Diagnstico microbiolgico del

gnero Streptococcus

TM Pedro Alarcn
Laboratorio de Referencia
Cocaceas Gram positivas
Mayo 2011

Taxonomia
Dominio

Bacterias

Phylium

Firmicutes

Bacilli

Clase
Orden
Familia

Genero

Lactobacillales

Bacillales

Staphylococcaceae

Gemella

Lactobacillaceae

Pediococcus

Aerococcaceae Carnobacteriaceae

Aerococcus
Abiotrophia
Dolosicoccus
Eremococcus
Flaklamia
Globicatella
Ignavigranum

Alloiococcus
Dolosigranulum
Granulicatella

Enterococcaceae

Enterococcus
Melissococcus
Tetragenococcus
Vagococcus

Leuconostocaceae

Streptococcaceae

Leuconostoc
Oenococcus
Weissella

Streptococcus
Lactococcus

Bergey's Manual (September 2009)

Gnero Streptococcus
Los Streptococcus son un gnero de Bacterias Gram positivas, esfricas de
menos de 2 um de tamao. Estas bacterias crecen en cadenas o pares,
donde cada divisin celular ocurre a lo largo de un eje. De all que su
nombre, del Griego streptos, significa que se dobla o retuerce con facilidad,
como una cadena.

-Hemolticos
-Hemolticos
-Hemolticos

Caractersticas Generales del genero

Streptococcus
Son bacterias anaerobias facultativas
La mayora de las especies crece en un ambiente con CO2
(5%), son capnofilos
Son homofermentativos, producen acido lctico a partir de
la fermentacin de la glucosa sin formacin de gas
Son catalasa negativo
Son oxidasa negativo
Forman cadenas cuando crecen en medios lquidos
Algunos poseen capsula, la cual los permite serotipificar

Pared Celular de Gram positivo

Tincin de Gram

Reaccin de Catalasa

Streptococcus hemolticos
Grupo viridans heterogneo e incluye
varios subgrupos

grupo mitis
grupo anginosus
grupo mutans
grupo salivarius
grupo bovis
grupo sanguis

Grupo mitis
Asociado a endocarditis y caries dentales

Streptococcus mitis : En prtesis y vlvulas

Streptococcus oligofermentans
Streptococcus oralis : En prtesis y vlvulas
Streptococcus gordonii
Streptococcus cristatus
Streptococcus infantis
Streptococcus peroris
Streptococcus australis
Streptococcus pneumoniae

Grupo anginosus
Asociado a abscesos subcutneos y rganos
Streptococcus anginosus : Tracto urogenital,
abscesos abdominales, tejidos blandos, cabeza
y cuello
Streptococcus constellatus : Tracto Respiratorio
subespecies constellatus y subespecie
pharyngis
Streptococcus intermedius : En absceso de
cerebro e hgado

Grupo mutans
Asociado a endocarditis y caries dentales
Streptococcus mutans : En placa bacteriana
(principal agente productor de caries y bacteremia)
Streptococcus sobrinus : En placa bacteriana
(dental)
Streptococcus criceti (animales)
Streptococcus ratti (animales)
Streptococcus downei (animales)
Streptococcus macacae (animales)
Streptococcus ferus (animales)

Grupo salivarius
Asociado a endocarditis y caries dentales
Streptococcus salivarius : En boca,
especialmente lengua, mucosa y saliva.
(bacteremia, endocarditis y meningitis)
Streptococcus vestibularis : En vestbulo oral
Streptococcus thermophilus : En lecheras
Streptococcus hyointestinalis: En tripas de cerdo

Grupo bovis
Infeccin del tracto biliar y urinario, endocarditis
Streptococcus infantarius II.1 (humanos)
*subsp. infantarius y subsp. coli
Streptococcus alactolyticus (animales)
Streptococcus equinus/bovis(animales)
Streptococcus gallolyticus
*Streptococcus gallolyticus subsp. gallolyticus (I)
(cancer gastrointestinal)
*Streptococcus gallolyticus subsp.pasteurianus II.2
(meningitis)
*Streptococcus gallolyticus subsp.macedonicus

Grupo sanguis/sanguinis
Asociado a bacteremias

Streptococcus sanguis biotipo 1

Streptococcus sanguis biotipo 2
Streptococcus sanguis biotipo 3
Streptococcus parasanguis
Streptococcus gordonii
Streptococcus sinensis
Aislados en humanos

Diferenciacin fenotipica de Streptococcus grupo viridans

- hemlisis, LAP +, PYR - , Vancomicina S
Grupo
viridans

Arginina
Dihidrolasa

Hidrlisis de la
Esculina

Acetoina
(VP)

Manitol

Sorbitol

Lactosa

Actividad
Ureasa

Grupo
Sanguis

Grupo
Mitis

Grupo
Mutans

Grupo
Salivarius

Grupo
Anginosus

Grupo
Bovis

LAP: Leucina-aminopeptidasa

PYR: Pirrolidonil-arilamidasa

Flujograma de diferenciacin de Streptococcus grupo viridans

LAP (+), PYR (-),Lactosa (+), Vancomicina sensible
Hidrlisis de Arginina

(+)

(-)

grupo sanguis
grupo anginosus

grupo mitis
grupo bovis
grupo mutans
grupo salivarius

Produccin de Acetoina (VP)

(+)
grupo anginosus
aroma dulce

Hidrlisis de la urea

(-)

(-)

grupo sanguis

(+)

grupo bovis
grupo mutans
grupo mitis

grupo salivarius

Produccin de Acetoina

(+)

(-)

grupo bovis
grupo mutans

grupo mitis

Acidificacin de Sorbitol

(+)
grupo mutans

(-)
grupo bovis

Latex D (+)
Bilis esculina (+)
Nacl (-)

1- Caractersticas fenotipicas de otros Gneros

bacterianos
Que presentan - hemlisis, Catalasa negativa
GENERO

LAP

PYR

SUSCEP.
VANCOMICINA

MOVILI
DAD

CALDO
SAL 6.5%

Enterococcus

S/R

Abiotrophia

Granulicatella

Aerococcus

Helcococcus

Leuconostoc

Weisella

Pediococcus

Tetragenococcus

Gemella

2- Caractersticas fenotpicas de otros Gneros

bacterianos
Que presentan - hemlisis, Catalasa negativa
GENERO

LAP

PYR

SUSCEP.
VANCOMICINA

MOVILI
DAD

CALDO
SAL 6.5%

Vagococcus

Alloiococcus

Globicatella

Facklamia

Dolosigranulum

Ignavigranum

Dolosicoccus

Eremococcus

Lactococcus

G r G ru
up
p
oa om
iti s
ng
G r i no s
u
u
Gr
u p po b s
os
ov
is
a
Gr
u p liv a r
iu s
os
Gr
an
Ae
u
g
D o ro co po m uis
cc
los
u
ta
us
ig
v ir n s
G e r anu
i
d
me
lu m
an
lla
pig s
ha
Ge
ru
em
me
oly m
lla
Gl
s
m
ob
an
or
i ca
s
Gr
t el billo
an
r
l
a
u
uli
m
sa
ca
ng
te l
u in
la
is
ad
i ac
en
s

Numero

Streptococcus grupo viridans (n:133)

Laboratorio de Referencia Cocaceas Gram positivas
Ao 2010
60

40

20

59

50

36

30
19
12

10
4 3

1 1 1
1 1 1

Streptococcus grupo mitis

Streptococcus pneumoniae

Kawamura et al. 1995 en estudio basado en

comparacin de secuencias de genes de
16S de rRNA encuentra una estrecha
relacin filogentica entre S. pneumoniae y
Streptococcus grupo viridans, sugiere
incluirlo como parte del grupo mitis

Streptococcus pneumoniae
Caractersticas generales:
Cocaceas
gram
Positivas
capsuladas con un tamao de 0.5
a 1.2 um de dimetro, dispuestas
en pares o diplos lanceolados
Son anaerobias facultativas
Para su crecimiento y desarrollo
necesitan de una atmosfera de 8 a
10 % de CO2
Presenta
colonias
redondas,
mucosas y no pigmentadas, de 1 a
3 mm de dimetro, las cuales
presentan un aspecto umbilicado,
con
una
depresin
central
producida por una autolisis
progresiva.

Factores de virulencia
Streptococcus pneumoniae

Adherencia( pspA y psaA): Capacidad de

adherirse a celulas blanco
Cpsula polisacrida: hay alrededor de 90
tipos capsulares
Pneumolisina (gen ply): Citotoxina que
destruye la membrana de globulos rojos
Neuraminidasa:(NamA-NamB)
hidroliza
glucoproteinas y glucolipidos celulares
Autolisina (gen lytA): hidroliza la capa de
peptidoglican, permite la division celular
Proteasa para IgA: inactiva la IgA1
presente en las mucosas, facilitando la
adherencia y colonizacin
Hialuronidasa:
diseminacin
de
los
organismos en los tejidos

Pruebas Bioquimicas
de Laboratorio

Solubilidad en bilis
Desoxicolato de sodio 10%
Reaccin Control
positiva Negativo

Susceptibilidad a optoquina 5ug

(Ethil hydrocupreina hydrochloride)

Serotipificacin por tcnica de Quellung

Mtodo de Referencia

Se produce el aumento (hinchazn)

de la capsula al aadir antisueros
capsulares especficos lo que la
hace visible microscpicamente
(100x)

Serotipos de Streptococcus pneumoniae de muestras

invasivas aos 2008 a 2010
Instituto de Salud Publica de Chile
200

1
3

14

4
5

180

8
13

14

14
29
34

160

14

38
10A
11A

140

12F
15A
15B
15C

120

15F
16F
18A

1
100

18C
18F
19A
19F

80

7F

22F
23A
23B
7F

60

7F

23F
24F
28A
33F

19F
40

3
19F
19F

35F
6A
6B
7F
9A

20

9L
9N
9V
Otros

Ao 2008

Ao 2009

Ao 2010

Susceptibilidad de Streptococcus pneumoniae aislados de

cuadros invasivos aos 2008-2010
Instituto de Salud Publica de Chile
Penicilina Meningitis (CIM)
Resistente

Sensibles

Ao

Total casos

2008

120

30

25

90

75

2009

113

37

32,7

76

67,3

2010

109

35

32,1

74

67,9

Penicilina No Meningitis (CIM)

Resistente

Sensibles

Intermedia

Ao

Total casos

2008

796

780

97,9

16

2009

827

0,24

801

96,8

24

2,9

2010

677

0,44

659

97,3

15

2,2

Susceptibilidad de Streptococcus pneumoniae aislados de

cuadros invasivos (n786)
Instituto de Salud Publica de Chile, ao 2010
Ceftriaxona meningitis (CIM)
Grupo de edad

Sensibles

Ceftriaxona no meningitis (CIM)

Intermedia

Resistente

Sensibles

%
14,3

Intermedia

Resistente

72

64

88,9

9,7

1,4

< 12 meses

21

17

81,0

4,8

12-23 meses

13

11

84,6

7,7

7,7

90

79

87,8

11

12,2

0,0

24-59 meses

62,5

0,0

37,5

78

66

84,6

11

14,1

1,3

5 a 14 aos

100,0

0,0

0,0

41

41

100,0

0,0

0,0

15 a < 60 aos

37

34

91,9

5,4

2,7

171

164

95,9

3,5

0,6

60 aos

17

17

100,0

0,0

0,0

172

160

93,0

4,7

2,3

Sin edad

100,0

0,0

0,0

53

50

94,3

3,8

1,9

109

97

89,0

3,7

7,3

677

624

92,2

45

6,6

1,2

Total

Eritromicina (KB o CIM)

Grupo de edad

Sensibles

SXT (KB o CIM)

Intermedia

Resistente

93

46

49,5

0,0

47

50,5

12-23 meses

103

45

43,7

0,0

58

24-59 meses

86

47

54,7

1,2

38

5 a 14 aos

50

46

92,0

0,0

15 a < 60 aos

208

171

82,2

60 aos

189

143

75,7

< 12 meses

Sin edad
Total

93

29

31,2

12

12,9

52

55,9

56,3

103

39

37,9

15

14,6

49

47,6

44,2

86

22

25,6

19

22,1

45

52,3

8,0

50

18

36,0

18

36,0

14

28,0

0,0

37

17,8

208

105

50,5

46

22,1

57

27,4

0,5

45

23,8

189

100

52,9

30

15,9

59

31,2

57

42

73,7

3,5

13

22,8

57

26

45,6

15

26,3

16

28,1

786

540

68,7

0,5

242

30,8

786

339

43,1

155

19,7

292

37,2

Sensibles

Resistente
%

93

91

97,8

2,2

12-23 meses

103

101

98,1

1,9

24-59 meses

86

84

97,7

2,3

5 a 14 aos

50

50

100,0

0,0
1,4

15 a < 60 aos

208

205

98,6

60 aos

189

187

98,9

1,1

Sin edad

57

57

100,0

0,0

786

775

98,6

11

1,4

Total

Resistente

n
< 12 meses

Intermedia

Cloranfenicol (KB o CIM)

Grupo de edad

Sensibles

Mtodos de Concentracin Inhibitoria

Mnima

Streptococcus beta hemoltico

Grupo Piognico
Streptococcus pyogenes

Streptococcus agalactiae
Streptococcus equi subespecie equi
Streptococcus equi subespecie zooepidermicus
Streptococcus dysgalactiae subespecie dysgalactiae
Streptococcus dysgalactiae subespecie equisimilis
Streptococcus canis
Streptococcus iniae
Streptococcus porcinus
Streptococcus phoacae
Streptococcus didelphis
Streptococcus urinalis

Streptococcus pyogenes
Caracteristicas:
Cocaceas gram positivas dispuestas en cadenas
Son colonias blancas de 1-2 mm de diametro con
una marcada zona beta hemlisis
Anaerobios facultativos
Inmoviles no formadores de esporas, capsulados
Son catalasa negativa
Rango de temperatura de crecimiento es de 25-45C
(optimo 37 C)

Streptococcus pyogenes
Pruebas de laboratorio:

Colonias beta-hemolticas con dimetro mayor a 0.5 mm

Catalasa
PYR
PYR
+
LAP
+
+
Grupo de Lancefield A (ao 1933)
VP
Bacitracina 0,04U
Sensible
Cotrimoxazol
Resistente
DNAsa
Positiva

Streptococcus pyogenes
Factores de Virulencia
Protena M: principal factor de virulencia, confiere
resistencia a la fagocitosis por los polimorfonucleares,
en base a esta protena podemos serotipificar a
S.pyogenes, existen mas de 124 serotipos ( emmgene sequence typing)
Protena F:adherencia y evasin del sistema inmune
Acido Lipoteicoico: unin a fibronectina
Enzimas: estreptoquinasas, DNAsas, amilasas,
esterasas y hialuronidasas
Toxinas: Estreptolisinas son hemolisinas (S y O)
capaces de lisar eritrocitos, leucocitos y plaquetas;
Exotoxinas pirognicas A, B y C (SpeA ,SpeB y SpeC)

Streptococcus pyogenes
Cuadros clnicos en orden de frecuencia:
Enfermedades supurativas
Faringitis
Escarlatina
Imptigo
Erisipela
Celulitis
Fascitis necrosante (gangrena estreptoccica)
Sindrome del shock txico estreptoccico
Otras: sepsis puerperal, linfangitis, neumona,
bacteriemia, endocarditis, meningitis y artritis.
Enfermedades no supurativas
Fiebre reumtica
Glomerulonefritis postestreptoccica

emm typing
Secuenciamiento del gen emm que codifica a protena M
Reemplaza el convencional mtodo serologico (1943)
Se analiza la secuencia nucleotidica NH2-terminal (regin
hipervariable)
La definicin de un nuevo tipo emm se basa en la
identificacin de mas de 160 bases nucleotidicas (mayor
a 95% de similitud con el gen emm de referencia)
La secuencia de emm types puede ser encontrada online
en:
http://www.cdc.gov/ncidod/biotech/strep/strepblast.htm.
Los tipos emm mas frecuentemente encontrados son:
emm1, emm3, emm4, emm6, emm12, emm28 y emm89.

emm types encontrados en cepas de Streptococcus

pyogenes (N62)
Laboratorio de Referencia ao 2010
10

10

Cantidad

4 4
3

3
2
1 1

1 1

1 2
m m1 8 9 8 0 m6 3 2 8 4 3 7
em em mm m m em mm m mm m3 m8 8 1 1 1 2 2 4 4 8
4
m m
e e
e em e m m
8 2 90
e e em em mm mm mm m m
e
e e
em em
emm types

Distribucin de Serotipo M de S. pyogenes por muestra

Laboratorio de Referencia de Cocaceas gram positivas
Ao 2010
SEROTIPO M

SANGRE

11

12

22

28

33

44

LIQ.
ARTICULAR

TEJIDOS

LIQ.
PERITONEAL

10
4
3

1
1

3
4

TOTAL

34

4
3

82

90

9
1

89

5
1

81

87

TOTAL

48
80

SECRECIONES

7
1

15

62

Streptococcus agalactiae
Caracteristicas:
Cocaceas

gram positivas dispuestas en cadenas

Catalasa negativas
Colonias de color blanco con tamao >0.5mm de
diametro, presentando una pequea beta hemolisis
Anaerobio facultativo
Crece mejor en presencia de 5% CO2 (capnofilos)

Streptococcus agalactiae
Factores de virulencia
Capsula:

Antifagocitaria, especificidad tipo, 10

antigenos capsulares
Beta hemolisina/citolisina: Lisis de clulas de
epitelio pulmonar
Acido Lipoteicoico: adherencia celular como
primer paso en la infeccin
Enzima hialuronato liasa (gen hylB): Participa
en la diseminacin rompiendo el acido hialuronico
de la matriz extracelular, tejido de placenta, tejido
fetal y liquido amnitico.

Patologas asociadas
*Es

un importante patgeno en neonatos y

mujeres embarazadas produciendo cuadros de
bacteremia, meningitis, neumona, shock sptico
y neutropenia.
*Causante de bacteriuria en mujeres embarazadas
*Causa cistitis, pielonefritis, uretritis en hombres,
mujeres no embarazadas y nios
*Infeccin de heridas, artritis.

Streptococcus agalactiae
Pruebas bioquimicas :
- Catalasa
- Ltex (C. Lancefield )
B
- Test de CAMP
+ (>98%)
- Hidrlisis de Hipurato de sodio +
- LAP
+
- PYR
-

Test CAMP

Hidrlisis de Hipurato

Prueba de CAMP
Streptococcus agalactiae (CAMP test positivo)
Staphylococcus aureus (ATCC 25923)
Arcanobacterium haemolyticum (CAMP reverso positivo)

Christie, Atkins, and Munch-Peterson, fue descrito en 1944.

Streptococcus agalactiae
Serotipificacin
La clasificacin serolgica est basada en la
identificacin de polisacridos ( Ia, Ib, II, III, IV,
V, VI, VII, VIII y IX) y protenas antignicas (C, R
y X)
Los serotipos mas comnmente aislados en
pases americanos son Ia, Ib, II y III
Serotipos VI y VIII han sido aislados en Japn
El serotipo III se asla con mayor frecuencia de
casos de sepsis neonatal y meningitis.

Serotipos de Streptococcus agalactiae segn muestra

Serotipos SAG

Sangre

LCR

Liquido
Articular

Secreciones

Total

Ia

23

27

Ib

II

11

17

III

61

11

76

IV

VI

VII

VIII

NT

Total

117

18

146

Resistencia de Eritromicina y Clindamicina en

Streptococcus pyogenes / Streptococcus agalactiae

Cl

Eritromicina y Clindamicina :S

Cl

Eritromicina : R y Clindamicina:S
Fenotipo M gen mef (macrolide efflux)

E
E

Cl
Cl

Cl

Eritromicina y Clindamicina :R
Fenotipo MLSc gen erm (erythromycin ribosomal
methylase)

Eritromicina y Clindamicina :R inducida

Fenotipo MLSi

Susceptibilidad Streptococcus pyogenes

ao 2009 n: 103
Laboratorio de Referencia

Fenotipos encontrados
M
1
MLSc 1

120
100

Resistencia a eritromicina 1.94%

Resistencia a clindamicina 0.97%

Cantidad

80
60

103

102

101

40

103
Sensible

20

Resistente
0

P
en
ic
ili
na
C
lin
da
m
ic
in
a
E
rit
ro
m
ic
in
V
a
an
co
m
ic
in
a

Antibioticos

Fenotipos encontrados
M
1
MLSc 8
MLSi 2

Susceptibilidad de Streptococcus agalactiae

ao 2009 n:136
Laboratorio de Referencia
140
120
100
136

126

125

Resistencia a eritromicina 8.08%

Resistencia a clindamicina 7.35%

136

60
40

Sensible

20
0

10

11

en
ic
ili
na

C
lin
da
m
ic
in
a
Er
it r
om
ic
in
a
V
an
co
m
ic
in
a

Cantidad

80

Antibioticos

Resistente
0

Susceptibilidad de Streptococcus pyogenes

ao 2010 n:62
Laboratorio de Referencia

Fenotipos encontrados
M
2
MLSc 2

70
60
Cantidad

50
40

Sensible

30

62

58

60

62

62

Resistente

Resistencia a eritromicina 6.45%

Resistencia a clindamicina 3.22%

20

Va
nc
om

Ce
fo
ta
xi
m

ic
in
a

a
da
m
ic
in
C
lin

Pe
ni

ci
lin

Er
it r
om
ic
in

10

Antibioticos

Susceptibilidad de Streptococcus agalactiae

ao 2010 n:147
Laboratorio de Referencia

Fenotipos encontrados
M
3
MLSc 5
MLSi 2

160
140
100
80
60

Sensible

146

137

139

146

146

40

ic
in
a

Antibioticos

Va
nc
om

Ce
fo
ta
xi
m

om
ic
in
itr
Er

en
i

ci
lin
a

a
C
lin
da
m
ic
in
a

20

Cantidad

120

Resistente

Resistencia a eritromicina 6.16%

Resistencia a clindamicina 4.79%

Streptococcus - hemolticos
Grupos A,C, G con dimetro de colonia mayor a 0,5 mm

Streptococcus dysgalactiae
subespecie equisimilis :
- Catalasa
- PYR
- Ltex (Grupo Lancefield) A,C,G
- VP
- Bacitracina 0.04u
Resistente

Streptococcus - hemolticos no piogenico

Grupos A, C, G con dimetro de colonias menor a 0,5 mm

Streptococcus anginosus (A, C, G, F, )

Streptococcus constellatus ( A,C, F, )
Streptococcus intermedius (F)
- Catalasa
- PYR
+
+
- VP
- Trehalosa
+
- Sorbitol
Voges-Proskauer

Identificacin Streptococcus
- hemolticos
Grupo
Lancefield

Tamao
de
colonia

Especies

PYR

VP

Hidrlisis
almidn

Sorbitol

CAMP

Grande

S. pyogenes

A,C,G,F

Pequea
<5mm

Streptococcus
grupo anginosus

A,C,G

Grande

S. dysgalactiae
subesp
equisimilis

Grande

S. agalactiae

Grande

S. dysgalactiae
subesp
disgalactiae

Grande

S. equi subesp
equi

Grande

S. equi subesp
zooepidermicus

Control de Calidad
Staphylococcus aureus ATCC 25923

Streptococcus pneumoniae ATCC 49619

Staphylococcus aureus ATCC BAA-976 (Test D Negativo)
Staphylococcus aureus ATCC BAA-977 (Test D Positivo)
Streptococcus pyogenes ATCC 21547 (Latex A)
Streptococcus agalactiae ATCC 13813 (Latex B)
Streptococcus dysgalactiae sp dysgalactiae ATCC 27957 (Latex C)
Streptococcus dysgalactiae sp equisimilis ATCC 12394 (Latex G)

Comentarios generales
Streptococcus grupo viridans aislados de sangre
u otros sitios estriles (LCR) se debe hacer
estudio de susceptibilidad a PEN o AMP solo
por mtodo Concentracin Inhibitoria Mnima.
Streptococcus
beta hemolticos del grupo
anginosus se les debe hacer antibiograma de
grupo viridans.

 Los test de susceptibilidad a penicilina y otros lactmicos aprobados por la FDA para el
tratamiento de Streptococcus pyogenes o
Streptococcus agalactiae no es necesario
realizarlo de rutina, como tambin para
vancomicina, ya que no se han reconocido
cepas resistentes. Cualquier cepa considerada
no susceptible DEBE enviarse al laboratorio de
referencia para su confirmacin.

MUCHAS GRACIAS

palarcon@ispch.cl