TcnicaHistolgica

Esunconjuntodepasosaseguirparalaobtencindepreparadoshistolgicosaptos
parasuestudiomedianteelmicroscopioptico.

1Obtencindelmaterial: seefectamediantebiopsia,necropsiaoautopsia.
Biopsia: consiste en tomar un trozo de tejido de un ser vivo. Este
procedimiento de uso frecuente en medicina requiere el mismo cuidado
deasepsia,antisepsia,etc.,queseutilizaentodoactoquirrgicomenoro
mayor.
Necropsia: es el procedimiento en el cual se extrae material de un
cadver
Autopsia: consiste en el estudio analtico y sistemtico completo.
macroscpico y microscpico de los rganos, aparatos y sistemas de un
cadver.Serealizaparaestablecercausasdemuerte.

2Fijacin: una vez obtenido el material que se desea estudiar por cualquiera de
los procedimientos descriptos se procede a su fijacin con lo que se evita la
destruccino lisiscelular.Esunprocesofsico qumicocomplejoporelcual se
mantiene a las estructuras orgnicas en el estado ms parecido al que posean en
vida.
Losobjetosdelafijacinson:
Mantenerlasestructurasenelestadomsparecidoalqueposean invivo.
Evitarlalisiscelularylaproliferacinbacteriana

Dar cierta solidez o dureza al tejido o material. La fijacin detiene los
procesos vitales pero en ciertas condiciones mantiene las actividades de
algunos componentes moleculares, por ejemplo la actividad de algunas
enzimas

Tiposdefijadores

Fsicos: Porebullicin.Porcongelacin:bajastemperaturasde 190Ca

70C(Nitrgenoliquido.dixidodecarbono)permitenexcelentesfijaciones.

Qumicos: seusansolucionessimplescomoalcoholes(etanolometanolque
puedenfijarclulasenextendidos)yclformolal10%.Elformolesunasolucin
dealdehdofrmicoal40%enaguadestilada.Deestasolucinsetoman10mly
se leagregan10 mldeaguadestilada(10%).Estaes la solucin msusada.Se
puede agregar a esta acetato de calcio, el que evita la oxidacin del aldehdo
frmicoocidofrmico,elqueperjudicalafijacin.Elformolpuededisolverse
al10%enbufferdefosfatoenlugardeaguadestiladaparamantenerelpHa7.4.

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 Mezclas fijadoras. se usan diferentes fijadores en una sola mezcla para

facilitarlafijacindeciertasestructuras. Ej.:lquidosdeBouin,Zenker.etc.
Relacin del volumen del tejido a fijarse con el volumen del fijador : es
necesarioquelostrozosafijarseandeunespesornomayorde0.5mm.Parauna
buena fijacin es necesario que la relacin volumen del tejido volumen del
fijadorseade1/40.
Tiempos de fijacin: depende del tejido, su volumen y el fijador usado
Cuandoseusaelformollaspiezaspequeasrequierenalgunashorasyyaalas24
horassefijanbien.Lafijacinsepuedecontrolarasimplevistaporelcambiode
color del tejido y su consistencia (se endurece) pero una buena fijacin solo se
apreciaenelcorteyapreparadoobservandoalmicroscopioptico.
Lavado: despus de la fijacin el tejido debe ser convenientemente lavado
conaguaobienconotrassustanciasqueeliminanrestosdefijadoresespeciales

3Deshidratacin: secolocalamuestraenalcoholesdeconcentracincrecientepara
eliminarelaguaquecontengayaquelaparafinanoesmiscibleconagua.Seutiliza
etanol70%,80%,96%y100%.

4 Aclaracin: son solventes que producen transparencia en los tejidos, adems de

solubilizar laparafina.Entreellosseencuentran. xilol.toluol.acetona,benceno.El
msusadoeselXilol.

5Inclusinenparafina: laparafinaesunamezcladehidrocarburossaturadosque
tienendiferentespuntosdefusin.Parafina blanda funde a4448C y laparafina
duraa5658C.LAparafinaseponeenestufadecultivoaunosgradosporencima
desupuntodefusin.Sesumergelamuestra,sellevaaestufaunosminutosparaque
la parafina penetre en los tejidos. Luego se enfra bruscamente colocando el
recipienteenhielo.

6 Preparacin del taco: se corta un trozo de parafina que contiene la muestra en

formadepirmidetruncada,demaneratalquelamismaquedesobrelabasemenor.
Se pega la base mayora un taquito de madera que servir para sostenerlo en el
micrtomo.

7 Corte: se realiza mediante el uso del micrtomo. El micrtomo de congelacin

permitecortareltejidodespusdefijarloporfro,congelacondixidodecarbonoy
loendureceparaqueluegopuedasercortado.Esunmtodorpidoyporesoseusa
paraeldiagnsticode biopsiasobtenidasenel actoquirrgicoparaque elcirujano
procedasegnesteinforme.Selousatambinparavisualizacindelpidosyesmuy
tilenelestudiodetejidonerviosoLosmicrtomosparacorteincluidosenparafina
son:eldedeslizamiento,enelque lacuchillaes mvil yeltejidoquesecortaest
fijosyeltipoMinot,enelqueeltejidosemovilizaylacuchillaestfija.Loscortes
puedentenerunespesorde4a4a100 mmo ms,segn lostejidosquesedeseen
estudiar.
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8Colocacinsobreportaobjeto: efectuadosloscortessecolocanenaguatibiapara
que se extiendan y luego se recogen con un pincel y se los extienden en el
portaobjetosysedejansecarparasuposteriorcoloracin.

9Desparafinizacin: sedebeextraertodolaparafinadeltejidoyaclararlo
nuevamente.SeutilizaXilol.
10Hidratacin: sedebehidratareltejidoyaquelamayoradeloscolorantesson
debaseacuosa.Paraellosecolocaelportaobjetoensolucionesdeetanolde
concentracionesdecrecientes.Etanol100%,96%,80%,70%yAguadestilada

11Coloracin: esuncompletocomplejofsicoqumicoqueleconfierecoloralos
tejidosdurantetiemposprolongados.Lasmolculasdecolorantestienenungrupo
queeselqueleconfiereelcolor:cromforoyotroquelofijaauxocromo.Los
colorantessonsalesperoselosclasificaen:
bsicos: endondelamolculadesalquecoloreaeslabasecomopor
ejemploelazuldetoluidina,azuldemetileno,hematoxilina
cidos: dondelamolculadesalquecoloreaeselcidocomoporejemplola
eosina
neutros: dondelasdospartesdelasolucinsalinaproporcionancolor,esun
ejemplodeestaeleosinatodeazuldemetileno.
Tiposdecoloracin:
Comunes: hematoxilinayeosina,azuldemetileno.
EspecificasmtododeRegaud.ImpregnacinargnticadeCajaloGolgi
Vitales: lntravitales: La coloracin intravital consiste en inyectar una sustancia
inocuaparaelanimalperoqueesfagocitada,porciertasclulas,comopor
ejemplolosmacrfagosofagocitos.
Supravitales:Lacoloracinsupravitaleslaquecoloreaalostejidosvivos
peroseparadosdelorganismo.Ejemplo:verdejanoparalasmitocondrias.
Metacromticas:Lacoloracinmetacromticaesaquellaqueconfierealtejidoun
colordiferentealdelcoloranteutilizado.Porejemploalcolorear
grnulosdelasclulascebadasdecolorrojo.

12 Deshidratacin: para preparar los preparados por tiempo prolongado. Se

sumergeelpreparadoensolucionesdeetanolde graduacincrecientes(70%,80%,
96%,100%).

13Aclaracin: se utiliza xilol o benzol, y sirve para diluir la resina adhesiva

utilizadaparapegarelcubreobjeto.
14 Colocacin de cubreobjeto: se cubre el corte con un delgado vidrio (el
cubreobjeto) que se adhiere con resina (blsamo de Canad) y permite su uso
prolongado.

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Ar tificiosdeTcnicas:
Son todas las alteraciones que se producen en los preparados histolgicos por
defectosofallasenunaomsdelasetapasdelatcnica.
Defectos de fijacin, deshidratacin, inclusin, pueden causar desgarros y
retracciones.
Si la acidez del formol no fue neutralizada, pueden aparecer grnulos
coloreadosporinteraccindelcidofrmicoconlahemoglobina.
Duranteelcortepuedenaparecerdesgarrospormelladurasenlacuchilla.
Si el corte no es cuidadosamente extendido pueden aparecer pliegues o
arrugas.
Defectos en la coloracin son inherentes a la calidad y preparacin de los
colorantesascomoinsuficientecoloracin.
Pasosdelatcnicahistolgica.

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Actividades
1. Enumerelospasosdelatcnicahistolgica.
2. Asucriterioculeselpasoclavedelamisma?porqu?
3. Cules son los colorantes ms usados? Qu estructuras celulares tien cada
uno?
4. Porqudebedesparafinarseelpreparadoantesdecolorearlo?
5. Culoculespiensaustedquesonlosartificiosdetcnicasmsfrecuentesde
encontrar?
6. Estatcnicahistolgicaseusaparatejidosvivosomuertos?

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