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Guia Validacion Laboratorios
Guia Validacion Laboratorios
2007
1
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Implementacin del Sistema para la validacin de los anlisis y mediciones de laboratorios en suelos y lodos.
INTRODUCCIN
La validacin de mtodos es un procedimiento para establecer por medio de estudios
de laboratorio una demostracin cientfica que un mtodo analtico tiene las
caractersticas de desempeo que son adecuadas para cumplir los requerimientos de
las aplicaciones analticas pretendidas. Por lo tanto, es un componente esencial de las
medidas que un laboratorio debe implementar para producir datos analticos fiables.
Este documento est orientado a la validacin de los mtodos incluidos en el Protocolo de
mtodos de anlisis para suelos y lodos , y cont con la asesora de la experta Anglica
Sadzawka y la participacin de Erick Zagal, Mara Adriana Carrasco, Rolando Demanet,
Hugo Flores, Renato Grez, Pedro Hernndez, Mara de Luz Mora, Alexander Reaman y
Gisela Romeny todos integrantes de la Comisin de Normalizacin y Acreditacin (CNA),
de la Sociedad Chilena de la Ciencia del Suelo, la que fue creada para desarrollar un
Programa de Normalizacin de Tcnicas y de Acreditacin de Laboratorios para el anlisis
de suelos y de tejidos vegetales.
Los mtodos de anlisis incluidos en dicho documento fueron seleccionados
principalmente de la EPA (United States Environmental Protection Agency), por lo tanto
son mtodos oficiales. Pero, ello no garantiza que el funcionamiento sea satisfactorio en
cualquier laboratorio que los use. Por lo tanto, siempre que un laboratorio monta un
mtodo, debe validarlo bajo sus condiciones, porque cualquier cambio introducido puede
afectar sus caractersticas. La ventaja de usar mtodos estndares, oficiales o
normalizados, es que la validacin no requiere determinar la totalidad de los parmetros
analticos bsicos, sino solamente una seleccin de ellos. Esta seleccin depender de las
caractersticas del mtodo y del laboratorio, aunque el reconocimiento oficial de que un
laboratorio est ejecutando en forma adecuada un mtodo puede requerir adems
estudios interlaboratorios.
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TABLA DE CONTENIDO
Pgina
INTRODUCCIN .................................................................................................................... 2
1
CALIBRACIN ............................................................................................................... 9
PRECISIN ................................................................................................................... 16
SENSIBILIDAD ............................................................................................................. 16
RANGO DE TRABAJO................................................................................................. 17
ESPECIFICIDAD........................................................................................................... 17
10 SELECTIVIDAD ............................................................................................................ 18
11 RECUPERACIN ......................................................................................................... 18
12 ROBUSTEZ................................................................................................................... 19
13 INTERFERENCIAS....................................................................................................... 21
14 APLICABILIDAD........................................................................................................... 21
15 ADECUACIN AL PROPSITO ................................................................................. 21
16 BIBLIOGRAFA............................................................................................................. 21
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TRMINOS Y DEFINICIONES
1.5.2
1.5.3
1.6 Especificidad
Habilidad de evaluar inequvocamente el analito en presencia de componentes
que se puede esperar que estn presentes. Tpicamente stos pueden incluir
impurezas, productos de degradacin, la matriz, etc.
1.7 Exactitud: grado de concordancia entre el resultado de un ensayo y el valor de
referencia aceptado (NCh 2755/1, 2003). Tambin se puede definir como la
cercana entre el valor que es aceptado, ya sea como un valor convencional
verdadero (material de referencia interno del laboratorio), o como un valor de
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CV (%) =
s
100
x
x=
x
i =1
s=
(x
i=1
x )2
n 1
sx =
s
n
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Calibracin
Lmite de deteccin
Lmite de cuantificacin
Exactitud, sesgo
Precisin
Sensibilidad
Rango de trabajo
Especificidad
Selectividad
Recuperacin
Robustez
Interferencias
Aplicabilidad
Adecuacin al propsito.
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3.1
CALIBRACIN
Principio
Los estndares se preparan en la misma composicin del extractante usado para las
muestras, con el mismo factor de dilucin. Es la prctica ms usada.
Los estndares se preparan en el extracto del blanco. Esta prctica es til cuando se
analizan pocas muestras o cuando el extractante es inestable.
Uso de la tcnica llamada adicin de estndares, que consiste en tomar alcuotas del
extracto de la muestra, agregar diferentes cantidades de analito y diluir a un volumen
final. Una alcuota se usa sin adicin de analito, obtenindose as la serie de
estndares. Esta prctica se usa cuando se quiere evitar diferencias de matriz entre
las muestras y los estndares.
3.2
Ajuste lineal
Una vez obtenidas las respuestas del instrumento a la serie de estndares de al menos
seis puntos, se debe dibujar el grfico de calibracin, ya sea en el mismo equipo de
medicin, si lo permite, o en el computador usando un programa que permita calcular la
ecuacin y el coeficiente de determinacin. En una relacin lineal, la ecuacin de regresin
toma la forma de:
y = bx + a
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donde:
y
x
b
a
=
=
=
=
desviacin (%) =
1 100
bx + a
i
Si las desviaciones son <5%, la curva puede ser aceptada como lineal.
Si las desviaciones son >5%, el rango se disminuye dejando fuera las
concentraciones ms altas.
Repetir el clculo de la regresin lineal.
Repetir el procedimiento hasta que las desviaciones sean <5%.
En situaciones en que un grfico de calibracin es lineal en un intervalo de
concentraciones y curvo en otro, es de gran importancia establecer claramente el intervalo
que se puede considerar lineal.
Una vez que se ha establecido el grfico de calibracin, su uso es simple: la concentracin
xi del analito en la muestra i la entrega directamente el instrumento o se calcula del valor
de yi medido segn la ecuacin:
y -a
x = i
i
b
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3.3
Ajuste polinomial
x =
i
donde:
xi
a
b
c
yi
=
=
=
=
=
b + b 2 4c(a - y i )
2c
Es importante tener en cuenta que durante los clculos se trabaja con todas las cifras
decimales y se redondean solamente al final. Para producir un mnimo sesgo, por
convencin el redondeo se hace como sigue:
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3.4
La incertidumbre es t.s, siendo t un valor estadstico que depende del nmero de datos y
de la confianza requerida (usualmente 95%). Por lo tanto, los lmites de confianza de la
ecuacin de regresin son:
y estimado :
intercepto :
pendiente :
t sy
a t sa
b t sb
s
y
s =
x
b
De manera que el lmite de confianza de los resultados de las muestras, xm, puede
calcularse como:
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y
b
Para una confianza del 95% y un grfico de calibracin de 6 puntos, el valor de t segn
tabla es de 2,78 para 4 grados de libertad (6 2). El lmite de confianza puede estrecharse
aumentando el nmero de puntos del grfico de calibracin.
El valor de sx as calculado puede ser slo aproximado porque se considera constante en
el rango, lo cual generalmente no ocurre en la realidad, ya que es comn que las
mediciones sean ms precisas en el centro del grfico de calibracin que en los extremos.
Pero, en la prctica, tal estimacin del error generalmente es suficiente.
Es importante considerar que cuando la determinacin del analito es parte de un
procedimiento con varias etapas, el error debido a la lectura se agrega a los errores de las
otras etapas, constituyendo el error total del procedimiento completo, que es la estimacin
de confianza ms til cuando se informan los resultados. Este se obtiene del promedio y la
desviacin estndar de varias repeticiones (>10) realizadas en muestras de control o de
los grficos de control en los anlisis de rutina. En este caso, para un nivel de confianza del
95%, el resultado del anlisis de una muestra sin repeticiones se informa como:
x 2s
donde:
s
4.1
Blancos
Las seales de los blancos generalmente no son cero, incluso pueden ser negativas, lo
cual puede ser debido a un error en el procedimiento o tambin a un efecto de la matriz de
la solucin, lo cual a menudo es inevitable. Por conveniencia, algunos analistas ajustan a
cero el instrumento con el blanco de medicin (estndar 0). Esto equivale a sustraer el
valor del blanco de los valores de los estndares antes de graficar la curva de calibracin.
Desde el punto de vista del control de calidad, esta prctica no debe realizarse. Para el
ajuste del cero del instrumento debe preferirse el uso de agua pura o agua con cido en la
misma concentracin de las muestras.
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4.2
Lmite de deteccin
4.3
Lmite de cuantificacin
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EXACTITUD, SESGO
x
100
donde:
x
=
=
x -
100
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PRECISIN
Los anlisis repetidos sobre una muestra de referencia permiten calcular, adems de la
exactitud y el sesgo, la desviacin estndar de la media como una medida de la precisin.
Numricamente, la precisin se expresa por el valor absoluto de la desviacin estndar o,
ms universalmente, por la desviacin estndar relativa (RSD) o por el coeficiente de
variacin (CV):
RSD =
CV (%) =
donde:
s
x
=
=
s
x
s
100
x
desviacin estndar de x
media de los resultados obtenidos para la muestra de referencia
SENSIBILIDAD
=
=
=
y
C
sensibilidad
cambio en la respuesta y debida a un C
cambio en la concentracin de analito
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RANGO DE TRABAJO
Si la dilucin 10x es demasiado alta para obtener un grfico adecuado, puede usarse por
ej. 5x.
ESPECIFICIDAD
Se prepara una solucin estndar del analito con una concentracin similar a la
que se espera que tenga la solucin de la muestra y se comparan las mediciones
en ambas soluciones.
Se prepara una solucin estndar del analito con una concentracin similar a la
que se espera que tenga la solucin de la muestra. Se fortifican ambas soluciones
con una cantidad equivalente de la matriz y se comparan las mediciones de
ambas soluciones.
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Se prepara una solucin estndar del analito con una concentracin similar a la
que se espera que tenga la solucin de la muestra. Se fortifican ambas soluciones
con una cantidad equivalente de analito y se comparan las mediciones de ambas
soluciones.
Tambin pueden usarse soluciones, tanto de la muestra como del estndar, fortificadas
con varias concentraciones de analito. Esto permite determinar el grado de
interferencia, dependiendo de la concentracin del analito a determinar. Estos datos
pueden obtenerse del estudio de linealidad del mtodo utilizando la adicin estndar.
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SELECTIVIDAD
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RECUPERACIN
x+
x
xag
=
=
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ROBUSTEZ
Un mtodo analtico es robusto si los resultados no son muy sensibles a las variaciones en
las condiciones experimentales. Tales condiciones experimentales pueden ser:
temperatura, duracin de la extraccin o agitacin, tcnica de agitacin, pH, pureza de los
reactivos, contenido de humedad de la muestra, tamao de la muestra, etc.
El mtodo ms conveniente para estimar la robustez es el denominado diseo factorial
parcial de Youden y Steiner, el cual con slo 8 repeticiones se pueden variar y analizar 7
factores. La matriz del diseo es la siguiente:
Experimento
1
2
3
4
5
6
7
8
A
+
+
+
+
-
B
+
+
+
+
-
Factores
C
D
E
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
F
+
+
+
+
G
+
+
+
+
-
Resultados
Y1
Y2
Y3
Y4
Y5
Y6
Y7
Y8
(absoluto) =
Y A + YA 4
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No siempre es posible o deseable variar siete factores, pero el mtodo descrito no permite
una reduccin de factores.
Para estudiar slo tres factores se puede usar el siguiente diseo:
Experimento
1
2
3
4
Factores
A
B
C
+
+
+
+
+
+
-
Resultados
Y1
Y2
Y3
Y4
(absoluto) =
YA + YA 2
La prueba de significancia del efecto puede hacerse en forma similar a la descrita para
siete factores, con la diferencia que aqu el n=2.
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INTERFERENCIAS
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APLICABILIDAD
Cuando se propone un nuevo mtodo o cuando se debe escoger un mtodo para una
determinacin, puede ser til una descripcin de la facilidad o dificultad de su aplicacin.
Los problemas, en la mayora de los casos, se relacionan con la disponibilidad y
mantencin de ciertos equipos y con los requerimientos de personal especializado. Si se
conocen limitaciones de aplicabilidad del mtodo, deben mencionarse en el informe de
validacin.
15
ADECUACIN AL PROPSITO
16
BIBLIOGRAFA
Implementacin del Sistema para la validacin de los anlisis y mediciones de laboratorios en suelos y lodos.
NCh 2737. 2002. Procedimiento para la calibracin de medidores de pH. Instituto Nacional
de Normalizacin, Santiago, Chile, 19 p.
NCh 2755/1. 2003. Gua para la cuantificacin y expresin de la incertidumbre en el
anlisis qumico. Parte 1: Fundamentos. Instituto Nacional de Normalizacin,
Santiago, Chile, 81 p.
NCh 2766. 2003. Qumica. Estructura y contenido de las normas. Mtodo de anlisis
qumico. Instituto Nacional de Normalizacin, Santiago, Chile, 24 p.
NCh-ISO 10013. 1994. Gua para desarrollar manuales de calidad. Instituto Nacional de
Normalizacin, Santiago, Chile, 14 p.
NCh-ISO 17025. 2000. Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de
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Ros C., A. 1999. Curso sobre validacin de mtodos. III Simposio y Exposicin de la
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de Energa Nuclear, Santiago, Chile, 17 p.
Van Reeuwijk, L.P. 1998. Guidelines for quality management in soil and plant laboratories.
FAO and ISRIC, FAO Soils Bulletin 74, Rome, Italy. 143 p.
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