UHPLC

Amador Robles Arlette

UHPLC
Cromatografa de lquidos de ultra alta eficacia

Tcnica
Separar
Identificar
Cuantificar

UHPLC
Columnas de relleno con
partculas porosas sub-2m
utilizados en condiciones de
presin muy altas

Efecto del tamao de la partcula.

Cromatografa lquida
Tamao de partcula pequea

Nmero de
placas mayores

Separaciones
ms rpidas

La eficiencia cromatogrfica, es
directamente
proporcional
a
la
relacin de la longitud de la columna y
de partculas de dimetro.

La fase mvil lineal, velocidad, es

inversamente
proporcional
al
dimetro de partcula.

 La reduccin del tamao de partcula tambin genera una contrapresin

alta (> 400 bar) no compatible con instrumentacin convencional.
UHPLC, con una presin mxima de 1.000 bar es una estrategia que
genera el tiempo de anlisis ms bajo para una eficiencia dada.
EL instrumento debe ser capaz de soportar las altas presiones generadas
por las partculas pequeas
El sistema cromatogrfico se adapta para funcionar en modo rpido y con
volmenes de columna reducidos.

Instrumentacin
Columna de 50x2.1 mm
Tiempo de ciclo de inyeccin es rpida
Tuberas: Acero inoxidable
El volumen de la tubera debe reducirse tanto como sea posible. Por
esta razn, la longitud del tubo debe ser lo ms
corto como sea posible y su dimetro 0.02 mm
Detector de tiempo constante tiene que ser lo suficientemente rpido (
100 ms) debido a anchuras de los picos son muy pequeas en
UHPLC.
La velocidad de muestreo del detector debe ser lo suficientemente alta

Fase mvil (disolventes)

Baja viscosidad
Baja reactividad
Alto grado de pureza

Ventajas
Resolucin ms alta.
Ms alta sensibilidad
Anlisis ms rpido
Mayor produccin.

Bibliografa
Dr. Davy Guillarme, Prof. Jean-Luc Veuthey ,Guidelines for the use of UHPLC, Instruments
Requirements for UHPLC instruments, method development in UHPLC and method transfer from
regular HPLC to UHPLC, Laboratory of Analytical Pharmaceutical Chemistry, School of Pharmaceutical Sciences,
University of Geneva, University of Lausanne, Available from : www.unige.ch/.../Guidelines%20for%20the%20use.