursos,
seminarios, diplomados, maestras, doctorados,
congresos, exposiciones, eventos cientficos, acadmicos, artsticos y culturales, en el mbito nacional e internacional.
4. Promover la investigacin y enseanza sobre la terapia celular, las clulas madre, la medicina regenerativa y antienvejecimiento.
5. Fomentar el acercamiento y enlace con asociaciones nacionales e internacionales.
6. Impartir cursos, diplomados, seminarios, maestras, doctorados, cursos de posgrado sobre terapia
celular, clulas madre, medicina regenerativa y
antienvejecimiento.
7. Establecer alianzas de investigacin y comercializacin con la finalidad tanto de importar como de
exportar todo lo relacionado con la terapia celular
con clulas madre, medicina regenerativa y antienvejecimiento, con instituciones gubernamentales, organismos internacionales, empresas e instituciones mdicocientficas nacionales y de todo
el mundo.
8. Editar, distribuir y vender libros, publicaciones,
artculos, gacetas, material audiovisual.
9. El registrar patentes y marcas nacionales e internacionales.
Visin
Establecimiento de clnicas, centros, hospitales, consultorios, albergues, casas de medio camino, casas para ancianos, servicio de traslado de pacientes (ambulancias),
spa, gimnasios, clnicas, centros de relajacin, recreacin y esparcimiento, cafeteras y restaurantes con preparacin de alimentos, servicio de banquetes que favorezcan la regeneracin celular y la longevidad de las
personas con los ms altos principios morales, ticos y de
calidad en la atencin mdica y con fundamentos cientficos sustentados en la terapia celular, en las clulas
madre, en la medicina regenerativa y en el antienvejecimiento en todo el mundo.
145
COMPROMISO PROFESIONAL
DE LA PRCTICA MEDICA EN
TERAPIA CELULAR
neracin y fortalecimiento de los tejidos del cuerpo, de

gran relevancia en los pacientes de la tercera edad y los
gravemente enfermos, incrementando la calidad de vida
de stos.
Nuestro principal compromiso es con el paciente, el

cual es de trascendental importancia. Por ello se debe
esforzar en mejorar continuamente nuestros servicios
profesionales en forma personalizada, considerando al
ser humano en forma integral con calidad y calidez,
siempre respetando la tica profesional y el trabajo de
otros colegas, se deben instaurar polticas de calidad, as
como en el establecimiento de procedimientos y trabajo
en equipo, en los centros de atencin que emprendan.
Consideremos el esfuerzo econmico y social que ha
realizado y realizan nuestros pacientes, por lo que de ser
posible se debe solicitar el menor nmero necesario de
estudios diagnsticos para establecer con precisin el
diagnstico y evaluar los tratamientos que estn recibiendo nuestros pacientes, de manera que cuando ya no
son necesarios se indica que sean suspendidos en forma
gradual y siempre bajo estricto control mdico.
Aunque todas las personas son candidatas a recibir la
terapia celular con clulas madre, la aplicacin de sta
ser cuando los pacientes cumplan con las indicaciones
establecidas en los protocolos. Por tal motivo nosotros
desde la primera consulta evaluamos los diagnsticos
establecidos y respetamos en la medida de lo posible los
tratamientos antes prescritos por sus mdicos tratantes.
El manejo de todos nuestros pacientes se debe realizar a travs del trabajo multidisciplinario de mdicos
expertos con ms de un posgrado en ciencias y medicina
o que acrediten el diplomado respectivo de la SITECEM S. C. Siempre bajo los ms producentes principios
de honestidad, el equipo mdico coordina todos los
esfuerzos de salud para alcanzar el mximo rendimiento
de salud y longevidad que el estado de salud previo al
tratamiento pueda alcanzar en beneficio de nuestros
pacientes.
Los pacientes que padecen cncer as como otras enfermedades que pueden llevar rpidamente a finalizar la
vida como el VIH pueden ser candidatos a recibir de
forma complementaria a su tratamiento de antirretrovirales, radioterapia y quimioterapia, ciclos de terapia
celular con clulas madre. Si bien somos honestos en
sealar que la terapia celular con clulas madre no logra
curar las enfermedades terminales graves y que las clulas madre no destruyen a las clulas tumorales, y tampoco eliminan grmenes patgenos crnicos, siempre
contribuirn en mayor o menor medida, dependiendo de
las condiciones biolgicas de cada persona, en la rege-
PROCEDIMIENTO GENERAL DE
ATENCIN MDICA PARA LA
TERAPIA CON CLULAS MADRE
Los pacientes deben solicitar una cita a los telfonos del

consultorio (2222 3000) o control de atencin mdica,
para que sean atendidos por mdicos especialistas y
diplomados de la SITECEM S. C., deben acudir en su
primera cita con una fotocopia o su credencial de IFE u
otra identificacin con fotografa, as como con los estudios de laboratorio y gabinete que tenga disponibles;
son tiles las biometras hemticas, funcionales hepticas, depuraciones de creatinina en orina de 24 h, exmenes generales de orina, SPECT, PET, radiografas, electrocardiogramas, tomografas, resonancias magnticas,
ultrasonidos, electroencefalogramas, potenciales evocados, etc. Despus de realizar una historia clnica,
exploracin fsica, anlisis de los estudios de laboratorio y gabinete, se evala si es candidato o no recibir la
terapia celular con clula madre; se disea y programa
un ciclo mnimo de cinco sesiones de administracin
intravenosa de clulas madre en forma individualizada;
se estudia si se requiere aplicar en forma local intramuscular, subcutnea, etc. La va de administracin y tipo
de clulas madre (lneas celulares) que necesita cada
paciente, por ejemplo si el paciente padece de enfermedad de Parkinson, requiere de clulas madre que se conviertan en neuronas productoras de dopamina. Si el paciente padece de vitligo se necesita de una lnea de
clulas que se transforman diferencindose en melanocitos; si el paciente presenta infartos del miocardio e
insuficiencia cardiaca, requiere lneas celulares que se
diferencien en miocitos y endotelio; si el paciente presenta diabetes mellitus se necesita una lnea de clulas
que se diferencien en clulas B productoras de insulina;
si el paciente tiene artrosis en las rodillas o cadera se
necesita una lnea especial de clulas madre que se
transformen en clulas formadoras de cartlago articular conocidas como condrocitos; stas se aplican en forma intravenosa y pueden tambin ser depositadas en
forma local en la regin anatmica de las placas de crecimiento. Si el paciente es de la tercera edad (mayor de 60
aos) o padece de diabetes mellitus con complicaciones
microvasculares como neuropata diabtica, retinopata
146
o neuropata, generalmente se requieren tres lneas celulares para poder regenerar los procesos de isquemia con
la formacin de clulas endoteliales y nuevos vasos sanguneos, as como regenerar las neuronas y gliales que se
encuentren daados en todo el sistema nervioso, y clulas que se diferencien en los distintos tipos celulares que
conforman las glndulas de secrecin endocrina que normalmente declinan sus funciones con el envejecimiento.
Las reacciones que ocurren tras la administracin de
la terapia celular con clulas madre son mnimas o nulas, raramente se presentan en forma de leves malestares
y dolores, los cuales son de muy buen pronstico ya que
indican regeneracin celular en los sitios a los que estn
llegando las clulas madre. Si el padecimiento se encuentra en el cerebro y se aplica una lnea celular para
neurogeneracin en un paciente con enfermedad de Alzheimer o Parkinson, el paciente puede presentar dolor
de cabeza; si el paciente est recibiendo una lnea de
regeneracin articular por presentar artrosis u osteoartritis, podr percibir aumento de dolor en la regin de la
cadera en algn punto de la articulacin con irradiacin
lumbar, el cual ir gradualmente desapareciendo. Si el
paciente est recibiendo una lnea de regeneracin para
la piel por estar enfermo de vitligo presentar gradualmente un enrojecimiento en las zonas blancas acompaado de ligero prurito y puntilleo, el cual se va difuminando en las zonas de lesin previa a un proceso de
repigmentacin normal. En los pacientes de la tercera
edad, la piel envejecida es renovada por lo que pueden
aparecer zonas de descamacin similares a las que ocurren despus de un bao de sol ligero, con la epidermis
nueva. En general los pacientes pueden referir tener
hambre, cansancio y sueo despus de recibir una
sesin de terapia celular con clulas madre y tambin
han referido que puede quitrseles el apetito. Los malestares cuando se presentan tienen una duracin menor a 48
h, y consisten en sensacin de fiebre o febrcula en ocasiones slo es la sensacin y la temperatura se encuentra
< 37 _C, los sntomas de malestar general mejoran con
la administracin de paracetamol u otro analgsico similar (TempraR, TaylexR o AdvilR). Es necesario que se
cumpla con las indicaciones, sobre todo la prescripcin
de dietas especiales y medicamentos complementarios
especiales (XangoR, LebasiR, PxPR, StemEnhiancerT, y Transfer FactorT, ImmunocalR, etc.) para ayudar
a la regeneracin y al antienvejecimiento segn sea el
caso. Estos productos apoyan las funciones de las clulas madre en el cuerpo. Dada la naturaleza de ambos, el
concepto y el producto, es imprescindible llevar a cabo
un esfuerzo significativo para educar a la gente, para
que de esa manera adquieran el conocimiento de esta
nueva tecnologa.
(Captulo 5)
As como los antioxidantes son importantes para proteger las clulas del dao ocasionado por los radicales
libres, los productos que apoyan a las clulas madre
son tambin importantes para ayudar a sus clulas madre y mantener el funcionamiento adecuado de los rganos y tejidos del cuerpo.
Generalmente, en forma individualizada a cada paciente se le programan las sesiones semanales de terapia
celular con clulas madre. Las lneas celulares, vas de
administracin, as como el nmero de sesiones, son diseados y prescritos por el mdico especialista. De
acuerdo a la evolucin del paciente se pueden modificar
la dosis (nmero de sesiones), lneas celulares y vas de
administracin. Habitualmente, para que el paciente
pueda percibir un efecto de mejora se requieren por lo
menos cinco sesiones (dosis mnima) y la dosis promedio recomendada es de 15 sesiones; a esto se le conoce
como ciclo de terapia celular. Cada ciclo de terapia
celular puede ser de 5 a 15 sesiones en las que se aplica
volmenes con ms de 10 000 000 de clulas madre
suspendidas en 3 mL de solucin especial, las cuales
generalmente se administran por va intravenosa y ms
de 1 500 000 clulas madres suspendidas en 0.5 mL de
solucin especial para aplicacin intramuscular y local.
Antes de comenzar y al finalizar el ciclo de terapia celular, es necesario realizar evaluaciones mdicas; la frecuencia y los estudios complementarios dependern del
estado de gravedad, edad y respuesta del paciente a la
terapia celular. Hay casos en los que se requiere una sola
lnea celular, por lo que el tratamiento resulta ms econmico, y el cual se incrementa con base en la cantidad
de lneas celulares, que por lo menos son tres.
Los ciclos de terapia celular se programan cuando los
pacientes no estn recibiendo otro tipo de ciclos, sobre
todo los de radioterapia o quimioterapia (terapias contra
el cncer), ya que durante estos tratamientos las clulas
sufren severos daos evitando su efecto regenerativo,
ya que muchas de ellas mueren antes de lograr dividirse
y transdiferenciarse en el tejido blanco del tratamiento.
Los ciclos de terapia celular deben suspenderse o aplazarse ya que se encuentran contraindicados, cuando los
pacientes presentan cuadros agudos de enfermedad
como parasitosis, infecciones vitrales y bacterianas (paludismo, toxoplasmosis, dengue, faringitis, etc.) e infecciones que cursan con fiebre elevada de diversa ndole (virus, hongos y bacterias), sobre todo cuando los
patgenos han alcanzado la circulacin sangunea (sepsis). Estos pacientes deben recibir el tratamiento antibitico o antiparasitario. Y una vez que el proceso ha
sido resuelto, y se tiene el resultado de la evaluacin podrn ser candidatos para recibir el ciclo de terapia celular. Los pacientes con infecciones crnicas como la he-

patitis, tuberculosis, etc., son la excepcin. Todos los
ciclos de terapia celular son evaluados bajo el criterio
del mdico tratante y siempre bajo consentimiento del
paciente. Esto se debe a que las clulas madre pueden
ayudar en estas situaciones de infeccin crnica en la
reparacin de los daos ocasionados por los largos procesos de inflamacin. Los pacientes con infeccin por
VIH y SIDA pueden recibir el beneficio de la regeneracin del sistema inmunitario ocasionado por la transfe-
147
renciacin de clulas madre no infectadas en linfocitos

competentes, el cual generalmente puede encontrarse
daado, debilitado e incluso gravemente destruido. Cabe
sealar que estas intervenciones se encuentran todava en
sus fases experimentales aunque con muy buenos resultados. Los costos aproximados de cada sesin de terapia
celular varan de 5 000 dlares a 30 000 dlares estadounidenses dependiendo de la lnea, tipo, origen y concentracin de clulas madre de cada inyeccin o implante.
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Captulo
Terapia celular y bioingeniera de tejidos
INTRODUCCIN
isqumicos la MEC se encuentra alterada y las clulas madre implantadas pueden encontrar problemas para adaptarse e integrarse al tejido. El colgeno tipo I, responsable del soporte estructural,
disminuye desde 80% hasta casi la mitad, mientras que el colgeno tipo III aumenta de 10 a 35%;
este desequilibrio entre la proporcin fisiolgica
del tejido contribuye a generar un estado disfuncional con complicaciones potencialmente fatales, como arritmias ventriculares.
El tejido conectivo se origina del mesodermo, consta de

clulas y matriz extracelular (MEC) compuesta por sustancia fundamental en estado de sol o gel. Las clulas
principales del tejido conectivo son los fibroblastos. La
estructura general del tejido conectivo presenta una red
dispersa de clulas de sostn que producen la MEC, un
entramado organizado y abundante de protenas fibrilares organizadas en un gel hidratado de glucosaminoglicanos (GAG).
Con la ingeniera de tejidos y la terapia celular con
clulas madre se pueden aislar clulas autlogas de un
paciente para hacerlas crecer en ambientes controlados
de cultivo, para regenerar el sitio afectado. Son terapias
avanzadas que ofrecen esperanza de salud, vida y seguridad a los pacientes. La ingeniera de tejidos tiene dos
estrategias fundamentales:
TERAPIA CELULAR CON CLULAS

MADRE. MEDICINA DEL SIGLO XXI
Las clulas madre tambin se conocen como clulas
troncales o clulas progenitoras (del ingls stem cells,
clula tronco). El estudio de las clulas madre con
aplicacin o fines teraputicos cientficos (bioingeniera de tejidos) se inici a principios de la dcada de
1970, cuando Till McCulloch y ms tarde Becker y col.
observaron cmo las clulas simples de mdula sea
podan generar todos los tipos de clulas hematopoyticas in vivo. La terapia celular con clulas madre es la
mejor terapia de la medicina regenerativa y antienvejecimiento y est fundamentada en las ciencias biomdicas. Mdicos altamente capacitados, con tres posgrados
en ciencias, preparan diferentes lneas celulares con
clulas madre para ser trasplantadas por va intravenosa
e intramuscular, con la finalidad de tratar enfermedades
incurables como Alzheimer, Parkinson, esclerosis mltiple, vitligo, diabetes mellitus, infartos, artropatas,
hernias discales, defectos del nacimiento y del desarro-
1. La generacin in vivo y el reclutamiento de clulas

que pueden sustituir la infraestructura daada
(MEC) en el rea lesionada. Con esta estrategia, la
terapia celular se aplica directamente en el sitio lesionado, permitiendo que las clulas madre se integren al sitio daado y que adems recluten clulas endgenas que colaboren en la regeneracin.
2. La ingeniera in vitro de tejido en placas de cultivo
mediante clulas sembradas obtenidas por biopsia
del paciente y que posteriormente sern trasplantadas para regenerar el sitio lesionado. La cardiomioplastia celular pretende regenerar el miocardio mediante terapia celular, pero en corazones
149
150
llo, y enfermedades relacionadas con el envejecimiento,

entre otras. La medicina regenerativa se basa en la aplicacin de las clulas madre y su capacidad de convertirse en clulas de diferentes tejidos. Las clulas madre
se clasifican en embrionarias y somticas o adultas. Durante varios aos se consider que la clula madre hematopoytica era la nica clula en la mdula sea con
capacidad generativa. Sin embargo, los estudios recientes han mostrado que la composicin de la mdula sea
es ms compleja, pues en ella se ha identificado un grupo
heterogneo de clulas madre adultas entre las que estn
las hematopoyticas, las mesenquimatosas (estromales),
poblacin lateral, clulas progenitoras adultas multipotentes (MAPC). Varios estudios han indicado que la potencialidad de algunos tipos de clulas madre adultas es
mayor que lo esperado, pues en determinadas condiciones han mostrado capacidad para diferenciarse en clulas de diferentes linajes, lo cual las acerca a la potencialidad de las clulas embrionarias. Esto ha creado nuevas
perspectivas para el tratamiento de diferentes enfermedades con clulas madre adultas, lo que al inicio se pensaba que slo poda hacerse con las embrionarias. La
terapia celular, la aplicacin de elementos subcelulares
y la ingeniera de tejidos forman parte de la medicina
regenerativa para reemplazar por clulas sanas a las
clulas daadas por diversos procesos en determinados
tejidos.
De manera natural, los tejidos del cuerpo a lo largo
de la vida sufren un desgaste, del que se defienden desarrollando la capacidad intrnseca de autorrenovacin de
los tejidos que se desgastan. Si no existiera esta renovacin, la esperanza de vida de los seres vivos se reducira
considerablemente.
Por otro lado, una gran parte del amplio elenco de las
enfermedades que afectan al ser humano se basa en la
degeneracin y muerte de los distintos tejidos que conforman el cuerpo, sea de manera aguda (infartos) o crnica (degeneracin y envejecimiento).
El avance de la medicina ha desarrollado tcnicas
que consiguen reparar los tejidos: los trasplantes. La introduccin de los trasplantes en la medicina moderna ha
supuesto una revolucin que algunos han comparado
con el descubrimiento de la penicilina.
El tratamiento con clulas madre puede beneficiar a
algunos pacientes con ciertos padecimientos como trastornos cardiovasculares, enfermedades autoinmunitarias, degenerativas y metablicas, y lesiones del sistema
nervioso central por trauma o del sistema vascular.
La mayora de los tratamientos de terapia celular a nivel mundial ofrecen xenotrasplantes de clulas que no
son humanas, sino que provienen de tejidos de animales
jvenes.
(Captulo 6)
Cuadro 61. Enfermedades que pueden

ser tratadas, de acuerdo con la experiencia
de la SICETEM, S. C.
Infarto del miocardio
Antienvejecimiento, menopausia, andropausia, estrs,
ansiedad, etc.
Diabetes mellitus tipos 1 y 2, hipotiroidismo, obesidad,
colesterol y triglicridos altos
Secuelas neurolgicas por diversos eventos vasculares
cerebrales, hipxicos, isqumicos y hemorrgicos, e
infecciosos
Enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer,
demencia, esquizofrenia, lesiones raquimedulares, etc.
Vitligo, alopecia, alergias crnicas, asma, esclerodermia,
esclerosis mltiple y lupus eritematoso sistmico
Sndrome de Down, sndrome de Turner, autismo, deficiencia mental, parlisis cerebral, etc.
Artrosis, osteoartritis, artritis reumatoide, fibromialgia reumtica, hernias discales y parlisis faciales por puntos
Cncer, tumores benignos, defectos del nacimiento, etc.
Despus de muchos aos de investigacin clnica en

ms de 1 000 pacientes, los doctores Gerardo M. Gonzlez, Javier Snchez Gonzlez y Carlos Sosa Luna desarrollaron en Mxico una terapia con clulas madre
(stem cell) de origen humano.
Dicha terapia se est aplicando exitosamente en trasplantes alognicos, con la ventaja de que no son costosos y no requieren hospitalizacin ni procedimientos de
radiologa intervencionista o quirrgicos que pongan en
peligro la vida del paciente.
La nueva terapia celular con clulas madre de origen
humano ofrece esperanza y seguridad a los pacientes,
fundamentadas en las ciencias biomdicas.
Los mdicos investigadores preparan lneas celulares con clulas madre humanas para ser trasplantadas
alognicamente por va intravenosa e intramuscular,
con el fin de tratar algunos padecimientos (cuadro 61).
Potencialidad celular
La clasificacin ms comn de las clulas troncales se
fundamenta en la potencialidad que tienen para originar
clulas de diferentes estirpes, lo cual est relacionado
con el grado de diferenciacin de las clulas troncales.
Segn lo anterior existen clulas troncales totipotenciales, clulas troncales pluripotenciales, clulas troncales
multipotenciales y clulas troncales de tejidos especficos. La potencialidad representa la capacidad y las posibilidades de diferenciacin de las clulas y se manifiesta
en el mbito natural de acuerdo con el orden jerrquico

de su desarrollo. De acuerdo con su potencial de diferenciacin, las clulas madre se han clasificado en totipotentes, pluripotentes y multipotentes.
Las clulas madre totipotentes son aqullas que en
condiciones apropiadas son capaces de formar un individuo completo, pues pueden producir tejido embrionario y extraembrionario. As, en el ciclo evolutivo posfecundacin, el cigoto u vulo fertilizado se considera una
clula totipotente, capaz de dar origen a todo el organismo. Igual sucede con la etapa siguiente de mrula, en
que todas las clulas son totipotentes. En el ratn se
plantea que la totipotencia slo persiste hasta el estadio
evolutivo de ocho clulas.
Las clulas madre pluripotentes son las que tienen la
habilidad de diferenciarse a tejidos procedentes de cualquiera de las tres capas germinales embrionarias. Aunque estas clulas por s solas no pueden producir un individuo porque necesitan el trofoblasto, s originan
todos los tipos de clulas y tejidos del organismo. En
esta categora estaran las clulas provenientes de la
masa celular interna del blastocisto.
En la categora siguiente estaran las clulas madre
multipotentes, que pueden diferenciarse en distintos
tipos celulares procedentes de la misma capa embrionaria, lo que las capacitara para la formacin de tipos celulares diferentes, pero no de todos. Tradicionalmente,
las clulas madre adultas se haban ubicado en esta etapa de la evolucin celular. Sin embargo, en los ltimos
aos se ha hecho evidente que la potencialidad de algunos tipos de clulas madre adultas es mayor que la que
habitualmente se les confera, pues se evidenci que podan diferenciarse en tejidos derivados de cualquiera de
las capas embrionarias, sealndose como el caso ms
tpico el de las clulas madre hematopoyticas. Este fenmeno ha sido calificado como versatilidad de las clulas madre adultas, tomando en cuenta la flexibilidad que
tienen algunas de ellas para formar clulas especializadas de otros linajes. Para esto se ha planteado que cuando
su entorno natural es sustituido por otro, cambian su programa de diferenciacin de acuerdo con las nuevas seales de diferenciacin que reciben, por lo que se les ha
asignado capacidad pluripotencial, y en este sentido se
asemejaran a las clulas madre embrionarias.
Estos hechos contradicen el dogma clsico en biologa celular de la capacidad diferenciativa limitada de las
clulas madre adultas. El cambio del programa de diferenciacin podra estar relacionado con variaciones en
las seales internas y externas que recibiran las clulas
en las interacciones que tendran con todos los elementos constitutivos del nuevo microambiente, hbitat o
nicho en que se situaran en el organismo. Entre esos
elementos podran considerarse, entre otros factores:
151
protenas promotoras e inhibidoras del ciclo celular,

factores secretados por las clulas vecinas, interacciones intercelulares y con la matriz extracelular del tejido
mediante protenas de membrana. Recientemente se ha
propuesto una interesante explicacin para estos cambios basada en las modificaciones que podran suceder
en diferentes fases del ciclo celular, en la modulacin de
la cromatina y en la variacin de los receptores de la
membrana celular.
En el orden jerrquico inferior se situaran las clulas
unipotentes, que son aqullas que slo se pueden diferenciar en un tipo celular, y que en algunos trabajos han
sido calificadas como clulas en trnsito, clulas progenitoras comprometidas o clulas precursoras.
Finalmente estn las clulas diferenciadas, las que
han alcanzado su plena maduracin y una actividad funcional especfica.
Ventajas y desventajas de las clulas

madre embrionarias y adultas
Las clulas troncales se caracterizan por ser indiferenciadas, tener capacidad de autorrenovacin y, ante determinadas seales, an poco conocidas, especializarse
para realizar una funcin concreta. Gran parte de los
estudios se han realizado en ratones e indican que en las
primeras etapas del desarrollo embrionario surge este
tipo de clulas que al diferenciarse forman un gran nmero de estirpes celulares que constituyen los tejidos
del embrin.
Las clulas troncales, tambin llamadas clulas madre, se clasifican en dos grandes grupos: troncales embrionarias y troncales adultas (de origen somtico). La
diferencia principal entre ambos grupos radica en el
grado de indiferenciacin o potencialidad que conservan para originar diferentes tipos celulares. Las clulas
troncales embrionarias pueden dar origen a clulas de
todos los tejidos del animal. De acuerdo con su grado de
indiferenciacin o potencialidad para originar diferentes clulas, se clasifican en: totipotenciales, pluripotenciales, multipotenciales y progenitoras de tejido. Las
dos primeras slo se encuentran en el embrin; las dos
ltimas, en el organismo adulto.
La identificacin de clulas troncales en diferentes
tejidos del cuerpo adulto y el hecho de que generan clulas troncales del embrin humano han despertado un
enorme inters entre los cientficos, principalmente por
las posibles aplicaciones teraputicas que aqullas pueden tener, por ejemplo, produccin de rganos completos para sustituir rganos afectados, como el rin y el
corazn, evitando as la bsqueda de donantes o la rege-
152
vulo fertilizado Blastocisto

(1 da)
(5 a 6 das)
Gstrula
(14 a 16 das)
Masa interna
de clulas
(Captulo 6)
Hgado
Lesin o
enfermedad
Clulas madre
endgenas
(clulas ovales)
Piel
2
1
Lesin
3
Masa externa
de clulas
Hepatocitos
Endodermo
(capa interna)
Pncreas
Hgado
Tiroides
Pulmn
Vejiga
Uretra
Mesodermo
(capa media)
Mdula sea
Msculo
esqueltico, liso
y cardiaco
Corazn y vasos
sanguneos
Ectodermo
(capa externa)
Piel
Neuronas
Glndula
pituitaria
Ojos
Odo
Clulas madre (troncales)
(exgeno)
Terapia celular
con clulas madre
Clulas madre
endgenas
(clulas de la cripta)
Lesin o
enfermedad
Factores de
crecimiento y
diferenciacin
Tubo digestivo
Esquema de regeneracin orgnica total
Figura 61. Los mdicos especializados de la SITECEM preparan clulas madre (troncales), que son clulas inmaduras del
cuerpo que actan como una masa iniciadora, debido a que pueden hacer copias idnticas de s mismas. Esto mantiene una
provisin constante de clulas iniciadoras listas para madurar dentro de varias capas distintas interna, media o externa de
tejido en respuesta a las necesidades del cuerpo. Se inyectan de acuerdo con la historia clnica y el diagnstico establecido del
paciente.
neracin de clulas en tejidos, y para aplicar terapias en

enfermedades neurodegenerativas, como la de Alzheimer y la de Parkinson, entre otras. Entre las aplicaciones
de las clulas troncales se observa la creacin de animales transgnicos, como ratones, ratas, cerdos y primates,
pues ellos constituyen una herramienta novedosa para
producir modelos animales donde existen las alteraciones genticas de enfermedades del hombre, que permiten seguir la manifestacin equivalente de signos y sntomas, facilitando el hecho de probar tratamientos para
desarrollar terapias ms efectivas.
Otro aspecto de las clulas troncales es su utilizacin
en la medicina veterinaria para implementar tecnologas
innovadoras en la crianza y manipulacin gentica de
animales domsticos.
Sin embargo, a pesar del potencial de este tipo de clulas, se han generado grandes controversias en relacin
con su investigacin y uso, lo cual ha ocasionado una
enorme confusin en cuanto a la informacin que se tiene sobre ellas y sus logros.
Recientemente se han descubierto las propiedades
pluripotenciales de algunos tipos de clulas madre adultas, lo que ha creado grandes perspectivas teraputicas
por su aplicacin autloga en la regeneracin de tejidos.
Por otra parte, se ha tratado de contraponer sus indicaciones con las de las clulas madre embrionarias, pero
todava es prematuro para definir la superioridad de
unas sobre las otras. Por el momento, ambos tipos de c-
lulas madre tienen ventajas y desventajas que quiz podran modificarse en el futuro.
Entre las ventajas de las clulas madre embrionarias
humanas est que pueden formar cualquier tipo de tejido y mantenerse indefinidamente en cultivo (figura
61). En su contra tendran los problemas ticos que
provienen de la necesidad de extraerlas de su medio natural, que es un embrin en desarrollo, lo que equivaldra
a la interrupcin de la vida de un nuevo ser ya en proceso
de formacin. Adems, su procedencia alognica es en la
actualidad una limitante relativa que puede controlarse
debido a la inmunobiologa tan peculiar de estas clulas.
Tambin se pueden utilizar clulas embrionarias provenientes del propio paciente, lo que equivaldra a un autotrasplante sin los problemas del rechazo que se presenta
con el trasplante de clulas alognicas.
Una opcin prometedora consiste en el mtodo de
transferencia de un ncleo de clula somtica del propio
paciente a un vulo desnucleado, con lo que se crea un
embrin derivado de una clula somtica (embrin artificial), el cual se lleva hasta la fase de blastocisto para la
obtencin de las clulas embrionarias que se utilizaran
en el enfermo y que tendran las caractersticas de clulas
autlogas.
Este procedimiento se denomina clonacin teraputica, que ya ha sido aceptado por gran parte de la comunidad cientfica, mientras que se mantiene la oposicin a la
clonacin con fines reproductivos (figura 62).

Otra desventaja es la incertidumbre sobre las condiciones necesarias para la diferenciacin hacia lneas celulares especficas, aunque se espera que en este campo
pueda avanzarse con rapidez a medida que se vayan incrementando los conocimientos que las investigaciones
actuales y perspectivas podran proporcionar. Una desventaja adicional es su potencialidad teratognica latente.
En cuanto a las ventajas de las clulas madre adultas,
se plantea que dada su procedencia autloga, no producen trastornos inmunitarios ni presentan problemas ticos. Pueden ser de diferentes tipos y obtenerse de distintas fuentes; algunas tienen un amplio potencial de
autorrenovacin y posibilidades de modificar su diferenciacin y utilizacin para la transferencia gnica.
Entre las desventajas se cree que la mayor parte de estas
clulas tienen una autorrenovacin limitada y una manipulacin en laboratorio compleja y costosa. Sin embargo, los resultados obtenidos en algunos ensayos clnicos
con clulas madre adultas de la mdula sea han abierto
la posibilidad de un mtodo de obtencin ms accesible.
Las clulas madre tienen la capacidad de dividirse
por periodos indefinidos en cultivos y dar lugar a las clulas especializadas. Se describen lo mejor posible en el
contexto del desarrollo humano normal.
El desarrollo humano comienza cuando un espermatozoide fertiliza un huevo y crea una clula que tenga el
potencial de formar un organismo entero. Este huevo
fertilizado es totipotente, lo que significa que su potencial es total. En las primeras horas despus de la fertili-
Ncleo
Clula
adulta
153
zacin, esta clula se divide en clulas totipotentes idnticas; esto significa que si cualquiera de estas clulas es
colocada en el tero de una mujer, tiene el potencial de
convertirse en feto. De hecho, los gemelos idnticos se
desarrollan cuando dos clulas totipotentes se separan y
se convierten en dos individuos genticamente idnticos. Unos cuatro das despus de la fertilizacin y despus de varios ciclos de la divisin celular, estas clulas
totipotentes comienzan a especializarse, formando una
esfera hueca de clulas llamada blastocisto. El blastocisto tiene una capa externa de clulas y en su interior
hay un racimo de clulas internas llamadas masa celular
interna.
La capa externa de clulas continuar formando la
placenta y otros tejidos necesarios para el desarrollo fetal en el tero. Las clulas de la masa celular interna seguirn desarrollndose y formando todos los tejidos del
cuerpo humano. Aun cuando estas clulas pueden formar cada tipo de clula encontrado en el cuerpo humano, no pueden formar un organismo, porque no pueden
formar tejidos extraembrionarios ni la placenta. Las clulas de la masa celular interna son pluripotentes; pueden dar lugar a muchos tipos de clulas, aunque no todos
los tipos de clulas necesarias para el desarrollo fetal
porque su potencial no es total. Las clulas madre pluripotentes experimentan una especializacin adicional en
las clulas madre que darn lugar a las clulas que tienen una funcin determinada. Estas clulas madre especializadas se llaman multipotentes y tambin se encuentran en nios y adultos.
Citoplasma
Fines
1. Investigacin
2. Tratamiento
Embrioblasto
(masa celular
interna)
Clulas
madre
embrionarias
Fusin
Embrin
Mrula
Blastocisto
Reproduccin
Obtencin de un
individuo
B
genticamente
igual al donante
del ncleo celular
vulo
Citoplasma
Ncleo
Figura 62. Aplicaciones de la clonacin de embriones humanos. A. Clonacin teraputica (permitida). B. Clonacin reproductiva
(prohibida).
154
Actualmente, las lneas de las clulas pluripotentes

humanas se han desarrollado a partir de dos fuentes de
forma experimental en modelos animales:
1. En el trabajo hecho por el Dr. Thomson, las clulas
madre pluripotentes fueron aisladas directamente
de la masa celular interna de embriones humanos
en etapa de blastocisto. El Dr. Thomson utiliz
embriones excedentes obtenidos por fertilizacin
in vitro (FIV) de clnicas de infertilidad. Los
embriones fueron desarrollados para propsitos
de reproduccin, no de investigacin. Se obtuvo el
consentimiento de las donantes. El Dr. Thomson
aisl clulas de la masa celular interna y las cultiv, produciendo una lnea celular pluripotente.
2. El Dr. Gearhart aisl las clulas madre pluripotentes
del tejido fetal obtenido de embarazos terminados.
Se obtuvo el consentimiento de las donantes despus de que hubieron tomado de manera independiente la decisin de terminar su embarazo. Aunque las clulas desarrolladas en el laboratorio del
Dr. Gearhart y en el laboratorio del Dr. Thomson se
obtuvieron de diversas fuentes, son muy similares.
El uso de la transferencia nuclear de la clula somtica
(SCNT) puede ser otra fuente de obtencin de clulas
madre pluripotentes. En estudios con animales usando
SCNT, a un ovocito se le extrae el ncleo, luego se asla
una clula somtica, otro cigoto o un espermatozoide,
y se fusiona con el cigoto enucleado. La clula fundida
resultante y sus descendientes son totipotentes hasta la
etapa de mrula. Las clulas de la masa celular interna
de este blastocisto se pueden utilizar para desarrollar
lneas celulares pluripotentes.
APLICACIONES DE LAS CLULAS

MADRE PLURIPOTENTES
Y MULTIPOTENTES
Las clulas madre pluripotentes, estimuladas para convertirse en clulas especializadas, ofrecen la posibilidad
de una fuente renovable de clulas y tejidos para tratar
enfermedades neurodegenerativas como Parkinson y
Alzheimer, lesin de la mdula espinal, quemaduras,
enfermedad cardiaca, diabetes, osteoartritis y artritis
reumatoide. El trasplante de clulas madre sanas al
msculo del corazn proporciona una nueva esperanza
para los pacientes con enfermedad cardiaca crnica.
(Captulo 6)
Trabajos preliminares en ratones y otros animales han

demostrado que las clulas madre sanas trasplantadas
en el corazn trabajan con xito en el tejido del corazn
junto con las clulas husped. En la diabetes, la produccin de insulina por las clulas pancreticas especializadas se interrumpe. Existe evidencia de que la terapia
celular atena la necesidad de inyecciones de insulina
y de hipoglucemiantes.
Las clulas madre o troncales tienen el potencial de
curar muchas enfermedades humanas porque:
S Son como clulas en blanco, con el potencial de
convertirse en cualquier tipo de clula del cuerpo
humano.
S Perduran; los embriones, en particular, pueden
proveer una cantidad ilimitada de clulas madre.
S Son regenerativas, pudiendo ser usadas como una
fuente viva para la autorreparacin.
Sabemos que nuestro cuerpo est formado de clulas de
diferentes tipos (clulas de la sangre, clulas de la piel,
clulas cervicales). Sin embargo, a menudo nos olvidamos de que todos estos tipos diferentes de clulas surgieron de una sola clula, el huevo fertilizado. Los bilogos del desarrollo estudian los extraordinarios
eventos que ocurren entre el momento de la fertilizacin
del huevo y la formacin de un nuevo individuo.
S Los primeros pasos simplemente involucran a la
divisin celular: una clula se convierte en dos
clulas, dos clulas en cuatro clulas, etc.
S Cada una de estas clulas individuales en el desarrollo temprano no est especializada (diferenciada), es decir, no posee an una funcin especfica
en el organismo, aunque tiene la capacidad de contribuir a la formacin de los rganos de un individuo. As, se la conoce como totipotente.
S Estas clulas se llaman clulas madre embrionarias y tienen tanto la capacidad de autorrenovarse,
manteniendo as un suministro continuo de clulas madre, como tambin la habilidad de dar origen a clulas especializadas (diferenciadas), como
las clulas del hgado o del cerebro.
S Se cree que una vez que se diferencian, las clulas
permanecen en este nuevo estado, por lo general
perdiendo su habilidad para dividirse.
En los adultos tambin existen clulas madre y permiten
que ciertos tejidos se regeneren durante la vida. Tambin tienen la capacidad de autorrenovarse y diferenciarse en linajes mltiples. De hecho, la lista que identifica las clulas madre en adultos y las lneas especficas

de clulas progenitoras (con habilidades limitadas de
autorrenovacin) est aumentando.
El uso clnico principal de las clulas madre es como
una fuente de clulas donantes, las cuales se usan en el
reemplazo de clulas durante las terapias de trasplante.
Las clulas madre pueden obtenerse de varias fuentes:
S Embriones de repuesto: las clulas madre pueden provenir de embriones extra que han sido almacenados en clnicas de fertilidad y que no fueron utilizados por las parejas donantes para la
concepcin de hijos.
S Embriones de propsito especial: son embriones creados por medio de fertilizacin artificial in
vitro (en el laboratorio) con el propsito especfico de obtener clulas madre.
S Embriones clonados: son embriones clonados en
laboratorios por medio del mtodo de transferencia somtica nuclear, con el fin de recolectar sus
clulas madre.
S Fetos abortados: los fetos de desarrollo temprano que han sido abortados contienen clulas madre, las cuales pueden ser recolectadas.
S Cordones umbilicales: este tejido posparto posee
potencial para la investigacin.
S Tejidos u rganos adultos: se pueden obtener clulas madre de tejidos u rganos provenientes de
adultos vivos durante la ciruga.
S Cadveres: el aislamiento y supervivencia de clulas progenitoras neurales de tejidos post mortem
(hasta 20 h despus de la muerte) ha sido reportado
y proporciona una fuente adicional de clulas
madre humanas.
Las clulas madre embrionarias deben obtenerse cuando el embrin se encuentre en un estado temprano de su
desarrollo, es decir, cuando el huevo fertilizado se haya
dividido hasta formar unas 100 clulas. stas se separan
y se mantienen en un envase de cultivo celular, detenindose as el desarrollo embrionario que lleva a la
creacin de un individuo. Es por esto que la investigacin en clulas madre embrionarias es el tpico de debates ticos. El uso de clulas madre de adultos ocasiona
menos dilemas ticos. Sin embargo, las clulas madre
de adultos pueden no tener el mismo potencial para usos
mdicos teraputicos que las obtenidas de los embriones.
Los blastocistos se obtienen haciendo lavados del
tero con DPBS o con algn medio de cultivo adicionado con 10 o 16% de suero fetal bovino. Despus, los
blastocistos intactos se cultivan sobre clulas nodrizas
que secreten LIF. A los 4 o 5 das los blastocistos se
adhieren y las clulas del ambrioblasto crecen forman-
155
do colonias redondas y compactas, las cuales son aisladas y disgregadas con tripsina, para sembrarlas sobre
clulas nodrizas nuevas; Despus de 3 o 4 das nuevamente se buscan las colonias redondas compactas y se
realizan los subcultivos.
Para obtener slo las clulas del embrioblasto se utiliza la tcnica de inmunociruga, que consiste en la
destruccin mediada por el complemento de las clulas
del trofoblasto, mediante un anticuerpo que se une a dichas clulas; as, el embrioblasto puede ser separado fcilmente de los remanentes de las clulas trofoblsticas;
despus se colocan las clulas sobre clulas nodrizas.
Entre 9 y 15 das ms tarde se forman colonias esfricas
y compactas que pueden ser aisladas y disociadas para
la realizacin de subcultivos.
Caractersticas in vitro
de las clulas madre embrionarias
Durante el crecimiento de las clulas troncales embrionarias se realizan diferentes pruebas para conocer si efectivamente son clulas troncales embrionarias indiferenciadas; este proceso se denomina caracterizacin. Las
pruebas ms utilizadas en los laboratorios donde se cultivan lneas de clulas madre embrionarias son:
1. Crecimiento y subcultivo. Consiste en la realizacin de varios pases de propagacin para verificar que las clulas sigan manteniendo las caractersticas morfolgicas de colonias troncales
embrionarias indiferenciadas; es decir, que continen desarrollando colonias de clulas esfricas y
compactas por encima de las clulas nodrizas. En
un principio se pensaba que era indispensable
hacer crecer las clulas troncales embrionarias
junto con clulas nodrizas, para evitar que las primeras se diferenciaran; posteriormente se descubri que la mayora de las clulas troncales requieren un factor producido por las clulas
nodrizas, sin el cual se diferencian; este factor es
una citocina llamada LIF y su expresin es estimulada por las clulas troncales. Desde entonces,
las clulas troncales pueden cultivarse en ausencia
de clulas nodrizas, agregando LIF o citocinas, relacionadas como bFGF, SF y SCF; en algunas especies se han obtenido lneas de clulas troncales
que pueden mantenerse indiferenciadas sin necesidad de LIF.
2. Marcadores moleculares. Existen diversos marcadores moleculares para identificar a las clulas
troncales; entre los ms importantes se encuentran:
156
3.
4.
5.
6.

a. Marcadores de superficie. Son protenas especializadas o azcares localizados en el nivel de
la membrana citoplasmtica. De estas molculas de superficie la ms utilizada para deteccin
es la SSEA1, o CD 15, FAl o trisaccharide
3fucosylNacetyllactosamine.
b. Factores de transcripcin. Son protenas que se
unen al DNA y ayudan en el encendido y apagado de genes especficos, como la protena
Oct4 (factor de transcripicin de la familia
POU), que se expresa en lneas celulares totipotenciales y pluripotenciales en clulas embrionarias tempranas y en algunas lneas de clulas
germinales.
Enzimas citoplasmticas. Una prueba de rutina
consiste en detectar la presencia de la enzima fosfatasa alcalina, que se expresa en grandes cantidades
en las clulas troncales embrionarias que permanecen en un estado indiferenciado.
Pruebas de cariotipo. Mediante esta prueba se
determina si los cromosomas son normales y estables. Este mtodo permite apreciar si los cromosomas estn daados o si el nmero de cromosomas
ha cambiado, aunque con esta tcnica no se pueden
detectar mutaciones genticas finas; es decir, en la
secuencia de DNA.
Diferenciacin. Se realizan ensayos para obtener
estirpes celulares que provengan de las tres hojas
germinales: ectodermo, endodermo y mesodermo.
Estos ensayos muestran la pluripotencialidad.
Formacin de cuerpos embrioides. Las clulas
troncales se cultivan en medio de cultivo lquido,
en ausencia de clulas nodrizas y sin factores que
las mantengan indiferenciadas, con la finalidad de
que formen agregados celulares denominados
cuerpos embrioides. Estas estructuras tienen clulas multidiferenciadas que siguen rutas similares
a las del embrin, pero sin la organizacin axial ni
la elaboracin de un plan de desarrollo corporal.
Asimismo, si se les adiciona cido retinoico, los
agregados celulares pueden propiciar cierto tipo de
clulas, aunque invariablemente darn origen a una
mezcla heterognea de clulas.
Clulas madre embrionarias y adultas

Las clulas madre embrionarias tienen ventajas y desventajas para uso teraputico, las cuales se mencionan
a continuacin:
(Captulo 6)
Ventajas
S Flexibles: tienen el potencial de formar cualquier
clula del cuerpo.
S Inmortales: un linaje celular puede potencialmente suministrar una cantidad infinita de clulas
con caractersticas definidas con cuidado.
S Fcilmente obtenibles: los embriones humanos
pueden obtenerse en las clnicas de fertilidad.
Desventajas
S Difciles de controlar: el mtodo para inducir al
tipo de clula a tratar una enfermedad en particular
debe ser definido y optimizado.
S Entrar en conflicto con el sistema inmunitario
del paciente: es posible que las clulas trasplantadas difieran en su perfil inmunitario de las del receptor y que sean entonces rechazadas.
S Ser ticamente controversiales: las personas
que creen que la vida comienza en el momento de
la concepcin dicen que el llevar a cabo investigaciones en embriones humanos no es tico aunque
el donante otorgue su consentimiento.
Las clulas madre adultas tambin poseen caractersticas
tanto adecuadas como difciles para el uso teraputico.
Ventajas
S Ya estn ms o menos especializadas: la induccin puede ser ms sencilla.
S Son inmunolgicamente resistentes: los receptores de los productos de sus propias clulas madre no sufren rechazo inmunitario.
S Son flexibles: las clulas madre adultas pueden
ser usadas para formar otros tipos de tejido.
S Tienen una disponibilidad variada: algunas clulas madre adultas son fciles de cosechar, mientras que cosechar otras, como por ejemplo, las clulas madre neurales (del cerebro), podra ser
peligroso para el donante.
Desventajas
S Estar disponibles en cantidades mnimas: es difcil obtenerlas en grandes cantidades.
S Finitas: no viven tanto tiempo bajo cultivo como
las clulas madre embrionarias.
S Genticamente inadecuadas: las clulas madre
cosechadas pueden llevar consigo mutaciones que
causan enfermedades o que pueden daarse durante la experimentacin.
Transdiferenciacin de
las clulas madre adultas
Se cree que las clulas madre adultas estn restringidas
a producir clulas diferenciadas, especficas a los rganos de los cuales fueron aisladas. Recientemente han
sido reportados varios ejemplos en los cuales se demuestra que estas clulas madre, bajo ciertas condiciones, pueden ser inducidas a producir otros tipos de clulas (transdiferenciacin), por ejemplo:
S Las clulas neurales madre (NSC, por sus siglas en

ingls) pueden dar origen a clulas de la sangre y
de msculo esqueltico.
S Las clulas de la mdula sea pueden dar origen
a msculo, a clulas del hgado y a astrocitos.
Cuando las NSC se utilizaron para formar msculo, no
se necesitaron ms inductores que el haberlas cultivado
con clulas de msculo progenitoras (mioblastos) o haberlas inyectado directamente al msculo. Estos resultados son prometedores para las terapias de trasplante
de clulas, debido a que los experimentos sugieren que
los tejidos receptores pueden instruir a las clulas trasplantadas y conseguir el resultado deseado. De esta manera los cientficos pueden considerar si es mejor para
las clulas madre ser diferenciadas in vitro (artificialmente) antes del trasplante o trasplantarlas directamente a los tejidos defectuosos. Algunos experimentos han
mostrado que las clulas madre trasplantadas naturalmente fueron capaces de migrar a regiones donde las clulas haban muerto debido a un derrame cerebral (por
un proceso llamado isquemia).
Las clulas madre ofrecen la oportunidad de trasplantar una fuente viva para la autorregeneracin. Los
trasplantes de mdula de los huesos (BMT, por sus siglas en ingls) son una reconocida aplicacin clnica del
trasplante de clulas madre. Los BMT pueden repoblar
la mdula sea y restaurar todos los tipos de clulas de
la sangre despus de que un paciente ha recibido elevadas dosis de quimioterapia o radioterapia, las cuales se
usan como tratamiento principal para eliminar las clulas
endgenas cancerosas. El aislamiento de clulas madre
y clulas progenitoras adicionales se est desarrollando
ahora para apoyar a muchas otras aplicaciones clnicas,
algunas de las cuales se describen a continuacin.
El conocimiento de las clulas madre ha hecho posible que los cientficos puedan hacer crecer nueva piel a
partir de cabellos removidos de la cabeza del paciente.
Las clulas madre de la piel (llamadas queratinocitos)
residen en los folculos del cabello y pueden ser removi-
157
das al arrancar el pelo con la raz. Estas clulas pueden

cultivarse para formar un equivalente epidrmico de la
piel de los pacientes y proveer tejido para un injerto
autlogo, eliminando el problema del rechazo. En la actualidad, este mtodo est siendo estudiado en pruebas
clnicas como alternativa a los injertos quirrgicos usados en los casos de lceras venosas y vctimas de quemaduras.
Las clulas madre neurales eran consideradas hasta
hace poco como estrictamente embrionarias. Numerosos
descubrimientos han comprobado que esto es incorrecto.
La identificacin y localizacin de clulas madre neurales, tanto embrionarias como adultas, ha sido un foco
importante de la investigacin reciente. Algunos objetivos importantes para los trasplantes de clulas madre
neurales son los pacientes con derrames cerebrales,
lesiones al cordn espinal y enfermedades neurodegenerativas como el Parkinson. Esta enfermedad conlleva
la prdida de clulas que producen el neurotransmisor
dopamina. El primer ensayo doble ciego de trasplantes
de clulas fetales para tratar la enfermedad de Parkinson
report una supervivencia y liberacin de dopamina
proveniente de las clulas trasplantadas y una mejora
funcional en los sntomas clnicos. Sin embargo, algunos pacientes desarrollaron efectos secundarios, lo cual
sugiere que hubo una sobresensibilizacin a la dopamina o demasiada dopamina producida. A pesar de que
estos efectos secundarios no se haban anticipado, el
xito del experimento a nivel celular es significativo.
De nuevo, se necesitan ms estudios y que continen los
estudios actuales. Hay ms de 250 pacientes que han recibido trasplantes de tejidos humanos fetales.
AVANCES EN BIOTECNOLOGA
S Diacrin ha estado desarrollando lo que llaman

xenotrasplantes, usando clulas fetales de cerdo.
Han comenzado las pruebas clnicas en pacientes
que han sufrido un derrame cerebral. Actualmente
estos pacientes necesitan recibir algn tratamiento
en las primeras 24 h despus del derrame para
poder obtener resultados teraputicos efectivos.
Muchos pacientes no reciben tratamiento a tiempo
porque los sntomas no son obvios al principio. La
terapia de Diacrin puede ser aplicada entre semanas y meses despus del trauma inicial.
S La estrategia de NeuroNova consiste en cultivar
clulas humanas adultas provenientes de donantes, diferenciarlas en cultivo para que produzcan
158
el tipo de clula deseada (neuronas dopaminrgicas que se pierden en la enfermedad de Parkinson)

y luego trasplantarlas directamente al cerebro de
los pacientes.
S Neurotech est utilizando clulas endoteliales
cerebrales alteradas (modificadas para producir
Interleucina2 humana) como una inmunoterapia
para el tratamiento de gliomas. Los resultados de
los experimentos en ratas han mostrado que estas
clulas recogen las clulas del tumor, lo cual ha
resultado en el inicio de un estudio clnico.
S Tratamiento para la diabetes: la diabetes afecta a
16 millones de personas en EUA y es causada por
el metabolismo anormal de la insulina. Normalmente la insulina es producida y segregada por
estructuras celulares del pncreas llamadas islotes
de Langerhans. Hace poco tiempo que se han podido generar clulas que expresan la insulina a
partir de clulas madre de ratn. Adems, estas clulas se autoorganizan para formar estructuras que
no slo se parecen mucho a los islotes pancreticos normales, sino que tambin producen insulina. Las investigaciones futuras necesitan enfocarse en formas de optimizar las condiciones para
la produccin de insulina, con el fin de proveer
una terapia basada en clulas madre para tratar la
diabetes que pudiera reemplazar la necesidad de
inyectarse insulina constantemente.
MATRIZ EXTRACELULAR (MEC)
Los componentes bioqumicos caractersticos de la

MEC son biopolmeros mixtos, formados por cadenas
de monosacridos y cadenas peptdicas, y entre ellos
hay desde glucoprotenas hasta proteoglicanos. La glucoprotena ms abundante de la MEC es el colgeno,
aunque tambin contiene fibrina y elastina, minerales
(hidroxipatita, una forma de fosfato clcico de la matriz
sea) y fluidos como plasma sanguneo o suero con antgenos en suspensin. Tambin forman parte de la MEC
los oligosacridos de las glucoprotenas, que forman
parte integral de la membrana plasmtica, y de los glucolpidos, los cuales en conjunto forman el glucocliz.
Muchas clulas estn ligadas a componentes de la MEC
por medio de protenas especializadas integradas en la
membrana plasmtica y que se llaman integrinas. Por la
cara citoplasmtica las actinas se conectan con la trama
superficial del citoesqueleto; por la cara externa se co-
(Captulo 6)
nectan con protenas como colgeno, lamininas y fibronectina. Sus componentes fundamentales son:
1. Protenas fibrilares.
2. Glucoprotenas estructurales en pequea proporcin que participan en la adhesin celular.
3. Glucosaminoglicanos (GAG).
Protenas fibrilares
Existen cuatro protenas que forman fibrillas en la matriz extracelular. La funcin de estas protenas formadoras de fibras es ofrecer diferentes propiedades tensiles
y elsticas a los tejidos de sostn y dar anclaje a otros
elementos celulares de los tejidos. Las protenas fibrosas son los elementos bsicos estructurales de los tejidos
conectivos.
1.
2.
3.
4.
Elastina.
Fibrilina.
Fibronectina.
Colgeno.
Al microscopio ptico y electrnico se observan estructuradas en tres tipos de fibras, que se denominan fibras
de tejido conectivo. Estas microfibrillas conectan los
componentes de la MEC.
1. Fibras elsticas.
2. Fibras reticulares.
3. Fibras colgenas.
Las fibras son de dos tipos moleculares: colgenas y
elsticas, ya que las fibras reticulares contienen colgeno en su estructura. Las fibras colgenas son flexibles
y muy resistentes a la traccin. Existen mltiples variedades de colgeno que dan lugar, al menos, hasta a 12
tipos de fibras colgenas. Las fibras elsticas se caracterizan por su elasticidad y su matriz est constituida por
una protena no glucosilada llamada elastina. Con la
edad disminuyen las microfibrillas, y la elastina se fragmenta y se desintegra.
El colgeno es la protena ms abundante del organismo. Se sintetiza por los fibroblastos y se presenta en
fibras y haces de fibras como escleroprotena; se organiza en unidades moleculares bsicas llamadas tropocolgeno. Es el componente esencial de los tendones y de
la MEC que rodea a las clulas seas en el hueso. Tambin es un componente del tejido conectivo de hueso,
crnea, dentina y tendones. Existen 20 tipos de cadenas
polipeptdicas de colgeno que se combinan y producen

distintos tipos desde el punto de vista morfolgico,
dependiendo de la combinacin de 25 cadenas distintas
polipeptdicas que se trenzan para formar las unidades
de tropocolgeno.
Los colgenos que tienen sus triples hlices truncadas se denominan FACIT e incluyen los tipos IX, XII,
XIV, XVI y XIX. El colgeno tipo I se encuentra en la
dermis (70% de lo que se denomina piel es colgeno).
Otros colgenos estn en los cartlagos, el tero y la
pared de los vasos sanguneos, en la lmina basal y en
el tejido conectivo subyacente. Las fibrillas de colgeno
colaboran en la formacin de un continuo estructural
uniendo entre s a grupos de clulas para formar un
tejido. De acuerdo con la estructura que forman, se dividen en:
1.
2.
3.
4.
5.
Colgenos fibrilares tipo I, II, III, V y XI.

Colgenos de cadena corta tipo VIII y X.
Colgeno de la membrana basal tipo IV.
Colgeno tipo FACIT: IX, XII, XIV y XIX.
Otros colgenos tipo VI, VII, IX, XII y XIII.
El colgeno contiene gran cantidad de glicina y prolina,

as como aminocidos que no fueron insertados por el
ribosoma, como la hidroxiprolina y la hidroxilisina,
aminocidos transformados mediante la accin de vitamina C. El colgeno est formado por una protena precursora llamada tropocolgeno que est formada por
tres cadenas polipeptdicas llamadas cadenas a, las cuales se sintetizan por los fibroblastos. Estas cadenas tienen una configuracin helicoidal levgira. Las tres
cadenas se pliegan y se fijan mediante enlaces transversales para formar una triple hlice dextrgira.
Glucoprotenas estructurales
extracelulares o protenas adhesivas
(adhesinas)
Son protenas no filamentosas que intervienen en la interaccin clulaMEC e interactan con receptores especficos de la superficie celular. La fibronectina es la
ms abundante y presenta una estructura filamentosa.
Esta protena est por toda la MEC y se deposita sobre
la superficie de diversos tipos celulares, favoreciendo la
adhesin de clulas entre s. Su funcin es contribuir al
anclaje de los epitelios a la MEC y formar parte de la
lmina basal.
Las protenas mejor caracterizadas son:
1. Fibronectina.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
159
Trombospondina.
Laminina.
Vitronectina.
Entactina.
Tenascina.
Selectinas.
Anexinas.
Las molculas de adhesin celular (CAM) se unen a receptores especficos ubicados en otras clulas o a la
MEC, facilitando las interacciones celulares y la migracin de ellas por los diferentes tejidos. Tambin transducen seales reguladoras de la transcripcin celular
luego de la interaccin con sus ligandos.
Estructuralmente existen cinco familias de CAM:
1.
2.
3.
4.
5.
Cadherinas.
Integrinas.
Selectinas.
Superfamilia de inmunoglobulinas.
Protenas de la MEC.
Las CAM son un grupo diverso de protenas involucradas en procesos biolgicos de vital importancia, como
la embriognesis, la reparacin tisular, la diferenciacin, el crecimiento, la comunicacin y la movilizacin
celular. Las CAM son glucoprotenas ubicadas en la
superficie celular que actan como receptores celulares,
aunque tambin se encuentran en la matriz tisular, y
mediante ellas se efectan las interacciones especficas
clulaclula y clulamatriz. Estas glucoprotenas tienen en un extremo un grupo carboxiloterminal, que se
encuentra fijo en el citoplasma y en el citoesqueleto.
Despus del carboxilo terminal est la regin transmembrnica, que atraviesa la membrana celular. El
resto de la glucoprotena se ubica extracelularmente y
termina en un grupo aminoterminal que da a la molcula
la especificidad para unirse a otras CAM.
Las CAM pueden ser monomricas, dimricas y
heterodimricas. Estas protenas pueden ser homoflicas o heteroflicas. Son homoflicas aqullas que se
unen especficamente a otras CAM idnticas a ellas
mismas, y heteroflicas las que lo hacen con otros receptores o CAM diferentes. Una determinada CAM puede
unirse de manera homotpica si lo hace con receptores
ubicados en el mismo tipo de clulas donde se encuentra.
La unin de CAM de clulas diferentes se llama heterotpica. Hay CAM constitutivas de una clula y otras que
requieren activacin previa antes de expresarse.
Las molculas de adhesin celular neural (NCAM)
son glucoprotenas de membrana, dos son transmembrnicas y la tercera est unida a la superficie celular
mediante un anclaje glucosilfosfatidilinositol (GPI).
160
Las molculas de adhesin cumplen dos funciones

principales:
1. Se unen a ligandos especficos ubicados en otras
clulas o en la MEC, facilitando las interacciones
celulares y la migracin de ellas por los diferentes
tejidos.
2. Transducen seales reguladoras de la transcripcin
de genes despus de interactuar con sus ligandos.
Las cadherinas estn presentes en la superficie de las
clulas epiteliales; su molcula est compuesta por 700
a 750 aminocidos, 4 de los cuales son homlogos. Son
protenas homodimricas que median adhesiones intercelulares homoflicas dependientes de calcio y temperatura que se unen a cadherinas idnticas expresadas en
clulas homotpicas o heterotpicas para establecer contacto clulaclula. Participan en la separacin histognica, migracin de las clulas y la diferenciacin de los
tejidos embrionarios, as como en la formacin de uniones entre clulas adyacentes.
Se han clasificado como E, P, N, R y M de acuerdo
con el lugar donde fueron caracterizadas (endotelio, trofoblasto, sistema nervioso, retina y mioblastos). Las
cadherinas intervienen en la adhesin celular, persistencia de los espacios intercelulares, desarrollo y crecimiento embrionario, implantacin de los blastmeros y
la morfognesis.
Las integrinas son glucoprotenas heterodimricas
de membrana (con una cadena a y una b); se han caracterizado 16 subunidades a y 8 subunidades b. Estas subunidades se unen por medio de enlaces no covalentes,
formando ms de 20 combinaciones diferentes.
Las selectinas o LECCAM se expresan en clulas
relacionadas con la fisiologa vascular (leucocitos, plaquetas y endotelio) y contienen un dominio lectina. Las
selectinas tienen tres dominios extracelulares. Aunque
las selectinas tienen un dominio corto intracelular, pueden transducir seales regulatorias que afectan la funcin de las integrinas y la produccin de citocinas. Estas
molculas median la adhesin laxa de los leucocitos a
las clulas endoteliales activadas durante los procesos
inflamatorios y son necesarias para la migracin de los
linfocitos a los ndulos linfoides perifricos durante la
circulacin y recirculacin linfocitaria. La familia de
las selectinas puede expresarse como molculas de superficie (E y L selectinas); aqullas pueden ser almacenadas en los grnulos a de las plaquetas o en los cuerpos
de WeibelPalade de las clulas endoteliales (Pselectina), o actuar como molculas solubles (Lselectina).
Las tres selectinas tienen relacin con la interaccin
clulaclula entre leucocitos y clulas endoteliales. Su
(Captulo 6)
funcin ms importante es la adhesin inicial de neutrfilos y monocitos al endotelio activado por citocinas, lo
que permite luego la quimiotaxis mediada por integrinas y la migracin transendotelial. Sus ligandos son carbohidratos fucosilados, sialilados o sulfatados (p. ej., el
Sialil LewisX que se expresa sobre los leucocitos); las
adhesiones que llevan a cabo son por lo general de tipo
heteroflico, dependientes de calcio y de carcter transitorio (duran slo milisegundos). Estas molculas median la adhesin laxa de los leucocitos a las clulas
endoteliales activadas durante los procesos inflamatorios y son necesarias para la migracin de los linfocitos
a los ndulos linfoides perifricos durante la circulacin
y recirculacin linfocitaria.
Las molculas de la superfamilia de inmunoglobulinas (Ig) son receptores celulares que incluyen un gran
nmero de protenas. Todas comparten una regin de 60
a 100 aminocidos entre dos cisternas y dispuestos en
dos bandas antiparalelas unidas por puentes disulfuro.
Estas bandas forman un pliegue de inmunoglobulina
que constituye un dominio. Todos los miembros de esta
familia poseen al menos uno de estos dominios. Algunas de estas protenas son secretadas y dejan de ser receptores de superficie.
Pueden ser monomricas, dimricas o heterodimricas y subdividirse en:
S Tipo C1: involucradas en el reconocimiento de
los antgenos; se incluyen aqu los receptores antignicos de los linfocitos T y B, los anticuerpos y
las molculas del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH).
S Tipo C2: protenas de adhesin celular y fijadoras
del complemento; incluyen molculas de acciones
muy diversas, desde adhesin neuronal (NCAM),
coestimulacin celular (CD28, CD80, CD86,
CTLA4) y molculas de adhesin como CD31.
Glucosaminoglicanos (GAG)
y proteoglicanos
Componentes fluidos o matriz amorfa, los GAG o mucopolisacridos son polisacridos complejos. Entre los
ms comunes en la sustancia extracelular estn el cido
hialurnico o hialuronano (el de mayor tamao y no est
sulfatado), el condroitinsulfato, el dermatansulfato, el
heparansulfato y el queratansulfato. stos, al combinarse con protenas, forman proteoglicanos. Los GAG
son molculas muy cidas, con numerosas cargas negativas que atraen grandes cantidades de sodio y agua, lo
cual aumenta la turgencia de la MEC; por ello, la dermis

es una masa gelatinosa con gran capacidad de hidratacin y con influencia en la turgencia y tirantez de la piel.
Los GAG son grandes cadenas de polisacridos que se
dividen en cuatro grupos dependiendo de su estructura:
1.
2.
3.
4.
cido hialurnico.
Condroitinsulfato y dermatansulfato.
Heparansulfato y heparina.
Queratansulfato.
Los proteoglicanos son una familia de molculas caracterizadas por un ncleo proteico al cual se unen una o
ms cadenas laterales de glucosaaminoglicano, mediante las cuales interactan con las protenas de la
matriz y con factores de crecimiento. Adems de formar
parte de la MEC, tambin se expresan en superficies
celulares para facilitar su unin a la matriz. Entre estas
molculas est el sindecano (antgeno CD138), que se
ubica en la superficie de las clulas epiteliales, permitiendo su unin al colgeno y estabilizando los epitelios.
Los proteoglicanos pueden localizarse en el exterior de
las clulas, intercalados en las membranas de las clulas, o acumularse intracelularmente en grnulos. Los
proteoglicanos son grandes aniones policovalentes; las
cargas negativas fijan cationes (Na, K y Ca) en los espacios de cada dominio.
DESARROLLO DE LA PLACENTA
El desarrollo del producto en el tero est ligado anatmica y metablicamente al de la placenta, rgano de
existencia transitoria que durante 9 meses funciona
como pulmn, rin, intestino y glndula encargados de
cubrir las necesidades fetales. Durante su breve existencia, la placenta suministra todas las sustancias que el
feto necesita; es la nica va activa selectiva para obtener y eliminar productos de desecho; posee metabolismo propio, capaz de modificar molculas de procedencia fetal o materna. Bajo la influencia que ejerce la
presencia de progesterona, el endometrio se prepara
para la implantacin. En la actualidad se dispone de dos
marcadores de receptividad epitelial: bioqumico y
morfolgico.
El marcador bioqumico es la existencia de un patrn
de integrinas adecuado (glucoprotenas de membrana
celular, cuya funcin es la fijacin de las clulas a la
matriz extracelular mediante lugares de reconocimiento
especfico en la membrana extracelular, consistentes en
161
el tripptido argininaglicinaasprtico). Se conoce la

existencia de 15 subunidades a y b; dichas subunidades
se asocian formando dmeros que confieren posibilidad
de adhesin a sustratos. El tripptido argininaglicina
asprtico es la secuencia de reconocimiento presente en
distintas matrices extracelulares como fibronectina, vitronectina, colgeno, fibringeno, factor von Willebrand, osteopontina, tenascina, laminina y entactina.
Durante la ventana de implantacin (das 20 a 24), que
corresponde al periodo de mxima receptividad del
endometrio, existe coexpresin de subunidades a1, a4
y b3 en el epitelio endometrial. La b3 abre la ventana y
la desaparicin de a4 la cierra.
El marcador morfolgico est dado por la presencia
de formaciones saculares en la porcin apical de las clulas epiteliales (pinpodos) el da 20 del ciclo y permanecen de 24 a 48 h. Su funcin parece ser la succin de
lquido endometrial haciendo coalescer las paredes
endometriales y favoreciendo la aposicin del embrin.
Periodo de adhesin
Por accin de la progesterona los capilares sanguneos
aumentan su permeabilidad en el lugar en que se producir la adhesin, desencadenada por produccin local de
prostaglandinas PGE2 y PGF2a.
En el estroma endometrial se producen cambios por
accin del trofoblasto, principalmente en el punto de
implantacin. Las clulas del estroma uterino se alargan, el citoplasma se llena de glucgeno y gotas de lpido, dando la apariencia de un panal de miel (reaccin
decidual). La clula sintetiza glucgeno, glucoprotenas y receptores a factores de crecimiento semejantes a
insulina, cuyos efectos se desconocen.
En las primeras fases del embarazo, las glndulas
permanecen en estado secretor. Las clulas se observan
distendidas, con citoplasma claro y ncleos grandes e
hipercromticos (fenmeno de AriasStella). Las glndulas endometriales comparten antgenos de membrana
con el citotrofoblasto. La expresin de antgenos de histocompatibilidad mayor MHC tipo I est ausente en la
decidua de la octava a la dcima semana de gestacin;
las MHC tipo II estn presentes en pequeas cantidades.
En la matriz extracelular se forma una densa red
fibrosa que slo se disuelve en el lugar de implantacin
del blastocisto por la accin de enzimas proteolticas
trofoblsticas o la liberacin de relaxina por parte de
clulas endometriales. A medida que avanza el embarazo, las clulas del estroma originan una membrana
basal, constituida por colgena tipo IV, laminina, proteoglicano, heparnsulfato y glucoprotenas.
162
Durante las primeras fases del embarazo, en los ganglios linfticos uterinos se localizan clulas derivadas
de la mdula sea, cuya morfologa es semejante a linfocitos grandes. Estas clulas se dispersan por toda la
decidua o se agrupan con linfocitos T. Se encuentran,
adems, macrfagos positivos para HLA clase II, en la
decidua y adyacentes a las arterias espiraladas. Conforme avanza la gestacin, el nmero de macrfagos y
clulas T deciduales permanece relativamente constante, pero el de linfocitos de grnulos grandes disminuye.
La mayora de los cambios deciduales de las primeras etapas del embarazo dependen de los niveles hormonales maternos y no del trofoblasto, adems de la accin
de citocinas sintetizadas por clulas del estroma; secreciones de clulas T, macrfagos y expresin del receptor para interleucina IL4 por las clulas epiteliales
glandulares deciduales, que podra desempear un papel estimulante del crecimiento de las clulas epiteliales. Los esteroides ovricos regulan integrinas y citocinas endometriales as como los pinpodos, preparando
al endometrio para su periodo de mxima receptividad.
El endometrio detecta la presencia del embrin, libera
molculas que actan sobre el embrin para hacerlo
competente para la implantacin. El embrin secreta
interleucina IL1, que acta sobre el endometrio para
que incremente integrinab3 y favorezca la adhesin
embrionaria. Los sistemas enzimticos que regulan la
implantacin estn determinados por citocinas, molculas de adhesin, TGFb y hormonas.
El endometrio que reviste la cavidad uterina se divide
en tres regiones segn su relacin con el producto de la
gestacin: decidua basal, situada directamente debajo
de la vescula corinica, que formar la placenta en
colaboracin con el corion; decidua capsular, que cubre
el resto de la vescula blastodrmica, y decidua parietal,
que reviste la cavidad uterina restante. El mecanismo
molecular por el cual el trofoblasto y el epitelio endometrial parecen relacionarse es a travs de las molculas
de adhesin, fundamentalmente la unin de integrinas
del endometrio con sus receptores (fibronectina, laminina, etc.) situados en el blastocisto o a la inversa.
S Citocinas. Factor fundamental en la implantacin
embrionaria.
S Factor estimulante de colonias 1 (CSF1). Citocina que favorece la adhesin del blastocisto al endometrio.
S Factor inhibidor de leucemia (LIF). Citocina que
favorece la adhesin del blastocisto al endometrio.
S Interleucina1 (IL1). Involucrada en el proceso
de adhesin; su bloqueo especfico inhibe la implantacin.
(Captulo 6)
A partir de la fase de mrula, un grupo de pequeas clulas perifricas (micrmeras) se diferencian desde las
clulas centrales (macrmeras) para dar origen al trofoblasto. El blastocisto temprano consta de 64 clulas; 15
de la masa celular interna estn destinadas a desarrollar
el embrin y las 49 restantes se transformarn en trofoblasto. As pues, los tejidos embrionarios y extraembrionarios difieren en una fase muy temprana del desarrollo en la que la divisin celular es muy rpida.
Inicialmente el trofoblasto constituye una capa unicelular que se dispone en la periferia de la futura yema embrionaria. A medida que la nidacin progresa, las clulas trofoectodrmicas del polo embrionario se adhieren
directamente al revestimiento uterino y lo invaden,
evento que se ve facilitado posiblemente por la secrecin de proteasas por parte del trofoblasto.
Periodo de invasin
Una vez ocurrida la nidacin prosigue la penetracin
del endometrio materno por el trofoblasto embrionario.
A medida que el embrin se aproxima al final de la
segunda semana, el trofoblasto desplaza, disocia y sustituye a las clulas epiteliales (implantacin por desplazamiento). Despus de la invasin del blastocisto hacia
el interior de la mucosa uterina, unos 7 u 8 das posconcepcin, el trofoectodermo produce dos tipos celulares
sumamente proliferativos e invasores, necesarios para
establecer contacto con la circulacin sangunea materna y elaborar la estructura bsica de la placenta. Despus de la implantacin, el trofoblasto comienza a moldearse en masas de aspecto semejante a vellosidades,
que en un principio constan totalmente de epitelio, sin
ncleo, de tejido conectivo y separadas por lagunas
maternas. El revestimiento de la vellosidad placentaria
se origina a partir de dos capas de trofoblasto:
a. Interna o citotrofoblasto (clulas de Langerhans),
constituida por grandes clulas individuales, ovaladas o redondeadas, con ncleo vesiculoso de
cara abierta y nucleolo voluminoso, aparato de
Golgi y retculo endoplsmico granular poco desarrollados y abundantes mitocondrias. Estas
clulas se reproducen activamente por mitosis.
b. Externa o sincitiotrofoblasto, que originada del citotrofoblasto presenta numerosos ncleos sin paredes celulares. El sincitiotrofoblasto tiene mltiples microvellosidades, su superficie libre estar
baada por la sangre materna de la cmara intervellosa, mientras que su cara basal descansa sobre el
citotrofoblasto. Posee numerosos ncleos sin con-

torno celular, retculo endoplsmico rugoso y aparato de Golgi muy desarrollados, numerosas mitocondrias, gotitas lipdicas y ribosomas libres.
En sus primeras fases, la placenta est dominada por el

componente celular trofoblstico (vellosidad primaria: citotrofoblasto y sincitiotroblasto). Posteriormente
se integra a la vellosidad un ncleo mesodrmico central (vellosidad secundaria: citotrofoblasto, sincitiotrofoblasto y mesodermo extraembrionario) y finalmente se constituye la circulacin vellosa mediante
capilares sanguneos (vellosidad terciaria: citotrofoblasto, sincitiotrofoblasto, mesodermo extraembrionario y endotelio de los capilares sanguneos).
El proceso de diferenciacin del citotrofoblasto a lo
largo de la etapa invasiva comprende mltiples pasos:
cuando se agrupan en columnas, pierden su capacidad
de divisin; a medida que invaden la pared uterina
aumentan la expresin de metaloproteinasa MMP9,
HLAG (molcula de histocompatibilidad de clase I,
importante para evitar el rechazo del feto por parte de
la madre) y hormonas especficas que incluyen lactgeno placentario humano (h LP).
S Receptor laminina a6 b4. Se expresa en clulas
epiteliales del citotrofoblasto y disminuye cuando
se diferencia el tejido.
S Fibronectina y receptor a5 b1. Aumentan en las
columnas celulares de citotrofoblasto cuando se
diferencia. Disminuye la invasin del trofoblasto.
S Colgeno IV y receptor a1 b1. Aumentan la invasin del trofoblasto.
S Integrinas a. Modulan el proceso invasivo.
S Ecadherina. Disminuye en zonas donde la invasin es activa.
S VEcadherina. Aumenta la invasin, se expresa
en el endotelio de vasos de sangre fetal y columnas
celulares.
El sincitiotrofoblasto que reviste la vellosidad se caracteriza por sus propiedades de absorcin y secrecin. Se
adelgaza e incrementa el nmero de microvellosidades
en algunas regiones (zonas de transferencia) donde se
lleva a cabo el mayor intercambio de sustancias, mientras que en otras permanece engrosado, con abundantes
conglomerados nucleares y retculo endoplsmico rugoso (zonas de sntesis). En el sincitiotrofoblasto se observan adems microcuerpos con funciones digestivas
o degenerativas y grnulos densos de paquetes de hormonas polipeptdicas. La lmina basal est formada por
163
colgeno tipo IV permeable a la mayora de las sustancias que cruzan la barrera placentaria.
Se ha localizado trofoblasto metablicamente activo
en: amniocorion, zona de unin maternofetal, citotrofoblasto de las columnas celulares corticales, trofoblasto
intersticial que invade la decidua basal, clulas gigantes
del trofoblasto que emigran al miometrio, citotrofoblasto intraarterial endovascular y ncleos trofoblsticos en
pulmn materno.
El tejido conectivo laxo que ocupa el centro de la
vellosidad consta de dos tipos de clulas:
a. De Hofbauer, ovoides, de ncleo excntrico,
cuyas funciones son fagocitosis y equilibrio
hidroelectroltico.
b. Fibroblastos. El estroma de las vellosidades est
formado por tejido conjuntivo fibroso laxo, rico en
agua, y fibras reticulares (las fibras colgenas
estn ausentes hasta el final del primer trimestre).
La sustancia fundamental del tejido conjuntivo posee
gran cantidad de cido hialurnico y del condroitn sulfrico, relacionados con la permeabilidad de la placenta. A partir de las semanas 7 y 8 disminuye la viscosidad
de la sustancia fundamental por despolimerizacin del
cido hialurnico y condroitn sulfrico, adems del aumento de la actividad de la hialuronidasa, lo que crea
condiciones favorables para el metabolismo materno
fetal.
Entre la lmina basal y el corion se forma un rbol
velloso placentario conformado por vellosidades corinicas. Los troncos vellosos y sus ramas contienen vasos
sanguneos y redes capilares a travs de los cuales circula sangre fetal. La superficie de las vellosidades coriales
est baada por sangre materna, extravasada de las arterias deciduales, que circula por los espacios intervellosos o lagunas (placenta hemocorial). La mayora de las
vellosidades quedan libres en los espacios de la decidua
basal, pero algunas se ponen en contacto ntimo con los
tejidos maternos (vellosidades fijas o empotradas);
otras forman columnas de tejido trofoblstico sin soporte conectivo (columnas celulares).
En las vellosidades jvenes del primer trimestre los
vasos coriales son centrales, escasos y de dimetro pequeo, y la relacin entre clulas del citotrofoblasto y
el sincitiotrofoblasto es equivalente; en las del tercer trimestre el sincitiotrofoblasto se adelgaza, las clulas de
citotrofoblasto y de Hofbauer desaparecen casi por
completo y los vasos sanguneos incrementan su tamao y su nmero. A partir del sptimo mes, la sangre
materna y fetal se halla separada por una membrana de
164
5 a 6 mm, constituida fundamentalmente por sincitiotrofoblasto y endotelio capilar.

A medida que crece la placenta los vasos sanguneos
de la decidua materna experimentan dos tipos de relaciones con el citotrofoblasto. En primer lugar, dentro
del lumen de los vasos se encuentran agregados de citotrofoblasto, tanto en la superficie apical del endotelio
como reemplazando a ste, de tal modo que parecen
unidos directamente a la pared del vaso en las semanas
6 a 8 y afectan las arterias espirales desde el extremo distal hasta la unin de la decidua basal con el miometrio,
por lo que se observan clulas de citotrofoblasto en la
luz de las arterias (fase intraluminal). En un segundo
tipo de interaccin, las clulas del citotrofoblasto se
encuentran detrs de la pared del vaso, colonizando el
msculo liso de ste y unindose subyacentemente al
endotelio (fase intramural).
Al final del segundo trimestre los vasos estn formados exclusivamente por clulas del citotrofoblasto y no
se aprecian clulas endoteliales en los segmentos del
miometrio; el tejido muscular y elstico es sustituido
por fibrina y el vaso adquiere aspecto sinusoidal, lo que
permite que la sangre materna entre a presin en las lagunas. Este tipo de fenmenos se acompaa de eventos
bioqumicos que favorecen la vasodilatacin e impiden
la oclusin del vaso por restos celulares, agregacin plaquetaria y adhesin celular propiciada por la lesin vascular. Finalmente, el trofoblasto deportado se disemina
a travs de las venas uteroplacentarias hacia la circulacin materna y emboliza en los pulmones.
La circulacin continua de sangre materna a travs
del espacio intervelloso es un proceso dinmico que requiere la adaptacin constante de cada cotiledn placentario a las necesidades cambiantes del feto. Estudios
recientes en gestaciones interrumpidas voluntariamente
han sido incapaces de detectar flujo sanguneo real en
el espacio intervelloso antes de la semana 12. Estos hallazgos han llevado a pensar que en la etapa inicial de la
gestacin los extremos de las arterias espirales estn
obstruidos por tapones intravasculares de trofoblasto, y
que el liquido que ocupa el espacio intervelloso es probablemente una mezcla de filtrado del plasma materno
y secrecin de glndulas uterinas. Las arterias espirales
se ensanchan progresivamente, y hacia la semana 12 o
13 los tapones trofoblsticos se permeabilizan, permitiendo la circulacin libre de flujo sanguneo materno
hacia el espacio intervelloso.
Estos fenmenos invasivos, de las arterias espirales
por el trofoblasto y la ausencia de conexin con el espacio intervelloso, permiten que el embrin quede protegido de las elevadas presiones que el flujo arterial ma-
(Captulo 6)
terno proporcionara sobre unas vellosidades coriales

inmaduras. La invasin precoz anormal del espacio intervelloso por el flujo materno se ha sugerido como
causa de aborto temprano.
La barrera placentaria consta de tres capas de origen
fetal: sincitiotrofoblasto, citotrofoblasto y estroma, que
incluyen la pared endotelial de los capilares. La placenta madura es de color rojo oscuro o violceo (este
color est determinado por la presencia de sangre), con
forma de disco, dimetro de 15 a 20 cm, grosor de 3 cm,
peso de 500 a 600 g y dos caras: materna, insertada
sobre la decidua basal, caracterizada por la presencia de
15 a 30 lobulillos o cotiledones, y fetal, que permanece
en contacto con el amnios y el cordn umbilical, en cuya
superficie se distinguen las ramificaciones de los vasos
sanguneos placentarios.
Las principales funciones de la placenta son transporte y sntesis, adems de proteccin, termorregulacin y defensa inmunitaria, entre otras. Entre las hormonas glucoproteicas que se sintetizan en el
sincitiotrofoblasto estn:
S GCH: hormona gonadotropina corinica.
S GH: hormona del crecimiento o lactgeno placentario.
S CCH: hormona corticotrpica.
S TRH: hormona liberadora de tirotropina.
S CFR: hormona liberadora de somatomamotropina, estrgenos y progesterona.
Receptor de progesterona (RP)
Se encuentra en el ncleo de la clula decidualizada,
msculo liso, endotelio y epitelio glandular.
Progesterona (P)
Efecto supresor sobre receptores de estrgenos. Regula
la accin de mucinas, protena endometrial asociada
con el embarazo, protena plasmtica A asociada con el
embarazo, prolactina, uteroglobina, protena 24Kda, citocinas, pptidos opioides, relaxina, renina, anhidrasa
carbnica y lactoferrina, entre otras. Inhibe respuesta
linfocitaria, produce crecimiento del tero, inhibe la
contractilidad uterina, hiperpolariza la clula miometrial, reduciendo su excitabilidad.
Estradiol (E2)
Regula la proliferacin de las clulas endometriales
mediante unin del mismo a sus receptores nucleares

RE, seguido por activacin de stos, interaccin con elementos de respuesta hormonal de genes especficos y
modificacin de tasas de transcripcin en clulas diana.
Estimula la expresin de factores de crecimiento (factor
de crecimiento de insulina, factor de transformacin del
crecimiento y factor de crecimiento epidrmico).
HGC
Mantiene la funcin del cuerpo lteo al inicio del embarazo. Diferenciacin sexual de productos masculinos.
Inhibe la proliferacin linfocitaria mediante unin a
macrfagos y prostaglandinas. Estimula la secrecin de
relaxina y prolactina.
Lactgeno placentario
Actividad lipoltica con movilizacin de depsitos grasos, incremento de cidos grasos libres y triglicridos
plasmticos. Aumento de la resistencia a la insulina, con
disminucin del consumo de glucosa por parte de la madre. Estimula la incorporacin de aminocidos a las protenas. Accin sinrgica con la insulina. Aumento de insulina circulante como respuesta a sobrecarga de glucosa.
S Adrenocorticotropina. Anloga a ACTH materna.
Su significado biolgico se desconoce.
S Tirotropina. Efecto desconocido.
S GnRH. Hormona del citotrofoblasto cuya funcin se desconoce.
S Inhibina. De origen citotrofoblstico. Inhibe la
secrecin de FSH e impide la ovulacin durante el
embarazo. Estimula la sntesis de HGC
S Protenas especficas de embarazo. Se desconoce
su significado biolgico. Se le ha relacionado con
la aceptacin inmunolgica del injerto semialognicofetal.
S Prostanoides. Funcionan como segundos mensajeros. Control de la resistencia vascular placentaria.
S Factores de crecimiento. Regulan proliferacin,
diferenciacin y metabolismo celulares.
PERSPECTIVAS ACTUALES DE LAS

CLULAS PROGENITORAS ADULTAS
Las SC tienen una capacidad asombrosa de desarrollarse y reproducirse formando luego todos los rganos del
165
nuevo ser humano durante el embarazo. Muchos cientficos tienen la esperanza de usar SC para reparar tejidos daados por enfermedades incurables, como en el
caso de demencia de Alzheimer, diabetes o parlisis de
mdula espinal. El problema es que los cientficos
extraen las SC de embriones recin formados en el laboratorio y durante el procedimiento matan al embrin
humano. Asimismo, debido a la necesidad de obtener
ms embriones humanos para estos procesos, se est
considerando la posibilidad de clonar embriones humanos (como en una fbrica o produccin en serie)
para matarlos y obtener cantidades significativas de SC
para experimentos: sta es la llamada clonacin teraputica.
Otra posibilidad de obtencin de SC est en los embriones congelados que han sobrado de los procesos
de fecundacin in vitro (FIV), que se realizan cuando las
parejas estriles buscan engendrar artificialmente. En
los laboratorios de FIV se engendran varios bebs y se
van implantando en el tero de la madre por grupos; si
se tiene xito con alguno de los primeros, entonces sobrarn algunos embriones. Estos embriones estn almacenados y como los padres ya han engendrado al
beb que queran, no desean ms hijos.
Desde septiembre de 2001 la asignacin de fondos
gubernamentales a las investigaciones con clulas estaminales (SC) ha estado limitada a las investigaciones en
SC de adultos o SC de embriones ya sacrificados antes
del da en que se emiti la ley. Ya no se permite en Norteamrica la investigacin en SC o la clonacin teraputica con fondos gubernamentales. Sin embargo, las
investigaciones y experimentos en seres humanos continan en pases como Corea del Sur, que en 2005 hizo
propaganda de haber logrado clonar un ser humano, o
en manos de corporaciones privadas que buscan obtener
en el futuro ingresos significativos provenientes de los
posibles descubrimientos mdicos.
Las clulas estaminales de adultos (ASC) son la alternativa humana y cristiana a la clonacin de seres
humanos. Ahora las ASC se obtienen fcilmente de la
sangre, la mdula sea y el cordn umbilical. Por ms
de 30 aos se vienen usando exitosamente, por ejemplo,
ASC para trasplantes de mdula sea en la lucha contra
el cncer, como se hace en la SICETEM.
La revista Lancet, una de las ms prestigiosas publicaciones cientficas a nivel mundial, dedic el nmero
del 16 de julio de 2004 al tema de las SC. Se publicaron
varios artculos de cientficos que solicitaban al presidente Bush y al Congreso promover la investigacin en
SC incluyendo como medio la clonacin teraputica
descrita antes. Sin embargo, tambin en ese mismo
nmero Lancet public tres artculos muy interesantes
166
acerca de los avances en clulas estaminales de adultos.

El primer articulo, de Wollert y otros cientficos alemanes (Lancet 364;9429;10 a 16 de julio de 2004, 141
148), es un estudio en pacientes que sufrieron infartos
cardiacos y tienen el corazn daado.
A un grupo de ellos se les inyect ASC de la mdula
sea y a otro grupo no. El grupo que recibi ASC experiment una mejora cardiaca significativa comparado
con el grupo de control. Ahora se sabe que la ASC de la
mdula sea se transforma en clula cardiaca y tambin
es probable que la ASC de la mdula sea induzca que
las clulas cardiacas daadas produzcan sustancias llamadas citocinas que mejoran la reparacin del corazn,
entre otros efectos posibles. Pero este estudio en seres
humanos demuestra claramente que las ASC de mdula
sea pueden ayudar a reparar otros rganos, como el
corazn.
El segundo estudio, de Seo y col. (Lancet 364; 9429;
10 a 16 de julio de 2004, 149155), es un estudio de clulas estaminales adultas periodontales (de la boca);
stas se aislaron y se procesaron en el laboratorio, luego
se inyectaron en roedores, y se comprob que las ASC
pudieron reparar tejido periodontal en roedores, demostrndose as que las ASC tienen una capacidad de regeneracin grande a pesar de lo que algunos cientficos
creen. El tercer estudio, de Joannides (Lancet 364;
9429; 10 a 16 de julio de 2004;172177), reporta cmo
se aislaron clulas precursoras de tejido nervioso cerebral a partir de un experimento hecho con ASC de piel.
Estos tres estudios muestran claramente cmo las ASC
son muy tiles para reparar tejidos daados; estas ASC
se han extrado fcilmente de personas adultas sin poner
en peligro la vida de ningn embrin.
Todos estos estudios recientes y muchos otros similares ofrecen una alternativa de ASC para la investigacin
cientfica sin necesidad de sacrificar embriones humanos. La mayora de los cientficos del mundo tienen
como aliados a los millones de pacientes del mundo que
tienen enfermedades incurables o crnicas a quienes les
han prometido que la investigacin en SC originar la
cura para sus malestares o la de sus seres queridos. Est
el claro ejemplo de Nancy Reagan, que vio morir a su
esposo, el ex presidente Ronald Reagan, con demencia
de Alzheimer, y ahora promueve la investigacin de SC
para buscar la cura para ese mal. Y esto es importante;
muchos de nosotros, cientficos o no cientficos quisiramos ser curados de una de estas enfermedades
mediante la investigacin.
La investigacin en SC trae la posibilidad y la promesa de descubrimientos cientficos importantes.
Segn la OMS hay unas 5 000 enfermedades raras
(ER), de las cuales unas 4 000 son causadas por alguna
(Captulo 6)
anomala gentica. En opinin de los autores, todas las

enfermedades tienen una base gentica. Se desconocen
datos precisos sobre la frecuencia real de la mayora de
las ER debido a la inexistencia de sistemas de notificacin de casos. Todo esto supone un obstculo para la
prevencin, el diagnstico y el tratamiento de las ER, y
es imprescindible mejorar el conocimiento en este campo incentivando la investigacin epidemiolgica, bsica y clnica.
Otro de los grandes problemas de las enfermedades
raras es la dificultad de encontrar un tratamiento adecuado y frmacos eficaces. En estos momentos el costo
de desarrollo de un medicamento es altsimo y el periodo medio de desarrollo se estima entre 10 y 14 aos.
Cuando por fin el medicamento ve la luz, el laboratorio
fabricante aspira legtimamente a recuperar la inversin. Es fundamental, pues, lograr que el Estado destine
recursos econmicos al sector de las ER desarrollando
un sistema de prevencin primaria, de diagnstico precoz, de tratamiento y rehabilitacin, de asistencia farmacutica, de informacin y educacin sanitaria, de
apoyo a la investigacin y desarrollo de medicamentos
hurfanos e igualdad de acceso en todo el territorio nacional, sin discriminacin.
TERAPIA GNICA
La terapia gnica pretende desarrollar nuevos mtodos

de ingeniera gentica, ya que las clulas son muy flexibles y fcilmente se les puede introducir genes curativos. El tema de la terapia gnica es de gran inters,
aunque por desgracia no ha avanzado todo lo rpidamente que se esperaba. La idea es muy sencilla y atractiva: reemplazar con un gen aqul que no est funcionando o que funciona mal, porque curar o arreglar un
gen defectuoso es mucho ms difcil. El primer intento
de aplicar la terapia gnica fue con la inmunodeficiencia total que presentaban dos nias del sndrome conocido como nio burbuja. Esta inmunodeficiencia se
debe a la dificultad de procesar bioqumicamente en la
sangre la adenosina. Este caso lo presentaron los investigadores norteamericanos como una solucin ya viable. Y, por si acaso, se les inyectaba la enzima deficiente: la adenosina deaminasa, con lo que estaban seguros
de no tener problemas. Estudios paralelos demostraron
la eficacia aparente de la transmisin del gen. Ms recientemente, en Francia han sido tratados varios nios
con inmunodeficiencia, aparentemente con buenos resultados, pero dos de ellos desarrollaron cncer, as que
la terapia se suspendi.

Las razones por las que la terapia gnica no ha avanzado con rapidez son sobre todo dos:
S Primera: existe dificultad en conseguir vectores

adecuados que no perjudiquen al organismo y que
estn dirigidos en especial al rea objetivo. [Nota:
A ttulo general, se dice que un vector es un agente
que transporta algo de un lugar a otro. Y en bioqumica, un vector es un fragmento de cido desoxirribonucleico que puede unir otro fragmento ajeno
y transferirlo al genoma de otros organismos.]
S Segunda: el metabolismo celular y la clula son
mucho ms complicados de lo que todava se sabe.
Por desgracia, el problema de los vectores se agudiz
hace dos aos con una de las enzimas, la ornitina transcarbamilasa, que se aplic a un voluntario, Lesinger,
que falleci por un exceso en el virus transportador. La
terapia gnica se consider al principio como una herramienta teraputica de inters, en especial en enfermedades monognicas hereditarias, entre las que estn las
inmunodeficiencias, la fibrosis qustica, la hipercolesterelemia familiar, etc. Tanto los investigadores como
las compaas farmacuticas tienen mayor inters en
enfermedades ms comunes como el cncer y las enfermedades neurolgicas, y tambin en las aplicaciones de
carcter teraputico o preventivo, como las vacunas
genticas.
Los cidos nucleicos son molculas muy lbiles
(inestables y que se transforman con facilidad en otra
cosa) y fcilmente hidrolizables en fluidos biolgicos.
Por esta razn se requiere el concurso de vectores para
facilitar su transferencia a las clulas. Existen dos tipos
principales de vectores: virales y no virales. Y mientras
que los primeros aprovechan el tropismo y la capacidad
de los virus para infectar clulas, los vectores no virales
se muestran menos eficaces, aunque son sistemas ms
seguros y pueden ser formulados con mayor facilidad
como medicamentos. Un sistema no viral est constituido por dos elementos: uno es el transportador, constituido por lpidos, polmeros, etc., y el otro es la construccin gnica. En todos los casos, el vector debe
interactuar con la superficie celular, internalizar el complejo, liberar el DNA, alcanzar el ncleo, ser expresado
y, segn los casos, el producto final debe ser exportado
como producto de secrecin. La eficiencia final del sistema depende, pues, de los dos elementos, y las mejoras
en ambos son esenciales.
El profesor Salvador Alio lleva trabajando muchos
aos en terapia gnica con vectores no virales, basada
en la utilizacin de los cidos nucleicos como medicamentos. En este sentido, uno de sus objetivos principa-
167
les es la introduccin celular selectiva de cidos nucleicos teraputicos, mediante procedimientos seguros y
eficaces. Entre los sistemas no virales puede distinguirse el DNA desnudo, que ha sido utilizado con xito en
algunos experimentos e, incluso en la actualidad, en
modelos in vivo utilizando el procedimiento denominado hidrodinmico, basado en la administracin directa
intravenosa de plsmidos en grandes volmenes.
Entre los trabajos ms recientes estn los de Nick
Lemoine e Iain McNeish sobre terapia gnica del cncer
con vectores virales. Desde 1996 se han investigado al
menos otros 20 protocolos para intentar restaurar la funcin del p53 utilizando la identificacin de genes supresores, incluso en combinacin con quimioterapia, pero
con xito limitado.
En el cuadro 61 se recoge el uso potencial de estas
nuevas tcnicas aplicadas a patologas concretas. Se
destaca la mencin de la osteognesis imperfecta como
enfermedad a tratar partiendo de un estudio previo de
Horwitz.
CLONACIN TERAPUTICA
El inicio de las discusiones y consideraciones sobre las

clulas madre, troncales o totipotentes se debe al xito
de la inseminacin artificial. Estos temas tomaron por
sorpresa a la sociedad y a la Iglesia sin la gran resistencia que s ha sido percibida en los ltimos tiempos por
las posibilidades de la clonacin teraputica, que en
Espaa incluye la posibilidad de utilizar para fines de
experimentacin los embriones sobrantes conservados
en las clnicas de inseminacin artificial.
Las expectativas del uso de la clonacin teraputica
en humanos, sobre todo si se mejora el rendimiento en
la clonacin, son enormes. En 2005 investigadores surcoreanos trabajaron con 30 embriones humanos, utilizando clulas somticas de las mujeres que donaron sus
vulos, con lo que evitaron posibles problemas con
mitocondrias; o sea que por el momento la clonacin
teraputica humana se ha realizado slo con mujeres. Al
parecer se utilizaron 242 vulos procedentes de 16
mujeres y se obtuvieron 30 blastocistos, de los cuales se
tomaron unos 20 grupos de clulas y de ellos una sola
lnea de clulas madre. Todava se necesita mejorar la
tcnica y quedan muchas incgnitas por estudiar (figura
63).
Se est avanzando mucho en la investigacin con clulas madre, y las empresas biotecnolgicas y farmacuticas han apostado fuerte por ello. Los recientes avan-
168
(Captulo 6)
Cuadro 61. Aplicaciones clnicas de la medicina regenerativa mediante el uso de clulas madre adultas
Enfermedad
Modelo
Fuente de clulas
madre
Va de
administracin
Osteognesis
imperfecta
BMT clnico (alognico)
Mdula sea
Intravenosa
Tirosinemia tipo I
(hgado)
BMT experimental
Lnea celular en
cultivo; mdula
sea purificada
Intravenosa
Hepatitis B o C
BMT experimental
o sangre perifrica
Intravenosa
Cirrosis heptica
BMT experimental
o sangre perifrica
Sangre perifrica
de mdula sea
purificada. Interfern B
Lnea celular en
cultivo; sangre
perifrica
Infarto
del miocardio
BMT experimental
Clulas madre de
Intravenosa
sangre perifrica
BMT experimental
Mdula sea; lnea Intravenosa

celular en cultivo
GCSFinducido
por clulas
madre
Clulas madre de
Intracardiaca
sangre perifrica
ces cientficos generan muchas expectativas, nuevos

dilemas y, fruto de nuestras esperanzas, algunas exageraciones. Hace unos cuatro aos que una empresa americana anunci que haba clonado por primera vez
varios embriones humanos para investigacin en trasplantes. Los investigadores de la compaa decan que
su finalidad era la clonacin teraputica, es decir, conseguir clulas madre embrionarias con el genoma del donante, utilizando la transferencia nuclear para evitar el
rechazo de los posibles usos de las clulas madre.
La clonacin por transferencia nuclear ya se utiliz
en 1952 para estudiar el desarrollo en anfibios, pero ha
demostrado ser ms difcil en mamferos. Hay especies
animales que se resisten a la clonacin y las especies que
se han podido clonar, como ratones, ovejas, vacas y cerdos, lo han hecho con una eficiencia muy baja. La oveja
Dolly naci despus de 276 intentos fallidos. Los inten-
Intravenosa
Resultado
Incremento de la
mineralizacin
sea
Mejora en el
metabolismo de
las enfermedades hepticas
Reduccin de la
viremia in vivo
Inhibicin de fibrognesis, apoptosis y resolucin

de la cirrosis
heptica
Reduccin del
rea infartada e
incremento de
los parmetros
hemodinmicos
Regeneracin de
cardiomiocitos
y clulas
endoteliales
Disminucin del
rea infartada,
mortalidad e
incremento de
fraccin de
eyeccin y
fuerza de la contraccin o gasto
cardiacos
Estudio
Horwitz y col.
Lagasse y col.
Eto y Takashi
Ueki y col.
Orlice y col.
Jackson y col.
Orlic y col.
tos fracasados en monos, el animal ms prximo al

hombre y con el que presenta menos de 2% de diferencia en su genoma, eran muy poco esperanzadores para
el hombre pero, tal y como deca el autor, una vez que
se mejorara la tcnica se lograra el xito, como as ha
sido.
Dado el enorme potencial de las clulas madre embrionarias capaces de generar los ms de 250 tipos celulares que conforman un ser humano, creen los autores
que la medicina regenerativa ser la estrella de la sanidad en el siglo XXI. Creacin de rganos, terapia
celular, terapia gnica e ingeniera de tejidos son
ya trminos familiares y sujetos de investigacin por
numerosos grupos.
Se cree que la clonacin teraputica se podr aplicar
a todo el que la necesite, pero esta afirmacin implica
amplios fondos econmicos, dominio de la tecnologa

Paciente
Clula
somtica
tomada
por biopsia
169
Oocito sin
ncleo de
un donador
Transferencia nuclear
Terapia celular con transferencia nuclear
Cultivo de clulas embrionarias
Islotes
Clulas Cardiomiocitos Neuronas
de clulas hematopoyticas
pancreticas
Desarrollo de
rganos in vitro
Hepatocitos
Trasplante
inmunolgicamente
compatible
Figura 63. Clonacin teraputica y terapia celular.
y realizacin de todo el proceso de manera individualizada. El costo actual lo hace imposible. Uno de los grandes retos que plantea el uso de clulas madre embrionarias es comprobar si son tumorognicas.
Se vislumbran resultados a ms corto plazo con las
clulas madre de adultos, porque se omitiran los problemas de tumorigenicidad, sin olvidar las procedentes
del cordn umbilical y tejidos de aborto. El xito con la
famosa oveja Dolly y los experimentos que lo sucedieron con otras especies han provocado innumerables discusiones, pero, curiosamente, se ha olvidado que desde
el punto de vista terico el reprogramar el ncleo representa un importantsimo hallazgo. La clonacin de
Dolly demostr que biolgicamente el tiempo es reversible y permite a una clula diferenciada reestructurarse
a su estado inicial. Es un tema de gran inters biolgico,
teortico y filosfico. La aplicacin de clulas madre de
adulto obtenidas del cordn umbilical, de la mdula
sea, piel, etc., evita las controversias ticas y ofrece
beneficios teraputicos similares a los de las clulas
madre embrionarias.
Contina el debate sobre los mritos relativos del uso
de clulas madre embrionarias o adultas para tratar a
pacientes; trabajos recientes discuten las posibilidades
de ambos tipos de clulas.
Aunque estos dos estudios apoyan el uso de clulas
madre, estimulan no obstante el debate sobre si estas
clulas deberan obtenerse de embriones o de adultos

(figura 64).
Hasta ahora no se haba probado que las clulas especializadas derivadas de cultivos de clulas madre
embrionarias pudieran funcionar despus de su trasplante. Por ejemplo, las clulas madre embrionarias de
ratones producen secrecin de insulina en clulas en
cultivo, pero no se ha demostrado que dichas clulas
cambien los altos niveles de azcar en la sangre de ratones con sntomas de diabetes. Quiz no sea sorprendente que las clulas generadas in vitro podran no ser
equivalentes a las que ocurren in vivo, dada la extensiva
interaccin celular que tiene lugar durante el desarrollo.
Para intensificar el rendimiento de las neuronas productoras de dopamina, Kim y col. expresaron la protena Nurr1, la cual es necesaria para generar estas
neuronas in vivo en cultivos de clulas madre embrionarias. Las neuronas que se obtuvieron sobrevivieron despus de ser trasplantadas a ratas con sntomas de la
enfermedad de Parkinson, mostrando propiedades electrofisiolgicas apropiadas. An ms impresionante, las
ratas empezaron a recobrar movimientos normales.
Otros han trasplantado clulas madre embrionarias
diferenciadas para mejorar los sntomas del Parkinson
en ratas, pero observaron tumores en algunos animales.
Para demostrar la eficacia mientras evitaban la formacin de tumores, Kim y col. han llevado a cabo una
170
Clulas epiteliales, epatocitos,

pulmones, tracto gastrointestinal
Endodermo
Blastocisto
(Captulo 6)
Clula progenitora
de mesodermo
Miocitos, osteoblastos, condrocitos,

adipocitos, clulas endoteliales
Mesodermo
Clulas madre
embrionarias
Clula progenitora
hematopoytica
Ectodermo
Clulas de la mdula sea y

clulas sanguneas
Queratocitos, neuronas, gliales, etc.
Figura 64. Diferenciacin de clulas madre embrionarias.
modificacin fundamental, aunque las clulas madre

embrionarias genticamente modificadas podran no
ser deseables para el uso de personas, para evitar las desventajas de las clulas madre de adultos que proliferasen indefinidamente en cultivos. Esto es justo lo que
Jiang y col. parecen haber hecho. Hay una poblacin de
clulas madre de mdula sea, conocido como clulas
madre mesenquimales, que pueden formar msculo,
cartlago, hueso y grasa.
El trabajo de Kim y col. no resolver el debate sobre
clulas madre embrionarias vs. adultas. Al contrario,
subraya la necesidad de investigar en esta rea evitando
intereses polticos. Slo entonces el pblico tendr una
oportunidad de obtener lo que merece: nuevos, vlidos
y seguros tratamientos para enfermedades hoy intratables. Hace dos aos aparecieron dos publicaciones de
gran trascendencia con el siguiente ttulo y prembulo
en Nature: Un proyecto de clulas madre humanas?
Estos dos artculos sobre clulas madre representan
una importante contribucin en el terreno cientfico y
muestran algunos de los obstculos que deben ser superados para llevar a la clnica las terapias de clulas
madre. Uno de los artculos, de Catherine Verfaillie y
col., describe una clase de clulas madre de adulto que
pueden resultar tan verstiles como las clulas madre
embrionarias. El otro artculo, de Ron McKay y col.,
muestra que las clulas madre embrionarias del ratn
pueden generar neuronas efectivas para remediar sntomas de la enfermedad de Parkinson en ratas modelo.
La investigacin de clulas madre de Verfaillie (llamadas clulas multipotentes de progenitores adultos o
MAPC) se ha presentado como prueba de que el trabajo
en clulas madre embrionarias humanas ya no es necesario. Investigadores de clulas madre consideran ambos artculos con optimismo y puntualizan que pasarn
aos antes de que las terapias humanas emerjan desde
estas investigaciones con clulas madre, citando la terapia gnica como leccin sobre el peligro de prometer
demasiado y demasiado pronto. Los descubrimientos
de Verfaillie se han rumoreado durante casi tres aos,
pero sus resultados son tan asombrosos que se espera
confirmacin de algn otro laboratorio para su verdadera aceptacin. Si se confirmara, habra necesidad de
coordinar nuevas lneas celulares y hacerlas muy accesibles para la comunidad cientfica.
En resumen, para comprender y avanzar el potencial
de las clulas madre embrionarias humanas, deberan
coordinarse esfuerzos para estandarizar tcnicas y prcticas para el desarrollo y diferenciacin de las clulas
desde todos los puntos posibles. Esto ser necesario
para determinar cul es la mejor actuacin para las diferentes aplicaciones y desarrollar tcnicas para aumentar
la produccin y proporcionar una procedencia uniforme
de clulas madre embrionarias para estudios con primates. Una cohesiva infraestructura de investigacin podra tambin proporcionar un sistema transparente y regulado, para que la derivacin de nuevas lneas de
clulas madre embrionarias humanas pueda ser llevada
a cabo de acuerdo con procedimientos y pautas generalmente aprobadas.
La mayora de los investigadores admiten que ser
necesaria la creacin de nuevas lneas de clulas madre
embrionarias para obtener clulas con crecimiento y diferenciacin ptimos. En pases como Israel, Singapur

y el Reino Unido, donde a los investigadores les est
permitido obtener lneas de clulas madre de embriones
de pocos das generados por fertilizacin in vitro, se
podrn obtener nuevas lneas celulares.
Desde que George W. Bush fue nombrado presidente, los investigadores estadounidenses con fondos federales deben trabajar con las 64 lneas de clulas madre
embrionarias que existan. De hecho, la realidad parece
mucho ms restrictiva, y los cientficos se han quejado
de que slo unas pocas de estas lneas estn actualmente
disponibles. Por otra parte, las lneas disponibles presentan dificultades para ser cultivadas y en algunos
casos los precios son muy altos o existen problemas de
propiedad intelectual.
Las clulas madre embrionarias y las clulas multipotentes de progenitores adultos representan herramientas para definir las bases moleculares de la pluripotencia (capacidad de formar los tejidos o clulas de un
organismo). Se debe explorar detalladamente cules
son las semejanzas y las diferencias entre las clulas
madre embrionarias y las clulas multipotentes de progenitores adultos. Por ejemplo, parece que las clulas
multipotentes progenitoras son buenas para formar clulas de hgado, pero no para el corazn. Las clulas
madre no diferenciadas forman tumores cuando se inyectan en animales. Ser posible eliminar las clulas
madre embrionarias potencialmente contaminantes de
poblaciones celulares diferenciadas?
Ya han aparecido en todo el mundo institutos de clulas madre, aunque en una escala relativamente pequea
comparada con, por ejemplo, los grandes fondos y empresas dedicadas al genoma humano. Los investigadores estiman que pasar cerca de una dcada antes de que
las clulas madre puedan ser usadas de manera rutinaria
para tratar enfermedades humanas. Pero aplicando las
enseanzas del trabajo en cooperacin y lo aprendido de
otros programas cientficos, este tiempo podra acortarse. Quiz sea el momento de empezar a pensar en un
Proyecto Humano de Clulas Madre.
Trasplante de clulas madre

adultas de la mdula sea
Es la terapia basada en clulas madre ms conocida, ya
que se usa para tratar leucemias y otros tipos de cncer,
as como alteraciones de la sangre. Como cualquier otra
clula sangunea, los leucocitos se generan en la mdula
sea a partir de una clula madre multipotencial. Una
vez que han madurado, los leucocitos abandonan la mdula y pasan a la sangre, donde desarrollan su funcin:
171
combatir los virus y todos los agentes patgenos que entran en el organismo. La leucemia se origina cuando estos leucocitos empiezan a crecer y a funcionar de forma
anormal, de modo que son incapaces de evitar infecciones e incluso alteran el funcionamiento normal de algunos rganos.
El tratamiento de esta enfermedad consiste en eliminar los leucocitos anormales de la sangre permitiendo
que slo los normales se multipliquen y ocupen su lugar.
Existen varias formas de conseguir esto. Una de ellas es
aplicar quimioterapia, que usa potentes frmacos para
destruir las clulas cancerosas. Cuando mediante este
procedimiento no se consigue eliminar todas las clulas
daadas, los mdicos recurren al trasplante de mdula. En este tipo de trasplantes, las clulas madre del paciente se reemplazan por las de un donante compatible.
Para ello, primero se eliminan las clulas cancerosas del
paciente y a continuacin se introduce, a travs de la
sangre, una muestra de mdula sana del donante.
Dado que muchas veces la labor de encontrar un donante compatible es muy difcil y requiere mucho tiempo, existe una ltima estrategia: aislar clulas madre
sanas del propio paciente, cultivarlas en el laboratorio
para obtener una cantidad importante de ellas y luego
volver a introducirlas. As se suprime el riesgo de rechazo. En vez de aislar estas clulas de la propia mdula,
que es ms difcil y adems ms agresivo, se pueden
obtener incluso de la sangre circulante del paciente.
Cultivos de clulas madre

Existen varias estrategias, pero en todos los casos es un
proceso largo, complejo y, por el momento, con una tasa
de xito baja. Para conseguirlo es necesario reproducir
en el laboratorio el escenario en el que estas clulas actan en el organismo. Adems, estos modelos experimentales tienen que cumplir una serie de caractersticas:
S Tienen que reflejar de forma exacta la biologa de
las clulas madre.
S Tienen que ser reproducibles, es decir, los experimentos se tienen que poder repetir en el laboratorio.
S Tienen que ser procesos de una duracin corta, de
modo que se puedan desarrollar, analizar y repetir
en un periodo de tiempo razonable.
Si se quiere obtener un cultivo o lnea celular de clulas madre embrionarias (figura 65), el proceso comienza aislando, con tcnicas de microciruga, la masa
celular interna del embrin. Esta masa de clulas se co-
172
Unin del esperma

y el vulo
Se forma el
embrin
Clula que se divide y

forma una lnea de
clulas madre
Masa celular
Clula
aislada
aislada
Clula en medio de cultivo
Figura 65. Estrategia para obtener cultivos de clulas

madre embrionarias a partir de un embrin (Fuente: smartplanet).
loca sobre un soporte de vidrio o plstico que contiene

un lquido rico en los nutrientes que las clulas necesitan para multiplicarse y crecer. A medida que las clulas
van dividindose y aumenta su nmero, el proceso se
repite. As, al final se obtiene una lnea celular de clulas embrionarias. Este cultivo seguir dividindose
siempre que se mantenga controlado el ambiente y se
aporten los nutrientes necesarios para que crezca.
Hoy en da la mayora de las lneas de clulas madre
embrionarias se generan a partir de embriones de ratn.
Sin embargo, los investigadores estn explorando nuevas formas para obtener este tipo de clulas:
(Captulo 6)
S A partir de embriones sobrantes de procesos de

FIV. Se pueden generar lneas de clulas madre
embrionarias humanas a partir de embriones creados mediante fertilizacin in vitro (FIV). En este
caso, como la fecundacin tiene lugar fuera del
cuerpo de la mujer, es posible desarrollar estos
embriones en el laboratorio.
S Mediante clonacin teraputica. Las clulas
madre tambin se pueden obtener por el procedimiento empleado para generar clones enteros
como la oveja Dolly. Sin embargo, al tener un uso
estrictamente mdico, se denomina clonacin teraputica.
En este proceso se inserta el ncleo procedente de una
clula adulta del donante en el interior de un vulo al
que se le ha quitado el ncleo. As, el ncleo adulto
aporta toda la informacin gentica (el DNA) necesaria
para la divisin celular, y el vulo y los nutrientes necesarios para que se lleve a cabo este proceso. Mediante
un estmulo (p. ej., una descarga qumica) se activa la
multiplicacin de esta clula como si fuese un zigoto. A
partir de aqu se obtendrn clulas madre embrionarias
genticamente idnticas al donante adulto. Por ello, esta
tcnica podra suponer una aproximacin valiossima
para generar tejidos sin riesgo de rechazo (figura 66).
Para obtener una lnea de clulas madre adultas, en
primer lugar hay que aislar estas clulas de los distintos
rganos del cuerpo, por ejemplo de la mdula sea. A
continuacin estas clulas se colocan en un soporte con
Se extrae el ncleo
del vulo
Mediante un pulso elctrico, se funden

la clula donante y el vulo sin ncleo
y
se extraen clulas
adultas del
paciente
Embrin con clulas

madre iguales a
las del paciente
Las clulas del paciente se cultivan en
un medio que impide la diferenciacin
Se induce la
divisin del vulo
* Una alternativa es inyectar el ncleo de la

clula donante directamente en el vulo
Figura 66. Estrategias para obtener cultivos de clulas madre embrionarias mediante clonacin teraputica.
173
Trasplantes teraputicos
Se las pone
en un medio
de cultivo
Las clulas se
subdividen
Se extraen clulas
madre del hueso
de un ratn
Medio de cultivo para

crear clulas sanguneas
Las clulas madre se
diferencian como clulas
sanguneas
Figura 67. Estrategias para obtener cultivos de clulas
madre embrionarias a partir de clulas madre adultas.
ambiente y nutrientes necesarios para iniciar la multiplicacin equivalente a las embrionarias (figura 67).
Futuras posibles aplicaciones

de las clulas madre
Se han propuesto varias, pero la principal es emplearlas

como herramienta para regenerar rganos y tejidos
daados del organismo.
Las neuronas
muertas no
producen dopamina
Inyeccin o
implante de
clulas madre
Los dos grandes problemas de la terapia de trasplantes

convencional son la falta de donantes y el riesgo de
rechazo del rgano recibido. Las clulas madre, al ser
capaces de originar cualquier rgano o tejido, podran
constituir una solucin muy valiosa. Algunas de las enfermedades que se podran tratar con estas clulas son,
por ejemplo, el Parkinson, la diabetes, la distrofia muscular, infartos y lesiones medulares.
Para conseguirlo es imprescindible conocer todos los
procesos moleculares que activan la diferenciacin de
las clulas madre a tipos celulares concretos de los rganos afectados en una determinada enfermedad. Esto es
algo muy complejo que se est investigando en varios
laboratorios del mundo, pero a pesar de todo son pocos
los que tienen autorizacin para trabajar con este tipo de
clulas. Por ello, hoy por hoy estos estudios estn en una
fase muy experimental.
En el siguiente enlace se explican, empleando como
ejemplo el tratamiento de la enfermedad de Parkinson,
todos los pasos necesarios para poder aplicar con xito
una terapia basada en las clulas madre (figuras 68 y
69). Despus de la inyeccin depende de las clulas
sobrevivir en su nuevo ambiente y producir dopamina.
S Estudiar las fases iniciales del desarrollo embrionario. Procesos que tengan lugar en este estadio pueden ser la causa de aparicin de alteraciones congnitas o alteraciones en la placenta que
originen abortos prematuros.
Las neuronas nuevas

producen dopamina
La dopamina
funciona como
neurotransmisor en
forma normal
Figura 68. Investigacin de la terapia celular con clulas madre en la enfermedad de Parkinson.
174
S Estudiar los efectos de alteraciones cromosmicas en las primeras etapas del desarrollo del embrin.
S Probar frmacos con potencial teraputico. La
aprobacin de un nuevo frmaco es un proceso
largo y complejo. Antes de que un frmaco entre
en fase clnica y se pruebe en voluntarios humanos, se hacen muchos ensayos en lneas celulares
animales a las que se administra el frmaco. Sin
embargo, la respuesta a un frmaco en un animal
y en el ser humano pueden ser muy diferentes. Por
ello, normalmente los frmacos se suelen probar
tambin en lneas celulares humanas in vitro. En
ocasiones estas lneas llevan demasiado tiempo
mantenidas en el laboratorio y ya no son exactamente iguales que sus progenitoras in vivo. Si se
consigue mantener clulas madre en el laboratorio, podran diferenciarse de la clula de inters y
ser ms parecidas a las originales. Por lo tanto,
podra determinarse con ms exactitud si un frmaco puede ser efectivo o no.
S De manera equivalente al punto anterior, tambin
podran utilizarse estas clulas para probar toxinas y frmacos en el laboratorio.
INGENIERA DE TEJIDOS
La ingeniera de tejidos ofrece tambin buenas posibilidades de tratamiento para la terapia celular, ya que se
pueden aislar clulas especficas con una biopsia obtenida de un paciente, para desarrollarlas en ambientes de
cultivo controlados para regenerar el sitio deseado en el
cuerpo del paciente. Son dos las estrategias de la ingeniera de tejidos:
Figura 69.
(Captulo 6)
1. La ingeniera in vitro de tejido en placas de cultivo

mediante clulas sembradas obtenidas por biopsia
del paciente.
2. Generacin in vivo y reclutamiento de clulas que
pueden sustituir la infraestructura daada (MEC)
en el rea lesionada y proporcionar ayuda temporal para las clulas implantadas. Con esta estrategia la terapia celular se aplica directamente en el
sitio lesionado, permitiendo que las clulas madre
se integren al sitio daado y que adems recluten
clulas endgenas que colaboren en la regeneracin. Con esto se garantiza tambin la expresin
de genes y la produccin de molculas activas
coadyuvantes para la sanacin y regeneracin del
tejido afectado.
Un entramado de colgeno proporciona soporte y alineacin a los cardiomiocitos, vasos sanguneos, preservando la arquitectura y evitando el sobreestiramiento
celular. Con una MEC de colgeno con geometra tridimensional funcional se garantiza el crecimiento apropiado de las clulas implantadas. Las interacciones
entre los cardiomiocitos y los no miocitos se realizan a
travs de sealizaciones en la MEC con las molculas
fibronectina, laminina, vitronectina, integrinas, actina,
alfaactinina, etc.
La matriz intercelular artificial debe tener caractersticas ideales similares a la MEC para que las clulas
madre puedan crecer y diferenciarse con un medio de
cultivo adecuado. Con la ingeniera de tejidos se puede
controlar el tamao, forma, fuerza y composicin del
injerto in vitro. Adems puede solucionar defectos congnitos o adquiridos y se pueden sustituir o reconstruir
estructuras especficas como las vlvulas del corazn
afectadas. La terapia celular es aplicable cuando la
estructura del rgano que falla es relativamente simple,
pequea y cuando la enfermedad es localizada. Los biomateriales tienen un papel dominante en la mayora de
las estrategias de la ingeniera de tejidos.
En la ingeniera cardiaca de tejidos, las caractersticas materiales como flexibilidad y degradabilidad necesitan aplicarse de modo que no interfieran con la contractilidad del msculo cardiaco. Estos materiales
deben ser bioactivos para tener la fuerza fsica apropiada, cintica de degradacin de polmeros sintticos
y especificidad biolgica del colgeno, fibronectina y
laminina (componentes principales de la MEC). Estos
biomateriales similares a los biolgicos se llaman biomimticos. Los biomateriales no slo sirven de soporte fsico a las clulas, sino que tambin tendrn que proveer las sustancias qumicas y biolgicas necesarias
para guiar el crecimiento, diferenciacin, implantacin,
175
Cuadro 62. Matrices intercelulares bioartificiales naturales

y sintticas creadas ex vivo para la medicina regenerativa y terapia celular
Naturales
Sintticas
Matrices de colgeno
Matrices gelatinosas
Hidrogeles de alginato
Matrices gelatinosas de alginato y polietilenglicol
Matrices de fibrina
Matrices electroconductoras de gelatina, alginato, cido polilctico o colgeno
Matrices de poliuretano biodegradable

Matrices de ismeros de caprolactona lctica
Matrices de ismeros de caprolactona lctica y carbonato
Matrices de alcohol polivinlico
Matrices de cido polihidrobutirato poligliclico
xido de polietileno
Polmeros de hialuronano
Matrices derivadas de fibronectina: ArgGlyASP (RGD)
distribucin, organizacin e integracin de las clulas

madre.
Los biomateriales biomimticos debern poder responder a estmulos celulares especficos, facilitar la formacin de una red vascular capaz de proporcionar oxgeno y nutrientes necesarios al metabolismo celular
para garantizar la adecuada actividad celular. Entre los
biomateriales y las clulas implantadas se establecen
interacciones moleculares y ultraestructurales capaces
de emular los procesos fisiolgicos del organismo (cuadro 62).
Es ventajoso el uso de pptidos cortos sobre protenas enteras porque evitan el procesamiento proteico
ulterior. Adems, los pptidos cortos son ms estables
durante el proceso de la modificacin y se pueden sintetizar de manera masiva en el laboratorio. La secuencia
que se usa con ms frecuencia es la derivada de la fibronectina: arginina, glicina y asparagina (RGD). Otros
biopolmeros biolgicos que se han empleado con xito
para formar entramados de MEC artificial son: poliuretano biodegradable, hidrogeles de alginato, biopolister
de polihidroxialcanoato, polmeros de hialuronano,
xido de polietileno, poli (Nisopropilacrilamida),
cido polilcticocogliclico, etc.
Los biopolmeros exgenos implantados en el cuerpo deben tener una tasa adecuada de degradacin, sin
originar productos de degradacin txicos ni desencadenar una respuesta inmunitaria.
El biopolmero elegido se puede reticular para formar un hidrogel usando un pptido bifuncional con dominios que interactan con receptores de membrana. La
fuente celular ptima para regenerar el tejido debe ser
fcil de obtener, con gran potencial proliferativo, no inmunognico, resistente a la isquemia despus del tras-
Matrices de cido polilcticocogliclico

Compuestos gelatinosos derivados del cido polilctico y sus
ismeros
Matrices de biopolister de polihidroxialcanoato
Matrices de poli (Nisopropilacrilamida)
Matrices de alginato/elastina/polietilenglicol (Alg/Ela/PEG)
plante, y tener la capacidad de convertirse en clula

diferenciada terminal madura y funcional del parnquima. Por desgracia, hoy en da no existe ninguna
clula con estas caractersticas perfectas. Las clulas
algenas son relativamente fciles de obtener aunque se
requiere inmunosupresin. En este contexto, las clulas
autlogas son ms fciles de obtener y de cultivar sin
tener ninguna barrera inmunolgica ni riesgos de infecciones.
Una matriz celularizada ofrece la ventaja de formar
una red vascular capaz de proporcionar el aporte energtico y nutritivo necesario para el metabolismo celular.
Para evitar que la MEC desarrollada ex vivo sea sensible
a la isquemia, debe contar con una red capilar desarrollada antes de ser implantada en los tejidos. Esto se logra
incorporando a la MEC factores angiognicos, como el
factor de crecimiento derivado de fibroblastos (bFGF),
el factor de crecimiento derivado del epitelio vascular
(VEGF) y el factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF), entre otros. Adems, la protena morfogentica del hueso (BMP) tambin estimula la angiognesis, el crecimiento, la proliferacin y la
diferenciacin de las clulas madre y de la MEC.
Para la terapia celular en corazn empleando bioingeniera de tejidos, los cardiomiocitos son difciles de
obtener y de cultivarse, son sensibles a la isquemia y si
son algenos provocan una respuesta inmunitaria en el
tejido del receptor. Aunque las clulas madre embrionarias humanas han demostrado tener el potencial de formar cardiomiocitos, estos estudios no han demostrado
diferenciacin controlada en tipos uniformes de clulas.
Adems, a menos que se deriven de transferencia nuclear somtica, las clulas madre embrionarias humanas sern rechazadas por el receptor. La terapia celular
176
(Captulo 6)
Cuadro 63. Molculas seal que coadyuvan en la terapia celular y medicina regenerativa
al actuar sobre las clulas madre y su proceso de diferenciacin
Molcula seal
Timosina beta 4
SDF1
LIF
IGF1
HGF
GCSF
EPO
VEGF
bFGF
Angiognesis
Miognesis
Antiapoptosis
Reclutamiento de
clulas madre
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
SDF1 = factor de crecimiento derivado del estroma; LIF = factor inhibidor de leucemia; IGF1 = factor de crecimiento similar a la insulina; HGF
= factor de crecimiento de hepatocitos; GCSF = factor estimulante de colonias de granulocitos; EPO = eritropoyetina; VEGF = factor de crecimiento epitelial vascular; bFGF = factor del crecimiento de fibroblastos bsico.
ms adecuada para regenerar tejido cardiaco es el empleo de clulas musculares esquelticas.

Los mioblastos y las clulas mononucleares de la mdula sea comparten ventajas sobre otras clulas propuestas para la reparacin cardiaca: son fcilmente disponibles, autlogas y crecen fcilmente in vitro. Las
clulas madre de mdula sea tienen gran plasticidad y
pueden alterar su fenotipo en respuesta a seales del rgano blanco para regenerar clulas daadas, adems de
que se obtienen del propio paciente y pueden administrarse mediante inyeccin simple de las clulas. Sin embargo, las clulas autlogas de pacientes diabticos tienen proliferacin deteriorada. Cuando se han usado
mioblastos esquelticos para regenerar al miocardio, se
han observado arritmias con las clulas mononucleares
de la mdula, calcificaciones cardiacas, fibrosis del miocardio con clulas madre mesenquimticas y teratomas
con clulas madre embrionarias humanas (cuadro 63).
Para construir el tejido cardiaco ideal, ste debe ser
contrctil, electrofisiolgicamente estable, flexible a
las tensiones mecnicas, vascularizado y no inmunognico. Los cardiomiocitos neonatales de embriones pueden formar miocardio adulto, sobre todo si se siembran
en estructuras de alginato. La naturaleza hidroflica del
alginato, su porosidad mayor de 90% y la estructura
interconectada del poro ofrecen grandes ventajas para
usarlo como alternativa en la biotecnologa de tejidos.
Varios factores del crecimiento sirven como estmulos para la proliferacin y la migracin endotelial de la
clula, as como la formacin de los vasos sanguneos
nuevos. El factor de crecimiento epitelial vascular
(VEGF) es un regulador importante de la neovascularizacin y tiene un papel importante en el desarrollo temprano de clulas madre sanguneas. El factor del creci-
miento de fibroblastos bsico (bFGF) es un potente

inductor de la proliferacin endotelial y de la formacin
de vasos sanguneos. Cuando se inyectan VEGF y
bFGF en el miocardio isqumico se observa formacin
de vasos sanguneos y perfusin adecuada del tejido. La
inyeccin local de los factores del crecimiento evita
efectos secundarios como hiperpermeabilidad, edema,
hipotensin y aterosclerosis.
El mecanismo para la regeneracin in situ del tejido
implantado implica la regulacin de los genes que controlan el ciclo y la diferenciacin celular. La activacin
gnica constituye la base para el diseo molecular de
una tercera generacin de biomateriales optimizados
para la regeneracin de tejidos. Sin embargo, un reto
importante es la construccin de catteres ideales que
permitan implantar de manera menos invasiva estos
tejidos generados ex vivo a fin de evitar procedimientos
quirrgicos.
La regeneracin in situ en el tejido daado se puede
estimular por la accin de ciertas citocinas capaces de
inducir el reclutamiento de clulas madre para regenerarlo. Con la ingeniera de tejidos se pueden implantar
clulas que recubran la superficie perifrica del sitio de
lesin por medio de catteres. Esta estrategia semiinvasora evita el riesgo de ciruga abierta y anestesia. La
matriz inyectable facilita la reparacin despus de la
lesin, como en el caso de infartos miocrdicos, proporcionando MEC dentro de la cual las clulas se conservan,
emigran y producen angiognesis. Los biomateriales
inyectables pueden servir como matriz de implantacin
de las clulas que producen neovascularizacin y reparan al miocardio infartado.
Se ha demostrado que la inyeccin de la matriz biodegradable de alginato en el miocardio infartado esti-
177
Figura 611. Paradigma clsico de la ingeniera de tejidos.

1. Estmulos diversos. 2. Biomateriales de matriz extracelular (MEC). 3. Terapia celular. 4. Citocinas y factores de crecimiento.
Figura 610. Bioingeniera cardiaca de tejidos. A. Fibras de

colgeno. B. Geles biodegradables. C. Lminas celulares
de tejido cardiaco diferenciado ex vivo. La adicin de factores de crecimiento, citocinas y hormonas (tringulos) interviene de manera definitiva en la divisin y diferenciacin de
las clulas madre.
mula la angiognesis, porque proporciona una forma de

MEC adecuada por donde puedan dividirse las nuevas
clulas, diferenciarse, integrarse y finalmente regenerar
la zona afectada. Sin embargo, todava se est buscando
la clula que forme cardiomiocitos ideales. Adicionalmente, estas estrategias se podran utilizar para la reparacin quirrgica del miocardio infartado o con defectos
congnitos. Tambin se est trabajando para controlar
la tolerancia inmunitaria para evitar que estos implantes
exgenos sean rechazados (figura 610).
Los cardiomiocitos se unen a la MEC por las protenas de membrana integrinas. La porcin extracelular de
estas molculas une la fibronectina a la MEC. Las protenas extracelulares de los perimiocitos, como distrofina y protenas relacionadas, contribuyen a la cardiognesis normal. Despus del infarto cardiaco se pierden
cardiomiocitos, la muerte celular en la zona del infarto
es catastrfica aunque breve. Posterior a ello ocurre una
respuesta curativa normal con inflamacin aguda, formacin de tejido de granulacin y formacin de tejido
cicatrizal. Las citocinas y factores de crecimiento se
liberan para reclutar leucocitos, sobre todo neutrfilos.
Los monocitos ingresan en el sitio de lesin y se convierten en macrfagos. La formacin de los vasos sanguneos es crucial para el miocardio infartado.
El tejido de granulacin es sustituido posteriormente
por colgeno y MEC producida por los fibroblastos. La
fibrosis resultante produce arritmias, enfermedad car-
diaca isqumica, hipertrofia cardiaca e insuficiencia

cardiaca congestiva. La sntesis de colgeno es compensada por la resorcin de MEC mediada por metaloproteinasas de la matriz. La actividad de estas enzimas se
incrementa en la cardiomiopata isqumica y dilatada.
Los cardiomiocitos fetales, los mioblastos esquelticos
y las clulas madre de la mdula sea ofrecen una posibilidad limitada para regenerar cardiomiocitos y mejorar la funcin cardiaca. Se han obtenido mejores resultados cuando se han injertado estas clulas en el sitio de
lesin, ya que estimulan el rea daada.
Se ha demostrado de forma alentadora para la medicina regenerativa que las clulas madre que residen dentro de la mdula sea o de la sangre perifrica se pueden
movilizar y reclutar hacia el corazn daado; adems,
se ha mostrado que el corazn contiene escasas clulas
madre residentes que se pueden diferenciar en msculo
cardiaco y tejido vascular, aunque la limitante para que
estas clulas madre puedan regenerar de manera ideal el
sitio afectado es que requieren una MEC endgena o
exgena creada por ingeniera de tejidos que proporcione el soporte adecuado. As pues, la bioingeniera de
tejidos no reemplaza ni sustituye la aplicacin de clulas madre, sino que es una forma de tratamiento en paralelo para garantizar que la medicina regenerativa tenga
xito cada vez ms en mayor proporcin de pacientes.
En la figura 611 se muestra el esquema de este tratamiento integral de frontera en un sitio afectado.
Modelos experimentales
de bioingeniera de tejidos
El nematodo Caenorhabditis elegans es un organismo
de vida libre que mide 1 000 mm de longitud. Sus casi
1 000 clulas transparentes son fcilmente visibles al
microscopio. A pesar de ser tan pocas, estas clulas
178
estn organizadas en sistema digestivo, muscular,

reproductor y un cerebro primitivo que ocupa la tercera
parte de sus clulas. Su ciclo de vida es de dos semanas
y ofrece un excelente modelo experimental para estudiar el comportamiento celular durante todo un ciclo de
vida: nacimiento, crecimiento, desarrollo y muerte.
Debido a que tiene una cantidad pequea de clulas
ha sido posible seguir todas y cada una de las divisiones
celulares que ocurren durante la embriognesis y que
forman al organismo completo, lo que ayuda a conocer
el origen celular de cada uno de los rganos que lo componen. De hecho, el gusano C. elegans es un verdadero
tubo de ensayo biolgico, en donde es posible manipular genes para estudiar su funcin y regulacin en un
ambiente natural. En el C. elegans se pueden estudiar
las clulas madre de manera experimental para su posterior uso teraputico en humanos. Las clulas madre germinales contienen en su citoplasma todos los componentes que se requieren para formar clulas, tejidos,
rganos y organismos completos.
El pez cebra tambin es un vertebrado diploide como
el humano (tiene doble material gentico), que representa un modelo ideal para la medicina regenerativa. La
embriognesis ocurre externamente y los embriones
son fcilmente visibles al microscopio por su transparencia, lo que permite estudiar todos los estadios de su
desarrollo, siguiendo con detalle la formacin de las capas embrionarias, la segmentacin del cerebro, la formacin de rganos, aparatos y sistemas como el digestivo, nervioso, corazn, pncreas, hgado, ojos, etc.
En ratones se ha demostrado que la inyeccin intramuscular de clulas del estroma de la mdula sea en
extremidades isqumicas, por ligadura de la arteria femoral, mejora la circulacin de la extremidad y evita su
autoamputacin.
Se cree que estas clulas pueden secretar diferentes
citocinas arteriognicas y contribuir a la formacin de
circulacin colateral mediante un mecanismo paracrino.
La clonacin posicional es una estrategia muy exitosa para la identificacin de numerosos genes que participan en las enfermedades mendelianas poco frecuentes; su aplicacin en las enfermedades complejas ha
tenido poca utilidad. Con esta estrategia se ha identificado el gen de la 5lipooxigenasa (5LO) como responsable de la resistencia al desarrollo de lesiones aterosclerticas en el ratn, incluso en presencia de
concentraciones elevadas de colesterol. La 5LO es la
enzima limitante en la biosntesis de los leucotrienos,
mediadores inflamatorios generados a partir del cido
graso poliinsaturado araquidnico. Tambin se ha demostrado la asociacin de la 5LO con la variacin en
(Captulo 6)
la respuesta farmacogentica en pacientes con asma y

asimismo se manifiesta asociacin significativa con el
espesor de la ntimamedia de la arteria cartida y en
desarrollo de aterosclerosis en humanos, igual que en
los ratones.
Los ratones knockin RAG1/GFP son un modelo de
estudio de la linfohematopoyesis temprana. Estos ratones knockin RAG1/GFP, a los que se les ha insertado
el gen de la protena verde fluorescente en el locus de la
enzima que recombina los segmentos genticos VDJ de
la inmunoglobulina y TCR, han sido particularmente
tiles en la investigacin de la biologa de progenitores
linfoides primitivos y en la generacin del conocimiento acerca del proceso de linfopoyesis temprana. Las
clulas con bajas o elevadas concentraciones de protena verde fluorescente (GFP) expresan concentraciones
correspondientes de transcritos de los genes de recombinasa RAG1, y las clulas sin linaje seleccionadas con
base en la expresin de GFP constituyen progenitores
extremadamente potentes de clulas linfoides.
Esto es, la transcripcin del locus RAG1 marca a los
progenitores linfoides tempranos en la mdula sea. De
esta manera se ha aprendido que las clulas troncales
hematopoyticas (HSC), los progenitores mieloides comunes (CMP), progenitores granulocticosmonocticos (GMP) y progenitores megacariocticoseritrocticos (MEP) residen en la fraccin RAG1/GFP, mientras
que los progenitores linfoides ms primitivos (ELP), al
igual que sus sucesores inmediatos (progenitores linfoides comunes, CLP) y una parte sustancial de los progenitores del linaje T (LSP), se caracterizan por la expresin moderada de RAG1/GFP, dando inicio a la
especificacin linfoide en la mdula sea.
Estos progenitores linfoides tempranos o ELP son
responsables de la produccin directa de algunos componentes clave de la respuesta inmune innata contra infecciones virales y bacterianas, como las clulas dendrticas plasmacitoides (pDC) y las clulas dendrticas
asesinas productoras de interfern (IKDC). Al mismo
tiempo, los ELP dan origen a los progenitores linfoides
ms diferenciados o CLP, los cuales expresan el receptor de IL7 y generan eficientemente linfocitos B y
clulas NK en la mdula sea, pero son poco poderosos
en la diferenciacin de pDC e IKDC.
Los receptores tipo Toll (TLR, de tolllike receptors)
han sido objeto de una intensa investigacin debido a
que estn constitutivamente presentes en diversas estirpes celulares de los sistemas innato y adaptativo; son los
responsables del rpido reconocimiento de patrones
moleculares asociados a patgenos, virus, bacterias y
parsitos. La sealizacin a travs de ellos dispara una
reaccin inespecfica pero limitante contra el agresor.

Datos recientes sealan que algunos TLR son expresados en la fraccin HSC de mdula sea de ratn, y que
su ligacin altera los patrones normales de diferenciacin y tiene una profunda influencia en la produccin de
precursores sanguneos. Asimismo, las observaciones
de los autores indican que las fracciones purificadas de
progenitores linfoides estn provistas de la maquinaria
funcional de reconocimiento de componentes microbianos, y que elevadas concentraciones de transcritos de
TLR9 son detectables en condiciones normales, abriendo la posibilidad de que estos progenitores linfohematopoyticos reconozcan directamente productos microbianos. Ms an, la produccin de clulas dendrticas se
ve fuertemente favorecida por la unin de motivos de
oligodeoxinucletidosCpG, ligandos sintticos de
TLR9.
Tan slo pocas horas despus de su exposicin a
CpG, los progenitores ms eficientes en la generacin
de clulas B CLP pierden esta capacidad y adquieren
potencial para producir clulas dendrticas, en parte
debido a la incompetencia para sealizar en respuesta a
IL7. En concordancia, estos progenitores linfoides recobrados de mdula sea de ratones tratados con CpG
muestran poca habilidad para producir linfocitos B y
aumentada competencia para producir tres tipos de DC,
incluyendo DC convencionales (cDC), IKDC y pDC.
Ms sobresaliente es el hallazgo de que durante la infeccin aguda por virus de herpes simple 1 (HSV1), cuyo
DNA contiene motivos CpG, se induce una significativa reduccin de los precursores de clulas B en mdula
sea, y se ve polarizada la produccin de linajes dendrticos a partir de CLP en cultivos de diferenciacin linfoide.
El fenmeno es dependiente de TLR9, sugiriendo que
en condiciones de infeccin viral o exposicin a componentes microbianos que sealicen va este receptor, los
progenitores linfoides ms primitivos pueden ser tocados y reprogramados o seleccionados a un destino de
diferenciacin distinto al original. Posiblemente sta sea
una de las respuestas ms tempranas y seminales hacia lo
no propio de las que se tenga conocimiento.
Por otra parte, se demostr que la expresin del gen
Oct4 (tambin conocido como Oct3, Oct3/4 y Pou5fl)
influye en la supervivencia de embriones clonados (por
transferencia de ncleos de clulas somticas a ovocitos
a los que se les elimin su propio ncleo) de ratones.
La actividad del gen Oct4, que codifica para un factor
de transcripcin (que regula la expresin de otros genes) esencial durante el desarrollo embrionario, est directamente relacionada con la viabilidad de los embriones; de hecho, sin expresin de Oct4 los embriones no
sobreviven. Se encontr adems que para que los em-
179
briones sobrevivan, la expresin de Oct4 debe darse en

concentraciones adecuadas, ya que mucha o poca expresin conduce a su muerte.
Slo 10% de los embriones clonados expresan Oct4
al nivel ptimo en los sitios y en los estadios embrionarios adecuados. Por ello, fallas en la expresin de Oct4
podran ser la causa de la gran ineficiencia en la clonacin de mamferos. Se ha demostrado que slo 3 de cada
100 embriones clonados alcanzan la madurez y logran
nacer. Sin embargo, como advierten los investigadores,
tambin otros genes podran expresarse incorrectamente en los embriones clonados.
A pesar del pequeo nmero de blastocistos de ratones clonados que expresaron Oct4 correctamente, fue
posible obtener clulas madre troncales embrionarias,
de manera que de acuerdo con estos resultados hacen
ms remota la posibilidad de xito de la clonacin humana con fines reproductivos, aunque al mismo tiempo
refuerzan la factibilidad de la clonacin teraputica
(tambin conocida como trasplante nuclear).
La transgnesis es posible en primates. El rea cientfica de transferencia de genes (transgnesis) a organismos eucariontes (organismos con clulas que tienen un
ncleo definido) tiene 20 aos de antecedentes y pas
por cinco etapas, cada una de las cuales ha marcado un
nuevo nivel en el desarrollo tecnolgico y en los estudios de organismos transgnicos.
La primera etapa se inici en 1980 y dur hasta 1984.
En estos aos los investigadores de EUA y la Unin
Sovitica desarrollaron una tcnica de transferencia de
genes por medio de microinyeccin a zigotos (huevos)
y obtuvieron los primeros organismos transgnicos de
laboratorio: ratn y mosca Drosophila, entre los ms
importantes. En esta etapa tambin se desarroll la tcnica para obtener plantas transgnicas. Con ello qued
demostrado que cualquier gen (de microorganismos,
plantas, animales y humanos) puede integrarse y expresarse en un organismo transgnico, afectando sus propiedades. Por ejemplo, el gen del crecimiento humano
estimula el crecimiento en ratones a los que se les ha
transferido dicho gen.
La segunda etapa se inici en 1985 y dur hasta 1989,
cuando se establecieron mtodos especficos para obtener animales transgnicos que no eran exclusivos del
laboratorio, como conejo, oveja, cerdo y vaca.
La tercera etapa ocurri de 1989 a 1992, cuando se
obtuvo un mtodo de transferencia de genes a sitios genmicos predeterminados. Este mtodo, conocido
como targeting, fue establecido con el uso de lneas de
clulas embrionarias totipotenciales (capaces de originar un organismo completo por sucesivas divisiones,
denominadas clulas madre embrionarias) que permi-
180
ten la obtencin de lneas de ratones transgnicos como

el knockout (animal al que se le sustituye uno de sus
genes por otro mediante mecanismos de recombinacin
homloga). Esta tcnica no poda ser aplicada a otros
tipos de animales adems de ratones, ya que no existan
lneas de clulas totipotenciales para otros organismos.
La cuarta etapa fue en aos ms recientes, 1996 y
1997, cuando los investigadores de Edimburgo, Escocia, lograron la clonacin de ovejas por medio de transferencia de ncleos de clulas somticas (cualquier
clula del organismo que no sea germinal) a vulos, y
combinaron este mtodo con la transferencia de genes.
Esta combinacin result en una gran eficacia para
obtener animales transgnicos y en los ltimos aos fue
usada para clonar, adems de ovejas, otros animales de
inters para la ganadera, como cerdos y vacas.
Uno de los resultados ms importantes de esta etapa
es el uso de clulas somticas no totipotenciales en lugar
de clulas embrionarias totipotenciales para el targeting
de genes, lo que abre la posibilidad de obtener animales
knockout entre especies animales de inters para la
ganadera, nico camino para la utilizacin de estos animales ms cercanos al ser humano como modelos de
enfermedades provocadas por disfuncin de genes particulares.
Durante la tercera y la cuarta etapa los animales
transgnicos ya se utilizaron en beneficio de la biomedicina como productores de sustancias farmacuticas
(aantitripsina, eritropoyetina, etc.), para mejorar la
calidad de la leche, como modelos para el estudio del
desarrollo de mtodos de diagnstico y tratamiento de
enfermedades importantes, como la enfermedad de clulas falciformes (patologa de hemoglobina), esclerosis amiotrpica lateral (enfermedad neurodegenerativa), hipertensin crnica (elevado nivel de presin de
la arteria cartida), degeneracin de la retina (enfermedad provocada por muerte celular) y otras ms. Adems, hay lneas de ratn que se utilizan en estudios de
diabetes, algunos aspectos del SIDA, oncologa, etc.
Las especies grandes son ms adecuadas que el ratn
para reproducir enfermedades y utilizarlas como modelos de padecimientos humanos.
En cuanto a los trasplantes, el problema de la escasez
de rganos y tejidos se manifiesta en todo el mundo. Una
de las respuestas a este problema es el uso de los cerdos
transgnicos, cuyos rganos y tejidos no son rechazados
por el organismo humano, al transferirles a los cerdos de
donde se obtienen estos rganos los genes humanos que
interactan con el sistema de histocompatibilidad y que
impiden el rechazo de los rganos y tejidos.
Hoy en da, al inicio del tercer milenio, estamos en la
quinta etapa de estos estudios, esto es, la obtencin de
(Captulo 6)
monos no antropoides transgnicos. Unos investigadores lograron transferir un gen de fluorescencia verde
(gen reportero) a 224 vulos no fertilizados de mono
Rhesus; estos vulos fueron fertilizados posteriormente
por medio de microinyeccin de espermatozoides y
transferidos a hembras. De cinco hembras embarazadas
nacieron tres machos normales, entre ellos un mono
transgnico llamado ANDi (iDNA, inserted DNA al
revs).
ANDi, el primer ejemplar transgnico entre primates
no antropoides, demostr que la aplicacin de la tecnologa de transgnesis es posible en estas especies. Los
monos no antropoides son muy parecidos a los humanos
y pueden ser modelos adecuados no slo para estudios
de enfermedades humanas graves como SIDA, cncer,
enfermedad de Alzheimer, Parkinson, epilepsia y otras
ms por medio de la transferencia de los genes respectivos; tambin pueden ser modelos para el desarrollo y
pruebas clnicas de tratamientos. La sociedad demanda
soluciones para problemas como el SIDA, el cncer y
los trasplantes, por slo mencionar algunos. Esta demanda slo podr ser satisfecha con el progreso de la
biotecnologa, tal como ocurre hoy en da en el campo
de la transgnesis y la clonacin. Claro que estos trabajos deben estar bajo el control de la comunidad cientfica y de la sociedad, a fin de restringir el uso de estos
animales en los experimentos y no utilizar animales
antropoides ni humanos en ningn tipo de manipulaciones genticas.
BIORREACTORES
En la ingeniera de tejidos clsica, las clulas en divisin proliferan y forman varias capas que crecen de
manera desorganizada. Para evitar esto se disearon los
biorreactores, los cuales pueden organizar los cultivos
en crecimiento en patrones apropiados para tejidos en
particular y regular la dinmica del flujo del medio de
cultivo y la geometra de los vasos sanguneos. En el
caso de los cultivos dinmicos pueden mantenerse en
una centrfuga a 50 rpm. En estas condiciones de movimiento giratorio, las clulas se enfrentan a las fuerzas
centrfugas y centrpetas, a la turbulencia del fluido, y
tienen acceso a todas las molculas del medio de cultivo
debido a la mezcla y el movimiento constante de ste.
Esos cultivos dinmicos tambin organizan a las
clulas en crecimiento, las cuales se repliegan en la
pared del recipiente y crecen en capas delgadas. Se ha
demostrado que los cultivos dinmicos tienen ventajas
superiores respecto a los cultivos estticos convencio-

nales, su actividad metablica es mejor, su adaptacin
al medio aerbico fisiolgico es ms adecuada, su material gentico es ms estable y su morfologa es superior
con una apariencia ms sana. Sin embargo, existen
ciertas excepciones y no todas las clulas pueden ser
cultivadas de la forma descrita, ya que ciertas poblaciones celulares pueden ser destruidas por la turbulencia
del medio de cultivo.
Los biorreactores se complementan con suaves pulsos elctricos controlados y fuerzas mecnicas como
compresin, estiramiento, gravedad, magnetismo, etc.
De esta manera se mejora y regula la proliferacin en la
distribucin de las clulas en el recipiente, donde adems se estimula la organizacin de una matriz extracelular artificial para que el tejido sea lo ms parecido
posible al sitio en donde va a ser colocado el trasplante.
Por ejemplo, se pueden disear vlvulas cardiacas artificiales con la biotecnologa de tejidos mediante la
metodologa antes descrita. A las clulas madre embrionarias se les induce a formar cardiomiocitos en un entramado de MEC artificial.
Este tejido muscular que se genera ex vivo puede posteriormente implantarse mediante un procedimiento
quirrgico en el paciente afectado. Sin embargo, todava existen enormes retos contra los que se tiene que
luchar y hay factores limitantes en la tecnologa de los
biorreactores. Se debe garantizar el aporte adecuado y
suficiente de nutrientes, oxgeno, factores de crecimiento, citocinas y hormonas para las clulas en crecimiento. Adems, el tejido en formacin en el biorreactor tiene un espesor de 100 mm; cuando el tejido alcanza
esta magnitud su crecimiento se detiene, ya que las clulas ms internas no pueden recibir los nutrientes y oxgeno adecuados para su supervivencia.
Este patrn de crecimiento permite obtener tejidos de
recambio gracias a la superposicin de estratos de clulas, de tal manera que se pueden cosechar los estratos
ms superficiales dejando los basales para que continen proliferando. Las clulas se cultivan con polmeros capaces de responder a las variaciones de la temperatura. Se obtiene adherencia y proliferacin a 37 _C y
se separan a 32 _C. Con este mtodo se han obtenido
tejidos similares al miocardio, crnea, vejiga y periodontal, piel, etc.
Otro factor adicional que se tiene que considerar para
el xito del procedimiento consiste en garantizar que
este tejido artificial generado ex vivo pueda sobrevivir
en el paciente despus de su trasplante, ya que sus clulas necesitan sobrevivir mediante adecuada perfusin
sangunea, neovascularizacin suficiente, integracin y
diferenciacin terminal ideal que garantice la correcta
funcin en su sitio de trasplante.
181
Regeneracin, rejuvenecimiento de
tejidos y optimizacin de la cicatrizacin
a travs de factores de crecimiento y
clulas madre autlogas
El objetivo de la bioingeniera de tejidos es regenerar o
mejorar los tejidos y las cicatrizaciones en cirugas o por
consultorio externo a travs de procedimientos autlogos. Para lograr estos objetivos se usan sistemticamente factores de crecimiento plaquetarios, clulas madre y
productos residuales a partir de la produccin de los
mismos. La funcin normal de los tejidos requiere que
el ndice de la prdida celular apoptosis sea correspondido por el ndice de su renovacin. El envejecimiento de un individuo se produce por la disminucin
de la reparacin o la aceleracin de la prdida celular de
los tejidos de los rganos (envejecimiento celular). El
conocimiento de este mecanismo de envejecimiento celular hace plantearse dos preguntas:
1. Cul es el reloj celular que mide el tiempo de la
senectud replicativa?
2. Cul es el lazo entre la senectud de la clula y el
envejecimiento del organismo?
Dado el agotamiento celular continuo, que sucede en el
tiempo, cuando la prdida excede la reparacin lo que
sobreviene conduce eventualmente a una declinacin
en la funcin y, en ltima instancia, a la falla del rgano.
Cuando est restringido a rganos especficos, puede
dar lugar a una de las muchas enfermedades degenerativas crnicas, como cirrosis del hgado. Actualmente se
sabe que en este envejecimiento est implicada la telomerasa (disminucin de la misma) con prdida parcial
del extremo telomrico que hace que cada clula tenga
una cantidad mxima de mitosis (aproximadamente 50
para los fibroblastos). Puede alterarse, al menos en
parte, el curso de este envejecimiento con el uso de clulas madre autlogas y factores de crecimiento plaquetarios para lograr mejoramiento de los tejidos e incluso
beneficiar la cicatrizacin de los mismos. Los factores
de crecimiento estn englobados en las molculas de
bajo peso molecular que reciben el nombre genrico de
citocinas. stas son molculas solubles que transmiten
informacin entre clulas. Son secretadas por las clulas de origen en respuesta a seales especficas e influyen en la respuesta y funcin de las clulas blanco.
Principales factores de crecimiento

S PDGF: factor de crecimiento derivado de plaquetas.
182
S
S
S
S
S

TGFb: factor de crecimiento transformante beta.
EGF: factor de crecimiento epidrmico.
VEGF: factor de crecimiento vascular endotelial.
IGFI: factor de crecimiento insulnico tipo I.
bFGF: factor de crecimiento fibroblstico bsico.
Clasificacin de las citocinas

S
S
S
S
S
S
Interleucinas (IL): 1 a 15.

Interferones (IF): alfa, beta, gamma.
Factor de necrosis tumoral (TNF): alfa y beta.
Factores estimulantes de colonias (CSF).
Factores de crecimiento transformante (TGF).
Otros factores de crecimiento (PDGF).
Una clula madre es una clula que tiene la capacidad

de dividirse (autorreplicarse) por periodos indefinidos
durante la vida del organismo. Bajo condiciones apropiadas, o dadas las seales correctas, las clulas madre
pueden diferenciarse hacia los diversos tipos de clulas
que forman el organismo. Segn su potencialidad se
clasifican en: totipotente (generan clulas embrionarias
o embriones), pluripotente (generan todos los tipos
celulares del embrin), multipotente (generan rganos
con sus tipos celulares), oligopotente (generan tejidos
especficos de un rgano) y unipotente (generan un solo
tipo de clula madura).
Debido a la capacidad de remedar o tomar las funciones del tejido por reparar se dice que tienen plasticidad.
La plasticidad es la capacidad de una clula madre adulta de tomar la funcin del tejido por reparar (las hemopoyticas se usan a nivel experimental para resolver patologas de cualquier tipo de tejido); por ejemplo, tejido
vascular, adiposo, heptico, etc.
Otras de las clulas madre usadas para reparacin o
regeneracin de tejidos son las SC mesenquimticas
(MSC, que son una proporcin importante de las SC de
la mdula sea). Las MSC representan una opcin teraputica atractiva, ya que pueden aislarse con relativa
facilidad. Se est explorando la capacidad de las MSC
para regenerar tejidos que el organismo no puede reparar o que lo hace muy lentamente. Las MSC no slo iniciaran la regeneracin tisular, sino que podran contribuir a la movilizacin de otras SC hacia el sitio de
reparacin. Se suele realizar una siembra directa en el sitio daado para atenuar o corregir desrdenes del tejido.
Uno de los conceptos ms modernos de las residencias de las SC es el de nicho. Las clulas madre junto
con las clulas del microentorno que las rodea forman
el nicho de las SC. Se puede definir funcionalmente
como la unidad multicelular y estructural dinmica
(Captulo 6)
que balancea las decisiones de autorrenovacin y destino de las clulas madre. Las clulas madre hematopoyticas (HSC) residen en los lugares localizados en el
hueso trabecular donde entran en contacto con los osteoblastos. Las digestivas se asocian para precisar localizaciones dentro de las subestructuras discretas (p. ej.,
unidades gstricas o criptas intestinales). Las epidrmicas que tienen el potencial de llenar de queratinocitos
basales el pelo y las glndulas sebceas se encuentran
en la ampolla del folculo piloso.
Del estudio de los nichos se desprende que hay tres
tipos de clulas madre, de acuerdo con su capacidad de
dividirse y actuar:
1. Long term SC (LTSC): son las clulas de reservorio por excelencia.
2. Short term SC (STSC): son las que actan como
reparadoras o regeneradoras de los tejidos; se calcula que se dividen durante cerca de dos meses
antes de desaparecer.
3. Multi potent progenitor (MPP): son la ltima fase
de las clulas madre, ya con las caractersticas del
tejido blanco, alta tasa de mitosis y corta sobrevivencia.
Una manera de medir la cantidad, o sea la posible funcionalidad de las clulas madre de mdula sea, es por
el recuento de stas en sangre perifrica. Se realiza a travs del antgeno CD34. ste da pautas indirectas de la
posibilidad de que las clulas hemopoyticas reactiven
los tejidos por tratar. El recuento mnimo funcional es
0.04% de los leucocitos circulantes. Es importante precisar que la poblacin CD34+ representa de 1 a 6% de
la mdula, mientras que el subconjunto de HCS representa solamente cerca de 0.05%. As, la poblacin
CD34+ incluye, adems de HCS, clulas no HCS (p. ej.,
clulas madre mesenquimticas).
Obtencin de factores de crecimiento

Las tcnicas para la obtencin de plasma rico en factores de crecimiento siguen las pautas del Dr. Anita con
respecto a la obtencin de la muestra y los tiempos de
centrifugacin (de 10 a 500 rpm para una centrfuga de
mesa). La diferencia es que no se realiza la activacin
plaquetaria con Cl2Ca a 10%, ya que se tratan los tejidos
blandos con heridas quirrgicas y en los cuales la cascada de la coagulacin se encuentra activada. Los factores de crecimiento se aplican en piel (cara, escote y cuello, manos, etc.), zonas de sutura, estras, cicatrices,
cavidades virtuales (lifting) y lceras (miembros infe-

riores). Los factores de crecimiento ms clulas madre
se aplican en cuero cabelludo, lipotransferencias, revascularizacin MI y cardiaca. En relacin con la optimizacin y sistematizacin de diferentes tcnicas en uso para
rejuvenecimiento, actualmente se estn realizando estudios prospectivos con:
1. Lser solo y combinado con factores de crecimiento o clulas madre o con ambos.
2. Factores de crecimiento + activacin de monolitos.
3. Recuperacin de clulas madre del tejido adiposo
de las lipoaspiraciones.
Obtencin de clulas madre de adulto

Se obtienen SC a partir de aspiracin mltiple en esternn, se separan las SC y se ponen a incubar en soluciones estabilizadoras (PBS pH 7.4) y nutrientes celulares
(complejo B y flico) durante 10 min, para luego resuspenderse las mismas en el PRPDGF obtenido previamente, ms o menos tres o cuatro veces volumen a volumen.
Una vez administrada, el paciente puede tener un discreto decaimiento e incluso un pico febril que ceden
espontneamente (en ningn momento presenta cuadros importantes) durante las primeras 24 a 36 h. Entre
los das 5 y 7 el paciente presenta un mejoramiento de
su estado general manifestando una sensacin de bienestar, y si su patologa de base es neurolgica, se evidencia una mejora importante a partir de la supresin
de sntomas como parestesias o paresias (ms rpido y
mejor cuanta menor evolucin en tiempo). Se obtienen
15 a 20 cc de mdula sea (en dos o tres punciones esternales). No se aspira ms de 7 cc por cada puncin. Se
centrifuga 20 a 250 x g. Se extraen las clulas madre de
la zona del Buffy Coat, incluida la zona de neocitos; el
resto se descarta. Luego se lleva a cabo la separacin de
clulas madre y clulas mononucleares por gradiente de
densidad (Ficoll Hypaque). Una vez obtenidas las clulas madre se resuspenden en el plasma rico en factores
de crecimiento aplicndose del mismo modo que los
factores de crecimiento solos.
Los tratamientos con sangre perifrica han sido utilizados desde hace aos para compensar las prdidas agudas de sta o intentando activar el sistema inmunitario
(aplicadas por va intramuscular) suprimiendo las alergias, o tambin como una alternativa para cualquier otro
tipo de enfermedad. Con el desarrollo del conocimiento
dichos tratamientos han avanzado de manera acelerada,
ya que se han utilizado los hemocomponentes: plaquetas, eritrocitos, leucocitos y clulas madre, cada uno de
183
ellos para patologas especficas. ltimamente tambin

estn siendo utilizados para otros fines, ya que se han
descubierto nuevas funciones de los elementos formes
de la sangre.
As, las plaquetas se utilizan para promover el rejuvenecimiento de los tejidos y la cicatrizacin a partir de
los factores de crecimiento plaquetarios (PDGF) que
estimulan la reproduccin celular y disminuyen la
apoptosis; las clulas mononucleares, para aumentar la
regeneracin tisular, y por ltimo, las clulas madre que
originalmente se usaron para el trasplante de mdula
sea, son hoy utilizadas para tratamientos de diversas
patologas de los distintos rganos de la economa.
Desde la vida perinatal hasta la adulta van apareciendo
SC en los tejidos somticos como parte de la fisiologa
del organismo para su renovacin. Esto nos lleva a concluir que en realidad las SC adultas no son clulas primitivas derivadas del embrin, sino clulas que aparecen tardamente y que estn especializadas en proveer
clulas de reposicin para el mantenimiento tisular.
Estas clulas adultas se encuentran en espacios
bien definidos y delimitados para cada rgano y reciben
el nombre de nicho de las SC. A partir de estos nichos
se sucede la renovacin de las clulas del organismo,
que se encarga de mantener el equilibrio de las que mueren con las que se reponen (eutrofismo o juventud). Con
el transcurso de los aos estos nichos se van despoblando y la cantidad celular no puede ser repuesta en forma
acabada, es decir, siempre se pierden ms que las que se
reponen (distrofismo o envejecimiento). Ya que se conocen algunos reservorios de factores de crecimiento y
clulas madre, se disean y realizan tratamientos intentando disminuir esta relacin de prdida/reposicin.
Objetivos teraputicos
de la terapia celular
1. Rejuvenecimiento de tejidos (sobre todo piel y faneras), los cuales pueden estar solos o asociados
a otros mtodos de rejuvenecimiento (luz pulsada
y lser).
2. Como tcnicas de cicatrizacin y rejuvenecimiento en cirugas (maxilofacial y plstica).
3. Como tratamientos de patologas preexistentes
(vasculopatas, cardiopatas).
4. Para revitalizacin de todo el organismo (como
consecuencia de los trasplantes de MO).
Prcticamente no hay contraindicaciones para realizar
la terapia celular, aunque se pueden excluir las pacientes
embarazadas. Como tratamiento alternativo para las
184
enfermedades de base, las intercurrentes y como revitalizacin de todos los rganos del cuerpo, la terapia celular intravenosa es mucho ms efectiva que si se aplica
de forma local en el lugar de la lesin. El tratamiento
local es el tratamiento mediante el cual se accede de
forma directa al tejido enfermo, por lo general mediante
catteres (p. ej., corazn), salvo los que involucran la
crnea. Para esto adems se necesita un equipo de hemodinamia y un cardilogo intervencionista.
El implante regional es el que acta sobre la zona a
partir de la colocacin sobre la arteria que irriga la zona;
esto se da por lo general para SNC (utilizacin de las cartidas y para determinadas patologas arteriales en
miembros inferiores). De manera paradjica contra lo
que uno piensa a priori, el mtodo con mayor efectividad es el sistmico por va intravenosa, que consiste en
(Captulo 6)
la colocacin de todo el concentrado de SC y clulas

mononucleares (las cuales no se separan, ya que adems
tienen un efecto propio en la reparacin a travs del proceso inflamatorio). Este concentrado puede ser resuspendido tanto en su propio suero como tambin en
plasma rico en plaquetas o en factores de crecimiento
(los autores prefieren este ltimo, ya que adems se
tiene efecto antiapoptsico y promittico de los PDGF).
La regeneracin precisa para el sitio afectado que se observa con la terapia celular se explica porque la regeneracin de los tejidos es por la va de la quimiotaxis, en
la cual tambin estn involucradas las SC a travs de las
quimiocinas SDF1, que son las quimioatrayentes
especficas y las integrinas de las SC (protenas de
membrana especficas para la unin en cada tejido), por
ejemplo a4 b1 para el endotelio vascular.
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186
(Captulo 6)
Captulo
Terapia celular y neurorregeneracin
INTRODUCCIN
base gentica y molecular que conduce a esta conducta

se desconoce, al igual que se ignora por qu el hombre
tiende a ser sociable. De momento, se han descubierto
algunos compuestos cerebrales cuyo nivel se relaciona
con comportamientos ms cooperativos.
Anatmicamente, el sistema nervioso se divide en
sistema nervioso central (SNC) y perifrico (SNP); considerando la funcionalidad se divide en sistema nervioso de la vida de relacin y sistema de la vida vegetativa, y ste a su vez se subdivide en sistema nervioso
simptico (SNS) y parasimptico (SNPS). El sistema
nervioso es un conjunto de estructuras neurales muy
especializadas en excitacin, neurosecrecin y conduccin, lo que se lleva a cabo con rapidez y especificidad
entre reas muy distantes del organismo. Las neuronas
son clulas nerviosas especializadas con la capacidad
estructural y electrofisiolgica de conductibilidad e irritabilidad; a la onda que generan se le llama impulso nervioso. Ante la accin de un estmulo determinando se
transduce esta energa en actividad elctrica por los
receptores sensoriales. El estmulo puede desencadenar
una respuesta inmediata o se puede almacenar. El cerebro, en especial la corteza cerebral, transforma la informacin en funciones superiores, que dependiendo del
estmulo pueden ser conscientes o inconscientes.
Las uniones ntimas continuas (zonulae occludens)
forman la barrera hematoenceflica, la cual impide el
paso de casi todas las molculas a excepcin de las sustancias liposolubles, que pasan con facilidad. Esta
barrera tiene por funcin proteger el tejido enceflico y
tambin regula el paso de iones (Na, K, Cl, Ca, amonio
e hidrgeno). En zonas donde no hay barrera, como en
los plexos coroideos y los rganos circunventriculares,
El debate sobre la naturaleza de la conciencia ha dejado

de ser un tema filosfico. Para algunos cientficos, la
conciencia emerge de la organizacin de las neuronas
en el cerebro, pero no se sabe cmo. El estudio de
pacientes con dao neurolgico ha arrojado las primeras pistas, pero de ah a entender cmo funciona la conciencia en personas sanas hay un mundo de distancia.
El rastreo y captacin de imgenes del cerebro de
voluntarios sanos mientras realizan tareas es una estrategia. Luego habr que reconstruir el rompecabezas del
conocimiento y responder a su aspecto ms enigmtico:
el sentido del yo. Freud llev a que nuestros sueos fueran un enchufe para nuestros deseos inconscientes.
Ahora, los neurlogos sospechan que la actividad del
cerebro durante el sueo REM, cuando ocurren los sueos, es crucial para aprender; entonces, la experiencia
de soar es apenas un efecto secundario?
Los experimentos en animales y las tcnicas de imagen han aportado conocimientos valiosos sobre los
tipos de memoria y las reas del cerebro implicadas.
Pero quedan muchos huecos, algunos neurlogos piensan que la proyeccin de imgenes del cerebro revelar
los circuitos implicados en este razonamiento. Diversos
aspectos de la personalidad son influidos por los genes:
el ambiente modifica los efectos genticos. Hay discusin sobre las contribuciones relativas.
La cooperacin, o la organizacin para la ayuda mutua, es una caracterstica que comparten muchas especies de animales, desde las abejas hasta los humanos. La
187
188
los capilares son fenestrados y permiten el paso libre de

diferentes sustancias.
Hasta ahora ninguna forma de tratamiento haba demostrado capacidad para regenerar fisiolgicamente el
sistema dopaminrgico nigroestriatal en la enfermedad
de Parkinson (EP). El trasplante de mesencfalo fetal
puede restaurar parcialmente el dficit de dopamina estriatal. En la actualidad, los trasplantes de mdula suprarrenal se han abandonado por su elevada morbimortalidad. Los xenotrasplantes fetales y el trasplante de
clulas retinianas tambin son poco alentadores. Sin
embargo, a partir de las clulas madre se puede obtener
gran cantidad de clulas dopaminrgicas, pero se requiere controlar los mecanismos de expansin y diferenciacin a clulas dopaminrgicas. Recientemente se
han introducido al mercado clulas madre y factores
trficos procedentes de Suiza y Alemania, con resultados alentadores.
Desde 1963, en que se estableci que la administracin de Ldopa mejoraba la aquinesia, ha sido el tratamiento de eleccin. En la dcada de 1980 se iniciaron
los trasplantes de clulas fetales mesenceflicas, los
cuales mostraron efectividad teraputica. Tambin se
demostr que las neuronas sobreviven en el cerebro despus del trasplante y que el nmero de neuronas viables
es un factor determinante de la mejora clnica. Se sabe
que el tejido trasplantado restituye la descarga regulada
de dopamina en el estriado y que las neuronas fetales
dopaminrgicas se integran funcionalmente en los circuitos neuronales lesionados. El resultado global es una
mejora de la activacin de las reas corticales frontales
responsables de la aquinesia del Parkinson. Un dato que
muestra la buena supervivencia del implante y la reinervacin del estriado denervado se refleja en el incremento
de la captacin in situ de 18F con 6[18F]1dopa mediante tomografa de emisin de positrones. El crecimiento axonal se estima por el alargamiento de 2 a 3 mm
en el lugar del implante. Con estos resultados, los estudios en pacientes se iniciaron en 1997 con el implante
intraestriatal de clulas fetales humanas mesenceflicas
ricas en neuronas dopaminrgicas posmitticas procedentes de fetos de aborto de 6 a 9 semanas de gestacin.
Con este mtodo se han demostrado mejoras de 18 a
34% en la Unified Parkinsons Disease Rating Scale
(UPDRS) o ndice motor a los 12 meses del implante
bilateral, y en la actualidad se contabilizan ensayos clnicos en ms de 350 pacientes. Los ensayos clnicos con
trasplantes intraestriatales de neuronas ofrecen mejora
en el tratamiento de la enfermedad de Parkinson, aunque
no son igualmente efectivos en todos los pacientes. La
generacin de neuroblastos dopaminrgicos a partir de
clulas madre embrionarias con mejor accesibilidad abre
(Captulo 7)
un campo de estudio de gran inters y con gran potencial.

La neurognesis posnatal ocurre en las clulas granulares
del hipocampo, corteza cerebelar, bulbos olfatorios y
clulas del epitelio olfatorio. Las clulas madre tienen un
enorme potencial como clulas capaces de reconstruir las
neuronas y estructuras daadas en enfermedades como
esclerosis lateral amiotrfica, enfermedad de Alzheimer,
enfermedad de Parkinson, esclerosis en placas, infartos
cerebrales y las lesiones medulares, por mencionar algunas. El sistema nervioso central aade una dificultad adicional a la terapia celular al ser un rgano con una organizacin estructural especializada.
Las clulas implantadas han de ser capaces no slo de
injertarse, sino tambin de establecer nuevas conexiones sinpticas y de integrarse al resto del tejido circundante. La enfermedad de Parkinson (EP) es una enfermedad neurodegenerativa que afecta a ms de 2% de la
poblacin mayor de 65 aos de edad. Se caracteriza por
una degeneracin progresiva de las neuronas dopaminrgicas de la sustancia negra que origina la aparicin
de los signos y sntomas caractersticos de la enfermedad. A pesar del tratamiento farmacolgico, la evolucin de la enfermedad conlleva complicaciones motoras y psiquitricas que disminuyen la calidad de vida de
los pacientes y dificultan su manejo clnico. La utilizacin de clulas con capacidad de sintetizar, liberar dopamina y restablecer los circuitos neuronales daados se
perfila como nuevas expectativas en el tratamiento de la
EP. En la EP se utilizaron clulas de origen fetal en ensayos clnicos en humanos con resultados cuando menos
controvertidos. Estudios in vitro e in vivo demostraron
que tanto las clulas madre embrionarias como las adultas (clulas madre de mdula sea, clulas madre neurales) son capaces de diferenciarse a neuronas dopaminrgicas. Sin embargo, no est claro hasta qu punto dichas
clulas son capaces de restablecer los circuitos neuronales destruidos en la EP y, por lo tanto, de eliminar los
sntomas de la enfermedad.
Las lesiones medulares, principalmente secundarias
a traumatismos, son una de las causas ms frecuentes de
patologa neurolgica en edades tempranas. No existe
curacin para esta enfermedad incapacitante, por lo que
la posibilidad de utilizar clulas madre para restablecer
las conexiones axonales aparece como una estrategia
especialmente atractiva. Estudios recientes sugieren
que las clulas madre embrionarias poseen la capacidad
de diferenciarse a neuronas motoras y facilitar la recuperacin motora en animales con lesiones espinales. Sin
embargo, parece que el mecanismo por el cual dichas
clulas contribuyen a restablecer las neuronas motoras
estara relacionado con la liberacin de factores de crecimiento que contribuiran al recrecimiento de los axo-

nes destruidos. Otros tipos celulares, como las clulas
de la gla envolvente o las clulas mesenquimatosas (o
del estroma) de la mdula sea tambin han demostrado
su capacidad para favorecer el recrecimiento de los axones tal como se ha demostrado en modelos animales.
La esclerosis mltiple es una enfermedad neurodegenerativa caracterizada por la degeneracin de las clulas
productoras de mielina (oligodendrocitos), que se manifiesta por una afectacin motora y sensitiva a consecuencia de la desmielinizacin de los axones. La posibilidad de favorecer la formacin de mielina mediante la
utilizacin de clulas madre capaces de diferenciarse a
oligodendrocitos ha sido explorada en modelos animales. Un estudio reciente ha podido demostrar, en un
modelo de esclerosis mltiple en ratn (ms concretamente, de encefalitis autoinmunitaria experimental),
que la inyeccin de neuroesferas (clulas madre neurales) tanto de forma intravenosa como intratecal promueve la remielinizacin multifocal. Es indudable que
estos resultados estn muy lejos de justificar experimentos en pacientes en una enfermedad que, aunque incapacitante, tiene una supervivencia prolongada. Por su gran
incidencia y elevado costo econmico y humano que
generan accidentes cerebrovasculares son uno de los
objetivos ms atractivos para la terapia celular.
Las evidencias recientes que indican la presencia de
un proceso de neurognesis tras producirse isquemia
cerebral han estimulado el inters por utilizar clulas
madre para suplementar la regeneracin autloga que se
produce espontneamente. El beneficio de la terapia
celular con clulas madre podra deberse al aporte exgeno de clulas con capacidad de neurognesis o de
angiognesis, o por la modulacin del microambiente,
estimulando la supervivencia y diferenciacin de las
clulas residentes en el tejido daado.
El trasplante de clulas madre neurales en modelos
de rata demostr ciertos beneficios, y de hecho se han
llevado a cabo pequeos estudios en humanos utilizando neuronas obtenidas a partir de una lnea celular de
teratocarcinoma. Los estudios realizados en animales
sugieren que las clulas de mdula sea son reclutadas
a las zonas de infarto cerebral y que contribuyen a la
mejora funcional cuando se inyectan focal e intravenosamente.
La inyeccin de clulas se asocia con la formacin de
nuevos vasos, liberacin de factores trficos y con la
expresin de marcadores neurales por parte de las clulas implantadas. No son aqullas las nicas enfermedades neurolgicas susceptibles de beneficiarse de la terapia con clulas madre, pero s las ms frecuentes o las
que representan un paradigma, como es el caso de la
enfermedad de Parkinson.
189
NEURONAS
Las neuronas son clulas sumamente especializadas

que se presentan en muchas formas, tamaos y variedades. Se llama neurona el cuerpo (soma) de la clula nerviosa, incluyendo sus prolongaciones; posee un cuerpo
celular o soma que se compone del ncleo y el pericarion, el cual emite prolongaciones citoplasmticas llamadas dendritas. El axn, que puede medir hasta 1 m de
longitud, tambin puede emitir prolongaciones en
donde se llevan a cabo las sinapsis. La neurona es la unidad funcional del sistema nervioso (figura 71).
En todo el sistema nervioso las neuronas adoptan una
gran variedad de formas, segn la disposicin del axn
y la cantidad de dendritas; se clasifican en:
A. Estructura de las clulas nerviosas
B. Neurotransmisores y neurohormonas
C. Transmisin sinptica de la seal
Figura 71. A. Estructura de las clulas nerviosas. B. Neurotransmisores y neurohormonas. C. Transmisin sinptica
de la seal.
190
(Captulo 7)
1. Unipolares: slo tienen una prolongacin y son

raras en los vertebrados; se observan durante la
neurognesis.
2. Bipolares: emiten una prolongacin por cada extremo del cuerpo celular; adems del axn tienen
slo una dendrita (receptores de los sentidos del
olfato, la vista y el equilibrio).
3. Multipolares: contienen una gran cantidad de
dendritas y se proyectan del cuerpo celular (clulas de Purkinje).
4. Seudounipolares: contienen un cuerpo circular y
emiten una nica prolongacin que se separa formando una T. Su soma se localiza en los ganglios de las races posteriores de los nervios espinales y en los ganglios sensitivos de los nervios
craneales.
La sinapsis es el proceso esencial en la comunicacin
neuronal y constituye el lenguaje bsico del sistema nervioso. Las dendritas son las conexiones de entrada de la
neurona y el axn es la salida que enva impulsos o seales a otras clulas. Esta unin puede ser inhibitoria o
excitatoria segn el transmisor que la libere; cada neurona recibe de 1 000 a 200 000 sinapsis. La transmisin
de una seal de una clula a otra por medio de la sinapsis
es un proceso qumico y elctrico. Se considera porcin
presinptica la porcin del axolema de la clula que
enva el estmulo, mientras que la porcin postsinptica
es la zona celular que recibe la seal. La hendidura
sinptica es el espacio o hendidura extracelular intermedia de las dos clulas y puede medir 30 nm de ancho.
La unin del neurotransmisor con el receptor de la
membrana postsinptica modifica la permeabilidad
para ciertos iones y provoca variacin en el potencial
elctrico. El estmulo es excitatorio si disminuye el
potencial de accin o de membrana (el glutamato y el
aspartato son los principales transmisores excitatorios)
e o inhibitorio (GABA y glicina) si aumenta el potencial
de membrana, ya que disminuye la posibilidad de formacin de un potencial de accin (figura 72).
Los receptores acoplados a protena G se llaman
receptores metabotropos. El mecanismo de eliminacin de los neurotransmisores vara de acuerdo con el
tipo de neurotransmisor. La colocalizacin es la existencia de dos o ms neurotransmisores distintos en la
misma placa terminal.
Las sinapsis se clasifican en dos tipos segn la transmisin del impulso: sinapsis elctrica y sinapsis qumica.
Actualmente se han identificado unos 50 neurotransmisores, que por su diversidad funcional y efectos se
clasifican en (figura 73):
Figura 72. A. Potencial de reposo. B. Potencial de accin.
1. Sistema rpido. Son de accin corta e inmediata.

2. Sistema lento. Su accin es de larga duracin y
tienen efectos neuromoduladores.
Se conocen varios tipos de neurotransmisores:
1. Aminas: acetilcolina, noradrenalina, dopamina,
serotonina e histamina.
2. Aminocidos: glutamato, aspartato, GABA y glicina.
3. Pptidos: encefalina, betaendorfina, dinorfina,
neuropptidos, sustancia P y neurotensina.
4. Purinas: adenosintrifosfato (ATP).
5. Compuestos gaseosos: NO, CO.
Clulas del tejido nervioso

El SNC consta de una enorme cantidad de neuronas y
sus prolongaciones estn incluidas en una masa de clu-
191
A. Neurotransmiroes importantes
CH 3
+
H3 CCOCH2 CH2 NCH3
Acetilcolina
CH 3
COO
Aminocidos
COO
+
H3 NCH
Glutamato
Glicina
Dopa
g aminobutirato (GABA)
Dopamina
Noradrenalina
Adrenalina
Serotonina
Histamina
+
H3 NCH2
Glutamato
Glicina
+
H3 NCH2
+
H3 NCH2
+
H3 NCH2
CH2
CH2
CH2
CH2
COO
N
H
GABA
bendorfina
Metencefalina y leuencefalina
Tiroliberina (TRH)
Gonadoliberina (GnRH)
Sustancia P
Somatostatina
Angiotensina II
Colecistocinina (CCK4)
y muchas otras
Pptidos:
ATP
ADP
AMP
Adenosina
YGGFMTSEKSQTPLVTLFKNAITKNAYKKGE
YGGFMeYGGFL
<GHPNH 2
<GHWSYGLRPGNH2
RPKPQQFFGLM
AGCKNFFWKTFTSC
H
N
DRVYIHPF
O
WMDFNH2
C
NH
N
O
CH2
P P
N HC
C
H
O
O
Tiroliberina
PP P
N
H
Histamina
Serotonina
Piroglutamato (<6)
Derivados de
las purinas:
(CH 2 ) 2
COO
Aminas
bigenicas:
NH2
A
P
B. Biosntesis de las catecolaminas
1
2
Tirosina3monooxigenasa [Fe2+ , THB] (1.14.16.2)

Descarboxilasa de los Laminocidos aromticos
(Dopadescarboxilasa) [PLP] (4.1.1.28)
COO
+
H3 NCH
A
P
CH 2
O2
OH
Tirosina
DehidroascorbatoSadenosilmetioninaSadenosilhomocistena
N
A
P
COO
+
H3 NCH2
CH 2
OH
Dopamina bmonooxigenasa [Cu] (1.14.17.1)

FeniletanolaminaNmetiltransferasa (2.1.1.28)
3
4
CO 2
2
+
H3 NCH2 Ascorbato
CH 2
OH
HOCH
3
O2
H2 O
OH
OH
OH
Dopa
Dopamina
CH 3
+
H2 NCH2
+
H3 NCH2
4
HOCH
H2 O
OH
OH
Noradrenalina
Figura 73. A. Neurotransmisores importantes. B. Biosntesis de las catecolaminas.
OH
OH
Adrenalina
192
las de sostn conocida como neurogla. Las neuroglas

superan en nmero a las neuronas. Comprende las clulas de la gla que se encuentran entre las neuronas del
SNC y el epndimo. Se denominan gla perifrica las
clulas satlite de los ganglios espinales y de los nervios
craneales y las clulas de Schwann de los nervios perifricos (se describirn ms adelante). Las clulas de la
neurogla a su vez se dividen en:
Astrocitos o astrogla
Son clulas con caracterstica forma de estrella, con
numerosas prolongaciones que junto con un vaso sanguneo forman procesos pediculares. Se distingue su
ncleo por ser ms claro, su citoplasma cuenta con
numerosos grnulos de glucgeno y los filamentos son
intermedios compuestos por protena cida fibrilar glial
(PAFG). En los astrocitos fibrosos el contenido de filamentos gliales es muy importante; stos se encuentran
en la sustancia blanca, presentan menos prolongaciones, ms largas y menos ramificadas que el tipo principal, los astrocitos protoplasmticos, que se localizan en
la sustancia gris y poseen prolongaciones de forma variable. Tienen la funcin mecnica de sostn y actan
como armazn para la migracin de las neuronas
durante el desarrollo del sistema nervioso, participan en
la produccin de lactato a partir de glucosa y conforman
el sistema de cicatrizacin (esclerosis).
(Captulo 7)
glas son las primeras en reaccionar y se transforman en

clulas reactivas con fagocitosis activa.
Epndimo (clula ependimaria)
Son clulas cilndricas ciliadas que tienen un ncleo
ovoide basal con cromatina laxa; su eje mayor es perpendicular a la lmina basal. Se denomina epndimo el
epitelio cbico que recubre la superficie interna de los
ventrculos cerebrales y el conducto central de la
mdula espinal. Las superficies ventriculares estn
recubiertas de cilios que colaboran con la velocidad de
flujo del lquido cefalorraqudeo. Las clulas estn relacionadas por medio de su porcin apical por desmosomas dispersos. El recubrimiento ependimario del piso
del tercer ventrculo tiene caractersticas especiales y
las clulas llamadas tanicitos, con prolongaciones muy
largas que se extienden desde el interior del tejido enceflico hasta la piamadre, en donde forman procesos
pediculares (cuadro 71).
Clula del plexo coroideo
Su ncleo es esfrico central de cromatina laxa. Las clulas de los plexos coroideos en los ventrculos cerebrales
sintetizan lquido cefalorraqudeo (LCR). Los plexos
coroideos estn formados por dos capas: la aracnoidea y
la ependimaria, con una superficie total de 200 cm2.
Estas clulas son cuboideas con numerosas mitocondrias
y microvellosidades (ribete en cepillo) atpicas.
Oligodendrocitos u oligodendrogla
Clula satlite
Poseen menos prolongaciones y ramificaciones, su ncleo es ms pequeo y oscuro que los astrocitos, el cuerpo celular es pequeo y su citoplasma no contiene filamentos ni grnulos de glucgeno. Los oligodendrocitos
satlites estn adosados al cuerpo de las clulas nerviosas
de la sustancia gris, mientras que los oligodendrocitos
interfasciculares se encuentran en la sustancia blanca y
forman hileras entre las fibras nerviosas. Los oligodendrocitos forman la mielina en el SNC, por lo que son
homlogos de las clulas de Schwann del SNP.
Microgla
Son clulas pequeas con ncleo reducido, oscuro y
delgadas prolongaciones con finas espinas. Se localizan
en todo el SNC y son ms numerosas en la sustancia gris
(5 a 20% del total de las clulas neurogla). Son de origen mesodrmico y provienen de los monocitos fetales.
En caso de lesin o dao del tejido nervioso, las micro-
Tienen ncleo ovoide y central de cromatina laxa; su

funcin es de sostn, proteccin y nutricin de las clulas ganglionares de los ganglios raqudeos.
Revestimiento de las fibras nerviosas

En el SNP todos los axones estn envueltos por clulas
de Schwann, mismas que proporcionan un sostn estructural y metablico. Los nervios pequeos se encuentran cubiertos nicamente por el citoplasma de
estas clulas y se los conoce como fibras nerviosas perifricas amielnicas. Las fibras mielnicas tienen una
mayor velocidad de conduccin de los potenciales de
accin. En el SNC la mielina es producida por los oligodendrocitos. Las fibras nerviosas amielnicas conducen
impulsos a una velocidad menor de 1 m/s y las mielnicas a 120 m/s. La mielinizacin comienza al cuarto mes
de gestacin y termina a los 25 aos de edad. La mielina
193
Cuadro 71. Anticuerpos usados para detectar diferenciacin de clulas en el SNC

Tipos
Anticuerpos
Clulas madre neurales

Neuronas
Nestina (ratn)
bIIItubulina (ratn)
Microtbulos asociada protena 2a, b (ratn)
67kDA neurofilamento protena (NFL; ratn)
110kDA neurofilamento protena (NFM; ratn)
210kDa neurofilamento protena (NFH; ratn)
Neurona especfica anolasa (NSE; conejo)
NeuN (ratn)
Conejo antiNG2
O1 (ratn)
O4 (ratn)
Galactocerebroside (ratn)
Rip (ratn)
APC (ratn)
MBP (ratn)
mAb328 (ratn)
Glial protena cida fibrilar (GFAP; ratn)
Oligodendrocitos
Astrocitos
est formada de 75% de lpidos (sobre todo colesterol)

y 25% de protenas. Entre las clulas de Schwann existen intervalos en el axn que no posee vaina de mielina
y recibe el nombre de ndulo de Ranvier. La vaina de
mielina evita que el potencial de accin del nervio se
propague de manera continua a lo largo del axn y hace
que el impulso viaje a saltos de ndulo a ndulo, conduccin saltatoria que aumenta mucho la velocidad de
conduccin de los axones. En algunas zonas de la vaina
de mielina internodular quedan espacios estrechos de
citoplasma que se conectan con el grueso del citoplasma
de la clula; a estas regiones se las conoce como hendiduras de SchmidtLanterman.
En caso de ruptura de las fibras nerviosas, ocurre
degeneracin walleriana (degeneracin del segmento
distal a la lesin) debido a que las clulas de Schwann
que secretan factores de crecimiento nervioso quedan
separadas de las fibras nerviosas. Si la distancia es
demasiado grande, los filopodios en crecimiento, de los
nervios seccionados, se mezclan con el tejido conectivo
y se forma un neuroma de amputacin cuyas fibras sensitivas pueden causar dolor. La velocidad de crecimiento de un nervio perifrico es de 1 a 2 mm/da. La
regeneracin puede durar varios meses. La mielina de
los oligodendrocitos evita que los axones del SNC se
regeneren (efecto paradjico). En la cromatlisis o ruptura de la sustancia de Nissl, la reaccin del soma
comienza un da despus de la seccin del axn y culmina despus de dos semanas. Esta reaccin puede ser lo
suficientemente intensa como para destruir la neurona.
Fuente
Banco para el desarrollo de estudios de hibridoma
Sigma
Sigma
Sigma
Chemicon
Sigma
Stressgen biotechnologies corp
Chemicon
Chemicon
Boehringer Mannheim
Boehringer Mannheim
Boehringer Mannheim
Chemicon
Calbiochem
Chemicon
Chemicon
Boehringer Mannheim
NEUROGNESIS
El tejido nervioso se origina de la capa germinativa
ectodrmica. En el periodo embrionario la notocorda
estimula tambin la formacin de la cresta neural. La
cresta neural tiene la caracterstica de que estimula la
formacin del neuroencfalo. El estmulo del epitelio
reticular forma surcos, que luego se unen y forman el
tubo neural con un neuroporo anterior y otro posterior.
El neuroporo anterior da lugar al encfalo (cerebro y
cerebelo), el posterior da lugar a la mdula espinal. El
tubo neural primario se compone de una sola capa de
clulas neuroepiteliales cilndricas; estas clulas se
diferencian en neuronas y neurogla. Las clulas neuroepiteliales estn recubiertas por las membranas limitantes externa e interna; posteriormente el epitelio se
transforma en seudoestratificado y estratificado. Estas
clulas que revisten el tubo neural dan origen a: clulas
nerviosas, neurogla, clulas ependimarias y plexos
coroideos. Las neuronas grandes evolucionan antes que
las pequeas y las motoras antes que las sensitivas; las
interneuronas son las ltimas en evolucionar. Las clulas de la gla evolucionan despus que las neuronas. La
induccin neuronal a las 3 a 4 semanas de gestacin va
seguida de la proliferacin de neuroblastos a las 8 a 25
semanas de gestacin. La migracin neuronal y agregacin selectiva neuronal ocurre entre las semanas 8 y 34
de gestacin, la diferenciacin neuronal y formacin de
vas especficas de conexin entre la semana 5 de gesta-
194
cin y los 4 aos de vida. La muerte neuronal en corteza

y eliminacin de sinapsis selectivas en corteza ocurre
entre los 2 y los 16 aos de edad, la mielinizacin se presenta a partir de la semana 25 de gestacin y hasta los
20 aos de edad. Las neuronas se generan en el cerebro
a un ritmo promedio de ms de 250 000/min para llegar
a la cifra final total de 100 000 millones de neuronas en
el cerebro humano antes del nacimiento.
Los cambios ms importantes de la neurognesis se
agrupan en varias fases (figura 74):
(Captulo 7)
to. Los astrocitos tipo 2 aparecen durante la primera

semana de vida extrauterina.
Cresta neural
La cresta neural en su etapa de diferenciacin y maduracin genera una serie de clulas que se distribuyen en el
embrin en direccin cefalocaudal. De estas clulas se
originan:
1. Clulas cromafines.
2. Clulas sensitivas de los ganglios nerviosos.
3. Clulas de los plexos ganglionares de Meissner y
Auerbach.
4. Clulas de la aracnoides.
5. Odontoblastos.
6. Melanocitos.
Fase I: induccin de la placa neural.

Fase II: migracin neuronal.
Fase III: agregacin neuronal.
Fase IV: diferenciacin celular.
Fase V: sinaptognesis.
Fase VI: muerte neuronal.
DESARROLLO DEL SISTEMA NERVIOSO
Desarrollo glial en el SNC

La teora ms aceptada es la que propone un linaje diferente para astrocitos tipo 1 y astrocitos tipo 2, mientras
que los oligodendrocitos compartiran la misma clula
precursora con los astrocitos tipo 2. Las clulas progenitoras bipotenciales (O2A) generan oligodendrocitos o
astrocitos tipo 2. Los astrocitos tipo 1 comienzan a aparecer en el da 16 de gestacin, mientras que los oligodendrocitos slo son detectados despus del nacimien-
El desarrollo del sistema nervioso se inicia en el embrin presomtico a travs de la induccin primaria. El
ectodermo dorsal de los embriones en fase de gastrulacin produce la protena de seal, morfogentica del
hueso 4 (BMP4) que lo inhibe para formar tejido neural, pero los inductores neurales, nogina y cordina (y la
folistatina en anfibios), bloquean la influencia inhibitoria de BMP4, permitiendo que se forme tejido neural
Anterior ceflico terminal
Nivel de
corte
(a) da 19
Cresta
neural
Superficie de
ectodermo
Placa
neural
Reborde
neural
Nivel de
corte
(c) da 22
Superficie de
ectodermo
Endidura
neural
Tubo
neural
(b) da 20
(d) da 23
Figura 74. Esquema de la neurognesis. El tejido nervioso se origina del ectodermo. El epitelio se invagina y forma el surco
neural, posteriormente se unen y forman el tubo neural con un neuroporo anterior y otro posterior. El neuroporo anterior da lugar
al encfalo (cerebro y cerebelo), el posterior da lugar a la mdula espinal. La notocorda estimula la formacin de cresta neural
a los lados del tubo neural. A su vez, la cresta neural estimula la formacin del neuroencfalo.

con la proliferacin del ectodermo paralelo a la notocorda (etapa de placa neural). Con la nogina y la cordina, la placa neural desarrolla caractersticas de prosencfalo y con el FGF8 se forma la placa neural
caudal. Los bordes laterales de la placa neural se aproximan entre s (etapa de surco neural) y finalmente se cierran en la lnea media (etapa de tubo neural). El cierre
del tubo neural comienza a nivel de los somitas cervicales, progresa en sentido ceflico y caudal hasta que permanecen abiertos solamente los extremos o neuroporos
anterior y posterior. Al unirse los pliegues neurales persiste una lmina de clulas a cada lado y por fuera de la
pared del tubo neural llamadas crestas neurales, que
darn lugar a la cadena de ganglios espinales y craneales. El tubo neural presenta un dimetro desigual. Su
extremo anterior es dilatado, de cavidad ancha y paredes gruesas, lo que prefigura el desarrollo del encfalo;
el posterior es estrecho y origina la mdula espinal.
Las diversas partes del encfalo (cerebro anterior y
posterior) estn indicadas primero por el engrosamiento de la pared del tubo neural y luego por el desarrollo
de evaginaciones y constricciones poco profundas. Al
principio aparecen tres vesculas: la anterior o prosencfalo, que da origen al telencfalo y diencfalo; la
media o mesencfalo, y la posterior o rombencfalo, que
a su vez se divide en metencfalo y mielencfalo. Antes
de que el prosencfalo sea claramente subdividido aparecen en sus paredes laterales dos protrusiones en forma
de saco, futuros esbozos de los ojos, los cuales se separan del resto del prosencfalo y forman el nervio ptico.
Se ha demostrado que la placa procordal induce la
diferenciacin del cerebro anterior y los ojos (inductor
arquenceflico); el intestino anterior y la notocorda, del
cerebro posterior (inductor deuteroenceflico), y la
notocorda aunada a la pared superior del intestino primitivo, de la mdula espinal (inductor espinocaudal).
Esto se demostr experimentalmente mediante injertos de clulas de la cresta neural que se diferenciaron de
acuerdo con el entorno. Se comprob que las diversas
partes de la placa neural no se determinan tempranamente, o que esta determinacin no es definitiva y puede modificarse por influencia de tejidos adyacentes. La
extirpacin de una parte de la pared superior de la placa
procordal debajo del borde de la placa neural produce
defectos enceflicos y oculares, como agenesia de segmentos del cerebro anterior y ciclopa. Si el rea de la
placa neural que da origen al plexo cervical se extirpa
y se reemplaza por una porcin posterior de la misma,
el injerto se adapta a su nueva posicin y adquiere las
propiedades funcionales necesarias para controlar los
movimientos de las extremidades anteriores; no obstante, si este procedimiento se efecta en una fase posterior
195
del desarrollo, el injerto de placa neural ya no adquiere

la funcin y en consecuencia los movimientos de las
extremidades anteriores son anormales. Esto indica que
las caractersticas de las diferentes partes del encfalo
y la mdula espinal se determinan gradual y progresivamente.
En el desarrollo de cualquier parte del sistema nervioso pueden identificarse ocho fases principales:
1. Induccin de la placa neural.
2. Proliferacin localizada de clulas.
3. Migracin de clulas desde la regin donde se generan hasta los lugares donde finalmente residen.
4. Agregacin de clulas para formar partes identificables.
5. Diferenciacin de neuronas inmaduras.
6. Formacin de conexiones entre neuronas.
7. Muerte celular selectiva.
8. Seleccin y estabilizacin de conexiones.
El acontecimiento crtico en la induccin neural es la interaccin ectodermomesodermo que da origen a la determinacin regional de las partes principales del futuro
cerebro y de la mdula espinal. Sin embargo, se desconoce cmo se llevan a cabo estas determinaciones regionales. Los experimentos con cultivo de clulas ectodrmicas y mesodrmicas por separado sugieren que el
elemento crtico sera la concentracin relativa de algunos factores, como neuralizante y mesodrmico. Las diferencias entre las placas basales y alar parecen determinarse en el estadio de placa neural y se caracterizan
inicialmente por la maduracin temprana de la placa
basal.
En el periodo de placa neural sobre la regin que formar la mdula espinal se expresan los factores de transcripcin Pax3, Pax7, Msx1 y Msx2. Este patrn de
expresin es alterado por sonic hedgehog (Shh) expresado en la notocorda y las protenas morfogenticas del
hueso 4 y 7 (BMP4 y BMP7) expresadas en el ectodermo no neural en el borde de la placa neural. La seal
de Shh reprime la expresin de Pax3, Pax7, Msx1 y
Msx2 produciendo un efecto ventralizante sobre una
regin del tubo neural que formar posteriormente la
placa del suelo que sigue expresando este gen. La placa
del suelo, adems de inducir motoneuronas, produce
netrina1, cuya funcin es atraer axones. La expresin
de BMP4 y BMP7 mantiene y regula a Pax3 y Pax7
en la mitad dorsal del tubo neural donde se formar la
placa alar induciendo la formacin de neuronas sensitivas, y tambin regula la formacin de la cresta neural
por la expresin del factor de transcripcin slug. Pax6
se expresa en las paredes laterales del surco y tubo neurales, entre la placa del piso y del techo (cuadro 72).
196
(Captulo 7)
Cuadro 72. Marcadores de la cresta neural y otras lneas

Protena
Nestina
Vimentina
LNGFR/p75
NFL
NFM
NFH
MAP2
Periferina
Tubulina bIII
Protena S100
Protena PO
GFAP
Desmina
Miosina
Cromogranina
Anticuerpos
Conejo
Conejo
mAb
mAb NR4
mAb NN18
mAb NE14
mAb AP20
Conejo
mAb
Conejo
Conejo
Conejo
mAb
mAb
Conejo
Tipo celular
Clulas madre de la cresta neural
NCSCs
NCSCs
Neuronas
Neuronas
Neuronas
Neuronas
Neuronas/PNS
Neuronas
Clulas de Schwann
Clulas de Schwann
Astrocitos
Msculo
Msculo
Clulas cromafines de la mdula suprarrenal
El examen microscpico de las clulas del tubo neural ha establecido que todas las clulas de la pared del
tubo neural proliferan y que la apariencia seudoestratificada del epitelio puede atribuirse a que los ncleos de
las clulas se encuentran en niveles distintos. Los ncleos sintetizan DNA en la regin epitelial profunda y
migran hacia la superficie ventricular antes de dividirse.
Despus de la mitosis, las clulas hijas forman de nuevo
sus procesos perifricos y los ncleos regresan a la zona
profunda antes de entrar en un nuevo ciclo mittico.
Estas clulas madre pluripotenciales expresan la
nidina, una protena filamentosa que se regula segn se
van separando las clulas progenitoras bipotenciales en
clulas progenitoras neuronales, que expresan protenas
de neurofilamentos, y las clulas progenitoras gliales,
que expresan protena cida glial fibrilar. Cuando las
clulas han pasado por cierto nmero de ciclos pierden
su capacidad para sintetizar DNA y migran fuera del
epitelio para formar una segunda capa celular adyacente
a la zona ventricular. Las clulas que constituyen este
manto o capa intermedia originan dos linajes celulares;
las clulas de linaje neuronal pasan por tres estadios de
maduracin:
1. Neuroblastos bipolares.
2. Neuroblastos unipolares con grandes masas de retculo endoplsmico rugoso o sustancia de Nissl.
3. Neuroblastos multipolares con filopodios que migran por estmulo de molculas quimoatrayentes o
netrinas y por molculas repelentes o semaforinas;
estas neuronas jvenes nunca vuelven a dividirse y
son precursoras de las clulas gliales que siguen
dividindose originando tres lneas celulares:
Fuente
Dr. K Ikeda
Chemicon
ATCC
Sigma
Sigma
Sigma
Sigma
Chemicon
Chemicon
DAKO
Dr. S. Uyemura
DAKO
Chemicon
Chemicon
Dr. R. Angeletti
a. La clula madre O2A dar origen a los oligodendrocitos y a los astrocitos tipo 2.
b. La clula madre de los astrocitos tipo 1 y la
clula progenitora radial que dar origen a clulas ependimarias, a clulas especiales de la gla
como clulas de Bergmann y de Mller, tambin puede formar astrocitos tipo 1. Aunque no
se conoce qu inicia o detiene el mecanismo de
proliferacin de las clulas nerviosas, est claro
que los instantes relativos en que las diferentes
poblaciones celulares cesan su divisin estn
determinados rgidamente.
El nmero de neuronas formadas en cualquier regin del
cerebro est determinado por tres factores: duracin del
periodo proliferativo, duracin del ciclo celular y nmero de clulas precursoras. Uno de los problemas de
ms difcil comprensin es cmo encuentran su camino
las neuronas. Es muy probable que intervengan factores
anatmicos, qumicos y de adhesin celular.
En muchas partes del cerebro el tamao final de la
poblacin neuronal se establece en dos etapas: una precoz, en la que se origina un nmero relativamente
grande de clulas, y una posterior, en la que el nmero
de neuronas se ajusta al tamao del campo que inerva.
El ajuste final no se relaciona con el tamao de la poblacin neuronal, sino con el nmero de procesos funcionales que conservan sus clulas.
Los genes Homeobox (secuencia hometica) expresados en la notocorda, placa precordal y placa neural
son los responsables de la separacin del encfalo en sus
regiones anterior, media y posterior, actuando en el eje
anteroposterior. Los ocho rombmeros del cerebro posterior expresan de manera variable los genes Homeobox

de la clase Antennapedia (genes Hoxa, b, c y d) y el gen
Krox20 que regula el flujo de expresin de los genes
Hox expresados de manera superpuesta. Los genes en
el extremo 3 son expresados ms pronto que los del
extremo 5 y son ms sensibles al cido retinoico (vitamina A), que tambin regula la expresin de los genes
Hox, siendo captado por las clulas a travs del RAR
(receptor de cido retinoico) e introducido al interior
por CRABP (protena citoplsmica fijadora de cido
retinoico). El exceso de cido retinoico cambia la expresin de estos genes en el extremo ceflico y provoca que
las rombmeras ms craneales se diferencien en tipos
ms caudales, y la deficiencia genera un cerebro posterior pequeo.
El gen Lim1 se expresa en la placa precordal y el
gen Otx2 en la placa neural. Estos genes regulan la formacin del cerebro anterior y del cerebro medio, Lim1
regula la expresin de Otx2 y su efecto llega hasta la
tercera rombmera en la unin mesencfalorombencfalo. Despus de la aparicin de los pliegues neurales
y los arcos farngeos se expresan genes Homeobox accesorios como Otx1, Emx1 y Emx2, que especifican
la identidad de las regiones del cerebro anterior y
medio.
El factor de crecimiento fibroblstico 8 (FGF8) es
la seal molecular clave en los dos centros organizadores adicionales que aparecen despus del establecimiento de los lmites de las regiones del cerebro; estos
centros son:
a. El reborde neural anterior, en la unin del borde

craneal de la placa neural y el ectodermo no neural.
b. El istmo entre el cerebro medio y posterior. El gen
FGF8 tambin induce la expresin de Wnt1 que
interacta con En1 y En2 para regular la formacin del mesencfalo y el cerebelo.
En el reborde neural anterior en el estadio de cuatro
somitas, el FGF8 induce la expresin del factor cerebral 1 (Bf1) que slo se produce en la placa neural anterior, regula el desarrollo del telencfalo y la especificacin regional dentro del mismo, como los hemisferios
cerebrales y la retina. El Shh es secretado por la placa
precordal e induce la expresin del gen NSC2.1 que
regula el desarrollo del hipotlamo. La adenohipfisis
se forma por la accin de los genes Rpx (gen bolsa de
Rathke con secuencia hometica o homeobox) de los
genes portadores de la secuencia del tipo Lim (Lhx3 y
Lhx4) que actan en el ectodermo dorsal del estomodeo para formar la bolsa de Rathke. En determinados
casos las clulas emigran de la zona ventricular y siguen
proliferando. Esto suele observarse en algunas regiones
197
del cerebro anterior (capa subventricular) y el cerebelo

(capa granular externa).
El proceso de migracin neuronal es ameboide y lento (0.1 mm/da). En pocos casos la clula no migra como
conjunto, sino que forma procesos en un estadio precoz,
los cuales permanecen fijos en tanto el cuerpo neuronal
se aleja. Se sabe que los movimientos, la facultad de
reconocimiento y adhesin celulares estn gobernados
por un mecanismo nico: la interaccin especfica entre
molculas de superficie. Se han identificado en diferentes estadios embrionarios unas molculas responsables
de la adherencia entre clulas (CAM); las primeras en
identificarse fueron: CAM heptica (LCAM o Ecadherina), CAM neural (NCAM) y CAM neuroglial
(NgCAM). En el inicio del desarrollo todas las clulas
tienen NCAM y LCAM, pero en el momento de la
aparicin del tejido nervioso slo las clulas del tubo
neural siguen sintetizando NCAM. Ulteriormente aparecen las molculas de NgCAM en las clulas gliales.
Es posible que dichas molculas sirvan para guiar el crecimiento de los axones, aunque no debe descartarse la
conduccin mecnica del microentorno celular, en el
cual las clulas gliales sirven de andamio. Cuando las
neuronas migratorias alcanzan sus destinos definitivos
suelen agruparse con otras clulas similares y formar
capas corticales o masas nucleares con una orientacin
particular, probablemente debida a la interaccin de
molculas de superficie celular especficas.
El gen Ret, ubicado en la regin q11 del cromosoma
10, codifica para un receptor de tirosina cinasa de la
membrana celular y es esencial para la migracin de las
clulas de la cresta neural. El ligando para el receptor,
a travs del cual migran las clulas de la cresta neural,
es un factor de crecimiento neurotrfico derivado de la
clula glial (GDNF) secretado por las clulas mesenquimatosas.
Si hay una mutacin en este gen, el receptor est alterado y no se forman ganglios parasimpticos (enfermedad de Hirschprung). En el sistema nervioso perifrico,
las clulas de Schwann que recubren a los axones mielinizados y no mielinizados son diferentes en sus orgenes, ya que el axn asociado con un precursor de clula
de Schwann promueve su diferenciacin por medio de
neurregulinas (protenas similares a los factores de crecimiento).
Durante el crecimiento neuronal se producen grandes cantidades de protenas asociadas con el crecimiento (GAP). GAP43 sirve de sustrato a la proteincinasa C que se concentra en el cono de crecimiento de los
axones, ya que las dendritas no tienen esta protena y, a
diferencia de los axones, poseen microtbulos con polaridad bidireccional.
198
PLASTICIDAD NEURONAL
INDUCIDA POR FRMACOS
En todo el mundo, 1 de cada 100 personas padece esquizofrenia, enfermedad que incapacita severamente; entre
10 y 15% de la poblacin sufren en algn momento de
su vida episodios depresivos mayores, y alrededor de
5% de los nios presentan el sndrome de dficit de
atencin e hiperactividad, por slo mencionar algunos
de los trastornos mentales que afectan al humano. El
conocimiento del origen de estas enfermedades es an
impreciso en cuanto a qu se debe a los genes y qu al
ambiente. Estudios comparativos de gemelos homocigotos, que comparten 100% de su DNA, muestran que
slo en 40% de los casos de esquizofrenia estn afectados ambos individuos, lo que significa que algunos factores no genticos estn involucrados en la enfermedad.
Los gemelos idnticos tienen diferentes huellas digitales y diferentes patrones de pliegues en su cerebro. No
hay suficiente informacin en el genoma para codificar
el detalle preciso de las conexiones entre cientos de
billones de neuronas en el cerebro, por lo que mientras
que los genes dan origen al patrn general de cada persona, cierta cantidad de efectos aleatorios durante el
establecimiento de las conexiones en el cerebro determinan su configuracin.
Se requiere identificar el agente ambiental, ya sea
viral o de otra ndole, que afecta al cerebro, as como
identificar los genes que causan vulnerabilidad para la
esquizofrenia. En sujetos vulnerables, la enfermedad de
la adiccin se produce por la administracin de drogas
a uno mismo. Las drogas de abuso parecen dar rdenes
a los circuitos del cerebro que estn involucrados en el
control de la motivacin, lo que significa que la voluntad de las personas adictas puede deteriorarse. Las drogas cambian fsicamente al cerebro en todos los niveles,
empezando con el molecular y el qumico, y en muchos
casos pueden observarse cambios en la estructura de la
sinapsis y la morfologa de las neuronas. De esta forma,
las drogas modifican lo que nosotros sentimos acerca de
nosotros mismos y lo que hacemos.
Todas las drogas de abuso tienen un efecto en el circuito llamado de las recompensas. Esta va se encuentra
a mucha profundidad en el cerebro; se inicia en el
mesencfalo y sus axones se extienden hacia el ncleo
accumbens, un rea involucrada en el procesamiento de
las emociones.
Este circuito tiene que ver, entre otras cosas, con el
aprendizaje de las cosas que son buenas para nosotros;
aprender eso cuando ocurre en presencia de emociones
(Captulo 7)
fuertes es muy diferente de cuando sucede en otras circunstancias.

Las adicciones han sido definidas como el uso compulsivo, fuera de control, de diversas drogas a pesar de
las consecuencias negativas que conlleva, y en donde la
decisin de obtenerlas, prepararlas, inyectarlas o inhalarlas se realiza mediante una serie de conductas voluntarias. Decimos que alguien ha perdido el control de
una serie de conductas voluntarias cuando observamos
que algunas personas adictas al alcohol o la cocana, por
ejemplo, continan usando dichas drogas a pesar de que
les ocasionen problemas familiares, laborales y de salud. Un alcohlico quiz ya ni siquiera disfruta beber
porque probablemente ya presenta problemas de deglucin por el mismo alcohol y an as sigue bebiendo.
Las adicciones constituyen enfermedades crnicas
recurrentes que comparten tres caractersticas principales: tienen una historia natural bien caracterizada, en
donde hay un periodo de inicio que requiere experimentacin con las drogas; luego se da un periodo sintomtico inicial y despus un periodo crnico reincidente,
que es muy caracterstico.
En estas enfermedades existen factores de riesgo y
uno de los ms importantes es la historia familiar de los
antecedentes genticos. En diversos estudios en familias
escandinavas y estadounidenses con hijos adoptivos los
jvenes crecieron parecindose ms a sus padres biolgicos. En el alcoholismo, al igual que en otras enfermedades crnicas como la diabetes mellitus y la enfermedad
coronaria, existen factores de riesgo que combinan la
vulnerabilidad gentica con los factores ambientales,
que en el caso de las drogas sera su disponibilidad.
El uso de drogas de abuso involucra experiencias
gratificantes y reforzantes; la primera es la que lleva a
seguir intentando repetir la experiencia. Pero, qu tienen las drogas que inducen a la persona a hacerse adicta
a ellas? Por qu otras sustancias, como las que tiene el
brcoli, por ejemplo, no captan nuestra atencin? Los
opiceos tienen sustancias que imitan neurotransmisores propios del cerebro, como las endorfinas. La cocana
se parece muchsimo a la dopamina y la nicotina a la
acetilcolina; el alcohol se parece al GABA: todas estas
sustancias producen lo que se llama gratificacin. Lo
que han aprendido los drogadictos es que pueden saltarse los procesos naturales y al darle cocana al cerebro
pueden inducir la produccin de una cantidad notable
de dopamina durante un tiempo prolongado. La dopamina es igual a la gratificacin y as, esta historia contina.
Para lidiar con el exceso de dopamina o de opiceos
u otros neurotransmisores, el cuerpo regula a la baja disminuyendo y alterando vas de sealizacin crticas;
199
A. Receptores de los neurotransmisores
B. Receptores de la acetilcolina
C. Metabolismo de la acetilcolina
Figura 75.
cuando uno deja de usar la cocana o los opiceos, el

efecto de la dopamina disminuye a rangos incluso
menores que los anteriores al consumo de drogas, de ah
que el individuo se sienta mal y buscar la droga para
sentirse mejor; es cuando se presenta el sndrome de
abstinencia y ello puede ocasionar depresin de leve a
moderada, incapacidad para experimentar placer y una
avidez creciente por las drogas (figura 75).
Existen diferencias entre la dependencia y la adiccin. Los asmticos y los pacientes con angina de pecho,
por ejemplo, se vuelven dependientes del inhalador y de
los nitratos, respectivamente, y suspender la administracin de sus medicamentos exacerba sus padecimientos; son dependientes, pero ello no los lleva a cometer
actos ilcitos, lo que sugiere un mecanismo diferente en
la dependencia y la adiccin. La dependencia representa
la neuroadaptacin a la estimulacin de las drogas
mediante respuestas compensatorias, mientras que en la
adiccin hay alteraciones en la capacidad de respuesta
Figura 76. Sntesis y metabolismo de la dopamina. A. La

sntesis de dopamina tiene tres pasos: la fenilalanina es
convertida en tirosina por la enzima fenilalanina hidroxilasa
(FH). La tirosina se convierte en DOPA (dihidroxifenilalanina) por la enzima tirosina hidroxilasa (TH). La DOPA se
convierte en dopamina por la enzima dopa descarboxilasa
(DC). Posteriormente la dopamina se metaboliza a noradrenalina y a adrenalina. B. Los cofactores que tambin participan en la va de sntesis del xido ntrico en las neuronas
nitrrgicas: DHB (dihidrobiopterina) y THB (tetrahidrobiopterina).
global de los sistemas, como el de la dopamina (figura

76).
Uno de los principios crticos de los mecanismos de
homeostasis en el cerebro tiene que ver con la activacin de los genes que se encuentran en el ncleo de la
clula y en ocasiones se requiere que uno produzca una
mayor o menor cantidad de cierta protena, por ejemplo
receptores o transportadores de dopamina, pero cuando
uno bombardea los receptores de la dopamina con una
cantidad increble de sta, entonces se produce una
seal transportada por segundos mensajeros y protenas
cinasas que llega al ncleo, activa factores de transcripcin o protenas que se encuentran en el DNA y ante el
exceso de esta seal se activan ciertos genes y factores
de transcripcin; ello va a provocar que el gen de la
dinorfina se active y produzca una gran cantidad de este
pptido. En un principio hay una tolerancia y el cuerpo
200
se adapta, pero luego hay que aumentar la dosis. La dependencia es un estado de adaptacin del organismo.
Para poder contender con el estado de exceso de
dopamina u opiceos, el cuerpo va a alterar vas de sealizacin crticas, por lo que al dejar de usar los opiceos
el sujeto se va a sentir terrible y a depender de la cocana
para sentirse normal; de lo contrario experimentar sntomas de abstinencia, como depresin, incapacidad
para experimentar placer y avidez creciente por el uso
de las drogas.
La cocana y las anfetaminas activan las sinapsis en
la va de la recompensa durante ms tiempo que la dopamina, por lo que resultan reconfortantes, ya que inciden
justo en un circuito cerebral cuyo trabajo es decir algo
as como: Oye, esto es bueno, hagmoslo otra vez y
recordemos exactamente cmo lo hicimos! La gente
tomar estas drogas una y otra vez, pero adems de esto,
lo que ocurre es que aunque haya habido periodos de
abstinencia, mucho tiempo despus de que alguien ha
dejado de ser dependiente, en el sentido clsico, y los
niveles de dinorfina regresaron a la normalidad, existe
un muy elevado riesgo de recada, que tiende a ser precipitada por seales relacionadas con las drogas y por el
estrs. Estas seales inician deseos o avidez consciente
por las drogas. En este punto, la neuroadaptacin por s
sola no puede explicar este fenmeno. Necesitamos
entender cmo se pierde el control sobre una serie de
conductas voluntarias, necesitamos entender las recadas, no como falta de voluntad, puesto que bajo ciertas
circunstancias apropiadas la gente puede controlarse,
aunque ciertamente esta capacidad para hacerlo est
muy disminuida cuando se trata de controlar sus motivaciones o conductas. Tenemos que explicar cmo las
seales y el estrs asumen el control de la conducta para
buscar las drogas y tenemos que explicar la persistencia
para incurrir en ellas, que puede durar dcadas o inclusive toda la vida.
Hay que preguntarse si la dopamina es simplemente
un equivalente de la euforia, de las gratificaciones, o si
es algo ms complicado. La informacin de la dopamina y el contexto en que se obtiene se conjuntan y las
caractersticas centrales de la adiccin surgen del reclutamiento inadecuado de mecanismos moleculares normales que son los responsables del aprendizaje asociativo. La dopamina induce seales de aprendizaje muy
poderosas. Lo que ocurre cuando se usan drogas es que
se empieza a activar un sistema que dice: Esto es
importante, hay que aprender el contexto. El sistema
de la dopamina funciona para fines de supervivencia;
est ah presente, de manera que los animales puedan
aprender dnde estn los alimentos nutritivos, dnde
conseguir una pareja, esto fue bueno, hay que repetirlo
(Captulo 7)
y recordar cmo lo hicimos. La dopamina transmite

seales cuando la gente est en un determinado contexto
y de esa manera las seales le indican al cerebro que
eso es lo ms importante que hay, cuando veas o experimentes tal olor, indica que ha llegado el momento de
obtener droga y no hay nada ms importante que eso.
La persistencia en la adiccin a las drogas refleja la persistencia de las memorias patolgicas que no son conscientes de personas, lugares y cosas, sino que son
memorias del procedimiento excesivamente aprendidas. La idea es que esta informacin se une y altera los
patrones de las conexiones sinpticas. A nivel molecular la dopamina cambia la arquitectura del cerebro. Una
hiptesis dice que el exceso de dopamina remodela el
cerebro fsicamente y graba la intensidad de las seales
para controlar el comportamiento.
Cuando hay dopamina o cocana se activa por fosforilacin el factor de transcripcin CREB. Este factor
activa a los genes y ello puede observarse en microarreglos. Unos 200 genes son activados de manera importante por la dopamina e incluyen a los factores de transcripcin. Para explicar las recadas tardas, la
persistencia de la adiccin y la especificidad de las seales, hay que pensar no slo en trminos de la neuroadaptacin, que es global, sino tambin en trminos del
paciente y de los mecanismos de aprendizaje que normalmente estn bajo el control de la dopamina. El objetivo es entender exactamente la manera en que la dopamina que producen las drogas lleva a este tipo de
remodelacin, a fin de saber si podemos cambiar la consolidacin, lo cual est an muy lejano, pero ya se est
empezando a entender algunos de los sustratos que sustentan estos comportamientos patolgicos.
Clulas madre neurales

Las clulas madre son precursores potenciales que pueden autorrenovarse indefinidamente, permitiendo su
expansin en grandes cantidades. Las NSC multipotenciales desarrollan neurognesis y gliognesis. Las NSC
retienen su plasticidad funcional despus de varios ciclos de congelacin y su diferenciacin se puede regular
con algunos factores de crecimiento. Se ha observado
que cuando se trasplantan de forma intraventricular o
intravenosa mejoran el cuadro con incremento en la
remielinizacin y reduccin en la patologa axonal. La
etapa exacta de diferenciacin de la NSC apropiada para
el trasplante no se ha dilucidado con certeza; por ejemplo, si las clulas madre de la ZSV se cultivan con factor
de crecimiento epidrmico (EGF) incrementan su
potencial mielinizante tanto en el SNC como en el SNP.
Cuando la clula madre expresa PSANCAM ha ingre-

sado en una etapa de diferenciacin glial con un potencial de remielinizacin de 95 a 100% comparado con el
70% proporcionado por las OPC.
En el campo de las neurociencias, uno de los mitos
ms arraigados es la incapacidad de regeneracin del
sistema nervioso (SN) despus de una lesin, como ocurre en lesiones traumticas de mdula espinal por accidentes, o por una enfermedad neurodegenerativa incurable como la enfermedad de Alzheimer o la de Parkinson.
Sin embargo, recientes avances en el conocimiento de las
bases celulares y moleculares del funcionamiento de los
organismos a nivel celular han permitido dar una nueva
visin en torno al mito y comprender con mayor precisin la realidad de la fisiologa del SN, derivando todo
ello en interesantes perspectivas clnicas.
La generacin de nuevas clulas en el sistema nervioso central (SNC) adulto es ahora no slo uno de los
ms relevantes descubrimientos, sino un camino hacia
la prevencin y tratamiento oportuno de patologas hasta hoy no resueltas. Se considera al estudio de las clulas
madre y los mecanismos de la regeneracin nerviosa
como una esperanza para el tratamiento de distintas enfermedades y afecciones del SN, lo cual era impensable
hace apenas dos dcadas.
Intentar comprender los mecanismos subyacentes a
las funciones mentales, normales y alteradas, as como
las interacciones celulares neurales, es todo un reto que
se podr resolver gracias a los impresionantes avances
de la biologa molecular, las tecnologas informticas,
la nanotecnologa y la protemica. Ahora se conoce con
certeza que todo lo que ocurre o deja de ocurrir en el
SNC se debe a la actividad de la unidad funcional neuronagla, constituida por las clulas gliales y las neuronas. Es el estudio de esta unidad funcional y los recientes descubrimientos en el campo de la ontogenia neural
lo que ha permitido cambiar el paradigma que se tena
acerca de un SN que no se regenera.
En la actualidad se reconoce que todas las clulas
poseen un linaje particular y provienen de una clula
progenitora multipotente, tambin conocida como clula madre; en este sentido, el descubrimiento de la presencia de estas clulas precursoras indiferenciadas en el
SNC de mamferos adultos ha resultado ser de capital
importancia. Conociendo la existencia de dichos precursores se realizaron estudios de neurognesis durante
el periodo posnatal tardo y la vida adulta. Otra gran
aportacin al cambio del paradigma, adems de las clulas madre neurales, es el reconocimiento de clulas
gliales con capacidad de promover la regeneracin nerviosa. Tal tipo de gla se denomina aldainogla (del
griego aldainos, hacer crecer). La gla envolvente del
bulbo olfatorio pertenece a este grupo y su gran accesi-
201
bilidad y facilidad de manipulacin en el laboratorio le

han conferido la categora de gla prototipo de regeneracin neural. Para abordar los temas mencionados, el
simposio cont con la presencia de destacados investigadores en el campo de las neurociencias, lderes en las
reas de la regeneracin nerviosa y en el estudio de las
clulas madre neurales.
Existen clulas gliales en diferentes regiones del
SNC, con fenotipos proclives a la promocin de la regeneracin neuronal, agrupadas con el calificativo de aldainogla. Hay evidencias de la remodelacin en los
contactos y ramificaciones de neuronas motoras e interneuronas en la mdula espinal del gato, lo que pone en
evidencia la importancia del empleo de nuevas tecnologas en la reconsideracin de antiguos paradigmas. A
pesar de la proteccin del sistema nervioso central
(SNC) por el crneo y la columna vertebral, siempre
existe el riesgo de lesiones y enfermedades neurodegenerativas. Cuando las neuronas se daan, el reemplazo
con clulas madre ofrece una excelente opcin de tratamiento. Se ha demostrado que las clulas madre tienen
la capacidad de regenerar neuronas faltantes y de reparar las daadas. Las clulas neurorregenerativas se
obtienen de cuatro fuentes: clulas madre embrionarias
del blastocisto, neurales embrionarias, del cerebro
adulto y de otros tejidos. Las clulas madre embrionarias son una gran esperanza para el tratamiento de los
trastornos neurodegenerativos, aunque las clulas
madre de la mdula sea del adulto tienen propiedades
pluripotenciales similares a las clulas madre embrionarias. Se ha intentado identificar las molculas seal
que intervienen en el proceso de movilizacin y direccionamiento de las clulas madre de la mdula sea a
sus dianas en tejidos afectados (figura 77).
Migracin neuronal
La migracin neuronal es un proceso sumamente importante para el ser humano, ya que el mnimo error en
su ejecucin tiene severas repercusiones en la salud
mental, ocasionando enfermedades como el autismo y
la liscencefalia. La incidencia de problemas del neurodesarrollo asociados al desarrollo anormal de la corteza
cerebral (en donde se procesan las funciones cognoscitivas como el juicio, la abstraccin y el pensamiento)
alcanza 1% de la poblacin mundial, cantidad que a
pesar de ser impresionante no es notoria porque la
mayora de los individuos afectados no llegan a trmino
o mueren a edad temprana. Son cinco etapas celulares
las que deben desarrollarse de manera adecuada para
evitar los problemas del desarrollo de la corteza cere-
202

Tijera
Micropipeta
Fmur
Fmur
Clulas de mdula sea
Tubo
de ensayo
Centrifugacin
Clulas madre purificadas
Figura 77. Preparacin de clulas madre de la mdula
sea del ratn. A. Se sacrifica al animal y se limpia el rea
con alcohol. B. El fmur se corta con tijeras. C. Se introduce
una jeringa de 3 mL y se aspira el contenido medular. D. Se
centrifuga, se descarta el sobrenadante y se resuspende en
placas de cultivo. E. Se cultiva con factores de crecimiento
por una semana, seguido de factores de seleccin neural
por otra semana. F. Se cultiva con factores de diferenciacin
neural durante siete das.
bral: diferenciacin, proliferacin, maduracin, migracin y apoptosis celular.

En un primer momento se desarrolla la preplaca, en
donde se dan la proliferacin y la citodiferenciacin;
despus se forman las primeras lminas de la corteza en
donde las neuronas van migrando a travs de las vas radiales y se van estableciendo en puntos especficos al
mismo tiempo que maduran. Las neuronas ms recientes
van formando las capas ms alejadas, hasta completar seis.
Algunas neuronas no generan conexiones con el resto, por
lo que tienen que desaparecer por apoptosis para no interferir negativamente en los procesos mentales.
Existen varios factores que alteran las etapas celulares. La infeccin durante el embarazo por citomegalovirus, por ejemplo, afecta de manera relevante la migracin neuronal y entre las causas ambientales nocivas
para este proceso estn los mecanismos de irradiacin
de rayos gamma o beta, as como las intoxicaciones por
tabaco, monxido de carbono, alcohol y metales pesados como mercurio y plomo.
Las sales de plomo producen encefalopata aguda en
los nios y crnica en el adulto. Cuando alcanzan niveles de 50 mg/dL (microgramos por decilitro) pueden ge-
(Captulo 7)
nerar convulsiones y coma en los menores, y una neuropata perifrica en los adultos cuando los niveles llegan
a los 80 mg/dL. La contaminacin por plomo interfiere
con el desarrollo del tejido nervioso debido a que las
molculas de adhesin neuronal se ven interferidas, por
lo que se ha estudiado el efecto de esta intoxicacin in
utero usando como modelo ratones nacidos de madres
intoxicadas con sales de plomo, antes del embarazo y
hasta su nacimiento, as como durante la lactancia.
Hubo problemas de ejecucin en las ratas intoxicadas, ya que eran significativamente ms lentas. Se
encontr desarrollo citoarquitectnico cortical con neuronas invertidas, migracin y mielinizacin retardadas
en la capa granular externa de la corteza cerebelosa, que
provoc una capa granular interna incompleta debido a
que la migracin neuronal de la capa granular externa
hacia el interior estaba retrasada 20 das. El volumen y
el peso cerebral eran menores. Las sales de plomo tienen un efecto sobre el neurodesarrollo y sobre la diferenciacin neuronal en el sistema nervioso central que
afecta los procesos cognoscitivos; sin embargo, an se
trabaja en la valoracin del dao que produce el plomo
en la memoria y el dficit de aprendizaje.
Entre los padecimientos ocasionados por los trastornos de migracin neuronal est la heterotopia periventricular, causada por una migracin incompleta por la
que algunas neuronas se adhieren al ventrculo. nicamente los productos femeninos de madres con este
padecimiento lo van a heredar, presentando ataques epilpticos, ya que los masculinos no sobreviven a la gestacin. El gen Xq28 est directamente involucrado en esta
enfermedad. El padecimiento de la doble corteza se produce porque las neuronas destinadas a formar parte de
la corteza no migran hasta la capa superficial de la corteza cerebral, de modo que al quedarse en las capas
internas forman una corteza mal ubicada.
La displasia cortical focal es tambin un desorden
provocado por un mal desarrollo de la corteza, en el que
existe un posicionamiento de grupos de clulas en sitios
que no les corresponden. Cuando el grado o el tamao
de estos cmulos de clulas son pequeos se llama microdisgnesis, la cual se presenta en sndromes genticos como el de West, as como en la epilepsia infantil
con ausencia y en casos de epilepsia juvenil.
La liscencefalia es otro caso de migracin neuronal
incompleta y en ella el cerebro que carece de convoluciones es liso, lo que provoca retraso mental y convulsiones. Los productos masculinos de mujeres con lisencefalia van a tener este mismo padecimiento y los
femeninos tendrn el de doble corteza cerebral.
El autismo es un fenotipo de conducta definido que
ocurre como resultado de diferentes procesos neuropa-

tolgicos (de manera importante, la migracin incompleta) causados por infecciones como la rubeola con
embriopata, citomegalovirus y encefalitis por virus
herpes simple o por toxinas como el alcohol y la cocana. Los individuos con autismo clsico o autismo de alto
rendimiento se caracterizan por tener dficit perceptual,
dificultad en el desarrollo del lenguaje, patrones repetitivos de conducta, pensamiento egocntrico, intolerancia a estmulos tctiles y comportamiento agresivo, por
lo que no logran una interaccin social recproca. Existe
gran controversia en cuanto a la etiologa de este desorden debido a que son muchos los factores que intervienen, adems de que el autismo a menudo se presenta
junto con una patologa mdica conocida, por ejemplo
la heterotopia periventricular, mejor conocida como
sndrome de X frgil, con una incidencia de 1 en 2 500
nios autistas, o bien la esclerosis tuberosa, en la que los
pacientes tienen ndulos anormales (parte de corteza
cerebral) por una migracin anormal y cuyos genes responsables son el cromosoma 9 (gen de tuberina) y el
cromosoma 16 (amartina), ambos inhibidores del crecimiento.
Apoptosis y neuropatas
En la neurognesis, las neuronas se generan a partir de
clulas precursoras que una vez diferenciadas no se dividen ms. Antes de emitir dendritas y axones, las neuronas inmaduras y las precursoras emigran desde el lugar de nacimiento en busca de la localizacin definitiva
usando como camino molculas de la matriz extracelular y el sistema glial. Esta migracin tiene como objetivo, adems, lograr las conexiones interneuronales
correctas.
Si esto no se efecta correctamente, la neurona no
recibe la accin de factores de crecimiento secretados
por la clula receptora a que pertenece el axn conectado, y la clula que hizo la conexin equivocada muere
por apoptosis. En la corteza cerebral, ms de 90% de las
neuronas mueren por apoptosis durante la neurognesis
(figura 78).
CLULAS GLIALES: NEUROGLA
En 1875 el italiano Camilo Golgi describi una tcnica

novedosa, que utiliza sales de plata, para teir cortes
histolgicos del cerebro. Curiosamente, cuando se aplica esta tincin, slo en 1 de cada 100 neuronas se precipitan las sales de plata, y en ninguna de las clulas no
203
neuronales conocidas como gla. Lo que a simple vista

pudiera parecer ineficaz, una mala tcnica de tincin,
result muy til para que los histlogos pudieran describir las formas de las neuronas.
Veinticuatro aos despus de la descripcin original
de la tcnica de tincin conocida como argentafn, Santiago Ramn y Cajal publica la obra Textura del sistema
nervioso del hombre y los vertebrados, considerada una
de las obras ms importantes en la historia de la neurobiologa moderna.
La contribucin genial de este sabio espaol consiste
en que, a partir de informacin de cortes histolgicos en
los que slo 1% del total de neuronas se observa de
manera aislada, postul que el sistema nervioso est
constituido por clulas separadas, bien definidas, que se
comunican entre s por medio de sinapsis formando
interconexiones increblemente complejas y altamente
estructuradas.
Con el paso del tiempo se han confirmado estas teoras; la estructura de las avenidas de informacin del
sistema nervioso central, formadas por conjuntos de
neuronas cuya funcin es conducir estmulos del sistema nervioso al resto del cuerpo y de regreso, est bien
definida. Asimismo, las tcnicas electrofisiolgicas utilizadas en el laboratorio y en la clnica han permitido
complementar la descripcin anatmica asignndole
una funcin fisiolgica.
Hasta hace aproximadamente una dcada, los neurobilogos consideraban las neuronas como la estructura
funcional ltima del sistema nervioso y que las clulas
gliales, cuya relacin numrica con las neuronas es de
9:1, tenan una funcin de sostn exclusivamente. Sin
embargo, el desarrollo de nuevas tcnicas de imagen
est revelando informacin que podra cambiar radicalmente el papel que se les asigna a las clulas gliales en
la generacin de las denominadas funciones mentales
superiores.
La gla est constituida por cuatro tipos celulares: las
clulas de Schwann, los oligodendrocitos ambos formadores de mielina, que envuelve los axones de las neuronas, los astrocitos cuya funcin ms conocida es
mantener la homeostasis electroltica del microambiente perineuronal y formar la barrera hematoenceflica y la microgla, clulas originadas de monocitos
con funciones inmunitarias. Todas ellas, de distinta
manera, tienen la capacidad de comunicarse y modificar la funcin de las neuronas de otras clulas gliales a
distintos niveles: regulan la transmisin a nivel de la
sinapsis, modifican la cohesin sinptica entre varias
neuronas, modifican la forma en que grupos neuronales
procesan la informacin proveniente de otras reas del
cerebro, favorecen o dificultan la formacin de nuevas
204
A. Proliferacin celular y apoptosis

Factores
(Captulo 7)
Macrfagos
que fagocitan
Factores
celular
Apoptosis
Proliferacin celular
Nmero constante de clulas

Modificaciones
en la membrana
Disolucin de la
estructura nuclear
Condensacin
de la cromatina
Contraccin
de citoplasma
Fragmento
del DNA
Clula apopttica
B. Control de la apoptosis
Clulas T citotxica
Ligando Fas
Receptor
de tipo I
del TNF
TNFa
Receptor Fas
Caspasa 8
FADD
Mitocondria
Citocromo C
Caspasas
efectoras
Protena p53
DNA con
daos por
radiacin
Otras
protenas
Rompimiento
RNAsn
protena
TRADD
Protena bcl2
Laminina Caspasa activada

DNAasa
Apoptosis
Figura 78.
uniones entre neuronas y producen factores estimuladoras del crecimiento neuronal, como lo demuestran
diversos estudios realizados en los ltimos 15 aos.
Mediante tcnicas de imagen modernas que permiten
observar flujos de iones intracelulares y extracelulares
se ha demostrado que la actividad neuronal est estrechamente relacionada no slo con actividad glial alrededor de las neuronas activas, sino tambin con grupos
gliales distantes.
La resonancia de la actividad de estas zonas en otras
distantes, no unidas por avenidas de informacin neuronales bien definidas, es llevada a cabo mediante sustancias qumicas y en la denominada corteza de asociacin.
Si se percibe el aroma de un perfume, esta informacin viaja por una va neuronal bien definida hasta la
corteza olfatoria; es decir, viaja por un impulso elctrico
a lo largo de axones. Sin embargo, el recuerdo de una
persona querida y la respuesta emocional que evoca el
estmulo se deben precisamente a la activacin de conglomerados gliales en sitios anatmicamente diferentes

de la va olfatoria. La actividad glial influye importantemente en la asociacin de ideas, estmulos, etc., todos
ellos importantes para las funciones cognoscitivas
(figura 79).
Otros datos indirectos que sugieren la importancia de
la gla para la formacin de las funciones mentales
superiores son el hecho de que en la medida en que se
vuelve ms compleja una especie en la escala evolutiva,
mayor es la proporcin entre clulas gliales y neuronas.
De los mltiples estudios que se le han realizado al cerebro de Albert Einstein se demuestra que no hay ninguna
diferencia aparente con respecto a los cerebros de otras
personas que permitiera explicar la genialidad de aqul,
excepto que tiene una mayor cantidad de clulas gliales
en la corteza de asociacin que el promedio.
En el adulto, algunos astrocitos siguen funcionando
como clulas madre en la zona subventricular y en el
205
A. Metabolismo energtico del cerebro

Solo proveen energa
durante el ayuno
prolongado
Cuerpos cetnicos
1 ATPasa intercambiadora de
Na /K (3.6.1.37)
B. Glutamato, glutamina y GABA
Neurona
GABArgica
Neurona
glutaminrgica
Clula de la gla
Receptor de GABA
1
2
3
4
5
Glutamina (3.5.1.2)
Glutamina sintetasa (6.3.1.2)
Glutamato descarboxilasa (4.1.1.15)
4aminobutirato transaminasa (2.6.1.19)
Succinato semialdehdo
deshidrogenasa (1.2.1.24)
Receptor de glutamato
Figura 79.
hipocampo. Los astrocitos y las glas radiales originan

todos los tipos celulares del cerebro posnatal en los
mamferos, como los astrocitos de la zona subventricular, las clulas ependimarias, un tipo de epitelio que
reviste las cavidades internas del sistema nervioso central (SNC) que contienen al lquido cefalorraqudeo
(ventrculos y conducto del epndimo), los oligodendrocitos que forman el aislante alrededor de los nervios.
En la etapa adulta, algunos astrocitos siguen funcionando como clulas madre tanto en la zona subventricular (ZSV) como en el hipocampo.
Es posible que la gla radial sea heterognea y que
como poblacin de clulas madre algunas ya tengan
determinado cul va a ser su futuro. Se ha identificado
una regin en el cerebro adulto de mamferos, la ZSV,
que contiene un gran nmero de clulas madre. Estas
clulas forman cadenas de migracin hacia el bulbo
olfatorio, en donde se integran completamente a los circuitos funcionales.
TERAPIA CELULAR EN LA
ENFERMEDAD DE ALZHEIMER
La enfermedad de Alzheimer (EA) es un padecimiento
neurodegenerativo crnico que involucra una prdida
neuronal y de terminales sinpticas muy intensa, sobre
todo en regiones cerebrales que tienen que ver con los
procesos cognoscitivos de la persona (principalmente el
hipocampo y la corteza cerebral de asociacin), provocando una prdida progresiva de la memoria, as como
confusin y desorientacin en el tiempo y el espacio, e
incapacidad para reconocerse a uno mismo.
Aunque en Mxico no hay cifras exactas sobre la frecuencia de la enfermedad, en EUA 10% de las personas
de 60 aos de edad y 50% de las mayores de 80 aos la
padecen (cuadro 73). La investigacin considera que
el nmero de afectados por la EA se incrementar considerablemente, debido a que la esperanza de vida ha au-
206

Cuadro 73. Causas ms frecuentes
de demencia
Enfermedad de Alzheimer (50 a 90%)

Infartos cerebrales mltiples (5 a 10%)
Alcoholismo (5 a 10%)
Trastornos endocrinometablicos
Hipotiroidismo
Deficiencia de vitamina B12
Neoplasias intracraneales
Hematoma subdural crnico
Hidrocefalia a presin normal
Otras enfermedades degenerativas
Enfermedad de Pick
Enfermedad de Parkinson
Enfermedad de Huntington
Parlisis supranuclear progresiva
Infecciones del SNC
VIH, sfilis, CreutzfeldJakob
(Captulo 7)
Cuadro 74. Correlacin anatomoclnica
en las demencias
Corticales
Anatoma
patolgica
Clnica
Axiales
Corteza de Ncleos grises

lbulos
profundos
frontales,
del encfalo
parietales
y temporales
Hipocampo
Afasia
Retardo psicomotor
Sistema
lmbico
Apraxia
Agnosia
Acalculia
Ejemplos
mentado en el mundo y se trata de un problema ligado

al proceso de envejecimiento y a ciertas caractersticas
biolgicas del cerebro que hacen que se expresen protenas aberrantes que impiden el buen funcionamiento de
las neuronas y provocan su muerte.
La EA, descrita por vez primera en 1907 por el
mdico alemn Alois Alzheimer, es irreversible y hasta
el momento no se conoce cura alguna. Muchos de los
primeros sntomas de esta enfermedad pueden no ser
percibidos fcilmente, porque se parecen a los signos
asociados con el envejecimiento, como olvido, prdida
de la concentracin y problemas motores y de lenguaje.
La enfermedad avanza hasta que el paciente es totalmente dependiente y no reconoce ni su propia imagen
en el espejo (cuadro 74).
El diagnstico de la EA es difcil, pues primero hay
que descartar que se trate de algn otro tipo de demencia, despus se deben realizar estudios neuropsicolgicos de prueba de desempeo de memoria y de cognicin
que pueden orientar bastante, lo mismo que estudios de
imagen; sin embargo, el diagnstico final es histopatolgico porque la demencia de Alzheimer se caracteriza
por dos lesiones cerebrales: la formacin de placas seniles (acmulos de protena bamiloide) y de maraas
neurofibrilares (formadas de protena Tau del citoesqueleto), las cuales no pueden observarse ni con un
estudio de resonancia magntica.
La mayora de los modelos transgnicos para EA se
basan en la manipulacin de la secrecin de la protena
bamiloide, pero nadie ha podido reproducir en modelos experimentales la produccin de maraas neurofi-
Subcorticales
Alzheimer
Movimientos
anormales
Disartria
Alteraciones
posturales
Depresin
Huntington
Pick
Parkinson y
Parkinson
plus
Creutzfeld
Jakob
Meningoencefalitis
Hipoxia
Vascular
Neoplasias
Wilson
VIH
Dficit de la
memoria
reciente
Desorientacin
Wernicke
Korsakov
Hidrocefalia
normotensiva
(?)
Encefalitis,
herptica
Postraumtica
Vascular
Neoplasias
Postraumticas
Postraumtica
brilares. La protena bamiloide se produce en pequeas cantidades durante el envejecimiento. Si se observa

el cerebro de personas ancianas, se pueden ver placas de
esta protena aunque no hayan padecido demencia; sin
embargo, no son tan grandes ni provocan tanta reaccin
inflamatoria como las que se presentan en la enfermedad, lo que hace pensar que existe otro factor que provoca que estas placas se acumulen de manera ms intensa.
En personas con EA, la protena Tau tiene ms fosfatos de los necesarios, lo que impide que funcione adecuadamente en el citoesqueleto y empiece a autoensamblarse, formando las maraas neurofibrilares (cuadro
75).
Hay varios grupos de investigadores que estudian
esta protena tanto en modelos in vitro como in vivo, alterando su tasa de fosforilacin e inhibiendo dos tipos
de protena fosfatasa con un compuesto llamado cido

Cuadro 75. Clasificacin pronstica
de las demencias
No tratables e
irreversibles
Tratables
Reversibles
Enf. degenerativas:
Alzheimer
Enf. metablico
carenciales
Tiroideas
Pick
Adrenales
Parkinson
Huntington
Pelagra
Dficit de B12 y
folato
Dficit de B1
Uremia
Wilson
Enf. infecciosas:
VIH
Creutzfeld
Jakob
Irreversibles
Demencias vasculares
Demencias postraumticas
Demencia alcohlica
Porfiria
Encefalopata
heptica
Tr del calcio
Enf. inflamatorias
e infecciosas
Sfilis
Meningitis
Encefalitis
Vasculitis (LES)
Procesos intracraneales:
Neoplasias
Hematoma subdural
Hidrocefalia normotensiva
Depresin
okadaico. En estos experimentos se ha logrado producir

muerte neuronal asociada a una protena Tau, que es reconocida por el anticuerpo Alz50, desarrollado a partir
de las maraas neurofibrilares de pacientes con EA.
Cuando alguien presenta los sntomas de esta enfermedad y ya transcurrieron 20 aos de cambios bioqumicos en el cerebro y en el modelo, las cosas ocurren
ms rpidamente, se inyecta cido okadaico, las protenas se alteran bioqumicamente y se detecta la protena
hiperfosforilada, pero las neuronas se mueren, por lo
que es difcil seguir el curso del efecto bioqumico; sin
embargo, estn tratando de mimetizar lo ms posible las
condiciones que pudieran llevar a un estado de alteracin bioqumica ms crnica para obtener las maraas
neurofibrilares. Primero se dan las alteraciones en la
207
protena bamiloide, provocando prdida de terminales

sinpticas y ocasionando que las neuronas dejen de recibir seales bioqumicas. Esta prdida de comunicacin
origina cambios bioqumicos en la siguiente neurona,
relacionados con alteraciones del citoesqueleto, por lo
que podra haber una relacin directa entre maraas y
placas.
Las mujeres premenopusicas y posmenopusicas
que estn recibiendo terapias sustitutivas de estrgenos
tienen una incidencia muy baja de la EA, por lo que el
grupo de la doctora Arias estudia el papel de los estrgenos en el mantenimiento del citoesqueleto y su relacin
con la protena Tau. Los estrgenos parecen ser protectores naturales de alguna alteracin bioqumica relacionada con el envejecimiento que podra degenerar en
padecimiento de Alzheimer.
La EA casi siempre es espordica, es decir, sin antecedentes familiares; slo en 10% de los casos tiene un
claro origen gentico. Hasta ahora las mutaciones en
tres genes principales se relacionan con este padecimiento: el primero se localiza en el cromosoma 2 y codifica para la protena precursora del bamiloide; el
segundo es un gen del cromosoma 14 que codifica para
la presenilina 1 y el tercer gen se localiza en el cromosoma 1 y codifica para la protena presenilina 2. Se han
obtenido ratones transgnicos con mutaciones en el gen
de presenilina 1 y se ha visto que aumenta mucho la produccin de la protena bamiloide.
Hay muchos caminos que seguir para encontrar
alguna combinacin teraputica que pudiera al menos
detener la progresin de la enfermedad, pero lo primero
es tratar de entender la conexin entre las dos alteraciones histopatolgicas para poder explicarse por qu
siempre van juntas o si hay un desencadenante comn.
Para ello, la investigacin bsica es indispensable, ya
que mientras no se tenga un panorama ms claro de la
fisiopatologa del padecimiento ser muy difcil desarrollar estrategias teraputicas preventivas o que
detengan el curso de este padecimiento (figura 79).
La demencia de Alzheimer (DA) es una condicin
neuropatolgica devastadora a la que se le ha llamado
la epidemia silenciosa del siglo XX. Los criterios clnicos e histopatolgicos que la definen fueron documentados por Alois Alzheimer en 1911. Sin embargo,
hasta el momento el origen y los mecanismos que participan en su progresin se desconocen. El criterio histopatolgico indispensable para el diagnstico de DA es
la presencia de inclusiones intraneuronales de la protena asociada con microtbulos, Tau (hiperfosforilada
y con anormalidades conformacionales) y la acumulacin parenquimatosa de la protena bamiloide (bAP).
Sigue siendo materia de controversia cul de las dos
208
anormalidades ocurre primero, cul de ellas es la ms

importante y si una es causa de la otra.
En la DA los cambios cognoscitivos y funcionales
corresponden a un patrn regresivo de lo que ocurre en
el cerebro durante su desarrollo: paso a paso se van deteriorando redes neuronales interconectadas que corresponden a reas de gran plasticidad y que son ontognica
y filogenticamente las ms recientes. Las seales celulares que controlan la conectividad y la plasticidad
sinptica permiten el mantenimiento de las neuronas en
un estado diferenciado e impiden la reactivacin de
mecanismos que inducen su migracin y proliferacin.
Algunas de las seales mitognicas involucradas en
fenmenos de morforregulacin pueden inducir la reactivacin del ciclo de divisin celular de manera aberrante que, al no ser compatible con el estado posmittico de las neuronas, podra conducirlas a la muerte
celular programada o a una patologa tipo Alzheimer.
En la DA se ha reportado la expresin temprana de
marcadores del ciclo celular en neuronas, aunque su
presencia tambin ocurre de manera espordica durante
el envejecimiento. En individuos viejos sanos existen
mecanismos que detienen la progresin del ciclo en la
fase G1. Una de las hiptesis de trabajo de los autores,
apoyada por evidencia experimental previa, postula que
en la DA fallan los mecanismos que controlan la progresin de G1/S, y en algunos grupos neuronales se llega a
etapas G2 y en casos raros hasta M. Si las neuronas
daadas por algn estmulo patolgico reactivan su
ciclo celular y fallan los mecanismos que controlan su
progresin, puede favorecerse la aparicin de marcadores de DA, como la protena Tau hiperfosforilada y la
elevacin de la bAP. En etapa G2 la clula desestabiliza
su citoesqueleto, evento que ocurre en el cerebro de
pacientes con DA, donde la desestabilizacin de microtbulos axonales puede incrementar la poza de Tau libre
y hacerla ms vulnerable a cambios bioqumicos como
la fosforilacin.
La formacin de Tau hiperfosforilada en residuos
que aparecen en la DA en el hipocampo in vivo, despus
de modificar la dinmica de los microtbulos con taxol
(que se sabe que disminuye la cantidad de Tau unida a
los microtbulos), aumenta la poza libre de esta protena. La desconexin de dos reas sinpticamente relacionadas, la corteza entorrinal y el hipocampo, induce
en ambas regiones la expresin de diferentes protenas
de ciclo celular y de protenas presentes en la DA. Entre
los mecanismos que tienden a controlar la progresin
del ciclo celular en neuronas posmitticas se incluye la
activacin de enzimas como la GSK3b, que integra
varias seales relacionadas con el crecimiento, la supervivencia y la diferenciacin, como la va Wnt. La prote-
(Captulo 7)
na Tau tambin es un sustrato de GSK3b y se ha demostrado que la inhibicin de la va cannica Wnt es capaz
de inducir la fosforilacin de epitopos que aparecen en
la DA, como el PHF1. Entre los factores de riesgo
capaces de alterar la integridad de redes sinpticas hay
varios asociados con el envejecimiento: deficiencias
hormonales, diabetes, deficiencias vitamnicas, enfermedad cardiovascular, estrs oxidante, factores socioambientales como depresin y exposicin al alcohol,
campos magnticos, privacin de estimulacin ambiental y ejercicio fsico y factores de riesgo gentico.
Gentica de la enfermedad de Alzheimer

Las variaciones en el gen SORL1 podran ser un factor
en el desarrollo de la enfermedad de Alzheimer de inicio
tardo. Hay hallazgos que podran llevar a una mejor
comprensin de una de las causas de la enfermedad de
Alzheimer y los investigadores sugieren que versiones
anmalas del gen SORL1 contribuiran a la formacin
de las placas amiloides, uno de los signos caractersticos
del cerebro de los pacientes con la enfermedad, e identificaron 29 variantes en la secuencia corta del DNA,
donde podran radicar los cambios que ocasionan la enfermedad. No obstante, el estudio no identific los cambios genticos especficos que dan lugar al padecimiento.
Richar Mayeux, de la Universidad de Columbia,
Lindsay Farrer, de la Universidad de Boston, y Peter St.
GeorgeHyslop, de la Universidad de Toronto, dirigieron el estudio que involucr a 14 instituciones de EUA,
Europa y Asia, 6 000 donadores de sangre para la tipificacin gentica y financiamiento por parte de los NIH
de EUA, as como otras 18 organizaciones internacionales pblicas y privadas. No entendemos por completo las causas de la enfermedad de Alzheimer coment
el director del National Institute of Aging (NIA),
Richard Hodes, pero sabemos que algunos factores
genticos pueden estar involucrados. Se conocan previamente tres genes cuyas variantes pueden causar la
enfermedad de aparicin temprana, y otro ms que
incrementa el riesgo para la tarda; el nuevo descubrimiento provee ahora datos genticos acerca de esta
ltima, por lo que el grupo profundizar su investigacin sobre el papel que tiene el gen SORL1.
Los cientficos piensan que en la enfermedad de Alzheimer, la protena precursora amiloide o APP es procesada en fragmentos de protena beta amiloide que forman placas en el cerebro, e iniciaron la bsqueda de
influencias genticas de un grupo de protenas que
transportan APP hacia las clulas, en busca de pequeos

cambios en siete genes involucrados en transportar APP
al interior de las clulas. Para empezar, los cientficos
revisaron dos grandes conjuntos de datos sobre informacin gentica de familias en las que ms de un integrante tuviera la enfermedad. Pronto pudieron ver que
muchas de las familias con este mal presentaban variaciones en SORL1, pero no de manera consistente en
cualquiera de los otros seis genes.
Ampliaron entonces su investigacin a familias del
Norte de Europa, hispanocaribeas, caucsicas, afroamericanas y de herencia semita (rabeisrael), para
buscar cambios en el gen SORL1. Nuevamente encontraron la misma asociacin entre las variaciones de
SORL1 y la enfermedad de Alzheimer. Buscando datos
adicionales provistos por Steven Younkin, de la Clnica
Mayo, se confirm la asociacin de variantes en SORL1
y el padecimiento. Estamos viendo la implicacin del
gene en diversos grupos raciales y tnicos, dijo Farrer
y aadi que estn animados y emocionados por experimentos de biologa celular que demuestran el papel de
SORL1 en la produccin de fragmentos bamiloides.
Al examinar las clulas sanguneas de personas con
y sin la enfermedad, los investigadores encontraron que
la cantidad de protena SORL1 en los enfermos es de
menos de la mitad que en las personas sanas. En experimentos de laboratorio encontraron que si se alteran los
niveles de SORL1, se modifica la forma en que la protena APP se moviliza en las clulas. Con niveles bajos
de SORL1 se incrementa la produccin de fragmentos
beta amiloides, en tanto que con elevados niveles de la
protena decrece la produccin de dichos fragmentos.
No obstante, notaron que otros factores genticos y no
genticos podran afectar la produccin de SORL1 en
las personas, y que se requiere ms investigacin para
determinar de qu manera las diferentes versiones del
gen SORL1 influyen en la produccin de los dainos
fragmentos de protena.
Las clulas madre embrionarias (ES) se derivan de la
masa celular interna de los embriones en etapa de blastocisto. Estas clulas pueden generar cualquier tipo
celular en el organismo; se pueden cultivar in vitro indefinidamente con un cariotipo y fenotipo de totipotencialidad funcional normal en presencia del factor inhibitorio de leucemia. Los factores del crecimiento, tales
como el factor de crecimiento de fibroblastos2
(FGF2), EGF y el PDGF, inducen a las ES a formar
precursores gliales. En la actualidad existen cerca de 50
lneas celulares disponibles de ES humanas. El riesgo
potencial ms importante del trasplante de ES es la
potencial formacin de tumores. Las clulas ES son
capaces de formar teratomas (tumores que contienen
clulas de las tres capas germinales embrionarias: ecto-
209
dermo, mesodermo y endodermo) despus del trasplante. Este problema se controla cuando se ha inducido
a las ES a diferenciarse hacia lneas neurogliales. Otro
riesgo potencial en el trasplante es la posibilidad de
rechazo del injerto, aunque en la prctica no se han
reportado casos. Adems, las consideraciones ticas
que implican las ES son un obstculo con el que se
enfrenta el personal que las maneja; sin embargo, los
bancos celulares especializados pueden solucionar
algunas de las condiciones ticas al establecer cultivos
de estas clulas. La posibilidad de utilizar clulas madre
del estroma de la mdula sea del ser humano adulto
(BMSC) tambin alivia las tensiones ticas; adems,
estas clulas pueden transdiferenciarse en msculo,
piel, hgado, pulmn, neuronas, etc. Las BMSC inyectadas ingresan en el cerebro y generan neuronas nuevas
y clulas gliales.
Las clulas madre trasplantadas tienen la capacidad
de migrar a las reas daadas del cerebro, donde se integran y se diferencian. Mientras que las NSC multipotenciales pueden migrar e integrarse en ratones embriones
y recin nacidos, en el cerebro adulto no pueden hacerlo
con tanta facilidad y la tasa de integracin es menor.
Recientemente se ha adoptado la terapia celular con
clulas madre de mltiples orgenes como una alternativa viable y esperanzadora en el tratamiento de la DA
y los resultados han sido alentadores.
ENFERMEDAD DE PARKINSON
La enfermedad de Parkinson (EP) es una degeneracin

neuronal crnica del ncleo estriado con dficit en la
sntesis de dopamina (C6H3 (OH)2CH2CH2NH2)
(figura 710) y trastorno del movimiento de origen multifactorial. El tratamiento farmacolgico ms eficaz es
la administracin oral de levodopa (L3, 4dihidroxifenilalanina), un precursor que se convierte en dopamina;
sin embargo, a largo plazo aparecen complicaciones,
como discinesias y resistencia al frmaco. La terapia
celular consiste en trasplantar clulas dopaminrgicas
de diversas estirpes celulares, como mdula suprarrenal, tejido nervioso, cromafn, clulas mesenceflicas
fetales, epitelio pigmentario de la retina y en la aplicacin de clulas madre embrionarias (stem cells) con
capacidad para autorrenovarse y transformarse en diferentes tipos celulares especializados. Estas clulas pueden sobrevivir e integrarse funcionalmente en el ncleo
estriado. El principal objetivo de la terapia celular es
210

Caudado (cuerpo)
(Captulo 7)
Limitacin en la
supraelevacin
de la mirada
Hipomimia
facial
Cpsula interna
Rigidez
(fenmeno de
rueda dentada)
Bradicinesia:
Marcha festinante
Inestabilidad
postural
Claustro
Temblor de reposo
Tlamo
Globus palidus
Putamen
Figura 710. Anatoma de los ganglios basales.
reemplazar las clulas que se han degenerado por otras

que puedan suplir su funcin.
Factores de riesgo y epidemiologa

de la enfermedad de Parkinson
La enfermedad de Parkinson (EP) es una degeneracin
neuronal crnica de las neuronas del estriado (ncleo
putamen y caudado) con dficit en la sntesis de dopamina (C6H3 (OH)2CH2CH2NH2) (figura 711 y
cuadro 76) y trastorno del movimiento que afecta
diversas partes del cuerpo. Sin embargo, se ha confirmado que la EP no es una enfermedad nica, sino que
tiene un carcter multifactorial. La EP es una de las
enfermedades degenerativas de mayor prevalencia,
pues afecta a 1% de la poblacin mayor de 65 aos de
edad. Su rasgo histolgico caracterstico es la presencia
de cuerpos de Lewy en la sustancia negra, junto con una
prdida de neuronas dopaminrgicas superior a 80%. La
causa se desconoce, aunque se acepta que hay un componente gentico. El tratamiento farmacolgico ms
eficaz es la administracin oral de levodopa (L3,
4dihidroxifenilalanina), un precursor que se convierte
en la catecolamina dopamina en el cerebro gracias a las
neuronas dopaminrgicas y nitrrgicas que an sobreviven en la sustancia negra pars compacta (SNpc). La
levodopa induce una espectacular mejora y es especialmente efectiva al ser administrada con carbidopa, que
mejora su eficacia, para tratar la acinesia y la rigidez en
estadios iniciales e intermedios de la EP. Sin embargo,
a largo plazo aparecen complicaciones, como discinesias y episodios onoff, y el frmaco no es eficaz en estadios avanzados de la enfermedad (cuadro 76).
Figura 711. Cuadro clnico de la EP.
La EP es la segunda enfermedad neurodegenerativa

ms frecuente despus de la enfermedad de Alzheimer
y afecta a cerca de 15% de las personas mayores de 65
aos de edad. La EP cursa con la muerte progresiva de
las neuronas dopaminrgicas de la SNpc. La principalconsecuencia de esta prdida neuronal es una disminucin en la disponibilidad cerebral de dopamina en el
ncleo caudado y en el putamen, lugar donde se proyectan las neuronas dopaminrgicas de la SNpc, originndose una disfuncin en la regulacin de las principales
estructuras cerebrales implicadas en el control del movimiento, los ganglios basales. La EP fue descrita inicialmente en 1817 por James Parkinson, que la describi
como parlisis temblorosa, y sus sntomas principales
son: discinesias, temblor en las manos, brazos, piernas,
mandbula y cara; rigidez de las extremidades y el
tronco; bradicinesia o lentitud de movimiento e inestabilidad postural o problemas de equilibrio (cuadro 77).
A medida que estos sntomas se hacen ms pronunciados, los pacientes tienen dificultad para caminar, hablar
y realizar otras tareas simples. El origen de la EP es multifactorial y se debe a cuatro mecanismos: estrs oxida-
Cuadro 76. Diagnstico diferencial de la EP

1. Parkinsonismo primario o idioptico
S Enfermedad de Parkinson
S Parkinsonismo juvenil
2. Parkinsonismo secundario, adquirido o sintomtico
S Infecciones
S Posencefalitis, neuroles, neurobrucelosis
S Enfermedad de CreutzfeldtJakoc, SIDA, abscesos
sicticos
S Drogas (MIR 9293, 32)
S Bloqueantes de receptores dopaminrgicos
S Neurolpticos (haloperidol, pimozide, etc.)
S Depletores presinpticos de dopamina
S Reserpina, tetrabenacina
S Falsos neurotransmisores
S Alfametildopa
S Alfametilparatirosina
S Litio
S Antagonistas del calcio
S Flunaricina, cinaricina
S Amiodarona
S Isoniacida
S Toxinas
S MPTP, CO, Mn, metanol, etanol
S Vascular
S Multiinfarto
S Choque hipotensivo
S Traumatismo
S Encefalopata pugilstica
S Otros
S Alteraciones paratifoideas
S Hipotiroidismo
S Degeneracin hepatocerebral
S Tumor cerebral
S Hidrocefalia normotensiva
S Siringomesencefalia
3. Parkinsonismo heredodegenerativo
S Enfermedad difusa por cuerpos de Lewy (AD)
S Enfermedad de Huntington
S Enfermedad de Wilson
S Enfermedad de HallevordenSpatz
S Calcificacin familiar de los ganglios basales
S Parkinsonismo familiar con neuropata perifrica
S Neuroacantocitosis
S Complejo ParkinsondemenciaELA
S Parlisis supranuclear progresiva
4. Degeneraciones multisistmicas
S Sndrome de ShyDrager
S Degeneracin estriongrica
S Atrofia olivopontocerebelosa
S Fallo autonmico progresivo
211
Cuadro 77. Criterios diagnsticos

1. Dos de los siguientes signos o sntomas:
S Temblor de reposo
S Rigidez
S Bradicinesia
S Inestabilidad postural
2. Mejora significativa con LDopa
3. Descartar los parkinsonismos secundarios
4. Ausencia de signos incompatibles con la enfermedad
de Parkinson:
S Oftalmopleja supranuclear con parlisis en la infraversin de la mirada
S Afectacin corticoespinal
S Afectacin del asta anterior
S Signos cerebelosos
S Polineuropata
S Mioclonas
S Crisis oculogiras
tivo, predisposicin gentica, exposicin a txicos ambientales o del propio organismo y envejecimiento acelerado. Los primeros sntomas aparecen cuando se produce la prdida de la mitad de las neuronas
dopaminrgicas de la sustancia negra.
Actualmente se utilizan las siguientes pruebas como
biomarcadores de la EP: tcnicas de imagen como neuroimagen funcional, tomografa por emisin de positrones (PET), tomografa computarizada de emisin de
fotn nico (SPECT) y ultrasonido transcraneal; pruebas clnicas como las afectivas y psicolgicas, neurofisiolgicas, olfatorias, visuales, etc.; y pruebas bioqumicas y genticas como la concentracin sangunea de
sinuclena, malondialdehdo, radicales superxido, etc.
Para la EP existen factores de riesgo hereditarios y factores modificables, como el medio ambiente, el consumo de agua contaminada, la exposicin a pesticidas,
los traumatismos craneoenceflicos (TCE) y el consumo
de tabaco. Los cerebros de fumadores tienen una reduccin de 40% de la forma B de la monoaminooxidasa
(MAO), una enzima selectiva para la degradacin metablica de la dopamina, y su inhibicin se asocia con una
actividad reforzada de este neurotransmisor, as como
con una produccin disminuida de perxido de hidrgeno, que es una fuente de las especies reactivas de oxgeno (ERO).
La inhibicin de MAO B tambin puede tener efectos
secundarios en otros neurotransmisores, como la serotonina y la noradrenalina, a travs de interacciones complejas con la dopamina. Adems, se han encontrado niveles comparables de MAO en los ex fumadores y en los
no fumadores.
212
La hiptesis ms aceptada es la ecogentica, que

incluye factores genticos y ambientales, los cuales
parecen ser los principales determinantes. Existe una
alta frecuencia de antecedentes familiares en personas
afectadas por EP. Estudios epidemiolgicos han demostrado que la prevalencia del EP es mucho mayor en
Europa y Amrica del Norte que en Asia y frica; adems, la mortalidad es menor en sujetos de raza negra que
en los de raza blanca. Se ha observado agrupacin de EP
en ciertas familias y grupos tnicos. Sin embargo, el
entorno y el estilo de vida pueden activar los genes involucrados en la EP, aunque todava no se ha identificado
ningn gen como responsable de la EP idioptica, ni la
herencia gentica como factor de riesgo para padecer la
enfermedad.
La EP es todava una enfermedad incurable y no se
conocen con precisin sus causas; puede afectar a toda
la poblacin sin distincin de edad. Esta enfermedad
crnica neurodegenerativa es muy frecuente en el
anciano y las tasas de prevalencia se incrementan con la
edad. Adems, ciertos factores ambientales o endgenos impactan sobre el circuito nigroestriado dopaminrgico cuando ste se encuentra funcionalmente deteriorado debido al envejecimiento.
Algunos estudios epidemiolgicos no han demostrado diferencias en la prevalencia de la EP segn el sexo;
sin embargo, la enfermedad podra afectar ms a los varones, con una prevalencia casi tres veces superior a las
mujeres. Los traumatismos craneoenceflicos (TCE)
tambin pueden ser una de las causas del parkinsonismo
o pueden agravar la enfermedad en pacientes con diagnstico establecido. Las neurotoxinas tambin son un
factor de riesgo para la EP, como es el caso del compuesto qumico 1metil4fenil1,2,3,6tetrahidropiridina
(MPTP). Las propiedades neurotxicas del compuesto
MPTP causan un sndrome de parkinsonismo similar a
la EP. Adems, su metabolito MPP+ se encuentra en
pesticidas. Algunos metales pesados como el hierro, el
mercurio y el plomo tambin se han asociado a la EP.
Se ha demostrado un aumento de la concentracin de
hierro total y de Fe3+ en la sustancia negra de pacientes
parkinsonianos. La 1,2,3,4tetrahidroisoquinolina (TIQ)
y la 1,2,3,4tetrahidrobcarbonilo (THbetaC) son dos
proneurotoxinas del sistema dopaminrgico que se han
relacionado con la etiologa de la EP. Tambin se sabe
que el fumar puede prevenir la acumulacin de estas
proneurotoxinas en el cerebro, ya que la reaccin entre
TIQ y THbetaC con algunos componentes del humo del
tabaco acta como un mecanismo neuroprotector para
la EP. Tambin se ha demostrado que existe estrs oxidativo en la EP. El aumento de la produccin de radicales libres y la insuficiencia del mecanismo defensivo
(Captulo 7)
antioxidante desempean un papel en la etiologa de la

enfermedad. Se ha observado un aumento de peroxidacin lipdica en las clulas cerebrales dopaminrgicas;
tambin se sospecha que una ingesta suficiente de antioxidantes en la dieta o en suplementos, como la vitamina E y el XangoR (concentrado de xantonas), disminuye el riesgo de Parkinson o desacelera su progreso.
Causas genticas de la
enfermedad de Parkinson
La EP se puede clasificar como juvenil (EPJ) cuando la
edad de inicio es igual o inferior a los 20 aos, de inicio
temprano (EPIT) cuando la edad es entre los 21 y los
40 aos, y tarda, con 70 aos o ms. En los pacientes
con EPJ y EPIT se observa de forma autosmica recesiva (AR), aunque existen pacientes aislados y escasas
familias con patrones autosmicos dominantes. En 1997
se hall un ligamiento con el cromosoma 6q25.2q27
(PARK2) y ms tarde se encontr que la mutacin del
gen parkin era la responsable del EPJ en las familias
japonesas. Los defectos del gen parkin tienen una distribucin mundial y hasta ahora se han descrito ms de 70
mutaciones. De la EPIT con patrn AR, 49% se encuentra en familias europeas, en las cuales se observa
una edad promedio de 32.11 aos. Otros estudios han
demostrado mutaciones en 17% de los pacientes con
EPIT aislados. La mayora de los pacientes con mutaciones del gen parkin tienen el cuadro clnico clsico de
la EP, pero tambin se han descrito pacientes con neuropata, trastornos de conducta, disautonomas, inicio
despus de los 50 aos de edad y respuesta marcada a
los anticolinrgicos o los agonistas dopaminrgicos.
Tambin se han identificado tres nuevos loci para la EP
AR en el cromosoma 1p: PARK 6, PARK 7 y PARK 9.
En el ao 2001 en tres familias italianas no relacionadas con patrn AR se hall ligamiento con el cromosoma 1p35p36. El promedio de edad fue de 38 aos.
Un ao ms tarde, en 28 familias europeas sin mutacin
del gen parkin con EPAR se detectaron 8 familias con
ligamiento con el PARK 6. Su fenotipo era muy similar
al descrito en las familias con mutaciones del gen parkin, pero con mayor edad de inicio de los sntomas parkinsonianos. En una familia de cuatro pacientes procedente de una regin genticamente aislada del sureste de
Holanda, con EPAR, se obtuvo ligamiento con el cromosoma 1p 36 (PARK 7), con una edad de inicio entre
los 27 y los 40 aos; adems se observ mutacin del
gen DJ1. En 1994 se describi una familia de Jordania
con parkinsonismo juvenil (edad de inicio entre los 11
y los 16 aos), que se present en cinco de nueve hijos
de padres consanguneos, asociado con demencia,

rpida progresin de los sntomas, espasticidad, respuesta elevada a la levodopa, paresia a la mirada supranuclear y atrofia palidal. Se denomin sndrome de
KuforRakeb debido a la localidad en la cual viva esta
familia. Las mutaciones del gen parkin (PARK 2) constituyen un porcentaje importante tanto en quienes tienen
un patrn AR como en los casos aislados.
El tratamiento convencional de la EP es farmacolgico y quirrgico, aunque ninguna de estas terapias, sola
o combinada, modifica el curso clnico de la enfermedad. La levodopa fue el primer medicamento dopaminrgico empleado en el tratamiento de la EP. A diferencia
de la dopamina, que no atraviesa la barrera hematoenceflica, la levodopa penetra en los ganglios basales,
donde es captada por clulas que poseen transportadores para dicho neurotransmisor, y una vez descarboxilada a dopamina, se convierte en neurotransmisor. Su
administracin crnica produce complicaciones motoras y para conseguir el efecto teraputico son necesarias
dosis cada vez ms elevadas. Los efectos secundarios
consisten en fluctuaciones motoras (periodos de mala y
buena movilidad alternantes a lo largo del da y en relacin a la toma del frmaco) y discinesias (movimientos
involuntarios) durante la fase de buena movilidad. Los
efectos secundarios aparecen a partir de los dos o tres
aos de haberse iniciado el tratamiento y normalmente
tras cinco aos 59% de los pacientes presentan fluctuaciones motoras y 41% muestran discinesias. La combinacin de levodopa con un inhibidor de la descarboxilacin perifrica como carbidopa o benserazide permite
que un mayor porcentaje de levodopa penetre en el cerebro. Similarmente, los inhibidores de la catecoloxi
metiltransferasa (COMT) prolongan la vida media de la
levodopa y la dopamina. El inhibidor de MAOB selegiline (Eldepryl, Emsam) revierte la sintomatologa. La
ciruga funcional estereotxica empleada desde 1939
reduce el temblor y la rigidez. Hoy en da la ciruga funcional estereotxica est indicada en pacientes que no
respondan bien al tratamiento farmacolgico. Los procedimientos que se realizan son: procedimientos de
lesin palidotoma y talamotoma, y procedimientos de estimulacin (deep brain stimulation, DBS)
estimulacin talmica, subtalmica y palidal.
Trasplante de clulas
secretoras de dopamina
La dopamina se sintetiza en una serie de pasos que
comienzan a partir del precursor Ltirosina, aminocido esencial presente en todos los tipos celulares. La
primera reaccin, que limita, se cataliza por la tirosina
213
hidroxilasa (TH), la cual necesita tres cofactores para

realizar su funcin: tetrahidrobiopterina (BH4), hierro
y oxgeno. El segundo paso se cataliza por la Lamino
descarboxilasa aromtica (AADC), que utiliza piridoxal 5 fosfato (PLP) como cofactor. La enzima GTP
ciclohidrolasa I (GTPCH I) cataliza el primer paso de
esta secuencia de reacciones. Con el objetivo de aumentar los niveles de dopamina en el estriado, algunos estudios se han basado en la clonacin del gen de la TH. Se
han utilizado astrocitos modificados genticamente por
introduccin de un ADNc de la TH, bajo el control del
promotor especfico de astrocitos derivado del gen de la
protena cida fibrilar glial (GFAP). La utilizacin de
este promotor tiene ciertas ventajas, ya que su regulacin est condicionada por seales extracelulares como
la gliosis, que ocurre en respuesta a daos cerebrales, y
por seales intracelulares, como las variaciones en los
niveles de AMPc.
El trasplante de clulas productoras de dopamina en
el estriado se ha considerado un abordaje racional en la
EP, porque existe un dao selectivo de neuronas de la
SNpc y dficit de dopamina que puede suplirse parcialmente por frmacos dopaminrgicos. La administracin oral de levodopa induce una estimulacin pulstil
de los receptores dopaminrgicos postsinpticos; adems, el estriado es una estructura fcilmente accesible
por ciruga. En 1979 se iniciaron los primeros trasplantes experimentales en el modelo de la rata con lesin
unilateral por 6hidroxidopamina (6OHDA). Entre
las diferentes estirpes de clulas dopaminrgicas, los
mejores resultados se obtuvieron con las clulas ngricas mesenceflicas y las clulas cromafines de la
mdula adrenal. Se observ que las clulas implantadas
podan sobrevivir, producir dopamina y mejorar los
trastornos motores. Ms tarde, estos hallazgos se reprodujeron en primates tratados con MPTP, tanto con clulas mesenceflicas como en la mdula adrenal. Se
demostr que la persistencia del beneficio motor se
correlaciona con la supervivencia e integracin funcional del tejido implantado. En este sentido, los resultados
han sido superiores con mesencfalo fetal: los implantes llegan a sobrevivir ms tiempo, reinervan el estriado
con un patrn organotpico y forman conexiones sinpticas, lo que se acompaa de recuperacin funcional.
Tambin se estudiaron mtodos que podan aumentar la
supervivencia del tejido adrenal, como la infusin del
factor de crecimiento nervioso (NGF), y ms tarde se
realizaron cotrasplantes de mdula suprarrenal con
otros tejidos que pudieran aportar este u otros factores
neurotrficos, como las clulas gliales o fragmentos de
nervio perifrico. Los factores neurotrficos aumentan
la viabilidad de las clulas implantadas e inducen arbo-
214
rizacin (sprouting) de las fibras dopaminrgicas del

cerebro husped.
Tambin se han desarrollado tcnicas de sustitucin
celular y trasplantes intracerebrales de clulas secretoras de dopamina (dopaminotrficas) o de molculas
neuroprotectoras. El trasplante de clulas secretoras de
dopamina aporta una fuente constante de dopamina tan
eficiente como la administracin de levodopa. Se sabe
que los trasplantes intraestriatales de clulas secretoras
de dopamina obtenidas de tejido nervioso o cromafn,
como las clulas mesenceflicas fetales, las clulas de
mdula suprarrenal y las clulas glmicas, mejoran la
sintomatologa parkinsoniana en modelos animales de
EP. Las clulas mesenceflicas fetales tomadas de
embriones abortados pueden sobrevivir y funcionar en
el cerebro de pacientes de EP, y muchos pacientes trasplantados muestran una mejora funcional; pero existen
factores limitantes, como la terapia inmunosupresora
para disminuir el rechazo y los problemas ticos, prcticos y de seguridad. El epitelio pigmentado de la retina
contiene clulas productoras de levodopa y dopamina
que pueden cultivarse y encapsularse con microtransportadores de gelatina (EsferaminaR). Estas clulas
microencapsuladas pueden sobrevivir en el estriado de
ratas y primates y producir mejora del dficit motor. La
reaccin inflamatoria que producen en el cerebro husped es mnima en ausencia de inmunosupresin. En
monos tratados con MPTP se ha demostrado, mediante
PET con 18Fdopa y con 11Craclopride, que estas clulas liberan dopamina in vivo.
Trasplante de mdula suprarrenal

En Mxico, Madrazo y col. trataron en 1987 a dos
pacientes mediante ciruga abierta e implantaron unilateralmente fragmentos de mdula suprarrenal en una
cavidad creada en el ncleo caudado, en comunicacin
con el ventrculo lateral. Los resultados comunicados
fueron espectaculares y se confirmaron posteriormente
en una serie de 42 pacientes. La tcnica utilizada por un
grupo sueco en cuatro pacientes fue, al igual que la
experimentacin animal, la implantacin estereotctica
unilateral en el estriado con resultados controversiales;
tambin se realizaron otros implantes de cantidades
variables de tejido mediante ciruga estereotctica en el
putamen o en el caudado, ms frecuentemente de forma
unilateral. La adrenalectoma previa se realiz por va
abdominal o, en algunos casos, por va retroperitoneal,
y se utilizaron distintas tcnicas de perfusin y preparacin del tejido. Sin embargo, las tinciones inmunohistoqumicas para TH han sido negativas o con escasa proli-
(Captulo 7)
feracin de fibras TH positivas que rodean la zona del

implante. Se han descrito complicaciones potencialmente serias, como hemorragias intracraneales, crisis
comiciales y cuadros confusionales posquirrgicos. En
un paciente que falleci tras desarrollar una hidrocefalia
obstructiva por migracin del tejido implantado al
cuarto ventrculo, la autopsia revel que se trataba de un
material compuesto de hueso, cartlago, pelo y epitelio
escamoso. El tratamiento inmunosupresor se ha asociado en algunos pacientes con afectacin renal o infecciones oportunistas, sobre todo cuando se ha mantenido
a largo plazo. La aparicin de discinesias persistentes en
los periodos off, en movimientos estereotipados de los
miembros inferiores similares a las discinesias bifsicas, tambin es una complicacin que se desarrolla con
leve o moderada intensidad. Para explicar el origen de
estas discinesias en situacin off se ha planteado que
podran deberse a un exceso de dopamina global producido por el trasplante o con un desequilibrio regional en
la funcin dopaminrgica estriatal (figura 712).
Trasplantes de mesencfalo
En modelos animales de EP, las clulas del mesencfalo
ventral del cerdo en desarrollo son capaces de sobrevivir en el estriado y corregir el dficit motor. Los trasplantes entre especies (xenotrasplantes) representan
una solucin a los problemas de disponibilidad de tejidos y rganos. Se realizaron por primera vez trasplantes
de mesencfalo fetal humano mediante estereotaxia en
dos pacientes con EP. Ellos documentaron mejora progresiva desde los dos o tres meses y sta continu
durante los tres aos de control clnico. En Mxico se
realizaron trasplantes mediante ciruga abierta en el
ncleo caudado. En otras partes del mundo se ha generalizado la tcnica estereotctica empleada por este procedimiento e incluye inmunosupresin previa y posterior con ciclosporina. La supervivencia a largo plazo del
tejido implantado es de cerca de 5%. Esta supervivencia
neuronal se puede incrementar con exposicin a factores neurotrficos, a sustancias antioxidantes y a agentes
antiapoptticos como los inhibidores de caspasas. Los
antioxidantes duplican la supervivencia de las clulas
mesenceflicas tanto in vitro como in vivo en ratas.
Estudios realizados en ratas lesionadas con 6OHDA y
en primates tratados con MPTP han demostrado que los
trasplantes intrangricos pueden reinervar y producir
una recuperacin funcional completa. Los resultados
del trasplante de mesencfalo fetal humano se puedan
optimizar si al intervenir a pacientes ms jvenes o
menos afectados se utiliza una mayor cantidad de tejido

A
215
B
Estrado
Tirosina
Vesculas
Cx. frontal
DOPA
Vesculas
S. negra
Tegmentum
Hipotlamo
DOPAC
Hendidura
sinptica
Neurona
presinptica
Neurona
postsinptica
Dopamina
Figura 712. A. Vas dopaminrgicas, ncleo estriado y molcula desarrollada del neurotransmisor de dopamina. Estas vas
estn afectadas en las enfermedades de Parkinson, Huntington y esquizofrenia, y tambin se asocian con la neurobiologa de
las adicciones. B. Sinapsis dopaminrgica donde se muestran esquemticamente los elementos presinpticos y postsinpticos.
Los receptores D1 se acoplan a la estimulacin de la actividad de la adenilciclasa, mientras que los receptores D2 inhiben la actividad de la enzima. DA = dopamina; MAO = monoaminooxidasa; COMT = catecoloximetiltransferasa.
para atenuar la degeneracin progresiva del sistema

nigroestriado. Cada centro de investigacin estandariza
las condiciones del trasplante respecto a la diseccin del
material fetal, edad de los donantes fetales, tipo de
almacenamiento tras la diseccin, tipo de disociacin
tisular previa al implante y composicin del medio
usado en la inyeccin.
En situacin ptima se puede obtener hasta 80% de
neuronas que expresan TH, la enzima limitante de la
sntesis de dopamina. Se asume un buen efecto teraputico cuando se contabilizan ~100 000 neuronas funcionales en ambos hemisferios, cuando existe recuperacin de 50% de la tasa normal de captacin de 18Fdopa
en el ncleo y medida de la reinervacin del volumen
estriatal. Otro aspecto de la composicin tisular que
requiere atencin es que en el mesencfalo ventral
donante hay dos subtipos de neuronas dopaminrgicas,
A9 y A10. La reinervacin procedente de axones de
neuronas A9 ejerce mayor mejora clnica. La eficacia
del tratamiento con y sin administracin de inmunosupresores disminuye en funcin de la gravedad de la
lesin, y se recomienda en los casos en que exista una
buena respuesta previa a la Ldopa; adems, la aparicin de respuesta inflamatoria local compromete la
supervivencia neuronal. Los primeros seis meses postrasplante son clave en la evolucin clnica de estos
pacientes. Otra opcin teraputica consiste en trasplantar clulas madre derivadas de la mdula sea, las cuales
son capaces de diferenciarse en neuronas dopaminrgi-
cas in vivo. Tambin se pueden establecer cultivos a partir de precursores neuronales y neuroblastos dopaminrgicos. El cultivo de estas clulas en un medio que
contenga un factor de la familia de receptores nucleares
Nurr, el factor de crecimiento de fibroblastos y el cido
ascrbico expresan un fenotipo similar al de las neuronas dopaminrgicas cerebrales sin que coexpresen otros
neurotransmisores como el GABA o la serotonina. Las
clulas neuronales multipotentes provenientes de primates se cultivan y expanden in vitro como neuroesferas; por ello su contenido en progenitores de neuronas
dopaminrgicas es muy elevado. El trasplante de estas
clulas revierte la asimetra motora inducida por drogas
y mejora las pruebas neurolgicas motoras y la captacin de 18Fdopa en primates.
Trasplante de agregados cromafines

El cuerpo carotdeo contiene clulas glmicas dopaminrgicas que actan como quimiorreceptores y sintetizan un factor neurotrfico derivado de una lnea celular
glial, el factor neurotrfico derivado de la gla (GDNF),
y que tienen gran capacidad neurorregenerativa. Adems se pueden obtener del paciente (autotrasplante), ya
que el cuerpo carotdeo es fcilmente accesible y su
reseccin unilateral no conlleva problemas clnicos
relevantes. Tambin se pueden obtener clulas dopaminrgicas del ganglio simptico cervical superior, aun-
216
que se puede presentar el sndrome de Horner (miosis,

ptosis, enoftalmos y sequedad facial). El tejido mesenquimatoso y cromafn extraadrenal noradrenrgico del
paraganglio de Zuckerkandl expresa TH, as como dopaminabhidroxilasa (DBH), la enzima que sintetiza
noradrenalina. Estas clulas cromafines pueden inducir
mejora funcional progresiva en ratas hemiparkinsonianas con reinervacin estriatal, incremento en la concentracin de dopamina, GDNF y factor de crecimiento
transformante b1 (TGFb1). Las clulas testiculares de
Sertoli pueden sobrevivir y mejorar el dficit motor en
ratas con lesin unilateral por 6OHDA y ejercen efectos trficos sobre clulas dopaminrgicas. Las clulas
PC12 derivadas de feocromocitoma de rata producen
levodopa y dopamina, y se han trasplantado en modelos
animales de EP.
Aplicacin de clulas madre

y terapia celular
Las clulas madre (stem cells) son clulas indiferenciadas con capacidad para autorrenovarse y transformarse
en diferentes tipos celulares especializados; adems, se
pueden obtener de diversos orgenes. Las clulas madre
bajo determinadas condiciones son capaces de autorrenovarse por largos periodos y pueden permanecer en estado totipotencial hasta que reciben determinada seal,
en respuesta a la cual dan origen a clulas especializadas. Hoy en da las clulas madre se exploran como un
vehculo de liberacin de genes en tejidos especficos,
lo que podra ser una opcin en el tratamiento de la EP.
Las clulas madre embrionarias se obtienen de la masa
celular interna del blastocisto preimplantatorio (4 a 5
posconcepcin), son pluripotenciales y poseen una elevada capacidad de autorrenovacin. Estas clulas pueden diferenciarse en clulas dopaminrgicas in vitro tras
trasplantarse en roedores. Estas clulas diferenciadas
pueden sobrevivir e integrarse funcionalmente en el estriado de rata con lesin por 6OHDA. Se han obtenido
clulas madre embrionarias de ratn mediante transferencia nuclear de clulas somticas (clonacin teraputica); con este mtodo se obtienen clulas dopaminrgicas diferenciadas del mismo individuo sin posibilidad de
rechazo inmunitario. Las clulas precursoras inmaduras
son clulas neurales que se obtienen del mesencfalo embrionario de pocas semanas de desarrollo. Aunque han
perdido potencialidad, pueden expandirse y diferenciarse en neuronas dopaminrgicas con baja supervivencia.
Tambin se han obtenido clulas precursoras mesenceflicas humanas con neuronas dopaminrgicas. Las
(Captulo 7)
clulas madre extraneurales del adulto son clulas indiferenciadas que se obtienen de distintos tejidos del organismo con el objetivo de contribuir a su mantenimiento
y reparacin; conservan la capacidad de autorrenovarse
y de diferenciarse en clulas del mismo tejido donde
residen (multipotencialidad) y tambin pueden dar
lugar a clulas de tejidos diferentes mediante el proceso
denominado transdiferenciacin si reciben las seales
adecuadas. Las clulas madre neurales del adulto pueden formar todos los tipos celulares del sistema nervioso y adoptan el fenotipo de la regin donde se
implantan. La neurognesis declina con la edad y se
correlaciona con la aparicin de enfermedades neurodegenerativas. Se han identificado clulas madre neurales
en la sustancia negra del adulto y pueden generar clulas
gliales o neuronas.
El principal objetivo de la terapia celular consiste en
reemplazar las clulas que se han degenerado por otras
que puedan suplir su funcin. Las clulas que se implantan en la sustancia negra y producen dopamina tienen
potencial neurorrestaurador, lo que confirma que la
terapia celular es neuroprotectora. Las estirpes celulares que se han utilizado con xito son: las clulas madre
fetales y adultas; las clulas de la cartida (productoras
de dopamina y de factores neurotrficos); las clulas de
mdula suprarrenal (productoras de dopamina) y las
clulas que liberan factores trficos y promueven la
supervivencia de neuronas que an no han degenerado,
como las clulas de Schwann, astrocitos, clulas modificadas genticamente, etc. Los efectos secundarios de
la terapia celular son infecciones, rechazos, injerto contra husped, degeneracin de las clulas implantadas,
problemas morales y ticos, crecimiento incontrolado
(teratomas) con el uso de clulas madre fetales por su
gran capacidad proliferativa, difcil de controlar y por
su diferenciacin impredecible. En cambio, aunque las
clulas madre adultas no generan tumores, su potencial
de regeneracin es menor.
Clulas madre hematopoyticas

de cordn umbilical
Las clulas madre hematopoyticas (CTH) obtenidas de
sangre de cordn umbilical pueden diferenciarse como
macrfagos, granulocitos y clulas dendrticas, entre
otras, con un potencial de proliferacin y expansin superior a las obtenidas de mdula sea o de sangre movilizada. Ya se han obtenido clulas estromales tipo fibroblastos a partir de clulas madre de sangre de cordn
umbilical, lo que, a reserva de comprobar que efectivamente se trata de ese tipo celular, podra dar la pauta

para generar tejidos no hematopoyticos a partir de clulas madre hematopoyticas. Grupos de clulas con
morfologas y funciones diferentes, como los eritrocitos
(glbulos rojos), leucocitos y plaquetas, se derivan de un
grupo celular comn denominado clula troncal hematopoytica, que radica en los tejidos hematopoyticos.
Diversos experimentos han mostrado que es posible restaurar la hematopoyesis en ratones deficientes cuando se
les trasplantan clulas madre hematopoyticas humanas.
Esto permite a los animales empezar a producir clulas
sanguneas humanas y repoblar su sistema hematopoytico. In vitro, estas clulas madre son capaces de iniciar
la hematopoyesis por periodos de 30, 50 y 70 das.
En la mdula sea la frecuencia de clulas madre
hematopoyticas es extremadamente baja, pues slo 1
de cada 10 000 o 15 000 de las clulas nucleadas es de
este tipo; sin embargo, en ratones inmunodeficientes,
una clula troncal humana es capaz de generar hasta
1013 clulas sanguneas maduras, mientras que in vitro
una de estas clulas origina hasta 35 millones de clulas
sanguneas maduras. A finales de la dcada de 1980 se
encontr que no slo en la mdula sea haba CTH, sino
tambin en la sangre del cordn umbilical, y se demostr que el potencial de proliferacin y expansin de
stas era superior al de las extradas de la mdula sea.
Con este tipo de clulas pueden tratarse enfermedades
de la sangre (leucemias, linfomas, anemias clsicas,
mielomas y algunas inmunodeficiencias menores),
principalmente en nios. La obtencin de clulas madre
de cordn umbilical tiene ventajas sobre la donacin de
mdula sea y la afresis, pues es inocua para el donante
y no representa un dilema tico porque se trata de una
muestra que se desecha con la placenta, por lo que
ambos aspectos garantizan una mayor disponibilidad de
este tipo de clulas.
El Banco de Sangre de Cordn Umbilical es como
una unidad especializada en el procesamiento de las
clulas madre que se encuentran en la sangre del cordn
umbilical, con el fin de criopreservarlas y almacenarlas
para un probable uso teraputico en el futuro. Este tipo
de terapias beneficia principalmente a pacientes peditricos, toda vez que debido a su menor peso requieren
menos clulas que un adulto. A pesar de que las CTH
estn comprometidas a ser sanguneas, han mostrado
capacidad para diferenciarse en otro tipo de clulas.
Transferencia nuclear en el tratamiento

Una de las opciones ms exploradas en la actualidad
pretende probar que las clulas madre pueden generar
217
un nmero suficiente de neuronas humanas secretoras

de dopamina (las extradas de fetos resultan insuficientes) que permitan seguir realizando trasplantes en los
pacientes y perfeccionando esta tcnica de terapia celular sustitutiva. Las clulas madre son capaces de reproducirse en un estado indiferenciado; es decir, sin tener
todava una funcin asignada. La segunda caracterstica
interesante de estas clulas es que pueden salir de ese
estado no diferenciado para adquirir cualidades de, por
ejemplo, neuronas dopaminrgicas. Existen varios tipos de clulas madre que pueden proveer neuronas humanas productoras de dopamina: el cerebro adulto contiene clulas madre multipotentes que pueden generar
neuronas y clulas de la gla. Desafortunadamente, no
existe mucha evidencia que permita afirmar, hasta el
momento, que estas clulas, ya sea manipuladas dentro
del cerebro o bien extradas e inducidas in vitro, puedan
generar neuronas dopaminrgicas que alivien el mal de
Parkinson. No obstante, los esfuerzos para poder utilizar estas clulas madre adultas deben continuar.
Otro tipo de clulas madre que dan lugar a neuronas
de dopamina mediante distintos protocolos de diferenciacin en cultivo son las clulas madre embrionarias,
las cuales se llaman pluripotentes porque tienen una
mayor capacidad de diferenciacin que las multipotentes (p. ej., pueden producir tejido cardiaco, pancretico,
sanguneo, etc.). Estas clulas se extraen de un estadio
preimplantacin de los embriones y, hasta el momento,
esto implica la interrupcin del desarrollo de ese organismo. As, la derivacin de las clulas madre embrionarias humanas que existen en la actualidad se realiz
gracias a la donacin altruista de embriones congelados
que haban sido producidos inicialmente con miras a
implantarse en una mujer que se encontrara en un programa de reproduccin asistida por fertilizacin in
vitro. Esos embriones permanecieron congelados
durante varios aos hasta que los padres decidieron
donarlos para derivar clulas embrionarias. Despus de
1998 se empezaron a estudiar estas clulas y se encontr
que sus caractersticas eran muy semejantes a las de
otros organismos, como el ratn o el mono, en donde ya
se haban generado neuronas de dopamina a partir de
ellas. Como era de esperarse, las clulas madre embrionarias humanas responden a las seales inductoras para
producir neuronas dopaminrgicas funcionales. An no
se cuenta con datos que permitan afirmar que estas clulas humanas contrarrestan el Parkinson experimental,
pero es slo cuestin de tiempo que esos datos sean
reportados.
Otra gran complicacin en todos los trasplantes es la
histocompatibilidad entre el receptor y el tejido por
injertar, que puede ocasionar un rechazo por parte del
218
receptor e incluso una reaccin de las clulas trasplantadas contra el husped. Este obstculo se podra salvar al
tener clulas del propio paciente que se pudieran usar
para su tratamiento. Como ya se mencion, una posibilidad es que clulas madre adultas se dirigieran a la produccin de neuronas de dopamina. Existe otra posibilidad tcnica y ticamente ms complicada, la clonacin,
que consiste en realizar la transferencia del ncleo de
una clula somtica (p. ej., una clula de la piel) a un
ovocito al que se le haya extrado el ncleo celular. Esta
transferencia de informacin gentica a un medio que
potencialmente puede realizar los programas de desarrollo que se desencadenan despus de la fecundacin,
seguido de estmulos fsicos, da como resultado embriones que instalados en el tero de mamferos dan
lugar a clones de ovejas o vacas.
Este procedimiento de transferencia nuclear ha sido
difcil de realizar en clulas humanas. En los ltimos
dos aos hubo un par de reportes que resultaron falsos.
En ellos, el grupo de investigacin de WooSuk Hwang,
en Corea del Sur, describa la metodologa para realizar
la clonacin teraputica (llamada as porque no pretende obtener un ser humano, sino embriones que puedan dar lugar a clulas madre embrionarias). Volviendo
a la pregunta inicial, se cree que la transferencia nuclear,
seguida de la derivacin de clulas madre embrionarias,
podra constituir una fuente confiable de neuronas
dopaminrgicas histocompatibles con los pacientes de
Parkinson de mediano a largo plazo. Estudios realizados con ratones demuestran que esta aproximacin es
eficaz en el tratamiento de Parkinson experimental.
Mucha tecnologa deber desarrollarse para poder hacer
esto posible con clulas humanas. Por otro lado, existe
un aspecto que no se aborda con frecuencia, pero que
puede cobrar gran relevancia: si la transferencia nuclear
se hace con clulas de un paciente que tenga Parkinson,
las clulas resultantes podran ser muy tiles para entender los mecanismos de muerte neuronal o probar distintas estrategias de proteccin.
Aplicacin de factores neurotrficos

Los factores trficos son molculas proteicas, producidas por diferentes tipos celulares que regulan la biologa
celular tanto en tejidos embrionarios como adultos.
Estos factores estimulan la diferenciacin celular en el
embrin, mientras que en el adulto los factores neurotrficos son necesarios para la supervivencia de las neuronas. Las clulas dopaminrgicas nigroestriatales son
sensibles tanto in vitro como in vivo a la accin de distintos factores neurotrficos, principalmente GDNF,
(Captulo 7)
coenzima Q10, factor neurotrfico derivado de cerebro

(BDNF), TGFb, neurotrofina 4 (NF4), factor de crecimiento similar a insulina (IGF), factor de crecimiento
fibroblstico (FGF) y factor del crecimiento derivado
de plaquetas (PDGF). El GDNF es un factor neurotrfico dopaminrgico muy potente y es ms efectivo que
otros factores como el BDNF, TGFb3, NTN, NT4/5,
CNTF. El GDNF es capaz de proteger a las neuronas
dopaminrgicas de la sustancia negra tanto de la axotoma como de la degeneracin inducida por neurotoxinas
como la neurotoxina MPTP o la neurotoxina 6OHDA.
La administracin exgena de GDNF produce la recuperacin funcional en modelos animales (roedores y
primates) de la EP. Esta molcula proteica es muy lbil,
se degrada con gran facilidad y casi no atraviesa la
barrera hematoenceflica. El GDNF administrado por
va intracerebroventricular alivia los sntomas de la EP,
promueve la regeneracin de las neuronas daadas y
aumenta los niveles de dopamina. Las micropartculas
con GDNF, LDOPA/carbidopa, dopamina o norepinefrina pueden prepararse con polmeros biodegradables
tipo PLGA (polylacticcoglycolic acid) cuyos productos de degradacin son atxicos.
Aplicacin de vectores dopaminotrficos

Con la aparicin de la tecnologa gentica se generaron
nuevas estrategias teraputicas de trasplante para introducir molculas neuroprotectoras con accin dopaminotrfica (figura 713). El GDNF y el BDNF poseen
potentes efectos in vivo e in vitro sobre las neuronas
dopaminrgicas. Tambin se han obtenido buenos
resultados con fibroblastos modificados genticamente
secretores de GDNF y BDNF, as como con vectores
virales que expresan GDNF. Los efectos neuroprotectores in vivo permiten el rescate de 40 a 70% de las neuronas dopaminrgicas. El TGFb1 es otro factor neurotrfico que protege las neuronas dopaminrgicas in vitro y
tambin es un cofactor que potencia la actividad de
GDNF tanto in vitro como in vivo. Los efectos antiparkinsonianos de los trasplantes celulares cromafines adrenales se deben a la liberacin de dopamina, a la reinervacin dopaminrgica del estriado denervado y la
expresin y liberacin de GDNF y TGFb1. Estas clulas
inducen la arborizacin de las neuronas supervivientes
dopaminrgicas, dando lugar a una reinervacin del
estriado daado.
Terapia gnica (TG) (figura 714)

Existen dos formas de introducir los productos gnicos
en la EP: la TG ex vivo, mediante la cual se usan clulas

A. Tipificacin del DNA
219
B. Diagnstico mediante RFLP
C. Identificacin de virus RNA mediante RTPCR
D. Terapia gnica
Figura 713.
de origen neural o no neural modificadas genticamente

in vitro con el sistema de expresin deseado, que luego
se implantan en el SNC, y la TG in vivo, que se lleva a
cabo por el tratamiento directo del cerebro in situ con
vectores, ya sean virales o no virales, que expresan el o
los genes de inters teraputico. Estos vectores pueden
ser virales, como adenovirus, herpesvirus, lentivirus,
etc., o no virales, como liposomas, DNA desnudo y
complejos DNAprotenas. Se han obtenido buenos
resultados con transduccin triple de TH, AADC y guanidil trifosfato cliclohidrolasa I (GTPCH I), las principales enzimas que intervienen en la sntesis de dopamina. Se han hecho estudios en modelos de la EP en
ratones con doble transfeccin con TH y GTPCH I in
vivo y ex vivo. En todos los casos se demostr que se
necesita la presencia de ambos genes para lograr una
mayor produccin de Ldopa. Todava no se ha aclarado la importancia de suministrar AADC in vivo, pues
aunque en la EP hay prdida de la mayora de neuronas

dopaminrgicas, las cuales constituyen la fuente principal de esta enzima, en el SNC de estos pacientes la
Ldopa se convierte en dopamina. Uno de los mtodos
usados para facilitar una fuente de Ldopa ha sido la
transferencia gnica de AADC in vivo conjuntamente
con la administracin sistmica de Ldopa. La Ldopa
se suministra con la carbidopa (inhibidor perifrico de
la AADC) para reducir el catabolismo de la Ldopa y
prolongar sus niveles plasmticos y cerebrales.
Esta estrategia tiene un beneficio limitado porque los
niveles de AADC disminuyen con el progreso de la enfermedad y, por lo tanto, evita la conversin de Ldopa
en dopamina en cantidades suficientes; este tratamiento
es efectivo en los primeros estadios de la enfermedad,
pero a medida que la enfermedad progresa, su efectividad disminuye. Con el objetivo de resolver este problema se liber AADC por medio de un vector viral ade-
220

A. Reaccin en cadena
de la polimerasa (PCR)
A. Genotecas
(Captulo 7)
B. Electroforesis del DNA
B. Secuenciacin del DNA
C. Sobreexpresin de las protenas
Figura 714.
noasociado en el estriado y se demostr que despus de

la restauracin de los niveles de la enzima y, por lo tanto,
de una conversin de la Ldopa en dopamina ms eficiente, se puede lograr una mejor respuesta a la Ldopa/
carbidopa en estadios ms avanzados de la enfermedad.
Se ha demostrado que la inyeccin intraestriatal de vectores virales que expresan GNDF promueve la generacin dopaminrgica y mejora el dficit motor en modelos animales de EP. En la construccin regulable del
oncogn vmyc las clulas transfectadas pierden la
capacidad de formar tumores cuando se implantan en el
hospedero. Tambin se han administrado vectores virales que sobreexpresan una proteasa antiapopttica.
La inyeccin en el ncleo subtalmico (NST) de
virus que expresan descarboxilasa del acido glutmico
(GAD) se acompaa de mejora motora, debido al incremento del neurotransmisor al inhibir cido gaminobutrico (GABA), lo que regula la hiperactividad del NST.
El trasplante de clulas modificadas genticamente
(terapia gnica ex vivo) se obtiene de cultivos neuronales. Estas clulas se han obtenido de fibroblastos, astrocitos, de mdula sea, de lneas celulares inmortalizadas, de clulas madre y pueden multiplicarse, sobrevivir
e integrarse bien y fcilmente al cerebro husped. Los
astrocitos constituyen una fuente importante para el
trasplante dada su naturaleza neural; estas clulas realizan funciones vitales relacionadas con la supervivencia
y mantenimiento de las neuronas, poseen un eficiente
sistema secretor y tienen un largo periodo de vida. Adems, expresan TH y sintetizan dopamina a partir de
Ldopa y la liberan al medio; los astrocitos son ms
resistentes al estrs oxidativo que las neuronas, propiedad importante porque en la sntesis y el metabolismo
de la dopamina se producen ERO.
La EP es un desorden neurodegenerativo causado
por el deterioro progresivo de las neuronas dopaminrgicas de la sustancia negra y una grave disminucin del
contenido de dopamina en el estriado; por ello, la apli-

cacin de la TG, tanto ex vivo como in vivo, se divide en
dos estrategias: una dirigida al reemplazo de la dopamina en el estriado, que incluye la introduccin de
genes que codifican las enzimas que participan en la sntesis de este neurotransmisor, y la otra que se basa en
mtodos neuroprotectores o restauradores por medio de
la liberacin de genes que codifican factores neurotrficos que previenen la muerte celular en el sistema nigroestriatal.
Perspectivas de la terapia celular

en la enfermedad de Parkinson
Hasta ahora ninguna forma de tratamiento ha demostrado capacidad para regenerar fisiolgicamente el sistema dopaminrgico nigroestriatal en la EP humana. El
trasplante de mesencfalo fetal puede restaurar parcialmente el dficit de dopamina estriatal. En la actualidad,
los trasplantes de mdula adrenal se han abandonado
por su elevada morbimortalidad. Los xenotrasplantes
fetales y el trasplante de clulas retinianas tambin son
poco alentadores. Sin embargo, a partir de las clulas
madre se puede obtener gran cantidad de clulas dopaminrgicas, pero se requiere controlar los mecanismos
de expansin y de diferenciacin a clulas dopaminrgicas.
Recientemente se han introducido al mercado clulas
madre y factores trficos procedentes de Suiza y Alemania, con resultados alentadores.
Ha sido el tratamiento de eleccin desde 1963, cuando se estableci que la administracin de Ldopa mejoraba la aquinesia. En la dcada de 1980 se iniciaron los
trasplantes de clulas fetales mesenceflicas, los cuales
mostraron su efectividad teraputica; tambin se demostr que las neuronas sobreviven en el cerebro despus del trasplante y que el nmero de neuronas viables
es un factor determinante de la mejora clnica. Se sabe
que el tejido trasplantado restituye la descarga regulada
de dopamina en el estriado y que las neuronas fetales
dopaminrgicas se integran funcionalmente en los circuitos neuronales lesionados. El resultado global es una
mejora en la activacin de las reas corticales frontales
responsables de la aquinesia del Parkinson. Un dato que
muestra la buena supervivencia del implante y la reinervacin del estriado denervado se refleja en el incremento de la captacin in situ de 18F con 6[18F]1dopa
mediante tomografa de emisin de positrones. El crecimiento axonal es estimado por el alargamiento de 2 a 3
mm en el lugar del implante. Con estos resultados, los
estudios en pacientes se iniciaron en 1997 con el implante intraestriatal de clulas fetales humanas mesen-
221
ceflicas ricas en neuronas dopaminrgicas posmitticas procedentes de fetos de aborto de 6 a 9 semanas de

gestacin. Con este mtodo se han demostrado mejoras
de 18 a 34% en la Unified Parkinsons Disease Rating
Scale (UPDRS) o ndice motor a los 12 meses del
implante bilateral y en la actualidad se contabilizan
ensayos clnicos en ms de 350 pacientes. Los ensayos
clnicos con trasplantes intraestriatales de neuronas
ofrecen mejora en el tratamiento de la enfermedad de
Parkinson, aunque no son igualmente efectivos en todos
los pacientes. La generacin de neuroblastos dopaminrgicos a partir de clulas madre embrionarias con
mejor accesibilidad abre un campo de estudio de gran
inters y con gran potencial. Las clulas madre con
capacidad neurognica se pueden aislar de distintas etapas del desarrollo. Una fuente es el blastocisto, que contiene clulas madre embrionarias; otra es el propio sistema nervioso central durante su desarrollo fetal, que
tiene clulas madre con una elevada capacidad de proliferacin que dan lugar a las clulas diferenciadas. Una
tercera fuente son las clulas madre de los organismos
adultos. En el cerebro adulto hay dos zonas identificadas como generadoras de neuronas: la primera es la
regin subventricular, adyacente a los ventrculos laterales, la cual genera neuronas que migran hasta el bulbo
olfatorio, donde las clulas madre se diferencian principalmente a interneuronas; la segunda es la zona subgranular del giro dentado en el hipocampo, la cual tambin
tiene precursores que se dividen y producen neuronas
que permanecen en el hipocampo.
Los precursores fetales del cerebro medio pueden
proliferar y diferenciarse in vitro a neuronas sintetizadoras de dopamina.
En animales con enfermedad de Parkinson, el trasplante de estas clulas permite su recuperacin; sin
embargo, en cultivo, estas clulas precursoras, derivadas del mesencfalo de roedores o de humanos, generan
neuronas dopaminrgicas slo por periodos cortos. As,
el uso de clulas madre fetales del cerebro medio para
el tratamiento de pacientes que padecen Parkinson tiene
dos inconvenientes: el primero es que tienen una capacidad transitoria para generar neuronas dopaminrgicas;
el segundo es que se necesitan numerosos fetos abortados como fuente de estas clulas en el estadio en donde
todava se encuentren precursores que puedan ampliarse para lograr un mayor nmero de neuronas dopaminrgicas. En cambio, las clulas madre embrionarias
pueden proliferar durante un largo periodo de manera
indiferenciada y constituir una fuente ilimitada para la
obtencin de muchos tipos celulares. Asimismo, estas
clulas pueden ser manipuladas con ms facilidad
mediante ingeniera gentica.
222
Se han desarrollado clulas madre embrionarias

transgnicas que sobreexpresan el factor de transcripcin denominado nuclear receptor related 1 (Nurr1), lo
que permiti aumentar la proporcin de neuronas dopaminrgicas.
Estas clulas fueron trasplantadas a ratas parkinsnicas que carecen completamente de la inervacin dopaminrgica en uno de los hemisferios. Sus experimentos
mostraron que las clulas trasplantadas sobreviven y
extienden prolongaciones hacia el tejido daado provocando una recuperacin funcional, lo cual no ocurre
cuando se trasplantan clulas derivadas de clulas
madre de cerebro adulto. Otra observacin interesante
es que estas clulas no causan tumores en los animales,
como ha sucedido cuando se trasplantan directamente
clulas madre embrionarias. Los animales con enfermedad de Parkinson presentan una conducta de rotacin
hacia un lado porque tienen asimetra en el cerebro. Con
el trasplante se logra una reversin de largo plazo (32
semanas).
El trasplante en el hemisferio lesionado responde a
estmulos con potasio o anfetamina liberando dopamina. Tambin se han realizado estudios mediante
tomografa por emisin de positrones para detectar los
sitios de recaptura de dopamina. Ya se han logrado diferenciar en cultivo clulas madre embrionarias humanas
de neuronas dopaminrgicas; ser muy interesante confirmar que estas clulas, al trasplantarse en modelos animales, puedan revertir las alteraciones motoras en animales con mal de Parkinson. Antes de utilizar estos
avances en la clnica deben hacerse numerosos estudios
de bioseguridad, pues como ya se mencion, hay estudios en los que el trasplante directo de las clulas madre
sin diferenciar a ratas parkinsnicas logr una reversin
de la conducta motora, aunque varios de estos animales
desarrollaron tumores en el cerebro. Debemos estar
seguros de que las clulas no van a transformarse dentro
de los pacientes. Las clulas podran ser tiles en el tratamiento de padecimientos muy particulares caracterizados por la falta de un tipo celular particular, muy especfico y restringido espacialmente como la diabetes tipo
I o la esclerosis lateral amiotrfica. Es necesario seguir
con el estudio del potencial teraputico de las clulas
madre de adulto, pues si en la actualidad no han resultado ser tan tiles para generar neuronas dopaminrgicas, tal vez sea porque no se ha encontrado la manera
correcta de indicarles que se diferencien a este tipo de
clulas.
Es importante entender cmo manipular estas clulas
podra servir para aumentar la capacidad de autorreparacin que tiene el cerebro en casos como el de la muerte
neuronal causada por accidentes.
(Captulo 7)
Figura 715. A. Resonancia magntica cerebral en esclerosis mltiple. Se aprecian mltiples lesiones hiperintensas de
pequeo tamao y distribucin periventricular. B. Placa de
desmielinizacin a nivel de mdula cervical.
ESCLEROSIS MLTIPLE
La esclerosis mltiple (EM) (figura 715) es una enfermedad neurolgica crnica que afecta a personas jvenes y puede provocar secuelas neurolgicas importantes. Esta enfermedad afecta a unas 30 000 personas en
Mxico y unas 400 en Navarra, Espaa. Debido a que
comienza hacia los 25 aos de edad y que est activa
durante toda la vida, el padecer una enfermedad crnica, caprichosa y que puede producir secuelas importantes genera gran preocupacin en pacientes y familiares.
La EM es la principal causa de discapacidad neurolgica en adultos jvenes, caracterizada por lesiones desmielinizantes inflamatorias multifocales en el SNC con
dao axonal, gliosis y neurodegeneracin. La EM es
una enfermedad inflamatoria en la que los leucocitos
lesionan el cerebro. Los sntomas pueden ser falta de
fuerza o sensibilidad en un brazo o una pierna, marcha
inestable, visin doble o borrosa que dure una semana
al menos y que suele remitir al cabo de un mes. Los brotes pueden repetirse a lo largo de los aos de forma
caprichosa.
Con el paso del tiempo, los brotes comienzan a dejar
secuelas y tras 20 aos de evolucin muchos pacientes
tienen problemas para caminar e incluso pueden estar
confinados a una silla de ruedas. Hay otros sntomas
muy frecuentes, como la fatiga, el dolor crnico, la rigidez y los problemas del control de la orina (cuadros 78
y 79).

Cuadro 78. Esclerosis mltiple
Sntomas sensitivos (61%)

Hipoestesia (37%)
Parestesias (24%)
Visin borrosa por neuritis ptica (36%)
Debilidad y otros sntomas motores (35%)
Diplopa (15%)
Ataxia (11%)
Las clulas madre del SNC adulto son capaces de

regenerar los oligodendrocitos y la mielina. Aunque los
astrocitos maduros retienen el potencial de reaccionar
a la lesin y dividirse, no existe evidencia de que formen
oligodendrocitos o se remielinicen. Se supone que la remielinizacin depende de las OPC que expresan NG2 y
el receptor a del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFRa) y reaccionan a la desmielinizacin.
La ZSV del adulto contiene un precursor de clulas
madre neurales (NPC) que expresa las isoformas
embrionarias de la molcula de adhesin celular neural
(PSANCAM). Las clulas ZSVPSANCAM tambin
reaccionan a la inflamacin y la desmielinizacin por
proliferacin y diferenciacin, formando astrocitos y
remielinizando oligodendrocitos.
En cerebros con EM se observan intentos de regenerar mielina debido a las placas oscuras descritas que
corresponden a zonas parcialmente remielinizadas con
prdida axonal permanente. Otro fenmeno que se observa se debe a los episodios crnicos de la EM que
agota las pocas clulas de reserva con capacidad de
regeneracin; adems se observa un infiltrado de linfocitos T y macrfagos, lo que complica la enfermedad
por el evento inflamatorio aadido en etapas iniciales de
la enfermedad. Los tratamientos ms habituales son el
interfern b y el acetato de glatiramer. Dichos tratamientos previenen parcialmente los brotes de la enfermedad, aunque no consiguen detenerla por completo.
Otros tratamientos de segunda lnea incluyen los quimioterpicos y los corticoides. El tratamiento de los
pacientes con secuelas importantes se basa en la rehabi-
Cuadro 79. Marcadores pronsticos que

predicen una evolucin ms severa de la EM
Enfermedad progresiva desde el inicio de los sntomas
Signos motores y cerebelosos en el debut
Escasa recuperacin de un brote
Corto intervalo entre los dos primeros brotes
Mltiples lesiones en RM en el debut
223
litacin. En la actualidad se estn realizando numerosos

estudios de investigacin sobre la EM. La perspectiva
del tratamiento para esta enfermedad es que ms que
curarla se consiga lentificarla lo suficiente para considerar que est controlada. Para ello ser preciso combinar diversos tratamientos, entre ellos la terapia celular.
Existen dos estrategias teraputicas para inducir la
remielinizacin en la EM:
1. Estimular la remielinizacin endgena administrando factores de crecimiento neurotrficos como
el factor de crecimiento similar a la insulina 1
(IGF1) y el factor de crecimiento glial2 (GGF2).
Estos factores estimulan la proliferacin y supervivencia de los oligodendrocitos.
2. Trasplante de clulas generadoras de mielina, que
se ha investigado por ms de tres dcadas. Los oligodendrocitos posmitticos tienen poca capacidad de remielinizacin, mientras que las clulas
madre OPC tienen mayor capacidad de divisin
celular, de migrar y de regenerar. Adems, se ha
observado que las OPC trasplantadas tienen
mayor capacidad de remielinizacin que las clulas madre endgenas.
Las clulas madre neurales (NSC) se desarrollan en la
zona ventricular y posteriormente en la zona subventricular (ZSV) en la neurognesis embrionaria. La NSC da
origen a tres estirpes celulares: neuronas, astrocitos y
oligodendrocitos. Se ha demostrado que las neuronas
olfatorias son continuamente generadas en la zona subventricular para regenerar al epitelio olfatorio cada dos
semanas; tambin se ha observado neurognesis en la
zona del hipocampo y en el giro dentado. Se cree que las
clulas ependimarias medulares y ventriculares tienen
la capacidad de actuar como NSC, ya que pueden
migrar y formar cicatriz glial en caso de lesin. En la
pared ventricular tambin existen precursores gliales de
oligodendrocitos (OPC).
Las clulas de Schwann forman la mielina en el sistema nervioso perifrico (SNP), pero cuando se trasplantan al SNC pueden generar mielina y recuperar la
velocidad de conduccin normal previamente alterada.
Las clulas de Schwann pueden separarse mediante
biopsia de nervios perifricos de los pacientes con EM,
cultivarse y reproducirse in vitro, trasplantarse de forma
autloga, con la ventaja adicional de que escapan a la
respuesta autoinmunitaria contra la mielina que se
genera en la EM. Las clulas que recubren el nervio
olfatorio (OEC) comparten propiedades de astrocitos y
clulas de Schwann. Estas clulas se desarrollan en el
neuroepitelio olfatorio y despus migran al bulbo olfatorio. Aunque estas clulas no forman mielina en condi-
224
ciones normales, tienen la capacidad de hacerlo cuando

son trasplantadas a zonas desmielinizadas. Pueden cultivarse in vitro y remielinizar axones con un patrn muy
similar a las clulas de Schwann. Adems, estimulan el
crecimiento axonal y secretan factores neurotrficos.
En septiembre de 2005 un equipo de investigadores
del Consejo Superior de Investigaciones Cientficas
(CSIC), en Espaa, desarroll con xito en ratones una
terapia celular para la artritis reumatoide y la esclerosis
mltiple. Los expertos descubrieron que al inyectar
estas clulas en animales enfermos se desencadenaba
un proceso que neutralizaba las clulas que atacan a
componentes de la articulacin en el caso de la artritis
reumatoide, o a la mielina en el caso de la esclerosis
mltiple. Los resultados del trabajo han sido publicados
en la edicin digital de la revista Proceedings, de la
Academia Nacional de Ciencias. El investigador del
CSIC y responsable principal del trabajo, Mario Delgado, asegur que las ventajas que ofrece este tipo de
terapia en las enfermedades autoinmunitarias son, entre
otras, que no se administra al paciente ningn frmaco,
evitndose as cualquier efecto secundario del mismo.
Para esta enfermedad se puede disear una terapia celular personalizada, no farmacolgica, a un costo accesible y por dems justificado, debido a que la EM no tena
tratamiento efectivo alternativo, hasta ahora, con la
terapia celular. Al usar una terapia celular de este tipo
se administran clulas que el propio organismo utiliza
de forma natural para mantener la tolerancia inmunitaria. Adems, estas clulas son especficas de un solo
antgeno, con lo que se evita la falta de especificidad del
tratamiento (cuadro 710).
Cuadro 710. Diagnstico diferencial

de esclerosis mltiple
Enfermedades desmielinizantes
S Esclerosis mltiple
S Sndrome de Devic
S Enfermedad de Balo
S Enfermedad de MarchiafavaBignami
S Mielinlisis central pontina
S Encefalomielitis diseminada aguda
S Encefalomielitis hemorrgica necrotizante aguda
Enfermedades dismielinizantes
S Leucodistrofia metacromtica. Alteracin funcional
de arilsulfatasa A. Herencia autonmica recesiva
S Leucodistrofia sudanfila
Adrenoleucodistrofia. Herencia ligada al cromosoma
X. Enfermedad de PelizaeusMerzbacher. Herencia recesiva ligada al cromosoma X.
(Captulo 7)
Otras enfermedades desmielinizantes

Sndrome de Devic. Se considera una variante de la
EM, aunque tambin puede producirse este sndrome en
la sarcoidosis y la tuberculosis. Asocia neuritis ptica
bilateral y mielitis transversa. Los dos sntomas pueden
presentarse simultneamente o separados por un intervalo de pocos das o semanas. La mielitis transversa
puede conducir a un bloqueo mielogrfico completo,
siendo entonces sombro el pronstico de recuperacin.
Enfermedad de Balo. Es una enfermedad desmielinizante monofsica, de mal pronstico, que se caracteriza a nivel anatomopatolgico por reas concntricas
de desmielinizacin en la sustancia blanca subcortical.
Su diagnstico es estrictamente histolgico y por resonancia magntica.
Enfermedad de MarchiafabaBignami. Consiste
en una degeneracin primaria del cuerpo calloso (zona
medial, con bordes dorsal y ventral conservados), que
se present inicialmente con especial frecuencia en
varones italianos de mediana edad o ancianos habituados al consumo de alcohol (vino). Tambin aparece en
pacientes desnutridos y se desconoce si su patogenia es
txica o metablica. La alteracin anatomopatolgica
es similar a la encontrada en la toxicidad por alcohol
metlico, arsnico o cianuro.
La presentacin ms frecuente es la demencia inespecfica. Los sntomas mentales estn casi siempre presentes y tienen caractersticas de estados manacos,
depresivos, paranoides, etc. Las convulsiones son bastante frecuentes y se suelen asociar a afasias, apraxias
o hemiparesias.
Mielinlisis central pontina. Es una enfermedad
desmielinizante del tronco cerebral, caracterizada por
signos de parlisis pseudobulbar (disartria, disfagia),
paraparesia o tetraparesia, conservando el parpadeo y
los movimientos oculares verticales (MIR 9798E,
134). Generalmente aparece entre 2 y 6 das despus de
la correccin rpida de estado de hiponatremia, pero
tambin se ha descrito asociada a alcoholismo crnico
y a trasplante heptico. Tiene un pobre pronstico y no
hay tratamiento efectivo.
Encefalomielitis diseminada aguda. Es una enfermedad desmielinizante de inicio sbito y curso monofsico, generalmente asociada a inmunizacin previa
(encefalomielitis posvacunal) o antecedente de enfermedad infecciosa exantemtica (encefalomielitis
posinfecciosa). Las vacunas ms implicadas eran las de
la rabia y la viruela, pero su incidencia es cada vez
menor. El sarampin es el agente infeccioso ms frecuente y son otras causas varicela, rubola, influenza o
micoplasma.

La severidad clnica es variable y cursa con fiebre,
cefalea, meningismo y deterioro progresivo del nivel de
conciencia. Las crisis son comunes, as como la clnica
motora (hemiparesia, tetraparesia) y cerebelosa.
En el LCR hay pleocitosis linfocitaria y libera proteinorraquia. Como tratamiento se utilizan los corticoides
a altas dosis por va intravenosa. La mortalidad es del 5
a 20% y la mayora de los pacientes quedan con secuelas
neurolgicas permanentes.
Encefalomielitis hemorrgica necrotizante aguda.
Es un cuadro clnico de inicio brusco varios das despus de una infeccin de vas respiratorias altas, con una
evolucin clnica similar a la de la encefalomielitis
aguda diseminada, pero ms explosiva.
Anatomopatolgicamente hay destruccin intensa
de la sustancia blanca subcortical y es caracterstica la
presencia de mltiples hemorragias de pequeo tamao
en disposicin perivenular, con intensa reaccin inflamatoria de las meninges.
ENFERMEDAD DE HUNTINGTON
La enfermedad de Huntington (EH) fue descrita en

1872 por George Huntington. Este padecimiento es
hereditario y afecta de igual manera a hombres y a mujeres, con una frecuencia de 5 a 10 casos por cada 100 000
individuos. En Mxico, de acuerdo con las estadsticas
del Instituto de Neurologa y Neurociruga, se han
reportado 8 000 casos. El origen gentico de esta enfermedad radica en la mutacin del primer exn del gen
IT15 localizado en el brazo corto del cromosoma 4.
La expresin normal de este gen codifica para la protena conocida como huntingtina (htt), que en su
extremo Nterminal presenta un fragmento polimrfico
que contiene un nmero variable (entre 3 y 30) de residuos del aminocido glutamina (Gln). La htt se considera mutada cuando el fragmento tiene ms de 34 repeticiones de Gln, aunque el padecimiento se desarrolla
invariablemente cuando el nmero de Gln es igual o
mayor de 40. Existe una relacin inversa entre la manifestacin de la enfermedad y el nmero de repeticiones:
cuanto mayor es el nmero de residuos de Gln, a menor
edad se manifiesta la enfermedad. La forma juvenil se
desarrolla antes de los 20 aos de edad si el gen contiene
un nmero igual o mayor de 60 repeticiones. La manifestacin fenotpica de la EH es progresiva y por lo
general presenta el mismo patrn de alteraciones. Pue-
225
den distinguirse tres etapas con una duracin aproximada de 5 aos. En la fase inicial el paciente muestra
temblor constante en manos y brazos, alteraciones en la
marcha y prdida de la capacidad para realizar movimientos finos. La presencia de movimientos involuntarios o coreicos caracteriza a la segunda etapa e incapacita al paciente para realizar actividades cotidianas
como comer, escribir y mantener una conversacin.
Dentro de los ganglios basales, la enfermedad se concentra especficamente en las neuronas del estriado,
sobre todo aqullas en el ncleo caudado y el plido.
Tambin est afectada la superficie exterior del cerebro,
o corteza, que controla el pensamiento, la percepcin y
la memoria.
Aunque se lleve una dieta normal o altamente proteica, hay una prdida drstica de peso corporal. Los pacientes manifiestan un deterioro acentuado de las capacidades mentales que culmina en demencia. En la tercera
etapa cesa la excesiva movilidad corporal y se presenta
una fase acintica, en la cual los pacientes muestran bradiscinecia o disminucin de los movimientos corporales,
acompaada de rigidez. En esta ltima etapa, 15 o 20
aos despus de las manifestaciones iniciales, ocurre la
muerte del paciente a consecuencia del deterioro progresivo de su salud, a menudo por neumona.
Al principio los familiares pueden notar que el individuo tiene cambios de nimo o se pone inusitadamente
irritable, aptico, pasivo, deprimido o enojado. Estos
sntomas pueden disminuir a medida que evoluciona la
enfermedad o, en algunos individuos, pueden continuar
e incluir arrebatos hostiles o ataques profundos de
depresin. La EH puede afectar la memoria, el juicio y
otras funciones cognoscitivas del individuo. Los signos
precoces pueden incluir tener dificultad para conducir,
aprender nuevas cosas, recordar un hecho, responder a
una pregunta o tomar una decisin. Algunos pacientes
podran manifestar cambios en la escritura. A medida
que evoluciona la enfermedad, la concentracin en
tareas intelectuales se dificulta cada vez ms.
En algunos individuos, la enfermedad puede comenzar con movimientos incontrolados en los dedos, los
pies, la cara o el tronco. Estos movimientos, que son signos de corea, a menudo se intensifican cuando la persona est ansiosa.
La EH tambin puede comenzar con torpeza leve o
problemas de equilibrio. Algunas personas desarrollan
movimientos coreicos ms tarde, despus de que la
enfermedad ha evolucionado. Pueden tropezar o parecer incoordinados. A menudo la corea crea problemas
serios con la marcha, aumentando la probabilidad de
cadas. La EH puede alcanzar el punto donde el habla se
arrastra y funciones vitales como tragar, comer, hablar
226
y especialmente caminar continan declinando. Algunos individuos desconocen a sus familiares. Sin
embargo, muchos permanecen alerta en su ambiente y
pueden expresar emociones. La Escala de Valoracin
Unificada de la Enfermedad de Huntington evala las
caractersticas clnicas, las etapas y el curso de la enfermedad.
Algunos individuos desarrollan sntomas de EH
cuando son muy jvenes, antes de los 20 aos de edad.
Los trminos inicio precoz o juvenil de la EH se
usan a menudo para describir la enfermedad que aparece en una persona joven. Un signo comn de la enfermedad en un individuo joven es la declinacin rpida
del desempeo en la escuela. Los sntomas tambin
pueden incluir cambios sutiles en la escritura y leves
problemas de movimiento, como lentitud, rigidez, temblor y tics musculares rpidos, llamados mioclono.
Varios de estos sntomas son similares a los de la enfermedad de Parkinson y difieren de la corea observada en
individuos que contraen la enfermedad ya siendo adultos. Se dice que estos individuos jvenes tienen la enfermedad acinticargida o la variante Westphal de la
EH. Las personas con EH juvenil tambin pueden tener
convulsiones y discapacidades mentales. Cuanto antes
sea el inicio, ms rpidamente parece evolucionar la
enfermedad. sta evoluciona con ms rapidez en los
individuos con inicio precoz o juvenil, y la muerte
sobreviene dentro de los 10 aos.
Los individuos con EH juvenil por lo general heredan
la enfermedad de sus padres. Estos individuos tambin
tienden a tener el nmero ms grande de repeticiones de
CAG; el motivo podra encontrarse en el proceso de
produccin de esperma. A diferencia de los huevos, el
esperma se produce por millones. Debido a que el DNA
se copia millones de veces durante este proceso, existe
una mayor posibilidad de que se produzcan errores
genticos. Para verificar el vnculo entre el nmero de
repeticiones de CAG en el gen de Huntington y la edad
al inicio de los sntomas, los cientficos estudiaron a un
nio que tuvo sntomas de la enfermedad a los dos aos
de edad: uno de los casos ms precoces y graves registrados. Encontraron que tena el nmero ms grande de
repeticiones de CAG estudiado hasta el momento: cerca
de 100. El caso del nio fue importante para la identificacin del gen y al mismo tiempo ayud a confirmar que
los jvenes con EH tienen los segmentos ms largos de
repeticiones de CAG, la nica correlacin probada
entre la longitud de la repeticin y la edad al inicio.
El origen de las alteraciones motoras caractersticas
de la EH es la muerte selectiva de las neuronas espinosas
medianas (NEM) que se encuentran en la regin del
neoestriado, un grupo de clulas nerviosas formado por
(Captulo 7)
el ncleo caudado y el putamen que controla el movimiento, el equilibrio y la marcha. Esta estructura forma
parte de un circuito cerebral involucrado en la planeacin y ejecucin de los movimientos corporales. La
razn por la cual la mutacin de la htt conduce a la
muerte selectiva de las NEM no se conoce, pero se han
postulado dos hiptesis: la primera sugiere que la mutacin promueve la prdida de la funcin de la htt, la cual
hasta la fecha no se ha identificado, y la segunda sostiene que la mutacin confiere a la htt una funcin distinta. Se ha observado una serie de alteraciones celulares que subyacen a la expresin de la htt mutada, como
la presencia de agregados intracelulares, tanto en el citoplasma como en el ncleo, que contienen a la htt completa y fragmentos de la regin mutada. stos tambin
contienen factores de transcripcin, protenas citoplsmicas y complejos proteicos del proteasoma implicados
en la degradacin de protenas mal plegadas. La presencia de las numerosas repeticiones de Gln en la htt impide
su degradacin por este sistema, y se ha propuesto que
la interaccin de sta con protenas con las que inicialmente no tiene una relacin funcional altera el funcionamiento celular y conduce a la muerte de las NEM.
Por otra parte, la evidencia sugiere que la muerte neuronal excitotxica mediada por la activacin de receptores del neurotransmisor glutamato, as como una deficiencia en el metabolismo energtico, son dos
componentes involucrados en la patognesis de la EH.
Estudios en pacientes sintomticos han revelado una
disminucin del metabolismo de la glucosa en las regiones cerebrales ms afectadas, y se ha observado una
reduccin de la actividad de los complejos mitocondriales y de enzimas involucradas en la sntesis de ATP.
Las neuronas son sumamente dependientes de la sntesis de ATP y una falla energtica aun moderada las predispone a los efectos txicos del glutamato, el cual
induce su muerte por un mecanismo que involucra el
aumento en la concentracin intracelular de calcio y la
produccin de radicales libres. Las NEM reciben proyecciones glutamatrgicas de la corteza cerebral, y ciertas
evidencias sealan que la administracin de agonistas de
los receptores glutamatrgicos en el estriado promueve
alteraciones conductuales y dao neuronal similar al de
la EH.
En cerebros post mortem y en modelos transgnicos
se han identificado alteraciones en la transmisin glutamatrgica (a nivel de sus receptores y transportadores),
las cuales en animales transgnicos preceden la manifestacin fenotpica de la enfermedad. Esto sugiere que
la expresin de la htt mutada podra alterar la transmisin glutamatrgica, lo cual aunado a una alteracin del
metabolismo energtico conducira eventualmente a un

proceso excitotxico. Sin embargo, la relacin entre la
htt mutada y la excitotoxicidad an no se ha dilucidado.
A pesar de la intensa investigacin sobre las consecuencias de la expresin de la htt mutada, hasta la fecha no
se ha podido desarrollar un tratamiento eficaz para la
EH. Las alternativas teraputicas con las que se cuenta
en la actualidad se enfocan en aminorar la excesiva alteracin motora, evitar la prdida masiva de peso corporal
y contrarrestar la produccin de radicales libres.
La terapia celular con clulas madre es la base de
numerosas investigaciones sobre factores neurotrficos
para la enfermedad de Huntington. Las clulas madre
pueden utilizarse como bombas de factores neurotrficos, ya que se integran y dispersan en el cerebro y pueden reemplazar y regenerar a neuronas y neuroglias
enfermas.
TERAPIA CELULAR EN LA EPILEPSIA
La epilepsia es uno de los primeros trastornos del cerebro que se describieron. Ya era mencionada en la antigua Babilonia hace ms de 3 000 aos. El extrao comportamiento causado por algunos tipos de convulsiones
ha generado a travs de la historia muchas supersticiones y prejuicios. La palabra epilepsia se deriva del trmino griego que quiere decir ataque. La gente alguna
vez lleg a pensar que las personas con epilepsia estaban siendo visitadas por demonios o dioses. Sin
embargo, en el ao 400 a.C., Hipcrates, un mdico de
la poca antigua, indic que la epilepsia era un trastorno
del cerebro y ahora se sabe que l tena razn. La epilepsia es un sndrome cerebral crnico de causas diversas,
caracterizada por crisis recurrentes debidas a unas descargas excesivas hipersincrnicas de impulsos nerviosos
por las neuronas cerebrales, asociadas eventualmente
con diversas manifestaciones clnicas y paraclnicas.
Las crisis pueden ser convulsivas o no convulsivas. A
no todas las personas que padecen una crisis epilptica
se les diagnostica epilepsia. Se consideran epilpticos
cuando padecen por lo menos dos ataques, los cuales no
siempre son asociados a los temblores motores de una
convulsin. Una crisis epilptica ocurre cuando una
actividad anormal elctrica en el cerebro causa un cambio involuntario de movimiento o funcin del cuerpo,
de sensacin, en la capacidad de estar alerta o del comportamiento. La crisis puede durar desde unos segundos
hasta varios minutos. Hay ms de 20 tipos diferentes de
crisis epilpticas. Los sntomas que experimenta una
227
persona durante una crisis epilptica dependen del lugar

del cerebro en el cual ocurra la alteracin de la actividad
elctrica. Una persona que tiene una crisis tonicoclnica
(tambin llamada de gran mal) puede gritar, perder el
sentido y desplomarse, ponerse rgida y con espasmos
musculares. Otro tipo de crisis epilptica es la denominada crisis parcial compleja, en la que el paciente puede
parecer confundido o aturdido y no podr responder a
preguntas ni a instrucciones. Otras personas tienen ataques muy leves que ni siquiera son notados por los
dems. Algunas veces la nica manifestacin de la crisis epilptica es un parpadeo rpido o algunos segundos
de mirada perdida con desconexin del medio; a este
tipo de crisis epilptica se lo denomina ausencia y es
relativamente frecuente en la infancia. La epilepsia
puede tener muchas causas; en unos casos es debida a
lesiones cerebrales de cualquier tipo (traumatismos craneales, secuelas de meningitis, tumores, etc.), pero en
muchos no hay ninguna lesin, sino nicamente una
predisposicin de origen gentico a padecer las crisis.
La epilepsia es un trastorno del cerebro en el cual grupos
de clulas nerviosas o neuronas del cerebro transmiten
a veces las seales en una forma anormal. Las neuronas
normalmente generan impulsos electroqumicos que
actan sobre otras neuronas, glndulas y msculos para
producir pensamientos, sentimientos humanos y acciones. La epilepsia perturba el patrn normal de la actividad neuronal y esto causa sensaciones, emociones y
comportamientos extraos o, a veces, crisis epilpticas,
espasmos musculares y prdida del conocimiento.
Durante una crisis epilptica, las neuronas pueden emitir seales hasta 500 veces por segundo, lo cual es mucho ms rpido que la tasa normal. En ciertas personas,
esto slo ocurre en ocasiones, pero en otras puede ocurrir hasta cientos de veces en un solo da (cuadro 711).
Las crisis son el resultado de una descarga cortical
anmala. De forma genrica podemos considerar tres
mecanismos fisiopatolgicos por los que se pueden producir:
1. Por una disminucin de los mecanismos inhibidores mediados por GABA.
2. Por un exceso de los mecanismos excitadores
mediados por asprtico y glutmico.
3. Por una alteracin de la conduccin inica de
membrana mediada por sodio y calcio.
Se dispone de un nmero limitado de frmacos antiepilpticos: fenitona (FN), carbamacepina (CBZ), fenobarbital (FB), benzodiazepinas (BZD), cido valproico
(VPA) y etosuximida (ESM). A ellos se aaden una
serie de nuevos frmacos: vigabatrina (VGB), lamotrigina (LMT), felbamato, gabapentina, tiagabina y topi-
228

Cuadro 711. Clasificacin de las crisis
epilpticas
Crisis parciales
1. Crisis parciales simples
a. Con sntomas motores
Focales motoras sin progresin
Jacksonianas
Posturales
Fonatorias
b. Con sntomas sensoriales
Somatosensoriales
Visuales
Auditivas
Olfatorias
Gustativas
Vrtigo
c. Con signos o sntomas vegetativos
d. Con sntomas psquicos
Fenmeno del ya visto
Miedo
Micropsia, macropsia
Alucinaciones auditivas y visuales
2. Crisis parciales complejas
a. Con inicio parcial simple
b. Con trastorno de la conciencia inicial
3. Crisis parciales secundariamente generalizadas
a. Inicio como crisis parcial simple
b. Inicio como crisis parcial compleja
Crisis generalizadas
1. Crisis de ausencia
a. Tpicas (pequeo mal)
Simple trastorno de la conciencia
Con automatismos
Con componentes mioclnico
Con componente tnico
Con componente atnico
Con componente vegetativo
b. Atpicas
2. Crisis mioclnicas
3. Crisis tnicas
4. Crisis tnicoclnicas (gran mal)
5. Crisis atnicas
6. Espasmos infantiles
ramato. En buena lgica, estos anticomiciales debieran

actuar contra uno o varios de esos tres mecanismos.
1. Potenciando la conduccin gabargica. Se consideran frmacos con accin gabargica: fenobarbital, benzodiazepinas, gabapentina (aumenta
sntesis y liberacin de GABA), vigabatrina
(Captulo 7)
(inhibe la GABAaminotransaminasa) y tiagabina (inhibe la recepcin de GABA en la hendidura sinptica).

2. Inhibiendo la liberacin de asprtico y glutmico
o bloqueando sus receptores (fundamentalmente
el Nmetildaspartato o NMDA). La lamotrigina inhibe la liberacin de asprtico y glutmico
mediante un bloqueo presinptico de los canales
del sodio. El felbamato y el topiramato parecen
bloquear los receptores de asprtico y glutmico.
3. Bloqueando los canales del sodio o calcio. La
fenitona y carbamacepina interaccionan con
los canales del sodio a dosis teraputicas, mientras que la etosuximida bloquea los canales del
calcio. Se discute la accin del valproico sobre
los canales del sodio o calcio.
Ms de 2 millones de personas en EUA (cerca de 1:100)
han experimentado una convulsin no provocada o se
les ha diagnosticado epilepsia. Las convulsiones se pueden controlar con medicinas y tcnicas quirrgicas
modernas en cerca de 80% de las personas diagnosticadas con epilepsia. Sin embargo, cerca de 20% de personas con epilepsia seguirn teniendo convulsiones aunque cuenten con el mejor tratamiento disponible. Los
mdicos llaman a esta situacin epilepsia resistente al
tratamiento. Tener una convulsin no quiere decir necesariamente que la persona tenga epilepsia; slo cuando
una persona ha tenido dos o ms convulsiones se considera que tiene epilepsia.
La epilepsia no es contagiosa y no es causada por
enfermedad mental ni retardo mental. Algunas personas
con retardo mental pueden experimentar convulsiones,
pero las convulsiones no significan necesariamente que
la persona haya sufrido o vaya a sufrir un deterioro mental. Muchas personas con epilepsia tienen inteligencia
normal o por encima de lo normal. Entre las personas
famosas que se sabe o que se ha rumorado que tenan
epilepsia estn el escritor ruso Dostoievski, el filsofo
Scrates, el general y emperador Napolen Bonaparte
y el inventor de la dinamita, Alfredo Nobel, quien cre
el Premio Nobel. Muchos medallistas olmpicos y otros
atletas tambin han tenido epilepsia. Las crisis epilpticas causan a veces dao cerebral, sobre todo si son graves. Sin embargo, la mayora de ellas no parecen tener
un efecto perjudicial sobre el cerebro. Los cambios que
se pueden presentar son por lo general imperceptibles y,
a veces, no est claro si esos cambios se deben a las crisis mismas o al problema subyacente que las caus.
Aunque la epilepsia no tiene cura en la actualidad, la
enfermedad llega a desaparecer en algunas personas.
Un estudio descubri que nios con epilepsia idioptica
o epilepsia de causa desconocida tenan entre 68 y 92%

de probabilidades de no sufrir convulsiones 20 aos
despus de haber sido diagnosticados. Las probabilidades de quedar libres de crisis epilpticas no son tan buenas para los adultos o para los nios con sndromes epilpticos graves, pero es posible que las crisis epilpticas
disminuyan o hasta se detengan con el tiempo. Esto es
ms probable si la epilepsia ha sido bien controlada con
medicamentos o si la persona ha tenido ciruga para tratar la epilepsia. Con tratamiento mdico es posible el
control de las crisis en un elevado porcentaje de pacientes.
El electroencefalograma (EEG) no siempre informa
que haya indicios de epilepsia, porque muchas veces en
zonas muy profundas del cerebro se producen algunos
cambios elctricos que el electroencefalograma no puede detectar. Todos estos factores pueden ser muy diversos, segn cada una de las diferentes formas de la epilepsia. Lo mismo que en las crisis epilpticas, tambin
en las epilepsias se distingue entre formas generalizadas
y focales, dependiendo de si van acompaadas de crisis
generalizadas o focales. Segn la Comisin Internacional de la Liga Internacional contra la Epilepsia, las crisis
epilpticas se clasifican en:
1. Crisis parciales
a. Crisis parciales simples: son crisis cuyas manifestaciones clnicas (sntomas o signos motores, sensitivos, autonmicos o psquicos) o
electroencefalogrficas reflejan una descarga
de un sistema de neuronas localizadas en una
parte del hemisferio cerebral sin alteracin de
la conciencia.
b. Crisis parciales complejas (con compromiso
del nivel de conciencia). Son precedidas por un
aura que seala el probable sitio de la descarga
(olfatorio?temporal; visual?occipital), asociadas con alucinaciones visuales o auditivas,
temor, ira, etc. Son frecuentes ciertos gestos
automatizados como movimientos de la lengua, taquicardia, palidez, etc. Por lo general
slo dura unos minutos.
S Parciales simples seguidas de parcial compleja.
S Crisis parciales complejas desde el inicio.
S Crisis parciales complejas que evolucionan
a secundariamente generalizadas.
2. Crisis generalizadas
a. No convulsivas:
S Ausencias.
S. Crisis atnicas.
b. Convulsivas:
S
S
S
S
229
Crisis generalizadas tnicoclnicas.

Crisis tnicas.
Crisis mioclnicas.
Crisis sin clasificar (figura 716).
Al comienzo del tratamiento se debe examinar si se

puede eliminar la causa de la epilepsia; en este caso se
habla de una terapia causal (p. ej., la operacin de un
tumor cerebral, supresin o mitigacin de un trastorno
metablico). En principio la epilepsia tiene cura. La
terapia sintomtica que se lleva a cabo en la actualidad
es la terapia clsica que se realiza en ms de 90% de
todos los enfermos epilpticos por medio de medicamentos inhibitorios de crisis (antiepilpticos). En su
mayora esta terapia medicamentosa se realiza a lo largo
de muchos aos. Gracias a ella muchos de los pacientes
tratados (cerca de 60%) no padecen crisis y en ms de
20% de los casos se consigue una mejora en las crisis.
La tolerancia a los antiepilpticos es buena en general;
sin embargo, en casos excepcionales estos medicamentos pueden tener graves efectos secundarios y ser perju-
Punta y onda (focales)
Punta y onda (generalizada)
Puntas (generalizadas/focales)
Actividad de fondo
Gran mal (generalizadas)
Paroxstica
generalizadas/focales
Deltas (v 3/seg), generalizada o focal
Theta (4 a 7/seg)
Alfa (8 a 13/seg)
Normal: 10/seg. (occipital)
Beta (15 a 30/seg)

Figura 716. Clasificacin de GreyWalter del EEG.
230
diciales para los pacientes. Por ello es absolutamente

necesaria una vigilancia facultativa regular de la terapia. De cada 10 pacientes tratados con medicamentos,
6 no padecern ms crisis, 2 presentarn una mejora
notable y 2 no experimentarn ninguna mejora. En
algunos casos un tratamiento quirrgico puede ser ms
ventajoso que el farmacolgico; esto suele suceder slo
en el caso de epilepsias focales y de momento afecta a
menos de 5% de todos los enfermos epilpticos. Se debe
individualizar el tratamiento teniendo en cuenta el sndrome epilptico, la comorbilidad, las interacciones, as
como la forma de vida, las preferencias del individuo y
la familia.
No es aconsejable el cambio entre genricos porque
podran variar la biodisponibilidad y los perfiles farmacocinticos, con lo que se puede modificar el efecto deseado o aumentar los efectos secundarios.
La monoterapia debe ser la eleccin cuando sea posible, y si fracasa una vez que se haya asegurado que se
han alcanzado niveles teraputicos, se deber cambiar
a otro medicamento con precaucin. La combinacin de
dos frmacos slo debe considerarse cuando hayan fracasado varios intentos de control de las crisis en monoterapia. Si a pesar de ello no se controlan, se deber
valorar con qu terapia estaba mejor controlado el
paciente, teniendo en cuenta la frecuencia de aparicin
de crisis as como los efectos secundarios.
El frmaco antiepilptico concreto debe ser elegido
en funcin del sndrome epilptico, tipo de crisis, edad
del paciente, otras patologas que sufra el paciente,
interaccin con otros medicamentos, caractersticas
especficas del paciente (mujer en edad gestacional,
embarazo, peso, etc.) y preferencias del paciente (perfil
de efectos secundarios, nmero de tomas al da, etc.).
El tratamiento con AED se debe iniciar ante una
segunda crisis epilptica. Ante un primer ataque epilptico se debe considerar el inicio del tratamiento con
AED: si existe dficit neurolgico, si el EEG demuestra
actividad epilptica inequvoca, si la familia no quiere
correr el riesgo de un segundo ataque epilptico y si en
las pruebas de imagen se observa alteracin estructural.
La decisin de retirar la medicacin se debe hacer en
consenso con el paciente, la familia y los cuidadores una
vez que hayan comprendido el riesgo de un posible
nuevo ataque, una vez tenido en cuenta el tipo de epilepsia, pronstico y calidad de vida, y siempre y cuando
hayan pasado dos aos sin ningn ataque.
La retirada debe realizarse lentamente, a lo largo de
dos a tres meses. La intervencin psicolgica puede utilizarse conjuntamente con el AED si ste no realiza un
control adecuado de la epilepsia, aunque no debe ser
una alternativa a los AED. La dieta cetgena no debe ser
(Captulo 7)
recomendada en adultos, y la neurociruga est indicada

cuando la epilepsia es resistente a los AED.
La valoracin de realizar una ciruga resectiva que
pueda ser curativa deber realizarse antes del planteamiento de llevar a cabo tratamientos paliativos como la
reseccin del vago. La estimulacin del nervio vago es
una alternativa en aquellos pacientes en los que no haya
control completo de los ataques y donde la ciruga est
contraindicada. Est indicada en crisis parciales (incluyendo las secundariamente generalizadas) y en las crisis
generalizadas.
Los ataques convulsivos que duran ms de 5 min o
que se repiten por tres ocasiones en 1 h deben recibir tratamiento urgente y como primera eleccin se debe escoger el DiacepamR rectal, que es seguro y eficaz.
El enfoque ms utilizado todava para tratar la epilepsia es recetar medicamentos antiepilpticos. Los primeros medicamentos antiepilpticos eficaces fueron los
bromuros, dados a conocer en 1857 por Sir Charles
Locock, mdico ingls. l se dio cuenta de que los bromuros tenan un efecto sedante y parecan reducir el
nmero de las crisis en algunos pacientes. Ahora hay
ms de 20 medicamentos antiepilpticos diferentes, todos con beneficios y efectos secundarios distintos. La
decisin de cul medicamento recetar y en qu dosis
depende de gran variedad de factores, entre ellos el tipo
de crisis que tenga la persona, su estilo de vida y su edad
y la frecuencia con que ocurren las crisis y, en el caso de
las mujeres, la probabilidad de quedar embarazada. Las
personas con epilepsia deben seguir los consejos del
mdico y compartir con l cualquier preocupacin que
puedan tener sobre los medicamentos que estn
tomando.
A menudo, los mdicos que atienden a un paciente
que acaba de contraer epilepsia recetan inicialmente
carbamazepina, valproato, lamotrigina, oxcarbazepina
o fenitona, a menos que se sepa que la epilepsia es de
un tipo que necesita un tratamiento diferente. En el caso
de las crisis de ausencia, la etosuximida es, con frecuencia, utilizada como tratamiento primario. Otros medicamentos comnmente recetados son, entre otros, clonazepam, fenobarbital y primidona. Algunos medicamentos
relativamente nuevos contra la epilepsia incluyen tiagabina, gabapentina, topiramato, levetiracetam y felbamato. Otros ms son utilizados en combinacin con uno
de los medicamentos estndar o para tratar las convulsiones resistentes al tratamiento que no respondan a
otros medicamentos. Algunos medicamentos, como la
fosfenitona, tienen un uso autorizado slo en instalaciones hospitalarias para el tratamiento de problemas
especficos como el estado de mal epilptico o status
epilepticus (ver la seccin Hay riesgos especiales

asociados a la epilepsia?). En el caso de las personas
con crisis graves, recurrentes y estereotipadas que son
fcilmente reconocidas por sus familiares, el medicamento DiazepamR est ahora disponible en un gel que
puede ser administrado rectalmente por un miembro de
la familia. Este mtodo para la administracin de medicamentos puede servir para detener las crisis repetidas
o prolongadas antes de que se conviertan en estado de
mal epilptico.
En la mayora de las personas con epilepsia las crisis
se pueden controlar con un solo medicamento administrado en una dosis ptima. La combinacin de medicamentos suele amplificar efectos secundarios como fatiga y disminucin del apetito, razn por la cual los
mdicos recetan una monoterapia o el uso de una sola
droga siempre que sea posible.
Si la monoterapia falla, a veces se recetan combinaciones de medicamentos para controlar eficazmente las
crisis del paciente.
El nmero de veces que una persona necesita tomar
medicamentos al da suele estar determinado por la vida
media del medicamento o por la cantidad de tiempo que
toma el que la mitad de la dosis del medicamento sea
metabolizada o descompuesta en otras sustancias en el
cuerpo. Algunos medicamentos, como la fenitona y el
fenobarbital, slo necesitan tomarse una vez al da,
mientras que otros, como el valproato, deben tomarse
dos o tres veces al da.
La mayora de los efectos secundarios de los medicamentos antiepilpticos son menores, como cansancio,
mareo o aumento de peso. No obstante, puede haber
efectos secundarios ms graves y potencialmente mortales, como las reacciones alrgicas. Los medicamentos
contra la epilepsia tambin pueden predisponer a la persona a sufrir depresin o psicosis. Las personas con epilepsia deben consultar al mdico inmediatamente si les
sale cualquier tipo de sarpullido mientras estn tomando el medicamento o si estn deprimidas o no se sienten
en capacidad de pensar en forma racional. Otros signos
de peligro que deben ser consultados inmediatamente
con el mdico son cansancio extremo, tambalearse al
caminar u otros problemas del movimiento y hablar
arrastrando las palabras. Las personas con epilepsia
deben estar conscientes de que los medicamentos contra
la epilepsia pueden interactuar con muchos otros medicamentos en formas potencialmente dainas. Por esta
razn, las personas con epilepsia siempre debern
decirle al mdico que los atiende cules medicamentos
estn tomando. Las mujeres tambin deben saber que
algunos medicamentos antiepilpticos pueden interferir
con la eficacia de los anticonceptivos orales y deben
hablar de esta posibilidad con su mdico.
231
Debido a que las personas se vuelven ms sensibles

a los medicamentos a medida que envejecen, es posible
que se necesite hacer un anlisis ocasional de los niveles
de los medicamentos en la sangre para ver si se necesita
ajustar las dosis. Los efectos de algunos medicamentos
en particular disminuyen con el tiempo, lo que causa un
aumento de las convulsiones si no se ajusta la dosis. Las
personas deben saber que algunas frutas ctricas, el jugo
de toronja en particular, puede interferir con la descomposicin de muchos medicamentos. Esto puede hacer
que se acumule mucho medicamento en el cuerpo, lo
que a menudo empeora los efectos secundarios.
Las personas que estn tomando medicamentos contra la epilepsia deben asegurarse de hablar con su
mdico o de buscar una segunda opinin mdica si el
medicamento no parece estar teniendo efecto o si causa
efectos secundarios inesperados.
Cuando una persona comienza a tomar un nuevo
medicamento contra la epilepsia, es importante que se
le ajuste la dosis para lograr los mejores resultados. El
cuerpo de cada persona reacciona a los medicamentos
en formas muy diferentes y, a veces, en formas impredecibles; sta es la razn de que pueda tomar cierto tiempo
encontrar el medicamento correcto y la dosis apropiada
que ofrezca un control adecuado de las crisis epilpticas
y reduzca a la vez los efectos secundarios. Un medicamento que en cierta dosis no surte efecto o que produce
muy malos efectos secundarios puede funcionar muy
bien si se cambia la dosis. Por lo general, los mdicos
recetarn al principio una dosis baja de un nuevo medicamento y vigilarn los niveles sanguneos del medicamento para determinar cundo se ha llegado a la mejor
dosis posible. Hay versiones genricas disponibles para
muchos medicamentos antiepilpticos.
Las sustancias qumicas presentes en los medicamentos genricos son exactamente las mismas que las
de los medicamentos de marca registrada, pero pueden
ser absorbidas o procesadas de forma diferente por el
cuerpo debido a la manera en que son preparadas. Por
lo tanto, los pacientes siempre debern consultar con su
mdico antes de cambiarse a una versin genrica de sus
medicamentos.
Algunos mdicos les aconsejarn a las personas con
epilepsia que suspendan sus medicamentos antiepilpticos si han pasado dos aos sin que haya habido una
convulsin. Otros mdicos consideran que es mejor
esperar de cuatro a cinco aos. La suspensin de la
medicacin siempre debe hacerse con la aprobacin y
supervisin de un mdico. Es muy importante seguir
tomando la medicacin antiepilptica por el tiempo que
el mdico disponga. Se recomienda tambin que los
pacientes pregunten con anticipacin al mdico o al far-
232
macutico qu deben hacer si se les olvida tomar una

dosis. La suspensin de la medicacin sin la aprobacin
del mdico es una de las razones principales por las que
las personas que han estado libres de crisis epilpticas
comienzan a tenerlas otra vez. Las crisis que se originan
con la suspensin repentina de los medicamentos pueden ser muy graves y causar estado de mal epilptico.
Adems, existe cierta evidencia de que las crisis incontrolables desencadenan cambios en las neuronas, lo que
hace ms difcil tratar las crisis en el futuro.
La posibilidad de que finalmente una persona pueda
suspender la medicacin vara segn su edad y el tipo de
epilepsia que tenga. Ms de la mitad de los nios que
entran en remisin con medicamentos pueden finalmente dejar de tomarlos sin tener nuevas crisis. Un estudio mostr que 68% de adultos que no haban tenido crisis durante dos aos antes de la suspensin de los
medicamentos pudieron suspenderlos sin sufrir ms
convulsiones y 75% de ellos pudieron descontinuar la
medicacin exitosamente si no haban sufrido crisis
durante tres aos. Sin embargo, las probabilidades de
suspender la medicacin exitosamente no son tan buenas para las personas con antecedentes familiares de
epilepsia, aqullas que necesitan tomar mltiples medicamentos, aqullas con crisis focales y aqullas que
siguen teniendo resultados de EEG anormales mientras
estn tomando los medicamentos.
Cuando las convulsiones no pueden ser controladas
en forma adecuada con los medicamentos, es posible
que los mdicos recomienden que se evale si debe
hacrsele ciruga a la persona. La ciruga de epilepsia la
realiza un equipo de mdicos en los centros mdicos.
Para decidir si una persona puede beneficiarse de la
ciruga, los mdicos toman en consideracin el tipo o
tipos de crisis que tiene. Tambin toman en cuenta la
regin del cerebro que est involucrada y qu tan importante es esa regin para el comportamiento diario. Los
cirujanos suelen evitar operar en reas del cerebro que
son necesarias para el habla, el lenguaje, la audicin y
otras habilidades importantes. Es posible que los mdicos realicen pruebas como la de Wada (administracin
del medicamento amobarbital en la arteria cartida)
para encontrar las reas del cerebro que controlan el
habla y la memoria. A menudo vigilan intensamente al
paciente antes de la ciruga para poder sealar la ubicacin exacta en el cerebro del lugar donde se inician las
convulsiones. Tambin pueden usar electrodos implantados dentro del crneo para registrar la actividad cerebral en la superficie del cerebro. Esto ofrece mejor
informacin que un EEG externo.
Durante una conferencia de consenso sobre la ciruga
de epilepsia, organizada en 1990 por los Institutos
(Captulo 7)
Nacionales de la Salud, se concluy que hay tres grandes categoras de epilepsia que pueden ser tratadas exitosamente con la ciruga:
a. Las crisis focales.
b. Las crisis que se inician como focales pero que
luego se propagan al resto del cerebro.
c. La epilepsia multifocal unilateral con hemipleja
infantil (como el caso de la encefalitis de Rasmussen).
Por lo general los mdicos recomiendan ciruga slo
despus de que los pacientes han tratado dos o tres diferentes medicamentos sin que stos hayan surtido efecto,
o si hay una lesin cerebral identificable (un rea
daada o disfuncional) que se cree que es la causante de
las crisis.
Un estudio publicado en el ao 2000 compar los
resultados de la ciruga con los resultados de un ao adicional de tratamiento con medicamentos antiepilpticos
en personas que llevaban largo tiempo con epilepsia del
lbulo temporal. Los resultados mostraron que 64% de
los pacientes que tuvieron ciruga dejaron de tener crisis, comparado con 8% de aqullos que slo siguieron
con la medicacin. Debido a este estudio y a otras evidencias, la Academia Americana de Neurologa (American Academy of Neurology o AAN, por sus siglas en
ingls) ahora recomienda ciruga para tratar la epilepsia
del lbulo temporal cuando los medicamentos antiepilpticos no sean eficaces. Sin embargo, el estudio y las
directrices de la AAN no dan orientacin sobre qu tan
largas o graves deberan ser las convulsiones o cuntos
medicamentos deberan ser tratados antes de que se considerara realizar la ciruga. Un estudio a nivel nacional
se encuentra ahora en marcha para determinar con qu
prontitud se debe realizar la ciruga de la epilepsia del
lbulo temporal.
Si se considera que la persona es una buena candidata
para la ciruga y tiene convulsiones que no pueden ser
controladas con los medicamentos disponibles, los
expertos por lo general estn de acuerdo en que debe
realizarse la ciruga lo ms pronto posible. Puede ser
difcil para una persona que ha tenido convulsiones
durante aos readaptarse por completo a una vida sin
convulsiones si la ciruga tiene xito. Es posible que la
persona nunca haya tenido la oportunidad de desarrollar
un grado de independencia y puede haber tenido dificultades en la escuela o el trabajo que se habran podido
evitar con un tratamiento temprano. La ciruga siempre
deber hacerse contando con el apoyo de especialistas
de rehabilitacin y consejeros que puedan ayudarle a la
persona a manejar las numerosas situaciones psicolgicas, sociales y laborales.

Aunque la ciruga puede reducir significativamente
o hasta detener las crisis en ciertas personas, es importante recordar que cualquier clase de ciruga conlleva
cierto riesgo (por lo general pequeo). La ciruga de epilepsia no siempre es eficaz para reducir las crisis y
puede causar cambios cognoscitivos o en la personalidad aun en personas que son excelentes candidatas para
la ciruga. Los pacientes siempre deberan preguntarle
al cirujano sobre su experiencia, su ndice de xito y de
las complicaciones del procedimiento que estn considerando hacerse.
Aun cuando la ciruga detenga por completo las crisis
epilpticas de la persona, es importante que se sigan
tomando los medicamentos durante cierto tiempo para
darle tiempo al cerebro de readaptarse. Los mdicos
suelen recomendar que se sigan tomando los medicamentos durante dos aos despus de una ciruga exitosa,
para evitar la ocurrencia de nuevas crisis.
En los casos en donde las convulsiones son causadas
por tumores cerebrales, hidrocefalia u otras condiciones
que pueden ser tratadas con ciruga, los mdicos pueden
operar para tratar estas condiciones subyacentes. En
muchos casos, una vez que la condicin subyacente ha
sido tratada con xito, tambin desaparecen las crisis de
la persona.
El tipo ms comn de ciruga de epilepsia es la extirpacin del lugar de origen de la crisis o pequea rea del
cerebro donde se originan las crisis. Este tipo de ciruga,
que los mdicos pueden llamar lobectoma o lesionectoma, slo es apropiado para las crisis focales que se originan en una sola rea del cerebro. Por lo general, las
personas tienen una mejor posibilidad de quedar libres
de crisis despus de la ciruga si el lugar de origen de la
crisis es pequeo y bien definido. Las lobectomas tienen 55 y 70% de xito cuando el tipo de epilepsia y el
lugar de origen de la convulsin estn bien definidos. El
tipo ms comn de lobectoma es la reseccin del lbulo
temporal, la cual se realiza en personas con epilepsia del
lbulo temporal. La reseccin del lbulo temporal
causa una reduccin significativa o un cese completo de
las convulsiones entre 70 y 90% de las veces (cuadro
712).
Transeccin subpial mltiple

Cuando las convulsiones se originan en partes del cerebro que no pueden ser extirpadas, los cirujanos suelen
realizar un procedimiento llamado transeccin subpial
mltiple. Durante este tipo de operacin, la cual se ha
realizado comnmente desde 1989, los cirujanos hacen
una serie de cortes diseados para evitar que las convul-
233
Cuadro 712. Diagnstico etiolgico

de la epilepsia
Neonatos
Hipoxia e isquemia pernital
Infeccin
Traumatismo
Hipoglucemia, hipocalcemia, hipomagnesemia
Dficit de piridoxina
Malformaciones congnitas
Trastornos genticos
Infancia (hasta 12 aos)
Crisis febriles
Infecciones
Idiomticas
Adolescencia
Idiomticas
Traumatismos
Alcohol
18 a 35 aos de edad
Traumatismo
Alcoholismo
Tumor cerebral
35 a 50 aos de edad
Tumor cerebral
Accidente vascular cerebral
Uremia, hepatopata, hipoglucemia, alteraciones electrolticas
Alcoholismo
> 50 aos de edad
Accidente vascular cerebral (como secuela)
siones se propaguen a otras partes del cerebro, a la vez

que se dejan intactas las capacidades normales de la persona. Cerca de 70% de los pacientes sometidos a la
transeccin subpial mltiple tienen una mejora satisfactoria en el control de las convulsiones.
La callosotoma o corte de la red de conexiones neuronales entre las mitades derecha e izquierda, o hemisferios, del cerebro se hace sobre todo en nios con crisis
graves que se inician en una mitad del cerebro y se propagan hacia la otra. La callosotoma puede eliminar las
crisis de cada y otras crisis generalizadas. Sin embargo,
el procedimiento no detiene las crisis en el lugar del
cerebro donde se originan y estas crisis focales pueden
hasta aumentar despus de la ciruga.
La hemisferectoma y la hemisferotoma retiran la
mitad de la corteza cerebral o la capa exterior. Son utilizadas predominantemente en nios que tienen crisis que
no responden a los medicamentos debido a un dao en
slo la mitad del cerebro, como ocurre en condiciones
mdicas como la encefalitis de Rasmussen, el sndrome
de SturgeWeber y la hemimegencefalia. Aunque este
234
tipo de ciruga es muy radical y se realiza slo como

ltima opcin, con frecuencia los nios se recobran muy
bien de este procedimiento y sus crisis suelen ceder del
todo. Con una rehabilitacin intensa recuperan a menudo casi todas las habilidades normales. Debido a que
la posibilidad de una completa recuperacin es mejor en
nios ms pequeos, la hemisferectoma debera ser
realizada lo antes posible. En muy contadas ocasiones
se realiza en nios mayores de 13 aos de edad.
El estimulador del nervio vago fue aprobado en 1997
por la Administracin de Drogas y Alimentos de EUA
(FDA, por sus siglas en ingls) para su uso en personas
con crisis que no son bien controladas por los medicamentos. El estimulador del nervio vago es un dispositivo que funciona con pilas y se implanta quirrgicamente bajo la piel del pecho, muy parecido a un
marcapasos, y se conecta con el nervio vago en la parte
baja del cuello. Este dispositivo enva descargas de
energa elctrica al cerebro por la va del nervio vago.
Esta estimulacin reduce las convulsiones entre 20 y
40% en promedio. Por lo general los pacientes no pueden dejar de tomar los medicamentos antiepilpticos
por tener el estimulador, pero experimentan a menudo
menos crisis y podran ser capaces de reducir las dosis
de sus medicamentos. Los efectos secundarios del estimulador del nervio vago suelen ser leves, pero pueden
incluir ronquera, dolor de odo, dolor de garganta y nuseas. Ajustar la cantidad de estimulacin utilizada
podra eliminar la mayora de los efectos secundarios,
aunque tpicamente persiste la ronquera. Las pilas del
estimulador del nervio vago deben ser reemplazadas
una vez cada cinco aos; esto requiere una ciruga
menor que suele realizarse en forma ambulatoria.
Varios dispositivos nuevos para el tratamiento contra
la epilepsia podran estar disponibles en el futuro. Los
investigadores estn estudiando si la estimulacin magntica transcraneal (EMT), un procedimiento que utiliza un poderoso campo magntico (imn) en la parte
externa de la cabeza para influir en la actividad cerebral,
podra reducir las crisis.
Tambin tienen la esperanza de crear dispositivos
que puedan implantarse para administrar medicamentos a partes especficas del cerebro.
Dieta
Los estudios han mostrado que en algunos casos los
nios pueden experimentar menos convulsiones si siguen una estricta dieta rica en grasas y baja en carbohidratos. Esta inusual dieta, llamada dieta cetognica,
hace que el cuerpo descomponga grasas en vez de car-
(Captulo 7)
bohidratos, para sobrevivir. Esta condicin se llama

cetosis. En un estudio realizado a 150 nios, cuyas convulsiones no eran bien controladas por los medicamentos, se encontr que cerca de 25% de los nios tuvieron
una disminucin de 90% de las crisis, o ms, al seguir
una dieta cetognica, y cerca de la mitad del grupo tuvo
una disminucin de las crisis de 50% o ms. Adems,
algunos nios pueden suspender la dieta cetognica
despus de varios aos y seguir libres de crisis. La dieta
cetognica no es fcil de mantener porque requiere el
seguimiento estricto de una dieta que incluye una gama
inusual y limitada de alimentos. Los posibles efectos
secundarios incluyen retardo del crecimiento debido a
la carencia nutritiva y acumulacin de cido rico en la
sangre, lo que podra causar clculos renales. Las personas que tratan la dieta cetognica deberan buscar la
orientacin de un dietista para asegurar que sta no las
conduzca a una carencia nutritiva grave.
Los investigadores no estn seguros de la manera en
que la dieta cetognica inhibe las convulsiones. Un
estudio mostr que un residuo de la cetosis llamado
betahidroxibutirato (BHB) inhibe las convulsiones en
animales. Si el BHB tambin funciona en los seres
humanos, los investigadores podran finalmente elaborar medicamentos que imiten los efectos inhibidores de
las convulsiones provocados por la dieta cetognica.
La bioautorregulacin es otra estrategia de tratamiento mediante la cual las personas aprenden a controlar sus propias ondas cerebrales y podra ser til para
controlar las crisis. Sin embargo, este tipo de terapia es
controversial y la mayora de los estudios han mostrado
resultados desalentadores.
Tomar grandes cantidades de vitaminas no suele ser
bueno para las crisis de una persona y podra hasta ser
daino en algunos casos. Pero seguir una buena dieta y
tomar algunos suplementos vitamnicos, en especial
cido flico, puede ayudar a reducir algunos defectos
del nacimiento y carencias nutritivas causadas por el
uso de los medicamentos. El uso de suplementos no
vitamnicos, como la melatonina, es controversial y
puede ser riesgoso. Un estudio mostr que la melatonina puede reducir las crisis en algunos nios, mientras
que otro encontr que el riesgo de crisis aumenta perceptiblemente con la melatonina. La mayora de los
suplementos no vitamnicos, como aqullos encontrados en las tiendas de alimentos naturistas, no estn regulados por la FDA, razn por la que sus efectos reales y
sus interacciones con otros medicamentos son desconocidos en gran medida.
Una investigacin desarrollada en el Centro de
Investigacin Prncipe Felipe (CIPF) en el ao 2007, en
Espaa, demostr en animales de experimentacin que

las interneuronas GABArgicas obtenidas de la diferenciacin de clulas madre fetales son eficaces para tratar
la epilepsia causada por las alteraciones del sistema
GABArgico del cerebro, segn inform la Generalitat
en un comunicado. Con este trabajo, los investigadores
han confirmado la extraordinaria capacidad de migracin de los precursores neuronales cuando son trasplantados en un cerebro normal de ratn, lo que supone
por s mismo una gran ventaja a la hora de tratar grandes reas del cerebro. Sin embargo, segn destac la
Generalitat, an ms importante es la demostracin de
que los precursores implantados se diferencian a interneuronas maduras y son plenamente funcionales, llegando a modificar de forma local y especfica la actividad inhibitoria cortical. Las caractersticas demostradas
por estos precursores neuronales los convierten en
ideales para su uso en terapia celular contra la epilepsia, ya que podran corregir las alteraciones del sistema
GABArgico, una de sus principales causas, y paliar las
crisis epilpticas incrementando selectivamente la inhibicin local.
Este trabajo cientfico, desarrollado por el Laboratorio de Regeneracin Celular del Centro de Investigacin Prncipe Felipe, que dirige el doctor Manuel lvarez Dolado, se public en la revista de la Sociedad
Americana de Neurociencia. De reciente creacin, el
Laboratorio de Regeneracin Celular es uno de los 10
grupos de investigacin que integran actualmente el
rea de Medicina Regenerativa del Centro de Investigacin Prncipe Felipe. La Consellera de Sanidad, en
colaboracin con el Instituto Carlos III de Madrid,
financia el programa de Medicina Regenerativa del
CIPF, con un presupuesto que asciende a 18 millones de
euros para el periodo 2005 a 2008.
Actualmente el Laboratorio de Regeneracin Celular realiza trasplantes de precursores neuronales en
diversos modelos animales de epilepsia para tratar de
paliar esta grave dolencia que afecta a cerca de 0.7% de
la poblacin.
El Conseller de Sanidad, Rafael Blasco, afirm tras
esta investigacin que la sanidad pblica valenciana
apuesta por investigar nuevos tratamientos que contribuyan a mejorar la calidad de vida del paciente y destac los grandes logros cientficos publicados por la
investigacin valenciana en los ltimos tiempos como
resultado del apoyo del Consell a los diferentes centros
de investigacin que hay repartidos en la Comunitat
Valenciana.
En este sentido apunt: los 200 millones de euros
que la Consellera de Sanidad prev invertir hasta 2010
dentro del Plan Estratgico de Investigacin Sanitaria y
Biomdica.
235
TERAPIA CELULAR EN EL AUTISMO
El autismo (llamado en ocasiones autismo clsico) es

la enfermedad ms comn del grupo de trastornos del
desarrollo conocido como trastornos del espectro
autista. El autismo se caracteriza por una escasa interaccin social, problemas en la comunicacin verbal y no
verbal, actividades e intereses gravemente limitados,
inusuales y repetitivos. Otros trastornos del espectro
autista incluyen el sndrome de Asperger, el sndrome
de Rett, el trastorno desintegrativo infantil y el trastorno
general del desarrollo no especificado o atpico. Los
expertos estiman que de 3 a 6 de cada 1 000 nios padecern de autismo. Los varones tienen cuatro veces ms
probabilidad de padecerlo que las mujeres.
Existen tres comportamientos distintivos que caracterizan al autismo. Los nios autistas tienen dificultades
para interactuar socialmente, padecen de problemas de
comunicacin verbal y no verbal, y muestran comportamientos reiterativos o intereses limitados u obsesivos.
Estos comportamientos pueden variar en cuanto a su
impacto, es decir, desde un trastorno leve hasta uno que
puede llegar a ser discapacitante. El rasgo distintivo del
autismo es una escasa interaccin social. Con frecuencia son los padres los primeros en advertir sntomas de
autismo en sus hijos. Desde etapas tan precoces como
la lactancia, un beb con autismo puede no responder a
la presencia de otras personas o concentrarse slo en un
objeto, excluyendo a otros, por largos periodos de
tiempo. Un nio autista puede en apariencia tener un
desarrollo normal y luego replegarse y volverse indiferente al contacto social.
Los menores con autismo pueden ser incapaces de
responder a su nombre y a menudo evitan sostener la
mirada de las otras personas. Asimismo, tienen dificultades para interpretar lo que los dems estn pensando
o sintiendo, ya que no logran comprender los cdigos
sociales, como un tono de voz o expresiones faciales, y
no observan los rostros de otra gente para obtener pistas
sobre cul debera ser el comportamiento adecuado.
Ellos carecen de empata.
Muchos nios con autismo efectan movimientos
repetitivos como mecerse o retorcerse, o caen en conductas autodestructivas como morderse o golpearse la
cabeza. Tambin tienden a empezar a hablar ms tarde
que otros nios y pueden referirse a s mismos por su
nombre en vez de yo. Los menores autistas no saben
jugar en forma interactiva con otros nios. Algunos
hablan como si estuvieran cantando y lo hacen en torno
a una gama muy limitada de temas favoritos, prestando
236
poca atencin a los intereses de la persona a la cual le

estn hablando.
Muchos nios con autismo tienen una baja sensibilidad al dolor, pero son anormalmente sensibles al ruido,
al tacto o a algn otro estmulo sensorial. Estas reacciones inusuales pueden contribuir a sntomas conductuales como la resistencia a ser acunados o abrazados.
Los nios autistas presentan mayor riesgo de padecer
de ciertas enfermedades coexistentes como el sndrome
de cromosoma X frgil (el cual provoca retraso mental),
esclerosis tuberosa (en la cual crecen tumores en el cerebro), convulsiones epilpticas, el sndrome de Tourette,
discapacidades de aprendizaje y trastorno de dficit de
atencin. Por razones que an no estn claras, entre 20
y 30% de los menores autistas desarrollan epilepsia al
llegar a adultos. Si bien algunas personas con esquizofrenia pueden mostrar una conducta de tipo autista, sus
sntomas no suelen aparecer hasta cerca de los 20 aos
de edad o en la etapa de adultos jvenes. La mayora de
la gente con esquizofrenia tambin tiene alucinaciones
y delirios, pero stos no se encuentran en el autista.
El autismo se clasifica como uno de los desrdenes
extendidos del desarrollo. Algunos mdicos tambin
usan trminos como perturbado emocionalmente
para describir a las personas con autismo. Porque el
autismo vara mucho en su severidad y sntomas puede
ser no reconocido en especial en individuos poco afectados o en aqullos con impedimentos mltiples. Los
investigadores y terapeutas han desarrollado varios
conjuntos de criterios para el diagnstico del autismo y
algunos de los usados con frecuencia incluyen:
S Juego imaginativo y social ausente o limitado.
S Habilidad limitada para hacer amistad con sus
iguales.
S Habilidad limitada para iniciar o mantener una
conversacin con los dems.
S Uso de lenguaje estereotipado, repetitivo o no
habitual.
S Patrones de intereses restringidos que son anormales en intensidad y foco.
S Aparente inflexibilidad y apego a rutinas especficas o rituales.
S Preocupacin por las partes de los objetos.
Los nios con algunos de los sntomas de autismo, pero
no con los suficientes como para ser diagnosticados con
la forma clsica del desorden, son a menudo diagnosticados con el desorden extendido del desarrollo no especfico (PDDNOS, del ingls pervasive developmental
disorder not otherwise specified). El trmino sndrome de Asperger se usa algunas veces para describir
(Captulo 7)
a personas con comportamiento autista pero con buen

desarrollo de las destrezas del lenguaje. Los nios que
parecen normales en sus primeros aos y que luego pierden destrezas y comienzan a mostrar un comportamiento autista suelen ser diagnosticados con el desorden
desintegrativo de la niez (CDD, del ingls childhood
disintegrative disorder). Las nias con el sndrome de
Rett, un desorden gentico ligado al sexo caracterizado
por un desarrollo inadecuado del cerebro, convulsiones
y otros problemas neurolgicos, tambin pueden mostrar
un comportamiento autista. A veces a PDDNOS, el sndrome de Asperger, CDD y el sndrome de Rett se les
llama el espectro de desrdenes del autismo.
Ya que los problemas de audicin pueden ser confundidos con autismo, a los nios con desarrollo tardo del
habla debe examinrseles la audicin. Algunas veces
los nios tienen dificultades de audicin adems de
autismo. Cerca de la mitad de las personas con autismo
tienen una puntuacin inferior a 50 en exmenes de IQ,
20% tienen una puntuacin entre 50 y 70, y 30% tienen
una puntuacin superior a 70. Sin embargo, estimar el
IQ en nios pequeos con autismo es a menudo difcil,
porque los problemas de lenguaje y comportamiento
interfieren con el examen. Un porcentaje pequeo de las
personas con autismo son savants, personas que tienen
destrezas limitadas pero extraordinarias en reas como
la msica, las matemticas, el dibujo y la visualizacin.
Los cientficos no estn seguros sobre la causa del
autismo, pero es probable que tanto la gentica como el
entorno desempeen un papel en ello. Los investigadores han identificado diversos genes asociados con este
trastorno. Estudios sobre personas con autismo han
encontrado irregularidades en varias regiones del cerebro. Otros estudios sugieren que la gente con autismo
tiene niveles anormales de serotonina o de algn otro
neurotransmisor en el cerebro. Estas anormalidades
sugieren que el autismo podra resultar de la interrupcin del desarrollo normal del cerebro en una etapa temprana del desarrollo fetal, causado por defectos en los
genes que controlan el crecimiento del cerebro y que
regulan el modo en que las neuronas se comunican entre
ellas. Si bien estos hallazgos son prometedores, slo son
preliminares y requieren estudios adicionales. La teora
de que la conducta de los padres es responsable del
autismo ha sido refutada.
Estudios recientes sugieren enfticamente que algunas personas tienen una predisposicin gentica al
autismo. En familias con un nio autista, el riesgo de
tener un segundo nio con el mismo trastorno es de
cerca de 5% o de 1 en 20. Este porcentaje es ms elevado
que el riesgo que corre la poblacin en general. Los
investigadores estn buscando pistas acerca de qu

genes contribuyen a este aumento en la susceptibilidad.
En algunos casos los padres y otros parientes de un nio
autista muestran alteraciones leves en sus destrezas
sociales y de la comunicacin, o caen en conductas
repetitivas.
La evidencia tambin sugiere que algunos trastornos
emocionales, como la enfermedad bipolar, ocurren con
ms frecuencia que el promedio en las familias de personas con autismo.
Para muchos nios, los sntomas del autismo mejoran con un tratamiento y la edad. Algunos menores
autistas crecen y logran llevar vidas normales o casi normales. Aquellos nios cuyas destrezas del lenguaje
sufren una regresin a temprana edad, por lo general
antes de los tres aos de edad, parecen presentar mayor
riesgo de desarrollar epilepsia o actividad cerebral similar a una convulsin.
Durante la adolescencia, algunos menores con autismo pueden deprimirse o experimentar problemas conductuales. Los padres de estos nios deberan estar preparados para ajustar el tratamiento a las necesidades del
menor.
No existe cura para el autismo. Las terapias e intervenciones conductuales estn diseadas para remediar
sntomas especficos y pueden otorgar una mejora sustantiva.
El plan ideal de tratamiento coordina terapias e intervenciones que tienen como blanco los principales sntomas del autismo: problemas de interaccin social y
comunicacin verbal y no verbal, y rutinas e intereses
obsesivos o repetitivos. La mayora de los profesionales
concuerdan en que cuanto ms temprana la intervencin, mejor.
Los terapeutas utilizan sesiones de intenso entrenamiento para el desarrollo de destrezas altamente estructuradas, con el fin de ayudar a los nios a desarrollar
destrezas sociales y de lenguaje. La orientacin familiar
para los padres y hermanos de los nios autistas con frecuencia ayuda a las familias a enfrentar los particulares
desafos de vivir con un nio autista.
Medicamentos
Los mdicos a menudo recetan un medicamento antidepresivo para controlar sntomas de ansiedad, depresin o
algn trastorno obsesivocompulsivo. Se emplean medicamentos antipsicticos para tratar problemas conductuales graves. Las convulsiones pueden ser tratadas con
uno o ms de los frmacos anticonvulsivos. Estimulantes
como los usados para nios con trastorno de dficit atencional se empleen a veces de manera efectiva para ayudar
a disminuir la impulsividad y la hiperactividad.
237
Otras terapias
Existe un cierto nmero de terapias controvertidas o intervenciones a disposicin de los menores autistas, pero
pocas, si acaso, estn respaldadas por estudios cientficos. Los padres deberan actuar con cautela antes de
adoptar cualquiera de estos tratamientos.
En EUA, el Instituto Nacional de Trastornos Neurolgicos y Accidentes Cerebrovasculares (NINDS) es
una de las principales instituciones que apoyan las
investigaciones biomdicas del gobierno federal de ese
pas sobre trastornos del cerebro y del sistema nervioso.
NINDS efecta investigaciones en sus laboratorios en
los Institutos Nacionales de la Salud (NIH) en Bethesda,
Maryland, y tambin otorga fondos para apoyar la
investigacin en las universidades y otros recintos.
Como parte de la Ley de Salud Infantil de 2000,
NINDS y tres entidades hermanas formaron el Comit
de Coordinacin del Autismo del NIH para ampliar,
intensificar y coordinar las investigaciones sobre
autismo del NIH. Ocho centros dedicados a la investigacin en ese pas han sido establecidos como Centros de
Excelencia en la Investigacin sobre Autismo para
reunir a investigadores con los recursos que necesitan.
Los centros estn llevando a cabo investigaciones bsicas y clnicas, incluyendo estudios sobre causas, diagnstico, deteccin precoz, prevencin y tratamiento,
como las que se destacan a continuacin:
S Los investigadores estn empleando modelos en
animales para estudiar cmo el neurotransmisor
serotonina establece las conexiones entre las neuronas, con la esperanza de descubrir por qu estas
conexiones estn alteradas en los autistas.
S Los investigadores estn probando un programa
asistido por computadora que ayudara a los nios
autistas a interpretar las expresiones faciales.
S Un estudio con tcnicas de imgenes est investigando qu reas del cerebro se activan durante
conductas obsesivas/repetitivas en adultos y nios
muy pequeos con autismo.
S Otros estudios que utilizan tcnicas de imgenes
cerebrales estn buscando anormalidades cerebrales que pudiesen causar una alteracin de la comunicacin social en menores autistas.
Los estudios clnicos estn evaluando la efectividad de
un programa que combina la capacitacin de los padres
y el uso de medicamentos para reducir la conducta
infantil alterada por el autismo y por otros trastornos de
espectro autista.
238
Lista de tratamientos actuales

para el autismo
Aminocidos cerebrales.
Anlisis de laboratorio.
Antgenos.
Baos de sales de Epson (para problemas de sulfatos).
5. Burroterapia.
6. Colostrum dosis.
7. Comunicacin facilitada.
8. Delfinoterapia.
9. Dieta de Feingold, eliminando azcares, edulcorantes, salicilatos, etc.
10. Dieta sin glutencasena o dietas en general (tratamientos nutricionales).
11. DMG y TMG (dimeltilglicina).
12. Eliminacin de toxinas residuales en amgdalas y
dentaduras.
13. Enfoque neurocognoscitivo.
14. Entrenamiento escucha (mtodo de Tomatis).
15. Entrenamiento de patrones de movimiento (mtodo de DomanDelacato).
16. Entrenamiento del procesamiento auditivo.
17. Entrenamiento neuromotor (gimnasio).
18. Entrenamiento vestibulocerebeloso.
19. Entrenamiento visual optomtrico.
20. Enzimoterapia.
21. Equinoterapia.
22. Factores de crecimiento neuronal y fibroblstico.
23. Homeopata.
24. Intervenciones basadas en el desarrollo y las diferencias individuales (modelo DIR).
25. Inyecciones de clulas de cerebro de feto de cerdo
o de ternera.
26. Inyecciones de vitamina B12.
27. Ionizacin (el mtodo de la seora Ana Mosquera).
28. Macrobiticos.
29. Medicacin psicoactiva.
30. Megavitaminas.
31. Mtodo Greenspan (floortime).
32. Mtodo Guntstein (RDI).
33. Mtodo Miller.
34. Mtodo Filadelfia.
35. Modificacin de conducta a travs del deporte
(mtodo de Julio Salazar).
36. Oligoelementos.
37. Oxigenadores cerebrales.
38. Perroterapia.
39. Piridoxina en altas dosis y magnesio.
1.
2.
3.
4.
(Captulo 7)
40. Programa de modificacin de conducta por

medio del deporte.
41. Programa Sonrise.
42. Programas ABA llevados a cabo por profesionales no acreditados.
43. Programas combinados de ABA con otros programas no contrastados.
44. Protocolo DAN.
45. Psicoanlisis (hiptesis madres frigorfico o
cualquier forma psicoanaltica).
46. Pulseras y otros elementos similares.
47. Quelacin (chelation therapy) o terapias que
actan sobre los niveles de mercurio.
48. Quinesiologa aplicada (osteopata craneal).
49. Reguladores de campos bioelectromagnticos.
50. Risperidona.
51. Secretina intravenosa.
52. TEACCH.
53. Teora de la mente.
54. Terapia antifngica (antimictica o antihongos).
55. Terapia cognoscitiva.
56. Terapia de colores (mtodo Irien).
57. Terapia de inmunoglobulina intravenosa.
58. Terapia de integracin auditiva (Guy Berard).
59. Terapia de integracin sensorial.
60. Terapia de ldica.
61. Terapia del tacto (touch therapy).
62. Terapia hormonal.
63. Terapia humanista.
64. Terapia inmunolgica o inmunoterapia.
65. Terapia IVIG (para problemas de autoinmunidad).
66. Terapia musical (musicoterapia).
67. Terapia ortomolecular.
68. Terapia sistmica.
69. Terapias antialrgicas.
70. Tratamientos biolgicos en general.
71. Trepanacin craneal electiva.
72. Terapia del abrazo (holding therapy).
73. Terapia celular.
TERAPIA CELULAR
EN LA ESQUIZOFRENIA
La mayora de las estructuras que participan en las funciones cerebrales cotidianas presentan patrones sinpticos atpicos, debido a problemas en el neurodesarrollo.
Complicaciones durante el embarazo y el parto, infecciones, toxinas, alteraciones hormonales y nutricin

inadecuada durante la gestacin pueden ocasionar el
padecimiento.
Anomalas de organizacin y citoarquitectura en el
sistema nervioso indican que en el sustrato anatmico
de la esquizofrenia hay conectividad neuronal anormal.
Aunque la etiologa precisa de este padecimiento se desconoce, se acepta que es un trastorno polignico cuyo
origen est relacionado con estmulos ambientales adversos como complicaciones durante la gestacin y el
parto, infecciones, toxinas, alteraciones hormonales,
nutritivas, familiares y genticas. La esquizofrenia presenta sntomas como la desorganizacin del pensamiento, alucinaciones e ideas delirantes, prdida de las
emociones placenteras (anhedonia) y motivacin anmala.
La esquizofrenia fue descrita por Emil Kraepelin
como una psicosis debida a un trastorno orgnico cerebral; sin embargo, despus de numerosos estudios de
cerebros de esquizofrnicos que no mostraban evidencia patolgica bien definida, durante la primera mitad
del siglo XX la psiquiatra postul que la esquizofrenia
era una psicosis funcional debida a factores psquicos y
ambientales.
En la segunda mitad del XX se desarrollaron medicamentos capaces de mitigar o desaparecer los sntomas
psicticos de la esquizofrenia, por lo que se reconsider
la existencia de un sustrato cerebral para las enfermedades mentales.
Las nuevas tecnologas de neuroimagen, como la
tomografa computarizada (TC), la resonancia magntica funcional (RMF), la resonancia magntica por
espectroscopia (RME), la tomografa por emisin de
positrones (PET) y la tomografa computarizada por
espectroscopia de fotn nico (SPECT), han aportado
imgenes e informacin de gran utilidad para el conocimiento de lo que ocurre en el cerebro esquizofrnico y
permitido confirmar algunos aspectos cuya existencia
se sospechaba, como la reduccin del volumen cortical
en los lbulos frontales, temporales, parietales y vermis
cerebeloso, as como la ausencia de la asimetra comn
entre los lbulos frontales y occipitales. Por medio de
estudios metablicos con RME se comprob la hipoactividad funcional de la neocorteza prefrontal dorsal.
Adems, gracias a estudios de neuroimagen y neuropatolgicos se han descrito aberraciones en estructuras
como la corteza prefrontal granular, las cortezas temporal y parietal asociativas heteromodales, la corteza del
cngulo, hipocampo, tlamo, cuerpo estriado, globo
plido y formacin reticular.
Las alteraciones citoarquitectnicas y de la densidad
neuronal pueden estar disminuidas o aumentadas en
casi todas las reas asociativas neocorticales y en las
239
estructuras alocorticales lmbicas, principalmente en el

hipocampo, lo que sugiere como factor etiolgico en la
esquizofrenia, un trastorno de migracin neuronal.
Comparaciones ms precisas entre cerebros normales y
esquizofrnicos han mostrado anomalas relacionadas
con los sntomas de la enfermedad; de esa manera, las
alucinaciones han sido relacionadas con alteraciones en
el lbulo temporal; el trastorno de pensamiento con
anomalas en el hipocampo, y los sntomas negativos
(aplanamiento de las emociones y motivacin anmala) con las alteraciones de la neocorteza prefrontal.
La evidencia visual obtenida en los estudios con RM ha
permitido relacionar los fenmenos que conciernen a la
informacin y a la atencin con el tlamo y los circuitos
neuronales de la lnea media.
En un estudio reciente se compararon las reacciones
emocionales desencadenadas por olores agradables y
desagradables en pacientes esquizofrnicos y sujetos
normales voluntarios; las imgenes de la PET y del flujo
sanguneo cerebral (CBF) mostraron que los esquizofrnicos tienen una capacidad normal para experimentar emociones desagradables, pero incapacidad para las
agradables. El estudio evidenci que en los enfermos el
flujo sanguneo cerebral estuvo disminuido en regiones
lmbicas clave para las respuestas emocionales.
El hecho de que todas estas estructuras interconectadas entre s, directa o indirectamente, estn involucradas en los mecanismos neurales de la esquizofrenia
constituye evidencia suficiente para confirmar que la
esquizofrenia obedece a un problema cerebral global.
El factor gentico es tambin importante en la patogenia
de la esquizofrenia. El programa de expresin gentica
que se inicia desde los periodos tempranos del desarrollo embrionario puede sufrir dao tanto en la direccin
migratoria neuronal como en la laminacin cortical.
Tanto el factor de crecimiento de la gla como la protena lipdica cerebral son de primordial importancia en
la gnesis de la red glial radial que permite la migracin
neuronal normal. Asimismo, la astroactina tiene a su
cargo formar el sistema de receptores necesario para la
migracin neuronal a lo largo de las fibras radiales. Esta
glucoprotena neural ha sido localizada en el ser
humano en el cromosoma 1.
En el esquizofrnico, la mayora de las estructuras
que participan en las funciones cerebrales cotidianas
(gnesis del pensamiento, respuestas afectivas, viscerales) y la motivacin para la atencin (funciones cognoscitivas) se hallan interconectadas con patrones sinpticos atpicos debido a un trastorno del neurodesarrollo,
que principalmente afecta a la neocorteza y la arquicorteza, as como a otros ncleos subcorticales. El sustrato
anatmico en la esquizofrenia es de conectividad anor-
240
mal. En la esquizofrenia, al pasar los impulsos aferentes

por las vas reticulolmbicas generan un impacto por
una conectividad aberrante en la neocorteza citoarquitectnicamente desorganizada, generando respuestas
carentes de emocin, interpretacin cognoscitiva errnea y conductas anmalas, desproporcionadas e incongruentes con la calidad de los estmulos sensoriales aferentes.
Otros factores que contribuyeron al cambio en los
conceptos prevalecientes sobre la esquizofrenia fueron
los nuevos conocimientos sobre los neurotransmisores
(principalmente dopamina y serotonina) y la neuroqumica cerebrales, los cuales hicieron posible la postulacin de la teora dopaminrgica de la esquizofrenia, que
relaciona los sntomas de la enfermedad con el aumento
de actividad de los receptores dopaminrgicos D2. Se
sabe tambin de la participacin indirecta de la serotonina, ya que existe similitud con los efectos que se
observan por la accin de la dietilamida del cido lisrgico (LSD) y por los de algunos medicamentos antipsicticos atpicos, como en el caso de la clozapina sobre
los receptores 5HT2A.
Recientemente se ha asociado al glutamato con los
sntomas de la esquizofrenia, ya que la fenciclidina, un
antagonista de los receptores NMDA induce un sndrome esquizofrenoide.
Se ha demostrado que lesiones, trasplantes y campos
magnticos activan clulas madre presentes en la zona
subventricular del cerebro. Investigaciones bsicas en
modelos animales muestran que trasplantes de clulas
al cerebro junto con la aplicacin de campos magnticos
activan clulas madre presentes en la zona subventricular.
Durante varios aos el doctor Ren Drucker, investigador del Instituto de Fisiologa Celular y actual Coordinador de la Investigacin Cientfica de la UNAM, se
ha dedicado al estudio de la enfermedad de Parkinson.
En la dcada de 1980 sus trabajos alcanzaron notoriedad
al lograr disminuir de manera muy importante la sintomatologa de pacientes con esa enfermedad a los que se
les haban trasplantado clulas de glndula suprarrenal.
Sin embargo, estos resultados fueron muy controvertidos, al igual que otras pruebas similares practicadas en
todo el mundo, pues estos procedimientos originales
generaron mucha investigacin, aunque no se ha adelantado mucho en el tratamiento de la enfermedad. En
los ltimos 10 aos ha estudiado los procesos de diferenciacin de las clulas cromafines usando como estmulo campos magnticos de muy baja frecuencia. Uno
de los objetivos de su investigacin fue encontrar una
manera ideal de acelerar su diferenciacin hacia clulas
de tipo neuronal con mtodos no invasivos que permi-
(Captulo 7)
tieran despus su trasplante al cerebro. Encontr que los

campos magnticos constituan una buena alternativa,
pues su aplicacin a clulas cromafines en cultivo
gener su diferenciacin y permite entender los mecanismos que operan en tal diferenciacin. Con base en
estos experimentos, y una vez que observ que el trasplante de estas clulas a ratas con lesin en un lado del
cerebro ocasiona que los animales giren hacia el lado
opuesto a la lesin y permite la recuperacin motora de
los animales, decidi probar si la diferenciacin de las
clulas podra realizarse directamente en el cerebro y no
en cultivo.
Con diversos experimentos comprob que esto era
posible, pero adems se top con un hallazgo inesperado. El trasplante disminuye la asimetra motora, aunque no ms all de 50 o 60%; pero lo que es notable,
apunt el doctor Drucker, es que despus de dos meses
de haberse trasplantado las clulas y de haberse diferenciado mediante campos magnticos, en las paredes de
los ventrculos laterales de ambos lados del cerebro aparecen clulas que pensamos que pudieran ser madre o
bien clulas diferenciadas que migraron hacia este
sitio. Para dilucidar esto, cultivaron estas clulas del
ventrculo en presencia de un marcador (Fluoro Gold),
las trasplantaron y encontraron que ninguna clula de la
zona subventricular contena el marcador: por lo tanto,
las clulas no podan provenir de las trasplantadas. Por
otro lado, como las clulas de la zona subventricular
dieron positivo para bromodeoxiuridina (un marcador
de mitosis que permite saber que las clulas se estn
dividiendo y diferenciando), se concluy que son las
intrnsecas de la pared subventricular y que se trata de
clulas madre. La neurognesis en el cerebro del mamfero adulto contina por lo menos en dos regiones: la
zona subventricular y la zona subgranular en el giro
dentado del hipocampo. En estas regiones la neurognesis est sujeta a una regulacin fisiolgica y puede ser
modificada por eventos farmacolgicos o patolgicos.
En este caso pareciera que el implante de las clulas cromafines y la aplicacin de campos magnticos estimul
a estas clulas madre en la zona subventricular del
ncleo caudado.
En un reciente artculo seala que cuando se interrumpe la circulacin de una arteria hacia el ncleo caudado se produce muerte celular y aparecen en el ventrculo clulas madre. Esto muestra que con cierto tipo de
estmulos muy intensos, las clulas madre de la zona
ventricular se expresan y podran buscar caminos de
migracin hacia zonas en las que se ha interrumpido
alguna funcin en particular. Lo importante de la aparicin de estas clulas madre en la zona subventricular,
concluy Drucker, es que eventualmente podran ser la

clave para sustituir a aquellas clulas que han fallecido
a travs de los aos debido a la edad o a otro tipo de
lesiones.
Una serie de experimentos con animales de varios
grupos (lesionados, lesionados y con trasplante, lesionados y estimulados con campos magnticos), es decir,
con todas las combinaciones, mostraron que cuantas
ms variables se sumaban, ms clulas de la pared subventricular se observaban, y por eso el doctor Drucker
concluy que el grupo con lesin, trasplantado y estimulado con campos magnticos, es el que muestra una
241
mayor activacin de clulas madre en ambos ventrculos. El siguiente paso es lograr la migracin de las clulas madre hacia la zona que se quiere reparar, y esto es
algo que el doctor Drucker ya ha empezado a investigar.
La SITECEM S. C. firm un acuerdo de cooperacin
con la AMAPE, A. C. (Asociacin Mexicana de Amigos de Pacientes Esquizofrnicos, A. C.) y se encuentra
construyendo una rea especial para el tratamiento con
terapia celular y clulas madre diseado especialmente
para pacientes con esquizofrenia que estar listo para el
ao 2009.
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244
(Captulo 7)
Captulo
Terapia celular en el sistema cardiovascular
INTRODUCCIN
se localizan clulas madre hematopoyticas, mesenquimales (estromales), poblacin lateral y clulas progenitoras adultas multipotentes (MAPC), las cuales pueden
transformarse en clulas madre pluripotenciales con capacidad regenerativa similar a las embrionarias. Se ha
demostrado que la potencialidad de las clulas madre
adultas es mayor de lo que se crea antes, ya que conservan su capacidad de diferenciarse en clulas de diferentes estirpes de forma muy similar a la potencialidad de
las clulas embrionarias. Esto ha creado nuevas perspectivas para el tratamiento de diferentes enfermedades
con clulas madre adultas, lo que inicialmente se pensaba que slo poda hacerse con las embrionarias. Europa
inici esta revolucin de la medicina hace ms de tres
dcadas, en EUA esta prctica tiene poco ms de una
dcada y en Mxico slo unos pocos aos. La enfermedad cardiaca isqumica y el infarto agudo del miocardio
(IAM) son enfermedades comunes y mortales. La disponibilidad limitada de corazones para el trasplante del
corazn ha obligado a buscar alternativas teraputicas
como transferencia de clulas, movilizacin de clulas
madre residentes e ingeniera de tejido fino para regenerar al corazn daado. El miocardio contiene cardiomiocitos, fibroblastos, clulas endoteliales, clulas
musculares lisas vasculares, macrfagos y matriz extracelular (MEC). Los cardiomiocitos constituyen 30%
del nmero total de clulas cardiacas, pero ocupan ms
de 70% del volumen cardiaco. Los fibroblastos se encuentran en grandes cantidades en el corazn y ocupan
gran parte de la masa cardiaca no muscular. El corazn
es capaz de una regeneracin limitada con la activacin
y reclutamiento de clulas madre residentes en el corazn adulto cuando ste sufre dao por traumatismos e
infartos. El colgeno cardiaco es sintetizado por fibro-
Actualmente las enfermedades cardiovasculares y el

cncer ocupan las dos primeras causas de muerte en
nuestro pas y en muchas otras naciones. Cabe destacar
que Mxico y Latinoamrica ocupan el segundo lugar
en obesidad en personas de ms de 18 aos de edad y el
primer lugar en nios. En este mbito se calcula que ms
de 7 millones de mexicanos padecen diabetes mellitus,
pero slo 30% han podido ser diagnosticados; 3 de cada
10 mexicanos adultos padecen hipertensin arterial sistmica y slo la mitad saben que la padecen.
El incremento de enfermedades crnicas y degenerativas impactan con gran mpetu la salud pblica en el
mbito mundial. Un ejemplo de esta escalada es el sndrome metablico, cuya definicin ha permitido a los
expertos considerarlo como uno de los factores de
riesgo para la morbilidad y mortalidad en las poblaciones del siglo XXI. Este sndrome es en parte responsable del gran incremento de muertes que ocurren a causa
de lesiones en el corazn, vasos sanguneos as como la
proliferacin de pacientes con cncer y otros padecimientos crnicosdegenerativos, en los que adicionalmente se incluyen las alteraciones del sistema inmunitario y procesos relacionados con el envejecimiento de las
poblaciones.
En aos recientes surgi una nueva gran rea de la
medicina llamada medicina regenerativa, basada en la
aplicacin de clulas madre, las cuales pueden convertirse en cualquier tipo de clulas del cuerpo humano.
Las clulas madre se clasifican en embrionarias y adultas, y se obtienen sobre todo de la mdula sea, donde
245
246

70
60
50
40
30
20
10
0
Clulas cardiacas
Fibroblastos
Cardiomiocitos
Otras
Figura 81. Clulas miocrdicas. Los fibroblastos son las

clulas ms numerosas con una relacin de 2:1 con respecto a los cardiomiocitos, aunque stos ocupan ms de
70% del volumen cardiaco.
blastos y clulas musculares lisas vasculares en respuesta a la tensin de estiramiento, isquemia y estrs
oxidativo. El colgeno tipo I ocupa 85%, mientras que
el tipo III ocupa 11%. Durante la cardiomiopata isqumica se produce una alteracin en el nivel del colgeno
tipo I, el cual disminuye de 80 a 40%, y tambin del colgeno tipo III, que se incrementa de 10 a 35%. Estos
cambios contribuyen a la remodelacin ventricular, a la
dilatacin sistlica y a la disfuncin diastlica. Se ha
demostrado que el uso combinado de terapia celular
mediante la inyeccin intramiocrdica o intravenosa de
clulas madre, y de ingeniera de tejidos por medio de
una matriz de colgeno de tipo I y III embebida con el
mismo tipo de clulas, aumenta la fraccin de eyeccin
y reduce la remodelacin ventricular en el infarto de
miocardio. La aplicacin de la medicina regenerativa en
pacientes con enfermedades cardiovasculares ha sido
objeto de numerosas investigaciones en los ltimos aos
en procesos agudos como el infarto del miocardio, crnicos como la cardiopata isqumica o ambas situaciones.
Para la terapia celular se han utilizado diferentes
fuentes de clulas. Los primeros intentos se iniciaron en
el laboratorio con clulas madre embrionarias, despus
se comenzaron a inyectar miocitos autlogos, obtenidos
del msculo esqueltico y cultivados antes de su inyeccin. Ms recientemente surgi como una nueva estrella la ya bien conocida clula madre mesenquimtica
adulta de la mdula sea. Es evidente que las clulas
madre de la mdula sea tienen la capacidad de diferenciarse en cardiomiocitos. El mecanismo por lo que esto
ocurre no est an bien dilucidado; se plantea que se
debe a la plasticidad de estas clulas cuando son inyectadas directamente en el rea isqumica durante una
ciruga de derivacin o bien por va intracoronaria, por
va transendocrdica o por va sistmica intravenosa.
En la literatura mundial se han comunicado varios estudios al respecto, pero la mayora abarcan un escaso nmero de pacientes, pocos tienen grupo control y son es-
(Captulo 8)
tudios no aleatorizados. En ellos se ha demostrado la

factibilidad, eficiencia e inocuidad del proceder. Sin
embargo, an hay diferentes interrogantes sobre este
proceder.
Los pacientes con angina refractaria y antecedentes
de isquemia del miocardio o infarto, cuando ya no pueden ser tratados con terapias convencionales como angioplastias coronarias y colocacin de prtesis endovasculares, con fraccin de eyeccin de 37.5% despus
de recibir la terapia celular con clulas madre humanas,
pueden mejorar en meses su fraccin de eyeccin, que
queda en 47%, y disminuyendo los requerimientos de
medicamentos y la sintomatologa. Los pacientes con
insuficiencia cardiaca con clase funcional III y fraccin
de eyeccin basal de 30% mejoran despus de 5 a 15 sesiones de terapia celular con clulas madre humanas.
Todos los pacientes mejorarn a una clase funcional II.
Los estudios de SPECT Sestamibi Tc99m a los seis meses de seguimiento muestran mejora por incremento de
la vascularizacin y viabilidad del miocardio (figura
81).
APARATO CIRCULATORIO
El sistema circulatorio sanguneo es el principal medio

de transporte de oxgeno, dixido de carbono, nutrientes y productos de degradacin metablicos, clulas de
sistema inmunitario, hormonas y regulacin de la temperatura corporal, etc. Comprende el sistema arterial,
capilares y venas; este recorrido tiene su punto de partida y finaliza en el corazn. La aorta se divide en ramas
principales que a su vez se ramifican en otras ms pequeas que garantizan que el organismo reciba la sangre
a travs de un proceso complicado de mltiples derivaciones. Las arterias menores se dividen en una fina red
de vasos ms pequeos llamados capilares, que tienen
paredes muy delgadas. As, la sangre entra en estrecho
contacto con los lquidos y los tejidos del organismo
(figura 82).
En los vasos capilares la sangre desempea tres funciones:
a. Libera el oxgeno hacia los tejidos.
b. Proporciona a las clulas del organismo nutrientes
y otras sustancias esenciales que transporta.
c. Capta los productos de desecho de los tejidos.
Despus los capilares se unen para formar venas pequeas. A su vez, las venas se unen para formar venas ma-

yores, hasta que, por ltimo, la sangre se rene en la
vena cava superior e inferior y confluye en el corazn
completando el circuito. La circulacin coronaria irriga
al propio corazn aportando nutrientes y oxgeno y retirando los productos de degradacin. En la parte superior
de las vlvulas semilunares nacen de la aorta dos arterias coronarias; despus stas se dividen en una complicada red capilar en el tejido muscular cardiaco y las vlvulas. La sangre procedente de la circulacin capilar
coronaria se rene en diversas venas pequeas, que despus desembocan directamente en la aurcula derecha
sin pasar por la vena cava. Existen dos grandes sistemas
circulatorios: el sanguneo y el linftico. El sistema circulatorio a su vez se divide en otros tres sistemas circulatorios sanguneos:
Corazn
Msculo
Mioblastos
Mdula sea
Cardiomiocitos
Miognesis
Clulas madre
mesenquimales
Vasos sanguneos sistmicos

Las arterias y las venas son conductos musculares elsticos que distribuyen y recogen la sangre de todos los
rincones del cuerpo; estn compuestas por tres capas:
1. ntima: formada por una capa interna de clulas
epiteliales planas muy especializadas y multifuncionales que se denomina endotelio, el cual que
descansa sobre una lmina basal y debajo del cual
hay una delgada capa de tejido fibrocolagenoso de
sostn.
2. Media: forma la capa intermedia de los vasos sanguneos y est constituida por msculo liso reforzado por capas organizadas de tejido elstico que
conforman las lminas elsticas interna y externa;
es particularmente prominente en las arterias,
siendo indistinta en las venas y virtualmente
inexistente en los vasos muy pequeos.
3. Adventicia: capa externa compuesta principalmente por colgeno y que tambin contiene clulas musculares lisas, sobre todo en las venas. En la
adventicia de los vasos existe una red llamada
vasa vasorum que enva ramas penetrantes a la media para su irrigacin; tambin posee inervacin
autnoma para la musculatura lisa de la media.
Son vasos gruesos y elsticos que transportan la sangre

a los rganos del cuerpo. La sangre circula a presin
debido a la elasticidad de las paredes. Comienzan con
la aorta y el tronco pulmonar que empiezan desde los
ventrculos y de stos nacen ramificaciones sucesivas
de dimetro cada vez menor. Su pared arterial es fuerte,
constituida por msculo liso y componentes elsticos.
Se dividen en:
Clulas
mononucleares
Clulas progenitoras
endoteliales
3. Sistemas porta: estos sistemas comienzan y terminan en capilares. Son conductos vasculares especializados que transportan sustancias de un lugar a otro, pero no dependen del corazn. El
sistema porta ms grande es el del sistema porta
heptico: del intestino y el hgado.
ARTERIAS
Clulas madre
hematopoyticas
Sangre
1. Circulacin sistmica: transfiere sangre oxigenada desde el corazn (bomba central) a todos los tejidos corporales por medio del sistema arterial sistmico, y devuelve la sangre con elevado contenido
de dixido de carbono de los tejidos hacia la bomba
central por medio del sistema venoso sistmico.
2. Circulacin pulmonar: en su recorrido a travs
de los pulmones, la sangre se oxigena (saturada de
oxgeno). Despus regresa al corazn por medio
de las cuatro venas pulmonares que desembocan
en la aurcula izquierda.
247
Angiognesis
Figura 82. Equilibrio entre la angiognesis y la biognesis

en la regeneracin cardiovascular.
1. Arterias elsticas (de conduccin): se caracterizan por ser las ms grandes (mayores de 1 cm de
dimetro) y reciben la principal salida del flujo
sanguneo del ventrculo izquierdo; estn sometidas a presiones de entre 120 y 160 mmHg, ya que
248
estn capacitadas para la amortiguar estas elevadas presiones. Las fibras elsticas se disponen de
manera circunferencial ms que longitudinal para
contrarrestar la distensin. Entre estas arterias estn la aorta y sus ramas principales, como las cartidas, las arterias coronarias y las pulmonares.
2. Arterias musculares (de distribucin): se forman
por lo general en su gruesa capa media por musculatura lisa; se controla su relajacin y contraccin
por medio del sistema nervioso autnomo y sustancias vasoactivas. Varan en forma y tamao
desde 1 cm de dimetro hasta 0.1 mm y suelen disponerse de manera circular en ngulo recto en
relacin al eje mayor del vaso. Estas arterias regulan el flujo sanguneo en los rganos y tejidos. Las
clulas musculares de la capa media se encuentran
de manera permanente en un estado parcial de
contraccin denominado tono.
SISTEMA MICROVASCULAR
En este sistema, sobre todo en los capilares, tiene lugar

el intercambio de oxgeno, dixido de carbono, agua,
sales, nutrientes y metabolitos. Las arteriolas regulan el
flujo de sangre hacia el dominio del capilar, poseen una
pared muscular gruesa y son las principales responsables de la resistencia al flujo sanguneo; disminuyen la
presin del flujo arterial hasta alcanzar un nivel bajo a
fin de proteger la pared arterial y se les denomina vasos
de resistencia. Los capilares se continan en las vnulas poscapilares que se unen en las vnulas musculares.
Por las vnulas poscapilares migran leucocitos y molculas grandes como protenas
Las arteriolas se definen arbitrariamente como el
vaso sanguneo arterial de dimetro menor de 100 mm.
La tnica ntima se compone de clulas endoteliales
aplanadas relacionadas mediante zonulae occludentes y
nexos; hay una lmina elstica interna que falta en la
porcin terminal y en la metaarteriola (esfnter precapilar 10 mm); estn inervadas por fibras parasimpticos.
Los capilares son los vasos sanguneos ms pequeos, que miden slo 10 mm, se anastomosan en territorio
capilar, presentan un canal o va preferencial, va directa
desde la arteriola a la vnula poscapilar. Los capilares
estn rodeados de clulas musculares lisas, los esfnteres precapilares; la pared est compuesta de clulas
endoteliales y una lamina basal que incluye pericitos. Se
reconocen tres tipos:
(Captulo 8)
1. Capilares continuos: en los tejidos musculares,

el encfalo y el tejido conectivo, gran presencia de
vesculas de un dimetro muy uniforme (70 mm)
que presentan plegamientos denominados caveolas. Se lleva a cabo el transporte transendotelial de
ciertas molculas hidrosolubles.
2. Capilares fenestrados: poseen poros o fenestras
en sus paredes y estn recubiertos de diafragma de
poros. Estos capilares se encuentran en el pncreas, en la lmina propia del tubo digestivo, en los
capilares renales y en las glndulas endocrinas. La
lmina basal es continua. Una excepcin es el glomrulo renal, compuesto de capilares fenestrados
que carecen de diafragmas.
3. Sinusoides: son canales vasculares grandes revestidos de epitelio (endotelio), delgado pero continuo, algunos con reas fenestradas; se adaptan a
la forma que queda entre las lminas epiteliales y
los cordones celulares del rgano que irrigan. Los
sinusoides tpicos se encuentran en el hgado,
bazo, mdula sea, corteza suprarrenal, adenohipfisis y otras glndulas endocrinas, y presentan
una endocitosis muy activa.
Las vnulas poscapilares representan el contacto endotelial menos denso de todo el sistema de vasos sanguneos; cuando el dimetro alcanza 50 a 100 mm aparecen
una o dos capas de clulas musculares lisas aplanadas
que se denominan vnulas musculares.
VENAS
Son vasos de paredes delgadas poco elsticas que recogen la sangre de todo el cuerpo y la regresan al corazn
(aurcula derecha). Las venas son el medio de transporte
de las redes capilares hacia el corazn, aumentan de
calibre en sus paredes y existen venas gruesas que por
lo general se acompaan de sus arterias. Las venas son
ms numerosas y de mayor calibre, pero sus paredes son
mucho ms delgadas, flexibles y menos elsticas que las
arterias. Existen tres tipos de venas de acuerdo con su
calibre: pequeas, medianas y grandes (tambin estructuradas por: tnica ntima, media y adventicia).
1. Vnulas y venas de pequeo calibre: una vnula
es la unin de varios capilares. Miden de 15 a 20
nm y estn formadas por endotelio rodeado de fibras reticulares delgadas y orientadas longitudinalmente, y en ocasiones con fibroblastos. Las
vnulas tienen un papel significativo en el intercambio entre la sangre y los tejidos en los cambios
relacionados con la inflamacin; son sensibles
tambin a la histamina y la serotonina, las cuales
aumentan la permeabilidad de las sustancias. Parece existir un gradiente de permeabilidad del lado
arterial al venoso que alcanza su mximo y disminuye en los vasos de menor tamao. Al aumentar
el calibre de las vnulas hasta 50 mm empiezan a
aparecer clulas musculares lisas. En las venas
mayores aparecen delgadas redes de fibras elsticas y su tnica ntima est constituida slo por endotelio y clulas musculares lisas.
2. Venas de calibre mediano: miden de 2 a 9 mm e
incluyen venas de la piel, de extremidades como
la braquial, la popltea, las viscerales y la cabeza.
En ellas la tnica ntima contiene tejido conjuntivo con fibras elsticas. La tnica ntima est frecuentemente desarrollada, las tnicas intermedias
y media forman un solo estrato. La tnica media
es mucho ms delgada que en las arterias y est hecha de fibras musculares lisas circulares y fibras
de colgeno con fibroblastos. La tnica adventicia
suele ser ms gruesa que la media y est hecha de
tejido conjuntivo con haces de colgeno y redes
elsticas.
3. Venas de gran calibre: en su tnica ntima tienen
la misma estructura que las venas de tamao medio. En ocasiones puede faltar la tnica; la adventicia constituye la mayor parte de la pared venosa
y es varias veces ms gruesa que la tnica media.
Est formada de tejido conjuntivo con gruesas
fibras elsticas, colgena y haces musculares longitudinales. sta es la estructura de la vena cava
inferior, la porta, la esplnica, la mesentrica superior, la iliaca externa, la renal y la cigos.
Vlvulas venosas
Se encuentran en venas con dimetro superior a 2 mm,
su borde libre est orientado hacia el corazn (seno de
la valva), forman pliegues de la tnica ntima e impiden
el reflujo de la sangre. Las venas del trax y el abdomen
no poseen valvas. La presencia de estas vlvulas venosas en combinacin con la bomba muscular esqueltica,
en especial en las extremidades inferiores, coadyuva al
retorno sanguneo de la circulacin venosa hacia el
corazn. El flujo sanguneo es unidireccional, ya que las
valvas se cierran una vez que la sangre ha pasado, para
evitar el reflujo y la estasis venosa.
249
SISTEMA LINFTICO
Sistema de vas linfticas

Comienzan en el tejido conectivo intersticial como capilares linfticos ciegos que se fusionan para dar origen
a vasos colectores, los vasos linfticos. Son numerosos
en la piel, mucosas y el tejido subseroso, pero ausentes
en el sistema nervioso central, la mdula sea y el odo
interno, que no contienen vas linfticas.
Estructura de las vas linfticas

La pared se compone de clulas endoteliales muy aplanadas, estn rodeadas de tejido conectivo, presentan
filamentos de anclaje y carecen de lmina basal o sta
es discontinua.
Vasos colectores
Presentan un gran nmero de anastomosis y suelen rodear como si fueran una red de venas; contienen vlvulas muy cercanas. Su recorrido se ve interrumpido por
ganglios linfticos. Los vasos colectores son contrctiles y muestran ondas peristlticas.
Conducto torcico
Mide 5 mm de dimetro y es el mayor de todos los vasos
linfticos. La principal funcin de los vasos linfticos es
devolver a la sangre el exceso de agua y solutos generado por la diferencia entre filtracin y reabsorcin en
los capilares. La linfa es un ultrafiltrado del plasma,
pero con un contenido proteico que vara de 2 a 5%; se
transpiran tambin las inmunoglobulinas. Al da se
transportan de 2 a 3 L de linfa. La linfa es un lquido
incoloro formado por plasma sanguneo y leucocitos; en
realidad es la parte de la sangre que se escapa o sobra de
los capilares sanguneos al ser stos porosos, se denomina fluido intersticial y se recoge en los espacios intercelulares. La linfa transporta algunos nutrientes, sobre
todo grasas, y distribuye los leucocitos en el organismo.
Conducto linftico
Es mucho ms corto que el torcico, con una longitud
aproximada de 1 cm. Este conducto linftico recibe la
250
linfa de la parte derecha del cuerpo situada sobre el hgado, se vierte en la vena subclavia derecha y en la vena
yugular interna. El conducto linftico junto con el torcico vierte a la sangre cada minuto entre 4 y 10 mL de
linfa. El conducto torcico transporta la linfa y se une a
la vena subclavia izquierda cerca de la unin con la vena
yugular interna. El conducto linftico transporta la linfa
a la vena subclavia derecha y tambin se une a sta cerca
de la unin con la vena yugular interna.
Ndulos linfticos
Tambin denominados ganglios linfticos, son estructuras ovales y pequeas del tamao de un frijol. Por lo
general estn en forma de racimos cerca de las venas en
puntos estratgicos a lo largo de los vasos linfticos
medianos de la rodilla, codo, axila, ingle, cuello, abdomen y pecho. La sangre se limpia y se filtra en estos
ndulos, y los leucocitos se acumulan all cuando hay
una enfermedad. Este proceso de filtrado previene la
introduccin en el sistema circulatorio sanguneo de
bacterias, clulas cancerosas y otros agentes infecciosos. Los ndulos linfticos son los centros de produccin y almacenamiento de algunos leucocitos en la respuesta inmunitaria secundaria.
HISTOGNESIS DEL APARATO

CIRCULATORIO
El sistema de vasos sanguneos aparece al final de la segunda semana de vida fetal a partir de clulas mesenquimticas; los angioblastos de la zona vasculosa de la
superficie del saco vitelino, las arterias y las venas se
originan de los capilares, sus paredes se hacen gruesas.
Las clulas mesenquimatosas circundantes se diferencian en tejido conectivo y clulas musculares lisas. Las
vas linfticas, los primeros vasos linfticos, aparecen
al final de la quinta semana de vida fetal y despus establecen comunicacin con las venas.
CORAZN
El corazn es una bomba muscular con cuatro cmaras,

dos aurculas que reciben sangre de las circulaciones
(Captulo 8)
sistmica y pulmonar, y dos ventrculos que bombean

sangre a la circulacin arterial sistmica y pulmonar. La
sangre cargada de oxgeno abandona el ventrculo izquierdo a travs de la aorta. Circula por el cuerpo y retorna, desoxigenada, hasta la aurcula derecha por las
venas cavas superior e inferior.
La actividad del corazn consiste en la alternancia
sucesiva de contraccin (sstole) y relajacin (distole)
de las paredes musculares de las aurculas y los ventrculos. Durante el periodo de relajacin la sangre fluye
desde las venas hacia las dos aurculas, dilatndose gradualmente. Al final de este periodo la dilatacin de las
aurculas es completa. Sus paredes musculares se contraen e impulsan todo su contenido a travs de los orificios auriculoventriculares hacia los ventrculos. Este
proceso es rpido y se produce casi de manera simultnea en ambas aurculas.
Se compone de fibras musculares ramificadas y
forma una estructura reticular tridimensional donde las
clulas estn unidas extremo con extremo mediante discos intercalares con ncleos ovales, grandes y claros de
localizacin central, adems de presentar ramificaciones donde se conectan con clulas vecinas. El dimetro
de las fibras es de 15 mm y poseen sarcolema abundante
parecido al del msculo esqueltico, con un estriado
longitudinal que se aprecia en el microscopio ptico.
En cada polo nuclear hay una zona de sarcoplasma
rico en mitocondrias en forma de clava, que adems
contiene un complejo de Golgi pequeo cerca del polo;
en personas ancianas hay depsitos de lipofucsina. El
sarcoplasma contiene ms glucgeno que la musculatura estriada. La caracterstica del msculo cardiaco en
presencia de discos intercalares es que se aprecian lneas transversales ms gruesas que parecen una escalera, siempre se encuentran a nivel de la parte media de
las bandas I donde se localiza la lnea Z, pero son ms
gruesas que stas.
Las capas que conforman el corazn son:
1. Endocardio: es el revestimiento interno de las
cuatro cmaras cardiacas y a su vez se compone de
tres capas:
a. Externa: en contacto con el miocardio, est
compuesta de fibras de colgeno.
b. Media: es la capa ms gruesa, compuesta de fibras de colgeno organizadas de forma regular,
y contiene fibras elsticas que se compactan.
Existen algunos miofibroblastos.
c. Interna: est compuesta de clulas endoteliales
planas que se continan con las clulas endoteliales que tapizan a los vasos que entran y salen
del corazn.
2. Miocardio: se lo considera la masa del corazn

porque es un elemento contrctil compuesto de fibras musculares cardiacas especializadas (la cantidad de miocardio y el dimetro de las fibras musculares dependen de la variabilidad del trabajo a
que se ve sometido el corazn). Las fibras atriales
miocrdicas son ms pequeas que las de los ventrculos y contienen unos pequeos grnulos neuroendocrinos, escasos, localizados cerca del ncleo y que son ms numerosos en la aurcula
derecha. Estos grnulos secretan el pptido natriurtico auricular cuando las fibras auriculares se
elongan excesivamente. stas a su vez aumentan
la excrecin de agua y de iones como sodio y potasio en el tbulo contorneado distal del rin, y reducen la tensin arterial al inhibir la secrecin de
renina por los riones y la secrecin de aldosterona.
3. Pericardio: es la bolsa que envuelve al corazn y
se la denomina saco pericrdico. Se compone de
tejido fibrocolagenoso compacto y elstico, tapizado por una capa de clulas mesoteliales planas
que se conoce como pericardio parietal. El pericardio visceral, tambin llamado epicardio, se
compone de clulas mesoteliales. La cavidad pericrdica es el espacio entre el pericardio parietal y
el visceral en la cual hay una pequea cantidad de
lquido seroso cuya funcin es lubricar ambas superficies.
El sistema de la conduccin de la excitacin cardiaca
o sistema cardionector regula las acciones de las aurculas y los ventrculos en una secuencia objetiva; est
compuesto por fibras de Purkinje, que son fibras musculares cardiacas modificadas. El ndulo sinusal est en el
tejido subepicrdico entre la cava superior y la aurcula
derecha y est compuesto de clulas musculares nodales. Este sistema est constituido por el ndulo sinoauricular de Keith y Flack, el ndulo atrioventricular de
Tawara y el haz auriculoventricular de His. Las clulas
especializadas del tejido nodal son ms pequeas que
las clulas musculares cardiacas ordinarias, dispuestas
en una red incluida en un tejido conjuntivo abundante
ms bien denso.
Las fibras del ndulo auriculoventricular son pequeas, como las del ndulo sinoauricular. En el haz auriculoventricular tambin son pequeas en su porcin inicial, pero ms distales; en sus ramas derecha e izquierda
se hacen mayores que las fibras musculares cardiacas
ordinarias y adems toman un aspecto muy caracterstico: se les llama entonces fibras de Purkinje. Las vlvulas cardiacas evitan que el flujo sanguneo retroceda y
251
vuelva a las cmaras cardiacas despus del vaciado.

Durante la sstole hay dos vlvulas que evitan que la
sangre regrese a las aurculas: la vlvula auriculoventricular derecha o tricspide y la auriculoventricular
izquierda o mitral (bicspide).
ENDOTELIO
El endotelio se compone de clulas planas con diferentes especialidades que contienen ncleos aplanados;
cada clula se observa anclada a la lmina basal y unas
con otras por medio de uniones de adhesin que evitan
la difusin entre las clulas. Se caracterizan por la presencia de muchas vesculas pinocticas implicadas en el
transporte de sustancias.
Estas clulas tienen la capacidad de notar cambios en
la presin sangunea, tensin de oxgeno y como respuesta emiten sustancias con efectos poderosos sobre el
tono del msculo liso vascular (endotelinas, xido ntrico, prostaciclinas); tambin secretan sustancias que impiden la coagulacin de la sangre. El endotelio se regenera lentamente por mitosis; la enzima convertidora de
angiotensina trasforma la angiotensina I en angiotensina II de efecto vasoconstrictor, estimulante de la presin arterial. Las clulas endoteliales controlan la
migracin de leucocitos a travs de la pared arterial.
Los cardiomiocitos tienen una vida de cinco aos,
mientras que los miocitos viven entre 80 y 120 das. La
MEC se halla en un estado de continuo recambio, mientras que las clulas cardiacas estn en estado quiescente
y tienen poca actividad regenerativa. Adems, 25% de
los cardiomiocitos son binucleados tetraploides y el
resto son diploides. En la hipertrofia se incrementan los
cardiomiocitos binucleados, que indican una reaccin
hacia la divisin celular. La cardiomioplastia celular
puede regenerar el miocardio para restaurar la contractilidad, limitar la remodelacin ventricular y estimular la
angiognesis en los pacientes.
DESARROLLO DE SISTEMA
CARDIOVASCULAR
Despus de la implantacin, el blastocisto se nutre del

estroma uterino (nutricin histotrfica). Un gran nmero de clulas sanguneas son fagocitadas por los elementos del sincitiotrofoblasto que, adems, asimilan gracias
252
a una actividad de fagocitosis del plasma que ocupa las

lagunas (nutricin hemotrfica). Posteriormente se inicia el proceso vasculogentico, que tiende a unir corion
y cuerpo embrionario para asegurar la nutricin de este
ltimo. En aves y anfibios se han demostrado, al inicio
de la gastrulacin, dos reas blastodrmicas, derecha e
izquierda, cuyas clulas poseen potencialidad cardioformadora. Estas clulas con capacidad histogentica
adquieren diferenciacin bioqumica, poseen protenas
contrctiles especficas, se vuelven resistentes a la anoxia y acumulan glucgeno.
Las reas cardiacas primitivas se fusionan en su porcin media delante de la membrana bucofarngea para
formar una herradura cuyas ramas laterales estn en el
tercio medio a cada lado del disco embrionario. La organizacin regional del rea presuntiva cardiaca es lbil
hasta que aparece la asomita, estado en que su destino
queda rigurosamente fijado. La induccin del intestino
farngeo es necesaria para que el mesodermo precardiaco de ambos lados se fusione en la lnea media y
forme un tubo cardiaco nico. El factor de transcripcin
Nkx25 (tambin llamado CSX) especifica el campo
cardiognico, siendo importante para el tabicamiento y
desarrollo del sistema de conduccin. Este gen es homlogo del gen tinman, que controla el desarrollo del
corazn en Drosophila. TBX5 es un factor de transcripcin que contiene una regin que se une al DNA
conocida como la caja T. Participa en el tabicamiento y
se expresa despus que Nkx25.
El gen morfogentico del hueso 2 (BMP2) es un
miembro de los factores de crecimiento TGFb que se
expresa en el endodermo subyacente al mesodermo cardiaco, induce y mantiene la expresin de Nkx25 para
establecer el campo cardiognico. Los genes Wnt, expresados en la regin cardiaca, parecen participar en la
restriccin del potencial cardiaco del campo cardiognico. Los primordios cardiognicos se localizan en la
hoja mesodrmica, laterales a la lnea primitiva, nodo
de Hensen y notocorda en el embrin trilaminar. Al producirse la flexin del embrin y la delaminacin del
mesodermo lateral, las vesculas amniocrdicas se desplazan con la esplacnopleura para situarse dorsales al
saco vitelino, delante y a los lados de la porcin ms
ceflica de la placa neural.
La fusin de los esbozos derecho e izquierdo para
formar un tubo cardiaco nico (etapa de tubo) (horizonte X de Streeter) se realiza segn una secuencia definida de la regin bulbar hacia el ventrculo primitivo, el
atrio y finalmente el seno venoso. La unin de ambos
primordios es consecuencia directa de los procesos
morfogenticos que conducen a la formacin de la faringe. Cuando los dos esbozos cardiacos se han unido y
(Captulo 8)
constituyen un tubo nico, deja de ser recto (etapa de

asa). Los bloqueos de los factores de transcripcin cardiaca Nkx2, MEF2, dHAND y eHAND se caracterizan por la detencin del desarrollo cardiaco en esta
etapa. La torsin se inicia con el borramiento del surco
interventricular derecho y la acentuacin del surco
interventricular izquierdo, condicionados por el cambio
de la forma celular.
A medida que la torsin avanza, los atrios ocupan
progresivamente una porcin ms ceflica y dorsal respecto a los ventrculos, y experimentan expansin lateral para dejar una depresin medial sobre la que descansa el tronco arterioso. En etapas avanzadas de la
torsin, el corazn adquiere apariencia externa tetracavitaria, aunque en realidad sigue siendo un tubo incurvado (etapa S). En esta etapa las cmaras cardiacas se
alinean: atrio derechobulbus cordis, atrio izquierdo
ventrculo primitivo. Se han atribuido las incurvaciones
cardiacas a numerosos factores; el ms aceptado es la
propiedad intrnseca del tubo miocrdico y no el crecimiento holomtrico entre el tubo cardiaco y la cavidad
pericrdica. Parece ser que la corriente hemodinmica
no influye tampoco en la formacin de las curvaturas
cardiacas, aunque s en la adquisicin de su estructura.
En los embriones de pollo de 10 somitas, cuando el
atrio es an doble, comienzan las contracciones cardiacas en el borde derecho del ventrculo. Las primeras
contracciones son irregulares y de ritmo lento. Cuando
los dos atrios se fusionan, el ritmo se incrementa, incluso an ms al incorporarse el seno venoso. Este aumento progresivo de ritmo cardiaco indica que el material que se fusiona en ltimo lugar posee clulas
marcapaso, con propiedades funcionales diferentes,
que imponen su ritmo a las anteriores. El inicio de las
primeras contracciones cardiacas en el humano se sita
probablemente en el estadio de 8 a 10 somitas. A partir
de la quinta semana se produce en el esbozo cardiaco del
embrin humano (horizonte XIII, +1 da, 4 a 5 mm) un
complicado proceso de tabicacin en virtud del cual su
cavidad se subdivide en cuatro para convertirse en un
sistema de doble bomba dispuesto en paralelo.
En el hombre, la separacin de los sistemas arterial
y venoso se completa despus del nacimiento, pero los
procesos necesarios para ello finalizan en los embriones
del horizonte XVII I XIX (16 a 18 mm, 40 + 1 da). La
tabicacin tarda 15 das y se inicia con la proliferacin
del mesnquima en las zonas de formacin de tabiques:
infundibulares, troncales y atrioventriculares. El corazn primitivo est dividido molecularmente. Los segmentos endocrdicos que experimentan una transformacin mesenquimatosa, pero no los auriculares ni
ventriculares, expresan el gen Msx1 y contienen la

molcula de adhesin celular NCAM. Los adherones
o gelatina cardiaca son producidos por clulas miocrdicas; contienen un complejo molecular de proteoglicano, fibronectina y protenas de la matriz. Una de estas
protenas, la ES30, se expresa tambin en la notocorda,
el ectodermo neural y la cresta ectodrmica apical, que
son los nicos tejidos que pueden sustituir al miocardio.
La induccin de la invasin de la gelatina cardiaca por
las clulas del endotelio aurculoventricular tambin
se acompaa de la actividad de TGFb1 y TGFb3.
A los ratones que carecen del factor de transcripcin
de wingedhelix MFH1 (mesenchyme fork head1) se
les produce la interrupcin del cayado artico. Para que
sea compatible con la vida se debe acompaar de un
ducto arterioso persistente y permeable que permita el
flujo de sangre hacia la regin caudal del organismo.
SENO VENOSO
El seno venoso se forma con la participacin de tres

pares de venas: cardinales, umbilicales y vitelinas derechas e izquierdas. A medida que el aporte sanguneo de
los vasos izquierdos disminuye, el seno venoso se incorpora a la pared posterior del atrio derecho. La sangre
pasa al atrio izquierdo a travs de la comunicacin interatrial. La porcin sinusal del atrio izquierdo se deriva de
las venas pulmonares.
253
dum, la porcin proximal derecha desaparece y la porcin distal derecha origina las valvas del seno venoso
coronario y de la vena cava superior.
Unin atrioventricular
La unin atrioventricular tiene forma de cilindro estrecho y ah se forman los cojines atrioventriculares anterosuperior, posteroinferior, derecho e izquierdo. Los cojines anterior y posterior proliferan con gran velocidad, no
as los laterales. La sangre que proviene del atrio primitivo se dispone en dos corrientes debido a que durante la
sstole los cojines anterosuperior y posteroinferior se
aproximan entre s. A medida que avanza la tabicacin,
los cojines se ponen en contacto, desaparece el endocardio de sus superficies de contacto, unen su mesnquima
y se constituyen las dos entradas a los ventrculos.
El tabique atrioventricular, una vez formado, se dobla
como herradura, convexa hacia los atrios y cncava
hacia los ventrculos. La rama derecha desciende ms
que la izquierda; esta ltima forma parte de la valva media de la vlvula mitral. La rama derecha crece hacia el
tabique interventricular, con el cual se fusiona. A consecuencia del crecimiento diferencial la rama izquierda del
tabique es ms alta, lo que hace que la porcin inferior de
la pared del atrio derecho corresponda simultneamente
a la pared superior del ventrculo izquierdo (tabique
atrioventricular), y la vlvula mitral se desarrolla en un
plano ms superior que la vlvula tricspide.
VENTRCULOS
Atrios
El septum primum aparece por primera vez como la
espina vestibuli y corresponde a una condensacin de
mesnquima en forma de media luna en la cual prolifera
el miocardio y est ubicada en la pared dorsocraneal de
la unin interatrial. Por otro lado, en el canal atrioventricular se forman almohadillas o cojines atrioventriculares. El septum primum crece hacia los cojines atrioventriculares y deja un orificio inicial entre ambos
(foramen primum); posteriormente ambas estructuras
se unen por contacto de sus superficies y aparecen zonas
de necrosis en la porcin superior del septum primum
(foramen secundum).
A la derecha del septum primum se origina el septum
secundum, estructura muscular carente de tejido mesenquimtico que crece hacia abajo en direccin al seno
venoso. Las valvas del seno venoso participan de la
siguiente manera: la izquierda se une al septum secun-
Durante el desarrollo inicial de ambos ventrculos se integran dos reas o placas de Davis para la formacin de
trabculas. stas proliferan y se desarrollan tanto en extensin como en longitud, respetando una pequea zona
o territorio prospectivo del futuro tabique interventricular. Posteriormente las trabculas ubicadas a ambos
lados de la unin del bulbus cordis con el ventrculo primitivo se fusionan y forman un tabique interventricular
compacto (septum interventricular muscular).
El crecimiento de este tabique est determinado por
el plegamiento y fusin de ambas paredes ventriculares.
La comunicacin interventricular se va cerrando paulatinamente a medida que el tabique muscular se desarrolla. Para que se complete la tabicacin ventricular es
necesario que los cojines atrioventriculares, los infundibulares o conales y el tabique interventricular muscular
se ubiquen en el mismo plano (septum interventricular
membranoso).
254
(Captulo 8)
TRONCO CONO
HEMOGLOBINA
Se cierra mediante la participacin de los cojines infundibulares o bulbares y los troncales en la formacin de
un tabique infundibulotroncal que consta de una porcin proximal recta y una distal en espiral. A consecuencia de esto se observa que la porcin proximal de
la arteria aorta es dorsal y a la izquierda; la porcin distal
de la arteria aorta es ventral y a la derecha; la porcin
proximal de la arteria pulmonar es ventral y a la derecha,
y la porcin distal de la arteria pulmonar es dorsal y a
la izquierda.
La molcula de hemoglobina est compuesta por el pigmento hem (que en su interior contiene a los iones
frrico y ferroso, que transportan al oxgeno en la sangre) y cuatro cadenas de globina: dos cadenas a y dos
cadenas b en el adulto, cuyos genes se encuentran en el
cromosoma 16 y en el 11, respectivamente. La hemoglobina embrionaria ms primitiva es una isoforma llamada Gower1 y est compuesta por dos cadenas z (tipo
a) y dos cadenas e (tipo b). Durante el periodo embrionario se producen de manera sucesiva la Gower1 (z2
e 2), la Gower2 (a2 e2) y la Portland (z 2 g 2). Durante
el periodo fetal se produce la hemoglobina fetal (a 2 g
2). En el feto despus de la semana 30 y en el adulto se
producen tres isoformas: la (a 2 b 2), la (a 2 d 2) y la (a
2 g 2), siendo ms frecuente la primera.
HEMATOPOYESIS
Los islotes sanguneos contienen clulas madre hematopoyticas (stem) o hemocitoblastos que pueden dar
origen a todos los tipos de clulas que se encuentran en
la sangre embrionaria. La hematopoyesis embrionaria
comienza en los cmulos paraarticos del mesodermo
esplacnopleural.
El linaje primario se divide en clulas progenitoras
linfoides y clulas progenitoras mieloides que son precursoras de los eritrocitos, granulocitos, monocitos y
megacariocitos. La clula madre de primera generacin
es la UFCML porque origina clulas mieloides y linfoides. Las clulas de segunda generacin son la UFC
L de la lnea linfoctica y la UFCS de la lnea del bazo
(del ingles spleen), que responde al estmulo de la interleucina3.
La diversificacin de estas clulas est controlada
por los factores estimulantes de colonias (FEC), protenas difusibles que estimulan la proliferacin de clulas
madre hematopoyticas. Las unidades formadoras de
brotes eritroides UFBE y unidades formadoras de
colonias eritroides UFCE descienden de la UFCS. La
actividad promotora de desarrollo (BPA) estimula la
mitosis de los precursores UFBE, y la eritropoyetina
estimula a las UFBE.
Los genes Hoxa y Hoxb desempean un papel importante en la hematopoyesis, sobre todo en la proliferacin. La exposicin de la mdula sea a los oligonucletidos contra los genes Hoxa da como resultado la
supresin de las lneas especficas de diferenciacin de
las clulas sanguneas.
La sobreexpresin de los genes Hoxb8, Hoxa9 y
Hoxa10 causa leucemia en ratones.
CLULAS MADRE
Conocidas en ingls como stem cells, tambin se las

conoce como clulas troncales, clulas tronco, clulas
precursoras, clulas progenitoras y clulas estaminales.
La clula progenitora o precursora es una clula diferenciada parcialmente que ha perdido la capacidad pluripotencial de la clula madre y que se ha comprometido con
un determinado linaje celular para formar clulas especializadas especficas. Las clulas madre pueden dividirse simultneamente para mantener su autorrenovacin, con produccin de ms clulas madre semejantes a
ella, y tambin pueden generar clulas hijas comprometidas hacia una estirpe celular especfica con la capacidad
de implantacin en tejidos sanos y enfermos (figura 83).
A los tres das el embrin tiene el aspecto de una
mora, por ello se lo conoce como mrula, con 12 a 16
blastmeros. A los cinco das comienza a introducirse
lquido en su interior para formar el blastocele. En esta
etapa el cigoto se llama blastocisto y posee en uno de sus
polos la masa celular interna o embrioblasto que forma
una prominencia dentro del blastocele. Las clulas que
integran sta dan origen a todos los tipos celulares, sistemas, tejidos y rganos del individuo en formacin.
Adems, tiene una capa celular aplanada que recubre la
cavidad del blastocisto y la parte exgena del embrioblasto, la cual se denomina masa celular externa o trofoblasto, de donde se deriva la placenta. La clula madre
embrionaria se deriva del embrin en su etapa de blasto-
255
Clulas madre
totipotentes
Clulas madre
pluripotentes
Tienen la capacidad
pluripotencial de
regenerar las 250
estirpes celulares
del cuerpo humano
Repoblacin funcional
Clulas madre sanguneas Otras clulas madre
especializadas
Glbulos Clulas
Glbulos
Plaquetas blancos especializadas
rojos
Tejido sano
Tejido
daado
Figura 83. Autorrenovacin y diferenciacin de las clulas madre.
cisto, cuyas clulas se denominan blastmeros y poseen

la capacidad de generar cualquier clula diferenciada en
el organismo. Las clulas de la masa celular interna no
mantienen indefinidamente in vivo su capacidad de generacin de cualquier tipo celular, pues se van diferenciando progresivamente en los diversos tipos celulares
durante la fase intrauterina del desarrollo. Pero cuando
se extraen de su ambiente embrionario natural y se cultivan in vitro, son capaces de proliferar ilimitadamente y
de mantener su potencial de generar clulas capaces de
diferenciarse en cualquiera de los tejidos del organismo.
En 1998 se obtuvieron las primeras clulas madre embrionarias de procedencia humana con fines de investigacin, y en aos recientes, clulas madre multipotenciales adultas y pluripotenciales para su aplicacin
clnica en humanos. El trmino clula madre embrionaria se introdujo en 1981 para distinguir las clulas
embrionarias procedentes de la masa celular interna de
aqullas derivadas de teratocarcinomas. Para que las
clulas madre embrionarias puedan crecer indefinidamente y mantener su estado indiferenciado, en los cultivos se utilizan fibroblastos embrionarios de ratn y el
factor inhibidor de leucemia (LIF) que bloquea la diferenciacin. Cuando las clulas embrionarias se extraen
en estas condiciones comienzan a diferenciarse espontneamente. Las clulas madre han despertado gran inters en la medicina regenerativa por su aplicacin teraputica en mltiples enfermedades humanas.
Cabe mencionar que las clulas pluripotenciales
adultas tienen la misma capacidad de regeneracin que
las clulas madre embrionarias (figura 84).
Las clulas madre somticas o adultas son clulas
restringidas en su capacidad de diferenciacin y slo
pueden generar clulas del tejido donde se localizan;

por ejemplo, las clulas madre extradas de la sangre no
tienen la capacidad de regeneracin total, pero en determinadas condiciones pueden diferenciarse en clulas de
diferentes linajes multipotenciales, lo que puede aprovecharse para su aplicacin clnica en la terapia celular.
En este contexto, las clulas madre hematopoyticas
desdiferenciadas a multipotenciales o pluripotenciales
pueden diferenciarse en diversos tejidos, como endotelio, msculo cardiaco, msculo estriado, hepatocitos,
neuronas, piel, etc. La clula madre hematopoytica
puede tener divisiones autorrenovadoras, dar lugar a todas las clulas sanguneas, reconstruir la mdula sea e
implantarse en tejidos sanos. Tambin existen clulas
madre adultas en otros sitios del organismo, como mdula sea, sangre perifrica, sangre del cordn umbilical, cerebro, mdula espinal, grasa, pulpa dentaria, vasos sanguneos, msculo esqueltico, piel, tejido
conectivo, crnea, retina, hgado, conductos pancreticos, folculo piloso, pulmn, tejido gastrointestinal, etc.
Esto ha creado nuevas perspectivas para el tratamiento
de diferentes enfermedades con clulas madre adultas
igual que con clulas madre embrionarias, con la ventaja de que no existen impedimentos ni controversias ticas. En otras palabras, esto equivale ticamente a una
transfusin sangunea o a un trasplante de rganos donde existen un donador y un receptor.
Potencialidad celular
La potencialidad representa la capacidad y posibilidades de diferenciacin de las clulas y se manifiesta en
el mbito natural de acuerdo con el orden jerrquico de
256
(Captulo 8)
Maduracin, seleccin
y purificacin celular antes
Clula progenitora
pancretica
Diferenciacin
Progenitor
Diferenciacin
Clulas
madre
embrionarias
ESC
Diferen
ciacin
Diferen
ciacin
Progenitor
Diferenciacin
Diferenciacin de
clulas del corazn
Seleccin celular
y purificacin
Progenitor neural
Diferenciacin
y purificacin
Clula madre
Neurona
progenitora neuronal
Figura 84. Generacin y utilidad de las clulas madre embrionarias y somticas en medicina regenerativa. Se esquematiza la
capacidad de regeneracin celular y orgnica total con una sola clula madre pluripotencial.
su desarrollo. De acuerdo con su potencial de diferenciacin, las clulas madre se han clasificado en: totipotentes, pluripotentes y multipotentes. Las clulas madre
totipotentes son aqullas que en condiciones apropiadas
son capaces de formar un individuo completo, pues pueden producir tejido embrionario y extraembrionario.
As, en el ciclo evolutivo posfecundacin, el cigoto u
vulo fertilizado se considera una clula totipotente,
capaz de dar origen a todo el organismo. Igual sucede
con la etapa siguiente de mrula, en que todas las clulas
son totipotentes. En el humano se plantea que la totipotencia slo persiste hasta el estadio evolutivo de 8 clulas. Las clulas madre pluripotentes son las que tienen
la capacidad de diferenciarse a tejidos procedentes de
cualquiera de las tres capas embrionarias (ectodermo,
mesodermo y endodermo) y pueden obtenerse tanto de
origen embrionario como adulto. Aunque estas clulas
por s solas no pueden producir un individuo ya que
necesitan el trofoblasto, s originan todos los tipos de
clulas y tejidos del organismo. En esta categora estaran las clulas provenientes de la masa celular interna
del blastocisto. Las clulas madre multipotentes pueden
diferenciarse en distintos tipos celulares procedentes de
la misma capa embrionaria. La versatilidad o plasticidad de las clulas madre adultas es la flexibilidad que
tienen algunas de ellas para formar clulas especializadas de otros linajes cuando su entorno natural es sustituido por otro; cambian su programa de diferenciacin
de acuerdo con las nuevas seales de diferenciacin que

reciben, por lo que se les ha asignado capacidad pluripotencial, y en este sentido se asemejaran a las clulas
madre embrionarias. Esto contradice el dogma clsico
en biologa celular de la capacidad diferenciativa limitada de las clulas madre adultas. Las clulas unipotentes slo se pueden diferenciar en un tipo celular, se consideran como clulas en trnsito, clulas progenitoras
comprometidas o clulas precursoras, mientras que las
clulas diferenciadas son las que han alcanzado su plena
maduracin y una actividad funcional especfica.
Clulas madre pluripotenciales

y multipotenciales adultas
Algunas clulas madre adultas tienen propiedades de
diferenciacin muy similares a las de las clulas madre
embrionarias. Estas clulas se han obtenido de la mdula sea de ratas, ratones y humanos, y se denominan con
las siglas MAPC por su nombre en ingls: multipotent
adult progenitor cells. Despus de que se introducen en
blastocistos murinos, pueden generar la mayora de los
tipos celulares derivados de cualquiera de las tres capas
embrionarias. Lo mismo sucede cuando se someten a
determinadas condiciones de cultivo. Aunque no hay
evidencias concretas de que las MAPC existan como
tales en tejidos normales, se pueden obtener mediante
cultivos a largo plazo de clulas estromales de la mdula

sea mantenidas en condiciones especficas. A diferencia de las clulas madre embrionarias, las MAPC se
pueden obtener de la mdula sea autloga o heterloga
para su aplicacin alognica. Con las clulas madre pluripotentes y multipotentes se evita la reaccin de rechazo que se podra producir en el receptor; adems, estas
clulas no muestran potencial teratognico. En la dcada pasada emergi una descripcin molecular de las interacciones aloinmunes y el proceso de la recuperacin
inmunitaria que conduca a la tolerancia.
El Dr. Juan Barrett y col. describieron la base celular
y molecular de la alorrespuesta; un mapa detallado de
la recuperacin inmunitaria celular postrasplante est
emergiendo y destaca la importancia de linfocitos postmicos en los primeros meses crticos que siguen al trasplante de clulas madre. La profesora Anne Dickinson
y col. describieron polimorfismos genticos extra
HLA que determinan la naturaleza de la reconstitucin
inmunitaria despus del trasplante alognico de clulas
madre (SCT). Se ha demostrado el papel inmunomodulador de las clulas madre tanto autlogas como alognicas, ya que las clulas madre no histocompatibles
pueden suprimir la activacin de linfocitos.
Estas clulas madre pluripotenciales y multipotenciales suprimen fuertemente la inmunidad celular del
hospedero al inhibir la proliferacin del linfocito T, en
una restriccin inmunitaria dosisdependiente. Las clulas madre tienen el potencial de inhibir la proliferacin
de los linfocitos T a travs de vas inmunosupresoras
mediadas por CD8; esto permite el trasplante alognico
sin rechazo. Por esta razn el trasplante alognico de
clulas madre en pacientes con osteognesis imperfecta
incrementa la formacin de osteoblastos en 2%, lo que
demuestra que los precursores mesenquimticos pre-
Clula madre
257
sentes en la mdula sea tienen un efecto teraputico

real. Por lo tanto, se puede afirmar categricamente que
la terapia celular con clulas madre alognicas puede
emplearse en prcticamente cualquier patologa crnica
degenerativa o traumtica dentro del campo de la medicina regenerativa (figura 84).
Las MAPC son capaces de proliferar in vitro con ms
de 120 divisiones celulares sin un aparente envejecimiento; no expresan los marcadores CD34, CD44, CD45,
ckit ni antgenos del complejo mayor de histocompatibilidad de clase I y clase II. Su expresin de Flk1,
Sca1 y Thy1 es muy baja, pero la de CD13, SSEA1
(en rata/ratn) y SSEA4 (en humano) es alta.
Las principales limitantes para el empleo de las
MAPC son la gran complejidad tcnica que requiere un
laboratorio especializado con todos los recursos humanos materiales y de equipo necesarios para su cultivo.
Sin embargo, la investigacin y aplicacin de las MAPC
abre nuevas perspectivas para su posible aplicacin teraputica en terapia celular y medicina regenerativa.
Las clulas madre que ingresan a la circulacin por
va intravenosa se integran a los tejidos daados y adquieren las caractersticas propias de las clulas del tejido donde se implantan. En el sitio de lesin se forman
cambios en el microambiente que atraen a las clulas
madre circulantes. Se cree que en la zona daada se producen quimiocinas especficas que atraen a las clulas
madre (figura 85). Tambin se ha sugerido que las clulas madre circulantes pueden incorporarse a rganos
no daados y actuar como agentes antienvejecimiento
al aumentar el promedio de vida de las clulas del rgano y del organismo en cuestin. De esta manera, si un
ser humano tiene un promedio de vida de 70 aos y a los
40 aos se le administran clulas madre de 0 aos de vida
Aplicacin
intravenosa
Corazn
infartado
Las clulas madre

se convierten en
cardiomiocitos
Las clulas madre

estimulan la angiognesis
Figura 85. Mecanismo propuesto para explicar la migracin, integracin y funcionalidad de las clulas madre en tejidos lesionados, como el corazn infartado. Modificado de: JAMC 2004;171(5):442443.
258
en cantidades suficientes, en esta persona la esperanza de

vida se incrementa 20 aos ms, ya que: 40 + 0 2 =
20 aos.*
Plasticidad de las clulas madre

La capacidad de las clulas madre adultas para transdiferenciarse en clulas especficas de otros tejidos se conoce como plasticidad celular. Las clulas madre aparentemente comprometidas tienen plasticidad potencial
para diferenciarse mediante cuatro mecanismos:
1. Heterogeneidad de las clulas madre presentes en
una poblacin celular.
2. Fusin de las clulas madre trasplantadas con las
clulas especficas residentes en un rgano.
3. Existencia de un proceso de desdiferenciacin y
rediferenciacin celular.
4. Persistencia de clulas madre adultas con capacidad multipotencial o pluripotencial.
Las clulas madre multipotenciales formadoras de las
clulas sanguneas de origen adulto (HSC) pueden aislarse actualmente empleando la tecnologa de citometra de flujo de alta velocidad y marcando las clulas con
anticuerpos monoclonales (sorting). La proporcin es:
1 clula madre de sangre perifrica por cada 15 000
clulas madre de la mdula sea. Esto explica que cada
vez haya ms empresas dedicadas a la criopreservacin
de sangre de cordn umbilical como un nuevo seguro
mdico, ya que con esto se asegura una fuente de clulas
madre para un trasplante autlogo en el futuro, en caso
de ser necesario.
Mecanismo de accin de la terapia

celular con clulas madre (hiptesis
GonzlezSnchezSosa)
Con la experiencia clnica de haber aplicado terapia
celular con clulas madre pluripotenciales y multipotenciales alognicas a una poblacin de cientos de
pacientes en una dosis aproximada de 106 clulas divididas en dos vas (endovenosa e intramuscular) cada siete
das, los autores se han atrevido a elaborar una teora
* En qu medida podemos estar a salvo de la enfermedad
de Alzheimer y el infarto? Un retardo de 5 a 10 aos en la
aparicin de esta enfermedad podra mejorar la vida de
millones de seres humanos. Los investigadores estn
determinando si los tratamientos con hormonas o los antioxidantes y el ejercicio mental y fsico son de ayuda.
(Captulo 8)
que trata de explicar con base cientfica cmo la introduccin de clulas madre alognicas de origen humano
acta en los organismos enfermos y envejecidos, observndose un efecto teraputico evidente tanto para el
paciente como para los mdicos desde la primera aplicacin (efecto inmediato), y puede observarse hasta un periodo de 15 a 6 meses (efecto mediato). Algunos pacientes pueden presentar sntomas asociados.
La hiptesis GonzlezSnchezSosa dice: Cuando las clulas madre alognicas ingresan a la circulacin, ocurren varios sucesos:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Tropismo y homing.
Integracin.
Transdiferenciacin.
Reclutamiento de clulas madre endgenas.
Reparacin.
Regeneracin.
La divisin celular asimtrica est siempre presente en todas las fases anteriormente mencionadas, es decir, antes, durante y despus de la reparacin y regeneracin del sitio afectado.
El mecanismo de accin de la terapia celular con clulas

madre puede ser adems estudiado en dos sentidos:
1. Efecto inmediato y mediato.
2. Efecto directo e indirecto.
TERAPIA CELULAR CARDIACA
En la construccin de los vasos sanguneos se produce

un fenmeno de doble control. Las clulas del mesnquima perivascular producen la molcula de seal angiopoyetina1 que se fija sobre las superficies de las clulas endoteliales a un receptor de tirosincinasa, el
Tie2, que estimula a estas clulas para que liberen sus
propias molculas de seales, como el factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF). Este factor estimula la migracin de clulas mesenquimatosas hacia el
endotelio vascular y al hacer contacto con ste liberan el
factor b de transformacin del crecimiento (TGFb).
Dicho factor estimula la diferenciacin de las clulas
mesenquimatosas en clulas musculares lisas o pericitos.
Uno de los acontecimientos ms fascinantes en los
ltimos aos ha sido la aplicacin de la medicina regenerativa en las enfermedades cardiovasculares, ya que,
a pesar de los recientes avances en el tratamiento
mdico y en las tcnicas intervencionistas para revascularizar las coronarias, la enfermedad coronaria isqu-

mica y la insuficiencia cardiaca (IC) siguen siendo las
causas ms frecuentes de morbilidad y mortalidad en el
mundo desarrollado.
Una gran proporcin de estos pacientes pueden desarrollar insuficiencia cardiaca debido al remodelado
ventricular, proceso caracterizado por una expansin
mecnica de la pared infartada seguida de una progresiva dilatacin y disfuncin ventricular.
Los esfuerzos para tratar a pacientes con enfermedades cardiacas avanzadas se haban centrado en el trasplante de corazn y ms recientemente en los dispositivos mecnicos ventriculares. El trasplante de corazn
tiene como limitante la escasez de donantes, la elevada
mortalidad por infecciones secundarias a la inmunosupresin que requieren estos pacientes y, en el caso de los
dispositivos mecnicos, el riesgo de complicaciones
trombticas. Por otra parte, en la mayor parte de estos
pacientes, la calidad de vida es pobre y la mortalidad
muy elevada.
Esto motiv que se siguiera buscando alternativas teraputicas. El surgimiento de la medicina regenerativa,
basado en la plasticidad de las clulas madre, y las evidencias de que el miocardio puede regenerarse, aunque
de forma limitada, han servido de fundamento a la utilizacin del trasplante de clulas madre al corazn. Para
reparar el corazn se han buscado nuevos mecanismos
basados en las evidencias de que puede sufrir un proceso de reparacin en la vida adulta y de que la vasculognesis no es una actividad dependiente slo de la etapa
de desarrollo fetal.
Los nuevos conceptos sobre la plasticidad de las clulas madre y el conocimiento de que stas pueden residir en diversos tejidos y tambin diferenciarse hacia
diversos tejidos y rganos, han sido aportes importantes
para el desarrollo de la medicina regenerativa.
Exista el dogma de que el miocardio no tena posibilidades de regenerarse despus de un dao celular, por
ejemplo el producido por un infarto agudo del miocardio (IM), debido a que los cardiomiocitos adultos son
clulas totalmente diferenciadas. Recientemente surgieron evidencias de que existe cierto grado de mitosis
y de formacin de nuevos miocitos, predominantemente en el borde del rea de un IM.
Hay existencia de clulas madre cardiacas (CMC)
residentes en el corazn del adulto, tanto normal como
patolgico. Estas nuevas clulas descritas tienen la propiedad de poder diferenciarse hacia clulas endoteliales,
musculares lisas y cardiomiocitos funcionantes y, por lo
tanto, son capaces de producir regeneracin miocrdica
despus de un infarto en experimentos con ratones.
En mamferos, estas CMC son lin, c kit+ (CD117+)
y se ha demostrado que son capaces de producir regene-
259
racin cardiaca cuando se inyectan por va intravascular. Pero tambin se ha demostrado la existencia de estas
CMC en el corazn humano y pueden dar lugar a la formacin de nuevos miocitos en pacientes con estenosis
artica y con cardiopata isqumica.
Adems de esta CMC, en los dos ltimos aos se han
comunicado otras poblaciones de clulas cardiacas primitivas con capacidad de diferenciarse hacia cardiomiocitos, regenerar las reas de IM o ambas cosas. Entre
stas est una poblacin celular denominada poblacin
lateral, o subpoblacin cardiaca (SPC), de caractersticas
similares a las de la mdula sea (MO), ya que tienen
capacidad funcional para expulsar el citofluorocromo
Hoechst 33342 cuando el anlisis se realiza en un separador de clulas activadas con fluorescencia (FACS).
Esta SPC es fenotpicamente diferente de las clulas
madre hematopoyticas (CMH) provenientes de la MO
que estn presentes en el corazn adulto normal y son
capaces de diferenciarse desde el punto de vista bioqumico y funcional hacia cardiomiocitos maduros y, por
lo tanto, identifica a esta SPC como una fuente de progenitores cardiacos diferentes.
La relacin entre los diversos tipos de progenitores
cardiacos no est clara, as como tampoco los mecanismos por los que se mantiene una reserva de CPC bajo
condiciones normales y patolgicas; lo que s es un
hecho importante en la biologa cardiaca es la demostracin de esta hiptesis de que el corazn es un rgano con
capacidad de autorrenovacin, lo cual es un descubrimiento revolucionario en esta ciencia. La nueva formacin de cardiomiocitos tambin puede deberse a que
clulas madre residentes en la MO y otros tejidos
migren hacia el tejido cardiaco daado y se diferencien.
En pacientes que han sufrido un IM se ha encontrado
un aumento en el nmero de clulas CD34+ circulantes,
con un pico mximo a los siete das, y se propugna que
esto representa una activacin del mecanismo de regeneracin ante un proceso de lesin del miocardio. Existen variables como la edad del paciente, los antecedentes de enfermedad coronaria previa, la asociacin con
infecciones y una angioplastia precoz, que parecen
influir en el nmero de estas clulas que podra movilizarse hacia la sangre perifrica (SP).
Otro hecho que sustenta esta hiptesis es el quimerismo encontrado cuando se realiza trasplante de corazn entre personas de diferente sexo. Por lo tanto, probablemente existen dos vas mediante las cuales el
corazn de un donante del sexo femenino puede ser
repoblado por clulas del receptor masculino:
S Por clulas indiferenciadas presentes en el remanente del corazn del receptor.
260
S Por transporte a travs de la circulacin sistmica

de clulas indiferencias residentes en la MO del
paciente trasplantado, que son capaces de movilizarse hacia el tejido daado y en virtud de su plasticidad diferenciarse hacia cardiomiocitos.
Sin embargo, esta capacidad de regeneracin es limitada y no es suficiente para remplazar los miocitos daados despus de un IM. Por lo tanto, para restablecer la
funcin cardiaca se ha planteado que es necesaria la
terapia celular mediante el trasplante de clulas que
puedan producir nuevos miocitos. Con la terapia celular
para el corazn se persiguen varios objetivos:
S Reemplazar cardiomiocitos, los miocitos daados
necrticos e hipofuncionantes por miocitos funcionantes (miognesis).
S Mejorar la angiognesis y la vasculognesis del
corazn daado.
S Limitar la expansin de la escara y de la dilatacin
ventricular, lo que potencialmente incrementa la
contractilidad regional y mejora la funcin ventricular.
S Mejorar la funcin contrctil del corazn.
Los mecanismos por los que se puede alcanzar una mejora de la funcin ventricular mediante el trasplante de clulas madre no estn bien definidos. Pueden participar la
mejora de la angiognesis y la vasculognesis, la mejora de la sobrevivencia del rea de miocardio en hibernacin, as como efectos paracrnicos de las clulas inyectadas y modulacin del tejido cicatrizal. Desde la dcada
de 1970 se reconoci que la apoptosis es distinta que la
necrosis. Algunos bilogos ahora arguyen que la historia
de la muerte celular es an ms complicada. El conocimiento sobre las nuevas vas de muerte celular podra
conducir hacia nuevas opciones teraputicas sobre el cncer y las enfermedades degenerativas y cardiovasculares.
El hecho fundamental es que estas actividades pueden disminuir o revertir el proceso de remodelado cardiaco con disminucin del rea del infarto, lo que trae
como consecuencia la mejora de la funcin ventricular.
La primera aplicacin clnica de la terapia celular la
report Menasch en un estudio de fase 1 en que se trasplantaron mioblastos esquelticos. Se ha demostrado
que las CMH podan transdiferenciarse en ratones que
haban sufrido dao miocrdico. Esto marc un hito en
el campo de la terapia celular en pacientes con IM, IC
o ambos. Las CMH se han inyectado tanto directamente
en el tejido muscular que rodea al rea infartada como
por va intracoronaria mediante cateterismo o por va
(Captulo 8)
transendocrdica. As comenzaron los estudios experimentales en animales, tratando de explicar todos los
mecanismos por los que este proceder podra ser til.
No obstante, an no existen conclusiones, pero se
debe resaltar el hecho de que la terapia celular se ha movido rpidamente del rea experimental a la clnica. Si
bien los datos preliminares apoyan la utilidad de la terapia celular para su aplicacin en la regeneracin del
miocardio isqumico, muchos aspectos quedan an por
dilucidar, lo que ha ocasionado que existan muchas interrogantes sobre este proceder, entre ellas:
S Cul es el mejor tipo de clula por administrar?
S Las clulas deben ser procesadas o administradas
como poblaciones celulares sin purificar?
S Cul es la fuente de clulas ms apropiada?
S Por qu va se administran?
S En qu enfermos se debe aplicar esta terapia: en
agudos o en crnicos?
S Cul es el nmero ptimo de clulas por administrar?
Tipos de clulas madre

En estudios experimentales se han evaluado diversos tipos de poblaciones celulares para su aplicacin en la
terapia celular del corazn, llamada cardiomioplastia.
Las clulas usadas en este proceder han sido las clulas
embrionarias y los mioblastos, y ms recientemente ha
adquirido gran auge la clula madre hematopoytica. Sus
principales caractersticas se muestran en el cuadro 81.
El tipo de clula ms lgico para la terapia celular
sera el cardiomiocito normal, pero se ha demostrado
que el trasplante de cardiomiocitos adultos y fetales da
lugar a injertos muy pequeos que usualmente mueren
despus de implantados, debido a su baja capacidad de
divisin. El mioblasto esqueltico ha sido hasta el momento la fuente de clulas ms usadas, sobre todo en
estudios experimentales, teniendo en cuenta que son
clulas con elevada capacidad proliferativa in vitro, su
propia esencia de ser clulas provenientes del tejido
muscular, por lo que tienen pocas posibilidades de formacin de tumores, y, por otra parte, son de fcil obtencin de forma autloga y muy resistentes a la isquemia.
Los trabajos en que se han empleado modelos animales con cardiopatas tanto agudas como crnicas han
demostrado la capacidad de los mioblastos esquelticos
para lograr un implante duradero cuando se trasplanta
un nmero suficiente de clulas. Entre sus inconvenientes est que el acoplamiento elctrico de estas clulas
implantadas es objeto de controversia, ya que se han detectado arritmias y hasta muerte sbita.
261
Cuadro 81. Clulas usadas en la regeneracin cardiaca

Caractersticas
Necesidad de inmunosupresin
Carcinognesis
Disponibilidad
Transformacin en cardiomiocitos (plasticidad)
Arritmognesis
Problemas ticos
Mioblastos
autlogos
Mioblastos
alognicos
CMH
Clulas
embrionarias
+
+
+
+
?
"
+
+
"
++
+
"
++
"
+
++
Todo esto ha limitado su uso para la terapia celular.

Sin embargo, se han publicado ensayos clnicos en humanos que inyectan mioblastos conjuntamente con
otros procedimientos para revascularizar las coronarias,
y con los cuales se demuestra una mejora de la funcin
miocrdica, sobre todo la funcin sistlica. Se sigue investigando esta fuente de clulas por las potenciales
ventajas que posee.
Las clulas embrionarias tienen la gran ventaja de su
probada capacidad de diferenciacin, pero enfrentan
sobre todo problemas ticos y adems son potencialmente carcinognicas. Por todo esto ha tomado auge el
trasplante de clulas madre provenientes de la MO.
Existen limitaciones tericas para utilizar clnicamentela MO como fuente de clulas madre para regenerar
el miocardio, aunque estas clulas se diferencian hacia
cardiomiocitos, lo que ha demostrado esta potencialidad.
El mecanismo de diferenciacin est condicionado
por la plasticidad de las clulas progenitoras. Ha sido
cuestionado el concepto de plasticidad porque no se observ una verdadera transdiferenciacin, y entonces se
ha propuesto un mecanismo de fusin celular como
posibilidad alternativa. Recientemente se expuso que el
mecanismo que sostiene la terapia celular es ms complejo de lo anticipado y que las clulas progenitoras
liberan factores angiognicos, protegen a los cardiomiocitos de la apoptosis, inducen la proliferacin de los cardiomiocitos endgenos y pueden reclutar a las clulas
madre cardiacas residentes en el corazn. Tambin se
adjudican a las clulas implantadas ciertos efectos paracrnicos que podran contribuir a la produccin de vasculognesis y remodelacin ventricular. Independientemente del mecanismo, s existe un consenso general de
que la terapia celular tiene la potencialidad de mejorar la
perfusin y la contractilidad del miocardio daado.
Es importante demostrar que las clulas implantadas
se han integrado al nuevo microambiente, que tienen las
caractersticas estructurales y bioqumicas del tejido en
que se han transformado, que han sobrevivido y que han
adquirido las funciones del nuevo tejido, as como que
existe un acoplamiento electromecnico completo. Este
acoplamiento entre el msculo cardiaco y las clulas

implantadas puede demostrarse por la expresin persistente de ciertas protenas, como la Ncaderina y la conectina, que se expresan en los cardiomiocitos normales
y permitiran comprobar la invasin de la barrera del
tejido fibroso por las clulas implantadas.
Se sabe que en la MO existe una poblacin celular
muy heterognea, aunque los diversos tipos de clulas
progenitoras, as como los mecanismos de control de su
funcin y diferenciacin, an no han sido bien comprendidos. Se encuentran progenitores hematopoyticos (CD34+), precursores endoteliales (CD 133+), las
clulas mesenquimatosas (del estroma) (CD34), otras
denominadas como poblacin lateral y las clulas progenitoras adultas multipotentes, conocidas como MAPC
por sus siglas en ingls.
Por lo tanto, de los diferentes tipos de clulas madre,
las provenientes de la MO parecen ser hasta el momento
las que muestran mayor capacidad de diferenciarse
hacia fibras musculares cardiacas o clulas endoteliales.
MTODOS DE SEPARACIN
DE CLULAS DE LA MO
Es importante separar una poblacin especfica a la que

se atribuye la capacidad de diferenciarse hacia cardiomiocitos. Se utilizan las clulas totales de la MO, ya que
se plantea que en ellas estn todas las clulas progenitoras con capacidad de transdiferenciacin, y no es necesario emplear mtodos costosos, que requieren manipulacin ex vivo y demoran la aplicacin de esta terapia.
Una vez obtenidas las clulas de la MO pueden emplearse mtodos de aislamiento y seleccin celular, ya
sea por anticuerpos monoclonales para separar poblaciones celulares muy especficas, o por tcnicas de separacin por gradientes de Ficoll, con lo que se obtienen
todas las clulas mononucleares. Las clulas de la MO
pueden ser inducidas a prediferenciarse en miocitos mediante un sistema de cocultivo con cardiomiocitos y la
262
inclusin de 5azacitidina en los cultivos. Estos intentos pueden ser efectivos en el manejo de la remodelacin cardiaca; sin embargo, las pruebas clnicas pueden
verse comprometidas por las mutaciones potenciales
debidas a la 5azacitidina.
Las clulas extradas son colocadas en medios de cultivo que favorecen su diferenciacin y aumentan su nmero. Las CMH pueden obtenerse de la MO con el procedimiento habitual y sta es la fuente ms utilizada.
Pero tambin pueden obtenerse de la sangre perifrica
despus de ser movilizadas mediante el uso de factores
de crecimiento, como el granuloctico (FCG), y macrfagos (FCGM), el factor de clula madre (FCS) o
una asociacin de factores.
El FCG se ha empleado como tratamiento nico en
la etapa isqumica aguda, ya que potencializa el proceso
natural de movilizacin celular posinfarto. Otra fuente
de clulas que se ha empleado es el cordn umbilical,
pero este proceso est an en fase de investigacin.
La regla de oro en relacin con la forma de administracin es trasplantar el nmero suficiente de clulas en
la regin del miocardio daada y alcanzar el mximo de
retencin en clulas de dicha regin. Es importante el
lugar de la administracin, no slo para inyectar con
certeza en el sitio de la lesin, sino porque las clulas
parecen diferenciarse hacia la estirpe celular del sitio en
donde se inyectan.
La mortalidad celular puede ser muy alta cuando se
implantan en el centro de una escara fibrtica, debido a
la disminucin de nutrientes y de oxgeno que tiene el
miocardio isqumico. El implante de las clulas debe
hacerse de preferencia en las reas perifricas (zonas
intermedias entre escaras y miocardio normal); la asociacin con angiognesis teraputica puede mejorar la
sobrevida celular.
(Captulo 8)
La forma transvascular ha sido la ruta ms empleada

en el infarto en fase aguda, cuando el IM es reciente y
se hace reperfusin, momento en que las molculas de
adhesin se expresan de forma significativa.
Va intravenosa
Consiste en la inyeccin de las clulas al torrente sanguneo mediante un catter venoso central. Tiene la ventaja de ser un procedimiento simple, que se puede emplear en casos de infarto agudo. Sin embargo, tiene la
desventaja potencial de que la dispersin de las clulas
hacia otros rganos reduce el nmero de clulas que llegan al miocardio y se adhieren a l. El proceso de incorporacin implica una interaccin clulatejido circundante y clulaclula, lo que trae como consecuencia
que la clula trasplantada se implante en el tejido del receptor.
Infusin intracoronaria
Es similar a la tcnica de cateterizacin, por lo tanto
puede realizarse en cualquier institucin que realice coronariografa. Las clulas se inyectan a travs de un
catter intracoronario y, dependiendo del lugar donde
ste se encuentre, se dispersan por el lecho arterial coronario o se sitan en un rea especfica del miocardio.
Esta tcnica, que se ha empleado en el IM agudo, tambin puede ser muy til en el caso de las miocardiopatas
idiopticas, donde no existe un rea o zona de infarto
bien delimitada, y as las clulas se dispersan a travs de
la circulacin coronaria hacia diferentes reas afectadas. En el caso de un IM, el catter se coloca cerca del
rea de necrosis para depositar un mayor nmero de clulas en esta rea afectada.
Estas pueden ser:
Movilizacin de CMH de la sangre perifrica

Este mtodo reciente ha generado nuevas expectativas;
es el uso de factores estimuladores de la movilizacin
de las clulas madre endgenas sin realizar extraccin,
basndose en la hiptesis de que por un mecanismo de
atraccin estas clulas migran hacia el rea de tejido
daado, donde se asientan y diferencian.
Con ms frecuencia se utilizan progenitores celulares que pueden recogerse por afresis de sangre perifrica, despus de movilizarlos mediante la inyeccin
sistmica de un factor de crecimiento e inyectarlos directamente en el rea afectada o readministrarlos por
va intracoronaria.
Transvascular
Inyeccin directa en el msculo cardiaco
Va endovenosa
Es la inyeccin intracoronaria y la movilizacin de
clulas progenitoras hacia la sangre perifrica.
sta es la ruta requerida en fases ms avanzadas con cardiomiopata isqumica crnica y enfermedad coronaria
avanzada.
Vas de administracin de las clulas

madre en cardiopatas
S
S
S
S
Transepicrdica.
Intracoronaria.
Transendocrdica.
Intravenosa.

Va transepicrdica
Las clulas se inyectan directamente en el miocardio.
En humanos esta va se ha utilizado hasta el momento
en conjunto con una ciruga de revascularizacin o derivacin, o durante la colocacin de un dispositivo mecnico ventricular. La inyeccin de las clulas se hace
directamente en el rea afectada y sus bordes. Tericamente, representa la forma ms precisa de administracin de las clulas y ha sido la forma ms empleada en
los estudios clnicos. Tiene la limitante de que slo se
puede realizar en pacientes que van a ser sometidos a
ciruga de revascularizacin, debido al riesgo quirrgico y anestsico.
La ventaja potencial de este proceder es la posibilidad de visualizar directamente el rea necrtica e inyectar las clulas con mayor precisin, con agujas finas de
calibre, en el rea afectada y en la que la circunda. Se
administran repetidas inyecciones de pequeos volmenes que aportan numerosas clulas. Por esta va tambin se han inyectado CMH por toracotoma mnima en
pocos casos, pero con este proceder se ha observado una
alta frecuencia de arritmias.
Va transendocrdica
Se hace por va perctanea y se emplea un sistema de
mapeo electromecnico mediante un catter denominado cellfix NOGA, que incluye un mtodo de identificacin electrofisiolgica del rea infartada; simultneamente se hace el tratamiento celular, inmovilizando
mediante succin la zona infartada con un sistema desplegable tipo ventosa. As es posible determinar con
precisin qu rea del miocardio es viable y cul no, y
se precisa mejor el sitio de la inyeccin. La desventaja
es lo costoso del sistema y que no todos los centros tienen acceso a l.
Inyeccin a travs de las venas coronarias

Este sistema se basa en el uso de un catter que tiene
incorporado en su punta un sistema de ultrasonido para
guiarlo y una aguja extensible que permite la inyeccin
de las clulas mononucleares en el miocardio. Este mtodo se ha empleado de forma experimental en pacientes con cardiopata isqumica, para inyectar mioblastos
en las reas de miocardio no viables. En contraste con
la va transendocrdica, en que las clulas se inyectan en
forma perpendicular a la pared ventricular, con este sistema se inyectan en forma paralela a la pared del ventrculo y con mayor profundidad. Se debe destacar que la
colocacin del catter en la vena coronaria especfica no
es un procedimiento fcil ni carente de riesgo.
263
La terapia celular tiene indicaciones en diferentes

situaciones:
S Eventos agudos, como el IM y traumas cardiacos.
S Enfermedades crnicas: cardiopata isqumica
crnica, miocardiopatas dilatadas, cardiopata en
el curso de la enfermedad de Chagas.
No existen conclusiones sobre cul es el momento ptimo para efectuar el trasplante de clulas despus de un
IM. Algunos estudios en modelos animales, as como en
humanos, sugieren que el tratamiento con clulas es
ms beneficioso despus del proceso agudo inflamatorio que sigue al IM, pero antes de que comience la fase
activa del remodelado ventricular.
Debido a la fisiopatologa de la evolucin del IM,
parece ser que el momento del trasplante tiene un efecto
sobre el proceso de transdiferenciacin in vivo. Si la
transdiferenciacin es dependiente del medio, como
sugieren algunos trabajos, y las CMH se inyectan en una
zona de escara fibrtica, se diferenciarn hacia fibroblastos, mientras que si se inyectan de forma temprana
en la zona del infarto donde an existe miocardio viable,
esto inducir a las clulas trasplantadas a diferenciarse
hacia clulas musculares y as contribuir a la miognesis. Como la CMH responde de forma diferente a la respuesta inflamatoria del husped y los diversos tipos de
clulas tienen diferentes momentos ptimos para que
ocurra el implante con el mximo de beneficio, se
requiere la realizacin de estudios que permitan esclarecer y definir lo relacionado con el momento ptimo para
la administracin celular.
El nmero de CMH administradas ha variado en los
diferentes experimentos. Para su identificacin se ha
utilizado generalmente el marcador CD34+.
El nmero de clulas depende de:
S Tipo de clula: cuando se administra una poblacin de clulas de la MO sin purificar, su nmero
ha variado entre 1 y 10 x 106 clulas CD34+, mientras que cuando se emplean fracciones celulares
purificadas, como la CD 133+, su nmero ha sido
de 1.5 a 2.8 x 106.
S Fuente de obtencin: en el caso de trasplantes con
clulas movilizadas y obtenidas de la SP, la cantidad ha oscilado entre 13 y 80 x 106 de CD34+, y
entre 4.5 y 63.5 x 109 las de CMN+, 45, nmero
mayor que el que se obtiene de MO.
S Va de administracin: cuando se emplea la va
intravascular, el nmero de clulas requeridas es
mayor por la dispersin celular que ocurre, mientras que en la inyeccin intramiocrdica, ya sea
por va epicrdica o transendocrdica, se utiliza
264

una cantidad menor de clulas. De hecho, se ha
evaluado como una posibilidad el efectuar implantes celulares repetidos cuando se utilizan catteres percutneos.
No existen estudios que comparen el nmero de clulas

administradas con la mejora de la funcin miocrdica.
Con toda seguridad, la continuidad de los estudios en
este campo permitir precisar la cantidad ptima de
clulas por implantar.
Se han comunicado numerosos estudios, la mayora
de los cuales son con escaso nmero de pacientes, varios
carecen de grupo control y no han sido aleatorizados. Se
muestra un resumen de los trabajos ms importantes
publicados, los diferentes procedimientos utilizados,
las vas de inyeccin, la asociacin con ciruga de revascularizacin o la no existencia de dicha asociacin, as
como los principales resultados obtenidos.
En stos se ha demostrado la factibilidad, eficiencia
e inocuidad del proceder, y en su mayora encuentran
una mejora de la funcin ventricular. En un reciente estudio doble ciego y con los pacientes aleatorizados no
se obtuvo mejora de la funcin global del ventrculo izquierdo, aunque se consider que posiblemente s mejore el proceso de remodelado cardiaco despus del infarto.
Los ensayos clnicos han incluido, fundamentalmente, a grupos de pacientes con IM agudo que han recibido
angioplastia e implantacin de frula para reabrir la
coronaria afectada. La va intracoronaria en el IM agudo
es la que ms han empleado los diferentes investigaciones. La experiencia en un grupo de ms de 100 pacientes
en quienes se ha empleado este mtodo sugiere que la
inyeccin intracoronaria de clulas mononucleares de
la MO sin purificacin es segura. La inyeccin no provoc un dao isqumico adicional al miocardio, no produjo reaccin inflamatoria sistmica ni aument el
nmero de reestenosis. Tampoco se asoci con arritmias
supraventriculares. El uso de clulas de MO separadas
con gradiente de Ficoll no produjo calcificaciones intramiocrdicas ni formacin de tumores en un periodo de
observacin de 12 a 18 meses.
En un estudio se encontr incremento en la frecuencia de reestenosis en el grupo de pacientes a los que se
administraron clulas progenitoras obtenidas de la sangre perifrica despus de la administracin de FCGM,
lo que se atribuy principalmente al uso de este factor
de crecimiento para la movilizacin. Este aspecto no
est totalmente esclarecido y es an objeto de estudios.
En otro grupo de pacientes con cardiopata isqumica crnica se inyectaron las clulas directamente en
el msculo cardiaco. Se emplearon la va transepicrdica y la transendocrdica con el objetivo fundamental
(Captulo 8)
de producir angiognesis. En casi todos se utilizaron clulas mononucleares no purificadas, aunque algunos
autores utilizaron la fraccin de clulas con marcadores
CD133+, con el objetivo primordial de producir angiognesis, ya que este antgeno slo se expresa en las CPH
ms inmaduras y en los precursores endoteliales, y
ambas poblaciones colaboran en el proceso de vascularizacin de los tejidos isqumicos. Slo 1% de las clulas nucleadas de la MO tienen este marcador, y por lo
tanto slo se puede obtener un nmero muy pequeo de
clulas para estos objetivos teraputicos.
Ahora bien, entre las limitaciones estn la escasa cantidad de pacientes incluidos en las diferentes series, el
tiempo de seguimiento corto en general y las indicaciones, que no son uniformes. Los procedimientos para
evaluar los resultados no son siempre similares. Hay
series que tratan a pacientes en fase aguda, a otros en
fase crnica y algunos pacientes tienen insuficiencia
cardiaca isqumica no susceptible de trasplante. Tambin varan las vas de administracin, al igual que el
sitio de inyeccin: unas veces se hace intrainfarto y
otras, periinfarto. Estos estudios al final llegan a una
conclusin comn, pues acaban reconociendo que la regeneracin miocrdica en el mbito clnico no ha hecho
ms que empezar, y sern necesarias series ms numerosas estudiadas con una metodologa estricta que permita demostrar que la terapia regenerativa miocrdica,
adems de ser un mtodo factible y seguro, es una tcnica eficaz.
Por ello se requiere disear investigaciones que permitan avalar los resultados, cumpliendo todos los requerimientos necesarios. Para muchos, los estudios clnicos han sido precoces, y arguyen que todava no se
conocen exactamente los mecanismos mediante los
cuales acta la terapia celular; para otros esto se justifica
por las ventajas potenciales que ofrece este tipo de tratamiento. Lo cierto es que, en este campo, la clnica ha ido
por delante de la investigacin bsica, ya que hay muchos aspectos que requieren ser precisados, como la
duracin del implante, la capacidad de las clulas implantadas para diferenciarse y mantener el fenotipo de
cardiomiocitos y al mismo tiempo integrarse al miocardio que sirve de hospedero y contribuir a mejorar la funcin contrctil. La respuesta de las clulas implantadas
a los estmulos fisiolgicos y patolgicos tambin necesita ser evaluada.
La teraputica ptima posiblemente se base en trasplantar diferentes fracciones de clulas que se complementen unas a otras para lograr restaurar la funcin del
miocardio, as como usar una combinacin de factores
estimuladores de la movilizacin de clulas madre endgenas.

Recientemente se efectu una reunin de consenso
de la Sociedad Europea de Cardiologa sobre la investigacin clnica con clulas madre adultas autlogas para
el tratamiento de cardiopatas. En ella se sealaron los
problemas investigativos que se mantienen en este campo y se hicieron recomendaciones sobre las investigaciones que se consideran ms apropiadas en la actualidad.
Se seal que el tratamiento con las clulas madre autlogas, en la etapa actual, no se puede recomendar todava
para su uso en la prctica clnica habitual, por lo que se
aconseja continuar las investigaciones en esta rea.
El desarrollo de estudios en animales que permitan
evaluar muchos de los aspectos sealados y el desarrollo de ensayos clnicos aleatorizados y controlados con
mayor nmero de pacientes contribuirn a definir el
papel definitivo de la cardiomioplastia celular. Las
clulas madre del adulto tienen gran aceptacin para la
regeneracin miocrdica y el tratamiento de la enfermedad cardiaca isqumica. La divisin de la clula madre
es asimtrica, ya que se divide en una clula madre y
una clula diferenciada. Las clulas madre embrionarias son pluripotentes en su capacidad de diferenciacin, mientras que las clulas madre del adulto son unipotenciales para diferenciarse slo en las clulas
especializadas del tejido de origen, y se llaman clulas
madre somticas.
Sin embargo las clulas madre hematopoyticas pueden generar clulas no hematopoyticas, como cardiomiocitos, hepatocitos, clulas endoteliales y epiteliales.
La transdiferenciacin de las clulas madre hematopoyticas (HSC) que rebasan los lmites del linaje se denomina plasticidad de la clula madre. Las HSC provienen
de tres fuentes: mdula sea, sangre perifrica y cordn
umbilical. Las clulas madre de la mdula sea tienen
dos fenotipos: el primero genera la lnea hematopoytica tradicional CD34+/CD45+/CD133+, mientras que el
segundo corresponde a las clulas madre mesenquimatosas (MSC) CD34/45/133, que tienen la capacidad
de regenerar el estroma medular, y a clulas de estirpe
mesodrmica como condrocitos, osteocitos, adipositos
y miocitos.
En muchos pacientes, la ruptura repentina de la
superficie endotelial de una placa aterosclertica localizada conduce a la formacin del trombo con la obstruccin aguda del receptor coronario. Despus del IAM,
una gran cantidad de cardiomiocitos que mueren por
necrosis o apoptosis no pueden regenerarse de forma
fisiolgica, y se forma una fibrosis o una cicatriz fibrosa
transmural. Las clulas madre de la mdula sea son
fcilmente accesibles y proporcionan excelentes fuentes de clulas con capacidad de divisin asimtrica y
plasticidad para la regeneracin miocrdica.
265
El fenotipo del cultivo in vitro de las MSC demuestra

una combinacin tpica de las molculas de superficie
CD73 (SH3, SH4), CD90 (Thy1) y CD105 (SH2). Las
clulas madre que expresan CD146 (Muc18) son especficas de linaje endotelial (EPC). Las clulas madre
multipotentes del adulto (MAPC) CD34/133+/Flk1+ de
origen mesodrmico tambin ofrecen un excelente
reservorio para la terapia celular, ya que se pueden diferenciar en adipocitos, osteoblastos, clulas endoteliales,
hepatocitos y miocitos in vitro. Las clulas madre del
adulto implantadas para la regeneracin miocrdica tienen la capacidad de angiognesis y miognesis. Se ha
observado que la infusin intravenosa de clulas CD34+
induce la formacin de vasos sanguneos dentro del rea
del infarto.
Otro factor que considerar es la supervivencia de las
clulas cuando se inyectan en el miocardio isqumico,
ya que es probable que la mayora de ellas no sobrevivan y la tasa de supervivencia se calcula entre 0.1 y
10%. El miocardio isqumico proporciona un ambiente
hostil debido a hipoxia local, acidosis, carencia de sustratos y acumulacin de metabolitos. Los mioblastos esquelticos son muy resistentes a la isquemia, pero poco
se sabe sobre las necesidades energticas de las clulas
madre. Adicionalmente, el miocardio necrtico est
infiltrado de clulas fagocticas e inmunolgicas. Aunque las clulas madre usadas son autlogas, pueden ser
fagocitadas en este proceso inflamatorio.
Las fuerzas mecnicas tambin se convierten en un
obstculo que vencer, ya que la presin transmural es
elevada durante la sstole y los cardiomiocitos en formacin se contraen. Los mioblastos esquelticos pueden resistir la contraccin, a diferencia de las clulas
madre no musculares. Se ha demostrado que si se transfectan las clulas estromales medulares con el gen para
la protena antiapopttica AKT, se incrementa la supervivencia celular y la capacidad regeneradora en el miocardio infartado.
Las miofibrillas esquelticas cultivadas e implantadas posteriormente en el miocardio afectado pueden
sobrevivir en el tejido del infarto, pero no integran completamente el sincitio funcional miocrdico. Se puede
inducir la movilizacin de las clulas madre al sitio de
lesin administrando factor estimulante de colonias de
granulocitos (GCSF), ya que puede movilizar clulas
madre de mdula sea al corazn isqumico; sin embargo, los leucocitos maduros tambin son reclutados en
el sitio de lesin y se ha observado incremento en la tasa
de reestenosis de frulas intracoronarias (figura 86).
Todas las clulas madre de origen embrionario o adulto comparten varias caractersticas, son capaces de generar clulas madre con propiedades similares a las de ellas
Msculo
Clulas
endoteliales
progenitoras
Inyeccin
sistmica
Inyeccin
intracoronaria
Catter
trasendocrdico
Mononucleares
Mdula sea
(Captulo 8)
SISTEMA VASCULAR PERIFRICO

Mioblastos
Sangre
266
Ciruga
cardiaca
Clulas madre
hematopoyticas
Clulas madre
mesenquimales
Ciruga
cardiaca
Movilizacin
(GCSF)
Figura 86. Clulas empleadas para la regeneracin miocrdica. Se muestran las clulas ms comnmente utilizadas y su potencial angiognico y miognico.
mismas y adems son clonognicas porque pueden formar colonias con idntica informacin gentica; tambin
son capaces de diferenciacin en tejidos maduros. Las
clulas madre embrionarias se obtienen de blastocistos.
El blastocisto genera la masa celular interna que da origen a las tres lneas germinativas, mientras que las clulas exteriores forman el trofoectodermo y la placenta.
Las clulas madre embrionarias humanas (hESC) expresan los antgenos de superficie: antgeno embrionario especfico de estado 3 (SSEA3), SSEA4, Tra1
60 y Tra181, el factor de transcripcin embrionario
Oct4, fosfatasa alcalina y la riboenzima telomerasa.
Las propiedades ms prometedoras de los cultivos de
hESC son su potencial de diferenciarse in vitro de todas
las clulas derivadas de las tres capas germinales embrionarias.
Incorporacin de las hESC a cardiomiocitos
Las hESCs forman tres capas denominadas cuerpos embrionarios (EBs) que contienen las tres capas germinativas: endodermo, ectodermo y mesodermo. Se ha demostrado que los cardiomiocitos generados con los EB
expresan los factores de transcripcin GATA4 y Nkx2.5
y genes cardiacoespecficos como troponina I y T, pptido natriurtico auricular y cadenas ligeras de miosina
auricular y ventricular (MLC), as como cadenas pesadas de miosina especficas del msculo cardiaco, a actinina, desmina, troponina I cardiaca y sarcmeros bien
desarrollados. Ciertos factores de transcripcin como
BMP10, Foxp1 y TBX5 aceleran la maduracin celular.
Se report un caso exitoso de trasplante de clulas madre autlogas en el miembro inferior isqumico de un
paciente de 72 aos de edad con arteriosclerosis obliterante crtica. El tratamiento habitual no consigui mejora y el dolor de reposo se increment progresivamente,
por lo que existan criterios para una amputacin mayor.
En estas condiciones se emple el nuevo mtodo de terapia celular mediante la implantacin de clulas mononucleares de su MO en el miembro inferior isqumico.
A las 72 h de realizado el implante se apreci una
marcada mejora del dolor, del edema, de la temperatura
cutnea y de la eritrocianosis, mejora que aument progresivamente, y se evit la amputacin de la extremidad
isqumica. La evaluacin realizada a las 4 y 24 semanas
mostr significativa mejora del estado clnico y las
pruebas funcionales. Este caso sirve de ejemplo de las
ventajas que puede ofrecer el tratamiento con clulas
madre adultas autlogas en el manejo de los enfermos
con isquemia crnica de los miembros inferiores y su
contribucin a disminuir la necesidad de amputacin de
la extremidad isqumica.
La terapia celular con clulas madre puede influir en
la liberacin de factores de crecimiento o reclutar clulas madre endoteliales capaces de actuar directamente
en el mecanismo angiognico. La implantacin de clulas mononucleares de mdula sea autloga resulta
segura y efectiva en la teraputica angiognica, debido
a la propiedad natural de las clulas de la mdula sea
de proporcionar, entre otras, clulas progenitoras endoteliales y tambin de secretar varios factores angiognicos y citocinas.
La terapia celular ha mostrado la efectividad del trasplante autlogo de clulas mononucleares de MO en los
miembros isqumicos de pacientes con arteriosclerosis
obliterante o tromboangetis obliterante. La rpida respuesta inicial en estas patologas se debe a la liberacin
por las clulas madre implantadas de citocinas con actividad antiinflamatoria o vasodilatadora, o ambas. La
mejora en la vascularizacin del miembro isqumico se
debe a la capacidad tanto regenerativa como angiognica de las clulas madre implantadas.
Las clulas mononucleares CD34+ de la MO contienen clulas madre endoteliales con capacidad de sintetizar varios factores de crecimiento angiognico, que
incluyen factores de crecimiento del endotelio vascular
y angiopoyetinas. Estas clulas tambin tienen la capacidad de mejorar la vasodilatacin dependiente del
endotelio en pacientes con isquemia vascular perifrica.
267
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270
(Captulo 8)
Captulo
Aspectos inmunolgicos
INTRODUCCIN
la actualidad se trasplantan ms de 30 000 pacientes al

ao en todo el mundo. La seleccin de la fuente y el tipo
de trasplante estn determinados por diferentes factores. Las clulas madre hematopoyticas (CPH) son
capaces de reconstruir de manera integral la hematopoyesis; se caracterizan adems por su capacidad de autoduplicarse, por la expresin de los antgenos CD34,
CD45RAO y tHY1, y no expresan antgenos mieloides
y linfoides T y B ni antgenos HLADR. Representan
cerca de 1 a 2% del total de clulas de la mdula sea,
y en condiciones normales la dcima parte de este total
circula en sangre perifrica.
El trasplante de clulas madre hematopoyticas de
sangre perifrica (TCPH) es una variante del trasplante
de clulas madre hematopoyticas de mdula sea
(TMO*) y se ha desarrollado gracias a la disponibilidad
de los factores de crecimiento hematopoyticos; gracias
a su uso se ha logrado incrementar la concentracin de
estas clulas en sangre perifrica hasta 25 veces, y en
esta fase las clulas madre o progenitoras (CP) son coleccionadas por una o mltiples leucofresis de flujo
continuo. Esto se ha desarrollado principalmente en el
campo de la oncohematologa para el tratamiento de hipernefromas, inmunodeficiencias congnitas, mieloma
mltiple, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide
crnica, linfoma no Hodgkin, enfermedad de Hodgkin
y artritis reumatoide, y son ms frecuentes los trasplantes autlogos, en los que el paciente es al mismo tiempo
el donante y el receptor de estas clulas que son responsables del injerto postrasplante, aunque en los ltimos
aos se han incrementado los trasplantes alognicos,
donde el donador es otra persona. Para la obtencin de
La sangre es un tejido conectivo lquido constituido por

eritrocitos y leucocitos suspendidos en el plasma sanguneo, circula por el sistema vascular transportando
oxgeno y nutrientes, y a la vez transportando para su
excrecin dixido de carbono y productos de desecho.
Adems de estas funciones, interviene en la distribucin
de hormonas desde sus lugares de origen hasta sus rganos blanco. Los diferentes tipos de leucocitos estn
transitoriamente en la sangre, pues migran por los capilares y las vnulas para convertirse en clulas libres en
el tejido conectivo, y es aqu donde realizan sus funciones. El volumen de la sangre en el hombre es de unos 5
L y ocupa 7% del peso corporal total. El hematocrito es
el porcentaje del volumen de la sangre que ocupa la
fraccin de los glbulos rojos. Las cifras normales de
hematocrito en humanos oscilan entre 37 y 54%, con
promedio de 45% dependiendo de diversos factores fisiolgicos, como edad, sexo y condicin fsica del sujeto. Los leucocitos y las plaquetas ocupan 1% y el resto
est constituido por el plasma sanguneo (55%). La
albmina es la protena ms abundante (32 a 34 g/L) y
mantiene el equilibrio osmtico de la sangre. El trasplante de clulas madre hematopoyticas consiste en
aplicar clulas obtenidas de mdula sea, sangre perifrica, cordn umbilical o hgado fetal, a un paciente que
ha sido previamente preparado para recibir el injerto.
Este procedimiento se ha convertido en una modalidad
teraputica para una gran variedad de enfermedades,
como hemopatas malignas, anemia aplsica, inmunodeficiencias y un gran nmero de tumores slidos. En
* Conocidas como clulas madre hematopoyticas (HSC).
271
272
las CP no es necesario trasladar al paciente a la unidad

quirrgica ni aplicar anestsico alguno; la recuperacin
hematolgica se obtiene en un tiempo menor que el observado en el TMO y por lo tanto disminuye el empleo
de componentes de la sangre, acortndose la estancia
hospitalaria, lo que hace que sea menos costoso. Los pacientes sometidos a trasplante de clulas hematopoyticas experimentan un periodo prolongado de disfuncin
inmunolgica que puede persistir por un ao o ms, con
una afectacin tanto de la inmunidad celular como humoral. Esto hace que tengan un riesgo elevado de infecciones en el periodo postrasplante. Despus del acondicionamiento hay una prdida de la memoria de
inmunidad acumulada durante toda la vida a la exposicin a agentes infecciosos, ambientales y vacunaciones.
El tratamiento de las infecciones se hace difcil, debido
a la pobre respuesta inmunitaria presente. Una de las herramientas para limitar el riesgo de infeccin es el uso
de vacunas, aunque su efectividad se ve limitada por la
inmunidad disfuncional que caracteriza a este periodo.
El trasplante de clulas hematopoyticas es una opcin teraputica para muchas enfermedades. Los tratamientos preparatorios convencionales estn asociados
con una elevada morbimortalidad por toxicidad sobre
rganos y tejidos, lo que limita su indicacin a individuos jvenes y en un estado de salud competente. Ante
la evidencia de induccin de una nueva remisin con
infusin de linfocitos del donante en pacientes que recayeron despus de un trasplante alognico, el benfico
papel del efecto injerto contra tumor sent las bases del
desarrollo de tratamientos preparatorios menos agresivos, no mieloablativos pero s intensamente inmunosupresores, que permitieran lograr la toma del injerto y un
estado de quimerismo mixto que pudiera modularse a
un estado de quimera total. Los resultados demuestran
que puede lograrse el implante despus de un tratamiento no mieloablativo, como se hace en la actualidad en el
grupo de los autores de terapia celular, medicina regenerativa y antienvejecimiento. Los autores se han dado
cuenta de que con la aplicacin de clulas madre pluripotenciales y multipotenciales alognicas no existen
problemas de incompatibilidad o rechazo inmunolgico. Esta afirmacin ya est demostrada cientficamente,
como consta en publicaciones como la de Barrett AJ y
col. (New developments in allotransplant immunology.
Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2003:
350371). Aunque por los antiguos paradigmas de la
inmunologa clsica es muy reciente y difcil de aceptar
que no exista rechazo inmunolgico con el trasplante de
clulas madre multipotenciales alognicas, debe aceptarse que el conocimiento mdico y cientfico es modificable a medida que se hacen nuevos descubrimientos.
(Captulo 9)
El estudio del quimerismo en el trasplante alognico de

clulas hematopoyticas permite conocer si el sistema
linfohematopoytico del donante ha sido capaz de implantarse en el organismo del receptor, y si lo hace desplazando totalmente al sistema linfohematopoytico
del receptor o en coexistencia con ste. Con la PCR para
amplificar zonas del DNA sumamente polimrficas se
demuestra el estudio molecular del quimerismo en pacientes con diferentes patologas malignas y no malignas. Desde que se comenz a realizar el trasplante hematopoytico se admiti la importancia de conocer el
establecimiento de quimerismo. Con la PCR se realizan
estudios de la evolucin de la quimera, se relaciona el
grado de quimerismo establecido con el comportamiento del injerto y de la enfermedad de injerto contra hospedero en los diferentes regmenes de acondicionamiento.
Tambin ha posibilitado la deteccin precoz de la recada en los pacientes trasplantados y la administracin
oportuna de inmunoterapia adicional. Finalmente, se
presentan las recomendaciones de la Sociedad Americana de Trasplante de Sangre y Mdula sea para estandarizar el estudio del quimerismo en los diferentes centros de tratamiento. Mxico tiene 0.03 donadores de
mdula sea por cada 10 000 habitantes, mientras que en
pases como Australia hay 83 donadores por la misma
cantidad de habitantes. Las clulas madre hematopoyticas (CPH) se localizan en la mdula sea, en la sangre
placentaria y en el cordn umbilical.
El trasplante de CPH es til para el tratamiento de enfermedades como leucemias agudas, crnicas y linfomas de alto riesgo que no se curan con quimioterapia y
radioterapia y que son producidas por alteraciones genticas, as como otras enfermedades de la sangre, como
la anemia aplsica severa, la anemia de Fanconi, el sndrome mielodisplsico y el mieloma mltiple, adems
de otras enfermedades genticas o errores innatos del
metabolismo. Existen tres fuentes de CPH que se emplean para la donacin:
a. La cavidad del hueso ms grande del cuerpo, que
es la pelvis.
b. La sangre perifrica movilizada (para ello se inyecta subcutneamente un factor de crecimiento
que moviliza a las CPH, llevndolas de la mdula
sea hacia la sangre), procedimiento similar al de
la donacin de plaquetas y por medio del cual se
obtienen las clulas por afresis.
c. La sangre del cordn umbilical. Para el trasplante
de mdula sea se requiere encontrar un donador
idntico al paciente, ya sea en su propia familia o
en los registros internacionales de donadores de
mdula sea.
Aspectos inmunolgicos de la terapia celular

Debido a que la herencia del Complejo HLA (human
leukocyte antigen), que son los genes relevantes para los
que se busca la identidad, es al azar, entre 60 y 70% de
los pacientes no encuentran en su familia un donador
compatible. Adems, debido a la extraordinaria diversidad gentica, no es fcil encontrar un donador compatible fuera de la familia. La compatibilidad donantepaciente depende de los genes de histocompatibilidad HLA
localizados en el cromosoma 6, que heredamos de nuestros padres. Se han descrito ms de 2 000 variantes de
HLA; por ello, la probabilidad de que un paciente tenga
un donador hermano HLA compatible es menor de 25%,
y de 30 a 35% con los padres. Por esta razn a partir de
1974 se crearon los Registros Internacionales de Donadores no Relacionados de Mdula sea (DONORMO).
Otra fuente de obtencin de CPH para trasplantes,
principalmente en nios, es la sangre placentaria. Las
clulas CPH obtenidas de esta fuente pueden restaurar
la funcin de la mdula sea siempre que la compatibilidad de los genes de histocompatibilidad HLA sea adecuada y que la dosis sea suficiente para el peso del
paciente, pues slo se puede extraer un nmero limitado
de clulas del cordn. En Mxico la Fundacin Comparte Vida cre en 2001 el Banco Altruista de Clulas
de Cordn Umbilical (BACECU), que alberga 70 unidades donadas en forma altruista y perfectamente caracterizadas desde el punto de vista de genes HLA y de factores de riesgo. Si no se encuentra donador para un
paciente en el DONORMO y el BACECU, se recurre a
los registros agrupados en la Red Internacional World
Marrow Donors Association (WMDA) y Bone Marrow Donors Worldwide (BMDW), que constituyen la
red mundial en la que estn incorporados los 57 registros de donadores altruistas, que en noviembre de 2005
alcanzaron la cifra de 10 millones de donadores existentes en el mundo, as como los 37 bancos de cordn umbilical pblicos que cuentan con el registro de 200 000
unidades de todos los bancos. Se incluyen aqu DONORMO y BACECU. La mayora de los trasplantes de
cordn umbilical de unidades no emparentadas en Mxico se han realizado en el contexto de la Fundacin
Comparte Vida, con 42 unidades de sangre placentaria
de bancos extranjeros y 2 de BACECU. Existe un
debate sobre los aspectos ticos y legales de la existencia de bancos privados de clulas madre, ya que stos
cobran elevadas cuotas por colectar y mantener las clulas viables, a pesar de que de acuerdo con el Grupo Europeo de tica (EGE), la probabilidad de necesitar un
trasplante autlogo es de 1 en 20 000 durante los primeros 20 aos de vida, y no se ha demostrado que las clulas que se usan para trasplante conserven sus propiedades
biolgicas y funcionales por ms de 15 aos a 196 _C.
273
Por otro lado, los bancos privados deben informar con

precisin que las enfermedades para las cuales se podra
usar el cordn autlogo son las mismas que para las que
se usa el trasplante alognico (de una persona genticamente distinta al paciente). Tambin se ha demostrado
que no puede usarse cordn autlogo para pacientes con
leucemias o enfermedades genticas, pues se vuelven a
reintroducir los genes mutados portadores de la enfermedad; por esta razn la terapia celular con clulas madre alognicas multipotenciales genticamente sanas es
el tratamiento de eleccin. Como se hace en la Sociedad
Internacional para la Terapia Celular con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y el Antienvejecimiento, S.
C. (SITECEM).
En terapia celular linfohematopoytica, quimerismo
significa la presencia de clulas no propias del receptor
que aparecen como resultado de un trasplante alognico. Antes se crea que para que este fenmeno ocurriera era necesaria la inmunosupresin, mieloablacin o
inmunodeficiencia en el receptor y la presencia de clulas hematopoyticas del donante, pero ahora se sabe que
las clulas madre pluripotenciales no inducen rechazo
inmunitario. El estudio del quimerismo linfohematopoytico ha salido del marco de los laboratorios de investigacin y se ha convertido en una importante herramienta clnica en la evaluacin del xito o el fracaso de
los trasplantes de clulas hematopoyticas. Mediante
estos estudios se puede saber si el sistema linfohematopoytico del donante ha sido capaz de implantarse en el
receptor, y si lo ha hecho desplazando al sistema linfohematopoytico del receptor o coexistiendo en equilibrio con ste. De esta manera, mediante determinaciones secuenciales, es posible conocer la evolucin o
comportamiento de la quimera con vistas a confirmar el
fallo primario del injerto, o conocer, antes que otros indicadores se manifiesten, que puede haber un fallo secundario del mismo. Adems, pueden estudiarse los
efectos de los diferentes regmenes de acondicionamiento y terapias de profilaxis sobre la toma o el fallo
del injerto, as como relacionar el grado de quimerismo
establecido con la enfermedad de injerto contra hospedero (EICH) y la actividad de injerto contra leucemia
(AICL). Segn la presencia de clulas del donante en el
receptor, el quimerismo puede clasificarse como: quimerismo total o completo (QC), donde todas las clulas
que se detectan proceden del donante; quimerismo mixto (QM), en el que coexisten clulas del donante y el
receptor en un compartimiento celular dado; quimerismo dividido, cuando una o ms lneas celulares proceden en su totalidad del donante y a su vez una o ms
proceden totalmente del receptor, y microquimerismo,
en el que existe menos de 1% de clulas del donante.
274
Este grado de quimerismo slo se puede detectar cuando se utilizan tcnicas muy sensibles.
El tipo o grado de quimerismo encontrado en un momento dado depende de la sensibilidad de la tcnica empleada, y se hace necesario analizar el quimerismo en
las diferentes lneas celulares debido a que slo es posible detectar el quimerismo dividido cuando se separan
las lneas celulares para su anlisis. Antes no se poda
detectar el tipo de quimerismo debido a que se utilizaban tcnicas poco sensibles con bajo grado de polimorfismo que requeran que el donante y el paciente fueran
de sexo diferente. En la actualidad existen tcnicas
mucho ms sensibles, como el anlisis por fluorescencia de la hibridacin in situ (FISH) de los cromosomas
X y Y y la amplificacin de pequeas zonas del DNA
muy polimrficas (VNTR o STR, por sus siglas en
ingls) mediante la tcnica de la reaccin en cadena de
la polimerasa (PCR). El polimorfismo de los VNTR y
de los STR es una caracterstica hereditaria y por esto
siempre se estudian varios VNTR o STR en el paciente
y el donante (que en general son hermanos) con el objetivo de encontrar los que sean diferentes y, por lo tanto,
tiles para el estudio del quimerismo. La introduccin
de la tcnica de la PCR como mtodo rpido para multiplicar estas zonas ha proporcionado una poderosa herramienta para el estudio del quimerismo. Su principal
ventaja es la gran sensibilidad, que permite detectar
pequeas poblaciones de clulas del donante o del receptor. Con esta tcnica es posible realizar un estudio cintico del comportamiento del injerto, e incluso encontrar
evidencias de un injerto establecido antes de que aparezcan las evidencias morfolgicas. En los estudios de quimerismo con la tcnica de la PCR aumenta la sensibilidad cuando se estudian las lneas celulares separadas, lo
que permite alcanzar mayor exactitud en la evaluacin de
los diferentes regmenes de acondicionamiento. Por
ejemplo, un caso puede tener 10% de clulas T en los leucocitos de la sangre perifrica y 3% de estas clulas en la
mdula sea (hecho no poco comn despus de un trasplante alognico). Cuando se realiza la determinacin en
mdula sea, el quimerismo resulta ser prcticamente del
donante, mientras que en sangre perifrica se puede apreciar un quimerismo mixto, aunque no se pueden determinar las lneas celulares involucradas, lo que limita la utilidad del anlisis.
ERITROCITOS
Son pequeos corpsculos que le dan a la sangre su color rojizo; se desarrollan en la mdula sea y antes de
(Captulo 9)
entrar en la circulacin pierden su ncleo y organelos,

quedando as reducidos a plstides cuyo citoplasma est
formado principalmente de hemoglobina (Hb); gracias
a esto los eritrocitos se especializan en transportar oxgeno de los pulmones a los tejidos y dixido de carbono
de los tejidos a los pulmones. La metahemoglobina reductasa reduce la ferrohemoglobina a metahemoglobina para volver a captar oxgeno. Obtiene su energa por
medio de la gluclisis. El nmero normal de eritrocitos
por mililitro de sangre es de alrededor de 5.4 millones
en los hombres y de 4.8 millones en las mujeres. El eritrocito tiene forma de disco bicncavo de 7.5 mm de dimetro y 1.9 mm de grosor. La forma de los eritrocitos es
sensible a diferentes factores del medio; por ejemplo, en
una solucin hipotnica se hinchan y se hacen unicncavos y en una solucin hipertnica se estiran y se hacen
permeables o se rompen, permitiendo que escape la hemoglobina; esta ruptura se llama hemlisis. Su forma
bicncava favorece el intercambio de gases, les proporciona elasticidad y gran resistencia osmtica.
La hemopoyesis es la formacin de clulas sanguneas y tiene lugar en los tejidos u rganos hemopoyticos, de los cuales el ms importante es la mdula sea;
despus del nacimiento all se forman todos los eritrocitos, trombocitos (plaquetas), leucocitos granulares, monocitos y parte de los linfocitos, pero el resto se origina
en los tejidos y rganos linfoides (timo, ndulos linfticos y bazo). Los rganos hemopoyticos estn compuestos por un estroma de clulas sanguneas y sus estadios inmaduros. Los leucocitos abandonan el torrente
sanguneo, dado que ejercen sus principales acciones en
los tejidos conectivos donde, despus de transformarse
en otros tipos celulares, finalmente mueren. A la vez
que forman clulas sanguneas, los tejidos hemopoyticos tambin las degradan.
Origen y desarrollo de
las clulas sanguneas
Las primeras seales de hemopoyesis aparecen en el ser
humano hacia la segunda semana de vida en la pared del
saco vitelino, donde aparecen en el mesnquima pequeas agrupaciones de clulas hemopoyticas denominadas islotes sanguneos. La hemopoyesis fetal vara paulatinamente su localizacin hasta ubicarse en el hgado,
que es el sitio principal de la formacin de la sangre,
hacia el tercer mes de vida fetal y forma casi con exclusividad eritrocitos. Los eritrocitos que se forman en el
saco vitelino se denominan eritroblastos primitivos y
dan origen a eritrocitos nucleados. Hacia el quinto mes
de vida disminuye la hemopoyesis en el hgado y el
bazo. La mdula sea pasa a ser el rgano hemopoytico

central de los ltimos meses de vida fetal y durante toda
la existencia despus del nacimiento. Todas las clulas
sanguneas se originan a partir de una clula madre comn, que aparece primero en el saco vitelino. Se cree
que el pasaje de la hemopoyesis en el hgado, el bazo y
la mdula sea tiene lugar por el transporte de clulas
madre por va hematgena de uno a otro rgano hemopoytico.
El saco vitelino se forma a partir del hipoblasto, delgada membrana de clulas endodrmicas que al poco
tiempo se extienden para revestir por completo la superficie interna del trofoblasto. Estas clulas constituyen el
saco vitelino primario, que a los 12 o 13 das se desintegra y deja tras de s un saco vitelino secundario ms pequeo, adherido al embrin y rodeado de esplacnopleura. A medida que se suceden los pliegues embrionarios,
el saco vitelino constituye parte del intestino primitivo
intraembrionario y del conducto vitelino, ubicado en el
cordn umbilical. Durante el desarrollo posterior del
cordn umbilical, el conducto vitelino se atrofia, se
oblitera y desaparece. El saco vitelino funciona como
principal centro hematopoytico en las semanas 3 a 5 de
desarrollo; participa poco tiempo en la nutricin y respiracin del embrin. En su piso se forman las clulas germinales primordiales.
La alantoides es un divertculo del intestino posterior
caudal al saco vitelino recubierto de mesodermo extraembrionario del pedculo de fijacin embrionario. A
partir de este mesodermo se forman vasos sanguneos
que al ponerse en contacto con el sistema vascular del
corion constituyen la futura circulacin fetoplacentaria
(vasos umbilicales). En el humano la alantoides es pequea y desaparece cuando el cordn umbilical se organiza, excepto en la porcin intraembrionaria, que se extiende desde el intestino posterior al anillo umbilical
para formar el uraco (ligamento umbilical medio).
El cordn umbilical establece la unin entre el cuerpo del feto y la placenta. Su formacin se inicia al organizarse el pedculo de fijacin, que origina los vasos
alantoideos (futuros vasos umbilicales). A medida que
la regin ventral del cuerpo embrionario se cierra, el
saco vitelino se une al pedculo de fijacin. Estos elementos quedan envueltos por la gelatina de Wharton y
el amnios, que circunscribe el anillo umbilical y se adosa a lo largo de todo el cordn como su cubierta. El cordn umbilical est constituido originalmente por las siguientes estructuras: saco vitelino, vasos vitelinos,
alantoides, vasos alantoideos, rodeadas por gelatina de
Wharton y el amnios. En la sexta semana la cavidad celmica y el intestino medio primitivos del feto se localizan en el cordn umbilical y se les denomina hernia
fisiolgica. Cuando el intestino regresa al abdomen (se-
275
mana 10) esta cavidad se oblitera por completo. Al nacimiento el cordn umbilical mide 50 cm de longitud y 1.5
cm de dimetro.
Todas las clulas sanguneas se originan a partir de
una clula madre hemopoytica comn, que se denomina clula madre hemopoytica pluripotencial y se
define como una clula capaz de dar origen a cualquiera
de las clulas sanguneas y de mantener su propia existencia por divisiones mitticas. Representan slo una
porcin muy pequea de la cantidad total de las clulas
nucleadas de la mdula sea. Slo alrededor de 5 a 10%
sufren divisiones, dado que el resto permanece en estado latente en la fase G0 del ciclo celular. Las clulas
madre pluripotentes poseen gran capacidad proliferativa cuando son estimuladas en relacin con el aumento
de la necesidad de produccin. La clula madre linfoide
y la clula madre mieloide son multipotentes, puesto
que dan origen a linfocitos y al resto de los elementos
figurados. Por la proliferacin de las clulas madre multipotentes se forman clulas madre unipotentes especficas de lnea. As, la clula madre linfoide da origen a
clulas madre para linfocitos T y a clulas madre para
linfocitos B, donde tiene lugar la maduracin de los linfocitos T no comprometidos. La clula madre mieloide
tambin se denomina unidad formadora de colonias de
granulocitos, eritrocitos, monocitos y megacariocitos
(UFCGEMM o UFCMIX), por su capacidad de formar colonias de clulas en cultivo. Las clulas madre
(stem cells) tambin se denominan clulas formadoras
de colonias (CFC). Las clulas madre con gran capacidad de formar colonias con rapidez tambin se conocen
como clulas formadoras de estallido (UFE) (burst en
ingls, BFU).
De las clulas madre mieloides se diferencian clulas
madre especficas de las lneas de eritrocitos (UFCE),
megacariocitos (UFCMeg), granulocitos y monocitos
(UFCGM). La mdula sea es un microambiente inductor de la hemopoyesis especial. Se cree que esto se
debe a que el estroma de la mdula sea, compuesto por
clulas reticulares, macrfagos, adipocitos, matriz extracelular y clulas endoteliales capilares, es necesario
para el crecimiento y la diferenciacin de las clulas
hemopoyticas. En consecuencia, no es posible mantener la hemopoyesis en un cultivo celular si primero no
se hace crecer una capa de estas clulas de adhesin a
partir de estroma de la mdula sea. Algunos de estos
factores son sintetizados y secretados por las clulas del
estroma; en especial se cree que el estado de equilibrio,
en condiciones normales, est condicionado por citocinas.
La proliferacin, diferenciacin y apoptosis son procesos centrales para la homeostasis celular. Estos procesos se regulan mediante encendido y apagado de grupos
276

Reticulocitos
Proeritroblasto
Eritroblasto
basfilo Eritroblasto
policromtico
Eritroblasto
ortocromtico
Eritrocito
Figura 91. Estadios de maduracin del eritrocito. Se
observa la expulsin del ncleo del eritroblasto ortocromtico.
de genes que permiten en parte y de manera regulada el

control de cada una de las distintas etapas del ciclo celular. En la actualidad se ha realizado una gran cantidad
de estudios en lneas celulares transformadas que pueden ser manipuladas e inducidas a diferenciarse.
A pesar de su invaluable contribucin al conocimiento, estas clulas poseen a menudo un genoma poliploide
(un incremento en el nmero normal de cromosomas)
que limita parte de los estudios que se realizan en ellas.
Una alternativa muy atractiva es la utilizacin de clulas
madre, tanto embrionarias como adultas, para el estudio
de los procesos ligados a la proliferacin y diferenciacin celular.
Una vez que la clula toma la ruta para diferenciarse
como megacariocito, el control del ciclo celular se
vuelve un factor crtico para la endorreplicacin responsable del fenotipo poliploide de los megacariocitos, en
particular los factores involucrados en la fase G1/S del
ciclo celular, por ejemplo la ciclina E y la cinasa dependiente de ciclina CDC6. Las secuencias de unin al
DNA E2GATA1 representan un regulador crtico de
la diferenciacin eritroidemegacarioctica. En presencia del factor de crecimiento EPO (eritropoyetina) y de
distintas interleucinas, los cultivos celulares fueron
capaces de diferenciarse a poblaciones parcialmente
enriquecidas en eritrocitos, mientras que en presencia
del factor de crecimiento TPO (trombopoyetina) y de
distintas interleucinas se diferenciaron hacia megacariocitos.
Como sistema alternativo se implement el uso de
clulas totipotenciales embrionarias (clulas ESC) para
generar ratones quimricos condicionales a los cuales
se les manipularon genticamente las clulas ES, con la
finalidad de reemplazar los genes CDC6 y GATA2 por
fusiones CDC6RED y GATA 1GFP, respectivamente.
Las familias de protenas represoras Polycomb
(PcG) y activadoras Trithorax (TrxG) fueron en su ori-
(Captulo 9)
gen descritas en Drosophila, como reguladoras a nivel

de la estructura de la cromatina de la expresin de los
genes hometicos.
En la actualidad, su rango de accin parece ser mucho ms amplio e incluye el control de la capacidad autorrenovadora de las clulas ESC, participa en los procesos de diferenciacin temprana y memoria celular, en
aspectos estructurales de regulacin epigentica como
la inactivacin del cromosoma X y, ms recientemente,
en procesos que llevan al origen y progresin de distintos tipos de cncer. Los componentes y procesos epigenticos asociados a la estructuracin del genoma eucariota en cromatina tienen un papel central en la
proliferacin y diferenciacin celular.
Ciclo vital de los eritrocitos

La eritropoyesis tiene lugar en torno de un macrfago
central, lo que se conoce como islote eritroblstico. Los
estadios celulares ms tempranos son ms grandes que
las clulas maduras y tienen un ncleo de mayor tamao
en relacin con el citoplasma, que es basfilo. Durante
el desarrollo, la clula madura disminuye de tamao al
igual que el ncleo, tanto en valores absolutos como en
relacin con el citoplasma, la cromatina se hace ms
densa y se tie con mayor intensidad, y la basofilia inespecfica del citoplasma es reemplazada de manera gradual por los componentes especficos.
La clula madre unipotente especfica de lnea para
la serie eritroctica se denomina UFCE. Su proliferacin y diferenciacin conduce a la formacin de las primeras clulas que se reconocen como eritroblastos verdaderos y, por lo tanto, pertenecen a la lnea celular
eritroide, denominada proeritroblasto; de clulas de
gran tamao, de 16 a 20 mm, despus de la mitosis; cada
clula se diferencia a eritroblasto basfilo. Tras otra
mitosis, las clulas se diferencian a eritroblastos policromticos. Tras una nueva mitosis, las dos clulas formadas se diferencian a eritroblastos ortocromticos o normoblastos. Con la eliminacin del ncleo, el eritroblasto
ortocromtico se transforma en eritrocito (figura 91).
LEUCOCITOS
Son clulas incoloras o clulas blancas con ncleo y

citoplasma, esfricas en la sangre, pero en los tejidos se
vuelven ameboideas y con prolongaciones. Hay cinco
clases de leucocitos en la sangre; segn tengan grnulos

o no se les clasifica en granulares o no granulares (llamados tambin mieloides por su origen) y segn la
forma de su ncleo, en mononucleares o polimorfonucleares. Los leucocitos granulares se clasifican segn su
afinidad tintorial en neutrfilos, eosinfilos y basfilos.
El nmero de leucocitos circulantes es de 5 000 a 9 000
por mililitro (una gota de sangre). La proporcin es de
1 leucocito por 700 eritrocitos y slo 2% del total de leucocitos se encuentran circulando. Los neutrfilos representan de 55 a 60%, los linfocitos de 25 a 33%, los monocitos de 3 a 7%, los eosinfilos de 1 a 3% y los
basfilos de 0 a 0.7%.
Ciclo vital de los granulocitos

El mieloblasto es el primer estadio identificable con el
microscopio en la serie granuloctica. El citoplasma es
basfilo y no contiene grnulos. Los promielocitos sufren una o varias mitosis y las clulas formadas se diferencian a mieloblastos. Los mielocitos se dividen y las
clulas formadas presentan un ncleo cada vez ms pequeo y aplanado; por ltimo se incurvan y adoptan una
forma arrionada o que se asemeja a un bastn curvo.
La clula se denomina ahora metamielocito y ya no se
divide. El metamielocito es la primera clula de la serie
granuloctica que se puede clasificar en tipos neutrfilos, eosinfilos o basfilos. La maduracin de mieloblastos a granulocito dura 10 das.
Linfopoyesis
Los elementos formes destinados a convertirse en linfocitos T abandonan la mdula, su lugar de origen, y son
llevados por la sangre hacia la corteza del timo, donde
proliferan y adquieren sus marcadores de superficie caractersticos. La gnesis de linfocitos B ha sido definida
ms claramente en las aves (se producen en la bolsa de
Fabricio) que en los mamferos, y parece que en stos
la gnesis de linfocitos B tiene lugar en muchos sitios,
entre ellos el tejido linfoide asociado con el intestino, el
bazo y la mdula sea; se ha aclarado que esta ltima es
el lugar principal de linfopoyesis en el organismo.
PLAQUETAS (TROMBOCITOS)
Las plaquetas son pequeas clulas sin ncleo en forma

de disco de 3 mm de dimetro que se forman a partir de
277
la fragmentacin citoplasmtica de los inmensos precursores celulares en la mdula sea, los megacariocitos. Contienen mitocondrias, microtbulos, grnulos de
glucgeno, elementos ocasionales del Golgi y ribosomas, as como enzimas para la respiracin aerobia y
anaerobia. Sus organelas ms destacables son sus grnulos y se pueden distinguir cuatro tipos:
1. Grnulos alfa: de 0.2 mm de dimetro, contienen
tres grupos importantes de protenas (exclusivas
de las plaquetas): factor de crecimiento derivado
de las plaquetas (PDGF), factor de von Willebrand
y fibringeno.
2. Grnulos densos: electrodensos, contienen serotonina, que no es sintetizada por plaquetas, sino
que se absorbe del plasma.
3. Lisosomas: son vesculas rodeadas de membrana
y que contienen enzimas lisosmicas.
4. Peroxisomas: en nmero escaso, manifiestan actividad de peroxidasa.
En la sangre humana, su nmero vara de 150 000 a
350 000 por mm3. Las plaquetas son esenciales para la
hemostasia normal y se deben agrupar durante dicho
proceso. Despus de la lesin del endotelio, las plaquetas se adhieren al colgeno que ha quedado expuesto a
la interaccin con los receptores glucoproteicos. El
amoldamiento de las plaquetas es posible debido a la
presencia de actina, miosina y sus microtbulos. Se adhieren a una superficie y se pueden liberar de manera
irreversible los contenidos de sus grnulos por el sistema canalicular, secretando y sintetizando tromboxano.
Los megacariocitos son clulas formadoras de plaquetas por fragmentacin citoplasmtica; son clulas
poliploides gigantes, con ncleo grande irregular y multilobulado que contiene su cromatina dispersa y no tiene
nucleolos en su citoplasma relleno de finos grnulos
basfilos. El precursor del megacariocito en la mdula
sea es el megacarioblasto, el cual duplica sus componentes nucleares y citoplasmticos hasta siete veces sin
que se produzcan divisiones celulares; en cada duplicacin provoca el aumento de lbulos nucleares (ploida)
y del tamao de la clula. Durante la maduracin citoplasmtica se elaboran grnulos, vesculas y membranas de demarcacin y la prdida de los ribosomas y del
retculo endoplsmico rugoso.
Trombopoyesis
La serie megacariocticaplaquetas est formada por un
conjunto de clulas que, originadas en la mdula sea a
partir de una clula progenitora comn con el resto de
278
las clulas mieloides (CFUGEMM), dan origen a las

plaquetas de sangre perifrica. Se distinguen cuatro
estadios evolutivos:
1.
2.
3.
4.
Megacarioblasto, el elemento ms inmaduro.

Promegacariocito.
Megacariocito granular.
Megacariocito liberador de plaquetas, el ms maduro.
El megacariocito, al desprender parcelas citoplasmticas delimitadas por las membranas de demarcacin,

como se ha demostrado a nivel estructural, origina las
plaquetas de la sangre perifrica. En la serie megacarioctica, a diferencia de lo que ocurre en el resto de las clulas hematopoyticas, las divisiones nucleares no van
seguidas de las correspondientes divisiones citoplasmticas, lo que determina la formacin de clulas poliploides de gran tamao con numerosos ncleos. En el estadio de megacarioblasto se suceden en nmero variable
las mitosis nucleares, apareciendo las sucesivas ploidas nucleares. Ello se acompaa, gracias a una elevada
sntesis de DNA, de un aumento del tamao nuclear. Finalizada esta etapa de sntesis de DNA y duplicacin
nuclear se inicia en el citoplasma la granulognesis que
dar origen a las futuras plaquetas sanguneas.
MDULA SEA
(Captulo 9)
compartimiento hemopoytico. Alrededor de los grandes vasos se observa gran cantidad de grasa, dado que
la hematopoyesis es ms activa en la periferia.
En el compartimiento vascular la arteria nutricia
recorre el hueso compacto en la mitad de la difisis. En
el interior de la mdula, la arteria nutricia se divide en
dos, recibiendo el nombre de arterias longitudinales
centrales que emiten ramas radiales a la periferia de la
mdula y formando las sinusoides, que son vasos de
paredes delgadas que se anastomosan intensamente entre s en la periferia de la mdula sea y vacindose en
una vena longitudinal central que sigue el sistema arterial. El intercambio de componentes entre la mdula y
la circulacin se da a travs de esta pared del sinusoide,
la cual se compone de tres capas: endotelio (delgado,
epitelio plano simple, unido por complejos de unin),
una capa de sustancia basal y capa adventicia.
El compartimiento hemopoytico de la mdula
sea es el espacio localizado entre los sinusoides y est
ocupado por clulas hematopoyticas y un estroma
constituido por clulas reticulares, las cuales pueden
formar fibras reticulares, macrfagos y adipocitos.
Funciones del tejido hemopoytico

1. Formacin y liberacin de clulas sanguneas.
2. Fagocitosis y degradacin de partculas circulantes y de eritrocitos seniles.
3. Produccin de anticuerpos.
Diferenciacin hematopoytica
La mdula sea es un tejido conectivo especializado; la
primera mdula sea primitiva aparece en el feto en el
segundo mes de vida intrauterina y es el principal tejido
hemopoytico de la ltima mitad de la vida fetal y el
resto de la vida. Es uno de los mayores rganos del cuerpo humano, contiene 75% de leucocitos y 25% de eritrocitos. Est contenida en las cavidades medulares de
los huesos largos y en los huesos esponjosos. La mdula sea roja tiene actividad hematopoytica y el color
se debe al contenido de eritrocitos. La mdula sea
amarilla casi no tiene actividad hemopoytica y hay
predominio de adipocitos. Los dos tipos pueden transformarse entre s. En los recin nacidos y en nios pequeos toda la mdula sea es roja, pero a partir de los
5 o 6 aos de edad comienza a transformarse en mdula
amarilla, donde slo se distinguen algunos megacariocitos. Al igual que otros tejidos conectivos, la mdula
sea contiene clulas y matriz extracelular, est dividida por un compartimiento vascular (sinusoides) y un
Las dos lneas de formacin hemopoytica son: la linfopoyesis (produccin de linfocitos) y la mielopoyesis. La
mielopoyesis se divide en trombopoyesis (produccin
de plaquetas), eritropoyesis (produccin de eritrocitos),
granulopoyesis (produccin de polimorfonucleares) y
monopoyesis (produccin de monocitos). Las clulas
madre tienen dos propiedades:
1. La capacidad de madurar en varios tipos de clulas
sanguneas (diferenciacin).
2. Una extensa capacidad de regenerar nuevas clulas madre y as mantener su propio nmero (autorreduplicacin o autorrenovacin).
Si su descendencia es capaz de diferenciarse en varios
tipos diferentes de clulas sanguneas maduras, se designan clulas madre hemopoyticas pluripotenciales
(CMHP). La diferenciacin de una de estas clulas im-
para la formacin de colonias que contienen neutrfilos, eritrocitos, monocitos y megacariocitos.

b. Otros dos CFS estimulan la diferenciacin de progenitores ms avanzados comprometidos en un
nico linaje celular: el factor estimulador de colonias de granulocitos (GCSF), que acta sobre la
UFCG unipotencial para la formacin de colonias
que contienen slo neutrfilos, y el factor estimulador de colonias de monocitos (MCFS), que induce la produccin de colonias puras de monocitos.
plica una prdida de la capacidad de desarrollarse a lo

largo de mltiples caminos alternativos y la adquisicin
gradual de nuevos rasgos morfolgicos distintivos y de
propiedades funcionales tpicas de las clulas sanguneas ms maduras. La descendencia inmediata de una
clula madre pluripotencial que retiene la capacidad para
automultiplicarse, pero que es capaz de diferenciarse en
un tipo nico de clula terminal, se designa como clula
madre unipotencial o clula madre comprometida.
Regulacin humoral de la hemopoyesis

Dado que las clulas sanguneas tienen vida corta y slo
pueden pasar una pequea parte de su vida en la circulacin, deben ser sustituidas continuamente mediante la
formacin de un gran nmero de clulas nuevas. La
identificacin de los agentes humorales ha sido facilitada por el desarrollo de mtodos para el cultivo de clulas hemopoyticas in vitro. Hasta el momento se han
aislado y caracterizado cuatro factores estimuladores de
colonias (CFS). Dos de ellos estimulan las clulas
madre iniciales que son todava capaces de diferenciarse hacia ms de un tipo celular:
a. El factor estimulador de colonias de granulocitos
y monocitos (GMCSF), que estimula a la UFC
GM para la formacin de colonias mixtas de neutrfilos y monocitos, y el multiCSF, tambin
denominado interleucina3, que estimula a la
clula progenitora multipotencial UFCGEMM
Clula madre
pluripotencial
Autorrenovacin
Clula madre
multipotencial
Autorrenovacin
El desarrollo de varias lneas celulares est estimulado

por la interleucina3, y por su CSF especfico, y por la
eritropoyetina (EPO), que es necesaria para la formacin de los eritrocitos y tambin estimula dbilmente la
diferenciacin del progenitor de los megacariocitos. La
trombopoyetina estimula la proliferacin y maduracin
de los megacariocitos. Los factores estimulantes de colonias son glucoprotenas cuyo peso molecular oscila
entre 18 000 y 90 000. Son activos en concentraciones
extremadamente bajas, y se supone que son sintetizados
por diversos tipos celulares de dentro y fuera de la mdula sea (figura 92). Se ha podido demostrar su presencia en la sangre y en la mayor parte de los rganos
estudiados en este sentido.
El mantenimiento de niveles circundantes normales
de produccin de leucocitos parece depender de la produccin de CFS por parte de las clulas del estroma de
la mdula sea. El ritmo basal de produccin leucocitaria controlada por factores dependientes de la propia
mdula sea se denomina hemopoyesis constitutiva,
mientras que la hemopoyesis inducida se debe al efec-
Clula madre
uni/bipotencial
Autorrenovacin
UFEE
Clula madre
mieloide
(UFCGEMM
o UFC.MX)
UFCGM
Clula madre
hematopoytica
Clula madre
linfoide
279
Clula madre de
linfocitos T
Clula madre de
linfocitos B
Clula madre
unipotencial
Autorrenovacin
Clulas en maduracin
Precursor de eritrocitos
(UFCE)
Precursor de eosinfilos
(UFCEo)
Precursor de basfilos
(UFCBas)
Precursor de neutrfilos
(UFCG)
Proeritroblasto
Precursor de monocitos
(UFCM)
Precursor de megaca
riocitos (UFCMeg)
Monoblasto
Precursor de linfocitos T
Linfocito T maduro
no comprometido
Precursor de linfocitos B
Linfocito B maduro
no comprometido
Sin autorrenovacin
Mieloblasto eosinfilo
Mieloblasto basfilo
Mieloblasto neutrfilo
Megacarioblasto
Figura 92. Esquema de los estadios de maduracin y lneas de hemopoyesis.
280
to de factores producidos por clulas alejadas de la mdula y que son activadas por los productos de las bacterias invasoras. Es evidente que los genes que codifican
los CSF no se expresan en otras clulas distintas de las
de la mdula sea hasta que son activadas por la recepcin de seales procedentes de los linfocitos T y los macrfagos, que actan como centinelas que detectan la
invasin bacteriana. En las infecciones, estas clulas
producen CFS y tambin citocinas que inducen la sntesis de CFS por parte de otras clulas. Al reaccionar con
un antgeno bacteriano especfico, los linfocitos T producen GMCFS y tambin liberan linfocinas que activan los macrfagos movilizados en la zona.
SISTEMA INMUNITARIO
Y TEJIDO LINFOIDE
El sistema inmunitario se compone de los rganos linfoides (primarios y secundarios), todos los cmulos de
tejido linfoides en rganos no linfoides, los linfocitos de
la sangre y la linfa, y todos los linfocitos dispersos en el
tejido conectivo y los tejidos epiteliales del organismo.
La inmunologa es el estudio de la inmunidad en su sentido ms amplio y de los acontecimientos celulares y
moleculares que tienen lugar una vez que el organismo
entra en contacto con los microorganismos y otras macromolculas extraas. Se denomina inmunidad congnita al conjunto de mecanismos defensivos que confieren al organismo cierta insensibilidad frente a las
infecciones debidas a diferentes microorganismos; representa la primera lnea de defensa contra las infecciones e incluye fenmenos ms generales como:
1. Barreras fsicas y qumicas (epitelios y sustancias
antimicrobianas producidas en la superficie epitelial).
2. Protenas sanguneas (sistema del complemento y
mediadores de la inflamacin).
3. Clulas fagocticas (neutrfilos, macrfagos, etc.).
A stos se agrega un mecanismo extraordinariamente
efectivo, la inmunidad adquirida (especfica) mediada por linfocitos que incluye la formacin de anticuerpos y linfocitos activados que atacan y destruyen a un
agresor especfico.
La propiedad especial del sistema inmunitario especfico es su capacidad para reconocer y reaccionar particularmente contra macromolculas extraas al organismo.
(Captulo 9)
Cuando los linfocitos registran la presencia de molculas extraas inician una respuesta inmunolgica; as, el
sistema inmunitario es capaz de diferenciar lo propio de
lo no propio. La tolerancia es la ausencia de reaccin
del organismo, una respuesta inmunolgica frente a sus
propios componentes. El sistema inmunitario tiene tambin memoria, por lo cual encuentros posteriores con el
mismo microorganismo o antgeno estimularn mecanismos de defensa cada vez ms eficaces.
Existen dos tipos de inmunidad especfica:
S Inmunidad celular: est mediada por linfocitos
T especficos que atacan y destruyen las clulas
propias infectadas por virus o las clulas extraas.
S Inmunidad humoral: sta empieza con una respuesta inmunolgica primaria; cuando el antgeno
extrao que ingresa reacciona con los receptores
de superficie de los linfocitos B que son especficos para el antgeno en cuestin, stos se diferencian a clulas plasmticas que sintetizan y secretan grandes cantidades de molculas de anticuerpo
(inmunoglobulinas).
El antgeno es una sustancia extraa al organismo. Actualmente se da el nombre de inmungeno al antgeno
capaz de generar una respuesta inmunolgica. La capacidad inmunognica de un antgeno aumenta con el peso
molecular y la complejidad estructural de la molcula.
Los linfocitos no reconocen la totalidad de la molcula,
sino pequeas zonas denominadas eptopes. Cuando los
anticuerpos fijan antgenos se forman complejos antgenoanticuerpo.
El anticuerpo es una molcula de globulina de elevado peso molecular perteneciente a la fraccin de inmunoglobulinas en el interior de las protenas plasmticas.
Existen cinco clases de inmunoglobulinas: IgG, IgA,
IgE, IgM e IgD. La IgG es la ms abundante en el plasma sanguneo. Una molcula de anticuerpo se compone
de dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) y
las cadenas estn unidas por puentes disulfuro. Una porcin variable de las cadenas ligeras y pesadas conforma
el sitio fijador del antgeno (fragmentos Fab); las otras
cadenas ligeras y pesadas conforman la regin constante (fragmento Fc) y se denominan CH y CL, respectivamente. Mientras que la capacidad fijadora de antgeno se relaciona con las regiones variables de las
cadenas ligeras y pesadas, los efectos biolgicos se relacionan con las regiones constantes. Los linfocitos son
las clulas que especficamente reconocen y responden
a los antgenos extraos; los dems tipos celulares funcionan con clulas accesorias en la induccin de respuestas inmunolgicas.
Tipos de linfocitos
1. Linfocitos pequeos (7 mm)
S Linfocitos T ab (LT): Th (CD4) y Tc (CD8).
S Linfocitos T supresores.
S Linfocitos B (LB).
2. Clulas nulas
3. Linfocitos grandes (15 mm)
S Linfocitos (ab).
S Clulas NK (NK).
Linfocitos T
Se generan a partir de la clula madre comn en la mdula sea, por el torrente sanguneo llegan al timo, all
atraviesan un periodo de maduracin no dependiente
del antgeno, que los transforma en linfocitos comprometidos; es decir, adquieren capacidad para reaccionar
en forma especfica frente a un antgeno determinado
mediante receptores de superficie. El receptor de la
clula T o TCR es un heterodmero compuesto de dos
cadenas peptdicas denominadas alfa y beta, unidas por
puentes disulfuro. El receptor de las clulas T es incapaz
de reconocer un antgeno solo, requiere que el antgeno
est unido a molculas del CMH. Durante el proceso de
maduracin en el timo, los linfocitos se diferencian en
dos lneas celulares, lo que conduce a la formacin de
linfocitos T facilitadores (Th) y linfocitos T citotxicos
(Tc). Los linfocitos Th expresan la molcula accesoria
de membrana CD4, estn sujetos a la restriccin del
CMH clase II y debido al patrn de citocinas se dividen
en: linfocitos Th1, que secretan IL2, interfern gamma
y factor beta de necrosis tumoral (FNTb), y linfocitos
Th2, que secretan IL2, IL4 e IL5. Los linfocitos Tc
expresan la molcula accesoria de membrana CD8.
Clulas NK
Pertenecen a un grupo de linfocitos denominados clulas 0, es decir, linfocitos sin marcadores de superficie
CD4 o CD8, que tampoco poseen TCR; por su morfologa se asemejan a los grandes linfocitos granulares. Representan una porcin menor de la poblacin linfocitaria. Combaten desde el principio las clulas infectadas
por virus, en el periodo que transcurre hasta que aparecen los linfocitos T citotxicos (CTL), como consecuencia de la respuesta inmunolgica celular. Las clulas NK tambin intervienen en la destruccin de las
clulas cancerosas que a menudo producen pptidos extraos al organismo. Los macrfagos y las clulas NK
tambin intervienen en el mecanismo denominado citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (DACC).
281
Linfocitos B
Se originan a partir de la clula madre linfocitaria comn; las clulas madre de los linfocitos B permanecen en
la mdula sea donde tiene lugar la maduracin. Durante
el proceso de maduracin los linfocitos B se comprometen, dado que adquieren receptores de superficie con
capacidad especfica para unirse a determinado antgeno.
Tambin aparece una gran cantidad de clones de linfocitos B, donde las clulas de cada clon poseen el mismo
receptor de superficie, mientras que los distintos clones
se diferencian en cuanto a especificidad. Las molculas
de anticuerpo que conforman los receptores de superficie
de los linfocitos no comprometidos son de tipo IgM e IgD.
COMPLEJO MAYOR DE
HISTOCOMPATIBILIDAD (CMH)
Es el conjunto de genes acoplados en hilera en un nico
cromosoma (el 6 en los seres humanos). Estos genes codifican glucoprotenas que se expresan sobre la superficie celular y as contribuyen a determinar si el tejido
trasplantado de un individuo a otro de la misma especie
es rechazado por una reaccin inmunolgica. Las molculas clase I y II estn relacionadas directamente con las
reacciones inmunolgicas, mientras que las de clase III
pueden estar relacionadas o no con el sistema inmunitario (cuadro 91). Las molculas CMH clase I se encuentran en la superficie de casi todas las clulas nucleadas y las molculas CMH clase II slo sobre la
superficie de las clulas presentadoras de antgeno, es
decir, macrfagos, clulas dendrticas y linfocitos B de
manera constitutiva, por lo cual se denominan clulas
presentadoras de antgenos profesionales.
Los monocitos son precursores de los macrfagos
que circulan en los tejidos y rganos linfoides y forman
el conocido sistema fagoctico mononuclear, el cual
consta de precursores de la mdula sea: monoblastos
y promielocitos. El citoplasma de los monocitos contiene muchos grnulos lisosmicos pequeos y vacuolas
citoplasmticas; los grnulos son electrodensos, homogneos y rodeados de membrana, los lisosomas primarios, y contienen fosfatasa cida, arilsulfatasa y peroxidasa. Los monocitos responden quimiotcticamente a la
presencia de material necrtico, microorganismos invasores e inflamacin, y abandonan la sangre para ingresar a los tejidos y ser llamados macrfagos. Los monocitos expresan molculas de clase II del CMH en su
superficie. El monocito tpico mide de 9 a 12 mm de dimetro y puede llegar a los 17 mm de dimetro. Constituyen de 3 a 8% de los leucocitos de la sangre circulante.
282
(Captulo 9)
Cuadro 91. Clasificacin del HLA

Complejo
HLA
CMH
Regin
Productos gnicos
II
DP
DPab
DQ
DQab
III
DR
DRab
VIGILANCIA INMUNOLGICA Y
RECIRCULACIN DE LINFOCITOS
Apenas finalizado el proceso de maduracin, los linfocitos B y T recin formados abandonan la mdula sea
y el timo respectivamente, y llegan al torrente sanguneo y lo abandonan para pasar a los tejidos y rganos
linfoides secundarios. El ingreso de sustancias extraas
puede ser a travs de los distintos sitios del organismo,
pero por lo general el patgeno o parte de l llega rpidamente a los rganos linfoides secundarios, y entonces
stos se convierten en sitios de encuentro entre los linfocitos no comprometidos y los antgenos invasores; de
este modo los linfocitos no comprometidos circulantes
pueden encontrar a sus antgenos especficos. Los linfocitos efectores y de memoria as formados abandonan el
rgano linfoide secundario y comienzan a recircular, al
igual que los linfocitos no comprometidos, pero con un
patrn diferente. Los linfocitos no comprometidos recirculan a travs de todos los rganos linfoides secundarios sin demostrar preferencias, mientras que los linfocitos efectores y de memoria, adems de seguir una
circulacin similar, muestran una tendencia a recircular
por zonas con inflamacin y por tejidos que no son linfoides, como mucosas, articulaciones y piel. Adems,
tienden a recircular por la zona tisular por donde ingres
el antgeno especfico la primera vez. En el ser humano
casi 75% de los linfocitos recirculantes son linfocitos T,
mientras que el resto son linfocitos B que parecen recircular a menos velocidad que los linfocitos T.
RGANOS Y TEJIDO LINFOIDE
El sistema inmunitario ha desarrollado tejidos especializados, llamados rganos linfoides perifricos, que
concentran eficazmente los antgenos introducidos a
travs de las puertas de entradas comunes, como la piel,
el tracto gastrointestinal y el respiratorio. Los rganos
C4, C2, BF
Protenas C TNFa
TNFb
I
B
HLAB
C
HLAC
A
HLAA
linfoides se clasifican en primarios: comprenden la

mdula sea y el timo, donde tiene lugar la maduracin
de las clulas madre linfocitarias a linfocitos no comprometidos inmunocompetentes, y secundarios: incluyen los ganglios linfticos, las amgdalas, el bazo y
varias agrupaciones de tejido linfoide asociado a mucosas (MALT), como las amgdalas, las placas de Peyer no
capsuladas en el intestino delgado, los cmulos foliculares del apndice y los numerosos folculos solitarios
de los intestinos delgado y grueso. En los rganos y tejidos linfoides tienen lugar las reacciones inmunolgicas.
Timo
El timo es un rgano linfoide primario, asiento de la
maduracin de los linfocitos T inmaduros a linfocitos T
maduros no comprometidos e inmunocompetentes.
Cada lbulo tmico est recubierto de una fina cpsula
de tejido laxo y subdividido por tabiques primarios de
tejido conjuntivo que llevan vasos sanguneos en cierto
nmero de lobulillos parenquimatosos polidricos y
con un dimetro de 0.5 a 2 mm. Cada lobulillo tiene una
regin perifrica fuertemente teida, la corteza, y una
porcin central menos teida, la mdula. El parnquima
del timo est formado por una red tridimensional de
clulas reticulares estrelladas que limitan compartimientos irregulares llenos de linfocitos, los cuales estn
muy apretados entre s y en contacto directo unos con
otros, sin tejido conectivo interpuesto entre ellos. En
ocasiones se muestran rasgos epiteliales ms patentes
en la mdula del lobulillo, donde pueden limitar quistes
o estar dispuestos en conjuntos concntricos de clulas
epiteliales escamosas, que constituyen los cuerpos de
Hassall o corpsculos tmicos de tamao variable, de
20 a 100 mm de dimetro, y que por lo general aumentan
con la edad; a veces se conoce como citorretculo tmico.
Las clulas reticulares epiteliales corticales tienen
origen endodrmico, mientras que las medulares y subcapsulares tienen origen ectodrmico. Todas las clulas
reticulares epiteliales expresan niveles elevados de
CMH clase I y II en su superficie y presentan cierto grado de contacto con los linfocitos, teniendo una influencia fundamental en la maduracin de stos. En la cor-

teza subcapsular externa las clulas epiteliales se
denominan clulas nodriza por su efecto en la maduracin de los linfocitos, que a este nivel son grandes, de
alrededor de 15 mm, mientras que en el resto de la corteza y la mdula son pequeos, de 7 mm. Los macrfagos
aparecen en cantidad moderada en la corteza, pero son
ms abundantes en la mdula. Se encuentran en las mallas del retculo epitelial. Las clulas dendrticas interdigitantes se encuentran en gran cantidad en el lmite corticomedular y tambin en la mdula. Al igual que los
macrfagos, se ubican entre las mallas del retculo epitelial y tienen largas prolongaciones ramificadas, en ntimo contacto con gran cantidad de linfocitos. Tanto los
macrfagos como las clulas dendrticas interdigitantes
expresan molculas CMH clase I y II en su superficie,
interviniendo, lo mismo que las clulas reticulares epiteliales, en la maduracin de los linfocitos.
Ganglios linfticos
Son pequeos rganos aplanados en forma arrionada
o de haba, encapsulados, que se disponen en cadenas a
lo largo del trayecto de los vasos linfticos. Varan en tamao desde unos pocos milmetros hasta 2 cm y a menudo forman grupos bien definidos que reciben la linfa
de determinadas regiones, por lo que se denominan ganglios linfticos regionales. Funcionan como filtro de la
linfa y sitio principal donde los linfocitos T y B sufren
proliferacin antigenodependiente y diferenciacin en
linfocitos efectores y linfocitos de memoria. Los ganglios linfticos son tambin muy abundantes en macrfagos que limpian la linfa de microorganismos invasores y de otras partculas.
El estroma de un ganglio linftico est formado por
un reticulado de fibras y clulas reticulares cuyas mallas
estn ocupadas por clulas libres; estas clulas son
sobre todo linfocitos de distintos tipos, pero tambin
hay macrfagos y clulas dendrticas interdigitantes y
foliculares. Los macrfagos se encuentran en la mdula
y la corteza, mientras que las clulas dendrticas interdigitantes predominan en la corteza profunda; ambos tipos celulares expresan molculas CMH II en su superficie. Las clulas dendrticas foliculares slo se
encuentran en los folculos de la corteza y se caracterizan por no ser clulas presentadoras de antgeno, dado
que no expresan molculas CMH II en su superficie. Sin
embargo, estn especializadas para fijar complejos de
antgenoanticuerpo sobre su superficie por largos periodos, pues expresan receptores para Fc en su superficie. Es difcil distinguir entre las clulas del retculo, las
283
clulas dendrticas y los macrfagos en los preparados

comunes, dado que slo se distinguen los ncleos uniformes, mientras que el citoplasma est casi oculto por
la masa de linfocitos.
En la corteza externa ms perifrica, compuesta de
tejido conjuntivo denso, los linfocitos forman ndulos
o folculos linfticos separados por tejido linfoide interfolicular difuso, mientras que la corteza profunda (o
paracorteza) se compone de tejido linfoide difuso. La
mdula se caracteriza por cordones claros (senos medulares) que reciben linfa de los senos trabeculares.
Bazo
Es el rgano linftico ms grande del organismo, est
rodeado por una cpsula de tejido conectivo denso y se
encuentra situado en el trayecto del torrente sanguneo.
Filtra la sangre (de manera mecnica o inmunolgica)
y reacciona inmunolgicamente frente a antgenos
transportados por el torrente sanguneo. El parnquima
del bazo consta de pulpa blanca y pulpa roja. La pulpa
blanca es rica en linfocitos y la pulpa roja contiene gran
cantidad de eritrocitos que filtra y degrada. Los eritrocitos viejos, daados o anormales son atrapados por
macrfagos, inician la degradacin de la hemoglobina
y recuperan y almacenan el hierro del grupo hemo para
su reutilizacin en la eritropoyesis de la mdula sea. La
pulpa roja constituye la mayor parte de tejido esplnico
y tiene dos componentes: los sinusoides venosos y los
cordones esplnicos (de Billroth), o sea el tejido que
est entre los sinusoides. La zona marginal es la zona
que separa la pulpa blanca de la pulpa roja. En la pulpa
blanca los centros germinativos se distinguen por su distribucin circular y por la escasez de fibras reticulares.
Tejido linfoide asociado

a mucosas (MALT)
Es una parte muy notable del sistema inmunitario, relacionada con las mucosas del tracto digestivo, las vas areas y el sistema urogenital en forma de linfocitos y tejido linfoide. La superficie de las mucosas es muy fcil
de lesionar y est en frecuente contacto con antgenos
extraos, sobre todo el tracto gastrointestinal y las vas
areas. La cantidad de clulas plasmticas en MALT es
en conjunto mucho mayor que la cantidad total de clulas plasmticas en la mdula sea, el bazo y los ganglios
linfticos juntos. Las zonas ms estructuradas donde se
encuentran folculos linfticos solitarios o como placas
de Peyer no reciben vas linfticas aferentes. La estre-
284
(Captulo 9)
tringe a clulas inmaduras; tambin los linfocitos T maduros pueden sufrir apoptosis. Entre los factores que
pueden inducir apoptosis en clulas maduras estn los
glucocorticoides y las radiaciones gamma, la estimulacin del complejo TCR/CD3 por anticuerpos monoclonales, antgenos (Ag), y por estimulacin de los receptores CD2, Fas/Apo1 y FNTa. La sensibilidad para
lograr la apoptosis es menor en linfocitos maduros y
requiere previa activacin. La ruta que siguen los linfocitos T al ser estimulados por las clulas presentadoras
de antgenos (CPA) depende de una serie de elementos
que determinan si la clula prolifera o si muere por
apoptosis (figura 93).
cha unin entre las clulas epiteliales mediante contactos de oclusin hace que sea muy difcil que los antgenos atraviesen el epitelio. En los sitios inductivos
aparecen clulas en el epitelio denominadas clulas M,
especializadas en el transporte de muestras de antgenos
extraos desde la luz del tracto digestivo, las vas areas
y las vas urinarias hacia el tejido linfoide asociado a
mucosas subyacentes. El tejido linfoide asociado a
mucosas en los bronquios se denomina BALT.
Apoptosis e inmunidad
La muerte celular programada es muy importante para
el desarrollo y funcionamiento del sistema inmunitario,
debido a que interviene en los eventos de formacin del
repertorio de clulas T y B, en los mecanismos de tolerancia central y perifrica, en la eliminacin de clulas
autorreactivas, en el establecimiento de la memoria inmunolgica y en los mecanismos citolticos de clulas
asesinas naturales (NK) y linfocitos T citotxicos. En el
timo son eliminados 95% de los timocitos por mecanismos de apoptosis, proceso denominado seleccin negativa (delecin clonal) y que elimina la existencia de clones T autorreactivos. Tambin en la mdula sea existe
un proceso similar de delecin de clones B, autorreactivo en el estadio B inmaduro por entrecruzamiento de
la inmunoglobulina de superficie en ausencia de seales
coestimuladoras. No obstante, la apoptosis no se res-
Clulas dendrticas
Las clulas dendrticas actan como centinelas del
sistema inmunitario por su ubicacin en sitios estratgicos para captar antgenos (piel y mucosas), adems presentan estos antgenos a los linfocitos T. As, estos ltimos, una vez activados, podrn ejercer actividad
citotxica o activar a otras clulas que posteriormente
eliminarn al patgeno. Adems de encontrarse en piel
y mucosas, las clulas dendrticas son componentes
fundamentales de los rganos linfoides primarios y secundarios, donde desarrollan su papel principal como
clulas presentadoras de antgeno profesionales. Aunque sobre todo se originan en la mdula sea, tambin
Tact
CPA
Anergia
CPA
Proliferacin
Tact
CPA
Apoptosis
Tact
CPA
Memoria
Tact
Tact
CPA
T
Tact
Factores que influyen en la

sensibilidad de la clula en reposo
Factores que influyen en

las clulas T activadas
Seales coestimulatorias B71, B72
Favorecen proliferacin
Seales coestimulatorias
Baja dosis de antgenos
Ciclo celular
Estimulacin del CD4, antgenos

Citocinas (IL2)
Receptores de muerte
Favorecen apoptosis
Gen myc
Fas
FNT
Inhiben apoptosis
Superfamilia Bcl2
bcl2, Mcl1, Bag1, Boo/Diva

bclXL, Bclw, A1, AKT
Alta dosis de antgenos

Citocinas
Ciclo celular
Figura 93. Factores que regulan la ruta de las clulas T activadas (TACT) en la respuesta inmunitaria secundaria. Los linfocitos
T maduros pueden sufrir apoptosis. La sensibilidad para lograr la apoptosis es menor en linfocitos maduros y requiere activacin
previa. La ruta que siguen los linfocitos T al ser estimulados depende de una serie de elementos que determinan si la clula prolifera o si muere por apoptosis. CPA = clula presentadora de antgenos.

se pueden generar a partir de monocitos, clulas que
permanentemente circulan en sangre perifrica y se
extravasan a los diferentes rganos a travs de seales
generadas bsicamente por citocinas y quimioatrayentes. Los monocitos poseen un fenotipo particular que les
permite diferenciarse a clulas dendrticas durante ciertos tipos de eventos, como los procesos inflamatorios.
Existen dos poblaciones de monocitos humanos que
se diferencian a clulas dendrticas: los CD16, que
constituyen la mayora (90%) de los monocitos, y una
poblacin minoritaria (10%), que son CD16+. Adems,
estas clulas adquieren un marcador, CD1a, que se
encuentra in vivo slo en poblaciones de clulas dendrticas muy particulares (p. ej., las de la piel), lo que
sugiere que algunas de estas clulas pueden provenir de
monocitos diferenciados in situ. Asimismo, las clulas
dendrticas tienen la capacidad de interaccionar con los
linfocitos T de memoria, los cuales se pueden clasificar
en dos tipos: de memoria central (LMC) y de memoria
efectora (LME). Los LMC residen en los tejidos linfoides y los LME se encuentran en tejidos no linfoides,
como pulmn y lmina propia intestinal. Las LMC pueden adquirir funciones efectoras rpidas (secrecin de
citocinas efectoras o actividad citoltica) tras su encuentro con el antgeno, pero slo despus de cierto nmero
de divisiones, mientras que las LME ejercen actividades
efectoras inmediatas. Por ello, estas clulas conforman
una lnea de proteccin inmediata, mientras que los
LCM podran ser precursores de los LME.
Bases moleculares y celulares de las

clulas madre hematopoyticas
Se ha descubierto que las clulas madre y los progenitores linfoides tempranos reconocen antgenos. De las
clulas madre conocidas embrionaria, mesenquimatosa y hematopoytica, la mejor caracterizada es la
clula madre hematopoytica (HSC), la cual es responsable de dar origen a todos los tipos celulares sanguneos (eritrocitos, megacariocitos, granulocitos, monocitos y linfocitos) a lo largo de la vida. En individuos
inmunocomprometidos o que han desarrollado cncer,
el trasplante de HSC es capaz de regenerar la hematopoyesis, as como de robustecer los sistemas de inmunidad
innata y adaptativa.
En el ser humano, las clulas madre hematopoyticas
y sus descendientes ms prximos, los progenitores
tempranos, no expresan en la superficie de la membrana
ningn marcador de clula sangunea madura, pero s
expresan molculas CD34, lo que ha permitido su iden-
285
tificacin a travs de anticuerpos y su aislamiento por

tcnicas de seleccin celular y por citometra de flujo.
Las HSC multipotentes de tejidos fetales y de mdula
sea adulta se caracterizan por la expresin de las molculas CD34 y CD10, y se encargan de la generacin de
progenitores pluripotentes tempranos. Los posibles progenitores linfoides comunes (CLP) expresan adems
CD38 y el receptor de interleucina 7 (IL7), y aunque
muestran un potencial residual hacia clulas T (cooperadoras y citotxicas), NK y dendrticas presentadoras
de antgeno y estimuladoras de las clulas T, se diferencian principalmente a clulas B (productoras de anticuerpos), en tanto que los progenitores que expresan
CD7 son altamente eficientes en la generacin de clulas T y NK.
El desarrollo de las clulas maduras y funcionalmente especializadas del sistema inmunitario progresa
a travs de estadios crticos de diferenciacin de las
HSC, compromiso y especificacin de sus progenitores
y maduracin de sus precursores, mediante opciones
binarias donde los progenitores de los linajes mieloide
y linfoide generan una o ms categoras de clulas sanguneas. Sin embargo, los progenitores tempranos retienen cierto grado de plasticidad, y la prdida gradual de
opciones de diferenciacin se presenta en paralelo con
la ganancia de funciones especializadas. En este nuevo
modelo, el proceso de regulacin de los diversos linajes
hematopoyticos (que en la normalidad es resultado de
la actividad de factores de crecimiento hematopoytico
y citocinas que promueven la sobrevivencia, proliferacin y diferenciacin de sus progenitores) es potencialmente susceptible de ser trastornado por seales
microambientales de dao liberadas durante quimioterapia, inflamacin, infecciones o estrs.
Tolerancia
Una de las caractersticas principales del sistema inmunitario es poder distinguir entre lo propio y lo ajeno. La
tolerancia de las clulas T hacia lo propio involucra un
proceso complejo que comienza en el timo, pero que
contina en la periferia, en los rganos linfoides secundarios. Se han descrito tres mecanismos principales de
la tolerancia:
1. La delecin clonal, en la que la clula T es eliminada fsicamente.
2. La anergia, que persiste en la clula T pero es incapaz de proliferar o de secretar citocinas.
3. La regulacin, en la que la clula T efectora es
regulada por las clulas T reguladoras.
286
La nocin de clulas T reguladoras fue propuesta hace

varias dcadas, pero slo recientemente se ha podido
demostrar experimentalmente su existencia. Desde entonces, estas clulas han despertado gran inters por su
posible aplicacin en la clnica tanto en las enfermedades autoinmunes como en la terapia antitumoral. Para
que haya una regulacin eficiente, la clula reguladora
tiene que estar presente cuando la clula T virgen es
activada. Se sabe que para que haya una activacin eficiente de la clula T se necesita establecer una sinapsis
inmunolgica entre sta y una clula presentadora de
antgeno (CPA). Dicha sinapsis est caracterizada por el
reclutamiento de diferentes protenas de sealizacin,
por ejemplo la protena cinasa K theta (PKCq). Cuando
una clula T reguladora y una clula T virgen hacen
contacto con la misma clula presentadora de antgeno,
la clula T virgen no recluta PKCq en su sinapsis inmunolgica. De nuevo, este fenmeno slo se observa si la
clula T virgen tiene la misma especificidad antignica
que la reguladora. La disminucin de reclutamiento de
PKCq por parte de las clulas vrgenes en presencia de
clulas T reguladoras puede ser uno de los mecanismos
por los cuales se lleva a cabo la supresin inmune y
explicara la falta de proliferacin y de secrecin de
interleucina 2 (IL2) por los linfocitos sujetos a dicha
supresin.
TRASPLANTE DE CLULAS MADRE

HEMATOPOYTICAS
El trasplante de clulas madre hematopoyticas (TCPH)

consiste en la aplicacin de clulas madre hematopoyticas (HSC) a un receptor previamente acondicionado
para recibir el injerto y constituye una teraputica til,
en ocasiones nica, para una gran variedad de enfermedades hematolgicas y no hematolgicas. Tras las primeras experiencias con el trasplante de mdula sea
(TMO) realizado por E. Donnall Thomas en la dcada
de 1950 comenz su expansin mundial en la dcada de
1970, para experimentar un espectacular desarrollo en
las de 1980 y 1990. En el ao 2000 se realizaron cerca
de 30 000 trasplantes en el mundo; de stos 70% fueron
autlogos y 30% alognicos. La sangre perifrica (SP)
fue la fuente de progenitores hematopoyticos en 90%
de los trasplantes autlogos y en 30% de los alognicos.
El TCPH se ha expandido a un amplio grupo de modalidades teraputicas al ampliarse las fuentes de obtencin
de clulas madre hematopoyticas (CPH). La fuente
(Captulo 9)
clsica de los progenitores hematopoyticos para el

TCPH es la mdula sea (MO), pero no es la nica, y
tambin se emplean para este fin CPH de la SP, del cordn umbilical (CU) y del hgado fetal. De ah que el trmino trasplante de clulas madre hematopoyticas sea
ms preciso que decir trasplante de mdula sea.
El trasplante alognico de clulas hematopoyticas
(TACH) es un tratamiento dirigido a tratar una variedad
de enfermedades hematolgicas y no hematolgicas,
para algunas de las cuales es el tratamiento de eleccin,
como lo hacen en la SITECEM con la terapia celular
con clulas madre. Los primeros trasplantes exitosos
fueron realizados entre 1968 y 1969 a nios con inmunodeficiencias congnitas, utilizando como donantes a
hermanos compatibles. Desde entonces se fueron perfeccionando estos procedimientos a medida que se iba
logrando un mejor conocimiento de los antgenos del
complejo mayor de histocompatibilidad y un uso ms
efectivo de la terapia inmunosupresora. En la actualidad
se realizan cada ao 40 000 trasplantes de clulas hematopoyticas (TCH) en todo el mundo. Se destaca en ese
contexto un lento incremento en el nmero de los trasplantes alognicos tanto familiares como no relacionados. Este hecho se debe a la limitada disponibilidad de
donantes compatibles. Es tambin una caracterstica de
los ltimos aos la disminucin del nmero de autotrasplantes, fundamentalmente por los resultados insatisfactorios comunicados en el cncer de mama, en el que
el autotrasplante haba llegado a ser la primera opcin
de tratamiento; sin embargo, en la SITECEM se ha acumulado experiencia de vanguardia a favor de la terapia
celular alognica, la cual es considerada ahora el tratamiento de eleccin. La ampliacin del margen de edad
de los receptores de TCH y el incremento del uso de sangre perifrica como fuente a partir de 1995 son caractersticas de esta etapa, as como la revitalizacin del uso
de sangre de cordn umbilical, sobre todo en pacientes
menores de 20 aos de edad, y ms recientemente, la
introduccin de los trasplantes hematopoyticos no mieloablativos (THNM). Los principios fundamentales del
trasplante alognico convencional incluan el uso de
elevadas dosis de quimioterapia o radioterapia que permitan erradicar la malignidad y facilitar la toma del injerto, la infusin de clulas de un donante compatible y
el uso de una inmunosupresin despus del trasplante,
como profilaxis de la enfermedad de injerto contra hospedero (EICH). Pero si se usan clulas madre multipotenciales o pluripotenciales se evita todo lo anterior y la
respuesta de regeneracin es espectacular en el paciente.
Los regmenes preparatorios convencionales estn
asociados con una gran morbilidad y mortalidad por
toxicidad sobre rganos. Los ms afectados son intes-

tino, pulmn, corazn e hgado. Tambin se relacionan
con una elevada incidencia de EICH aguda. Todo esto
lleva a una elevada mortalidad relacionada con el trasplante, que oscila entre 20 y 50% de los casos, y limita
su utilizacin en pacientes jvenes o que no presenten
un grado importante de dao orgnico. Por esta razn,
la terapia celular de vanguardia que se aplica en la
SITECEM es el tratamiento de eleccin, porque adems
de ofrecer una excelente regeneracin, las complicaciones son prcticamente nulas.
Hasta finales de la dcada de 1970 se crea que el
efecto antitumoral del TACH era resultado del rgimen
preparatorio, pero ya en la dcada de 1980 se evidenciaron conceptos que modificaron este enfoque. Se acept
que la accin antitumoral no estaba basada slo en la
citorreduccin, sino en el efecto inmunolgico mediado
por los linfocitos del donante, conocido como efecto
injerto contra tumor (EICT).
Por otra parte, estudios en modelos animales sugirieron que aunque la toma del injerto requera inmunosupresin, no era necesariamente dependiente de las dosis
mieloablativas del tratamiento condicionante, y muchas
enfermedades malignas no se curaron a pesar de utilizar
elevadas dosis de quimioterapia.
La tendencia actual en el trasplante de mdula sea
convencional consiste en buscar esquemas menos agresivos que disminuyan las complicaciones de los trasplantes.
En este contexto, en el centro mdico de los autores
de terapia celular y medicina regenerativa se aplican clulas madre pluripotenciales y multipotenciales alognicas altamente purificadas sin necesidad de mieloablacin ni riesgo de rechazo o reaccin inmunolgica. La
explicacin de esta respuesta clnica tan perfecta se
debe a que las clulas madre multipotenciales alognicas modulan la respuesta inmunitaria del receptor para
establecer una simbiosis de tolerancia sorprendente y
desconocida en la mayor parte del mundo hasta ahora,
ya que destituir paradigmas en la ciencia mdica equivale a destituir imperios poderosos.
Historia de la terapia
celular hematolgica
Los experimentos en los que se bas el TMO humano
se efectuaron en ratones hace ms de 40 aos, aunque
los inicios de este procedimiento comenzaron en 1891,
cuando Brown les administraba a sus pacientes MO por
va oral como tratamiento para trastornos hematolgicos. En 1939, Rasjek y Osgood administraron a sus pa-
287
cientes MO intramedular y endovenosa para el tratamiento de leucemias y aplasia medular. Tambin en este
ao se realiz el primer intento de recuperar la hematopoyesis mediante la administracin de transfusiones en
un paciente con anemia aplsica, as como una pequea
cantidad de MO de su hermano, sin mediar ningn tratamiento condicionante previo. En 1949, con los estudios
de Jacobson y col. se demostr que los ratones letalmente irradiados podan recuperar su hematopoyesis normal
si se les protega el bazo de las radiaciones, lo que demostraba el papel de este rgano como parte del sistema
hematopoytico. Despus de que se identific la aplasia
medular producida por irradiacin como una causa importante de muerte en la poblacin japonesa expuesta a
los efectos radiactivos de las explosiones de las bombas
atmicas, se aceleraron las investigaciones en animales
relacionadas con la cantidad de irradiacin corporal que
era necesaria para provocar aplasia medular, y se establecieron las bases para una aplicacin clnica ms racional del TMO. Poco tiempo despus, en 1951, Lorenz
y col. describieron que con la infusin de clulas de la
MO de otro ratn se podan rescatar los ratones sometidos a irradiacin letal. Estos experimentos iniciales
parecan demostrar que la proteccin a las radiaciones
se deba a factores humorales. Sin embargo, Barnes y
Loutit, al revisar sus propios experimentos y los de otros
investigadores, concluyeron en 1954 que la hiptesis
qumica deba ser remplazada por la celular.
Los intentos iniciales de aplicar este mtodo a pacientes con enfermedades hematolgicas graves fueron
un fracaso, ya que se desconoca la importancia de la
similitud de los antgenos de histocompatibilidad entre
el donante y el receptor, as como la necesidad de tratamiento inmunosupresor intenso.
Los anticuerpos inducidos por transfusiones y embarazos que reaccionaban con los antgenos presentes en
los leucocitos humanos fueron descritos inicialmente
por Miescher y Fauconnet en 1954. Ms tarde, en 1958,
Dausset y Van Rood utilizaron estos anticuerpos para
describir los grupos de antgenos de leucocitos humanos (HLA). En la dcada de 1950 se realizaron casi 200
trasplantes alognicos de MO en humanos, sin xito a
largo plazo. Sin embargo, durante este tiempo se obtuvieron resultados satisfactorios con el trasplante de gemelos idnticos, lo que sirvi de base para el desarrollo
de este procedimiento. En 1959 se utilizaron dosis letales de irradiacin corporal total (ICT) y MO de un gemelo idntico para trasplantar a dos pacientes con leucemia linfoide aguda (LLA) avanzada, con recuperacin
de la hematopoyesis en algunas semanas, aunque los
pacientes murieron de enfermedad progresiva. En 1965
Santos y Owens comunicaron que la ciclofosfamida
288
(CFM) era un potente inmunosupresor en modelos murinos. Como este medicamento era conocido por su
efecto antileucmico, el grupo de Seattle administr 60
mg/kg durante dos das antes de administrar la ICT, y
con este rgimen se obtuvieron los primeros receptores
con sobrevida a largo plazo. El primer intento de trasplante alognico de MO en humanos lo llev a cabo en
la dcada de 1960 E. Donnall Thomas, por lo que recibira el premio Nobel de Medicina en 1990.
A finales de la dcada de 1960 exista una mejora en
el tratamiento antibitico y un desarrollo mayor de
agentes antineoplsicos efectivos. Los primeros trasplantes alognicos exitosos ocurrieron en 1968 y 1969,
cuando dos pacientes que sufran de inmunodeficiencias congnitas y uno con enfermedad de Wiskott Aldrich sobrevivieron al procedimiento. Despus se acept de manera gradual esta prctica durante la dcada de
1970. Los primeros trasplantes autlogos en humanos
los realizaron en 1950 Kurnick y col., y en 1959 McGovern. Estos implantes parecan proteger contra la toxicidad medular, pero su beneficio clnico era incierto
debido a la inefectividad en la erradicacin de la enfermedad base. El trasplante autlogo fue utilizado exitosamente, primero en pacientes con linfomas en la dcada de 1970, y su uso se ampli en todo el mundo en la
dcada de 1980.
Los inicios del trasplante de SP fueron en 1962, cuando Goodman y Hodgson demostraron la existencia de
CPH en la sangre de los ratones, la que poda recolectarse de forma exitosa cuando comenz a desarrollarse
la tecnologa de la citocentrifugacin. Esta fuente de
CPH se comenz a utilizar en pacientes de los que no se
poda obtener clulas madre medulares, debido a su
enfermedad de base o a irradiacin previa, y su uso se
ampli despus de descubrir que los factores de crecimiento hematopoyticos causaban una liberacin transitoria de CPH en la SP. De esta forma, en 1981 se introdujo la SP como fuente de CPH. La demostracin de la
presencia de CPH en el CU sugiri el uso de estas clulas para la realizacin de los TCPH, y el primer trasplante exitoso de esta fuente lo publicaron Gluckman y
col. en 1989. Debido a la poca probabilidad de encontrar
un donante familiar compatible, se realizaron los primeros TCHP no relacionados en la dcada de 1970. La
heterogeneidad de los haplotipos HLA hizo necesaria la
realizacin de grandes paneles de donantes, hasta la
existencia hoy en da del registro internacional de
donantes no familiares. Una de las hiptesis para realizar los TCPH en las leucemias es que la curacin
depende en gran medida del efecto injerto contra leucemia, ms que del rgimen de acondicionamiento; por lo
tanto, es posible controlar la enfermedad a largo plazo
(Captulo 9)
con regmenes menos agresivos. Esto sent las bases

para la introduccin del trasplante no mieloablativo,
tambin llamado minitrasplante, en la dcada de 1990,
hasta llegar a la terapia celular moderna, que no tiene
complicaciones ni representa riesgo para el paciente
como lo fue en el pasado.
Pasos para decidir la realizacin

de un TCPH clsico o convencional
Seleccin del receptor; estudio de la pareja donantereceptor. Estudio de compatibilidad HLA y otros estudios
necesarios pretrasplante; determinar el tipo de trasplante y la fuente de CPH; determinar el rgimen de acondicionamiento que se va a utilizar; realizar el trasplante y
dar seguimiento del paciente trasplantado.
El TCPH est indicado en dos situaciones fundamentales:
a. Cuando el paciente tiene una enfermedad que
afecta la MO y es curable por medio de la sustitucin total de sta por otra sana o por la obtencin
de una quimera mixta.
b. En el caso de los trasplantes no mieloablativos y en
las afecciones en las que la toxicidad medular sea
un factor limtrofe para un tratamiento intensivo.
Algunas de las enfermedades en las que se utiliza esta
terapia celular son las neoplasias hematolgicas como
la leucemia mieloide crnica, leucemias agudas, sndromes mieloproliferativos, enfermedad de Hodgkin y linfomas no Hodgkin (LNH), leucemia linftica crnica y
otras enfermedades linfoproliferativas crnicas, mieloma mltiple (MM) y sndromes mielodisplsicos.
Tambin se han tratado con xito enfermedades congnitas no malignas como hemopatas, talasemia, drepanocitosis, sndrome de WiskottAldrich y anemia de
Fanconi, otras enfermedades congnitas que afectan la
mdula sea, enfermedad de Gaucher, osteopetrosis,
mucopolisacaridosis y diversos trastornos lisosmicos,
enfermedades que requieren tratamiento antineoplsico
intensivo y la mayora de los tumores slidos para cuyo
tratamiento deban emplearse dosis de quimioterapia
mortales por su efecto mielosupresor.
Las indicaciones ms comunes para el alotrasplante
y el autotrasplante difieren, y las ms comunes para el
primero son las leucemias agudas y crnicas, mielodisplasias y enfermedades no malignas (aplasia medular,
deficiencias inmunes y trastornos metablicos hereditarios). Los autotrasplantes son generalmente usados para
linfomas, MM y tumores slidos. En el ao 2000, los
LNH y el MM fueron las causas principales de trasplante en EUA.
289
Cuadro 92. Principales indicaciones de los trasplantes de clulas madre hematopoyticas (TCPH)
segn el Grupo Europeo para el Trasplante de Mdula sea (1998)
Trasplante alognico
Indicaciones establecidas
Anemia aplsica grave
Leucemia mieloide crnica
Leucemia mieloide aguda (pacientes menores de 50 aos de
edad)
Sndromes mielodisplsicos (pacientes menores 50 aos)
Leucemia linfoide aguda en primera recada (algunos subtipos)
Inmunodeficiencias combinadas graves
Leucemias agudas mieloides y linfoides en segunda recada
Talasemia
Indicaciones recientes
Mieloma mltiple
Anemia drepanoctica
Osteopetrosis
Enfermedades metablicas hereditarias
Enfermedad de Hodgkin
Linfomas no Hodgkin
Experimental
Leucemia linfoide crnica
Carcinoma renal
Cncer de mama
El cuadro 92 muestra las principales indicaciones

de los TCHP segn el Grupo Europeo para el Trasplante
de Mdula sea (1998).
En 1996 se definieron as las diferentes categoras de
los TCPH:
1. Estndar: son los que se realizan con frecuencia
sin que el paciente entre en ningn estudio institucional. Se hacen en cualquier centro con experiencia en el TCHP.
2. Por protocolos de investigacin clnica: el valor de
estos trasplantes no est an bien establecido. Se
le ofrece al paciente la posibilidad de realizarle un
TCHP en el contexto de un protocolo de investigacin que utiliza diagnsticos definidos. El protocolo puede ser diseado para una sola institucin
o ser parte de un estudio multicntrico. Por lo general debe ser aprobado por una comisin de tica.
3. De desarrollo: se define as cuando hay poca o ninguna experiencia en este tipo de trasplante. A menudo incluye casos aislados o estudios piloto.
Deben ser aprobado por una comisin de tica. Por
lo general, los resultados son para presentaciones
o publicaciones.
Trasplante autlogo
Leucemia linfoide aguda en primera recada (algunos subtipos)
Enfermedad de Hodgkin en segunda recada
Linfomas no Hodgkin en segunda recada
Mieloma mltiple
Tumores slidos como el neuroblastoma
Enfermedades autoinmunes, como esclerosis mltiple

Leucemia linfoide crnica
Leucemia mieloide aguda
Tumores slidos como ovario y mama
Enfermedad de Hodgkin en primera recada
Linfomas no Hodgkin en primera recada
Amiloidosis
Otros tumores slidos
Artritis crnica juvenil
4. No recomendado generalmente: comprende procedimientos contemplados en una fase o estado de

la enfermedad en que el TCHP no se les realiza a
los pacientes de manera convencional. Puede haber cierta superposicin con la categora anterior.
Tambin incluye estados iniciales de la enfermedad en la que no se justifica el riesgo de un trasplante o en enfermedades tan avanzadas que las
posibilidades de xito son muy pocas.
TIPOS DE TRASPLANTE
Los tipos de TCPH pueden clasificarse como:
Trasplante alognico clsico

Efectuado entre individuos de una misma especie. El
procedimiento implica la infusin de CPH de un donante sano a un paciente sometido a tratamiento de acondicionamiento, administrado previamente, con el fin de
290
erradicar las clulas neoplsicas y la capacidad de respuesta inmune del receptor para evitar un rechazo del
injerto una vez infundido. La principal limitacin para
la realizacin de este tipo de trasplante es la disponibilidad de un donante familiar HLA compatible. Sin embargo, los avances obtenidos en los ltimos aos en el
campo de la inmunologa y la biologa celular y molecular, as como la creacin de registros de donantes de
mdula y bancos de sangre de cordn, han permitido
ampliar las posibilidades de encontrar donantes histocompatibles no relacionados para los pacientes que lo
requieren. El procedimiento para llevar a cabo el trasplante alognico clsico se observa en la figura 94.
Aunque la pareja donantereceptor sea idntica para
el sistema HLA, existen antgenos de compatibilidad
menores, lo que provoca que en este trasplante exista
una doble barrera inmunolgica, y puede ocurrir que el
receptor rechace las clulas infundidas (rechazo del injerto). Las clulas inmunocompetentes infundidas pueden reconocer como extraas las clulas del receptor, lo
que se conoce como enfermedad injerto contra hospedero (EICH). Ventajas de este tipo de trasplante: se trasplantan CPH sanas y se ejerce efecto injerto contra tumor. Desventajas: est restringido a una minora
(posibilidad de donante, grupos tnicos, edad, estado
general), la posibilidad latente de EICH, mayor incidencia de rechazo y necesidad de inmunosupresin ms
severa. Este tipo de trasplante comprende las siguientes
variantes:
(Captulo 9)
1. Hermanos HLAidnticos: cada persona hereda

un haplotipo de cada uno de sus progenitores; por
ello, la posibilidad terica de disponer de un hermano HLA idntico es de 25%. Es el tipo de donante ideal. Actualmente la mayora de los trasplantes
alognicos se hacen con este tipo de donante.
2. Familiares parcialmente compatibles: para los
pacientes que no tienen un familiar HLA idntico,
el trasplante haploidntico de un familiar es una
opcin, y la ventaja ms significativa de este trasplante es la mayor disponibilidad, por lo que un
donante est disponible 90% de las veces y la demora para el procedimiento puede reducirse, pero
tiene una mayor desventaja por el aumento del
riesgo y severidad de la EICH aguda y crnica, y
aunque la deplecin de linfocitos T puede disminuir esta complicacin, no se han obtenido resultados totalmente satisfactorios con este procedimiento.
3. No familiares, total o parcialmente compatibles: debido a la limitacin de los tipos de trasplantes ya descritos, se ha trabajado para aumentar
las posibilidades de donantes no relacionados, los
cuales alcanzan ms de 7.5 millones en el mundo.
En la actualidad, 25% de los trasplantes alognicos son de este tipo. A pesar de la cantidad de
donadores disponibles en el registro internacional
es difcil encontrar uno para muchos pacientes,
sobre todo para las minoras tnicas y raciales.
Mdula
Donante
Quimioterapia
Irradiacin
Metotrexate y
ciclosporina A
Figura 94. Esquema de los pasos seguidos en el trasplante alognico clsico, el cual difiere de la terapia celular con clulas
madre alognicas, que son ms seguras y no requieren preparacin del paciente.
291
Cuadro 93. Principales indicaciones aceptadas del trasplante de MO no relacionado clsico
Entidad
Grupo
Fase crnica
Leucemia linfoide aguda
Cromosoma Filadelfia
Leucemia mieloide aguda

Sndromes mielodisplsicos
Aplasia medular
Secundaria o posmielodisplsicos
Factores de mal pronstico
Formas muy graves
Se deben tener en cuenta algunas observaciones previas

al inicio de una bsqueda internacional de donantes no
emparentados o no relacionados, entre ellas: confirmar
que en el estudio de los familiares no exista ningn
donante compatible; valorar los riesgos y beneficios de
este tipo de trasplante frente a otras opciones como el
autotrasplante y la quimioterapia, y considerar las condiciones generales: edad menor de 45 aos y ausencia de
alteraciones neurolgicas en enfermedades congnitas.
El material que se va a infundir en el trasplante de MO
no relacionado clsico debe ser congelado y transportado
al centro de trasplante donde se vaya a realizar. En general, no hay efectos deletreos de las clulas en las primeras 24 h previas a la infusin. Se pueden eliminar los eritrocitos y el plasma en caso de incompatibilidad ABO, o
los linfocitos T, para disminuir las posibilidades y gravedad de la EICH. Aunque la indicacin de los trasplantes
no relacionados debe ser analizada en cada caso en particular, las ms aceptadas se resumen en el cuadro 93.
Los criterios para la seleccin de un donante no familiar han variado. En la dcada de 1980 y a principios de
la de 1990, la mayora de los trasplantes compatibles no
relacionados se basaban en estudios serolgicos del
HLA. Despus, el desarrollo de tcnicas moleculares
revel que muchos casos aparentemente compatibles no
lo eran, y en la actualidad los estudios de HLADR de
alta resolucin han eliminado el uso del cultivo mixto
de linfocitos. Para seleccionar a un donante no relacionado se deben tener presentes ciertos aspectos:
1. Estudio de clase I (A, B, C) y clase II DRb1 y DQb1, por tcnicas moleculares.

2. Utilizacin de donantes con una sola disparidad
molecular en clase I o clase II, especialmente si
existen varios idnticos con los criterios clsicos
(serologa A y B y molecular DRb1).
3. Si slo se identifica un donante que cumpla los criterios clsicos, pero no los de identidad molecular
completa, habr que valorar la edad del receptor y
Indicaciones
Pacientes menores de 40 aos de edad y en los 2 primeros aos del diagnstico
Primera y segunda remisiones completas, edad menor
de 45 aos
Primera remisin completa a la edad de 45 aos
Menores de 45 aos de edad
Menores de 45 aos de edad, no respuesta a la inmunosupresin
la urgencia del trasplante, para decidir si se utiliza

ese donante o se busca uno ms adeduado.
4. No est bien definido si es ms relevante la disparidad de clase I o de clase II, aunque algunos autores plantean que las diferencias del locus A son las
que se asocian con mayor mortalidad.
El trasplante de MO no relacionado clsico es ms difcil y costoso que el trasplante de donantes compatibles,
y el riesgo de complicaciones postrasplante es ms alto.
La EICHA se mantiene como una de las complicaciones
inmunolgicas ms frecuentes despus del TCPH y se
produce en 75% de pacientes sometidos a este tipo de
trasplante. Las ventajas de este tipo de trasplante son la
amplia posibilidad de donantes y el mayor efecto injerto
contra leucemia, mientras que las desventajas incluyen
el riesgo aumentado de fallo del injerto (5 a 10%), el
aumento de la frecuencia y gravedad de la EICH (80%),
mayor frecuencia de infecciones, tiempo de demora en
la bsqueda del donante, gran toxicidad del rgimen de
acondicionamiento, riesgo de infecciones fatales y de
trastornos linfoproliferativos y reconstitucin inmune
demorada o incompleta; aunque esto se puede evitar si
se aplica la terapia celular moderna.
Trasplante singnico o isognico

En este caso el donante y el receptor son gemelos homocigotos y no existen entre ellos diferencias genticas ni
inmunolgicas. Sus ventajas son: poca o ninguna posibilidad de EICH y no requiere inmunosupresin. Sus desventajas consisten en que no tiene efecto injerto contra
tumor y hay mayor posibilidad de recadas, lo que tambin se puede evitar con la terapia celular del SITECEM.
Trasplante autlogo o autotrasplante

de mdula sea
La experiencia acumulada con el trasplante alognico
clsico permiti comprobar in vivo el efecto curativo
292
del uso de megadosis teraputicas sobre algunas neoplasias hematolgicas. Sin embargo, el aumento de la
dosis est limitado por la aparicin de toxicidades graves. Resulta especialmente crtica la provocada en la
mdula sea, que conduce a una mielosupresin prolongada. De esta manera, la necesidad de garantizar una
funcin hematopoytica correcta tras un tratamiento
quimiorradioterpico en dosis elevadas, junto con las limitaciones del trasplante alognico, ha sido la causa del
desarrollo del autotrasplante en los ltimos aos. Este
tipo de trasplante consiste en obtener clulas madre
hematopoyticas del propio paciente, conservarlas y
reinfundirlas despus de administrar dosis de quimioterapia o radioterapia ablativa, como se observa en la
figura 95. Aunque su uso comenz tardamente, en la
actualidad es el tipo de trasplante ms utilizado. Las
diferencias con el trasplante alognico se muestran en
el cuadro 94.
El rgimen de acondicionamiento y la extraccin de
la mdula se realizan de forma similar al trasplante alognico, pero la inmunosupresin postrasplante no es necesaria. Es importante la criopreservacin en este tipo
de trasplante a 196 _C. En la actualidad, la fuente ms
utilizada para el autotrasplante son las clulas obtenidas
de la SP por medio de procedimientos de afresis. Ventajas de este tipo de trasplante: no requiere la bsqueda
de un donante, menor toxicidad relacionada con el procedimiento, se puede realizar a pacientes de mayor edad
(60 a 65 aos), no existen las complicaciones indeseables de EICH, permite la realizacin de consolidacin
en los tumores slidos en el momento en que la masa
tumoral es menor, se necesitan menos clulas para la
reconstruccin medular que en el trasplante alognico,
es una opcin en pacientes que por diferentes causas no
pueden recibir un trasplante alognico. Desventajas: las
clulas recolectadas pueden tener una calidad deficiente, existe el riesgo de contaminacin con clulas tu-
Mdula sea
Congelacin
Alta dosis
quimioterapia
y radiacin
Figura 95. Esquema de los pasos seguidos en el trasplante autlogo.
(Captulo 9)
Cuadro 94. Comparacin entre trasplante

hematopoytico alognico y autlogo
Parmetro
Autlogo
Alognico
Necesidad de donante
Contaminacin con clulas
tumorales
Recuperacin hematopoytica
Facilidad del proceso
Efectos adversos
No
S
S
No
Ms rpida
Ms lenta
++
Ligeros
S
No
+
Frecuentemente severos
S
S
No
No
No
60 a 70
40 a 55
Hematopoyesis duradera
Enfermedad injerto contra
hospedero
Inmunosupresin postrasplante
Necesidad de criopreservacin
Efecto injerto contra leucemia
Edad lmite para los candidatos (aos)
morales, aunque es menor con el uso de SP, mayor frecuencia de fracaso en la recuperacin medular debido a
defectos en el microambiente medular, influido por la
enfermedad de base o los tratamientos previos, aumento
del porcentaje de recada por enfermedad mnima residual y ausencia de efecto injerto contra leucemia. Existen diferentes factores que determinan la fuente de CPH
por utilizar, como la patologa para la que se vaya a realizar el trasplante, la disponibilidad de donantes y el
inters de la institucin que realice el procedimiento.
En los trasplantes se han descrito todas las complicaciones que se observan cuando se emplean las dosis altas de quimioterapia y radioterapia. Hay que tener en
cuenta que los pacientes escogidos inicialmente para
estos tratamientos han tenido cierto grado de deterioro
de su organismo por la evolucin de su enfermedad. Las
manifestaciones de toxicidad hematolgica son de menor duracin y las complicaciones infecciosas antes de
la recuperacin hematolgica son menos frecuentes. La
reduccin o eliminacin de los agentes txicos mieloablativos, con la disminucin del dao tisular al no producirse la liberacin de citocinas que ocurre con el
acondicionamiento convencional, ha hecho que se espere menos EICH, pero aunque ha sido difcil determinar su incidencia, parece ser la complicacin ms frecuente y que a largo plazo podra poner a debate la
ventaja de este tipo de trasplante.
Existen diferencias en cuanto al tiempo de aparicin
de la EICH en los trasplantes no mieloablativos; se ha

descrito una forma aguda ms tardamente que lo habitual as como la presentacin ocasional de una forma
crnica ms temprana. Tambin se han descrito en las
primeras semanas sntomas similares a los observados
en los autotrasplantes como sndrome del implante, y
que en el trasplante alognico convencional se han interpretado como una manifestacin de fracaso del injerto, como una forma hiperaguda de la EICH. Las experiencias recientes con los trasplantes no mieloablativos,
sobre todo con el uso de la ciclofosfamida, demuestran
que puede ocurrir sin EICH y ser una manifestacin del
rechazo al injerto. Su patognesis depende de la intensidad del tratamiento preparatorio y de la fuente de obtencin de las clulas hematopoyticas, quiz en relacin
con una produccin exagerada de citocinas proinflamatorias, y puede presentarse antes o durante la recuperacin granuloctica. Con el desarrollo de los regmenes
no mieloablativos se ha ampliado su espectro de diferencias con la EICH.
El fracaso del injerto en los trasplantes no mieloablativos (TNMA) est por debajo de 5% cuando se utiliza
un rgimen de toxicidad reducida y de cerca de 20% con
un tratamiento realmente no mieloablativo. El rechazo
suele ir seguido de la recuperacin autloga. El aumento de la incompatibilidad de los antgenos HLA incrementa el riesgo. Pacientes peditricos con el diagnstico de una aplasia medular que fueron condicionados
con fludarabina, ciclofosfamida y GAT presentaron
mucositis o diferentes grados de enteritis, as como episodios febriles que respondieron al tratamiento antimicrobiano. De los 5 pacientes, 1 present una hemorragia
alveolar difusa. Como consecuencia del quimerismo
mixto puede observarse persistencia de los ttulos de
isohemoaglutininas en el receptor. Tambin se describe
aplasia de clulas rojas refractaria a la eritropoyetina, la
cual puede mejorar despus de la suspensin del tratamiento con ciclosporina. Los protocolos de TNMA
pueden incrementar el riesgo por complicaciones asociadas con el retardo de la reconstitucin de los linfocitos T. Se ha reportado al menos un caso de linfoma virus
de EpsteinBarr despus de un TNMA utilizando fludarabina, ciclofosfamida y globulina antitimoctica. Tambin se ha reportado la reactivacin de una infeccin por
citomegalovirus, pero su incidencia ha sido ms baja
que la observada en los trasplantes convencionales.
Inicialmente, los criterios de inclusin estaban dirigidos a pacientes con hemopatas malignas en edades
avanzadas o con un deterioro orgnico o funcional en
los que estuviera contraindicado un trasplante con acondicionamiento mieloablativo. A medida que se ha extendido la prctica de stos y se han obtenido mejores
resultados, las indicaciones se extienden a pacientes j-
293
venes y en un estado de salud competente, sobre todo en

aquel grupo de enfermedades en las que mejor se ha podido demostrar el beneficio del EICT, ampliando sus indicaciones a pacientes con hemopatas malignas y tumores slidos. En estos casos es necesario modular el
estado de quimera hasta llevarla a una quimera total, ya
sea con la suspensin de la inmunosupresin o con la
utilizacin de infusin de linfocitos del donante. Se han
publicado resultados satisfactorios en el caso del carcinoma metasttico renal.
En defectos congnitos de lneas hematopoyticas no
linfoides, como la anemia drepanoctica y la beta talasemia mayor, un quimerismo mixto de bajos niveles (3 a
10%) pero mantenido puede controlar las consecuencias clnicas del fenmeno bioqumico. Sin embargo, en
algunos desrdenes del metabolismo estn menos definidas las consecuencias del quimerismo mixto. Las enfermedades autoinmunes, como el lupus eritematoso sistmico, la esclerosis mltiple y la enfermedad de Crhn,
son otro grupo acerca del cual se discute actualmente el
posible beneficio de los trasplantes con acondicionamientos no mieloablativos, y se han presentado los resultados en dos casos con sndrome de Evans en los cuales
se logr una remisin clnica e inmunolgica. Los trasplantes alognicos clsicos con toxicidad reducida constituyen una opcin teraputica prometedora en enfermedades no malignas; ya existen trabajos que muestran
resultados en hemoglobinopatas, inmunodeficiencias y
errores del metabolismo. Afortunadamente, en Mxico
se ofrece ya la terapia celular moderna a travs de la
SITECEM en una amplia gama de enfermedades.
Trasplantes no mieloablativos
o de intensidad reducida
Al no utilizarse esquemas mieloablativos, el periodo de
aplasia se acorta, porque se produce la recuperacin hematolgica con ms rapidez y las complicaciones infecciosas disminuyen en el periodo de neutropenia grave.
Los requerimientos transfusionales tambin disminuyen. Mientras que los trasplantes convencionales muestran tasas de mortalidad entre 30 y 50%, los trasplantes
con acondicionamientos no mieloablativos tienen una
mortalidad menor de 10%. Los trasplantes no mieloablativos clsicos han demostrado que puede disminuirse el costo de stos sin comprometer su eficacia,
como tambin se observa en la terapia celular con clulas madre. Este hecho les confiere una ventaja econmica muy importante al brindar esta opcin de tratamiento a pacientes de los pases en vas de desarrollo
que no pueden cubrir los costos de los trasplantes con-
294
vencionales, ms riesgosos y costosos. Hay una ventaja

econmica al utilizarse medicamentos menos costosos
en los protocolos de acondicionamientos y menor cantidad de tratamientos de apoyo o sostn. Tambin representa un ahorro considerable de recursos el que se acorte
o evite el periodo de estada hospitalaria.
Fuentes de clulas hematopoyticas

Clulas obtenidas de mdula sea
sta fue la primera fuente utilizada. Las CPH se obtienen por aspiracin medular. La mayora de los equipos
que realizan el TMO siguen la tcnica de Thomas: al
donante (o al paciente, en caso de autotrasplante) se le
administra en el quirfano anestesia general o raqudea
y se practican entre 100 y 200 punciones aspirativas en
las crestas ilacas, con las que en el adulto normal se
obtienen entre 800 y 1 200 mL de sangre medular con
un contenido de entre 1.5 y 3.5 x 108 clulas/kg del
receptor. En el nio se debe obtener una muestra de 10
a 20 mL/kg del receptor. A medida que se extrae la
mdula se deposita en un medio heparinizado para, al
final, pasarla a travs de filtros de 200 a 300 nm de luz.
De esta forma, los grumos medulares se convierten en
suspensiones celulares y se eliminan las esquirlas seas.
En el TMO alognico clsico esta sangre medular se
transfunde 24 h despus de finalizado el rgimen de
acondicionamiento por va intravenosa. Las clulas madre hematopoyticas son capaces de llegar a la mdula
o regresar de ella en un da. Las molculas de adhesin,
como VLA4 y otras, son importantes en el anidamiento celular. En el TMO autlogo la sangre medular
se criopreserva hasta el momento de la transfusin.
Clulas obtenidas de sangre perifrica
En 1981, despus de descubrir que los factores de crecimiento hematopoyticos causaban una liberacin transitoria de CPH en la SP, se comprob que un nmero
suficiente poda ser recolectado por leucofresis y se
lograba un implante rpido y mantenido despus de la
infusin. Recientemente ha aumentado el uso de SP
como fuente de CPH. En el ao 2000, ms de 95% de
los adultos y 80% de los nios y adolescentes utilizaron
la SP como fuente de CPH, y en los trasplantes alognicos clsicos realizados, ms de 50% de los trasplantes
HLA idnticos, la mayora de los haploidnticos y singnicos, as como un tercio de los no relacionados, utilizaron esta fuente. Las clulas pueden ser recolectadas
despus de la utilizacin de varios mtodos como el uso
(Captulo 9)
de quimioterapia, de factor estimulador de colonias

(FEC) o de ambos, as como de una combinacin de
FEC o el uso de estos factores de manera secuencial.
Para el trasplante alognico de SP exclusivamente se
emplean los FEC para la movilizacin de las clulas del
donante, ya que se trata de un individuo sano y ticamente no es aceptable el uso de quimioterapia. Por lo
general, despus del cuarto o quinto da de la movilizacin, las clulas se recolectan con una mquina separadora con la que se obtienen las clulas mononucleares
y se reinfunden al donante los otros componentes de la
sangre. Para este procedimiento se requieren dos accesos venosos, para permitir un proceso continuo. En muchos pacientes o donantes preparados para movilizar
clulas hematopoyticas, la extraccin de un solo da no
suele bastar para lograr el implante, ya que la cantidad
de clulas es pequea, por lo que se requiere repetir el
proceso durante varios das. Es necesario obtener un gran
volumen de leucofresis, que representa unos 20 L en un
adulto o de 2 a 4 volmenes sanguneos en un nio. Para
esto se necesita realizar dos o ms das de afresis, sobre
todo cuando se va a efectuar un trasplante autlogo y en
pacientes tratados previamente con quimioterapia. En
los enfermos no tratados con quimioterapia intensiva, as
como en donantes sanos para un trasplante alognico clsico, por lo general se requiere una sola sesin.
Se puede lograr la movilizacin inducida por quimioterapia, que se emplea en los trasplantes autlogos,
con el uso de varios regmenes mieloablativos, siendo
uno de los utilizados es el que emplea la ciclofosfamida
(CFM) en una dosis total de 2 g/m2 durante dos das. En
la actualidad, los estudios muestran que el uso combinado de FEC granuloctico (GCSF) con el etopsido
moviliza diferentes subtipos de clulas dendrticas, lo
que favorecera una mejor generacin de respuesta inmunolgica. Se ha observado respuesta con el uso de
GCSF en una dosis de 2 a 10 mg/kg, aunque con dosis
tan altas como 24 mg/kg/da la respuesta ha sido superior, aunque con la desventaja del alto costo y los efectos
secundarios, principalmente el dolor seo. Se ha empleado el FEC grnulomonoctico (GMCSF) de igual
modo, aunque se ha descrito una menor actividad de linfocitos T cooperadores, lo que tendra una repercusin
en la recuperacin inmunolgica despus del trasplante.
La combinacin de ambos factores puede ser superior
al uso de uno solo, pero la mayora de los pacientes responden bien a slo uno de ellos. Algunos regmenes utilizados para la movilizacin de CPH son:
1. Ciclofosfamida: 2 g/m2/da IV durante 2 das, seguido de GCSF 5 mg/kg/da subcutneo (SC)
desde el da 3 hasta finalizar la afresis.
2. GCSF: 10 mg/kg/da IV y etopsido (2 g/m2) EV.

3. GCSF: 5 a 10 mg/kg/da SC cada 12 h durante 3 a
4 das, seguido por afresis los das 4 y 5 siguientes.
4. GMCSF: 250 mg/m2/da SC durante 3 a 4 das, seguido por afresis los das 4 y 5 siguientes.
5. Combinacin de GCSF: 5 a 10 mg/kg/da (SC en
la maana) y GMCSF 250 mg/m2/da (SC en la
tarde) durante 4 das, con afresis, comenzando el
da 5.
6. GCSF: 12 mg/kg dos veces al da durante 4 das.
7. Se ha utilizado el factor de la clula madre (SCF)
recombinante en pacientes que no responden a la
movilizacin para trasplantes de SP con FEC o a
la combinacin de ste con quimioterapia. Se ha
empleado el mismo rgimen anterior, en el cual se
obtuvo una escasa movilizacin ms el SCF, que
result en la obtencin de una cantidad suficiente
de clulas CD34+ con una elevada capacidad de
reconstitucin hematopoytica.
8. En los pacientes que no logran una movilizacin
adecuada, como en fibrosis o metstasis medular,
y tambin en los trasplantes alognicos, se utiliza
con xito el trasplante de mdula estimulada con
GCSF, cuya eficacia es comparada con el TCPH
de SP movilizado con este factor, con menor incidencia de EICHA y crnica (EICHC).
Los donantes sanos de CPH de SP deben tener los siguientes requisitos: hemoglobina 11 g/dL o superior,
recuento plaquetario 150 x 109/L antes de comenzar el
tratamiento de movilizacin y resultados negativos de
estudios virolgicos (citomegalovirus, hepatitis B, C y
virus de la inmunodeficiencia humana o VIH). Si no se
consigue la celularidad necesaria con un solo proceso de
afresis, los requisitos para las donaciones subsiguientes deben ser: hemoglobina 10 g/L y recuento plaquetario 70 x 109/L. La edad no es una limitante. La ventaja
principal del TCH de SP sobre el trasplante de MO es
que el primero contiene un mayor nmero de clulas y
se logra un mejor implante. Por otro lado, tambin comprende un mayor nmero de linfocitos T, fenmeno que
podra favorecer EICHA. A pesar de que la infusin de
linfocitos T es unas 10 veces mayor con el trasplante de
clulas de SP, el riesgo de EICHA no parece aumentar
significativamente, aunque s se eleva el riesgo de la
EICHC. No se conocen bien las razones por las cuales
la EICHA no es frecuente, pero estudios recientes
muestran que las clulas dendrticas producen interleucina 10 (IL10), la que estimula a las clulas Th0 a transformarse en Th2, que segregan IL4 e IL5, las cuales
actan como inhibitorias de la respuesta inmunolgica.
El GCSF estimula las clulas T cooperadoras e induce
295
clulas dendrticas. Otras posibilidades planteadas para

explicar la ausencia de EICHA a pesar del gran nmero
de linfocitos T es que los monocitos infundidos junto
con los linfocitos pueden producir IL10 inmunoinhibidora y puede haber un incremento de las clulas NK inmunoinhibidoras. Por lo tanto, es importante el balance
de Th1/Th2 de los linfocitos CD4. La EICHA puede ser
causada por un predominio de la respuesta Th1 sobre
Th2 y el dominio de esta ltima inhibe la EICHA. El
empleo de esta fuente celular tiene problemas ticos derivados del uso de FEC en donantes sanos para la movilizacin celular, ya que persiste la duda de si se puede
lograr o no una permanente reproduccin de las clulas
hematopoyticas. El otro problema tico est relacionado con la posibilidad de elevado riesgo de EICH, causado por el mayor contenido de clulas T. La administracin de FEC causa la mayora de los sntomas en el
donante, que incluyen dolor lumbar, seo y muscular,
cefalea, hipotensin, malestar general, somnolencia,
prdida de apetito, erupcin, nuseas, fiebre, retencin
de lquidos, etc. Se han descrito casos de paro cardiaco
e infarto del miocardio durante la afresis en donantes
con antecedentes de enfermedades cardiovasculares.
Otras complicaciones incluyen aumento de tamao del
bazo y ruptura esplnica, as como signos de hematopoyesis extramedular. Tambin se puede presentar epiescleritis e iritis. El sangrado por trombocitopenia producido despus de la administracin del GCSF en
pacientes que comienzan con un nmero de plaquetas
bajo se debe al aumento de la agregacin plaquetaria.
Ventajas de esta fuente de CPH: no hay necesidad de utilizar el quirfano (y se evitan as todos los riesgos que
esto conlleva), obtencin de una mayor cantidad de clulas hematopoyticas, rpida recuperacin hematolgica despus del implante, menor posibilidad de obtencin de clulas malignas y disminucin del riesgo de
infeccin del material recolectado; tambin se pueden
obtener clulas hematopoyticas en situaciones en las
que se dificulta su extraccin de la mdula sea (mielofibrosis, irradiacin plvica, etc.). Las desventajas incluyen: mayor posibilidad de desarrollar EICH dado el
mayor contenido de clulas T, y necesidad del uso de factores estimuladores hematopoyticos en personas sanas.
Las CPH muestran un amplio rango de molculas de
adhesin, que incluye miembros de la familia de las integrinas, selectinas y la superfamilia de las inmunoglobulinas, entre otras. Entre estas molculas de adhesin,
el VLA4, conocido como CD49d, utiliza importantes
ligandos, como la fibronectina y el VCAM1, que son
expresados en el estroma de la mdula sea. La expresin CD49d sobre las clulas CD34 puede estar involucrada en el proceso de movilizacin y muestra una co
296
expresin ms baja en las clulas, dado el efecto

producido por la administracin de factores estimuladores de colonias. El uso de FEC permite una migracin
de las clulas hematopoyticas hacia la periferia, ya que
es capaz de escindir las molculas de adhesin y permitir la salida de las clulas de su nicho, por lo que se
piensa que sta es una de las razones por las cuales las
clulas CD34+ se movilizan fcilmente desde la MO
hacia la SP. Las clulas son fcilmente reconocidas por
el estroma medular y en este proceso est involucrado
el factor 1 derivado del estroma producido por la MO,
que se une con el receptor CXCR4 y juntos activan
varias molculas de adhesin como la VCAM1 a travs de varias seales intracelulares. Otro factor involucrado en el proceso de anidamiento y en el implante es
la presencia del cKit, el cual permite a la clula madre
adherirse al estroma medular. A pesar de que no existe
un criterio uniforme en cuanto al nmero de CPH por
recolectar, se considera necesario un mnimo de clulas
CD 34+ > 2 x 106/kg del receptor.
Clulas hematopoyticas
obtenidas de cordn umbilical
El reconocimiento de que las clulas del CU tienen caractersticas de crecimiento, capaces de producir una repoblacin a largo plazo de clulas hematopoyticas, dio
lugar a la idea de obtener clulas de la placenta y de la
vena umbilical despus del parto para el trasplante alognico. El primer trasplante alognico de CU exitoso se
realiz en 1989 para tratar a un nio con anemia de Fanconi, y se us como donante su hermana HLA idntica.
Se ha demostrado que el CU de recin nacidos tanto
a trmino como pretrmino contiene un nmero determinado de clulas madre hematopoyticas capaces de
producir el implante en nios y adultos. Su eficacia en
estos ltimos es limitada, ya que la cantidad de clulas
madre es demasiado pequea para proveer un implante
duradero, a diferencia de la terapia celular con clulas
madre del SITECEM, donde el nmero de clulas
madre implantadas es suficiente para ofrecer una regeneracin exitosa. En la actualidad, el CU es la tercera
fuente de clulas para trasplante en adultos y la segunda
en nios. Se ha empleado en enfermedades genticas y
malignas y utilizado en pacientes con compatibilidad
total o parcial, familiares y no familiares. Para la obtencin de estas clulas se necesita una serie de requisitos
como: mujeres con antecedentes obsttricos normales,
controles serolgicos negativos durante la gestacin,
ausencia de antecedentes mdicos maternos o paternos
que supongan un riesgo de transmisin de enfermedades
infecciosas o genticas a travs de la sangre del cordn,
(Captulo 9)
desarrollo normal del parto y consentimiento informado

firmado por la madre. Se deben excluir partos antes de las
32 semanas, fiebre mayor de 38 _C en el momento del
parto, inmunizacin fetomaterna y signos de sufrimiento fetal. Durante el embarazo se realiza una historia
clnica y se efectan determinaciones serolgicas de
enfermedades infecciosas a la madre, as como cultivo de
la sangre del cordn. Al nacimiento se repiten estos exmenes serolgicos y se hace un examen minucioso del
recin nacido. Los resultados serolgicos, junto con el
volumen, celularidad, estudio HLA y grupo sanguneo,
se guardan en un registro confidencial que autoriza el uso
teraputico de la donacin. Si la sangre del cordn no
cumple las caractersticas requeridas, ser desechada.
Mtodos de recoleccin
1. Previo alumbramiento (coleccin in utero). Se
realiza mediante la puncin y aspiracin de la
vena umbilical utilizando jeringuillas de 60 mL
con anticoagulante, o por puncin de la vena umbilical con set de aguja incorporada a bolsa de recoleccin y recogida por gravedad en bolsas que
contienen anticoagulante.
2. Despus del alumbramiento (coleccin ex utero)
se cuelga la placenta y se utilizan los mismos
mtodos que en la coleccin in utero, o se secciona
el cordn umbilical cerca de la placenta y se cateterizan la arteria y la vena umbilical.
3. A travs de la arteria se infunde una solucin
salina preparada, y a travs de la vena se conectan
jeringuillas de 60 mL y se aspira hasta obtener
toda la sangre placentaria posible. El cordn se exprime suavemente y se deja correr la sangre venosa por gravedad en un tubo estril. Se determina
el volumen, se realizan recuentos celulares: clulas
totales, mononucleares, CD34, unidades formadoras de colonias granulomonocticas (GMCFU),
tipificacin HLA, grupo sanguneo y factor, serologas virales y cultivos para bacterias y hongos.
Una unidad de sangre del cordn se considera apta para
el trasplante cuando presenta las condiciones siguientes: volumen de 100 mL (40 a 250 mL); recuentos de
leucocitos de 10 x 108; recuentos de CD34+: 3 x 106 y
recuentos de GMCFU 5 x 105. Se sabe que las clulas
madre del CU poseen una expansin ex vivo mayor que
las clulas de la MO cuando son estimuladas con factores de crecimiento. La expansin de las clulas CD34+
del CU durante 14 das con interleucina 11 (IL11) y
GCSF es significativamente mayor que la realizada en

clulas de la MO. Se ha demostrado una alteracin significativa en el nmero de citocinas y linfocinas hematopoyticas en la sangre obtenida del CU, tales como
GCSF, GMCSF, as como de IL3 comparado con el
adulto, lo que explica que el neonato est ms propenso
a infecciones. Esto lleva a la demora en la recuperacin
hematolgica e inmunitaria despus del trasplante.
Existe una disminucin del nmero absoluto de clulas
CD4+, CD 8+ y CD3+, pero una relacin CD4+/CD8+
ms alta que en las clulas de la SP. El volumen de sangre recolectada de cada placenta est entre 40 y 240 mL
y el nmero de clulas nucleadas de una sola muestra
vara entre 4.7 x 108 y 4.6 x 109. Con el objeto de aumentar la cantidad de clulas, se utilizan mltiples cordones
umbilicales en combinacin para lograr el injerto. Barkers y col. realizaron un estudio en pacientes con hemopatas malignas de riesgo elevado, que no posean donantes relacionados y fueron trasplantados empleando
dos cordones umbilicales despus de un acondicionamiento intenso, demostrando que el injerto ocurre ms
rpidamente que cuando se usa un solo CU. El fcil y
pronto acceso, la ausencia de riesgo en el procedimiento
(tanto para la madre como para el recin nacido) y lo
innecesario de una compatibilidad rigurosa hacen muy
prometedor este tipo de trasplante. Las ventajas de esta
fuente de CPH son: ausencia de riesgo para el donante;
menor posibilidad de transmisin de infecciones; disminucin de la frecuencia y gravedad de EICH; mayor
posibilidad de crear un banco de clulas; aumenta la
posibilidad de incluir grupos minoritarios; menor tiempo de bsqueda de donante; uso para el trasplante de
genes; expansin ex vivo; posibilidad de combinar
varios donantes; posibilidad de utilizar donantes no totalmente compatibles. Las desventajas son: escaso nmero de clulas; poca factibilidad en adultos o pacientes
de gran peso; se desconoce si tiene un efecto injerto contra leucemia efectivo; recuperacin hematopoytica
ms lenta; imposibilidad de una segunda donacin en
caso de fallo del implante y posibilidad de transmisin
de enfermedades genticas no reconocibles en el momento del nacimiento, por lo cual se prefiere la terapia
celular moderna, debido a la elevada calidad de las clulas madre que utiliza.
Clulas hematopoyticas
obtenidas de hgado fetal
La primera hematopoyesis extravascular detectable en
el feto humano ocurre en el hgado en las primeras 6 semanas y se mantiene como el mayor sitio con esta funcin hasta el nacimiento. Esto motiv al uso de este rgano como fuente de CPH. Para la obtencin de estas
297
clulas del hgado fetal se disgrega el material heptico

obtenido de fetos procedentes de abortos espontneos de
entre 16 y 24 semanas. Se separa el tejido conectivo de
las suspensiones celulares por gravedad, los eritrocitos se
lisan y las clulas mononucleares se separan por centrifugacin, se coleccionan, se lavan y se criopreservan.
Al finalizar el proceso de recoleccin de las clulas
madre se realiza la cuantificacin de las GMCFU, pero
estas tcnicas son muy laboriosas, se requieren dos
semanas para tener el resultado y las cifras varan de
acuerdo con los diferentes laboratorios. Para tener una
cifra de clulas con mayor rapidez se cuenta el nmero
de clulas CD34+, marcador presente en las clulas
madre, y se considera como til la presencia de al menos
2 x 106 clulas CD34+/kg de peso del receptor. Por
debajo de este valor aumenta la posibilidad de demora
del implante de neutrfilos y especialmente de plaquetas. Despus de la obtencin de las CPH, stas se mantienen en refrigeracin hasta su posterior infusin. Una
vez que el producto se ha obtenido e identificado, debe
ser conservado a una temperatura de 4 _C si es por menos de 48 h, ya que la viabilidad desciende 5% en 24 h,
y de 50 a 70% en 7 das. Se debe criopreservar a 80 C
al menos si se va a utilizar antes de 6 meses y despus
de este tiempo debe ser a una temperatura de 196 _C
en nitrgeno lquido, y as puede mantener la capacidad
de producir un adecuado implante hasta 10 aos despus. La criopreservacin es un factor importante para
los trasplantes autlogos, ya que permite el mantenimiento a largo plazo de la viabilidad y la funcin
reconstructiva, con un mnimo de riesgo de contaminacin microbiana. En el caso de los trasplantes alognicos, estas clulas son obtenidas en el momento en que
van a ser usadas y no es necesaria la criopreservacin.
En ocasiones es necesario actuar sobre la muestra obtenida antes de administrarla al paciente. En la seleccin
de las clulas por infundir puede haber eliminacin de
las clulas malignas (seleccin negativa) u obtencin de
clulas CD34+ (seleccin positiva). Tambin se puede
lograr una proliferacin de clulas diana especficas,
tales como clulas madre o dendrticas y deplecin de
linfocitos T, entre otros procedimientos. Los mtodos
de separacin y seleccin son:
1. Separacin fsica mediante el tamao, densidad,
lisis osmtica, hipertermia y aglutinacin.
2. Separacin farmacolgica por medio de 4hidroperoxiciclofosfamida, mafosfamida, mostaza nitrogenada y VP16.
3. Separacin por mtodos inmunolgicos y anticuerpos monoclonales mediante lisis mediada por
complemento, anti CD52 que elimina linfocitos T,
298
B y monocitos; inmunotoxinas: ricina A, exotoxinas, Pseudomonas diftrica; anticuerpos con radionclidos; anticuerpos fijados a partculas inmunomagnticas y AcMo, partculas densas
combinadas con AcMo, partculas de polipropileno no porosas de baja densidad y separacin por
flotacin.
4. Cultivos en presencia de factores de crecimiento
y lisis por toxinas.
5. Fisicoqumicos por fotoactivacin de la rodamina.
6. Seleccin positiva de CD 34 mediante purgado indirecto, recuperando nicamente las clulas
CD34+ y mediante citometra de flujo con sorting.
Despus de la recoleccin, las clulas pueden ser sometidas a los procesos siguientes:
1. Deplecin de granulocitos por centrifugacin.
2. Deplecin de las clulas tumorales por tcnicas de
separacin.
3. Deplecin de las clulas T para disminuir el riesgo
de EICH en el trasplante alognico y no alognico.
4. Aplicacin de anticuerpos monoclonales.
5. Cultivo junto con citocinas para lograr un crecimiento ex vivo.
6. En caso de incompatibilidad eritrocitaria se debe
reducir el hematocrito, el volumen plasmtico o
ambos.
7. Para ahorrar espacio de almacenamiento se realizan tcnicas de separacin por densidad fsica, utilizando dispositivos de procesamiento mecnico
u otras tcnicas.
Las clulas CD34+ movilizadas a la SP proliferan con
la presencia de IL1, IL3 e IL6, eritropoyetina (Epo),
GMCSF, GCSF y SCF. El propsito de la expansin
es lograr una capacidad reconstructiva hematopoytica
suficiente, con pequeos volmenes de material de cultivo o para pacientes que movilizan pocas clulas, con
el objetivo de acortar la duracin de la citopenia. En el
trasplante alognico clsico, el tratamiento ms frecuente consiste en la deplecin de los linfocitos T con la
finalidad de prevenir la EICH. Desafortunadamente, este
procedimiento se acompaa de un aumento en el nmero
de los fallos del implante, de recidivas leucmicas por un
menor efecto injerto contra leucemia y de un retraso en
la reconstitucin inmunolgica. Por ello, la deplecin
linfoide T no mejora de forma global la supervivencia
libre de enfermedad de los pacientes trasplantados.
En los trasplantes autlogos, el tratamiento ex vivo
tiene como objetivo eliminar la celularidad neoplsica
residual que pueda existir, que es la mayor limitacin de
(Captulo 9)
este tipo de trasplante. Se utilizan varios mtodos para

eliminar las clulas malignas de las colecciones de CPH
con el objetivo de separar las clulas normales de las
malignas existentes en el inculo, sin provocar dao
sustancial de las CPH y as no afectar la potencialidad
de un injerto exitoso. Estos mtodos estn basados tanto
en una seleccin negativa como positiva. La seleccin
positiva ms utilizada es aqulla que se basa en el uso
de un medio enriquecido para conservacin de las CPH
y la seleccin de las clulas CD34+. Esta tcnica est
basada en la presencia de antgenos de superficie expresados por los precursores hematopoyticos y requiere la
inmunoseleccin de la clula progenitora mediante el
uso de antgenos de superficie como el CD34. La principal ventaja de este mtodo es que no depende de caractersticas especficas de las clulas tumorales, tales
como expresin de antgenos o sensibilidad a drogas
citotxicas, mientras la clula tumoral sea negativa para
el antgeno de superficie celular. Otra ventaja de la seleccin positiva sobre la negativa es que la primera
puede ser aplicada fcilmente a gran nmero de clulas
mononucleares. La seleccin negativa se basa en tcnicas que depletan las clulas tumorales en mayor cantidad que a las clulas normales. Esto incluye el uso de
agentes citotxicos como la mafosfamida (ASTAZ), la
4hidroperoxiciclofosfamida (4HC), la mostaza nitrogenada y el VP16, entre otros. Estos compuestos tienen poco efecto en las clulas madre hematopoyticas
no comprometidas debido a que se encuentran en estadio Go, pero destruyen las clulas leucmicas por su
rpida proliferacin. Las clulas por infundir se incuban
con el citotxico por un periodo de tiempo apropiado y
luego se lavan y se criopreservan. En el caso de los anticuerpos monoclonales, los agentes inmunolgicos actan sobre determinados antgenos celulares, como es el
caso del Campath 1 (anti CD52). Las propiedades que
debe tener un agente depurador, inmunolgico o farmacolgico son las siguientes: debe salvar las clulas hematopoyticas necesarias para la recuperacin hematolgica luego del tratamiento con altas dosis; debe
eliminar las clulas tumorales durante la breve exposicin, con frecuencia disponible antes de la criopreservacin; no debe ser txico en infusin cuando las CPH
se reinfunden, debe ser eliminable y capaz de eliminar
clulas malignas con independencia del estado del ciclo
celular. La combinacin de mtodos de seleccin negativa y positiva lleva a una mejora en la pureza de las
clulas coleccionadas.
Los pacientes sometidos a trasplante de clulas madre hematopoyticas (TCPH) pasan por un periodo prolongado de disfuncin inmunolgica que puede persis-
299
Cuadro 95. Estado de la inmunidad celular y humoral en el trasplante de clulas hematopoyticas

Fenotipo
Clulas B
Clulas T
Incremento de expresin de CD
10+ en mdula por un ao
Inversin de CD4/CD8 por 6 a

12 meses
Incremento de expresin de CD
10+ en mdula por un ao
Circulacin de clulas B inmaduras CD23+, CD38+, IgM+
por un ao
Prdida de la complejidad en el
reordenamiento de genes de
Igs
Funcin in vitro
Inversin de CD4/CD8 por 6 a

12 meses
Prdida de los receptores de
clulas T
Funcin in vivo
Clulas NK
Recuperacin de las clulas

CD3CD3+/ CD56+ a niveles
normales o aumentados en el
postrasplante inmediato
Disminucin de la respuesta
proliferativa a Stafilococcus
aureus
proliferativa a antgenos CD3,
IL2 y reaccin alognica linfoctica mixta
Disminucin de la produccin
Disminucin de los linfocitos T
de IgM en respuesta a antgecitotxicos al virus Epstein
nos
Barr
Disminucin de la produccin
de IL2
Disminucin de los niveles de
Disminucin de la hipersensibiliIgM, IgG e IgA por 3 meses, 6
dad retardada
a 9 meses y ms de 2 aos,
respectivamente
secundaria en presencia de
EICH crnica
tir por varios aos. Presentan un patrn predecible de

deficiencia y recuperacin del sistema inmunitario y
existe una afectacin de la inmunidad tanto celular
como humoral (cuadro 95), lo cual hace que estos pacientes tengan un riesgo elevado de infecciones, con
alta morbiletalidad. El rgimen de acondicionamiento
(RA) destruye la hematopoyesis normal con dao de

neutrfilos, monocitos y macrfagos, as como a las clulas de las mucosas, y causa una prdida temporal de
la integridad de esta barrera. El tracto gastrointestinal,
que normalmente contiene bacterias y hongos, se convierte en un reservorio patgeno potencial.
Cuadro 96. Factores que intervienen en la recuperacin inmunitaria

despus del trasplante alognico clsico
Factor
Fuente de clulas utilizada
Inmunosupresin para prevenir o tratar la EICH
EICH
Edad del receptor (edad del timo)
Cantidad de linfocitos T
Profunda inmunoablacin del receptor
Inmunodominancia
Clulas T reguladoras
Equilibrio Th1/Th2
Factores de crecimiento IL2, IL12, IL7
Quimerismo linfoide
Incompatibilidad HLA
Efecto
La SP tiene una recuperacin ms rpida que la MO
Dao del EICL y respuesta antiviral
Inmunodeficiencia, dao tmico demora la tolerancia
Pacientes jvenes favorecen una rpida recuperacin tmica
Mayor cantidad mejora la recuperacin
Favorece la expansin de clulas T
Favorece la expansin de clulas T
Reduce EICH, retiene el EICL
Reduce EICH, retiene el EICL
Favorecen la expansin de clulas T y la recuperacin tmica
El quimerismo mixto reduce el EICL y la EICH
La alorreactividad de las clulas favorece el EICL y la EICH
SP = sangre perifrica; MO = mdula sea; EICH = enfermedad injerto contra hospedero; EICL = efecto injerto contra leucemia; IL = interleucina;
NK = clula asesina natural; Th = clula T cooperadora.
300
La recuperacin de la respuesta inmunolgica tambin depende del tipo de trasplante que se realice, ya que
en el alognico se adicionan otros factores (cuadro 96).
La recuperacin de la inmunidad celular y humoral despus de la exposicin a elevadas dosis de terapia citotxica depende predominantemente de la reconstitucin
de los elementos linfoides.
En el trasplante alognico clsico, la reconstitucin
inmunolgica es particularmente ms lenta debido a la
reeducacin de las clulas linfoides del donante en un
ambiente extrao en ausencia de timo funcional. La naturaleza de la inmunidad disfuncional surge de las alteraciones cualitativas y cuantitativas de los linfocitos T
y B, lo que en ausencia de enfermedad injerto contra
hospedero crnica (EICHC) se resuelve en un periodo
de 6 a 12 meses.
Despus del TCPH hay una prdida de la memoria de
la inmunidad acumulada durante toda la vida a la exposicin a agentes infecciosos, ambientales y vacunaciones. Debido a que la transferencia de inmunidad del
donante al receptor es variable e influida por el tiempo
de exposicin antignica entre el donante y el receptor,
la inmunidad adquirida pasiva no es confiable para producir inmunidad a largo plazo.
Despus del TCPH, el nmero de linfocitos T y B circulantes recupera sus valores normales en las primeras
seis semanas, manteniendo un dficit funcional durante
el primer ao. La recuperacin inmunolgica es ms rpida en los trasplantes singnicos y autlogos que en los
alognicos y en los de sangre perifrica (SP), en comparacin con los de mdula sea (MO). La cantidad de clulas T CD3+ se recupera en poco tiempo despus del
trasplante, y ms an cuando se infunde una mayor cantidad de clulas CD34. Tambin se mantiene una inversin prolongada del ndice CD4/CD8 debido a una disminucin de las CD4 cooperadoras y a un aumento de
las CD8 citotxicas. Existe una deficiencia en el nmero de clulas CD45RA+ generadas durante este periodo, y la relacin CD4/CD45RA+ puede no recuperarse
hasta dos aos despus. Durante este tiempo tambin
hay una prdida de receptores T, lo que persiste por ms
de un ao.
La funcin de las clulas T se mantiene alterada
durante los 6 a 12 meses que siguen al TCPH, y en el alognico, el repertorio inmunolgico es dominado por
clulas T derivadas del donante, predominantemente
clulas de memoria efectoras. La produccin de interleucina 2 (IL2) por las clulas T est disminuida en respuesta a estmulos con mitgenos, y estn ausentes las
reacciones de hipersensibilidad retardada, lo que se recupera slo cuando no existe EICHC. La actividad
citoltica de las clulas CD8+ est comprometida, como
(Captulo 9)
se demuestra en la respuesta inefectiva frente al virus

EpsteinBarr (VEB).
La fase final de la recuperacin inmunitaria celular
est dada por la emergencia de nuevas clulas T generadas de precursores pretmicos del donante en el caso del
trasplante alognico clsico. Estas clulas se procesan a
partir del tejido tmico del receptor, que las hace tolerantes al ambiente. Existen diferencias en esta educacin
de los linfocitos de acuerdo con la edad del receptor. Los
nios y los pacientes jvenes tienen un timo ms funcional y, por lo tanto, una mayor recuperacin del nmero
de clulas T durante los primeros dos aos. Ciertos estudios demuestran que los pacientes que son sometidos a
TCHP antes de los 18 aos de edad tienen un conteo de
clulas CD4+ igual a los donantes pocos aos despus
del trasplante, mientras que a los que se les realiz el procedimiento despus de esta edad mantenan el conteo
ms bajo. Esto sugiere que en pacientes mayores de 18
aos de edad la insuficiencia tmica postrasplante no desaparece por completo.
En contraste, la reconstitucin de las clulas asesinas
naturales (NK) no requiere un timo funcional y ocurre
rpidamente en las primeras semanas del periodo postrasplante. El nmero de clulas CD3, CD16+ y CD56+
est aumentado en el primer mes del trasplante alognico y autlogo, e incrementa sus niveles en los primeros tres meses. Los neutrfilos se recuperan en dos o tres
semanas, pero se mantiene una disminucin de la quimiotaxis por un periodo de hasta cuatro meses. La cantidad de monocitos en la SP regresa a los valores normales en los primeros 40 das y su funcin es generalmente
normal. Los macrfagos aparecen en el hgado y en los
pulmones cerca del da 80 y se ha demostrado que son
del donante.
En el periodo postrasplante inmediato, las clulas B
medulares expresan el antgeno temprano CD10. Durante el primer ao del trasplante estas clulas expresan
CD1c+, CD5+, CD23+ y CD38+, as como IgM e IgD
unidos a la membrana. En ausencia de EICH, las clulas
perifricas que expresan CD19+ y CD20+ regresan a la
normalidad despus de tres a seis meses postrasplante,
y la recuperacin es ms rpida en pacientes que reciben
trasplante autlogo de sangre perifrica, dado el aumento de clulas T auxiliadoras CD4+/CD45RO+. La respuesta proliferativa de clulas B a mitgenos est casi
abolida durante los primeros meses.
Las concentraciones sricas de IgM son normales en
los primeros tres a seis meses postrasplante, pero las de
IgG se mantienen muy bajas durante al menos nueve
meses, y los niveles de IgA pueden demorar hasta dos
aos en recuperarse. La ausencia de clulas T cooperadoras para la estimulacin de las clulas B resulta en una

Cuadro 97. Factores que afectan la
recuperacin inmunitaria segn el tipo
de trasplante celular
Tipo de
trasplante
Autlogo
Alognico
Factor predisponente
S Destruccin de los elementos linfoides
S Neutropenia prolongada
S Dao de la mucosa gastrointestinal
S En adultos, ausencia de timo funcional
Adems de los factores presentes en los
autlogos:
Reeducacin de las clulas linfoides
Presencia de EICH y fenmenos inmunolgicos asociados
Inmunosupresin postrasplante
EICH = enfermedad injerto contra hospedero.
dificultad para el cambio de clase de inmunoglobulina

de IgM a IgG despus de la exposicin antignica. La
recuperacin de IgG 2 e IgG4 est particularmente demorada, y en los primeros tres meses del trasplante los
pacientes no logran incrementar los niveles de IgM primaria en respuesta a la inmunizacin. En general, la recuperacin inmunolgica depende de un nmero de factores (cuadro 97) y se produce ms rpidamente en los
trasplantes de SP que en los de MO, ya que el primero
contiene 10 veces ms clulas T y B y existe un aumento
fundamentalmente de clulas CD4+, as como una relacin CD4/CD8 ms elevada que en los de MO. Tambin
se han observado diversos fenmenos autoinmunitarios
(anemia hemoltica, trombocitopenia), as como la
transmisin de enfermedades alrgicas (asma, hipersensibilidad) y autoinmunes (tiroiditis, diabetes) del donante al receptor.
Debido al dao inmunitario con el trasplante clsico,
los pacientes experimentan infecciones en diferentes periodos postrasplante, lo que refleja el defecto predominante en el hospedero (figura 96). Esto hace que existan
patrones de infecciones en este periodo, esquematizados
en tres fases y que comienzan desde el da 0 del trasplante.
301
microorganismos ms comunes son los grammpositivos, la Candida, y si la neutropenia contina, el Aspergillus. En ocasiones puede haber reactivacin del virus
herpes simple.
Fase II posimplante
Esta fase comprende a partir del da 30 y hasta el da
100, y se caracteriza por el dao de la inmunidad mediado por las clulas; la duracin de este defecto se puede
prolongar por la presencia de la EICH y la terapia de inmunosupresin utilizada para esto. Despus del implante, los herpes virus y particularmente el CMV son los
agentes patgenos con mayor presencia y pueden originar un cuadro de neumona, hepatitis y colitis. Tambin
son frecuentes durante este periodo las bacterias gramnegativas, el Pneumocystis carinii y algunas especies de
Aspergillus.
Fase III tarda
Las infecciones son ms frecuentes en los pacientes sometidos a trasplante alognico clsico que padecen de
EICH. En estos casos se mantienen los defectos de la
inmunidad humoral y celular y el dao en la funcin del
sistema reticuloendotelial, y los pacientes estn en riesgo de sufrir infecciones por CMV, virus varicelazoster,
virus de EpsteinBarr y virus respiratorios, as como
por bacterias encapsuladas como H. influenzae y S.
pneumoniae.
Fase neutropnica Da 100 Meses despus del trasplante

pos TMO
TMO
8 9 10 11 12
Bacteriana
Hongos
HV/VSR
Virus varicelazoster
Neumocistis carinii
Citomegalovirus
Bacteriana (sinopulmonar)
Fase I preimplante
Incluye a partir del da 0 y hasta el da 30 posteriores al
trasplante (primer mes). Durante este periodo los pacientes tienen dos factores de riesgo para la infeccin:
la neutropenia mantenida y la ruptura de la barrera cutneomucosa. Generalmente los primeros episodios febriles son de causa bacteriana y slo en ocasiones se
puede identificar un germen o sitio de infeccin, por lo
que estos cuadros se tratan de manera emprica. Los
Neumona idioptica
EICH aguda
EICH crnica
Figura 96. Infecciones que se presentan en el TMO que

muestran el tiempo aproximado de la aparicin de las complicaciones. TMO = trasplante de mdula sea; EICH = enfermedad injerto contra hospedero; HV = herpes virus; VSR
= virus sincicial respiratorio.
302
PAPEL INMUNOMODULADOR Y
RESPUESTA ALOINMUNE DE
LAS CLULAS MADRE
(Captulo 9)
aloinmunidad es un proceso complejo que involucra tanto a los linfocitos T como a las clulas NK del donante,
que interactan con clulas especficas del receptor.
Clulas T
De manera interesante, se ha demostrado el papel inmunomodulador de las clulas madre de mdula sea
(BMSC) tanto autlogas como alognicas. Las clulas
madre multipotenciales y pluripotenciales suprimen
fuertemente la inmunidad celular al inhibir la proliferacin del linfocito T, disparada por estmulos mitognicos celulares, inespecficos o pptidos antignicos, en
una restriccin inmunolgica dosisdependiente. Parece
ser que las clulas madre no histocompatibles pueden
suprimir la activacin de linfocitos por mecanismos
desconocidos hasta ahora. En los seres humanos, el trasplante alognico de BMSC en pacientes con osteognesis imperfecta incrementa la formacin de osteoblastos
en 2%, lo que demuestra que los precursores mesenquimticos presentes en la mdula sea tienen efecto teraputico real. En otras palabras, la terapia celular con clulas madre alognicas es un hecho demostrado que
puede emplearse en prcticamente cualquier patologa
crnica degenerativa o traumtica en el campo de la medicina regenerativa, como lo hacen en protocolos de terapia celular en el SITECEM. Se ha demostrado que las
clulas madre mesenquimticas (MSC) tienen el potencial de inhibir la proliferacin de los linfocitos T a travs
de vas inmunosupresoras mediadas por CD8, lo que
permite el trasplante alognico sin rechazo.
Actualmente, la terapia celular con BMSC se utiliza
como inmunoterapia adoptiva por la capacidad de las
clulas madre multipotenciales de inducir tolerancia y
homeostasis inmunolgica en el paciente tratado con
terapia celular. La morbilidad y mortalidad del procedimiento ha mejorado en los ltimos aos gracias a un mejor conocimiento del sistema de histocompatibilidad, al
desarrollo de la terapia antiinfecciosa, al uso de ambientes con escasa contaminacin microbiana, al soporte hemoteraputico y a la administracin de inmunosupresores potentes. A pesar de que la tcnica para la obtencin
y administracin de la mdula sea es un procedimiento
relativamente sencillo, los problemas relacionados con
el acondicionamiento del receptor, los estudios de histocompatibilidad, las alteraciones inmunes que aparecen
en el periodo postrasplante, la prevencin y el tratamiento de la enfermedad de injerto contra hospedero (EICH)
y de las infecciones que pueden ocurrir despus del trasplante, as como las medidas de aislamiento del enfermo,
hacen que en la actualidad el trasplante clsico sea uno
de los ms complejos en el campo de los trasplantes. La
Existen varias fases en la alorrespuesta. En la fase inicial o de induccin, las clulas CD8+ y CD4+ del donante interactan con antgenos del complejo mayor de
histocompatibilidad (CMH), clase I y clase II respectivamente, que se encuentran en las clulas presentadoras
de antgenos (CPA) del receptor. La seal dada por el
CMH a travs de los receptores de clulas T y de las
clulas CD3+, CD4+ y CD8+ constituyen la primera
seal para la activacin de las clulas T. Una respuesta
completa de las clulas T lleva a la proliferacin de las
clulas efectoras, requiriendo una segunda seal dada
por la interaccin con molculas coestimuladoras como
CD80 y CD86 sobre las CPA y las clulas CD28+ en la
superficie de los linfocitos. En esta segunda fase o de
expansin, las clulas T proliferan bajo influencia de la
IL2 y la IL12. En la tercera fase o efectora, las clulas
T aloactivadas interactan con sus antgenos similares
en las clulas diana del receptor, causando dao celular
por citotoxicidad directa mediante la liberacin de perforina y granzima, o por la produccin de citocinas inflamatorias.
Clulas NK
Mientras que las clulas T requieren estimulacin y posterior expansin, la interaccin de las clulas NK con
otras clulas produce una seal positiva para destruir
inmediatamente el blanco mediante la liberacin de perforina y granzima. Normalmente estas clulas estn
inhibidas por seales negativas a travs de los receptores KIR, que interactan con las molculas clase I del
sistema HLA de las clulas diana. Cuando se encuentran con clulas que tienen prdida de las molculas
clase I, o expresan estas molculas y no son reconocidas
como propias (como ocurre en los trasplantes HLA no
compatibles), no se produce la seal negativa y se liberan sustancias como la perforina y la granzima. Las
reacciones aloinmunes son responsables de tres eventos
principales: el implante, la EICH y el efecto injerto contra tumor (EICT).
Tanto las clulas T como las NK del donante y del
receptor, as como las clulas CD34+ del donante, estn
involucradas en la toma del injerto, y se necesita una importante inmunosupresin para que esto ocurra. En los
trasplantes HLA idnticos, el implante es el resultado de
la accin de una alorrespuesta exitosa contra las clulas
T residuales del receptor, que causan el reemplazo del

sistema inmunitario de ste. El uso de elevadas dosis de
inmunosupresores en los trasplantes no mieloablativos
con fludarabina y ciclofosfamida muestra la importancia del injerto de las clulas T en el establecimiento de
una hematopoyesis duradera. En las primeras semanas
despus de este tipo de trasplante, 100% de las clulas
T son de origen del donante, mientras que la recuperacin de la hematopoyesis es predominantemente del
receptor. Semanas o meses ms tarde, la hematopoyesis
del receptor es sustituida por la del donante, seguida por
lo que se considera efecto injerto contra mdula del trasplante. En contraste, los receptores que no logran un injerto temprano de las clulas T del donante tienen un
elevado riesgo de rechazo por las clulas residuales del
receptor. Aunque algunas investigaciones han demostrado la importancia de la resistencia de las clulas NK
del receptor a la radioterapia en el fallo de injerto, estas
clulas tienen un papel limitado en este aspecto. Tanto
el acondicionamiento como un nmero importante de
clulas madre son capaces de sobrepasar los mecanismos de resistencia por las clulas NK del receptor. Las
clulas NK del donante desempean un papel importante en la toma del injerto, ya que lo favorecen a travs
del reconocimiento y la destruccin de los linfocitos y
clulas hematopoyticas residuales en el receptor. Las
clulas CD34+ influyen en el injerto de diferentes formas. Estas clulas pueden bloquear la funcin de las
clulas T del receptor a travs de un efecto de veto que
lleva a la apoptosis de las clulas T reactivas del receptor. En los trasplantes depletados de clulas T, las clulas CD34+ del donante son la fuente principal de clulas
NK que favorecen el injerto tanto en los trasplantes
HLA idnticos como no idnticos, por lo que un alto nmero de clulas CD34+ tienen un efecto beneficioso en
este proceso.
ENFERMEDAD INJERTO
CONTRA HOSPEDERO (EICH)
La EICH es la principal complicacin de los TCPH alognicos clsicos y de rganos que contienen clulas linfoides. En esta entidad se conjuga una serie de eventos
inmunolgicos entre el tejido injertado y el receptor,
disparados por sus diferencias antignicas, lo cual produce diversas manifestaciones clnicas, de leves a muy
severas, que pueden comprometer la vida del paciente.
La denominacin inicial de EICH fue propuesta en
1966 por Billingham, quien enunci los siguientes criterios para la presentacin de esta entidad: el injerto
303
debe contener clulas inmunolgicamente competentes

y antgenos tisulares del hospedero diferentes de los del
donante y receptor inmunocomprometido. La EICH tiene dos formas clnicas: la aguda (EICHA) y la crnica,
con caractersticas clnicas, inmunolgicas e histolgicas diferentes. Clsicamente se ha definido que la aguda
se presenta en los primeros 100 das postrasplante, especialmente entre los das 7 y 21, mientras que la crnica
es aqulla que se manifiesta despus de los 100 das. La
forma aguda afecta fundamentalmente el hgado, piel y
tracto gastrointestinal, mientras que la crnica se comporta como enfermedad multisistmica con grados variables de queratoconjuntivitis sicca, enfermedad heptica
similar a la cirrosis biliar primaria, diarrea, bronquiolitis
obliterante, polimiositis, as como neuropata perifrica,
y aunque aparece despus de 100 das postrasplante, en
algunos pacientes pueden observarse manifestaciones
tempranas en los primeros 40 das.
Las clulas T transfundidas son las responsables de
la induccin de la EICHA, pues presentan actividad citoltica, cooperadora o ambas, frente a las clulas del
receptor que expresan antgenos diferentes. Las clulas
efectoras de la respuesta inmunitaria son los linfocitos
T, principalmente CD4+, CD8+ y, en modelos animales, los linfocitos NK. En la piel y el tracto gastrointestinal estas clulas efectoras producen dao celular promoviendo la apoptosis. Existe una estrecha relacin
entre infeccin y EICHA. La fisiopatologa de esta enfermedad se fundamenta en la distorsin de la respuesta
celular contra infecciones por virus y bacterias gramnegativas en los principales rganos blanco, especialmente en el tracto gastrointestinal, donde estimulan la
liberacin de citocinas y mediadores inflamatorios. La
piel, el hgado y el tracto gastrointestinal estn expuestos a una gran cantidad de endotoxinas que disparan y
amplifican la respuesta inflamatoria en los pacientes
con EICHA La fisiopatologa de la EICHA se divide
en tres fases: el rgimen condicionante, la activacin de
clulas T y la fase efectora.
En la primera fase o rgimen condicionante, la EICH
A comienza desde la fase de preparacin pretrasplante
antes de la infusin de las clulas del donante. Durante
este periodo se producen daos en la mucosa intestinal,
el hgado y otros tejidos por la quimioterapia y la radioterapia. Las clulas activadas secretan citocinas proinflamatorias, como el factor de necrosis tumoral a (FNTa),
IL1 y factores de crecimiento, como el factor estimulador de colonias granulomonoctico (FEC GM), promoviendo el aumento en la expresin de molculas de adhesin y complejos mayores de histocompatibilidad.
En la segunda fase de activacin de las clulas T del
donante se incluye la presentacin antignica, la activa-
304
cin de los linfocitos T del injerto y la proliferacin y

diferenciacin de estas clulas activadas. Cuando las
clulas CD4+ y CD8+ ingresan en el torrente sanguneo,
interactan con las clulas presentadoras de antgeno; si
existen diferencias en el CMH, las clulas del injerto desencadenan una reaccin injerto contra hospedero.
Cuando el donante y el receptor son HLA idnticos,
puede presentarse EICH por diferencias en los complejos menores de histocompatibilidad. En el lecho capilar,
las clulas T del injerto interactan con las clulas endoteliales y se exponen a nuevos aloantgenos. En un proceso dinmico, el endotelio es activado y participa a su
vez en la activacin de las clulas T. El aumento de la
Eselectina, una molcula de adhesin endotelial, y
diferencias en las isoformas de PECAM (molcula de
adhesin endotelial plaquetaria) entre donante y receptor incrementan el riesgo de EICHA. Estas molculas
permiten la adhesin de linfocitos circulantes provenientes del donante a diferentes antgenos endoteliales
del hospedero, lo que facilita el paso de las clulas a los
diferentes tejidos. En la activacin de las clulas T se
requieren dos seales: la interaccin del receptor de
clula T (TCR) con pptidos unidos al HLA y las seales coestimuladoras con las clulas presentadoras de
antgeno. Las clulas T activadas secretan citocinas tipo
Th1, especialmente IL2 e IFNg. La IL2 es producida
por las clulas CD4+ del injerto en los primeros das
despus de TMO y luego por las clulas del hospedero.
El IFNg es muy importante en la patognesis de la EICH
porque estimula la produccin de mltiples citocinas en
los macrfagos, amplificando de esta manera la cascada
de eventos inmunolgicos. El balance entre citocinas
Th1 y Th2 es crtico para la presentacin de la EICH; el
incremento tanto de Th2 como de la IL4 se relaciona
con baja frecuencia y prevencin de esta entidad. El uso
de factor estimulador de colonias granuloctico (FEC
G) disminuye el riesgo de EICH y mejora la toma del
injerto al cambiar el perfil de citocinas por aumento de
las tipo Th2.
Durante la tercera fase efectora de la inflamacin, los
linfocitos grandes granulares (linfocitos gd) y las clulas NK son responsables de los efectos citolticos que se
incrementan por los mediadores inflamatorios y las
citocinas. La respuesta inflamatoria amplifica el dao
celular al estimular la sntesis de FNTa, IL1a e incrementar las molculas HLA clase II y de adhesin
ICAM1 en la piel y el tracto digestivo.
Durante la fase del rgimen condicionante pueden
producirse grandes cantidades de LPS (endotoxina) en
la piel y el tracto gastrointestinal. En la fase efectora, el
LPS estimula en la piel a los queratinocitos, y en la dermis y el tracto gastrointestinal a los fagocitos mononu-
(Captulo 9)
cleares para la produccin de FNTa, que causa dao

directo del tejido al inducir la muerte celular por apoptosis.
Los receptores TLR han sido identificados como receptores para el LPS. Algunas mutaciones de estos receptores estn relacionadas con una pobre respuesta a
estas toxinas y se reduce el riesgo de EICH aguda. Los
agentes virales tambin agravan la EICH y son factores
predisponentes para su presentacin; entre stos se destaca la infeccin por citomegalovirus, el cual estimula
el fenmeno inflamatorio, y la produccin de citocinas
tipo Th1. La citotoxicidad es mediada por las clulas
NK y depende de las vas de FasL, perforinas y granzimas, asocindose con el dao celular en los rganos
afectados.
La EICHC es similar a las enfermedades autoinmunes como la esclerodermia; histolgicamente hay un
notorio aumento del depsito de colgeno y fibrosis en
los rganos afectados, asociado con una elevada produccin de autoanticuerpos. Las clulas T del donante
reconocen antgenos especficos del hospedero en la
piel y la sangre que desencadenan fenmenos de alorreactividad y autorreactividad.
Se ha demostrado la aparicin de anemia hemoltica,
trombocitopenia, anticuerpos, antilinfocitos y autoanticuerpos contra el ncleo, nucleolo, msculo liso, tiroides y piel.
Los estudios de inmunotipificacin de linfocitos han
mostrado infiltrados de clulas T (la mayora son
CD8+) sin NK o linfocitos B en la piel. Se han encontrado altos niveles de IFNb, lo que sugiere un perfil de citocinas Th1. Adems, se ha demostrado la presencia de
FNTa e IL1a en los queratinocitos de lesiones de
EICHC, lo que amplifica el fenmeno inflamatorio. La
presencia de cambios esclerodermiformes est relacionada con la proliferacin de los fibroblastos y el aumento en la produccin y depsito de colgeno asociados
con clones CD4+ autorreactivos y con la degranulacin
de mastocitos.
Efecto injerto contra tumor (EICT)

En el escenario del trasplante alognico clsico se establece una serie de mecanismos que involucran a las
poblaciones celulares efectoras de la respuesta inmunolgica, y en la actualidad se considera que la actividad
de los linfocitos T del donante en un receptor inmunodeprimido es el mayor potencial teraputico de tratamiento inmunoterpico contra el cncer. La actividad EICT
es mediada inicialmente por los linfocitos T del donante, los que reconocen antgenos especficos tumorales o
aloantgenos presentes en las clulas normales y leuc-

micas. Aunque las clulas efectoras no estn bien definidas, se citan los linfocitos T CD4, CD8 y las clulas
asesinas naturales (NK). La proteinasa 3, presente en los
grnulos primarios mieloides y sobreexpresada en la
leucemia mieloide crnica (LMC) y algunos tipos de
leucemia mieloblstica aguda (LMA), sirve como blanco para la respuesta inmune antileucmica. Algunos
antgenos derivados de esta proteinasa pueden estimular la citotoxicidad tanto autloga como alognica de las
clulas T contra la leucemia. El grado de respuesta al
EICT es variable, depende de cada hemopata y del momento de evolucin de ste. La leucemia mieloide crnica (LMC) responde bien en fase crnica y existen
varias hiptesis que tratan de explicar este nivel de respuesta. La proteinasa 3 es el blanco ideal para el efecto
ICT. Adems, los precursores mieloides malignos diferenciados en clulas dendrticas presentan antgenos
para la respuesta EICT. La pobre respuesta de este
efecto en la leucemia linfoblstica aguda (LLA) parece
estar en relacin con el rpido ritmo de proliferacin de
los blastos linfoides y la escasa capacidad de stos para
estimular una respuesta inmunolgica efectiva. El efecto injerto contra tumor se presenta en: enfermedad mnima residual en la primera etapa posterior al trasplante,
despus de que el paciente haya recibido altas dosis de
quimioterapia como tratamiento condicionante; disminucin del riesgo de recada en pacientes que padecieron EICH aguda o crnica despus del trasplante; mayor riesgo de recada en pacientes sometidos a
trasplante singnico, al igual que cuando se realiza la
deplecin de linfocitos T de la mdula por implantar; induccin de la remisin en pacientes que recayeron despus de trasplante alognico con infusin de linfocitos
T del donante, y reactividad de los clones derivados de
clulas T del donante contra clulas malignas del receptor. Tambin se ha visto que la suspensin de la inmunosupresin en pacientes con recada de la leucemia despus de un trasplante alognico puede inducir una nueva
remisin.
En el TCPH alognico clsico se ha reconocido que
existen mecanismos inmunolgicos mediados por las
clulas inmunolgicas del donante que tienen un papel
importante en la erradicacin de clulas malignas. Por
lo tanto, se considera que el potencial curativo del trasplante alognico no es slo dependiente del rgimen de
acondicionamiento, sino tambin del llamado efecto
injerto contra tumor (EICT), y se piensa que es la principal razn por la que el trasplante alognico clsico tiene
menor porcentaje de recada que el autlogo cuando en
ambos se han usado los mismos regmenes de acondicionamiento, fenmeno que tambin se observa en la
terapia celular con clulas madre. El conocimiento de
305
este mecanismo ha llevado al desarrollo de procedimientos modernos de trasplantes, como la infusin de

linfocitos del donante (ILD) y el trasplante no mieloablativo. Las clulas efectoras involucradas en el EICT
incluyen diferentes subtipos del donante, como: clulas
NK, clulas T tumorespecficas o asociadas con antgenos tumorales, y clulas T especficas para antgenos de
incompatibilidad menor del receptor.
Las clulas malignas del receptor presentan antgenos que son capaces de producir respuesta y proliferacin de los linfocitos T del donante, y tales lneas leucmicas especficas de clulas T se han utilizado con xito
en el tratamiento de la leucemia mediante la llamada
transferencia o terapia adoptiva. Este EICT no est bien
comprendido. En el caso de la LMC hay evidencia de
que tanto las clulas CD4+ como las CD8+ estn involucradas en este efecto, y estos linfocitos citotxicos inhiben la formacin del clon leucmico. Estas lneas pueden mostrar citotoxicidad slo a las clulas leucmicas,
a estimuladores no leucmicos o a ambos, y sugieren la
presencia tanto de antgenos especficos de lnea como
compartidos. El EICT puede estar mediado tanto por
antgenos de compatibilidad menor (AgHm), que dependiendo de la especificidad de lnea pueden o no causar tambin EICH, como por antgenos especficos
tumorales, los cuales no inducen EICH.
El mecanismo efector utilizado por los linfocitos T
del donante para producir el EICT incluye la actividad
citotxica directa a travs del ligando FasFas L
(CD95CD178), a travs de la perforina y la granzima,
as como mediante la secrecin de citocinas, las cuales
pueden lisar las clulas diana, como el FNTa. Los antgenos diana del EICT no estn bien definidos, y la estrecha relacin entre este efecto y la EICH hace pensar que
se trata de antgenos compartidos entre las clulas malignas y tejidos normales como piel, hgado e intestino.
En el caso de los trasplantes compatibles, parece estar
en relacin con los antgenos del sistema menor de histocompatibilidad, algunos de los cuales parecen ser tejidoespecficos, lo que puede contribuir a la explicacin
del EICT sin EICH. Las protenas expresadas en las clulas tumorales como resultado de translocaciones o
mutaciones, as como las protenas normales tambin
sobreexpresadas a consecuencia de una diferenciacin
aberrante, se procesan a pptidos y se presentan en la superficie celular, donde son reconocidas por las clulas
T. Estas protenas involucradas en la transformacin
celular, como el gen ras o bcr/abl, son blancos especficos tumorales para la inmunoterapia. Tambin se han
aislado clulas T especficas capaces de reconocer protenas normales sobreexpresadas en las clulas leucmicas, como la proteinasa3, la mieloperoxidasa y la pro-
306
tena del tumor de Wilms (WT1), que pueden

estimular la citotoxicidad tanto autloga como alognica. En el caso de la proteinasa 3, est presente en los
grnulos primarios mieloides y sobreexpresada en la
leucemia mieloide crnica (LMC) y en algunos tipos de
leucemias mieloides agudas (LMA). El WT1 est sobreexpresado en las leucemias agudas, pero no as en las
clulas hematopoyticas normales, donde es muy bajo
o no se expresa. Existen otras hemopatas malignas que
son menos susceptibles a este efecto, lo cual se debe
fundamentalmente a dos causas: la rapidez de proliferacin de la enfermedad, donde aqullas que tienen un
crecimiento ms lento responden mejor, y el fenotipo
leucmico.
La sensibilidad vara, segn la patologa, en:
a. Sensibles: LMC, leucemia linfoctica crnica
(LLC), linfomas no Hodgkin (LNH) de bajo grado.
b. Poco sensibles: LMA, LNH de grado intermedio,
mieloma mltiple (MM), HDG, hipernefroma,
cncer de mama.
c. Insensibles: LLA, LNH de alto grado.
El EICT y la EICH estn estrechamente ligados y est
bien documentado que el desarrollo y gravedad de la
EICH es inversamente proporcional a la posibilidad de
recada en un alotrasplante. El hecho de que el efecto injerto contra tumor desempee un papel decisivo en la
erradicacin de la malignidad se ve respaldado por
varias observaciones:
a. Se ha demostrado la presencia de enfermedad mnima residual en la primera etapa posterior al trasplante despus de haber recibido el paciente altas
dosis de quimioterapia como tratamiento condicionante, lo que desaparece en los primeros 9 a 12
meses postrasplante.
b. Existe una disminucin del riesgo de recada en
pacientes que padecieron una EICH aguda o crnica despus del trasplante.
c. Se ha demostrado que el riesgo de una recada en
un paciente sometido a un trasplante singnico es
mayor, al igual que cuando se realiza la deplecin
de linfocitos T de la mdula por implantar.
d. La induccin de la remisin en pacientes que recayeron despus de un alotrasplante con infusin de
linfocitos T del donante.
e. La demostracin de la reactividad de los clones
derivados de clulas T del donante contra clulas
malignas del receptor.
f. La suspensin brusca de la inmunosupresin en
pacientes con recada de la leucemia despus de un
(Captulo 9)
trasplante alognico, la cual puede en ocasiones
inducir una nueva remisin.
En la EICT se plantea que se trata de antgenos diferentes de los que producen la EICH, aunque se cree que la
existencia de este efecto sin EICH se debe a una mayor
sensibilidad de la clula leucmica a un mecanismo
inmunolgico comn. Tambin se considera que el aumento de selectividad contra la clula leucmica podra
resultar de la reaccin con antgenos relacionados con
la lnea hematopoytica o antgenos leucmicos especficos, ya que de hecho se han descrito AgHm asociados
con la lnea hematopoytica. Varias caractersticas de la
respuesta de las clulas T a los AgHm pueden contribuir
a su eficacia antitumor: los AgHm son altamente inmunognicos y las clulas T pueden causar EICH a pesar
de la inmunosupresin que se administra; la mayora de
los clones de clulas T especficos para AgHm tienen
una gran capacidad de reconocer antgenos tumorales;
la respuesta de clulas T a los AgHm involucra tanto a
los linfocitos CD4+ como a los CD8+, y aunque las
clulas leucmicas no son blanco directo de las CD4+,
puede incrementar el EICT aumentando y manteniendo
la respuesta de las clulas CD8+.
En los trasplantes de donantes femeninas en receptores masculinos existe un incremento del EICT y EICH.
Esto sugiere que los AgHm, codificados por el cromosoma Y, confieren una contribucin adicional a estos
efectos, adems de los que producen los AgHm autosmicos. El riesgo de recada leucmica es menor en los
trasplantes alognicos y no manipulados que en aqullos en donde se desarroll la EICH aguda y crnica. Sin
embargo, en pacientes que no desarrollaron esta complicacin hubo menor incidencia de recada que en los
pacientes que recibieron trasplante singnico o depletado de clulas T, lo que sugiere que las clulas T pueden
actuar sobre los antgenos menores sin producir EICH.
Una disociacin del EICT de la EICH, tambin se ve el
trasplante no mieloablativo o en la ILD, donde la regresin del tumor no siempre coincide en tiempo con el
desarrollo de la EICH. A pesar de la existencia de innumerables tratamientos como esteroides, globulina antilinfoctica (GAL) y anticuerpos monoclonales contra el
FNT, CD54 y CD25, la EICH se mantiene como un problema importante despus del TCPH. Se ha visto que
con la deplecin de clulas T se incrementan el rechazo,
la recada y las infecciones por una demora en la recuperacin inmunolgica. De esta manera, mientras la
deplecin de clulas T previene la muerte por EICH,
compromete el EICT. Estos datos sugieren que ambos
efectos estn muy relacionados y que el desarrollo de
EICH est asociado con un bajo riesgo de recada. Sin
embargo, la leucemia puede curarse, en ausencia de

EICH, mediante la utilizacin de infusin de linfocitos
del donante, por lo que eso indica que existe una base
para separar ambos fenmenos. En los ltimos aos el
reto ha sido lograr un mtodo fiable para prevenir la
EICH y mantener el EICT, as como la inmunidad celular contra agentes infecciosos. En el grupo de trabajo de
los autores se ha contribuido a dilucidar este reto al aplicar terapia celular con clulas madre alognicas multipotenciales y pluripotenciales sin obtener el ms mnimo indicio de rechazo inmunolgico. De forma
clsica, se puede lograr la separacin de la EICH del
EICT por diferentes mtodos:
1. Deplecin selectiva de clulas T: mediante la
separacin de clulas T para antgenos de clulas
no leucmicas, manteniendo el EICT, utilizando la
purga fotodinmica. Tambin se ha utilizado la
induccin de clulas T mediante inmunotoxinas
contra el Ag CD25 en trasplantes haploidnticos,
lo que logra un bajo porcentaje de EICH y una recuperacin inmunolgica superior a los casos con
deplecin de clulas T.
2. Eliminacin de clulas T vrgenes: se ha visto
que estas clulas, que nunca han encontrado sus
antgenos especficos, expresan CD62L+, lo que
las diferencia de las clulas de memoria, que pueden ser CD62L o CD62L+. Por lo tanto, las clulas del donante que nunca han estado en contacto
con sus aloantgenos son las que producen la
EICH, y las clulas activadas de memoria no inducen EICH, ya que no son estimuladas por los antgenos y s mantienen la EICT.
3. Seleccin de clulas Th2/Tc2: se han definido
cuatro subtipos de clulas T funcionales: CD4+
cooperadoras (subtipos Th1 y Th2) y clulas
CD8+ citotxicas (subtipos Tc1 y Tc2). Th1 y Tc1
secretan predominantemente IL2 e INFa, mientras que Th2 y Tc2 secretan IL 4, IL5 e IL10, que
son citocinas antiinflamatorias. Por lo tanto, las
clulas Th2 del donante no inician la EICH, y adems la regulan. Las Tc2 del donante no causan
EICH importante y median el EICT, y tambin tienen un efecto en la prevencin del rechazo al
injerto. Por lo tanto, la seleccin de las clulas Th2
y Tc2 permite un injerto con preservacin del
EICT y prevencin del EICH.
4. Insercin de genes suicidas: este efecto fue descrito por primera vez por Bordignon y col. y consiste en la transduccin de linfocitos del donante
con el gen de la enzima timidin cinasa del herpes
virus. Estas clulas son seleccionadas e infundidas
307
al paciente como parte de las CPH iniciales o

como ILD. Si ocurre la EICH y se requiere intervencin teraputica se administra GanciclovirR
para eliminar estas clulas y as el EICH.
5. Adicin de clulas T reguladoras: estas clulas
con doble marcador CD4+, CD25+ son importantes en la induccin y mantenimiento de la autotolerancia, y producen as una disminucin en la
autoinmunidad.
6. Uso de clulas NK alorreactivas para crear un
EICT sin EICH.
Vacunacin del paciente trasplantado

Los pacientes sometidos a un rgimen mieloablativo y
a quienes se les realiza un TCPH experimentan un prolongado periodo de disfuncin inmunitaria que persiste
por un ao o ms. Los ttulos de anticuerpos para enfermedades prevenibles adquiridos por vacunas declinan
durante los primeros cuatro aos despus del trasplante
si el paciente no es revacunado. Las vacunas con virus
vivos atenuados son ms eficaces que las que contienen
virus muertos, pero las primeras son ms peligrosas en
pacientes inmunocomprometidos, por el riesgo de diseminacin de la infeccin.
Se han publicado varias guas para la inmunizacin
de los pacientes trasplantados, aunque estas recomendaciones no han sido uniformes. En 1995 el Grupo
Europeo para el Control de Enfermedades Infecciosas
en Pacientes Trasplantados public los resultados de un
estudio realizado en Europa. La mayora de los centros
iniciaron sus vacunaciones un ao despus de realizado
el trasplante. En 1997 el Centro de Control y Prevencin
de Enfermedades de EUA (CDC) estableci las guas
para la prevencin de enfermedades infecciosas en los
pacientes trasplantados, que se public en el ao 2000
junto con un esquema de inmunizacin en estos pacientes. El cuadro 98 muestra las vacunas recomendadas
para los receptores de trasplantes hematopoyticos.
Las respuestas a la administracin de vacunas en los
pacientes con cncer y que usan ciclosporina son casi
nulas. La vacunacin contra antgenos polisacridos de
microorganismos encapsulados tiene un comportamiento igual en estos pacientes, ya que las respuestas
son dependientes de las clulas B, que son amplificadas
por las clulas T cooperadoras, y estos aspectos inmunolgicos estn ausentes en el paciente postrasplantado, resultando en una respuesta inefectiva a la vacunacin. Los pacientes que reciben trasplante de SP tienen
una relativa preservacin del ttulo de anticuerpos en
relacin con los que son sometidos a TMO. Existen
varias estrategias para mejorar la eficacia de las vacuna-
308
(Captulo 9)
Cuadro 98. Vacunas recomendadas para receptores de trasplante de mdula sea

Vacuna
Edad del paciente
Tiempo de administracin
Difteria, ttanos, pertusis (DPT)
< 7 aos
12, 14 y 24 meses despus

del trasplante
Difteria y toxoide tetnico (DT)

Ttanos y toxoide diftrico (Td)
Haemophilus influenzae tipo B conjugada
Hepatitis B
>7 aos

del trasplante
del trasplante
del trasplante
del trasplante
Todos los pacientes

Todos los pacientes
< 18 aos en pacientes
susceptibles
Adultos: pacientes con
factores de riesgo
Antineumocccica
Todos los pacientes
12 y 24 meses despus del

trasplante
Influenza
Todos los pacientes
Vacunacin antes del trasplante y reactivacin a los

6 meses despus del trasplante
Antipoliomielitis
Todos los pacientes

del trasplante
Parotiditis, rubeola,
sarampin (PRS)
Todos los pacientes
> 24 meses despus del

trasplante
Varicela
Contraindicada
Contraindicada
Comentarios
No hay datos relacionados con la seguridad e inmunogenicidad de la vacuna
contra la tos ferina; pacientes con contraindicacin a esta vacuna deben
recibir la DT
Pacientes con contraindicacin a la pertusis deben recibir DT
Debe ser reactivada cada 10 aos
No recomendada en todos los pacientes

Se recomiendan dosis elevadas para
adultos inmunocomprometidos; no hay
datos relacionados con la respuesta a
altas dosis en nios. Se observa una
respuesta de 1 a 2 meses despus de
la tercera dosis. Los que no responden
deben recibir un segundo ciclo de 3
dosis
Eficacia limitada en el postrasplante
inmediato. El rango de eficacia
aumenta en periodos posteriores. Se
usa profilaxis antibitica en pacientes
con EICH crnica
Nios menores de 9 aos deben recibir 2
dosis en la primera vacunacin. Nios
de 12 aos deben recibir la mitad de la
dosis. Los nios > 12 aos deben recibir la mitad de la dosis o la dosis completa
La vacuna es inmunognica despus del
trasplante, aunque no hay certeza de
su eficacia
Se recomienda en pacientes recuperados inmunolgicamente, no indicada
en pacientes que reciben terapias
inmunosupresoras
Contraindicada
Modificado de: Joint Guidelines por el Centro para el control de enfermedades, Sociedad Americana de Enfermedades Infecciosas y Sociedad
Americana de Trasplante de Mdula sea, 20 de octubre de 2000.
ciones, como el uso de agentes adyuvantes y citocinas

que aumentan la respuesta celular y humoral. Las sales
de aluminio y el aceite mineral se han usado para mejorar la respuesta a la inmunizacin, pero los mecanismos
de accin no han sido bien dilucidados, y se cree que
inducen una reaccin inflamatoria con reclutamiento de
clulas presentadoras antignicas y liberacin de citocinas, lo que incrementa la respuesta celular y humoral.
Entre las citocinas utilizadas en pacientes inmunocomprometidos para mejorar la respuesta a antgenos especficos estn la IL1, IL2, IL6, IL12 y el FNTa.
Tambin se ha utilizado el FECGM, que induce la libe-
racin de la IL1, IL2 y FNTa, lo que promueve la diferenciacin de clulas T y B, as como de las CPA.
Otras investigaciones sugieren que la presencia de ttulos de anticuerpos contra enfermedades especficas en
el donante influyen en el riesgo y la gravedad de la
infeccin en los receptores de trasplantes alognicos.
Una de las estrategias para mejorar la eficacia de la
vacunacin postrasplante es la inmunizacin del donante que trata de generar inmunidad que puede pasar
de forma pasiva al receptor, lo que lleva a una disminucin significativa de infeccin por varicela zoster en
receptores de donantes que han sido inmunizados dos a

cuatro semanas antes de la obtencin de las clulas hematopoyticas. En el caso de los trasplantes autlogos,
los pacientes pueden ser vacunados antes del procedimiento, lo que logra una respuesta ms rpida a la revacunacin postrasplante. Otra estrategia utilizada para
prevenir enfermedades en el periodo postrasplante es la
vacunacin de los familiares allegados al paciente, as
como del personal que atiende estos casos, con vacunas
contra enfermedades como hepatitis, influenza, sarampin, parotiditis, rubeola y varicela. Tambin pueden
ser inmunizados de forma pasiva directamente mediante el uso de globulinas como las de la hepatitis, rabia,
sincitial respiratorio, ttanos y varicela zoster. Algunas
consideraciones sobre vacunas especficas y su manejo
en los pacientes trasplantados son las siguientes: la
DPT, polio y hemofilus se recomiendan en pacientes
despus del primer ao. Es importante la administracin de dosis de refuerzo para favorecer la memoria inmunolgica; con la vacuna antineumocccica se logra
alguna proteccin con el esquema de 2 dosis a los 12 y
24 meses; se recomienda la vacunacin anual antiinfluenza, comenzando seis meses despus del trasplante;
la vacuna antihepatitis B slo se recomienda en los
pacientes de riesgo; las vacunas antihepatitis A y antimeningocccica no se recomiendan de rutina; las vacunas antiparotiditis, rubeola y sarampin (PRS) no deben
aplicarse antes de los dos aos postrasplante, ya que el
uso de virus vivos atenuados est restringido en los
receptores de TCPH. Con la vacuna antivaricela se han
obtenido buenos resultados en algunos estudios, aunque
no se recomienda de rutina; la vacuna antirrbica tampoco se recomienda.
Bancos de clulas madre

El trasplante alognico de clulas madre hematopoyticas (alloSCT) es un tratamiento efectivo de neoplasias
y afecciones genticas hematolgicas. Sin embargo, la
limitante en este procedimiento es que se requiere tener
antgenos leucocitarios humanos (HLA) compatibles y
elevadas dosis de quimioterapia y radioterapia en el
receptor, lo que incrementa significativamente la morbilidad y mortalidad. Las clulas madre de cordn umbilical (CBSC) son una excelente fuente de clulas
madre para terapia celular. Desde que en 1989 Gluckman y col. obtuvieron clulas madre de la sangre del
cordn umbilical por primera vez para el tratamiento de
la anemia de Fanconi mediante trasplante (CBT), los
bancos de sangre de cordn umbilical (CU) han proliferado por todo el mundo. El primer banco de clulas
madre obtenidas de la sangre del cordn umbilical lo
309
instal la escuela de medicina de la Universidad de

Indiana. Se estima que existen en la actualidad cerca de
200 000 bancos de CB en todo el mundo, la tercera parte
en EUA, otra tercera parte en Europa y el resto en Australia, Asia y Latinoamrica. Las CU se pueden obtener
de la vena umbilical antes o despus de la expulsin de
la placenta. El volumen sanguneo que se recoge es de
73 " 23 mL. Se estima que cada mililitro de sangre de
cordn contiene de 10 a 15 millones de clulas nucleadas (NC). Las clulas NC se pueden separar de los eritrocitos mediante la tcnica desarrollada por Rubinstein
y col. en 1995, donde se utiliza un potencial elctrico en
gel de almidn hidroxietil y centrifugacin suave para
remover los eritrocitos. La solucin final que ser criopreservada contiene una unidad de 20 mL de clulas
nucleadas (NC) y 5 mL de la solucin de criopreservacin. De todas las clulas sanguneas, los megacariocitos son las ms sensibles a los ciclos de congelamiento
descongelamiento, dando como resultado un nmero
reducido de plaquetas. Cada unidad de CB contiene menos NC y clulas CD34+ que las de mdula sea (BM),
o clulas madre de la sangre perifrica (PBSC). La ventaja de las clulas madre de cordn umbilical es que son
menos diferenciadas y, por lo tanto, son capaces de generar lneas celulares sanguneas mieloides y linfoides
en receptores mieloabatidos. La ventaja adicional es
que el sistema inmunitario del recin nacido es completamente virgen a los antgenos medioambientales, por
lo tanto sus linfocitos son inmaduros y por ende ms
tolerantes con el HLA del receptor; adems, su produccin de citocinas es menor as como su reactividad a
ellas cuando estn en el cuerpo del receptor. Tambin se
ha demostrado que las clulas madre mieloides que provienen de las CB son ms quimiorresistentes que las
clulas madre provenientes de la mdula sea del
adulto. La dosis mnima recomendable para que las NC
puedan sobrevivir y reconstruir completamente las
clulas sanguneas del receptor es de 20 millones de
NCs/kg, aunque la dosis media recomendada en pacientes peditricos es de 31 a 105 millones de NCs/kg.
El promedio de la histocompatibilidad del HLA entre
receptordonador es de 0 a 17%. La disparidad del HLA
de 2 a 3 alelos pone en riesgo la histocompatibilidad de
79 a 100% de las CBT. Cuando las CBT son compatibles, el tiempo de recuperacin mieloide es mayor que
si no lo son (3 semanas vs. 4 semanas). Las CBSC pueden proliferar fcil e indefinidamente en medios apropiados de cultivo. Las citocinas, como el factor de clulas madre, la trombopoyetina, el ligando de Flt3, la
interleucina 6 son las principales molculas que estimulan la divisin celular en estas clulas, mientras que la
interleucina 3, la eritropoyetina y el factor estimulante
310
de colonias de granulocitos estimulan su diferenciacin. Se ha observado que la dosis de clulas CD34+ y

la aplicacin del factor estimulante de colonias de granulocitos y macrfagos (CFUGM) es un factor importante en la recuperacin hematopoytica. El trasplante
intraseo de las CBSC directamente en la mdula sea
del receptor tiene mejor adaptacin y desarrollo de las
clulas en el receptor aunque en la SITECEM se ha
observado que la aplicacin intravenosa o intramuscular ofrece un resultado similar. Adems de acelerar la
adaptacin del trasplante, las dosis de clulas requeridas
tambin son menores debido a que se depositan directamente en el microambiente medular evitando el proceso
de la colocacin y la prdida por adhesin, migracin y
diapdesis del torrente circulatorio al canal medular
cuando la aplicacin en la terapia celular es intravenosa.
El trasplante cuidadoso de clulas madre y el tratamiento inmunosupresor racional no mieloablativo (NST)
evitan la mielosupresin irreversible que se observaba
en el pasado. El esquema teraputico de Seattle consiste
en bajas dosis de irradiacin total de 200 cGy (TBI, 200
cGy) con o sin fludarabina e inmunosupresin intensiva
pretrasplante y postrasplante. Tambin se puede combinar
la fludarabina y la ciclofosfamida (FC) o la combinacin de fludarabina con seroterapia con globulina antitimocitos (ATG) o alentuzumab y frmacos moderadamente mielosupresores como el busulfn o el melfaln,
que son muy tolerables y se pueden aplicar de forma
ambulatoria.
Minitrasplantes
Se han desarrollado regmenes preparatorios menos
agresivos que permitan disminuir la toxicidad y lograr
en los pacientes un estado de quimera parcial o total.
Los estudios iniciales permitieron afirmar que poda
lograrse el implante despus de una inmunosupresin
intensa sin mieloablacin. Los THNM se definen como
una agresin medular de carcter transitorio, seguida de
una completa recuperacin hematolgica, cuyo objetivo fundamental es inducir el EICT. Sus principios se
basan en el uso de inmunosupresin intensa, la infusin
de clulas hematopoyticas alognicas, procedentes de
un donante compatible; la obtencin de un estado de
quimera mixta, que luego puede ser llevado a un estado
de quimera completa e inmunosupresin postrasplante.
Se basa en el hecho de que las clulas del donante se establecen en la mdula sea del receptor, sustituyen gradualmente su hematopoyesis y al eliminar la mdula de
ste eliminan a su vez la enfermedad de base. Sustenta
el criterio de que en el trasplante alognico las reaccio-
(Captulo 9)
nes de hospedero contra injerto e injerto contra hospedero estn mediadas por linfocitos T, con similitud en el
sistema mayor de histocompatibilidad. La inmunosupresin despus del trasplante controla la EICH y
reduce la reaccin hospedero contra injerto residual y,
por lo tanto, elimina la necesidad de un rgimen preparatorio intensivo y de gran toxicidad. En los trasplantes
convencionales, el rgimen de acondicionamiento que
se aplica produce una eliminacin casi completa del tejido hematopoytico y linfoide, por lo cual se alcanza un
grado de quimerismo total o completo, y la alorreactividad del donante contra las clulas del receptor es poco
significativa. Sin embargo, se ha demostrado que al utilizar tratamientos condicionantes no mieloablativos o
de toxicidad reducida, se conserva el tejido hematopoytico del receptor y se alcanza una quimera mixta, que
puede mantenerse estable durante aos.
Estos tratamientos se denominaron minitrasplantes
en sus inicios aunque ahora se definen segn la intensidad del tratamiento condicionante, y pueden ir desde no
mieloablativos, pasando por mnimamente mieloablativos, hasta esquemas de toxicidad reducida. Los no mieloablativos son de menor intensidad y en caso de que se
produzca un fallo del injerto, puede lograrse una recuperacin autloga en un plazo aproximado de 28 das
sin que se produzca una aplasia prolongada con complicaciones severas. El objetivo fundamental de estos esquemas es la inmunosupresin. Los regmenes de toxicidad reducida o los mnimamente inmunosupresores
utilizan por lo general las mismas drogas, pero en dosis
superiores, lo que resulta en una mayor intensidad del
tratamiento, y en caso de un fallo del injerto, producen
una aplasia prolongada con las complicaciones secundarias a sta.
En estos ltimos se une al objetivo de la inmunosupresin el de lograr un efecto antitumoral. En relacin
con los frmacos utilizados, pueden dividirse en esquemas basados en el uso de anlogos de las purinas y basados en radioterapia. Los primeros utilizan en la mayora
de los casos la fludarabina, un medicamento que tiene
una gran actividad inmunosupresora y es capaz de producir una linfopenia profunda, con marcada actividad
antitumoral y un efecto benfico en la toma del injerto.
Su toxicidad es escasa y su empleo siempre se ha encaminado a la disminucin de la mortalidad relacionada
con el trasplante. Fue utilizada como alternativa en los
regmenes preparatorios, donde se planteaba que era
capaz de reducir la toxicidad y la activacin proinflamatoria en los tejidos del receptor. La 2fluoroadenina9b,
Darabinopuranosida (FAra), es un metabolito activo
de la fludarabina capaz de provocar dao en las clulas
endoteliales microvasculares. Gracias a los estudios

mediante citometra de flujo se ha podido demostrar la
activacin proinflamatoria de las clulas endoteliales
microvasculares humanas. Se ha comprobado que la defibrotida es protectiva contra el metabolito activo de la
fludarabina, que induce apoptosis y aloactivacin, sin
afectar el efecto antileucmico de sta.
Un grupo de investigadores de la Universidad de Hadassah, en Jerusaln, utilizaron la fludarabina combinada con busulfn y globulina antitimoctica en lo que
llamaron un acondicionamiento moderadamente reducido. En los casos que mantuvieron una quimera mixta
o recurrencia de la enfermedad, descontinuaron la inmunosupresin o utilizaron una infusin de linfocitos
del donante (ILD). Con este esquema lograron una sobrevivencia libre de enfermedad de 40% despus de los
37 meses. Los investigadores de Houston utilizaron la
fludarabina en combinacin con otras drogas antileucmicas especficas de acuerdo con la hemopata que se va
a tratar. Giralt y col. trataron a pacientes de mal pronstico con LMA o sndrome mielodisplsico (SMD) utilizando la fludarabina en combinacin con idarrubicina
y citosina arabinsido o la 2 clorodeoxiadenosina
(2CDA) con citosina arabinsido, mientras que un
grupo de investigadores encabezados por Khouri combinaron la fludarabina con ciclofosfamida o citocina
arabinsido con cisplatino en pacientes que padecen hemopatas malignas linfoides. Este grupo tuvo diferentes
resultados dependiendo de si se trataba de pacientes
refractarios a la quimioterapia o de pacientes con sensibilidad a ella. Childs y col. emplearon la fludarabina con
ciclofosfamida en un grupo de pacientes con hemopatas malignas y tumores slidos. Este ltimo tratamiento
fue muy bien tolerado y tuvo una baja mortalidad relacionada con el trasplante a los 100 y a los 200 das despus de realizado ste. Con una media de 126 das, la
sobrevivencia global fue de 70.2%.
La radioterapia es inmunosupresora y se utiliza sola
o combinada con otras drogas. Un grupo de investigadores en Seattle, en el Fred Hutchinson Cancer Research Center utilizaron un acondicionamiento consistente en una dosis de irradiacin corporal total de 200
cGy, seguida de la infusin de las clulas hematopoyticas de un donante compatible y una inmunosupresin
postrasplante de duracin ms corta que en los casos de
trasplantes convencionales. La profilaxis de la EICH se
trat con mofetilmicofenolato desde el da 0 hasta el 27,
y ciclosporina en dosis completa desde el da 1 hasta el
35, disminuyendo sta hasta el da 56, y posterior a este
rgimen se le aadi fludarabina. Esta serie ha sido una
de las ms grandes reportadas desde que empezaron a
publicarse los trabajos con regmenes de acondicionamientos no mieloablativos.
311
Quimerismo
Una quimera establecida como completa en los primeros das despus del trasplante puede evolucionar a quimera mixta e incluso desaparecer, lo que se traducira
finalmente en un fracaso del injerto. Por otra parte, el estado de quimera mixta puede evolucionar hacia el fallo
del injerto si predominan las clulas del receptor, o
hacia el estado de quimera completa con predominio
casi absoluto (ms de 98%) de la hematopoyesis del donante. Por lo tanto, dado que el estado de quimera puede
variar en el tiempo, es importante monitorear su evolucin. Cuando se practica la deplecin de clulas T, un
rgimen no mieloablativo o de intensidad reducida o un
nuevo rgimen profilctico de la EICH, se requiere realizar el anlisis de quimerismo 1, 2, 3, 6 y 12 meses despus del trasplante. Esto permite tomar medidas teraputicas que dependen del grado de quimerismo, como
la infusin de linfocitos del donante (ILD). El patrn de
quimerismo en el trasplante no mieloablativo en las primeras semanas despus del trasplante puede predecir la
EICH o el fracaso del injerto y, por lo tanto, se deben
realizar las determinaciones en sangre perifrica cada 2
o 4 semanas durante los primeros meses.
En los trasplantes convencionales, el rgimen de
acondicionamiento que se aplica produce una eliminacin casi completa del tejido hematopoytico y linfoide
del receptor, por lo que por lo general se alcanza un grado de quimerismo total o completo. Adems, en estos
casos la alorreactividad del donante contra las clulas
del receptor es poco significativa. Por lo tanto, la determinacin del quimerismo no es esencial cuando se trata
de un trasplante mieloablativo que utiliza rgimen de
acondicionamiento y profilaxis de la EICH convencionales. Sin embargo, se ha observado que si el paciente
recibe una mdula en la cual se han depletado las clulas
T, aparece generalmente un estado de quimerismo
mixto. En estos casos es importante analizar el comportamiento de la quimera que se establece. Tambin se
debe vigilar el quimerismo si se est estudiando un nuevo rgimen de acondicionamiento o una nueva profilaxis para la EICH, a fin de evaluar los efectos del nuevo
rgimen o profilaxis, o ambos. En los regmenes de toxicidad reducida, el acondicionamiento a que se lleva al
paciente es slo el suficiente para que se logre la implantacin del injerto. Se ha demostrado que bajo este
rgimen se conserva el tejido hematopoytico del paciente y se alcanza un estado de quimerismo mixto que
puede mantenerse estable durante aos y no necesariamente es seal de recada.
Las clulas T son las causantes principales de la
EICH, por lo que la vigilancia del quimerismo de esta
312
poblacin celular es muy importante para evaluar el estado inmunolgico despus de un trasplante alognico.
Se ha demostrado la correlacin entre el quimerismo de
clulas T y la EICH, la AICL y la recada del paciente.
Mattsson y col., en un estudio de 102 pacientes sometidos a trasplante alognico de clulas madre, encontraron una correlacin significativa entre el QM de clulas
T y un menor riesgo de padecer una EICH aguda de
moderada a severa. En otro estudio, FernndezAviles
y col. estudiaron el quimerismo en pacientes sometidos
a trasplante alognico de sangre perifrica depletada de
clulas T (SPDCT), y encontraron que el QM de las
clulas T apareci en un nmero significativo de los casos y estuvo asociado con el fallo del injerto en aqullos
con ms de 30% de clulas T del paciente.
Tambin se observa la aparicin de quimerismo mixto de los linfocitos B despus de un trasplante en el que
se combinan algunas variedades de inmunodeficiencias
severas si no se aplica un rgimen de acondicionamiento mieloablativo. En un estudio con 68 pacientes,
Mattsson y col. no encontraron correlacin entre el QM
de clulas B y el riesgo de desarrollar EICH. Las evidencias de su estudio sugieren que la respuesta alorreactiva
de los linfocitos T puede afectar al grado de quimerismo
de los linfocitos B. Entre los pacientes con QM en clulas mieloides, ellos encontraron menor incidencia de
EICH al compararla con los que presentaron QC en esta
lnea celular. En las leucemias de origen mieloide es importante analizar el grado de quimerismo en esta lnea
celular, ya que la aparicin de QM de naturaleza mieloide en estos pacientes es signo de un elevado riesgo de
recada. Al respecto, FernndezAvils y col. encontraron que despus de un trasplante alognico de sangre
perifrica depletada de clulas T (SPDCT), o de clulas
madre sin depletar, el quimerismo mixto de clulas mieloides apareci en un bajo porcentaje de los pacientes,
pero estuvo asociado con recada en los casos de leucemias de origen mieloide.
Por lo general un paciente se considera en remisin
cuando se detecta menos de 5% de blastos por examen
morfolgico de la mdula sea. Al momento del diagnstico, los pacientes con leucemia aguda pueden tener
un total de 1012 clulas malignas. Por lo tanto, un paciente considerado en remisin puede tener hasta 1010
clulas malignas. Por esto es importante desarrollar tcnicas sensibles y especficas que permitan la deteccin
precoz de la recada en los pacientes trasplantados y la
administracin oportuna de inmunoterapia adicional,
por ejemplo disminucin de la inmunosupresin e ILD.
En estos pacientes no siempre es posible encontrar una
translocacin cromosmica como marcador molecular
de enfermedad mnima residual e indicador precoz de
(Captulo 9)
recada. Sin embargo, el anlisis del quimerismo a travs de la amplificacin de los VNTR o STR por la tcnica de PCR puede realizarse prcticamente en todos los
pacientes, y dado su grado de sensibilidad, es til para
este fin, aunque es importante sealar que no permite
identificar la presencia de clulas malignas.
En varios estudios se ha tratado de correlacionar la
recada de la enfermedad despus del trasplante con la
aparicin de QM en una lnea celular determinada. Mattsson y col. estudiaron el quimerismo en las diferentes
lneas celulares de acuerdo con el inmunofenotipo expresado al inicio o en la recada de la enfermedad, en pacientes con LMA y SMD trasplantados con clulas
madre; en este trabajo encontraron que en 7 de 10 pacientes se detect QM antes de la recada. ste se evidenci slo en la lnea celular afectada por la enfermedad, mientras que no hubo correlacin entre el QM de
clulas T y la recada. El hecho de detectar QC en todas
las lneas analizadas, excepto en la lnea celular afectada por la leucemia, haba sido reportado anteriormente por otros autores. En el propio estudio, dichos investigadores concluyeron que en caso de ser necesaria
inmunoterapia adicional, por ejemplo reduccin de la
inmunosupresin seguida de ILD, se recomienda administrar sta cuando el QM en la lnea celular afectada se
detecta en periferia despus de ms de un mes de practicado el trasplante. Los autores reportan que el anlisis
del QM en la lnea celular afectada en los pacientes con
LMA y SMD es un mtodo sensible y especfico que
permite la deteccin temprana de recada despus del
trasplante alognico de clulas madre y la aplicacin
temprana de medidas de inmunoterapia, con el fin de
evitar la recada de la enfermedad.
La ILD se utiliza como medida teraputica oportuna
ante la posibilidad de recada en los pacientes trasplantados. En un estudio donde se perfundieron linfocitos
del donante despus de un trasplante no mieloablativo,
el anlisis del quimerismo en las clulas T CD3+ demostr que la EICH estuvo asociada con elevados niveles de quimerismo en estas clulas, mientras que los
menores de o iguales a 20% de clulas T del donante
estuvieron asociados con el fracaso del injerto. Sin embargo, en otros estudios no se ha encontrado una correlacin clara entre el estado de quimerismo y la lnea
celular con la ulterior evolucin del injerto y el paciente.
Tambin se ha visto que cuando existe una recada postrasplante, los granulocitos y clulas eritroides son originarios del hospedero, pero las clulas linfoides proceden tanto del hospedero como del donante y, por lo
tanto, se produce un estado de inmunotolerancia. Este
estado limita la posibilidad de que se produzca la EICH
y la AICL con una intensidad tal que permita erradicar
la malignidad. Conocer el grado de quimerismo ha sido

de gran utilidad en estos casos, ya que ha permitido llevar el quimerismo mixto a un estado de quimera completa, acortando el periodo de inmunosupresin posterior al trasplante y, si esto no es suficiente, utilizando
infusiones de linfocitos T del donante. Al da de hoy no
es posible predecir en 100% de los casos y de manera
inequvoca el comportamiento de la quimera y su relacin con la evolucin del injerto, pero es til y necesario
determinar en qu lnea celular y en qu grado se establece la quimera, ya que permite predecir la posible
evolucin del paciente segn el grado de quimera de la
lnea linfohematopoytica y actuar de manera precoz
ante la posibilidad de aparicin de la EICH y de una
recada de la enfermedad.
En las recomendaciones de la Sociedad Americana
de Trasplante de Sangre y Mdula sea del ao 2001
para estandarizar el estudio del quimerismo se puntualiz que el anlisis del quimerismo debe hacerse con
tcnicas sensibles e informativas, como el estudio de los
STR o los VNTR. Las clulas de sangre perifrica suelen ser ms tiles que las clulas de mdula sea para el
anlisis del quimerismo; tambin se recomienda el anlisis del quimerismo de lnea especfica en los regmenes no mieloablativos y en los de toxicidad reducida.
Adems, debe realizarse un anlisis del quimerismo 1,
3, 6 y 12 meses despus en los casos de trasplante con
deplecin de clulas T, regmenes no mieloablativos y
de toxicidad reducida y el nuevo rgimen profilctico
de EICH, debido a que del grado de quimerismo dependen las medidas teraputicas por seguir, como la ILD.
En el caso de los trasplantes no mieloablativos, el patrn
de quimerismo en las primeras semanas puede predecir
la EICH o el fracaso del injerto, por lo cual los anlisis
deben hacerse cada 2 a 4 semanas.
ASPECTOS MOLECULARES
DEL CNCER
La bsqueda de los mecanismos moleculares subyacentes en el cncer llev a la identificacin de un grupo de

50 genes que se asocian con el desarrollo de tumores y
neoplasias. Estos oncogenes resultaron ser versiones alteradas de genes celulares que, en su condicin normal,
regulan la proliferacin celular. A los genes normales
que sirven de precursores de las versiones alteradas se
los denomin protooncogenes, y a sus versiones alteradas, oncogenes. Las mutaciones de algunos oncogenes
313
producen la sobreexpresin de formas de protena normales o silvestres, como ocurre con el factor de transcripcin cmyc, identificado en leucemias, o con el
receptor HER2/Neu de la familia de receptores de membrana de la familia del factor de crecimiento epidrmico,
presente en cncer de glndula mamaria y de ovario. En
otros oncogenes las mutaciones generan protenas con
alteraciones que les confieren una ganancia en aumento
de funcin, mantenindolas activas por periodos prolongados o en forma permanentemente activa como el
oncogn ras, presente en ms de 50% de los tumores humanos, o cAbl, identificado en leucemias. En la
dcada de 1980 el grupo de Mariano Barbacid, en los
Institutos Nacionales de Salud de EUA (NIH), hizo
grandes contribuciones en este campo al identificar varios oncogenes. Durante su estancia posdoctoral en el
Instituto Nacional de Cncer en Maryland, EUA, una
joven israelita, Shulamit KatzavShapira, logr identificar el sexto de los oncogenes que se descubrieron en
el grupo del doctor Barbacid y, con base en este hecho,
propuso que el gen fuera bautizado como Vav, la sexta
letra del alfabeto hebreo (Katzav S et al., 1989, Embo
J 8:22832290), quedando demostrado que el oncogn
Vav regula la transcripcin de clulas hematopoyticas.
La protena Vav participa en: la regulacin de la liberacin de calcio; la activacin de protenas G pequeas de
la familia Rho asociadas al movimiento celular; la activacin de vas de sealizacin intracelulares dependientes de la cinasa PI3K; la sealizacin mitognica
mediada por la protena adaptadora Grb2, y la sealizacin en clulas hematopoyticas mediada por las cinasas ZAP70 y Syk. Hoy en da se conocen tres genes relacionados: dos protooncogenes: Vav1, Vav2 y el oncogn
Vav, derivado de Vav1, cuyas mutaciones eliminan los
primeros 66 residuos de aminocidos, perdindose as
el primer dominio proteico que normalmente modula
negativamente al dominio GEF (guanine nucleotide exchange factor). Vav es una protena multifuncional que
controla las protenas G asociadas al citoesqueleto y,
por lo tanto, a la capacidad de las clulas tumorales para
migrar. Las protenas G actan como elementos de activacin de una diversidad de procesos celulares que van
desde la sealizacin acoplada a receptores de siete
dominios transmembranales con protenas G trimricas
Gi o Gs hasta el control del citoesqueleto a travs de las
familias de protenas G: Rho, Rac y CDC42, o el control
del trfico vesicular por medio de las protenas G de la
familia Rab.
En total se han descrito ms de 40 genes que codifican para protenas G. Su nombre se deriva de su capacidad de hidrolizar GTP (GTPasas). En respuesta a estmulos externos, las protenas G unen GTP y se activan.
314
Esta activacin resulta de un cambio en la conformacin de las protenas G que, al estar unidas a GTP, les
permite interactuar con otras protenas y activarlas. Sin
embargo, las protenas G permanecen activas slo por
breve tiempo, ya que adems de poder unir GTP, poseen la
capacidad de hidrolizarlo a GDP + fsforo inorgnico (Pi).
Las protenas G, ahora unidas a un GDP, regresan a
una conformacin basal y pierden su actividad biolgica. Su reactivacin depende de una variedad de protenas que promueven el intercambio de nucletidos de
guanina o GEF (guanin nucelotide exchange factors),
pero la reactivacin de las protenas G, que requiere
disociarse del GDP e intercambiarlo por un GTP, puede
ser modulada por protenas inhibidoras de la disociacin del complejo protenas GGDP o GDI (GDP dissociation inhibitors). As, Vav acta como un GEF y, por
lo tanto, es un activador de las protenas G pequeas de
la familia Rac. Sin embargo, la protena Vav tiene un papel dual, ya que por una parte posee en su dominio DH,
actividad de GEF que le permite promover el intercambio de GDP por GTP en protenas G, lo que conduce a
su activacin. La activacin de las protenas Rho, Rac
y CDC42 genera clulas con mayor capacidad de proliferacin y de movimiento. Para tratar de entender los
cambios en la expresin gnica inducidos por Vav se ha
estudiado el factor de transcripcin asociado a la actuacin de linfocitos T (NFAT).
En lneas humanas de clulas T, la activacin de
NFAT mediada por el receptor de clulas T (TCR) requiere Vav y, en particular, la interaccin del dominio
CH con LyGDI, que favorece la activacin de la fosfolipasa C gamma (PLCg), generando ms inositol3fosfato (PI3).
Todo esto promueve un aumento transitorio de calcio
(Captulo 9)
en el citoplasma que sale del retculo endoplsmico

(RE) y acta como un segundo mensajero. Adems, Vav
media la activacin de las cinasas MAP, lo que resulta
en cambios de expresin gnica.
Uno de los genes que se sobreexpresan en clulas que
sobreexpresan la forma silvestre de Vav es la osteopontina, una glucoprotena de matriz extracelular de hueso
altamente fosforilada y con una gran capacidad para
interactuar con minerales. La osteopontina se reconoce
como un marcador de malignidad en diferentes enfermedades oncolgicas.
De manera interesante, la transfeccin y expresin
del oncogn Vav tambin induce la expresin de osteopontina en clulas de mesodermo, y cuando se interfiere
con su expresin por medio de RNA de interferencia
(RNAi), ya sea apagando la expresin del oncogn Vav
o bien apagando directamente la expresin de la osteopontina, las clulas reducen significativamente su capacidad de crecer en agar semislido, un criterio de transformacin e invasividad tumoral. Mientras que Vav se
expresa normalmente en linajes hematopoyticos, la
forma oncognica de Vav no se asocia a leucemias pero
s a neuroblastomas y a cncer de pncreas.
Si bien posee caractersticas estructurales semejantes
a factores de transcripcin, la funcin mejor comprendida se relaciona con el mdulo que acta como factor
de intercambio de nucletidos de guanina de protenas
G de la familia Rho, y promueve la expresin de protenas de matriz sea como la osteopontina en forma dependiente del factor de transcripcin de clulas T (NFAT).
El fenotipo invasivo que presentan las clulas que
expresan la forma oncognica de Vav se pierde si se
interfiere con la expresin del oncogn Vav o con la de
la osteopontina.
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Gooley T et al.: Decreased transfusion requirements for
patients receiving nonmyeloablative compared with conventional peripheral blood stem cell transplants from HLA
identical siblings. Blood 2001;98:35843588.
116. Wunder E, Sovalat H, Henon PR, Serke S (eds.): Hematopoietic stem cells. The Mulhouse Manual. Dayton, Alpha
Med Press, 1994.
117. Zetterquist H, Mattesson J, Uzunel M, NsmanBjrk I,
Svenberg P et al.: Mixed chimerism in the B cell lineage is
a rapid and sensitive indicator of minimal residual disease in
bone marrow transplant recipients with preB cell acute lymphoblastic leukemia. Bone Marrow Transplant 2000;25:
843851.
Captulo
10
Entorno actual de las clulas madre
INTRODUCCIN
El ovocito fertilizado activa el bloqueo de la polispermia, el cual impide que los otros espermatozoides
penetren en l. Esto ocurre al aumentar rpidamente la
concentracin interna de iones calcio. Luego el material
de los dos proncleos, el masculino y el femenino, se
duplica y se condensa (es decir, los cromosomas se
hacen visibles), para despus formar el huso mittico de
la primera divisin celular. A las 30 h de haberse iniciado la fecundacin ocurre la primera divisin celular,
que da origen a un embrin de dos clulas y despus se
divide sucesivamente en 4, 8, 16 y 32 clulas (fase que
se conoce como mrula, formada por clulas madre embrionarias). En algunos casos, durante tres o cuatro das
despus de la fecundacin, se pueden despegar algunas
clulas totipotentes que darn lugar a otro ser humano
completo. Resultarn entonces dos gemelos monocigticos (con la misma informacin gentica) (figura
101).
Luego se pasa a la fase de blastocisto, en la cual el
embrin tiene el aspecto de una esfera hueca llena de
lquido. En el blastocisto se diferencian dos regiones: el
trofoblasto y la masa celular interna (MCI). Slo una
parte de la masa celular interna, el epiblasto, formado
por clulas pluripotentes, dar lugar al nuevo ser. El
resto de las clulas originan la placenta, el corion y otras
estructuras extrafetales. En la etapa de blastocisto el
embrin humano consta de 180 clulas que inician el
contacto con la pared interna del tero (endometrio),
donde comienzan a implantarse a partir del sexto o sptimo da (figura 102).
El embrin se implanta progresivamente en la mucosa uterina, rodendose de los capilares de los vasos
sanguneos maternos. En el mismo sitio donde se realiz el implante se forma progresivamente la placenta.
Clula madre (stem cell en ingls) se define como:

clula progenitora, capaz de regenerar uno o ms tipos
celulares diferenciados y con la capacidad de autorrenovarse. Durante el desarrollo embrionario todos los seres
humanos pasamos por varias etapas en las primeras semanas del embarazo: cigoto (vulo fecundado), blastocisto, gstrula y mrula. Es asombroso saber que en la
etapa de blastocisto, que comprende de los das 6 a 14
despus de la fecundacin, todas las clulas estn indiferenciadas; es decir, no se han especializado en funciones particulares, aunque estas mismas clulas darn origen a clulas especializadas con tareas concretas, como
las neuronas, las clulas musculares, los eritrocitos y los
osteocitos. Como todas las clulas del organismo provienen de las clulas del blastocisto, se dice que son totipotenciales y reciben el nombre de clulas madre embrionarias (embrionic stem cells en ingls).
Existe otro tipo de clulas madre, las clulas madre
organoespecficas; stas son pluripotenciales y multipotenciales, se derivan de divisiones celulares de las
clulas madre embrionarias y tienen la capacidad de originar las clulas de un rgano especfico tanto en el
embrin como en el adulto. El ejemplo ms notable de
clulas madre organoespecficas son las de la mdula
sea, las cuales son capaces de originar todas las clulas
de la sangre y del sistema inmunitario. A la fecha los
cientficos han logrado aislar y cultivar clulas madre
de adulto de: piel, grasa subcutnea, msculo cardiaco
y esqueltico, cerebro, retina y pncreas.
319
320
4. Cigoto
3. Fecundacin
5. Estadio de
2 clulas
2. Ovlo no
fecundado
Tuba
uterina
6. Estadio de
4 clulas
1. Ovulacin
Ovario
tero
7. Estadio de
8 clulas
9. Estadio de
16 clulas
10. Inicio del9. Blastocistos
implante
Figura 101. Esquema que muestra la ovulacin en el ovario, la fecundacin, las primeras etapas de la divisin celular
temprana en el embrin y la implantacin en el tero.
Trofoblasto
Endodermo
Epitelio de revestimiento y
glandular de tubo digestivo
hgado, vas biliares y
pncreas; vas respiratorias;
vescula, uretra y prstata;
tiroides, paratiroides y timo
Clulas de las lneas
germinales de ovocitos y
espermatozoides
(Captulo 10)
Durante estos primeros instantes no puede distinguirse

si se trata del embrin de un humano, de un chimpanc
o de un ratn. Lo que hace que un cigoto fecundado genere un humano o un len es su programa gentico, pues
los genes controlan los procesos de especializacin y
desarrollo de estas clulas animales.
El embrin es un ser completamente desprotegido,
incapaz de defender su derechos; estas circunstancias
llevan a considerar que el embrin an no es un ser
humano y, por lo tanto, puede ser utilizado con fines de
investigacin. Si no existiesen otras alternativas para
obtener clulas madre estaramos ante un grave problema. Por fortuna la ciencia ha provisto alternativas
satisfactorias y stas permiten continuar y desarrollar la
investigacin con clulas madre sin sacrificar vidas
humanas. La terapia celular con clulas madre y la
manipulacin gentica constituirn los pilares bsicos
de la medicina en un futuro muy cercano. La aparicin
de muchas enfermedades delimitadas en nuestros genes
ser controlada por la ingeniera gentica. Las clulas
madre proveern tejidos y rganos de repuesto a medida
que los nuestros se vayan deteriorando, lo que generar
mejora de la salud y de la vida de las personas, pero esto
no nos debe cegar ante los riesgos del desarrollo tecnolgico. En el cuadro 101 se puede apreciar la utilidad
de las clulas madre en un solo pas, EUA.
Masa celular interna
Epiblasto
Ectodermo
Tejido nervioso; epidermis y sus derivados
(pelo, cabello, uas, esmalte dental)
Mesodermo
Esqueleto, musculatura,
tejido conectivo, aparato
cardiovascular y renal
Figura 102. Esquema que muestra los tres tipos de clulas multipotenciales que se derivan de sus respectivos epitelios primordiales: ectodermo, endodermo y mesodermo.

Cuadro 101. Personas en EUA que se
consideran candidatas a terapia
celular con clulas madre
Enfermedad
Enfermedad cardiovascular
Enfermedades autoinmunitarias
Diabetes
Osteoporosis
Cncer (diferentes tipos)
Alzheimer
Parkinson
Quemaduras (graves)
Lesiones en mdula espinal
Defectos congnitos
Nmero de pacientes
58 millones
30 millones
16 millones
10 millones
8.2 millones
5.5 millones
5.5 millones
0.3 millones
0.25 millones
0.15 millones/ao
Aun cuando existen muchos tipos de clulas madre

en el organismo, los cientficos les reconocemos jerarquas. Algunas clulas madre estn ms diferenciadas
que otras. En los estadios tempranos del desarrollo embrionario, las clulas del blastmero son idnticas entre
s y relativamente indiferenciadas (blastmeros). Cada
una y de manera individual es capaz de generar un organismo completo, cualidad referida como totipotencia.
En el siguiente estadio, las clulas madre ya no son
capaces de producir un organismo completo, permanecen indiferenciadas y conservan la capacidad de desarrollarse en casi cualquier tipo de clula encontrada en
el organismo humano; con ello se representa un tipo
biolgico de plasticidad conocida como pluripotencia.
En este momento las clulas madre se dividen en numerosos tipos de linajes diferenciados y todas las clulas
son especializadas para formar corazn, msculo, nervios, piel o sangre.
La potencial versatilidad de las clulas madre derivadas del estadio embrionario temprano representa una
prometedora teraputica. Como estas clulas tienen la
capacidad de proliferar y renovarse a s mismas durante
la vida del organismo, se ha reconocido la posibilidad
de utilizarlas para generar cierta cantidad de clulas o
tejidos especializados para lograr la regeneracin de
nuevas clulas o tejidos como tratamiento de una lesin
o dao impuesto por enfermedades como el Alzheimer,
el Parkinson, la enfermedad cardiaca y la insuficiencia
renal. Los avances en las investigaciones con clulas
madre de adulto han demostrado una mayor plasticidad
de estas clulas, aproximndose a la capacidad de pluripotencialidad de las clulas madre embrionarias. Estas
nuevas aplicaciones de las clulas madre de adulto permiten salvar las barreras ticas propias de las clulas
321
madre embrionarias. Actualmente en muchos lugares*

se utilizan estas clulas madre en forma de autotrasplante o alotrasplante para la recuperacin del sistema
inmunitario y hematopoytico tanto en pacientes tratados con quimioterapia y con disminucin de las defensas secundarias al tratamiento como en pacientes con
neoplasias hematolgicas.
CARACTERSTICAS DE
LAS CLULAS MADRE
Las clulas madre embrionarias humanas (hESC) tienen dos caractersticas importantes para la medicina
regenerativa:
1. La capacidad de proliferar sin diferenciarse por
medio de un proceso de autorrenovacin.
2. La capacidad de generar clulas especializadas
inducidas por su diferenciacin.
Las primeras hESC se obtuvieron hace 20 aos a partir
de clulas de la masa celular interna (MCI) en el modelo
de blastocisto de ratn. Las clulas se colocaron en una
superficie adecuada de fibroblastos nutricios o alimentadores y en presencia del factor inhibitorio de la leucemia (LIF) que lleva a una proliferacin y mantenimiento de clulas pluripotenciales sin diferenciacin en
este modelo murino. Tambin se demostr que estas clulas madre inmortales son capaces de generar in vitro
progenitores de linajes celulares y permitan tambin el
estudio del desarrollo temprano. As que este modelo de
ratn permiti avanzar de manera importante en el estudio y caracterizacin de las clulas madre.
El cambio de las clulas madre a un medio de cultivo
sin clulas alimentadoras genera la formacin de grupos
celulares y diferenciacin que forman los cuerpos embrioides (EB). Los cuerpos embrioides consisten en clulas madre rodeadas de una capa de clulas endodrmicas; en el centro de este acmulo se forma una cavidad
cubierta de clulas ectodrmicas columnares que rodean un espacio lleno de lquido que morfolgicamente
es similar a los embriones de seis a ocho das. La expresin de marcadores para el mesodermo (activina), del
endodermo (colgeno tipo IV) y del endodermo (alfa
fetoprotena) indica que los cuerpos embrioides tienen
elementos de las tres capas germinativas. En este esta* Incluido Mxico con la Sociedad Internacional para la Terapia Celular con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y el
Antienvejecimiento, S. C. (SITECEM)
322
dio del desarrollo es posible la diferenciacin a los linajes celulares diversos mediante los inductores adecuados. Dependiendo de las condiciones de cultivo, se ha
demostrado que las clulas embrionarias de ratn son
capaces de diferenciarse en un gran grupo de linajes que
incluyen a las clulas epidrmicas, clulas tipo II del
epitelio alveolar, precursores neuronales, osteoblastos
y cardiomiocitos, por nombrar slo algunos.
El primer cultivo de clulas embrionarias humanas
fue establecido de manera adecuada en 1998 a partir de
cigotos que no se haban utilizado en los mtodos de fertilizacin in vitro (FIV) por problema de fertilidad. A
partir de estos estudios y de otros semejantes se demostr que, al igual que con las clulas madre de ratn, las
clulas madre humanas tienen la capacidad de autorrenovarse sin sufrir diferenciacin y son de naturaleza
pluripotente. Estas caractersticas hacen suponer que
este tipo de clulas tendrn una gran aplicacin en la
medicina regenerativa.
Obtencin de las clulas madre

embrionarias humanas (hESC)
En general la fuente de las clulas embrionarias humanas es la fertilizacin in vitro debido a que los cigotos
que no se utilizan pueden servir como una fuente de este
tipo de clulas, permitiendo generar lneas celulares.
Inicialmente el mtodo para la obtencin de las clulas
embrionarias humanas era la inmunociruga, que consiste en eliminar las clulas del trofoectodermo externo
por medio de molculas del complemento en un blastocisto dejando intactas las clulas de la masa celular
interna. Posteriormente las clulas se colocaron sobre
fibroblastos irradiados o tratados con mitomicina C; el
cultivo se complementaba con grandes concentraciones
de suero y en estas condiciones se formaron colonias de
clulas madre embrionarias despus de varios das de
cultivo. Otros mtodos han explorado la obtencin de
clulas madre embrionarias humanas a partir de blastocistos humanos de ocho das o la de lneas de clulas
madre a partir del periodo de mrula.
En la actualidad existen docenas de lneas de clulas
madre humanas registradas en los Institutos Nacionales
de Salud (NIH) y estn disponibles para los investigadores. Para el estudio de las alteraciones genticas
existe un banco de lneas celulares con diferentes mutaciones, lo que ofrece una gran disponibilidad de este
tipo de clulas para la investigacin. Estas lneas se
derivaron de cigotos con alteraciones que se haban descartado para FIV.
(Captulo 10)
Entre las alteraciones que se tienen en esta coleccin

estn la adrenoleucodistrofia, la distrofia muscular de
Duchenne y Becker, la anemia de Fanconi, el sndrome
X frgil, la enfermedad de Huntington, el sndrome de
Marfan, la distrofia miotnica, la neurofibromatosis
tipo I y la talasemia. Por otra parte, tambin se logr la
generacin de una lnea de clulas madre a la que fue
posible implantarle el ncleo de una clula de la piel de
un paciente, de tal manera que las clulas derivadas de
esta lnea no presentaron ningn problema de rechazo
al ser implantadas en el mismo paciente.
Los trabajos que llevaron al establecimiento de los
medios de cultivo para clulas madre humanas fueron
laboriosos. Incluso en la actualidad el mantenimiento
de este tipo de clulas es un proceso que requiere habilidades especializadas en su manejo. Lo primero que
llam la atencin fue la sensibilidad de las clulas
madre humanas comparadas con las de ratn, pues mostr que la concentracin celular, el tipo de matriz extracelular y clulas alimentadoras influyen de manera importante en las vas de sealizacin y su supervivencia.
En un principio se utiliz la investigacin de las clulas embrionarias de ratn para la obtencin y el cultivo
de las clulas madre embrionarias humanas. Para las
clulas de ratn se demostr que un cultivo con fibroblastos embrionarios inactivos en su capacidad mittica
en presencia del factor LIF garantizaba mantener a las
clulas madre pluripotentes, indiferenciadas y en proliferacin. En el caso de las clulas madre embrionarias
humanas, s requieren fibroblastos pero no necesitan el
factor LIF para mantener su potencial y proliferacin.
Sin embargo, la utilizacin de clulas alimentadoras
derivadas de ratn tiene el riesgo de contaminacin con
patgenos murinos (virus de la leucemia murina) que
pueden infectar al humano. Por otra parte, estas clulas
alimentadoras secretan al medio un cido silico diferente y extrao al humano, para el cual se secretan anticuerpos de manera natural. Por lo anterior se volvi
imperativo disear cultivos que eliminaran clulas de
otra especie.
Los esfuerzos realizados a la fecha han permitido
identificar ms de 100 protenas que son secretadas por
los fibroblastos alimentadores y que mantienen indiferenciadas a las clulas madre embrionarias humanas. Se
ha visto que muchas de estas protenas participan en la
adhesin y proliferacin celular, la protena que participa en la va de Wnt y la inhibicin de las protenas
morfogenticas de hueso (BMP).
Tambin se trat de encontrar componentes capaces
de reemplazar al suero, encontrndose que las protenas
como noggina combinadas con el factor de crecimiento
fibroblstico, factor fibroblstico solo o en combina-

cin con otros factores (como activina A), son capaces
de mantener indiferenciadas a las clulas madre embrionarias humanas. Tambin se ha logrado cultivar las
hESC con clulas alimentadoras fibroblsticas posnatales humanas ms los factores antes mencionados, con la
idea de eliminar el suero bovino fetal del medio de cultivo.
Se ha demostrado que al inyectar blastocistos, stos
son capaces de integrarse en las tres capas germinativas
e incluso se integran en el linaje de las clulas germinativas. Como estos experimentos no se pueden realizar
con las clulas madre embrionarias humanas, se ha diseado un mtodo que demuestra el potencial de stas al
implantarlas en ratones inmunodeficientes formando
teratomas que poseen derivados de las tres capas germinativas. Morfolgicamente las hESC son diferentes de
las de ratn, poseen una ntima relacin ncleocitoplasma y cada clula tiene uno o ms nucleolos. Las
clulas expresan elevadas concentraciones de telomerasa, ribonucleoprotena que se encarga de la elongacin de los telmeros cromosmicos. Tambin expresan en gran proporcin la protena Oct4 (un factor
transcripcional de lnea germinal); la expresin de este
gen se conserva, pues ayuda a mantener un estado indiferenciado en las clulas.
Entre las clulas madre de humano y ratn existen
diferencias en las vas de sealizacin de LIF, el factor
de crecimiento transformante beta (TGFb), Wnt y el
FGF. Por lo anterior se deduce que el conocimiento
generado del estudio de las clulas madre embrionarias
de ratn no se puede aplicar al humano de forma generalizada, aunque pueden inferirse los mecanismos biolgicos que regulan a estas clulas.
El uso de ciertos factores de crecimiento puede guiar
a las hESC hacia la diferenciacin especfica de linajes
celulares. Por otra parte, los factores de crecimiento epidrmico, fibroblstico, el cido retinoico, la BMP4 y
el factor transformante beta inducen a los cuerpos embrioides humanos a expresar marcadores mesodrmicos
y ectodrmicos. El tratamiento con activina A induce a
estas clulas a expresar derivados mesodrmicos.
Fuentes de clulas madre embrionarias

Las clulas madre embrionarias se forman despus de
la fertilizacin (unin del espermatozoide y el vulo
materno) originando el embrin humano; estas clulas
se diferenciarn en 250 estirpes celulares diferentes que
formarn los rganos de los seres humanos. Es por ello
que tericamente si se aprende cmo cultivarlas en el
laboratorio y manipularlas, se podran originar tejidos
323
u rganos nuevos para implantarlos en pacientes y curar

enfermedades. El problema es que al obtener las clulas
madre del embrin ste puede destruirse. Hoy en da
hay cerca de 100 000 embriones congelados en las clnicas de fertilizacin in vitro de EUA que no han sido usados y sos seran los primeros candidatos. Sin embargo,
los grupos privados que no estn restringidos por fondos federales no slo usan ya embriones congelados,
sino que ya han empezado a crear embriones en laboratorios para extraer estas clulas, porque ello puede convertirse en un excelente negocio en el futuro debido a la
gran cantidad de personas enfermas que podran beneficiarse.
La investigacin en esta rea de la medicina es muy
promisoria, pero los mdicos saben que hasta ahora no
existe la panacea para la cura de todas las enfermedades,
aunque las clulas madre pueden proporcionar avances
y descubrimientos en la ciencia igual que como se hace
en muchas otras reas de la medicina, como el estudio
de nuevos frmacos y mejores tcnicas quirrgicas.
La posibilidad de poder obtener clulas madre embrionarias sin tener que destruir al embrin del cual se
extraen es un tema biolgico y tico que est causando
gran inters en la comunidad internacional. En la fecundacin, el ovocito o clula materna se une al espermatozoide en las trompas de Falopio de la mujer, constituyendo un nuevo ser humano llamado cigoto en este
estadio. En esta etapa el cigoto tiene ya toda la informacin gentica necesaria para que el nuevo ser se desarrolle y crezca en los siguientes nueve meses dentro del
tero materno y durante el resto de su vida. En las horas
que siguen a la fecundacin, el cigoto empieza a dividirse para formar el embrin. En las primeras 30 h se
divide en cuatro clulas totipotentes, llamadas as
porque, de separarse, cada una de ellas podra originar
un nuevo ser. ste es uno de los principales puntos de
debate en relacin a la clonacin, ya que el uso de clulas totipotentes es una de las dos posibles tcnicas
que, de aprobarse, se usaran para clonar seres humanos
como potenciales fuentes de clulas madre para la experimentacin.
Despus de cuatro das, el embrin tiene 12 clulas
y se le conoce como mrula. La mrula se dirige de la
trompa de Falopio al tero de la madre, donde se implanta y recibe el nombre de blastocisto. Ah permanecer por los prximos nueve meses, hasta su nacimiento. El blastocisto genera dos capas de clulas: la capa
interna o embrioblasto, que forma el embrin humano,
y la capa externa o trofoblasto, que forma la placenta.
A este nivel el embrioblasto est formado por un grupo
de clulas denominadas estaminales pluripotenciales
o clulas madre. Esto significa que, si bien cada una
324
independientemente no puede generar un individuo

completo como las clulas totipotenciales anteriormente mencionadas, s tienen tres caractersticas fundamentales y nicas que otras clulas del cuerpo no
poseen:
1. La capacidad de dividirse indefinidamente.
2. La capacidad de diferenciarse, es decir, de transformarse en una clula especializada del cuerpo
humano.
3. La capacidad de ser inmortales.
La investigacin en clulas madre de animales se ha
venido estudiando desde hace muchos aos con algunos
xitos. Se ha logrado, por ejemplo, que estas clulas se
reproduzcan en el laboratorio y generen otras clulas
ms especializadas.
La actual controversia surgi cuando se logr aislar
las primeras clulas madre de embriones humanos. Algunos grupos privados de cientficos se sumaron a dichas iniciativas y comenzaron a experimentar con clulas extradas de embriones producidos especficamente
para este fin mediante la fertilizacin in vitro (FIV).
Estos grupos ya han logrado hacerlas crecer en el laboratorio y en algunas ocasiones han conseguido tambin
que se multipliquen. Una tcnica utilizada con frecuencia en dichos ensayos consiste en extraer las clulas
madre del embrin y colocarlas en cultivos celulares
con fibroblastos (clulas del tejido conectivo) de ratn,
donde las clulas madre se reproducen de manera constante, convirtindose as en una fuente de recursos para
la experimentacin.
El proceso es an imperfecto, por lo que se requieren
constantes pruebas con nuevos embriones. Muchos de
los cultivos celulares no llegan a tener xito o son destruidos por factores externos como la contaminacin
bacteriana. Por otro lado, al extraerse las clulas madre
del embrin humano, stas se diferencian en las diversas clulas que formarn los distintos tejidos del cuerpo.
Estas clulas regeneran los rganos ms importantes,
como el cerebro, el corazn y los msculos, que son las
clulas con funciones ms especializadas en el cuerpo
humano. As pues, las enfermedades que atacan o daan
irreversiblemente estos rganos no pueden ser curadas
(como la demencia) o dejan secuelas para siempre
(como la diabetes y los infartos de miocardio) a menos
que se logre que las clulas daadas sean reemplazadas
o reparadas con clulas madre.
Lo que ms esperanza da en el campo mdico es que
la investigacin con clulas madre consiga que stas
puedan ser forzadas a diferenciarse en el laboratorio,
obteniendo as los tejidos que se requieran para curar o
(Captulo 10)
aliviar dichas enfermedades. Ya se ha logrado que las

clulas madre se diferencien en clulas de la mdula
espinal o neuronas cerebrales, abriendo as la posibilidad de reemplazar las neuronas de un adulto daadas
por la demencia de Alzheimer o el Parkinson, y recuperando de esta manera a enfermos que actualmente se
consideran invlidos o discapacitados de por vida y
cuya situacin seguira empeorando hasta el momento
de su muerte.
En este contexto, cientficos de la Universidad Johns
Hopkins han conseguido que ratones con enfermedades
degenerativas nerviosas de la mdula espinal recuperen
cierto movimiento al implantarles dichas clulas madre.
Otros grupos de cientficos, basados en experimentos in
vitro, han logrado diferenciar las clulas madre en clulas del tejido cardiaco y trabajan con la esperanza de
producir a corto plazo el tejido que reemplace la porcin
del corazn humano adulto que muere cuando la persona sufre un infarto del miocardio. Tambin se pueden
formar nuevas clulas del pncreas e introducirlas en un
paciente con diabetes, curndolo parcial o totalmente.
Por desgracia estas enfermedades son bastante comunes, con millones de enfermos en todo el mundo.
Los ejemplos antes mencionados son slo algunos de
los posibles usos de las clulas madre. Pero la propaganda periodstica y las esperanzas de los pacientes y
sus familiares hacen crecer la lista de enfermedades que
podran ser erradicadas o mejor controladas, generando
esperanza de vida. Algunos grupos privados de EUA,
como la Geron Corporation, afirman que ya han logrado la diferenciacin de las clulas madre en ms de 250
estirpes celulares que constituyen el cuerpo humano. El
hacer crecer una clula madre en laboratorio y esperar
que reemplace a una neurona del cerebro y que revierta
una enfermedad incurable, todo ello sin ningn dao al
paciente, es ya una realidad en muchas partes del mundo
y en el SITECEM, como lo pueden constatar nuestros
pacientes. Queda claro que la posibilidad de que se usen
estas clulas y los productos derivados de ellas en la terapia celular, con las potencialidades de uso en el futuro,
es lo que ms atrae el inters de la ciencia mdica.
El Instituto Nacional de Salud de EUA (NIH) public
en julio del ao 2008 un reporte favorable al uso de fondos gubernamentales para incrementar la investigacin
en clulas madre. La prensa estadounidense, motivada
por evidencia cientfica publicada en las revistas de
ciencia de prestigio como Nature, Science, NEJM, etc.,
inici una campaa muy agresiva en la que aseguraba
a los pacientes y familiares que las investigaciones con
clulas madre son la solucin a cientos de enfermedades, la mayora de ellas actualmente incurables. Artistas
de cine muy conocidos como Christopher Reeve ya

fallecido y que sufri de parlisis en las extremidades
por una lesin irreversible en la mdula espinal y
Michael J. Fox quien padece de Parkinson, entre
otros, han contribuido significativamente a propagar
esta idea, motivados por su propia esperanza al respecto.
Incluso conocidos polticos provida estadounidenses,
como los senadores Orrin Hatch y Tommy Thompson
(Secretario de Salud del gobierno del presidente Bush),
apoyan estas iniciativas. Adems, segn encuestas de
opinin realizadas en EUA en julio de 2008, cerca de
57% de los que se oponen al aborto y 70% de los que se
declaran catlicos apoyan la investigacin en clulas
madre por las bondades reales que prometen.
Actualmente, el hecho de tener que utilizar embriones humanos para obtener clulas madre todava genera
dudas entre personas mal informadas o que tienen presiones polticas o religiosas. En EUA, por esta razn algunos cientficos y polticos propusieron que no se permitiera la produccin en cadena de embriones en el
laboratorio con el exclusivo fin de promover esta investigacin, pero s que se usen cerca de 100 000 embriones humanos que actualmente estn congelados en clnicas de fertilizacin in vitro.
Existen parejas infrtiles que recurren a tcnicas de
fertilizacin in vitro, donde se une el espermatozoide
con el vulo materno en el laboratorio y luego se implanta el embrin en la madre. Como el proceso no es
100% efectivo, se prefiere generar entre 6 y 10 embriones. Si alguno de los primeros se implanta exitosamente
en el tero materno y finalmente se desarrolla, los embriones sobrantes son entonces descartados o congelados para algn uso futuro. Estos embriones pueden ser
una fuente excelente de clulas madre, puesto que de
todas maneras sern destruidos.
Lamentablemente no es posible una alternativa como
la extraccin de estas clulas madre de bebs espontneamente abortados, aunque el beb conserva todava
un buen nmero de clulas madre en la sangre del cordn umbilical y otros rganos. Ello se debe sobre todo
a que estas situaciones son pocas e impredecibles. Adems, a veces el beb permanece muerto en el tero varias horas antes de ser espontneamente abortado, lo
que lleva al deterioro de las clulas madre.
Generacin de gametos a partir

de clulas madre embrionarias
Se ha demostrado que las clulas madre embrionarias
del ratn poseen la capacidad de diferenciarse como clulas germinales. Es decir, adems de los diversos lina-
325
jes somticos (neuronas, miocitos, leucocitos, etc.) se

obtuvieron ovocitos y espermatocitos. Al combinar tcnicas para la obtencin de clulas madre embrionarias
con las de clonacin, en teora sera posible tomar clulas de una mujer estril, introducirlas mediante transferencia nuclear a un ovocito de ella misma o de otra
mujer, y cultivarlo hasta blastocisto. Posteriormente se
toman las clulas de la masa celular interna, se cultivan
con la tcnica de clulas madre y despus de una serie
de manipulaciones (que ya se han hecho en el ratn) se
lograra que las clulas germinales primordiales fueran
capaces de iniciar la meiosis in vitro hasta la etapa de
ovocitos.
Siendo el ovocito la nica clula depositaria de los
factores necesarios para reprogramar el genoma de un
adulto despus de la transferencia nuclear, la posibilidad de generar ovocitos a partir de clulas madre derivadas de ovocitos clonados establece un nuevo paradigma
en la terapia celular. Con ella no resultara necesario
tomar ovocitos directamente de ovarios de pacientes
con tcnicas quirrgicas, sino que podran generarse en
el laboratorio, contando as con bancos de ovocitos congelados. Esto podra tener una aplicacin en parejas
heterosexuales en las que el hombre es infrtil: se obtendran clulas madre de su piel y se cultivaran. Mediante
la tcnica de transferencia nuclear se generara un blastocisto del que se obtendran clulas madre que se induciran a diferenciarse en espermatocitos, que en este
caso podran llevar el cromosoma X o Y para procrear
cualquiera de los dos sexos. A su vez, la pareja femenina
donara los ovocitos que seran fertilizados por la tcnica de reproduccin asistida.
En parejas heterosexuales donde la mujer fuera infrtil se tomaran tambin clulas de la piel de cuyas clulas se usara un ncleo para hacer la transferencia
nuclear. El ovocito podra obtenerse de un banco, generando as un blastocisto a partir del cual se derivaran
clulas madre que se canalizaran hacia la formacin de
ovocitos. Usando el semen del esposo, se podra hacer
la fertilizacin in vitro con las tcnicas de reproduccin
asistida para que la pareja pudiera procrear un hijo,
resolviendo as su problema de infertilidad.
Aunque todava en una etapa terica, los resultados
obtenidos en ratones plantean dilemas ticos respecto a
la idea de familia predominante en la cultura occidental.
De perfeccionarse las tcnicas de clonacin y programacin dirigida de las clulas madre embrionarias, en
teora ya sera posible la procreacin por parejas homosexuales. En el caso de dos hombres, se tomaran clulas
de la piel de uno de los dos, se obtendran los ovocitos
de un banco y se generaran clulas madre a partir de las
cuales se podra inducir la diferenciacin hacia ovoci-
326
tos. La contraparte, tambin masculina, donara los espermatozoides con los que podran procrear bebs de
uno u otro sexo. En este caso se requerira una mujer
receptora para llevar a trmino el desarrollo. En el caso
de parejas homosexuales femeninas tambin resultara
posible la procreacin, con la limitante de que slo podran tener hijas, debido a la ausencia del cromosoma Y.
CLONACIN TERAPUTICA
Existen tres estrategias orientadas a preparar clulas

madre embrionarias humanas pluripotenciales, con una
informacin gentica bien definida a la cual aadir despus la diferenciacin deseada:
1. La transferencia de un ncleo de una clula especializada a un oocito humano desnucleado, seguido del desarrollo embrionario hasta el estado de
blastocisto y la utilizacin de las clulas de la masa
celular interna de la misma para obtener ESC y, de
stas, las clulas diferenciadas deseadas.
2. La transferencia de un ncleo de una clula especializada en un oocito de otro animal, lo que permitira el desarrollo de un embrin humano utilizable.
3. Reprogramacin del ncleo de una clula especializada fundindolo con el citoplasma de ESC,
obteniendo as un heterocarionte hbrido.
Desde hace tres dcadas, los estudios de las clulas
madre del adulto (ASC, adult stem cells) sealaban que
en muchos tejidos adultos hay clulas madre capaces de
dar origen slo a clulas propias de un determinado
tejido, y no se pensaba en la posibilidad de una reprogramacin. Pero en aos recientes se han descubierto clulas madre pluripotenciales en varios tejidos humanos,
en la mdula sea (BMSC), en el cerebro (NSC), en el
mesnquima (MSC) de varios rganos, capaces de dar
origen a diversos tipos de clulas, la mayora sanguneas, musculares y nerviosas. Ahora se sabe cmo reconocerlas, seleccionarlas, mantener su desarrollo y llevarlas a formar diversos tipos de clulas maduras
mediante factores de crecimiento y otras protenas reguladoras. La terapia celular con clulas madre que, una
vez implantadas, son capaces de restituir las funciones
especficas a los tejidos enfermos es una alternativa real
de tratamiento para la mayora de las enfermedades. En
el hombre, las clulas madre de la mdula sea, de las
que se forman todas las diversas lneas de clulas sanguneas, tienen como marcador de reconocimiento la
(Captulo 10)
molcula CD34 y, una vez purificadas, son capaces de

reconstituir toda la poblacin sangunea en pacientes
que reciben dosis ablativas de radiaciones y quimioterapia, a una velocidad proporcional a la cantidad de clulas empleadas en el trasplante de mdula sea. Tambin
se sabe cmo guiar el desarrollo de clulas madre nerviosas (NSC) utilizando diversas protenas, entre ellas
la neurorregulina y la protena osteomorfogentica 2
(BMP2, bone morphogenetic protein 2), que son capaces de llevar a las NSC a convertirse en neuronas, neuroglia o msculo*. Es muy prometedor el potencial de las
clulas madre adultas para una terapia eficaz de
muchas patologas. Watt y Jones afirman que las clulas madre musculares, ya sean de la lnea mioblstica
embrionaria o de la adulta, pueden convertirse en clulas de mayor importancia para tejidos diversos que los
que les dieron origen, y ser la clave de terapias celulares
futuras, incluso diferentes de las de origen muscular.
Nolta y Kohn subrayan que los progresos en el uso de
la transduccin gnica en las clulas madre hematopoyticas ha llevado a su uso en la clnica. La genoterapia
har posible tratar enfermedades genticas y adquiridas
como lo hacen los trasplantes de clulas madre alognicas. Clarke y Frisen dicen que estos estudios sugieren
que las clulas madre en los diferentes tejidos adultos
pueden ser mucho ms similares a las clulas embrionarias humanas de lo que se haba pensado hasta ahora,
hasta contar en muchos casos con un repertorio muy
parecido, y demuestra que clulas nerviosas adultas
tienen una gran capacidad de desarrollo, y son potencialmente aptas para utilizarse como punto de partida de
una produccin de varios tipos de clulas para trasplante
en diversas enfermedades. Todos estos progresos y los
resultados ya obtenidos en el campo de las clulas madre del adulto demuestran su gran plasticidad.
En la etapa de blastocisto se obtienen las clulas de
la masa celular interna y se cultivan las clulas madre
(del organismo dador de los ncleos) para que despus
de tratadas se diferencien en distintos tipos celulares,
como neuronas dopaminrgicas en el tratamiento de
Parkinson; clulas beta del pncreas para diabticos;
hepatocitos para pacientes con cirrosis heptica, etc.
En la Universidad Johns Hopkins se obtuvieron clulas madre embrionarias a partir de fetos abortados,
mientras que la compaa Advanced Cell Technologies
Corp. obtuvo un embrin hbrido usando una tcnica
similar a la de transferencia nuclear para fusionar un
vulo enucleado de vaca con una clula somtica humana. Bsicamente se persigue la obtencin de clulas
madre para su cultivo in vitro y lograr su diferenciacin
* Transdiferenciacin de ectodermo a mesodermo.

en distintos tipos de clulas y tejidos, con fines teraputicos: autotrasplantes y terapia celular, aunque tambin
existe la posibilidad de trabajar con clulas madre de
adultos y no slo con las provenientes de embriones.
Hay indicios de que existen clulas madre pluripotentes
en varios rganos, incluyendo el cerebro.
CLULAS MADRE Y CNCER
Lo sorprendente de las clulas madre como posibles

herramientas teraputicas reside en que poseen la capacidad de convertirse en cualquier tipo de clula especializada. La leucemia aparentemente curada puede reaparecer por la accin de clulas madre propias
genticamente defectuosas, segn una investigacin de
cientficos canadienses sobre la leucemia que public la
revista Nature Immunology en 2004. Las alteraciones
en el DNA que provoca el cncer pueden tener su origen
en defectos de las clulas madre debido a que la neoplasia se reproduce a partir de las clulas madre propias
defectuosas. Las investigaciones sobre la biologa de las
clulas madre del cncer en casos de leucemia han mostrado similitud con otros cnceres, incluyendo tumores
slidos como el cncer cerebral y el de mama. Los cientficos de la Universidad de Toronto dirigidos por John
Dick estudiaron clulas de pacientes con leucemia mieloide aguda (LMA), una hemopata clonal caracterizada
por la proliferacin de clulas mieloides en mdula sea
y sangre perifrica. Tras extraer clulas con leucemia,
las inyectaron en ratones y encontraron que no eran
idnticas, sino que algunas repetan defectos distintos y
caractersticos, lo que demostr que la leucemia no era
causada por clulas que posteriormente adquiriesen un
defecto, sino que el error se deba al genoma de las clulas madre endgenas. Esta investigacin forma parte de
una serie de trabajos que demuestran que el tratamiento
convencional mediante trasplante de mdula sea debe
ser sustituido por una terapia celular con clulas madre
alognicas sanas y con la capacidad de curar esa leucemia, pues ahora los mdicos deben centrarse no slo en
destruir las clulas cancerosas, sino en acabar con las
clulas madre que las producen.
Por otra parte, Reya T y Clevers H publicaron en
2005 en la revista Nature una revisin que muestra la relacin existente entre las clulas madre normales, las
cancergenas y el cncer. Segn sus conclusiones, para
terminar con los procesos neoplsicos hay que eliminar
las clulas madre cancergenas presentes en los tumores
metastsicos. Aunque parece razonable que cada tejido
crece desde una clula madre especfica del propio te-
327
jido, la identificacin rigurosa y el aislamiento de estas

clulas madre somticas slo se han determinado en
ciertas circunstancias. El equipo de Tannishtha Reya,
del Departamento de Patologa y Biologa del Desarrollo de la Universidad de Stanford, en California, cree
que el descubrimiento de que la mdula sea, al igual
que las clulas madre hematopoyticas, puede dar lugar
a tejidos no hematopoyticos sugiere que dichas clulas
pueden tener una diferenciacin potencial mayor que la
que se haba asumido antes. Estudios actuales sostienen
la idea de la plasticidad de las clulas madre hematopoyticas, lo que abrir nuevas vas para entender el desarrollo potencial de las clulas madre hematopoyticas
adultas y sus aplicaciones teraputicas.
Las clulas madre normales y las cancergenas comparten la capacidad de su propia regeneracin; la maquinaria para llevar a cabo una divisin de autorregeneracin es similar.
Algunas vas de sealizacin asociadas a la apoptosis, como Notch, Shh y Wnt, pueden regularse por la autorregeneracin. As, estudios en clulas madre del
intestino y de clulas epidrmicas sugieren que la va de
sealizacin Wnt puede contribuir a la regulacin de las
clulas madre y a la autorregeneracin en otros tejidos.
Existe evidencia considerable de que ciertos tipos de
leucemia se desarrollan a partir de las mutaciones que
se acumulan en las clulas madre hematopoyticas. Si
el crecimiento tumoral y metastsico se conduce por
una pequea poblacin de clulas madre cancergenas,
podra explicar los errores en el desarrollo de terapias
que sean capaces de erradicar los tumores slidos. Aunque los frmacos existentes pueden reducir el tamao de
los tumores metastsicos, esos efectos son normalmente transitorios y en ocasiones no se reflejan en un aumento de la sobrevida del paciente. Una razn del error
de estos tratamientos es la resistencia a quimioterpicos
que aparecen en estas clulas. Otra posibilidad de los
fracasos teraputicos clsicos es que fallen los tratamientos dirigidos a destruir las clulas madre cancergenas. Entender las vas de sealizacin que utilizan las
clulas madre normales y las neoplsicas facilitar el
empleo de las clulas madre normales para la medicina
regenerativa y la identificacin de clulas madre cancergenas que se pueden utilizar como objetivos para las
terapias anticncer.
En la mayora de los tumores existen clulas madre
cancergenas que se pueden autorregenerar de forma indefinida, en contraste con las clulas madre sanas que
pueden tener un potencial proliferativo limitado. Por
eso, para curar el cncer es necesario poder destruir las
clulas madre cancergenas y caracterizar e identificar
sus propiedades. Las clulas madre alognicas sanas
328
como las que se aplican en el SITECEM son una fuente

potencial e inagotable de regeneracin de tejidos enfermos.
CLULAS MADRE EN EUROPA
Desde hace unos 30 aos las clulas madre han sido objeto de una amplia investigacin tanto en tejidos adultos
como de embriones y en cultivos in vitro de clulas
madre embrionarias de animales de experimentacin en
pases desarrollados como Suiza y Alemania, entre
otros. La preparacin de clulas madre (madre) embrionarias humanas (ES, ESC) implica la produccin de
embriones humanos y la utilizacin de los excedentes
de fecundaciones in vitro criopreservados hasta la fase
de blastocisto inicial. Cabe mencionar que en pases
como Inglaterra y Espaa son numerosos los bancos de
embriones criopreservados excedentes de FIV. La
extraccin del embrioblasto o masa celular interna es un
procedimiento que implica la destruccin del embrin;
el cultivo de dichas clulas se hace en un estrato de
fibroblastos de ratn irradiados (feeder) y en un entorno
adecuado, donde se multiplican y confluyen hasta la
formacin de colonias llamadas cuerpos embrioides
(EB, embryoid bodies). Los cultivos de las clulas de las
colonias obtenidas llevan a la formacin de lneas celulares capaces de multiplicarse indefinidamente, conservando las caractersticas de clulas madre durante
meses y aos. Estas clulas se utilizan para la preparacin de lneas celulares diferenciadas. La inoculacin
de ESC humanas en animales de experimentacin
(ratn) y su cultivo in vitro en condiciones apropiadas
hasta llegar a la confluencia han demostrado que son
capaces de dar origen a clulas diferenciadas que se
obtendran, en un normal desarrollo, a partir de las tres
capas embrionarias primitivas: endodermo (epitelio
intestinal), mesodermo (cartlago, hueso, msculo liso
o estriado) y ectodermo (epitelio neural, piel, etc.).
Los resultados de la terapia celular han conmovido
tanto al mundo cientfico como al de la biotecnologa,
en especial mdico y farmacolgico, y con no menor
fuerza al mundo comercial, farmacutico y de los
medios de comunicacin. Esto da grandes esperanzas
de tratamiento para la terapia de enfermedades graves,
solucin que se est buscando ya desde hace aos, aunque tambin se ha producido una gran conmocin en el
mundo poltico. La doctora Natalia Lpez Moratalla,
presidenta de la Asociacin Espaola de Biotica y
(Captulo 10)
tica Mdica, declar en Granada el 23 de abril de 2008:

Las clulas madre embrionarias han fracasado; la
esperanza para los enfermos est en las clulas madre
adultas. La doctora Lpez Moratalla, catedrtica de
biologa molecular, afirma que la investigacin ha
derivado decididamente hacia el empleo de las clulas
madre o troncales adultas, que se extraen del propio
organismo y estn ya dando resultados en la curacin de
enfermos.
Segn Lpez Moratalla, hay ya cerca de 600 protocolos que utilizan clulas madre adultas, y no se ha presentado ninguno con clulas de origen embrionario.
Las clulas madre adultas poseen el mismo potencial
de crecimiento y diferenciacin de las clulas madre
embrionarias y sustituyen con creces las posibilidades
biotecnolgicas soadas para aqulla. Los ltimos
hallazgos sobre las posibilidades teraputicas de las
clulas madre adultas ponen en entredicho abiertamente
las dos grandes promesas propiciadas por la nueva ley
espaola de biomedicina: el uso y creacin de embriones para investigacin y la llamada clonacin teraputica. A los dilemas ticos ya conocidos (la destruccin
indiscriminada de miles de embriones humanos) se
unen evidencias cientficas que cuestionan cada vez
ms su utilidad teraputica. Es una exigencia tica de
la investigacin dar una informacin veraz a la sociedad
y que pueda decidir con conocimiento los aspectos de
la poltica cientfica que le atae; y que pueda incentivar
o frenar la dedicacin de recursos a un campo prometedor para curar determinadas enfermedades.
La expectacin con que se recibieron las clulas madre, y el hecho de que desde el inicio las clulas madre
de adulto tuvieran que competir con las embrionarias
como alternativas a la gran promesa de curacin de graves enfermedades, ocasion que la divulgacin de los
avances se viera presionada por dilemas ticos y confusin en la sociedad, aunque poco a poco la informacin
cientfica y los testimonios clnicos de la terapia celular
han generado calma y aceptacin, como ya ocurre en
Mxico, donde la SITECEM ha sido pionera.
ALTERNATIVAS TICAS PARA OBTENER

CLULAS MADRE EMBRIONARIAS
El problema tico fundamental para poder utilizar clulas madre embrionarias humanas es que hay que destruir
al embrin del cual se obtienen. Actualmente se buscan
alternativas para poder disponer de dichas clulas sin tener que destruir los embriones humanos que las donan.
Una opcin tica para conseguir clulas madre embrionarias sera que dichas clulas pudieran extraerse de

embriones humanos generados por va natural, pero sin
tener que destruirlos. En este caso se podra tratar ticamente el tema como se trata el de la donacin de rganos
por parte de donante vivo, lo cual es moralmente aceptable. Desde un punto de vista experimental son varias las
posibilidades que se han propuesto para conseguir clulas madre embrionarias sin tener que destruir a los embriones de los que se obtienen, que podran resumirse en
las siguientes: obtener clulas madre embrionarias
mediante reprogramacin de clulas adultas a partir de
clulas epiteliales de la piel; obtenerlas de embriones
congelados, y posteriormente descongelados, excedentes de tcnicas de fecundacin in vitro, a los que se considerara tcnicamente muertos, pero que an pudieran
conservar clulas vivas tiles para experimentaciones
biomdicas; extraerlas de un embrin en fase muy temprana de su desarrollo, menos de 16 clulas, lo que no
requerira la destruccin del embrin que las dona; crear
estructuras biolgicas no embrionarias, por transferencia
nuclear somtica, a partir de material cromosmico genticamente modificado obtenido de clulas somticas
adultas, de las cuales se pudieran obtener las correspondientes clulas madre; reprogramar clulas somticas
adultas fusionndolas con clulas madre embrionarias;
obtenerlas de embriones aneuploides y reprogramar directamente clulas somticas adultas hasta el estado de
indiferenciacin genmica propia de las clulas embrionarias pluripotenciales.
Tratando de certificar si un embrin descongelado de
4 a 8 clulas, que es el momento evolutivo en el que los
embriones excedentes de fecundacin in vitro suelen
congelarse, est muerto, Landry y Zucker propusieron
en el ao 2004 los siguientes criterios: los embriones
congelados que no se dividen a las 24 h de su congelacin son desechados para fines reproductivos por considerarlos no viables. Estos embriones debern ser observados con intervalos de pocas horas; durante las 24 h
siguientes, los embriones que no se hayan dividido en
este periodo de tiempo ya no se dividirn ms, por lo que
se los puede considerar orgnicamente muertos. A estos
embriones muertos se les podra extraer las clulas
madre vivas para experimentaciones biomdicas.
Si se extrae una blastmera (clula que an es totipotente) de un embrin de 4 das en etapa de mrula de 60
a 70 clulas, generado por fecundacin in vitro, lo cual
no destruye al embrin, se pueden desarrollar las lneas
celulares que se requieran. Con este procedimiento se
pueden obtener clulas madre embrionarias sin tener
que destruir al embrin que las dona, por lo que se evitara la principal dificultad tica para obtenerlas.
Tambin se pueden obtener clulas madre embrionarias a partir de cuerpos embrioides, los cuales son agre-
329
gados de clulas embrionarias que pueden reproducir

muchos de los procesos que ocurren en las primeras etapas del desarrollo embrionario, creadas por transferencia nuclear somtica alterada (ANT). La posibilidad de
generar entidades biolgicas no embrionarias sirve
como fuente de clulas madre por el sistema denominado ANT, propuesto por William B. Hurlbut, de la
Universidad de Stanford, en California. Este proceso se
desarrolla en tres etapas:
a. En la primera se toma una clula somtica adulta
del paciente que requiere el trasplante celular y se
altera su DNA cromosmico para dirigir la expresin gentica del ncleo hacia un objetivo biolgico determinado, que en este caso tiene como
finalidad que el embrin creado no sea viable.
b. Despus, este ncleo alterado se fusiona con un
ovocito enucleado, lo que da lugar a una nueva
clula distinta del ovocito originario y de la clula
adulta alterada, es decir, se produce un hbrido que
exhibe las propiedades gnicas programadas en el
ncleo alterado en la clula somtica adulta.
c. Finalmente, la clula ANT, tras estimularla adecuadamente, puede desarrollarse hasta dar lugar a
un blastocisto alterado que es incapaz de implantarse y del cual se podran extraer las clulas madre
que seran genticamente idnticas a las del paciente del que se tom la clula original, clulas que
podran usarse tanto para investigaciones biomdicas en general como teraputicamente para tratar al
paciente que don la clula somtica adulta.
El procedimiento ANT lo utilizaron A. Meissner y R.
Jaenisch en 2005. Ellos proponen crear, utilizando ratones, blastocistos alterados a partir de un tipo de clulas
somticas adultas, los fibroblastos, cuyo material cromosmico se ha modificado para que no puedan expresar un gen, el Cdx2, necesario para que el blastocisto
pueda implantarse. As pues, estos embriones seran
prcticamente inviables al carecer de un trofoblasto
funcionalmente activo, por lo que no podran implantarse en el tero, pero s podran ser fuente de clulas
madre embrionarias pluripotenciales.
La posibilidad ms aceptada para obtener clulas
madre embrionarias es conseguirlas a partir de clulas
madre de tejidos adultos que, tras fusionarse con clulas
madre embrionarias, pueden llevarse a un estado de indiferenciacin genmica similar al embrionario. Para
que la transferencia nuclear somtica (clonacin teraputica) pueda utilizarse para la obtencin de clulas
madre embrionarias, el ncleo de la clula somtica, antes de ser transferido al ovocito, debe reprogramarse
hasta un estado cromosmico ms indiferenciado, pare-
330
cido al embrionario. Los mecanismos que rigen este

proceso son todava poco conocidos, pero se sabe que
cuando el ncleo de la clula somtica se inyecta en el
vulo enucleado, el citoplasma de dicho vulo tiene capacidad para reprogramar el material cromosmico de
la clula adulta dando lugar a una clula con un estado
de indiferenciacin similar al de las clulas embrionarias pluripotentes, y con una estructura cromosmica
similar a la de la clula somtica que ha donado el
ncleo. Adems, como la estructura gnica del ncleo
de estas clulas es idntica a la del donante, si dichas
clulas son trasplantadas a ste no sufrirn rechazo, por
lo que podran ser utilizadas para terapia celular. En
2005 W. S. Hwang cre 11 lneas celulares a partir del
material gentico obtenido de clulas somticas adultas
de otros tantos pacientes. Para obtener las clulas embrionarias, posteriormente hay que desarrollar el cigoto
generado hasta blastocisto, del cual se obtienen las clulas madre que, tras ser cultivadas adecuadamente, podran ser tiles para investigaciones biomdicas y para
tratar enfermedades. Una posibilidad de obtener clulas
pluripotentes de tipo embrionario sin tener que utilizar
ovocitos humanos para que las clulas adultas se reprogramen a clulas pluripotentes es la propuesta en 2005
por Cowan y col., quienes demostraron que si las clulas
somticas adultas se fusionan con clulas madre embrionarias, stas pueden ejercer un papel similar al que
desarrolla el citoplasma del ovocito para conseguir la
reprogramacin del material cromosmico de las clulas somticas adultas a clulas indiferenciadas de tipo
pluripotente*. Para conseguir esto, los autores fusionan
fibroblastos con clulas madre embrionarias y tras cultivar ambos tipos de clulas en un medio que facilita la
fusin de sus membranas, obtienen un hbrido dotado de
un nico ncleo. Pero como esta nueva clula procede
de dos clulas, fibroblasto y clula madre embrionaria,
con un ncleo diploide, la clula resultante tendr el
doble de dotacin cromosmica de las clulas adultas
normales, es decir, ser una clula tetraploide con 92
cromosomas. Las clulas tetraploides as obtenidas se
comportan de forma muy similar a como lo hacen las
clulas madre embrionarias, pues tienen marcadores
proteicos propios de dichas clulas; ofrecen el mismo
carcter de inmortalidad; pueden diferenciarse en cuerpos embrioides, como hacen las clulas madre embrionarias, y tambin desarrollar teratomas, pudiendo ambos, teratomas y cuerpos embrioides, expresar potencia
de las tres capas germinales (endodermo, mesodermo y
* Hiptesis de la herencia horizontal de Snchez Vsquez
publicada en el libro de Prcticas de histologa de Editorial
Alfil, en 2007.
(Captulo 10)
ectodermo). Es decir, parece que las clulas madre embrionarias humanas, cuando se fusionan con clulas somticas adultas, pueden reprogramar el ncleo de estas
ltimas para transformarlas en clulas pluripotentes
similares a las embrionarias, lo que ya se haba conseguido experimentalmente utilizando ratones.
Esto demuestra que las clulas madre embrionarias
contienen los factores de reprogramacin nuclear necesarios para modificar el ncleo de las clulas somticas
adultas llevndolas a un estado de pluripotencialidad,
por lo que podran sustituir a las clulas madre embrionarias obtenidas de blastocistos generados por fecundacin in vitro o por transferencia nuclear somtica.
Sin embargo, un aspecto negativo de estas experiencias es que al ser tetraploides los hbridos as generados,
su potencial teraputico es prcticamente nulo, por lo
que podran utilizarse para experiencias biomdicas
pero no para terapia celular. Para hacer teraputicamente tiles estas tcnicas habra que desarrollar un
mtodo para eliminar el DNA sobrante, que proporciona la clula madre embrionaria, para as convertir en
diploide la clula tetraploide obtenida.
Los cigotos normales tienen dos proncleos, uno
procedente del padre y otro de la madre. Sin embargo,
tras la fecundacin in vitro se pueden obtener cigotos
que tienen uno o tres proncleos; a estos cigotos se los
denomina aneuploides y no son viables. En el ao 2004
se comprob que de blastocistos de embriones aneuploides se pueden obtener clulas madre de tipo embrionario normales. En el artculo de Human Reproduction,
los autores utilizaron nueve blastocistos obtenidos de
cigotos aneuploides de los cuales se pudo obtener una
lnea de clulas madre embrionarias. Una opcin tica
aceptable para conseguir clulas similares a las embrionarias sin tener que destruir un embrin humano sera
poder desdiferenciar (rejuvenecer) clulas madre de tejidos adultos de la persona que debe recibir la terapia
celular, para as, tras reprogramar su genoma, obtener
de las clulas generadas las correspondientes lneas celulares. En 2005 M. L. Condic utiliz la transferencia
nuclear alteradareprogramacin asistida del ovocito
(ANTOAR). A diferencia de la ANT, que propone suprimir del genoma de la clula adulta la informacin
expresada por algn gen necesaria para que el embrin
generado sea viable, en la ANTOAR lo que se propone
es una modificacin gentica del material cromosmico
de la clula somtica adulta para que sta slo se pueda
desdiferenciar hasta un estadio evolutivo de clula pluripotente, pero sin llegar nunca a un estadio de clula
totipotente similar al ovocito fecundado. En este caso,
a partir de la clula generada slo se podrn derivar
clulas de diversos tejidos, pero nunca un embrin

humano. De esta forma se habran solventado las dificultades inherentes a la necesaria destruccin de un
embrin para obtener clulas madre embrionarias.
Para conseguir que la clula somtica adulta se reprograme, en este caso se utiliza la capacidad que para ello
tiene el citoplasma de los ovocitos. As pues, al transferir el ncleo de la clula somtica adulta a un ovocito
enucleado no se pretende generar una clula totipotente,
aunque si estuviera modificada como la ANT no podra
dar lugar a un embrin, sino nicamente reprogramar la
clula somtica adulta a clula pluripotente. Sin embargo, la posibilidad de poner la tcnica ANTOAR a
disposicin de la clnica humana exigir primero una
amplia experimentacin con clulas animales, para delimitar mucho mejor todo el procedimiento tcnico;
pero cuando la tcnica ANTOAR pueda estar disponible se tendr la posibilidad de obtener clulas madre
embrionarias por un mtodo ticamente aceptable, al no
requerir ste la destruccin de embriones humanos.
El lquido amnitico tambin es una valiosa fuente de
clulas madre. Las clulas que se encuentran en el lquido amnitico pueden generar diferentes tejidos, como
seo, muscular y heptico. Esta capacidad las convierte
en una fuerte esperanza para futuros tratamientos que
incluso posee importantes ventajas sobre las clulas
madre embrionarias, las cuales adems plantean el problema tico de crear seres humanos para utilizar sus
clulas y luego eliminarlos. Segn el estudio realizado
por el equipo del doctor Anthony Atala, director del Instituto de Medicina Regenerativa de la Universidad
Wake Forest, 1% de las clulas del lquido amnitico
recogidas en una prueba diagnstica regular tienen en su
superficie el mismo tipo de antgeno (llamado cKit)
que presentan las clulas madre embrionarias. Mediante
un medio de cultivo se pueden obtener lneas celulares
estables, denominadas clulas madre de lquido amnitico. Ya se saba desde haca dcadas que tanto la placenta como el lquido amnitico contienen mltiples
tipos de clulas progenitoras para el desarrollo del embrin, incluida la grasa, el hueso y el msculo. Para
comprobar que las nuevas clulas diferenciadas eran
funcionales, los cientficos marcaron las clulas y pudieron observar cmo se integraron, despus de inyectarlas, en el cerebro de ratones y se mantuvieron viables
durante dos meses. Tambin se aplicaron a clulas hepticas, donde los investigadores comprobaron que tambin funcionaron las clulas madre, produciendo algunas de las protenas tpicas de las clulas del hgado y
adems urea, una caracterstica especfica de la funcin
heptica. Pero la prueba ms contundente de la utilidad
de las clulas para la ingeniera gentica fue cuando
estos expertos probaron que stas podan formar hueso.
331
Para ello se utilizaron clulas madre amniticas humanas y se impregnaron moldes con ellas. Estos moldes se
implantaron en ratones y despus de ocho semanas se
recuperaron y se analizaron. Lo que se observ es que
se haba formado tejido seo. Una ventaja que presentan
las clulas madre amniticas sobre las embrionarias es
que se pueden obtener fcilmente y cada 36 h se duplican en un medio de cultivo. Adems, no requieren otras
clulas para su cultivo y presentan un bajo riesgo de formar tumores, riesgo que s tienen las embrionarias, lo
que es positivo para aplicaciones teraputicas. Un banco con 100 000 muestras podra en teora proporcionar
a 99% de la poblacin estadounidense con una buena
compatibilidad gentica para un trasplante. Cada ao, y
tan slo en EUA, hay ms de 4 millones de nacimientos.
La amniocentesis es una prueba relativamente rutinaria de diagnstico prenatal en la cual se extrae una
muestra de lquido amnitico para analizar su composicin en busca de rastros que alerten contra posibles problemas del embarazo o defectos genticos. Es decir, es
un procedimiento ya plenamente regulado y exento de
objeciones mdicas, ticas y morales.
La investigacin de las tcnicas teraputicas con
clulas madre es una de las lneas ms interesantes que
se presentan de cara a la medicina del futuro. Con el descubrimiento de las clulas madre pluripotenciales inducidas (iPS) se ha dado un giro a los avances en terapia
celular, ya que se est investigando con un material de
gran flexibilidad y disponibilidad que no plantea los
problemas ticos que surgen con las embrionarias. A
new year and a new era, afirm M. Pera en Nature. En
el ao 2008 se ha dado un giro importante en la investigacin con las clulas madre, sus aplicaciones en la
medicina regenerativa y la obtencin de productos
humanos, especialmente lneas celulares por parte de
empresas biotecnolgicas. De hecho, est siendo un ao
de avance espectacular en la biologa de las clulas
madre pluripotenciales y su maduracin natural en el
organismo durante el desarrollo, en especial en cmo se
guardan estas clulas con capacidad regenerativa en los
nichos de clulas madre de adulto especficos de rganos y tejidos. En la etapa inicial de la terapia regenerativa es necesario aislar las clulas, activarlas in vitro y
transferirlas de nuevo al rgano daado; sin embargo,
para el futuro prximo se trata de inducir y potenciar in
vivo la funcin que ya poseen naturalmente. Un aspecto
importante para la eficacia a largo plazo de la medicina
regenerativa es conocer el envejecimiento de las clulas
madre. Hoy en da se pueden manipular clulas humanas de adulto y generar clulas con pluripotencialidad
inducida (iPS) que poseen el mismo potencial de crecimiento y diferenciacin de las clulas madre embriona-
332
rias. La reprogramacin inducida en clulas adultas

hasta el estado embrionario abre perspectivas importantes tanto a la investigacin bsica como a la clnica. El
compromiso tico de Yamanaka, diseador de esta tecnologa, en relacin con su uso hacia otros fines es un
ejemplo de la responsabilidad del investigador y supone
asumir que la ciencia triunfa al servicio del hombre slo
desde la tica.
Tan slo en California, ms de 3 000 millones de
dlares han sido utilizados ya para la investigacin con
clulas madre embrionarias y clonacin humana. El
profesor de ingeniera biolgica James Sherley asegura
que muchos cientficos que no apoyan las investigaciones con embriones humanos tienen temor de expresar sus opiniones por las posibles represalias y las consecuencias negativas que esto pudiera acarrear en la
publicacin de investigaciones, promociones y oportunidades laborales. El cientfico norteamericano Douglas Kerr logr devolverles la movilidad a ratas parapljicas con este tipo de investigaciones. Si se valoran de
forma objetiva los avances en la investigacin no ser
necesario destruir embriones para obtener el oro teraputico del futuro y conseguir los mismos resultados.
El doctor Robb MacLellan, investigador del Centro
de Medicina Regenerativa e Investigacin de Clulas
Madre Eli and Edythe Broad, de UCLA, logr que se
generara otro tipo de clulas, completamente diferentes
y con otras funciones especializadas, a partir de clulas
madre pluripotentes inducidas (iPS), lo que parece ser
el futuro de la medicina regenerativa. En teora, de las
clulas de la piel de una persona se podran generar
clulas con funciones cardiacas que hubieran sido daadas, como en el caso de un infarto. Este sistema permite
tambin evitar algunos otros de los problemas que se
presentan en la utilizacin de clulas madre provenientes de embriones, como el rechazo del organismo contra
el donante. De la misma forma, cuando las clulas
madre provenientes de embriones se inyectan directamente al corazn en modelos animales, producen tumores al generar no solamente clulas cardiacas, sino otras
clulas que tambin estn en el organismo. Estos problemas no se han presentado con las clulas iPS. Para la
regeneracin cardiaca, las clulas iPS se cultivan con
una matriz protenica, identificada como el elemento
que permite que las clulas madre embrionarias lleguen
a ser clulas cardiovasculares. Al aislar estas clulas iPS
cultivadas y estimular al progenitor cardiovascular
inducido, las clulas (que inicialmente pertenecan al
tejido epitelial) generan caractersticas propias del
tejido cardiovascular. Tericamente, las clulas iPS tienen la facultad de convertirse en los 250 tipos distintos
de clulas que forman el cuerpo humano.
(Captulo 10)
Dilemas ticos
Los riesgos con el empleo de las clulas madre son numerosos y no es posible predecirlos con cierta precisin,
pues todava no se conoce qu usos predominarn en la
manipulacin de clulas madre, ni los posibles descubrimientos cientficos que puedan surgir. Algunos cientficos justifican la produccin y destruccin de embriones humanos para la obtencin de clulas madre y
afirman que no consideran al embrin temprano como
un ser humano sino slo hasta que se inicia la implantacin del beb en el tero materno, lo que ocurre alrededor del sptimo da de vida. Por ello, se argumenta que
no hay ningn problema tico en el hecho de producir
embriones en el laboratorio y experimentar con ellos o
extraerles las clulas madre antes de implantarlos, puesto que no seran todava seres humanos.
Adems, no todos los embriones que intentan implantarse de forma natural sobreviven. A veces hasta 30% de
ellos son espontneamente abortados por un proceso
natural, como puede ocurrir tambin en cualquier
momento del embarazo e incluso despus, ya que nunca
sobreviven 100% de todos los recin nacidos. De la
misma forma, ciertos mtodos anticonceptivos actan
como mtodos abortivos, como los dispositivos intrauterinos (DIU) y la pldora del da siguiente, que impiden
la implantacin del beb. As, el embrin no es considerado ser humano porque no necesariamente sobrevivir.
De los primeros estadios del embrin humano en la etapa de mrula (ocho clulas totipotenciales) podran
obtenerse hasta cuatro u ocho seres humanos semejantes dividiendo artificialmente dichas clulas o usando la
tcnica de clonacin, que consiste en unir el ncleo de
una clula adulta con un ovocito o clula materna a la
que se le ha sacado su propio ncleo, formando as artificialmente un nuevo ser que tiene todas las propiedades
para desarrollarse en un embrin humano (como en el
caso de la oveja Dolly).
Se garantizara de esta manera la produccin en
cadena y la obtencin de la cantidad adecuada de embriones humanos para satisfacer la oferta y la demanda
que estos experimentos requeriran sin necesidad de
estar buscando mujeres donantes de vulos. Pero el
debate est an abierto. Para la clonacin de la oveja
Dolly se realizaron 288 intentos antes de tener xito; de
hacerse estos experimentos en seres humanos podra
ocurrir algo similar y se perderan muchos embriones
antes de conseguir una clonacin exitosa. La compaa
Advance Cell Tecnology, Inc., de Massachusetts, con el
fin de presionar al gobierno estadounidense se apunt la
primera clonacin exitosa de un ser humano. Lo que
en realidad se limitaron a hacer fue tratar de concebir

ocho embriones humanos uniendo vulos con ncleos
de clulas maduras, pero slo pudieron concebir dos,
que murieron luego de llegar uno de ellos a desarrollarse
hasta el estadio de seis clulas.
La posibilidad de crear libremente embriones con
estos fines favorece la seleccin e incluso la eliminacin
de los embriones que se consideren ms apropiados para
los fines de sus creadores.
Se incentiva asimismo el racismo, ya que no todas las
razas son igualmente bienvenidas, y se pone la valoracin de la vida humana en el cdigo gentico o en la funcin que pueda desempear, por ejemplo, el ser fuente
de clulas madre.
Algunos dilemas ticos suscitados son los que se refieren al respeto a la vida y la dignidad humanas. Estas
clulas madre poseen un enorme potencial teraputico
y la controversia en su obtencin radica en la destruccin de embriones humanos. En este momento sera
oportuno ofrecer una definicin biolgica de embrin,
pues sta no considera puntos de vista legales, morales,
religiosos ni sociales. Se describe como procesos multifactoriales de desarrollo embrionario, combina el reconocimiento de eventos observados para futuro desarrollo.
Con ello se reconoce que la fertilizacin y el desarrollo no
son procesos estticos. Una definicin conservadora del
embrin humano sera la siguiente: un embrin humano
se origina de la primera divisin mittica cuando la fertilizacin de un oocito humano por un espermatozoide
humano se completa, o cualquier otro proceso que inicia
el desarrollo organizado de una entidad biolgica con
genoma nuclear humano o genoma nuclear humano
alterado que tiene el potencial de desarrollarse hasta o
ms all del momento en que aparece el surco germinal
primitivo y no ha alcanzado las ocho semanas de desarrollo desde la primera divisin mittica.
Esta definicin intenta combinar los aspectos de los
estadios de desarrollo observados, el potencial de desarrollo y el origen del DNA que contribuye a la formacin del nuevo individuo. Esta definicin crea la posibilidad de una anomala en una entidad que se origin de
la fertilizacin completa de un oocito humano por un espermatozoide humano y que por cualquier razn carece
del potencial para su futuro desarrollo para considerarlo
como embrin y no posee ese estado. En este contexto,
las clulas madre se obtienen de tres maneras:
a. Del propio organismo, ya que los rganos contienen algunas clulas an no diferenciadas para
reposicin de las que se pierden. En este caso se
requiere el consentimiento informado firmado por
la persona para poder proceder a la extraccin de
las clulas madre.
333
b. De fetos abortados. Plantea problemas de uso con

fines teraputicos o de investigacin.
c. De embriones en la etapa de blastocisto (entre los
5 y los 14 das de la fertilizacin).
La procedencia de embriones puede ser de los sobrantes
de fecundacin artificial que se encuentran en estado de
congelacin, de los fecundados in vitro (FIV) con propsitos de experimentacin y finalmente de embriones
clonados por medio de la utilizacin de vulos humanos
o de animales.
En este contexto, no todas las clulas madre poseen
la misma capacidad de regeneracin ni de transdiferenciacin a otra clula del organismo. De acuerdo con este
criterio, se han diferenciado en clulas totipotentes, pluripotentes y multipotentes. Las primeras son las clulas
que forman al embrin hasta la etapa de 16 clulas. Si
en este momento una clula se separa de las dems,
podr dar origen a otro embrin. Las pluripotentes se
pueden transformar en cualquier tipo de clulas de
tejido u rgano, pero nunca en embrin. Ello se ejemplifica con las clulas de la masa celular interna del
embrin en la etapa de blastocisto, cuando se forman el
endodermo, el mesodermo y el ectodermo, lo que se
conoce como embrin trilaminar. Y por ltimo, las multipotentes se pueden diferenciar en clulas de diferentes
tipos dentro de una misma clase. Como ejemplo estn
las clulas sanguneas, que se diferencian en eritrocitos,
leucocitos y plaquetas (figura 103).
Las clulas madre de adultos tienen ciertas ventajas:
S Eliminan el problema de histocompatibilidad en
el caso del autotrasplante, pues es el mismo individuo el donador y el receptor de las clulas que se
le transfieren, evitando de esta manera el rechazo.
S Ahorran tiempo para transformarse, por ejemplo,
de embrionarias a clulas de un determinado tejido u rgano, puesto que ya estn ms diferenciadas, no forman tumores, no tienen restricciones
ticas, etc.
Las empresas biotecnolgicas estn invirtiendo mucho
dinero en estas tecnologas debido a su potencial efecto
regenerativo y econmico. Estos inversionistas o patrocinadores junto con los cientficos, los medios de comunicacin, los comits de biotica y los gobiernos dirigen
el ambiente de la investigacin cientfica. Estos comits
de ciencia y tecnologa presionan al Estado y a la opinin pblica para lograr desaparecer los impedimentos
para continuar las investigaciones en beneficio de la
humanidad, ya que la terapia celular con clulas madre
ofrece una verdadera opcin de regeneracin y curacin
para enfermedades reconocidas como incurables.
334

Mrula totipotente
Blastocisto
Oocito
Embrin
trilaminar
Espermatozoide
MCI
Clulas
multipotenciales
Ejemplos de
generacin y
regeneracin
orgnica
Sistema
circulatorio
Sistema
inmunitario
Sistema nervioso
Clulas
madre
unipotentes
Figura 103. Esquema que muestra la capacidad pluripotencial de las clulas madre embrionarias para formar cualquier tipo de rgano adulto. Las clulas madre pluripotentes
se originan de las clulas de la masa celular interna (MCI)
dentro del blastocisto. Las clulas madre se convierten en
cualquier tejido del organismo, aunque slo las clulas de
la mrula son totipotentes, capaces de formar placenta.
Los cientficos estamos motivados por la posibilidad

de conocer y controlar la vida humana para preservar la
salud y mejorar la calidad de vida. La prensa tambin
est condicionada por las empresas biotecnolgicas y
los patrocinadores, quienes les proporcionan materiales
informativos y los resultados de las investigaciones, lo
que da la justa medida al debate ya que la investigacin
cientfica es neutral y ofrece juicios de valor a la sociedad. A su vez, los medios de informacin pueden divulgar estos avances en el campo biomdico y de la salud
para beneficio de la humanidad.
Adems, todos los trabajos de investigacin en donde se utilizan clulas o tejidos humanos deben ser autorizados por comits de biotica, lo que les da validez
tica. La sociedad civil tambin influye de manera principal en la poltica de asuntos biomdicos. El movimiento a favor de la experimentacin con embriones
para obtener cuanto antes las clulas madre y aplicarlas
en la clnica tiene el respaldo de algunas asociaciones de
enfermos, mientras que los movimientos provida respetan de manera incondicional al embrin, con la creencia
de que el recurso de embriones es inmoral e innecesario
puesto que las clulas madre de adultos han mostrado su
enorme potencialidad. Ante esta situacin habra que
preguntarse: si alguna persona que ha estado en contra
de la utilizacin de las clulas madre enfermara grave-
(Captulo 10)
mente, cambiara su manera de pensar si la nica opcin de curar su enfermedad fuera precisamente con
clulas madre?
Por un lado, se puede entender que el embrin an no
es un ser humano. Por otro, se piensa que no debe tratarse al embrin humano como si fuera un objeto; esto
se fundamenta en que el embrin es una persona desde
su concepcin y tiene derecho a la vida. Y otra opinin
la tienen quienes sin llegar a la identificacin entre
embrin y persona se mantienen respetuosos con el embrin porque implica el inicio de una vida humana.
Desde el punto de vista social y poltico existe una
enorme presin sobre las peticiones legales para que se
autorice la investigacin con embriones sobrantes de la
fecundacin asistida. El beneficio econmico de las
empresas, el lucro y la notoriedad de los cientficos
aunados a los intereses teraputicos de los enfermos
favorecen el uso de las clulas madre. Cada una de las
tres fuentes mencionadas de clulas madre da lugar a un
campo de la biotica. Las que proceden de adultos se
refieren a ensayos clnicos con seres humanos; las condiciones en las que se puede disponer del tejido humano
de adultos es muy extenso, mientras que las clulas
madre embrionarias plantean el problema de embriones
abortados o descartados en el laboratorio.
INVESTIGACIN EN CLULAS
MADRE ADULTAS
El descubrimiento de clulas madre en la mdula sea
de los adultos hace 40 aos, y ms recientemente en la
sangre del cordn umbilical de los recin nacidos, en el
cerebro, piel, grasa, pulpa dental, vasos sanguneos, sistema digestivo, retina, hgado y pncreas, segn el anteriormente mencionado reporte del Instituto Nacional de
Salud de EUA (NIH), abre las puertas a la esperanza de
una ciencia en favor de una cultura de vida. Las clulas
madre de adultos pueden reproducirse y generar tambin clulas de otros tejidos, como ha sido probado ya
con las clulas madre de la mdula sea y el cerebro.
Los mdicos y cientficos que creen en el xito futuro
de la investigacin de clulas madre de adultos estn de
acuerdo con el otorgamiento de fondos para este tipo de
proyectos, ya que no existe ningn riesgo para la integridad de la persona ni se destruyen embriones humanos. La investigacin en clulas madre de adultos ha
permitido ya avances significativos en trasplantes de
mdula sea, que se llevan a cabo hoy en da con clulas
madre adultas en la mayora de los casos, en el tratamiento de leucemias, linfomas y mieloma mltiple,
entre otros cnceres.

Hoy en da es rutina que para las enfermedades antes
mencionadas los hematlogos de casi todas partes del
mundo induzcan la multiplicacin y recolecten clulas
madre de la sangre de pacientes adultos, de cordones
umbilicales de recin nacidos y de la sangre de donantes
adultos (sin poner en peligro la vida e integridad de los
pacientes, recin nacidos o donantes) para repoblar las
mdulas seas de pacientes afectados por estos cnceres
o por las quimioterapias, salvndoles en algunos casos
la vida y otorgndoles la cura que no sera posible sin
estas clulas. Todo ello se hace gracias a ms de 40 aos
de investigacin en clulas madre adultas de la mdula
sea y de la sangre, modelo por seguir en el resto de
rganos del cuerpo humano.
Las clulas madre no slo se han encontrado en los
lugares ya sealados o se utilizan habitualmente para
salvar pacientes con algunos tipos de cncer, sino que
incluso algunos cientficos han sido capaces de inducir
la diferenciacin de clulas madre adultas de la mdula
sea en clulas de otros tejidos. Por ejemplo, cientficos
de la Robert Wood Johnson Medical School de Nueva
Jersey y otros grupos extrajeron clulas madre de la
mdula sea de ratas y las hicieron diferenciarse en neuronas para el cerebro.
Los mdicos y cientficos (entre los que se cuentan
los autores) que trabajan con clulas madre de adultos
son conscientes de las limitaciones que, al menos por
ahora, presentan estas investigaciones: las clulas madre de adultos no son tan numerosas, no se reproducen
tan fcilmente como las de los embriones ni son tan fciles de encontrar. Pero ante estas dificultades no se puede
recurrir a la solucin fcil que significara la produccin
y el sacrificio de embriones humanos para obtener las
clulas madre.
Por otro lado, la investigacin cientfica rigurosa en
clulas madre adultas, por dar un ejemplo, ha llevado a
descubrir que existen al menos dos tipos ms de clulas
madre adultas disponibles slo en la mdula sea que no
se conocan hace 10 aos. Ante esta perspectiva, quienes se dedican a la investigacin en esta rea necesitan
que se otorguen fondos y apoyo para este tipo de investigaciones, ya que las expectativas de las clulas madre
de adultos son altas. En ese caso, la ciencia estara
autnticamente al servicio del hombre.
Fondos para la investigacin

en clulas madre en EUA
El 9 de agosto de 2001 el presidente de EUA, George W.
Bush, trat de dar solucin al debate con la autorizacin
de un uso limitado de fondos federales para la investiga-
335
cin en clulas madre, decisin que podra resumirse en

los siguientes puntos:
1. No se permitir que se engendren nuevos embriones para matarlos y extraerles las clulas madre,
con fondos gubernamentales de EUA.
2. No se permitir tampoco que se destruyan los cerca de 100 000 embriones congelados que se encuentran en las clnicas de fertilizacin in vitro
slo se les puede extraer las clulas madre para la
investigacin cientfica.
3. Existen docenas de lneas celulares (cultivos) de
clulas madre que se vienen reproduciendo en laboratorios y provienen de embriones producidos
por grupos privados para tal fin. stas pueden ser
reproducidas y repartidas entre todos los cientficos interesados en este tipo de investigaciones. El
Instituto Nacional de Salud de EUA (NIH) otorgar fondos a los cientficos interesados.
4. El NIH entregar asimismo 250 millones de dlares para investigar las clulas madre que se pueden
extraer de los cordones umbilicales de bebs y de
adultos.
Se han certificado ms de 64 lneas celulares embrionarias, de las cuales 44 estn en laboratorios fuera de
EUA. La Universidad de Gotemburgo, en Suecia, es la
que posee ms (19 lneas celulares), luego vienen la
Corporacin Cythera de San Diego, California (9 lneas
celulares), y Reliance Life Sciences de Mumbai, India
(7 lneas celulares). El secretario de salud T. Thompson
desminti que estas lneas celulares no estn en buen
estado y certific que podran ser usadas, calmando los
nimos de todos los que objetaron la decisin del presidente Bush y que estn a favor de producir nuevas lneas
celulares con fondos del Gobierno. El presidente de la
Conferencia de Obispos Catlicos de EUA, Monseor
Joseph A. Fiorenza, y el cardenal Anthony Bevilacqua,
entre otros, han declarado que se darn fondos a cientficos que quieran utilizar estas clulas, ya que en el Vaticano se ha dado testimonio del potencial regenerativo
de la terapia celular con clulas madre, cuando Su Santidad el Papa Juan Pablo II se someti a este tratamiento
en la etapa final de su vida.
Tambin podrn tener acceso a dichos fondos los
cientficos que utilizaron clulas de estos embriones, lo
que habla a favor del enorme potencial que tiene la medicina regenerativa en la actualidad a travs de la terapia
celular con clulas madre. Esta nueva forma de tratamiento, conocida como medicina del siglo XXI o del
tercer milenio, es una verdadera esperanza para curar
enfermedades, preservar la salud y mejorar la calidad de
vida.
336
Investigacin sobre clulas

madre en el mundo
El Dr. Shinya Yamanaka, de la Universidad de Kioto, y
el estadounidense James Thomson, de la Universidad de
Wisconsin, obtuvieron clulas madre a partir de clulas
somticas de la piel, descubrimiento que la comunidad
cientfica catalog como revolucionario por permitir la
creacin de tejidos humanos para regenerar rganos enfermos. Las posibilidades teraputicas que abre la investigacin con clulas madre constituyen una verdadera revolucin para la medicina en el futuro inmediato.
Con el cultivo en el laboratorio de estas clulas y el control de su reproduccin se estar en condiciones de curar
enfermedades tan graves y variadas como el Alzheimer,
el Parkinson, la diabetes juvenil, las lesiones de la mdula espinal, algunos tipos de cncer, el infarto del miocardio, etc. No se puede dudar que estamos ante un logro
verdaderamente revolucionario de la medicina y de la
ciencia que proporcionar enormes beneficios a la
humanidad.
La principal controversia en torno a las clulas madre
tiene que ver con el modo en que son obtenidas, ya sea
de nuestro propio cuerpo; de clulas precursoras (las
gnadas) en fetos abortados, y de embriones en fase de
blastocisto. Los embriones pueden tener diversas procedencias: embriones excedentes de fecundaciones artificiales; embriones fecundados in vitro y embriones
creados por clonacin utilizando vulos humanos o de
animales. Los xitos teraputicos de las clulas madre
adultas consiguen regenerar huesos con clulas madre
de la mdula sea. Los pacientes hemipljicos y los parapljicos logran caminar tras la terapia celular con
clulas de cordn umbilical, tambin til en casos de
leucemia adulta. De esta manera, los cientficos de varios pases, entre ellos Mxico, reconocen la eficacia de
la terapia celular con clulas madre para curar enfermedades. La comunidad cientfica y mdica internacional
empieza a reconocer pblicamente la eficacia de los tratamientos teraputicos realizados con clulas madre
procedentes de adultos. Por ejemplo, cientficos espaoles regeneraron huesos a partir de clulas madre adultas del mismo paciente. En Corea, una mujer paraltica
logr volver a caminar despus de ser sometida a una reparacin de su mdula espinal con clulas madre extradas de la sangre de cordn umbilical. Y, tambin gracias
a la sangre de cordn umbilical, dos estudios paralelos
consiguen demostrar que este tipo de clulas madre es
til para tratar la leucemia adulta.
En un simposio internacional sobre Medicina Regenerativa celebrado en Madrid y organizado por la Fundacin Ramn Areces, cientficos de EUA y Europa han
(Captulo 10)
destacado el xito teraputico de las clulas madre procedentes de adultos. Manuel de Santiago, coordinador
del encuentro y miembro de la Asociacin Espaola de
Biotica y tica Mdica, ha sealado la importancia de
este tipo de clulas procedentes de adultos, dado que
muestran un abordaje teraputico sencillo. Adems,
ofrecen grandes expectativas para la ciencia biomdica
y son respetuosas de las exigencias ticas. La directora
del Instituto de Clulas Madre de la Universidad de
Minnesota, Catherine Verfaille, cree que quiz en 20
aos slo se utilicen clnicamente las clulas madre
adultas. Para el autotrasplante celular, el proceso implica la extraccin de mdula sea, donde se localizan
las clulas madre adultas. Mediante una puncin, el
material extrado se somete a un proceso de expansin
de clulas y se seleccionan las que se pondrn en cultivo
durante 12 das. Las clulas madre obtenidas se mezclan
con un material slido y se implantan al paciente. A partir de aqu se inicia un proceso de regeneracin que dura
entre cuatro y seis semanas.
Los cientficos de la escuela mdica de la Universidad Chosun, en la ciudad de Kwangju, aseguran que el
caso de Hwang Misoon, de 37 aos de edad, es el primero publicado en el mundo en el que un paciente con
lesin en la mdula espinal ha sido tratado con xito con
clulas madre procedentes de la sangre de cordn umbilical. La investigacin ha demostrado que las clulas
madre pueden desarrollarse reemplazando a las clulas
daadas en rganos o partes del cuerpo. La revista The
New England Journal of Medicine public un estudio
realizado por un equipo de investigadores del Grupo de
Trasplante de Sangre y Mdula Europeo y del Registro
Netcoord, en el cual demostraron la efectividad de las
clulas madre obtenidas del cordn umbilical. La investigacin se realiz con 682 adultos enfermos de leucemia que recibieron un implante de clulas madre hematopoyticas de un donante no emparentado, aunque
compatible; 98 procedan de sangre de cordn umbilical
y 584 de mdula sea. El resultado demostr que no se
produjeron diferencias en cuanto a rechazo, mortalidad
tras la intervencin y tiempo que permanecieron sin
recaer entre ambos grupos. En la investigacin, dirigida
por Mary J. Laughlin, del Hospital Universitario estadounidense de Cleveland, en Ohio, los autores compararon los beneficios del uso de clulas madre en el
mismo tipo de enfermos, analizando los resultados
cuando las clulas del cordn umbilical y las de mdula
sea eran menos compatibles. Los datos coinciden con
los del primer estudio.
De acuerdo con los resultados teraputicos que el uso
de clulas madre adultas est demostrando, cabe resaltar que estos avances contribuyen a superar la disputa

tica sobre el controvertido uso de clulas madre embrionarias, lnea de investigacin defendida por numerosos cientficos, determinadas industrias de biotecnologa y algunas personalidades pblicas, como es el
caso del fallecido actor Christopher Reeve, que invirti
tiempo y dinero en fomentar la investigacin con embriones.
A veces los medios de comunicacin confunden a la
opinin pblica al exponer como un xito de las clulas
madre embrionarias lo que son investigaciones o intervenciones llevadas a cabo con clulas madre adultas
extradas del cuerpo del propio paciente o de cordn
umbilical.
Algunos autores, como Deierborg y col. (Prog Neurobiol, mayo de 2008) y Hall (Technology Review, noviembre de 2001), sugieren que las clulas madre adultas, desde un punto de vista estrictamente biomdico,
son superiores a las clulas madre embrionarias para su
uso en medicina, ya que tienen gran versatilidad biolgica y son capaces de diferenciarse en muchos ms tipos
de clulas de los que se haba pensado. Aunque tienen
menor capacidad de diferenciarse que las clulas madre
embrionarias, son ms seguras y parecen mejor programadas para lograr lo que se busca en cada caso determinado.
El Dr. Darwin J. Prockop, de la Universidad de
Tulane, cree que las clulas madre adultas pueden ser
ms adecuadas que las embrionarias de frente a la medicina regenerativa, pues forman parte de un sistema natural de regeneracin, lo que se ha demostrado porque
cuando un tejido resulta daado, las clulas madre de la
mdula sea emigran en grandes cantidades hacia la
zona lesionada para regenerarla.
En una revisin publicada en el British Medical Journal (2001;322:2932,), los autores comentaron que la
utilizacin de clulas madre adultas de los islotes pancreticos se apunta como el tratamiento de eleccin para
los pacientes diabticos en los prximos 10 aos, ya que
tienen indudables ventajas sobre las clulas madre
embrionarias.
Tambin se ha demostrado que las clulas madre mesenquimales obtenidas de tejidos adultos ofrecen ventajas adicionales sobre las clulas madre embrionarias, ya
que al parecer aqullas estn desprovistas de los marcadores moleculares que desencadenan el rechazo inmunitario, e incluso parecen capaces de inhibir la propia
respuesta inmunitaria, como se ha demostrado en los siguientes artculos cientficos:
S Mesenchymal stem cells for treatment of steroid
resistant, severe, acute graftversushost disease: a
phase II study. Lancet 2008;371(9624):15791586.
337
S Human leukocyte antigenG5 secretion by human

mesenchymal stem cells is required to suppress T
lymphocyte and natural killer function and to
induce CD4+CD25highFOXP3+ regulatory T
cells. Stem Cells 2008;26(1):212222.
S Humanplacentaderived mesenchymal stem cells
inhibit proliferation and function of allogeneic
immune cells. Cell Tissue Res 2007;330(3):437 446.
S Adult human fibroblasts are potent immunoregulatory cells and functionally equivalent to mesenchymal stem cells. J Immunol 2007;179(3):1595
1604.
S Interferongamma does not break, but promotes
the immunosuppressive capacity of adult human
mesenchymal stem cells. Clin Exp Immunol 2007;
149(2):353363.
S Modulation of immune responses by mesenchymal stem cells. Ann N Y Acad Sci 2007;1106:272
278.
S Immunogenicity of adult mesenchymal stem cells:
lessons from the fetal allograft. Stem Cells Dev
2005;14(3):252265.
S Bone marrow mesenchymal progenitor cells inhibit lymphocyte proliferation by activation of the
programmed death 1 pathway. Eur J Immunol
2005;35(5):14821490.
S Human mesenchymal stem cells inhibit differentiation and function of monocytederived dendritic cells. Blood 2005;105(10):41204126.
S Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses. Blood 2005;105(4):
18151822.
S Immunopathogenesis of acute graftversushost
disease: implications for novel preventive and
therapeutic strategies. Ann Hematol 2004;83(9):
551565.
S HLA expression and immunologic properties of
differentiated and undifferentiated mesenchymal
stem cells. Exp Hematol 2003;31(10):890896.
Estas evidencias demuestran que se podra disponer de
una fuente de clulas madre universal sin que fuera
necesario utilizar las del propio paciente, como tambin
lo demuestran los resultados clnicos que los autores
han tenido con sus pacientes en la Sociedad Internacional para la Terapia Celular con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y el Antienvejecimiento S. C (figura
104).
David Greewood, de la compaa Geron en California, una de las pioneras en clulas madre embrionarias
y rival de Advanced Cell Technology (ACT), opina: En
general se puede decir que por razones ticas y comer-
338
Figura 104. Sociedad Internacional para la Terapia Celular

con Clulas Madre, Medicina Regenerativa y el Antienvejecimiento, S. C.
ciales las compaas de biotecnologa estn centrando

sus investigaciones ms en las clulas madre obtenidas
de tejido adulto que en las clulas madre embrionarias.
Martin Edwards, director ejecutivo de ReNeuron,
coment que cientficamente hablando, la clonacin
teraputica podra funcionar, pero hay grandes dudas
acerca de si podra llegar a ser un negocio rentable, opinin que comparte Michael Ruhl, director ejecutivo de
la compaa alemana de biotecnologa Cardion, quien
va ms all al afirmar que: cuestiones ticas aparte, no
hay ninguna posibilidad de que la utilizacin de clulas
madre embrionarias pueda llegar a ser rentable. Tambin Michael Lytton, del Oxford Bioscience Partners,
experto en inversiones en el rea de la biomedicina, en
una conferencia presentada en el Congreso sobre Medicina Regenerativa, celebrado en Washington en diciembre de 2001, opin que las dificultades tecnolgicas,
las incertidumbres polticas, los problemas sobre patentes y otras dificultades hacen que sea muy improbable
que teraputicas derivadas de clulas madre embrionarias puedan introducirse en el mercado farmacutico.
Varios experimentos en animales han reforzado las
posibilidades teraputicas de las clulas madre de adulto de mdula sea. En abril de 2001 dos grupos de trabajo (el New York Medical College y el National Human
Genome Research Institute, Bethesda, Maryland) publicaron que clulas madre de mdula sea eran capaces
de regenerar msculo cardiaco daado. Para ello provocaron reas de infarto a corazones de 30 ratones. Posteriormente inyectaron clulas de mdula sea en las
zonas no infartadas de tejido cardiaco. Nueve das despus de la inyeccin, las clulas trasplantadas estaban
formando nuevo tejido cardiaco clulas musculares
(Captulo 10)
y vasos sanguneos en 12 de los 30 ratones, mejorando los parmetros hemodinmicos de esos ratones. De
30 ratones se curaron 12, aunque es posible que el uso
de esta tcnica en el hombre tenga mejores resultados.
En otro estudio (Universidad de Columbia) se aislaron
clulas de la mdula sea de voluntarios y posteriormente se inyectaron estas clulas a ratas a las que se les
haba provocado infartos cardiacos. Dos semanas despus de la inyeccin, los investigadores comprobaron
que capilares formados por clulas endoteliales humanas representaban 25% de los capilares del corazn.
Cuatro meses despus, las ratas que haban sido inyectadas con las clulas humanas presentaban considerablemente menos tejido cardiaco cicatrizal y una mejor funcin cardiaca que las ratas no tratadas con clulas de
mdula sea humana. El 24 de agosto de 2001, cientficos de la Universidad de Dsseldorf obtuvieron una
mejora espectacular en un hombre que padeca un
infarto, injertndole clulas madre obtenidas de su propia mdula sea. Tras inyectar estas clulas madre de
mdula sea en la zona infartada del corazn, ellas evolucionaron hasta convertirse en tejido muscular cardiaco, mejorando considerablemente la funcin cardiaca del paciente. En la Universidad de Yale tambin
utilizaron clulas madre de mdula sea como uno de
los principales tejidos fuente para la reparacin de estructuras corporales daadas. En este estudio, una nica
clula de mdula sea de ratn adulto pudo multiplicarse y dar lugar a pulmn, hgado, intestino y piel. El
experimento consisti en un doble trasplante medular.
Se inyectaron clulas de mdula sea de ratn, marcadas con una protena verde fluorescente, en el torrente
sanguneo de ratones hembra que haban recibido una
dosis de radiacin mielotxica letal que destruy gran
parte de las clulas de la mdula sea. Dos das despus
aislaron clulas marcadas de verde que se haban instalado en la mdula sea de los animales receptores.
Luego inyectaron en ratones radiados una sola de las clulas marcadas de verde junto con clulas de la mdula
sea de los ratones hembra que haban sobrevivido al
menos un mes. Once meses despus del segundo trasplante, los cientficos encontraron clulas de la progenie de la clula inyectada en pulmn, piel, intestino,
hgado, as como en hueso y sangre. Esto demuestra que
una clula madre de mdula sea puede originar cualquier tipo celular.
Aunque la mdula sea es un rgano de fcil acceso,
a veces las tcnicas de estimulacin farmacolgica de la
mdula sea para la recoleccin de clulas madre en
donantes no son efectivas, y hay que proceder a recoger
estas clulas directamente por puncin, maniobra que
no deja de ser traumtica. Por ello, muchos investigado-

res abogan por buscar clulas pluripotenciales de rganos todava ms accesibles.
Si existe un objetivo primordial en la investigacin
con clulas madre, ste es conseguir descifrar los mecanismos para la obtencin de un determinado tejido diferenciado a partir de una clula madre indiferenciada.
Los artculos hasta ahora publicados en terapia celular
con clulas madre sugieren que no ser fcil producir
poblaciones celulares puras de un determinado tejido,
requisito necesario para garantizar la seguridad de las
terapias celulares para la regeneracin o sustitucin de
rganos.
Otro de los grandes debates cientficos gira en torno
a la necesidad de demostrar por consenso de la comunidad cientfica internacional la certeza de que una clula
hija de una clula madre (tanto adulta como embrionaria) efectivamente se haya transdiferenciado a una
clula de una estirpe celular diferenciada y distinta de
aqulla a la que perteneca su progenitora (la clula
madre).
Theise public un artculo de las virtudes regenerativas de una sola clula madre de mdula sea que, transferida a un organismo daado distinto del que proceda,
prenda y regeneraba tejidos de mltiples rganos. l y
su equipo afirmaron esperanzados que se ha demostrado que una clula de mdula sea tiene cuatro veces ms
capacidad de activarse en un tejido daado que en un tejido sano. En estudios realizados en ratones se han encontrado clulas madre de adulto que pueden desarrollarse en cualquier tejido aun perteneciendo a otro tejido
diferente (por lo tanto, las clulas madre de adulto situadas en el cerebro pueden diferenciarse no slo para formar neuronas, sino tambin miocitos, clulas sanguneas, intestinales, hepticas y miocrdicas).
Igualmente, las clulas madre sanguneas de adulto
pueden diferenciarse para formar neuronas cerebrales,
y las clulas progenitoras de mdula sea de adulto pueden convertirse en clulas miocrdicas funcionales
capaces de reparar infartos de miocardio.
Clulas madre embrionarias

vs. clulas madre adultas
Aunque la polmica sigue siendo difcil de resolver porque los argumentos ticos no se han resuelto, el consenso
es que los embriones humanos deben tratarse con respeto, pero que salvar vidas a travs de la investigacin
mdica justifica su uso. En una clnica de reproduccin
asistida, el mdico elige el blastocisto ms sano para
implantarlo en el tero. Los dems se congelan para un
339
uso eventual, pero en su mayora no tienen perspectivas

realistas de llegar a trmino y finalmente sern destruidos. Si los padres han expresado su deseo de donar sus
embriones para investigacin en vez de descartarlos, es
moralmente aceptable usar sus clulas para hacer el bien
a otros. Los embriones en cuestin se crean como parte
de un proceso dador de vida, el de ayudar a que las parejas estriles conciban. Adems, no est tan claro que la
vida de un individuo comience en el instante de la fecundacin, pues el sistema nervioso slo empieza a aparecer
a las dos semanas.
El preembrin puede dividirse y originar gemelos; por
lo tanto, es discutible que la individualidad comience
unos das despus de la fecundacin.
Adems, la destruccin frecuente de preembriones
ya es ampliamente aceptada en ciertas formas de anticonceptivos, como el diafragma intrauterino, que impide la implantacin del vulo fecundado, y el mismo tratamiento de fertilizacin asistida.
El estudio de clulas madre requiere la destruccin
de muy pocos embriones. Las clulas madre embrionarias se caracterizan por su capacidad de crecer y dividirse indefinidamente. O sea que, en teora, las clulas
de un solo blastocisto podran satisfacer todos los requerimientos.
La obtencin de clulas madre humanas sera un procedimiento ocasional y limitado, y no una destruccin
constante e ilimitada de embriones. La investigacin
encierra una promesa real; es preciso estudiar ambas
clases de clulas madre, ya que las esperanzas puestas
en las clulas madre embrionarias tienen fundamentos
slidos, ofrecen un nuevo mtodo eficaz para tratar
enfermedades degenerativas incurables, como el mal de
Parkinson y la diabetes. Las clulas madre adultas son
menos prolficas y verstiles que las embrionarias, al
menos en teora.
Es importante estudiar ambos tipos de clulas (de
adulto y embrionarias), a fin de establecer cul conviene
ms a cada aplicacin. Las embrionarias no son reconocidas por el sistema inmunitario, al igual que las clulas
madre adultas pluripotenciales.
El Dr. Paul Sanberg, de la Universidad de Florida, es
uno de los pioneros en obtener clulas madre de fetos
abortados. En la Reunin Anual de la Asociacin Americana para el Avance de las Ciencias del ao 2000, el Dr.
Sanberg demostr que las clulas madre procedentes de
cordn umbilical de fetos abortados, tratadas adecuadamente con cido retinoico y hormonas de crecimiento e
inyectadas en el sistema sanguneo de ratas en las que se
haba provocado un ictus, favorecan su recuperacin. Su
trayectoria mas reciente en la investigacin sobre clulas
madre se encuentra en los artculos siguientes:
340
S Human cord blood progenitor cells decrease cytokines and inflammatory cells in acute myocardial
infarction. Stem Cells Dev 2008.
S Trophic factor induction of human umbilical cord
blood cells in vitro and in vivo. J Neural Eng
2007;4(2):130145.
S Human umbilical cord blood progenitor cells are
attracted to infarcted myocardium and significantly reduce myocardial infarction size. Cell
Transplant 2006;15(7):647658.
S Expression of brain natriuretic peptide by human
bone marrow stromal cells. Exp Neurol 2004;185
(1):191197.
Bancos de clulas madre

de cordn umbilical
Desde hace varias dcadas se ha visto que congeladas
a 196 _C en contenedores de nitrgeno lquido, las
clulas madre de cordn umbilical son casi eternas, con
una vida media de 5 000 aos. Primero se extraen el
plasma y los eritrocitos. El marcador CD34 permite
identificar las clulas madre que habrn de ser congeladas, y cuantificarlas.
Luego de confirmar mediante diversos estudios que
las clulas no fueron contaminadas durante su recoleccin, se procede a congelarlas progresivamente en rampas; primero a 80 _C y finalmente a 196 _C.
Obtenidas durante el parto a partir de la sangre del
cordn umbilical y de la placenta, las clulas madre son
criopreservadas en contenedores con nitrgeno lquido
a 196 _C, y pueden ser descongeladas en cualquier
momento para ser trasplantadas como forma de tratamiento para diversas enfermedades que pudiera sufrir
en el futuro el beb o algn pariente cercano.
Hoy en da, el trasplante de clulas de cordn umbilical se emplea en el tratamiento de enfermedades oncohematolgicas, como la leucemia y los linfomas, as
como para cualquier cncer en cuyo tratamiento sea
necesario reconstruir la mdula sea daada por la quimioterapia. Asimismo, estos trasplantes han demostrado ser efectivos para el tratamiento de afecciones menos
frecuentes, como ciertas anemias (p. ej., la de Fanconi
y la betatalasemia) y trastornos metablicos.
Todo hace suponer que en el futuro las clulas madre
(cuyas principales caractersticas son dividirse indefinidamente y ser capaces de convertirse en cualquier tipo
de clula del organismo) regenerarn un espectro mucho mayor de enfermedades. Existen muchos trabajos
de investigacin que sugieren que las clulas madre sirven de reemplazo para cualquier clula daada, como
(Captulo 10)
las del pncreas en la diabetes, las del corazn en el

infarto y las neuronas en el Parkinson y el Alzheimer
(Chillik, 2004). La posibilidad de contar con clulas
madre obtenidas del cordn umbilical (que habitualmente se desecha tras el parto) es presentada como una
alternativa cientficamente vlida y ticamente irreprochable al uso teraputico de clulas madre embrionarias.
La alternativa al uso de clulas madre embrionarias
es utilizar clulas madre de cordn umbilical, de placenta e incluso de abortos espontneos. Pero, sin duda,
una fuente de clulas madre con grandes posibilidades
clnicas en un futuro inmediato son las clulas madre de
tejidos adultos. En la dcada de 1990 se pudo demostrar
la posibilidad de transformar clulas madre de diversos
tejidos adultos en clulas de varios linajes de su mismo
tipo celular; a partir de entonces tres descubrimientos
han marcado el desarrollo del conocimiento y la utilizacin de las clulas madre de tejidos adultos y abierto el
camino para su uso potencial en la mayora de las enfermedades:
a. El primero fue la cada del viejo paradigma de la
biologa del desarrollo, donde se crea que estirpes
celulares de un linaje fundamental no podan formar clulas de otro linaje; por ejemplo, el mesodermo s puede formar ectodermo y viceversa.
b. El segundo fue comprobar que las clulas madre
de algunos rganos adultos mostraban ms plasticidad de lo que en principio se crea, pudiendo
incluso transformarse en clulas madre multipotentes y pluripotentes.
c. El tercero fue que las clulas madre se detectaron
tambin en rganos como cerebro y msculo (que
se crea que carecan de ellas) y que podan cultivarse indefinidamente y despus dirigir su diferenciacin hacia clulas del tejido de origen u otro
distinto.
Obtencin de clulas madre

adultas de diversos tejidos
En 1997 Eglitis y col. consiguieron generar clulas nerviosas a partir de clulas madre de mdula sea, hecho que
tambin consiguieron ms tarde otros cientficos. Tambin
se consigui obtener, a partir de mdula sea, clulas musculares. En enero de 1999 el grupo de Vescovi (Science
1999;283:534) cultiv y transform clulas madre nerviosas de rata en clulas sanguneas, y en noviembre de 2000
el mismo grupo de Vescovi consigui tambin la transformacin de clulas madre nerviosas de ratones en clulas
del msculo esqueltico.

A partir de estas experiencias, otras muchas han confirmado en los ltimos aos la posibilidad de obtener
clulas de distintos tejidos a partir de clulas madre del
propio tejido o de otro distinto. Las clulas madre de
mdula sea se pueden transformar en hepatocitos, clulas renales, endoteliales y pueden generar neuronas;
las clulas madre nerviosas de ratn y humanas pueden
transformarse en clulas de tejido muscular esqueltico;
las clulas madre nerviosas adultas de ratn pueden
transformarse en una gran variedad de clulas de otros
rganos: corazn, pulmn, intestino, rin, hgado, sistema nervioso, msculo y otros tejidos; las clulas madre precursoras de oligodendrocitos pueden convertirse
en clulas madre nerviosas; las clulas madre de piel de
ratn pueden transformarse en clulas neuronales, musculares y de tejido graso; las clulas madre humanas de
pncreas pueden transformarse en clulas secretoras del
factor 1 promotor de insulina; las clulas madre de pulpa dental pueden transformarse en distintos tipos celulares de tejido dental; las clulas madre gastrointestinales pueden transformarse en distintos tipos de clulas
epiteliales; las clulas madre mesenquimales pueden
trasplantarse al tero de oveja y diferenciarse hacia
otros tipos celulares, como clulas seas o de tejido adiposo. Tambin se pueden obtener hepatocitos de clulas
madre adultas de otros tejidos; se pueden obtener clulas madre de tejido adulto de cadveres; cultivos de
clulas humanas derivadas de teratocarcinomas pueden
formar clulas neuronales capaces de producir dopamina; clulas madre del hgado se pueden transformar
en clulas cardiacas; clulas madre de tejido graso pueden cultivarse y transformarse en cartlago, msculo,
hueso y el propio tejido graso; clulas madre adultas
humanas y animales pueden cultivarse y servir de base
para obtener una fuente prcticamente ilimitada de clulas madre tiles para tratamientos clnicos. Adems,
las clulas madre de placenta obtenidas despus del
parto se han podido transformar en clulas de hueso, tejido nervioso, cartlago, sangre, msculo, tendn y vasos sanguneos. En 2001, los miembros de un equipo de
cientficos australianos comunicaron que haban aislado una muestra extremadamente pura de clulas
madre adultas de tejido nervioso a partir de clulas de
ratn, consiguiendo 80% de pureza; importante avance
si se tiene en cuenta que la pureza hasta ahora conseguida no superaba 5% (Nature 2001;412;736739).
Aunque todas las experiencias anteriormente comentadas apoyan la posibilidad de que las clulas madre
obtenidas del tejido adulto puedan desarrollarse hacia
clulas de diferentes tejidos, la formacin de tejidos u
rganos completos a partir de estas clulas madre aparece como una posibilidad mucho ms remota. Cuando
341
se cultivan clulas madre se obtiene una masa celular

amorfa; para intentar crear estructuras similares a los
tejidos, que sera el primer paso para la creacin de
rganos nuevos, es necesario que las clulas crezcan
sobre una matriz externa sobre la que puedan ordenarse
las clulas que se van generando. En relacin con ello,
Patrick Stayton, de la Universidad Washington, en
Seattle, cultiv clulas madre sobre una matriz de laminina, consiguiendo que se alinearan a lo largo de estas
fibras formando una estructura muy similar a la del miocardio (Lancet 2000;356:1500).
Respecto a la posibilidad de transformar, desdiferenciando, clulas somticas adultas hasta clulas madre
que posteriormente puedan ser cultivadas para obtener
clulas de su propio tejido o de otro, las experiencias son
mucho ms reducidas. Sin embargo, en el Congreso de
la Sociedad Britnica de Fertilidad celebrado el 23 de
febrero de 2001, James y su grupo, de PPL Therapeutics, en la que participa tambin el Instituto Roslin,
comunicaron que haban logrado transformar clulas
adultas de piel de vaca en clulas madre multipotentes,
y posteriormente obtenido de ellas clulas de msculo
cardiaco. Segn sus autores, estas experiencias podran
aplicarse a la creacin de tejidos. Respecto a la posibilidad de conseguir a partir de clulas somticas adultas,
sin transformarlas a clulas madre, clulas de otro
tejido, tambin las experiencias son mnimas, aunque
igualmente el 27 de febrero de 2001, en la Reunin de
la Sociedad Americana de Investigacin Ortopdica
celebrada en San Francisco, un equipo de la Universidad Duke, dirigido por Guilak y Erickson, present
resultados de su trabajo, demostrando la posibilidad de
lograr condrocitos (clulas de cartlago) a partir de adipocitos humanos (grasa) obtenidos de restos de liposuccin. Adems, tambin consiguieron cultivar los condrocitos sobre una matriz tridimensional, obteniendo
una estructura similar al tejido cartilaginoso.
PERSPECTIVAS ACTUALES
En 1973 se consigui que la Corte Suprema de EUA eliminara restricciones para el aborto provocado, basndose en un caso de violacin. En los siguientes aos se
fueron introduciendo legislaciones que permitieron
ampliar las razones para abortar, y hoy se produce ms
de un milln y medio de abortos por ao en EUA, siendo
menos de 1% de ellos por causa de violacin. En la Ciudad de Mxico, Distrito Federal, tambin se ha legalizado el aborto y basta con que una mujer quiera abortar
342
para que ste se realice. La Asamblea Legislativa del

Distrito Federal (ALDF), dominada por partidos de
izquierda, vot en pleno la reforma al artculo 144 del
Cdigo Penal del D. F., que fue aprobada por 46 votos
a favor, 19 en contra y 1 abstencin el 27 de abril de
2007. Las mujeres que tengan menos de 12 semanas de
embarazo y radiquen en la capital del pas podrn abortar en cualquiera de las 15 clnicas de salud pblica que
han sido acondicionadas por el gobierno, lo que se considera un gran avance en materia legislativa a favor de
la decisin de la mujer de detener un embarazo no deseado. En Holanda se ha legalizado la eutanasia, lo que
permite a la persona ser duea de su vida en su totalidad.
En los ltimos 20 aos la legislacin y los legisladores
se han vuelto ms permisivos, documentndose ya incluso casos de eutanasia no slo en enfermos terminales, sino tambin en personas sanas y nios enfermos.
En EUA, la oposicin que el Congreso ha mantenido
desde hace aos a respaldar con fondos federales las
investigaciones en las que se destruyan embriones humanos se ha enfrentado a fuertes presiones por parte del
National Institute of Health (NIH) para obtener fondos,
al menos para utilizar las clulas madre producidas por
grupos privados. Influyen tambin las recomendaciones del National Bioethics Advisory Committee
(NBAC), instituido por el gobierno federal de EUA para
el estudio de este problema de que sean asignados fondos pblicos no slo para la investigacin sobre clulas
madre embrionarias, sino tambin para su produccin;
ms an, se insiste en que se elimine la prohibicin
vigente por ley del uso de fondos federales para la investigacin sobre embriones humanos. Lo mismo sucede
en Inglaterra, Japn y Australia.
En 2006 el presidente George W. Bush fren un proyecto de ley que pretenda eliminar la prohibicin de
utilizar fondos pblicos para la investigacin con clulas madre en EUA. Sin embargo, no es necesario el uso
de clulas madre provenientes de embriones para curar
enfermedades como la leucemia y el cncer, ya que gracias a las clulas madre adultas han sido tratadas con
xito enfermedades como el mal de Alzheimer y el Parkinson desde 1988, cuando se usaron por primera vez
las clulas provenientes del cordn umbilical (clulas
madre adultas) para llevar a cabo trasplantes de clulas
madre sanguneas.
A pesar de que hace ms de 30 aos que el aborto es
legal en EUA, el estudio de las clulas madre ha provocado controversias ticas, y tanto organizaciones religiosas como activistas en pro de la vida han dicho que
esos estudios destruyen la vida de los seres humanos
que acaban de ser procreados. Sin embargo, recientes
estudios han encontrado que no slo los embriones
(Captulo 10)
Polticas estatales en materia de investigacin

en clulas madre embrionarias (EUA)
Missouri tiene una enmienda constitucional
para legalizar la investigacin
6 estados aprueban la investigacin
Iowa y Massachusetts derribaron los
obstculos para esta investigacin
Wisconsin construir un instituto de
investigacin
6 estados prohibieron la investigacin
Figura 105. Se muestran las posiciones legislativas entre
los estados de EUA que estn discutiendo y analizando la
investigacin en clulas madre. En Nueva York se aprobaron 600 millones de dlares para la investigacin en clulas
madre durante los prximos 11 aos, mientras que California destinar 3 000 millones de dlares en este campo
durante los prximos 10 aos. Tomado de: http://www.stateline.org/live/details/story?contentId=195908.
humanos son fuente de clulas madre, sino que tambin

las contiene el mismo lquido amnitico que rodea al
embrin. Precisamente son estas clulas adultas o multipotenciales las que se utilizan en la medicina regenerativa actual como valiosa alternativa al trasplante
medular y para la reparacin de tejidos y rganos.
La senadora Hillary Clinton es una de las partidarias
del estudio de las clulas madre y en 2005 patrocin su
investigacin antes de que el presidente Bush lo vetara,
declarndolo enemigo de la ciencia y diciendo que la
administracin actual realmente ha provocado un alto
en la guerra contra el cncer. Por su parte, Barack
Obama, Joe Biden y hasta el republicano Rudy Giuliani
abogaron por relajar las restricciones federales respecto
al estudio de las clulas madre con tal de encontrar la
cura a enfermedades hasta ahora incurables. Por otra
parte, los republicanos Sam Brownback y Mitt Romney
apoyaron el uso de clulas madre adultas y de embriones humanos derivados de tratamientos de fertilidad,
respectivamente.
En EUA la tendencia legislativa entre los estados
progresistas est a favor de la investigacin en clulas
madre, aunque persisten los debates en ciertos estados,
como se muestra en la figura 105. El 5 de abril de 2007,

Christine Vestal, escritora de Stateline.org, realiz un
anlisis de la posicin poltica en EUA respecto a la
investigacin en clulas madre durante la administracin del presidente George W. Bush. El congresista
Eliot Spitzer por Nueva York logr la aprobacin de 600
millones de dlares para la investigacin en clulas
madre durante los prximos 10 aos, mientras que California designar 3 000 millones de dlares en este
campo durante los prximos 10 aos.
As pues, los gobiernos de los pases, en especial sus
organismos legislativos y en particular el Congreso de
EUA, por la gran influencia de sus decisiones estn en
el momento histrico de favorecer la investigacin
sobre clulas madre como una alternativa teraputica
poderosa en beneficio de la humanidad. El presidente de
EUA, George W. Bush, cristiano declarado, cuando
habla de las clulas madre y del embrin humano manifiesta su preocupacin por proteger a estas clulas y
embriones que tienen la capacidad de generar un ser
humano en el futuro y un potencial enorme en el campo
de la investigacin y en la salud humana.
Se ha reconocido a las clulas madre embrionarias
como uno de los mtodos teraputicos ms prometedores de la prxima dcada. Sin embargo, existen numerosas controversias relacionadas con la biotica en esta
rea de la investigacin. Cada pas tiene sus propias
legislaciones e influencia poltica, adems de creencias
religiosas. Estas diferencias tendrn una importante influencia sobre la colaboracin internacional para la
investigacin. Mxico y Latinoamrica no pueden ni
deben cruzarse de brazos ante este momento histrico
de la medicina y de la ciencia. Los mdicos, cientficos,
grupos religiosos y polticos deben estimular el desarrollo de la terapia celular con clulas madre, pues su
enorme potencial curativo regenerativo debe aprovecharse al mximo en beneficio de la humanidad.
Por otra parte, las clulas madre de tejidos adultos ya
pueden ser aplicadas en la prctica clnica como terapia
celular, como se demuestra en algunos de los trabajos
que se presentan a continuacin, donde las clulas madre de tejidos adultos se han aplicado ya con finalidad
teraputica en: tumores cerebrales (Cancer Invest 2000;
18:492493); meduloblastomas y glioblastomas (J Neurooncol 1999;44:147153); gliomas malignos recurrentes y meduloblastomas en nios (Pediatr Transplant 1999;1:8795); neuroblastomas (J Clin Oncol
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agosto de 2001); artritis reumatoide (Arthritis Rheum
2001;44:754760); lupus eritematoso (Arthritis Rheum
2001;44:728731); lupus eritematoso en nios (Lancet
2000;356:701707); policondritis (Arthritis Res 2000;
2:327336); citopenias autoinmunitarias (Blood
2000;96: 32723275); otras enfermedades autoinmunitarias (Stem Cells 1999;17:366372; Cancer Treat Res
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Clin Immunol 2000;20:19). Inmunodeficiencias: utilizando clulas madre de mdula sea (Blood
2000;96:1239 1246); utilizando clulas madre de un
banco de cordones umbilicales (J Pediatr
2001;138:570573). Anemias: anemia de clulas falciformes (sickle cell) utilizando clulas madre de cordn
umbilical de un hermano (Oncol 2000;22:437400);
anemia sideroblstica por trasplante alognico de clulas madre de mdula sea (Br J Haematol
2001;113:938939; Ann Neurol 2001;49:222 229);
anemia en macroglobumina de Waldenstrom, por trasplante alognico de clulas madre de mdula sea (Bone
Marrow Transplant 2001; 27:10271029); anemia
aplsica severa, por trasplante alognico de clulas
madre de sangre perifrica (Ther Apher 2001;5:5457);
trombocitopenia congnita: por trasplante alognico de
clulas madre de sangre perifrica (Bone Marrow
Transplant 2000;26:571572); enfermedades virales
344
crnicas: trasplante alognico de clulas madre de sangre perifrica (Bone Marrow Transplant 2000;26:805
808; Lancet 2000;356:223 223); enfermedades de los
huesos y cartlagos: trasplante de condrocitos autlogos
(Cell Transplant 2001;10: 203208); trasplante alognico de clulas mesenquimales de mdula sea en nios
con osteognesis imperfecta (Nat Med 1999;5:309
313); alteraciones corneales: trasplante alognico de
clulas madre corneales obtenidas de cultivo (Cornea
2001;29:488494); trasplante de clulas madre de
lquido amnitico (Cornea 2001;20:354361; Br J Opthalmol 2001;85:567575); trasplante alognico de clulas madre corneales (Br J Opthalmol 2001;85:
604609); trasplante alognico de clulas madre conjuntivales (Opthalmology 2001;180: 11261133; Cornea 2000;19:421426); trasplante autlogo de clulas
madre corneales (N Engl J Med 1999;340:16971703;
N Engl J Med 2000;343:8693); enfermedades hepticas: trasplante alognico de clulas madre hepticas tras
trasplante heptico (Blood 2000;96:39973999); amiloidosis primaria: trasplante autlogo de clulas madre de
sangre perifrica (Drugs 2000;9:23432350); infarto de
miocardio: regeneracin del tejido cardiaco lesionado
por trasplante autlogo de clulas madre de mdula sea
(Dtsch Med Wochenschr 2001;126:932938; Stroke
Neurology 2000; 55:565569); terapia gnica: trasplante
autlogo de clulas madre de mdula sea genticamente modificadas en inmunodeficiencia severa combinada (SCID)X1 (Neurosurgery 2001;49: 586592).
Aplicaciones clnicas de la terapia

celular con clulas madre
Regeneracin tisular por clulas madre alognicas del
mismo tejido: las clulas madre de un determinado
tejido pueden unirse a ese mismo tejido daado y diferenciarse hacia clulas adultas sanas tanto cuando se inyectan directamente en el tejido como cuando se introducen indirectamente a travs del sistema circulatorio
(Science 2000;290:1479). Las clulas madre nerviosas
cultivadas se pueden trasplantar al sistema nervioso
central, en donde se diferencian hacia neuronas maduras (Nature 1999;402:390). Las clulas madre de msculo, cuando se trasplantan a un tejido muscular daado, se transforman en clulas musculares adultas sanas
fusionndose con las originales daadas y regenerndolas (J Cell Biol 1999;144:1113). En septiembre de 2001,
en el Congreso de la Sociedad Americana de Ciencias
Neurolgicas celebrado en Nueva Orlens, se presentaron varias comunicaciones relacionadas con este tema.
(Captulo 10)
As, Jeffrey Kocsis, de la Universidad de Yale, mostraba

que en lesiones realizadas en la mdula espinal de animales tras inyectar clulas madre nerviosas cerca de la
lesin, las clulas daadas se recubran de nuevo de
mielina, recuperando en parte su funcin. Tambin Jeffrey Rothstein, de la Universidad Johns Hopkins de Baltimore, comunic en ese mismo Congreso que las clulas madre pueden emigrar a lo largo de la mdula
espinal. La Dra. Barbara Tate, del Hospital Infantil de
Boston, present unos experimentos en los que a ratas
en quienes se haba provocado un Alzheimer experimental se les inyectaba grupos de clulas madre en la
parte opuesta de su cerebro, comprobndose que las
clulas madre inyectadas se desplazaban hasta la otra
parte del cerebro, la lesionada, depositndose sobre la
placa de Alzheimer. Es decir, se pudo comprobar que las
clulas madre de tejido adulto tienen la posibilidad de
desplazarse hacia la zona daada y regenerarla.
En la LXXIII Reunin Anual de la Asociacin Americana del Corazn celebrada en Nueva Orlens en
noviembre de 2001, un equipo del hospital Bichet de
Pars, dirigido por Philippe Menache, present la primera experiencia clnica de trasplante autlogo de mioblastos realizado en un paciente de 72 aos de edad con
isquemia cardiaca por una coronariopata. Los mioblastos se cultivaron en el laboratorio durante dos semanas,
trasplantndose a continuacin al paciente. Al mes se
comprob que la situacin clnica del mismo haba
mejorado objetivamente, seguramente por reposicin a
partir de los mioblastos trasplantados de las clulas cardiacas daadas (Lancet 2001;357:279280). Experimentos similares se han realizado por otros autores (J
Cell Biol 2000;150:10851100; Nature 1999;401:390
394; Circulation 2000;102(III):210213; Ann Thorac
Surg 2001;71:17241733). Y ms recientemente se ha
dado otro importante paso para tratar a los pacientes con
infarto, al comprobarse que el tejido cardiaco contiene
clulas madre que, adecuadamente estimuladas, pueden
crecer y reparar el miocardio lesionado (N Engl J Med
2001;344:17501757).
Esta posibilidad de que las clulas madre puedan
trasladarse a los sitios en donde existen tejidos lesionados hace que hayan podido utilizarse tambin para
transportar frmacos hasta diversos tejidos patolgicos
o lesionados. La Dra. Karen Aboody, del Hospital
Infantil de Boston (Proc Natl Acad Sciencies USA
2000;97:12846), transfect clulas madre con un gen
capaz de reducir diversos tipos de tumores. Al inyectar
estas clulas madre portadoras del gen en distintos lugares del cerebro de ratas demostr que las clulas madre
inyectadas emigran hacia el tumor, lo rodean y eliminan

un gran nmero de sus clulas patolgicas, disminuyendo as su tamao.
Tambin se puede obtener una regeneracin tisular
por clulas madre adultas de otro tejido o de cordn
umbilical. El Dr. Paul Sanberg demostr en el ao 2000,
en la Reunin Anual de la Asociacin Americana para
el Avance de las Ciencias, que es posible regenerar
tejido nervioso deteriorado por un ictus cuando clulas
de cordn umbilical son inyectadas a los animales lesionados por va circulatoria. Tambin se public (Nature
Med 2000;6:1282) que las clulas madre de mdula
sea se pueden trasplantar a fetos de oveja y all diferenciarse en una gran variedad de tejidos.
En la LXXIII Reunin Anual de la Asociacin Americana del Corazn, celebrada en Nueva Orlens en
noviembre de 2001, un equipo de ciruga cardiaca de la
Universidad McGill de Montreal, dirigido por Ray
Chan, comunic que si clulas madre de mdula sea de
rata se inyectan directamente en el corazn de estos animales, se pueden convertir en clulas de msculo cardiaco; esto lo comprobaron en 20 de los 22 animales utilizados. En diciembre de 2000 se publicaron dos
artculos que demuestran que clulas madre de mdula
sea implantadas en animales de experimentacin se
pueden transformar en neuronas. En el primero de ellos
(Science 2000;290:1775), el equipo de Helen Blau
inyect clulas de mdula sea marcadas en ratones
adultos y varios meses despus algunas de esas clulas
marcadas generaron protenas neuronales desarrolladas
en el propio tejido nervioso central del animal trasplantado. La generacin de estas clulas se constat al cabo
de 1 a 6 meses de realizado el trasplante de mdula.
Tambin, Eva Mezey y su equipo (Science 2000;290:
1779) demostraron que cuando se inyectan clulas de
mdula sea en las debidas condiciones experimentales, pueden emigrar al cerebro y diferenciarse en clulas
que, como en el trabajo anterior, tambin son capaces de
generar protenas especficamente neuronales. Este trabajo, como el anterior, abri la posibilidad de que clulas de mdula sea, fciles de obtener, puedan constituir
una fuente alternativa de neuronas en pacientes con
enfermedades neurodegenerativas o con lesiones del
sistema nervioso central. Tambin en diciembre de
2000, en la 42 Reunin de la Sociedad Americana de
Hematologa, celebrada en San Francisco, un equipo de
biologa molecular del Instituto Nacional de la Salud de
EUA inform que haban conseguido regenerar clulas
cardiacas en el miocardio lesionado de ratones trasplantndoles clulas madre de mdula sea. Igualmente,
Michel Rathbone, de la Universidad Canadiense McMaster, comunic el 15 de agosto de 2001 (Edmonton Sun)
que haban conseguido regenerar, en 100% de los casos,
345
clulas nerviosas de mdula espinal trasplantando clulas madre intestinales en el tejido nervioso daado de
animales de experimentacin. Con estas investigaciones se demostr que al ser inyectadas, clulas madre de
tejidos adultos pueden transformarse in situ en distintos
rganos, como corazn, msculos, hgado, pulmn,
intestino, pncreas, piel, etc. (Science 2000;288:1660).
Otras evidencias de regeneracin con terapia celular
se demostraron con clulas madre endoteliales que pueden utilizarse para angiognesis (Science 1997;275:
964967); con clulas madre de mdula sea de rata que
pueden emigrar hasta zonas del cerebro daadas y all
transformarse en astrocitos (Proc Natl Acad Sci 1999;
96:1071110716); con clulas madre adultas de rata de
tejido nervioso que pueden servir para reparar tejido
nervioso en la enfermedad de Parkinson (Proc Natl
Acad Sci 1999;96:70297934); con clulas madre adultas de tejido nervioso que pueden emigrar hasta la retina
y all transformarse en clulas retinianas (Mol Cell Neurosciences 1999;16:197205); con clulas adultas de
cerebro que pueden servir para reparar tejido nervioso
daado (Nature 2000;405:951955; Nature 2000;405:
892893); con clulas madre del conducto pancretico
humano que forman islotes pancreticos capaces de
producir insulina (Proc Nat Acad Sci 2000;97:7999
8004); tratamiento de diabetes utilizando clulas madre
pancreticas (Nature Med 2000;6: 278282); con clulas madre sanguneas de cordn umbilical de ratn que
mejoran a ratones con enfermedad de Huntington (Am
J Clin Pathol 2000;114:4, abstr 89); con clulas madre
de mdula sea de ratn que, inyectadas por va intravenosa, se dirigen haca zonas daadas del cerebro y ah
pueden generar neuronas (Science 2000;290:1775
1779); con clulas madre sanguneas de cordn umbilical de ratn que mejoran a ratones con esclerosis lateral
amiotrfica (J Med 2000;31:2131); con clulas madre
sanguneas de cordn umbilical de ratn que mejoran a
ratones con enfermedad de Alzheimer (Modern Pathol
2001;14:207A); con clulas madre nerviosas que incrementan el nmero de clulas neuronales formadoras de
dopamina en la enfermedad de Parkinson (Congreso de
la Sociedad Japonesa de Neurologa en Okayama,
2001).
Tambin se demostr la capacidad de las clulas
madre nerviosas de emigrar hacia la zona lesionada
(Neuron 2001;28:385397); la implantacin de clulas
madre de mdula sea en tejido cardiaco isqumico
favorece la angiogensis y la recuperacin del tejido
cardiaco lesionado (Circulation 2001;104:1046; Cell
2001;105:369377; J Clin Invest 2001;107:13951402;
Nature 2001;410:701705; Nature Med 2001;7:430
436); las clulas madre de mdula sea mejoran la fun-
346
cin cerebral cuando se administran a ratas con isquemia cerebral (Stroke 2001;32:10051011; Cell Transplant 2001;10:3140). Al estimular la produccin de
(Captulo 10)
clulas madre de mdula se comprob que se puede

reparar el tejido cardiaco lesionado en ratones (Proc
Natl Acad Sci USA 2001;98(19):1073310738).
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ndice alfabtico
A
aborto, 341
cido
acetilsaliclico, 119
retinoico, 197
actina, 277
actividad inhibitoria de diferenciacin, 76
activina A, 323
acupuntura, 3
adhesina, 159
adiccin, 199
a las drogas, 200
adrenoleucodistrofia, 322
albmina, 2
alfadiona, 119
aloinjerto, 9, 22
aloinmunidad, 302
alopecia areata, 84, 138
alorrespuesta, 302
alotrasplante de islotes, 27
Alzheimer, 119, 132, 139, 141,
149, 154, 180, 207, 321, 336,
340, 342
experimental, 344
amiodarona, 24, 114
amniocentesis, 331
anafilaxia, 4, 119
andamio, 22
anemia, 19, 340
aplsica severa, 272
de Fanconi, 272, 288, 296,
309, 322, 340
drepanoctica, 293
hemoltica, 301, 304
normoctica, 19
normocrmica, 19
anergia, 285
angiognesis, 189, 247, 251, 260,
264
animal
con enfermedad de Parkinson,
221
knockout, 180
anticuerpo, 280
antienvejecimiento, 1, 4, 31, 144
antiepilptico, 229
antgeno, 280
aplasia, 57
medular, 287, 288
apoptosis, 61, 66, 68, 72, 75,
123, 181, 183, 203
celular, 202
e inmunidad, 284
apoptosoma, 68
aquinesia, 221
de Parkinson, 221
arritmia, 54, 177, 263
supraventricular, 264
ventricular, 149
arteria
elstica, 247
muscular, 248
arteriola, 248
artritis, 54, 139
reumatoide, 7, 121, 138, 154,
224, 271
349
artrosis, 138, 139, 141, 145

asma, 121, 128, 301
bronquial, 7, 137
astrocito, 192, 220
astrogla, 192
ataque convulsivo, 230
aterosclerosis, 7, 176, 178
obliterante, 266
autismo, 201, 202, 235
clsico, 235
autoinjerto, 22
autointolerancia, 119
autorregeneracin, 327
autorrenovacin, 26, 48
de clulas madre embrionarias, 72
autorreparacin, 154
autotrasplante, 28, 2886, 327
celular, 336
de mdula sea, 291
B
banco
de clulas, 18
madre, 122, 309
de cordn umbilical, 340
de rganos para trasplante, 25
de sangre de cordn umbilical,
309
de tejido, 18
privado de clulas madre, 273
beb
de probeta, 13
350
de tubo de ensayo, 13
betatalasemia, 340
mayor, 293
bioautorregulacin, 234
biogenrico, 127
bioingeniera de tejidos, 149,
175, 177, 181
biologa
celular, 103
y molecular de las clulas
madre, 61
del desarrollo, 37, 86
molecular, 135
biomaterial biomimtico, 174
biomedicina, 180
biorreactor, 180
biotecnologa, 132, 157, 180
de DNA recombinante, 2, 6
de tejidos, 176, 181
blastocisto, 84, 87, 88, 90, 254,
256
clonado, 90
partenogentico, 91
bronquiolitis obliterante, 303
burroterapia, 238
C
callostoma, 233
canalizacin, 10
de Waddington, 10
cncer, 16, 19, 31, 54, 92, 95,
111, 118, 134, 138, 139, 143,
145, 166, 171, 180, 245, 285,
304, 313, 321, 327, 334, 336,
340, 342
cerebral, 327
cervicouterino, 19
de colon, 78
de glndula mamaria, 313
de mama, 286, 306, 327
de ovario, 313
de pncreas, 314
capilar, 248
continuo, 248
fenestrado, 248
cardiomiocito, 251, 259, 261,
265, 266
cardiomiopata isqumica crnica, 262
cardiomioplastia celular, 24
cardiopata, 54, 262

isqumica, 246
cebamiento, 67
cefalea, 295
cefalosporinas, 122
ceguera, 118
clula(s)
de animales clonados, 87
de carcinoma embrionario, 44,
49
de Schwann, 192, 193, 196,
197, 203, 216, 223
diferenciada, 256
embrionaria, 261
germinal, 48
pluripotencial, 329
endotelial, 251
estaminal de adultos, 165
germinal
embrionaria, 44
primordial, 70
glial, 197, 204
hematopoytica, 265
inmortal, 48
madre, 2, 3, 12, 26, 32, 54, 55,
82, 105, 144, 157, 182, 200,
205, 216, 245, 254, 256,
278, 319
a partir de clulas somticas
de la piel, 336
adulta, 22, 54, 55, 89, 117,
156, 255, 328, 337
autloga, 265
de la mdula sea, 56
alognica, 121, 257, 290
multipotencial, 115, 273,
307
amnitica humana, 331
autloga, 181
bipotencial, 279
cancergena, 327
circulante, 257
comprometida, 279
de abortos espontneos, 340
de adulto, 169, 170
de carcinoma embrionario,
70
de cordn umbilical, 309,
340
de embriones humanos, 129
preimplantados, 137
de fetos abortados, 339
(ndice alfabtico)
de la cresta neural, 196
de la mdula sea, 18, 19,
89, 105, 177
y de la piel, 57
de la piel, 157
de linfocitos
B, 279, 281
T, 279
de lquido amnitico, 331
de mdula sea, 176, 182,
246, 338, 340, 345
de origen
adulto, 5, 108, 112
embrionario, 5, 10, 18,
106, 108
humano embrionario, 17
tumoral, 117
de placenta, 340
de sangre perifrica, 27
de tejidos adultos, 340
del adulto, 69, 70
del cordn umbilical, 89
del lquido amnitico
humano, 85
del propio individuo, 55
derivada de ovocitos clonados, 325
embrionaria, 2, 12, 16, 26,
29, 44, 48, 49, 51, 54,
55, 57, 69, 70, 77, 81,
117, 128, 130, 152, 154,
155, 156, 168, 169, 170,
172, 179, 181, 188, 201,
255, 256, 319, 328, 329,
331, 332, 334, 340, 343
de origen humano, 27
de ratn, 40
germinal, 70
humana, 29, 69, 71, 79,
105, 123, 136, 175,
217, 321, 323
pluripotencial, 326
pluripotencial, 88
en adultos, 154
en Europa, 328
endgena, 264
endotelial, 345
estromal mesenquimatosa,
56
extraneural del adulto, 216
hematopoytica, 56, 151,
182, 216, 254, 255, 259,
ndice alfabtico
279, 285, 294, 296, 327,
336
no comprometida, 298
hemopoytica
comn, 275
pluripotencial, 275, 278
humana, 53, 155, 339
linfocitaria, 282
comn, 281
linfoide, 275, 279
medular, 288
mesenquimal, 337
mesenquimtica, 176, 182,
302
mieloide, 275, 279, 309
monopotencial, 22
multipotencial, 18, 104,
139, 171, 258, 279, 286,
302
adulta, 255
alognica, 272
multipotente, 38, 51, 151,
182, 217, 256, 257, 275
neural, 157, 189, 201, 223
neuronal de la mdula espinal, 57
oligopotente, 182
organoespecfica, 319
multipotencial, 319
pluripotencial, 319
pancretica, 116
pluripotencial, 16, 70, 73,
139, 143, 196, 258, 279,
286, 302
adulta, 255
alognica, 272
humana, 73, 75, 81
inducida, 331, 332
pluripotente, 26, 27, 48, 49,
57, 69, 151, 153, 182,
256, 257, 275
procedente de cordn umbilical de fetos abortados,
339
sangunea, 18, 105
de adulto, 339
satlite, 23
semiespecializada, 18
somtica, 84, 255, 265
totipotente, 151, 182, 256
troncal embrionaria, 179
unipotencial, 279
unipotente, 182, 275, 276,

334
viva, 329
y cncer, 327
y terapia celular, 216
madre alognica pluripotencial, 307
mesenceflica fetal, 214
mesenquimatosa, 250
multipotente, 48
de progenitores adultos, 170
muscular
cardiaca ordinaria, 251
lisa, 250
neuronal multipotente, 215
plana, 251
pluripotente, 44
progenitora, 149
adulta, 165
multipotente, 56
satlite, 192
totipotente, 47, 323
troncal, 149, 254
de tejidos especficos, 150
multipotencial, 150
pluripotencial, 150
totipotencial, 150
tronco o precursora, 135
unipotente, 151
celuloterapia, 1
cetoacidosis, 19
choque anafilctico, 119
ciclina, 65
ciclo
celular, 61
de terapia celular, 146
ciclofosfamida, 293, 294, 303,
311
ciclosporina, 293, 311
A, 290
circulacin
pulmonar, 247
sistmica, 247
cirrosis, 8
biliar primaria, 303
del hgado, 181
heptica, 7
ciruga de epilepsia, 232
citocentrifugacin, 288
citocinesis, 62
citocromo, 4
citomegalovirus, 295
351
citometra de flujo, 285

de alta velocidad, 18
clonacin, 55, 128, 129, 131,
133, 180, 323, 332
animal, 54
con fines reproductivos, 152
de clulas madre con fines
teraputicos, 134
de mamferos, 85, 179
exitosa de un ser humano, 332
humana, 49, 129, 132, 134,
332
con fines reproductivos,
130, 179
no reproductiva, 131, 133
por transferencia nuclear, 168
posicional, 178
reproductiva, 50, 87, 99, 129,
132
teraputica, 48, 49, 50, 88, 90,
91, 99, 128, 129, 130, 132,
134, 135, 136, 152, 165,
167, 168, 172, 179, 218,
326, 328, 329
humana, 88
clonogenicidad, 26
clorhidrato de adrenalina, 120
colitis, 301
combinacin de medicamentos,
231
compatibilidad donantepaciente,
273
complejo Parkinsondemencia
ELA, 211
concepto de trasplante, 9
congelacin de clulas madre del
cordn umbilical, 118
contaminacin, 82, 83
bacteriana, 82
cruzada con otra lnea celular,
96
fngica, 82
microbiana, 83, 96
por micoplasma, 82
por plomo, 202
contraindicacin para la terapia
celular, 8
contrato de clonacin, 92
convulsin, 232
epilptica, 236
cordn umbilical, 262
corea, 225
352
creacin de rganos, 168

cresta neural, 195, 197
criopreservacin, 14, 28, 33, 84,
85, 292, 297
de clulas de cordn umbilical, 144
de embriones humanos, 16
crisis
antiepilptica, 233
curativa, 32
epilptica, 227, 228, 229, 235
focal, 232, 233
generalizada, 228, 229
parcial, 228, 229
compleja, 229
simple, 229
cuerpo embrionario, 48
cuestionario bsico de calidad de
vida, 142
cultivo
celular, 82, 83
de clulas madre, 70, 171
embrionaria, 172
D
decidua
basal, 45
capsular, 45
parietal, 45
deficiencia vitamnica, 208
degeneracin, 150
de la retina, 180
delecin clonal, 285
delfinoterapia, 238
demencia, 7, 206, 212, 225, 324
de Alzheimer, 165, 166, 206,
207, 324
dependencia, 200
depresin, 7, 200, 206, 208
dermatitis atpica, 121, 137
derrame cerebral, 157
desarrollo
de biotecnologa, 22
del sistema nervioso, 194
desdiferenciacin, 23, 70
celular, 258
desorden
desintegrativo de la niez, 236
extendido del desarrollo no
especfico, 236
dextrn, 120
diabetes, 54, 94, 100, 107, 111,
115, 128, 131, 154, 158, 165,
173, 180, 208, 301, 321, 324,
339, 340, 345
autoinmune recurrente, 27
juvenil, 91, 118, 336
mellitus, 3, 7, 29, 84, 115, 119,
139, 143, 145, 149, 198
tipo 1, 20, 27, 222
tipo 2, 27, 132
diagnstico de preimplantacin,
16
diarrea, 303
dieta
biomdica antienvejecimiento,
32
cetognica, 234
rica en grasas y baja en carbohidratos, 234
diferenciacin, 73, 85, 95, 195,
200, 202, 255
sexual, 52
difteria, 308
dilema
biotico, 14
tico, 332
dimenidrato, 122
dimorfismo sexual, 42
dixido de carbono, 247, 248
discinesia, 213, 214
displasia cortical focal, 202
distrofia
miotnica, 322
muscular, 173
de Duchenne y Becker, 322
distrofismo, 183
DNA
mitocondrial, 47
recombinante, 18
doble trasplante medular, 338
donacin
de oocito, 16
de rganos
para programa de trasplante, 18
por parte de donante vivo,
329
dopamina, 157, 198, 200, 210,
213, 217, 218, 220
doxilamina, 122
drepanocitosis, 288
(ndice alfabtico)
droga, 198, 200, 211
de abuso, 198
duplicacin del DNA, 63
E
edema, 176
agudo del pulmn, 8
efectividad de la terapia celular,
17
efecto
injerto
contra leucemia, 292, 297,
298, 299
contra mdula del trasplante, 303
contra tumor, 291, 302,
304, 306
secundario de los medicamentos antiepilpticos, 231
embriognesis, 46, 49, 73
embriologa molecular, 86
embrin quimrico, 51
empleo de clulas madre con
fines teraputicos, 55
encefalomielitis
diseminada aguda, 224
hemorrgica necrosante aguda,
225
encefalopata
aguda, 202
crnica, 202
enfermedad
bipolar, 237
cardiaca, 321
isqumica, 177, 245, 265
cardiovascular, 245
celiaca, 112
coronaria, 198
isqumica, 258
crnica avanzada, 262
de Alzheimer, 29, 54, 111,
146, 188, 201, 205, 206,
208, 210
de Balo, 224
de Basedow, 8
de clulas falciformes, 180
de Crohn, 293
de Hodgkin, 271, 288
de Huntington, 115, 211, 225
de injerto contra hospedero,
302
ndice alfabtico
de Lou Gehrig, 115
de MarchiafabaBignami, 224
de Parkinson, 7, 29, 54, 94,
107, 111, 115, 132, 145,
146, 169, 173, 188, 201,
206, 210, 211, 212, 221,
240, 345
de inicio temprano, 212
juvenil, 212
tarda, 212
degenerativa, 207
del injerto, 112
desmielinizante, 224
infecciosa, 207
inflamatoria, 207
injerto
contra hospedero, 290, 292,
299, 301, 303
crnica, 300
neurodegenerativa, 152, 154,
210, 216
pulmonar crnica, 141
enfermo terminal, 342
envejecimiento, 33, 150, 181,
208
acelerado, 211
biolgico, 137
cronolgico, 137, 141
de las clulas madre, 331
epilepsia, 180, 227, 228
focal, 230
multifocal unilateral con hemipleja infantil, 232
eptope, 280
equinoterapia, 238
eritropoyetina, 2, 127
esclerodermia, 7
esclerosis
en placas, 188
lateral amiotrfica, 93, 115,
180, 188, 222
mltiple, 8, 20, 119, 121, 139,
149, 189, 223, 224, 293
tuberosa, 236
espermatognesis, 38, 39, 40, 51
espondilitis anquilosante, 112
esquema teraputico de Seattle,
310
esquizofrenia, 7, 92, 115, 198,
236, 239
estado de indiferenciacin, 28
estigma, 43
estirpe celular, 61, 209, 216

estreptocinasa, 120
estrs, 31, 200, 285
emotivo, 7
oxidativo, 143, 208, 210, 220,
246
estrgeno, 207
estructura del DNA, 4
etiopatogenia del cncer, 4
eutanasia, 342
eutrofismo, 183
expansin de clulas madre
hematopoyticas, 73
experimentacin con clulas
madre, 131
expresin transgnica, 96
extraccin de las clulas madre,
333
F
factor
de crecimiento, 2, 82, 95, 181,
182, 258
del hepatocito, 22, 23
epidrmico, 22, 24, 200
fibroblstico, 8, 197
nervioso, 213
neuronal, 89
neurotrfico, 197
para fibroblastos, 55
transformadora, 24
vascular, 266
de transcripcin, 71, 252, 253
de transferencia, 2, 20
estimulador de colonias, 2
inhibidor de leucemia, 71
inhibitorio de la leucemia mieloide, 76
neurotrfico, 218
faringitis, 146
frmaco
anticonvulsivo, 237
antiepilptico, 230
fenmeno de AriasStella, 161
fertilizacin de embriones humanos in vitro, 13, 14
feto quimrico, 48
fibra muscular cardiaca modificada, 251
fibroblasto, 263
353
fibromialgia reumtica, 121, 138

fibrosis, 295
qustica, 167
fiebre de absorcin, 32
fludarabina, 303
formacin de quimeras, 11
frmula nutracutica, 21
G
genoma, 125, 126, 132
de las clulas madre endgenas, 327
eucariota, 276
humano, 126, 143, 171
nuclear, 135
poliploide, 276
genmica, 18
genoterapia, 326
gla, 204
gliognesis, 200
glucagn, 116, 120
glucocorticoides, 284
glucgeno, 252
glucosaminoglicano, 160
H
hematopoyesis, 254
heparina, 122
hepatitis, 19, 93, 147, 301, 309
B, 295, 308
C, 295
herencia
horizontal, 5, 12, 18, 32
vertical, 5
hernia discal, 139, 149
hibridacin, 98
in situ, 98
hidrocefalia obstructiva, 214
hidrocortisona, 120
hipercolesterolemia familiar, 167
hiperglucemia, 19
hipernefroma, 271
hiperpermeabilidad, 176
hipersensibilidad, 301
hipertensin, 143
crnica, 180
hipertrofia cardiaca, 177
hipogammaglobulinemia congnita, 91
354
hipotensin, 176, 295

histocompatibilidad, 112
historia de la terapia celular, 8
homeopata, 3
huso mittico, 63
I
implante, 296
impronta genmica, 88
impulso nervioso, 187
individualidad, 112
infarto, 150, 332
agudo, 262
del miocardio, 24, 120, 245,
259
cardiaco, 338
cerebral, 188
mltiple, 206
del miocardio, 94, 114, 145,
246, 295, 324, 336
masivo, 25, 127
miocrdico, 176
infeccin por citomegalovirus,
304
influenza, 19, 31, 308, 309
infusin de linfocitos del
donante, 305
ingeniera
celular, 133
de tejidos, 22, 108, 149, 150,
168, 174, 176, 177, 180
gentica, 133, 166, 320
injerto
autlogo, 157
de clulas
de la cresta neural, 195
madre alognicas, 121
quirrgico, 157
inmortalidad, 103
inmunidad
adquirida, 280
celular, 280
congnita, 280
humoral, 280
inmunociruga, 155, 322
inmunofluorescencia, 98
inmungeno, 280
inmunoglobulina, 2
inmunohistoqumica
con fosfatasa alcalina, 97
con peroxidasa, 97
inmunologa, 280
inmunosupresin, 310
inmunotolerancia, 312
inseminacin artificial, 167
insuficiencia
cardiaca, 107, 145, 259
congestiva, 177
de clulas, 140
renal, 321
aguda, 8
crnica, 19, 138
tmica postrasplante, 300
insulina, 2, 19, 29, 115, 116, 127,
128, 131, 141, 154, 158, 345
humana recombinante, 19
interfern, 2
intrones, 4
investigacin
con clulas madre, 320
en EUA, 342
de terapia celular, 114
en clulas madre, 325, 335,
342
adultas, 334
en EUA, 335
inyeccin intraestriatal de vectores virales, 220
istopo radioactivo, 18
isquemia, 246, 260
aguda, 122
cardiaca, 344
K
knockout, 12, 18
L
leche de brujas, 45
legislacin, 129
lesin medular, 188
leucemia, 26, 57, 94, 112, 113,
128, 134, 171, 273, 287, 305,
307, 312, 314, 327, 334, 336,
340, 342
adulta, 336
aguda, 141, 272, 288
crnica, 272
de origen mieloide, 312
linftica crnica, 288
(ndice alfabtico)
linfoblstica aguda, 305
linfoctica crnica, 306
linfoide aguda, 287
mieloblstica aguda, 305
mieloide
aguda, 271, 306
crnica, 271, 288, 305, 306
leucocito, 251
levodopa, 213
lidocana, 119
linaje celular, 85, 92, 196
lnea celular, 96, 335
del banco, 29
linfa, 249, 250
linfocito postmico, 257
linfoma, 26, 113, 334, 340
de alto riesgo, 272
no Hodgkin, 271, 288, 306
liofilizacin, 33
liofilizado de xenoinjerto, 17
liscencefalia, 201, 202
lobectoma, 233
lupus eritematoso, 7
sistmico, 84, 112, 121, 138,
293
M
maduracin, 202
mal epilptico, 231, 232
marcador, 106
de pluripotencialidad, 71
y autorrenovacin, 74
de superficie celular, 74
molecular para clulas madre,
107
matriz
extracelular, 95
sustituta, 16
mecanismo
de reparacin natural, 23
molecular de la pluripotencialidad, 70
medicamento
antiepilptico, 231, 232
antipsictico, 237
medicina
alpata, 3
alternativa, 3
antienvejecimiento, 6, 15, 30,
31, 137
del siglo XXI, 335
ndice alfabtico
del tercer milenio, 335
genmica, 130, 131
natural, 3
naturista, 3
regenerativa, 1, 2, 4, 6, 18, 30,
31, 37, 49, 51, 144, 150,
168, 178, 245, 256, 332,
335, 337, 342
de nivel I, 19, 32
para el antienvejecimiento, 31
de nivel II, 21, 24, 25, 31
de nivel III, 25, 29
y antienvejecimiento, 149
medio de cultivo, 82
meiosis, 64
en el hombre, 65
en la mujer, 65
metstasis medular, 295
metotrexato, 290
miastenia gravis, 112
microaborto, 50
microgla, 192
microorganismo, 81
microquimerismo, 273
mielinizacin, 194
mielinlisis central pontina, 224
mieloma mltiple, 19, 271, 272,
288, 334
migracin, 202, 208
neuronal, 197, 201, 202
incompleta, 202
minitrasplante, 310
mioblasto
alognico, 261
autlogo, 261
esqueltico, 265
miocardiopata idioptica, 262
miognesis, 247, 260, 263
miosina, 277
mitomicina C, 322
mitosis, 62, 63, 64, 65, 196
modelo experimental de bioingeniera de tejidos, 177
mofetilmicofenolato, 311
mongolismo, 7, 31
morfognesis embrionaria y fetal,
55
mosaicismo, 105, 120
gonadal, 121
inverso, 121
quimrico, 121
somtico, 120
mucopolisacaridosis, 288
muerte
celular, 66, 68, 240
por apoptosis, 61
programada, 67, 284
selectiva, 195
neuronal, 194
por necrosis, 68
sbita, 260
multipotencialidad, 105, 216
msculo
cardiaco, 250, 255, 266
esqueltico, 250
estriado, 255
mutacin, 120
N
necrosis, 66
hipofisaria, 8
neomicina, 12, 116
neoplasia, 119
neumococo, 31
neumona, 141, 301
neuroblastoma, 314
neuroesferas, 115
neurofibromatosis tipo I, 322
neurognesis, 89, 189, 193, 194,
200, 203, 223
en el cerebro del mamfero
adulto, 240
posnatal, 188
neurogla, 192, 193
neurona, 189
bipolar, 190
multipolar, 190
seudopolar, 190
unipolar, 190
neuropata perifrica, 303
neurotransmisor, 190
nio
autista, 235
burbuja, 166
con crisis graves, 233
con epilepsia idioptica, 228
nitrgeno lquido, 82, 84
nodal, 77
ndulo linftico, 250
noxas, 31
nutracutico, 2, 5, 19, 20, 31
355
genrico, 21
nutricin
hemotrfica, 252
histotrfica, 251
O
obesidad, 245
objetivo teraputico de la terapia
celular, 183
obtencin de clulas madre de
adulto, 183
oftalmopleja, 211
oligodendrocito, 192
oligodendrogla, 192
oligofrenia, 31
oncogn, 313
organoespecificidad, 32
organognesis testicular, 40
organotropismo, 32
origen de las clulas madre, 109
osteoartritis, 138, 139, 146, 154
osteoartrosis, 7
osteoblasto, 257
osteognesis imperfecta, 167
osteopetrosis, 288
osteopontina, 314
osteoporosis, 7, 111, 321
oveja Dolly, 85, 90, 93, 135, 169
P
paciente
con anemia aplsica, 287
con angina refractaria, 246
con antecedentes de isquemia
del miocardio, 246
con asma, 178
con cncer, 19, 307
con cardiomiopata, 25, 127
con cirrosis heptica, 326
con diabetes, 324
mellitus, 121
insulinodependiente, 19
tipo
1, 121
2, 141
con disautonomas, 212
con enfermedad
cardiaca avanzada, 259
cardiovascular, 246
356
hematolgica grave, 287

con enfermedades neurodegenerativas, 345
con esquizofrenia, 241
con hemopata maligna, 293
de riesgo elevado, 297
y tumores slidos, 311
con infarto, 344
del miocardio, 54
con infeccin
por SIDA, 147
por VIH, 147
con isquemia vascular perifrica, 266
con lesiones del sistema nervioso central, 345
con leucemia mieloide endgena, 327
con neoplasia hematolgica,
321
con neuropata, 212
con osteognesis imperfecta,
112, 257, 302
con Parkinson, 121
con recada de la leucemia,
305, 306
con sndrome de inmunodeficiencia adquirida, 31
con trasplante alognico clsico, 301
con trastornos de conducta,
212
con vitligo, 121
diabtico, 27, 115, 176, 337
embarazada, 183
hemipljico, 336
inmunosuprimido, 109
que padece insuficiencia cardiaca, 54
refractario a la quimioterapia,
311
sometido a trasplante singnico, 305, 306
trasplantado, 288
tratado con quimioterapia, 321
paludismo, 146
paracetamol, 122, 146
paradigma
de la terapia celular, 9
del cultivo celular, 83
parlisis
cerebral infantil, 7
de las extremidades, 94
de mdula espinal, 165
Parkinson, 114, 118, 119, 139,
141, 149, 154, 157, 173, 180,
206, 321, 324, 325, 336, 339,
340, 342
parkinsonismo juvenil, 211
parotiditis, 308, 309
partenognesis, 29, 50, 88, 109
penicilina, 119, 122, 150
perroterapia, 238
piel artificial, 24
plasticidad, 26, 55, 83, 182, 259,
261
celular, 57, 123
de diferenciacin, 26
adultas, 56
ectodrmica, 89
gentica, 133
mesodrmica, 89
neuronal, 198
para la regeneracin miocrdica, 265
sinptica, 208
pluripotencia, 48, 90, 171, 321
pluripotencialidad, 105, 135
polimiositis, 303
polimorfismo, 274
polineuropata, 211
polio, 309
polipptido pancretico, 116
potencialidad, 150
prin, 4
proceso de anidamiento, 296
progenitor
hematopoytico, 286
linfoide, 56
comn, 285
temprano, 285
mieloide, 56
pluripotente temprano, 285
progesterona, 15
prolactina, 46
proliferacin, 202, 208
propagacin de clulas madre
embrionarias de ratn, 71
protena
adhesiva, 159
exn, 19
intrn, 19
(ndice alfabtico)
proteoglicano, 160
proteoma humano, 18
protemica, 6, 19
protooncogn, 313
Proyecto
del Genoma Humano, 6, 20,
125, 126, 127
de Clulas Madre, 171
prueba antidopaje, 19
psoriasis, 7
punto de restriccin
G2M, 65
M, 65
R, 65
Q
queratoconjuntivitis sicca, 303
quimera, 40, 49, 293, 311
completa, 310, 311, 313
mixta, 310
parcial, 310
quimerismo, 57, 120, 272, 273,
274, 311, 312
completo, 273
dividido, 273
linfohematopoytico, 273
mixto, 273, 274, 293, 311, 313
total, 273
R
rabia, 309
radiacin gamma, 284
rata con isquemia cerebral, 346
ratn
con enfermedad
de Alzheimer, 345
de Huntington, 345
homocigoto con gen modificado, 12
knockin, 178
knockout, 13
mutante, 73
quimrico, 51, 276
sometido a irradiacin letal,
287
transgnico, 51
reaccin
de hipersensibilidad retardada,
300
ndice alfabtico
injerto contra hospedero, 304,
310
recaptura de dopamina, 222
receptor de muerte, 67, 68
rechazo
de trasplante con clulas
madre, 114
del organismo contra el
donante, 332
recoleccin, 296
recombinacin homloga, 12
rediferenciacin, 23
celular, 258
reemplazo hormonal, 32
regeneracin, 1, 61, 258, 260
cardiaca, 261
celular, 19
con terapia celular, 345
miocrdica, 264, 265
nerviosa, 201
tisular, 182, 183
por clulas madre adultas,
345
regulacin, 285
de la autorrenovacin, 76
de la pluripotencialidad, 73
remielinizacin, 223
remodelacin tisular, 55
reparacin de estructuras corporales daadas, 338
replicacin de DNA, 42
reproduccin
celular, 183
sexual, 52
reprogramacin
de clulas adultas, 329
nuclear, 330
reservorio de criopreservacin,
107
retinitis pigmentaria, 119
retrovirus, 117
revacunacin postrasplante, 309
rinitis alrgica, 137
rubola, 308, 309
senectud replicativa, 181

senescencia, 75
seno lactfero, 46
septum
interventricular
membranoso, 253
muscular, 253
primum, 253
secundum, 253
serotonina, 277
SICETEM, 143
SIDA, 8, 31, 93, 94, 180
silenciacin de genes, 10
silencio teraputico, 32
sinapsis, 190, 198
elctrica, 190
qumica, 190
sincicial respiratorio, 309
sndrome
de abstinencia, 199
de cromosoma X frgil, 236
de Devic, 224
de Down, 7, 31, 121, 141
de Evans, 293
de feminizacin testicular, 53
de Horner, 216
de inmunodeficiencia adquirida, 20
de la triple X, 121
de Marfan, 322
de Sjgren, 112
de Turner, 31, 43
epilptico, 230
esquizofrenoide, 240
general de adaptacin, 7, 31
metablico, 245
mielodisplsico, 272
X frgil, 322
sistema
avidinabiotina, 97
nervioso central, 201
porta, 247
somatostatina, 116
subcultivacin de clula, 28
supergenrico, 128
S
sarampin, 308, 309
seleccin
de un donante no familiar, 291
negativa, 284
T
talasemia, 288, 322
targeting, 179
teca
357
externa, 41, 43
folicular, 41
interna, 41
tcnica
de criopreservacin, 15
de fertilizacin artificial en
animales, 10
de inmunofluorescencia, 97
de regeneracin de plantas in
vivo, 37
de reproduccin asistida, 325
de seleccin celular, 285
de separacin celular magntica, 52
de Thomas, 294
tejido conectivo, 250
telomerasa, 75
teora
de la generacin con clulas
madre, 103, 139
del envejecimiento biolgico,
140
teraputica
contra el cncer, 15
farmacolgica quirrgica, 1
terapia
antialrgica, 238
anticncer, 327
celular, 1, 2, 4, 5, 7, 8, 17, 22,
31, 33, 53, 55, 94, 121, 122,
125, 144, 149, 150, 168,
183, 189, 209, 216, 223,
238, 260, 263, 264, 266,
271, 327, 330
alognica, 109
autloga, 54, 84, 85, 109
autoplstica, 55
con cardiomiocitos, 24
con clulas
madre, 31, 37, 41, 53,
54, 55, 100, 109, 111,
117, 119, 122, 137,
139, 145, 173, 227,
286, 305, 321, 326,
333, 335, 339, 343
adulta, 24
alognicas, 121, 302
de origen adulto, 25
de origen humano,
150
358
del mismo paciente,

25
embrionaria de origen
humano, 29, 118
humanas alognicas,
120
con liofilizado, 9
en corazn, 175
en el autismo, 235
en la enfermedad
de Huntington, 225
de Parkinson, 221
en la epilepsia, 227
en la esclerosis mltiple,
222
en la esquizofrenia, 238
hematolgica, 287
heteroplstica, 55
intravenosa, 184
para el antienvejecimiento,
10
regenerativa, 56, 89, 128
sustitutiva, 217
xenognica, 109
citotxica, 300
con clula
congelada (criopreservacin), 6
desecada (liofilizado), 6
fresca, 6
con especie de mamfero superior, 17
de reemplazo de tejidos daados, 92
de regeneracin celular, 94
gnica, 12, 56, 120, 121, 166,
168, 170, 218
del cncer, 167
ldica, 238
musical, 238
regenerativa, 331
del miocardio, 54
ttanos, 93, 308, 309
tiopental, 119
tiroiditis, 301
tolerancia, 119, 280, 285
inmunitaria, 119
totipotencia, 321
toxoplasmosis, 146
transcripcin, 126
transdiferenciacin, 4, 110, 139,
216, 258, 261, 263, 265
de embriones, 15
de inmunidad del donante al
receptor, 300
gnica, 219
nuclear, 29, 88, 99, 128
de la clula somtica, 154
en el tratamiento de la
enfermedad de Parkinson, 217
somtica, 175
alterada, 329
transgnesis, 180
transposones, 4
trasplante, 150, 289
alognico, 112, 119, 257, 273,
274, 286, 288, 289, 295,
296, 297, 301
clsico, 289, 291, 298, 300,
304
de clulas
hematopoyticas, 272,
286, 309
madre, 312
de mdula sea, 57
autlogo, 112, 286, 288, 289,
291, 297, 301, 309
de mioblastos, 344
cardiaco, 54
celular cromafn adrenal, 218
con acondicionamiento mieloablativo, 293
de clulas, 263
fetales mesenceflicas, 188,
221
generadoras de mielina, 223
hematopoyticas, 272, 299
madre, 26, 157
adultas de la mdula
sea, 171
alognico, 111, 326
hematopoyticas, 271,
286, 289
productoras de dopamina, 213
sanguneas, 342
de corazn, 259
de donador no emparentado,
113
de donante femenina, 306
de gemelos idnticos, 287
de islotes pancreticos, 115
(ndice alfabtico)
de mdula, 171, 345
sea, 4, 24, 26, 57, 112,
114, 121, 183, 287, 326,
334
alognico, 111
suprarrenal, 214
de mesencfalo, 214
fetal humano, 214
de mioblastos, 54
de progenitores hematopoyticos, 113
de sangre, 24
de tejidos humanos fetales,
157
haploidntico, 113, 307
hematopoytico
alognico, 292
autlogo, 292
no mieloablativo, 286
heptico, 58
intrangrico, 214
isognico, 291
mieloablativo, 311
no mieloablativo, 288, 292,
293, 305
nuclear, 29, 89, 179
singnico, 113, 291
teraputico, 173
xenognico, 119
trastorno
autoinmunitario, 93
de dficit de atencin, 236
de migracin neuronal, 239
tratamiento
de medicina antienvejecimiento, 10
de Parkinson, 326
traumatismo craneoenceflico,
212
trofismo, 4, 17
trofoblasto, 256
trombocitopenia, 301, 304
tromboxano, 277
tuberculosis, 92, 147
tumor cerebral, 211
U
tero
en renta, 16
sustituto, 16
ndice alfabtico
vacuna, 308
antienvejecimiento, 25
antihepatitis
A, 309
B, 309
antineumoccica, 309
antiparotiditis, 309
antirrbica, 309
antivaricela, 309
antivejez, 9
con virus
atenuados, 307
muertos, 307
gentica, 167
vacunacin
anual antiinfluenza, 309
del paciente trasplantado, 307
vlvula venosa, 249
varicela, 308, 309
zoster, 308
vasculognesis, 260, 261
vena
de calibre mediano, 249
de gran calibre, 249
de pequeo calibre, 248
vnula
de pequeo calibre, 248
muscular, 248
359
poscapilar, 248
VIH, 206, 295
virus
de la leucemia murina, 322
del papiloma humano, 19, 31
vitamina
B1, 120
C, 159
vitligo, 7, 119, 137, 145, 149
X
xenoinjerto, 9, 22
xenotrasplante, 87, 150, 157
360
(ndice alfabtico)

Terapia Celular Con Celulas Madre y Medicina Regenerativa

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TERAPIA CELULAR CON

Terapia celular con

Dr. Dolores Javier Snchez Gonzlez

Dr. Carlos Armando Sosa Luna

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Dr. Gerardo Martn Gonzlez Lpez

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Medicina regenerativa y biologa del desarrollo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Biologa celular y molecular de las clulas madre . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Manejo de las clulas madre en el laboratorio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

La terapia celular en la prctica mdica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Terapia celular y bioingeniera de tejidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Terapia celular y neurorregeneracin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Terapia celular en el sistema cardiovascular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Aspectos inmunolgicos de la terapia celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Captulo 10. Entorno actual de las clulas madre . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Por su colaboracin en la captura y revisin de textos:

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Historia de la terapia celular

HISTORIA DE LA TERAPIA CELULAR

como medicina regenerativa. Se puede decir que es un

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Figura 11. Clulas madre derivadas de endotelio en verde

Zelluoterapie (en alemn).

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

Clulas madre Clulas madre

Clulas madre Clulas madre de

Clulas madre de cordn

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

alcance de la teraputica actual3 en la medicina (figura

Habitualmente referida como alpata.

Secretario de Salud Jos ngel Crdova Villalobos. 9 de

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

3. La de diferenciarse en clulas especializadas que

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

cin en endotelio, neurona, miocito, fibroblasto, etc.

tambin puede explicar los experimentos in vitro, en

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Figura 15. La clula madre ingresa a la circulacin por

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

como vlvulas cardiacas porcinas, glndulas y rganos

viosos dependen de los depsitos asilados en los tejidos de

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

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Cuadro 12. Indicaciones de la terapia celular

1. Es indispensable establecer un diagnstico que

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

probado una mayor efectividad cientfica y clnica

tabolismo de protenas solubles contenidas en la

HISTORIA DE LA TERAPIA CELULAR

Desde los orgenes ms antiguos de la medicina surgi

E Editorial Alfil. Fotocopiar sin autorizacin es un delito.

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

de 1882 y muri el 1 de septiembre de 1971. Es considerado

Terapia celular con clulas madre y medicina regenerativa

introducindose en el conocimiento cientfico de la epigentica; Edwards RG admiraba a su brillante maestro

Historia de la terapia celular y de la medicina regenerativa

Las clulas madre

3 lneas celulares principales

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muchos aos despus del Premio Nobel en Fisiologa y