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TEMA3PROTEINASalumno PDF
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Turbidimetra y nefelometra
Inmunodifusin
Electroforesis
Inmunoelectroforesis
Inmunoelectroforesis en cohete
Inmunofijacin
Cromatografa
1.1.
1.2.
Aspectos prcticos:
Tanto en los reactivos como en el suero pueden existir partculas que
produzcan una dispersin de luz no deseada ej. lipoprotenas,
quilomicrones Tambin puede interferir la suciedad.
La intensidad de la luz dispersada aumenta al disminuir la ?. Las
protenas suelen tener un pico de absorcin en el ultravioleta (? <
300nm) y los cromgenos del suero entre 400-425nm; por todo ello
se suele trabajar a ? que oscilen entre 320-380nm y 500-600nm.
Muy frecuentemente, para cuantificar protenas concretas, se utilizan
anticuerpos que reaccionan con dichas protenas de la muestra, en este
caso se habla de inmunoturbidimetra e inmunonefelometra. Para
enteder estas tcnicas necesitamos tener claro unos conceptos previos:
Inconvenientes de la inmunodifusin:
1. Es necesario que las concentraciones de Ag y Ac sean similares o de
lo contrario no se alcanza la equivalencia y no se forma el
precipitado. El precipitado solo se forma en el punto de equivalencia o
cuando hay un ligero exceso de Ag.
2. Las molculas ms pequeas migran con ms rapidez que las de gran
tamao y conforme la migracin contina el precipitado puede
redisolverse y volverse a formar de acuerdo con los cambios de
concentracin de Ag o Ac en el gel.
3. Si hay grandes cantidades de Ac, el antgeno no se difunde muy lejos
antes de alcanzar la equivalencia y el anillo es ms grueso o espeso.
3. ELECTROFORESIS
Una de las tcnicas ms sencillas para la separacin (y posterior
cuantificacin) de protenas es la electroforesis (tcnica en la cual una
partcula cargada se hace desplazar a travs de un medio aplicando un
campo elctrico).
Cuando se aplica un campo elctrico a un medio que contiene partculas
cargadas, las partculas cargadas negativamente migran hacia el nodo o
polo positivo mientras que, las cargadas positivamente migran hacia el
electrodo negativo (ctodo).
Este principio se puede aplicar para separar las fracciones de protenas
puesto que los aminocidos (aa) constituyentes de la protenas, y por tanto
las protenas, son compuestos anfteros que se comportan como cidos
4. INMUNOELECTROFORESIS
La inmunoelectroforesis es una inmunodifusin en la que se aplica una
corriente elctrica para separar las protenas de la muestra.
Esta tcnica se realiza en dos fases:
6. INMUNOFIJACIN
La inmunofijacin consiste en la separacin electrofortica de las protenas
de una muestra seguida del contacto del gel con una tira de acetato de
celulosa impregnada con antisuero. La unin Ag-Ac da lugar a la formacin
de bandas de precipitacin visulalizadas tras lavar y teir. Es una tcnica
muy rpida que se utiliza especialmente en le deteccin de bandas
oligoclonales en lquido cefalorraqudeo.
Preguntas de revisin
1.
Si pretendiera cuantificar la concentracin de protenas en una muestra de
suero Qu mtodo empleara?
2.
3.
4.
5.
Un paciente con un mieloma:
a) Tendra hiper o hipoproteinemia?
b) Si quisiera identificar la inmunoglobulina que aparece alterada qu tcnica
podra utilizar?
c) Y si quisiera cuantificarla?
6.
Podra utilizar la espectrofotometra con luz U.V. para cuantificar protenas?
Conteste razonadamente.
7.
a)
b)
c)
d)
e)
8.
a)
b)
c)
d)
e)
La
La
La
La
La
La
nefelometra mide:
luz dispersada
luz transmitida
disminucin de la luz transmitida
disminucin de la luz dispersada
luz reflejada
9.
a)
b)
c)
d)
e)
La
La
La
La
La
La
turbidimetra mide
luz dispersada
luz transmitida
disminucin de la luz transmitida
disminucin de la luz dispersada
luz reflejada
10.
a)
b)
c)
10
11.
a)
b)
c)
d)
e)
12.
a)
b)
c)
d)
e)
13.
a)
b)
c)
d)
e)
14.
a)
b)
c)
11
e)
ay b
12