8 - ANTIBIOGRAMA

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8. ANTIBIOGRAMA
Un antibitico es una sustancia de origen biolgico que inhibe el crecimiento de los
microorganismos a concentraciones muy bajas.
Un antibiograma es un estudio de la sensibilidad "in vitro" de un microorganismo patgeno
frente a las sustancias antimicrobianas.
Existen distintos mtodos siendo los ms importantes los de :

Difusin: Habitualmente cualitativos. Atendiendo al halo de inhibicin que aparece

alrededor del disco, se clasifican los microorganismos como sensibles (S),
intermedios (I) o resistentes (R) segn sea la eficacia obtenida por el agente
amtimicrobiano frente al microorganismo.

Dilucin: Es un estudio cuantitativo. Se emplean una serie de tubos con distintas

concentraciones de agente antimicrobiano (4-128 g/ml).
Se observa el crecimiento de los microorganismos mediante la aparicin de turbidez, o el
cambio de color del indicador incorporado al medio.

La sensibilidad de una bacteria a un antibitico viene dada por la

C.M.I. es la concentracin mnima inhibitoria, representa la mnima cantidad de

antimicrobiano capaz de inhibir el crecimiento de un microorganismo.

C.M.B. concentracin mnima bactericida. Es la concentracin mnima que mata el

microorganismo. Normalmente, la CMI es suficiente para combatir una determinada
infeccin ya que los mecanismos inmunitarios se encargan de eliminar al
microorganismo.

Deteccin de beta lactamasas: Algunos microorganismos son capaces de producir

estas enzimas, que destruyen los derivados del grupo de las penicilinas, hidrolizando
el anillo betalactmico. Se aplica esta prueba a los siguientes microorganismos:
Staphylococcus aureus, Haemphilus influenzae y Neisseria gonorrhoeae.

El antibiograma por el mtodo de difusin en agar es una de las pruebas utilizadas para
determinar la sensibilidad de un microorganismo frente a un antibitico. En esta prueba se
enfrenta la bacteria inoculada sobre la superficie de un medio de agar a una solucin
antibitica absorbida en discos de papel de filtro o en pastillas.
Procedimiento:
1. Preparar 3 placas Petri con agar Meller Hinton.
2. A partir de un cultivo fresco de las bacterias que hay que ensayar (E. coli,
Staphilococcus, ...), inocular 4-5 colonias en un tubo con 5 ml de caldo TSB.
3. Utilizando un hisopo de algodn sumergirlo en el inculo y eliminar el exceso
presionndolo sobre la pared interna del tubo.

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4. Inocular la superficie de una placa de agar Meller Hinton con el hisopo pasndolo
uniformemente por toda la superficie en tres direcciones. Por ultimo, pasar el hisopo
por el reborde de la placa.
5. Dejar secar 10 min con la tapa algo abierta (junto al mechero).
6. Preparacin de los discos con antibitico. Disolver una cpsula, comprimido,
gragea o vial de antibitico en agua destilada; elegir una presentacin de antibitico
fcilmente soluble (Calcular el volumen de dilucin que precisa cada tipo de
antibitico, segn la tabla 8.1).
7. Preparar un banco de diluciones (-1, -2) con agua destilada.
8. Con micropipeta Pasteur impregnar los discos para antibiograma con 1 gota de
micropipeta (32 l) de las disoluciones de antibitico (se puede utilizar la misma
pipeta si se realiza de menor a mayor concentracin). Anotar la concentracin y el
volumen de antibitico aadido en cada disco.

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9. Colocar el disco de antibitico (con pinzas estriles) sobre la superficie del agar y
apretarlo suavemente sobre la superficie del medio. Los discos no deben estar a
menos de 15 mm de los bordes de la placa y a unos 20 mm uno de otro para que no se
superpongan las zonas de inhibicin. (No mover los discos una vez implantados).
10. Realizar la operacin con:
a. Placa 1 (Staphilococcus):3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Amoxicilina.
b. Placa 2 (Staphylococcus):3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Penicilina G
c. Placa 3 (E.coli): 3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Amoxicilina,
3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Penicilina G.
1. Marcar placas y dejarlas 15' a temperatura ambiente para que difunda el antibitico.
2. Anotar las concentraciones y el tipo de antibitico sembrado en cada disco.
3. Incubar la placa en posicin invertida a 37 C durante 24 h.
4. Medir los dimetros de las zonas de inhibicin con una regla.
5. Interpretacin: Atendiendo a los resultados obtenidos con los criterios de inhibicin
aceptables indicados en la tabla 7.1., clasificar los microorganismos investigados
como S, I, R. Determinar la C.M.I.
Tabla 8.1. Halos de inhibicin aceptables segn las normas
de la NCCLS para los antibiogramas de difusin
Halos de inhibicin (mm)
Antibitico /carga
E. coli
P. aeruginosa
S. aureus
del disco (g)
ATCC 25922 ATCC 25923 ATCC 27853
Amicacina/30
Amoxicilina-clavulnico/20/10
Ampicilina/10
Cefazolina/30
Cefotaxima/30
Ceftazidima/30
Cefuroxima/30
Cloranfenicol/30
Ciprofloxacina/5
Clindamicina/2
Doxiciclina/30
Eritromicina/15
Gentamicina/10
Imipenem/10
cido nalidxico/30
Nitrofurantona/300
Norfloxacina/10
Oxacilina/1
Penicilina G/10
Piperacilina/100
Tobramicina/100
Trimetoprim/Sulfametoxazol/
1,25/23,75
Vancomicina/30
NA = No aplicable

19-26
19-25
16-22
23-29
29-35
25-32
20-26
21-27
30-40
NA
18-24
NA
19-26
26-32
22-28
20-25
28-35
NA
NA
24-30
18-26
24-32

20-26
28-36
27-35
29-35
25-31
16-20
27-35
19-26
22-30
24-30
23-29
22-30
19-27
NA
NA
18-22
17-28
18-24
26-37
NA
19-29
24-32

18-26
NA
NA
NA
18-22
22-29
NA
NA
25-33
NA
NA
NA
16-21
20-28
NA
NA
22-29
NA
NA
25-33
19-25
NA

NA

15-19

NA

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122

Clasificacin de las sustancias antimicrobianas

La evaluacin de sensibilidad permite seleccionar el compuesto ms adecuado para el
tratamiento de una infeccin bacteriana.
1. Inhibidores de la sntesis de la pared celular( Betalactmicos)
Comprende un nutrido grupo de
antibiticos naturales y
semisintticos que tienen en comn
presentar en su estructura qumica
un anillo -lactmico (Penicilinas,
cefalosporinas...). Su mecanismo de
accin se basa en la inhibicin de la
formacin del peptidoglucano,
componente esencial de la pared
celular (murena).
El esqueleto de la pared celular bacteriana est constituido por un heteropolmero, el
glucopptido murena1. En su composicin intervienen sustancias que no se presentan ni en
plantas ni en animales. Estos elementos estructurales "singulares", constituyen un "tendn de
Aquiles" para la terapia mdica.
La penicilina evita la formacin de la murena, impidiendo la formacin de uniones
transversales por transpeptidacin entre aminocidos.
Las bacterias se diferencian esencialmente de los animales y plantas en los componentes, la
estructura, as como en las reacciones implicadas en la sntesis de la pared celular.
Los agentes teraputicos que afecten especficamente slo a la pared celular bacteriana y a su
sntesis, deben ser inocuos para el organismo superior hospedador.
La presencia de una capa de glucopptido en las paredes celulares es una caracterstica
general de todas las eubacterias dentro de las procariotas. Tan solo las arqueobacterias
(metgenas, termfilas extremas, halfilas extremas) y otros pequeos grupos (micoplasmas)
no forman glucopptidos del tipo descrito.
1.1 Penicilinas
Desde el descubrimiento de la penicilina en 1928, se han desarrollado una multitud de
compuestos de esta familia, cuyo compuesto base es el cido 6-aminopenicilnico (6-APA).
Por reacciones de sustitucin con cidos clorados pueden sintetizarse cientos de penicilinas.

Murena: Heteropolmero formado por cadenas en las que se alternan N-acetilglucosamina

(G) y el cido N-acetilmurmico (M), unidos mediante enlaces -1,4 glucosdicos. Entre los
aminocidos de estas cadenas rectas, se forman enlaces peptdicos.

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Muchas penicilinas semisintticas no se abren por la accin de la penicilinasa2 y pueden

administrarse por va oral gracias a su estabilidad frente a los cidos.

Penicilinas naturales:
 Penicilina G. Activa frente a Gram (+). No acta sobre enterobacterias.

 Penicilina V. Permite la administracin oral por su mayor resistencia a pH cidos.

Penicilinas semisintticas. Poseen cadenas laterales en el anillo betalactmico, que

les proporciona una relativa resistencia a las penicilinasas.
 Oxacilina, Cloxacilina. Son penicilinas resistentes a la penicilinasa, presente en
microorganismos como el S.aureus.
 Amoxicilina (Clavumox, Ardine, Clamoxil...). Amplio espectro. Actan sobre
algunas enterobacterias. La resistencia va en aumento, 40 % de cepas E.coli.

1.2

Inhibidores de beta-lactamasa. Su actividad antibacteriana es reducida, pero sus

unin con algunas -lactamasas impide que stas destruyan a los antibiticos lactmicos, proporcionndoles un aumento de espectro (cido clavulnico)
Cefalosporinas
Productos de fermentacin del hongo Cephalosporium, cuyo anillo base es el 7-ACA,
cido 7-aminocefalospornico. Los derivados semisintticos de las cefalosporinas se
clasifican por generaciones. Las cefalosporinas de 3 generacin son efectivas frente
a penicinilasas, microorganismos Gram negativos y enfermedades graves como:
menngitis, neumona y la septicemia.

Penicinilasas: Enzimas producidas por ciertas cepas bacterianas resistentes a las penicilinas
mediante la destruccin del anillo beta-lactmico (beta-lactamasas).
Porcentaje de cepas S.aureus resistentes a penicilina G: 1940- 3%, 1948-58%, 1990->90%

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124

2. Inhibidores de la sntesis de protenas. Extenso y heterogneo grupo de antibiticos.

Su actividad se centra en el ribosoma bacteriano3 70S, aunque cada grupo acta en distintos
puntos del proceso de sntesis de las protenas.
Actinomicetos y streptomicetos son grupos bacterianos que se caracterizan por
crecer formando micelio. Tienen una gran significacin industrial como productores
de antibiticos muy activos: estreptomicina (tuberculosis), tetraciclina..
Cloranfenicol. Se encontr, en primer lugar, en cultivos de Streptomyces venezuelae,
pero actualmente se obtiene por sntesis qumica. Es extraordinariamente estable y
acta contra muchas bacterias Gram negativas, tambin contra espiroquetas,
rickettsias, actinomicetos, anaerobios y virus de gran tamao. No obstante, se suele
reservar para infecciones graves, debido a su toxicidad.
3. Inhibidores de la sntesis de cidos nucleicos.
Quinolonas: Productos de sntesis qumica (quimioterpicos). Su mecanismo de
accin inhibe la formacin de la enzima ADN girasa, necesaria para la duplicacin del
ADN. Son bactericidas.
4. Inhibidores de la sntesis del cido flico.
Sulfamidas. Son antibiticos qumicos de sntesis. Actan bloqueando la sntesis de
cido flico, imprescindible para la produccin de protenas. Antibiticos de amplio
espectro. Se utilizan en infecciones leves.
Inhibicin competitiva: El cido paraaminobenzoico (PABA) es un componente
preciso para la sntesis del cido flico. Dos molculas, sulfamida y PABA compiten
por el mismo sitio activo.

Los organismos animales no son capaces de sintetizar cido flico, as que toman la
coenzima (vitamina) completa en los alimentos.
3

Estos antibiticos actan tambin sobre los ribosomas (70 S) de las mitocondrias y
cloroplastos de las eucariotas. Pero ya que la membrana externa de las mitocondrias, es muy
poco permeable a las molculas de antibitico, apenas tienen efecto sobre las clulas
eucariotas, a las bajas concentraciones en que se utilizan con los procariotas.

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125

Cuestionario
1. Explica las causas de la resistencia que presentan ante la accin de la mayora de
antibiticos de eficacia antibacteriana:
a. Los hongos
b. Los micoplasmas
c. Los virus
2. Qu es la CMI?, y la CMB?
3. Cmo se clasifican los microorganismos segn el grado de crecimiento alcanzado frente
a un antibitico?
4. Qu diferencia existe entre un antibitico y un quimioterpico?
5. Clasifica los antibiticos citados en este captulo, segn sean naturales, de sntesis o
semisintticos.
6. Recopilar en una tabla los datos siguientes:
Agente
antimicrobiano

Lugar de la clula
en que acta

Mecanismo de
actuacin

Espectro de
aplicacin

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126