UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

PROGRAMA EDUCATIVO
QUMICA INDUSTRIAL
TRABAJO RECEPCIONAL MODALIDAD TESIS

IDENTIFICACION DE LOS
MICROORGANISMOS PRESENTES EN LA
CORTEZA DE Acacia angustissima (TIMBRE)
PRODUCTORES DE ALCOHOL ETLICO
PRESENTA
ZULIMA JOYSE RODRIGUEZ HERRERA
ARACELI ORTIZ CELISEO
DIRECTORA
Q.I ELVIRA ROMN GARCA

ORIZABA, VER.

FEBRERO, 2009

AGRADECIMIENTOS Y DEDICATORIAS

AGRADECIMIENTOS DE ZULIMA JOYSE RODRGUEZ

HERRERA.
Agradezco a la institucin:
Universidad veracruzana,
Durante estos cuatro aos y medio
Donde adquir conocimientos
Que forman profesionales y personas exitosas.

Gracias a mi asesora de tesis

QI. Elvira Romn Garca
Por su paciencia, apoyo incondicional
Y tiempo que me brindo y ensearme
Que de los errores tambin se aprende
Nunca lo olvidare.

Agradezco a mis maestros por ensearme

Y compartirme sus conocimientos,
Que han de formarme como una qumica industrial
Y que Dios los bendiga.

DEDICATORIAS DE ZULIMA JOYSE RODRIGUEZ HERRERA.

Agradezco a Dios, por

A mi padre que es un poco enojn y

Acompaarme en cada momento,

estricto le doy gracias por su apoyo,

De mi vida, darme la sabidura

Y sus regaos, gracias a eso he llegado

y entendimiento,

a realizar mi meta ya que es la mejor

Y haber logrado mi meta

herencia que me pueden dar te quiero

Ya que si n su ayuda,

Mucho.

No lo habra logrado
Todo se lo debo a mi creador

Gracias a una persona muy especial,

Adems de su infinito amor y bondad.

Que me brindo su apoyo, y estuvo conmigo

en

No se como expresarlo,

Las buenas y malas, medi su compresin y

Porque gracias a su apoyo y consejos

su enseanza, gracias German!

Y palabras de aliento, De si puedes!,

No te rindas! Y A su amor, comprensin

Gracias a mi amiga Araceli

Lo logre! te quiero mucho Mami

Que a pesar de nuestros enojos,

Siempre me brindo su apoyo y comprensin

A una persona muy especial, a Mi hermana,

gracias, por escucharme y apoyarme y darme
Palabras de aliento, te quiero mucho.

Gracias a todos mis amigos que me apoyaron,

Especialmente a tere, que me brindo su confianza,
Apoyo, pero sobre todo amistad, tqm.

Te voy a extraar amiguita!

AGRACEDECIMIENTOS DE ARACELI ORTIZ CELISEO

AGRADEZCO ala Institucin que me acogi en estos 4 aos y medio (Facultad de ciencias
Qumicas), en los que medio apoyo, formacin, enseanza y superacin, en ella aprend que los
valores son importantes para la formacin del profesionista (que ahora ser), ahora se que es mi
deber llevar en alto este nombre por donde quiera que me encuentre y llevar acabo estos valores
inculcados.

Alos maestros que me transmitieron sus conocimientos y consejos, que me ensearon a forjarme
metas y poderlas alcanzar, que me dieron su apoyo sin condicin, adems de amistad y
motivacin, ustedes maestros han sido mi ejemplo a seguir. Gracias!. Que Dios los bendiga y los
siga iluminando con su Espritu para seguir ejerciendo su profesin.
Q.I Magdalena Luna, Dra. Rosalba Ortega, M.C Josu del ngel Zumaya, Q.I Daniel Ramirez
Q.I Manuel Onesimo , Q.F:B Maria Elena Lpez, Dra. Marina Guevara

A mi directora de tesis, Q.I Elvira Romn Garca que no solo fue directora del trabajo
Recepcional, si no tambin de mi vida como estudiante, yo se que este trabajo tambin se lo debo
a usted, gracias por todos los momentos de amistad, de apoyo incondicional, de regaos, de
motivacin y de consejos, ya que todo esto ha servido en mi formacin como persona y ahora como
profesionista que voy a hacer. Que Dios la bendiga y que le multiplique todo lo que me dio, que la
cuide en todo momento, mis mejores deseos para siempre. La quiero mucho.

DEDICATORIAS DE ARACELI ORTIZ CELISEO

Le dedico este triunfo a mi Dios, gracias mi seor por darme esta oportunidad, ste logro es por ti
y para ti. Gracias padre por darme fortaleza, sabidura e inteligencia en este proyecto de mi vida,
gracias por acompaarme siempre y no dejarme en las dificultades, por levantarme en mis
debilidades y amarme todos los das, te amo seor.
A mi mam: Celia Celiseo Almanza
Mami: te dedico ste triunfo que s que tambin lo sientes tuyo.
Gracias por ser el pilar de mi vida, en el cual me he sostenido todo este tiempo, gracias por
apoyarme en mis decisiones, en mis errores y ayudarme a superar en mis fracasos, mamita tu sabes
que te amo y que dara mi vida por m como t la has dado por m y quiero que sepas que pase lo
que pase, siempre estar en mi mente y en mi corazn.
A mi pap: Carlos Ortiz Navarro.
Papi: gracias por todo lo que me ha dado, sus consejos, sus regaos, pero sobre todo por
consentirme tanto, le dedico este logro tan importante en mi vida y se que tambin en la suya, que
Dios lo bendiga y lo cuide siempre, recuerde que lo amo mucho y que sin usted, no se que sera de
mi, gracias papi!
A mis hermanos: Carlos, Javier, Heriberto, Daniel, Zayra.
Gracias por su apoyo incondicional, gracias por su compresin y cario, solo les puedo decir que
los quiero muchsimo, este triunfo tambin es para ustedes y para poderles decir que S se puede!
Recuerden que cuentan conmigo par todo, nunca se den por vencidos.

A mis amigos:
Como no puedo mencionar a todos, ya que si no alcanzara la hoja, solo les puedo decir que
gracias por su apoyo, por su compresin, motivacin, pero sobre todo su amistad, solo les puedo
decir gracias y que los quiero mucho.
A mi mejor amiga: Zulima Rodrguez Herrera
S que a lo largo de nuestra amistad hubo enojos, disgustos, pero que tambin muchas alegras,
gracias por soportarme todo, nunca olvidare tus berrinches y tu amistad y tus enojos, te quiero
mucho y te deseo que tu vida sea exitosa, llena de bendiciones y alegras, sigue adelante y nunca
te des por vencida, siempre que veas esta tesis, recuerda que las cosas cuestan pero que Si se
puede!

TODO LO PUEDO EN CRISTO POR QUE EL ME FORTALECE

Fil. 4, 13

INDICE GENERAL
INDICE DE FIGURAS Y TABLAS
CONTENIDO
INTRODUCCION
Objetivo general
Objetivo especfico
Justificacin
Hiptesis

PGINA.
1
3
3
3
4

I
1.
1.1
1.2
1.3
1.4
1.4.1
1.4.2
1.4.3
1.4.4
1.5
1.6
1.7
1.7.1
1.7.2
2.
3.
3.1
3.1.1
3.1.2
3.2
3.3
3.3.1
3.3.2
3.3.3
3.4
4.

ANTECEDENTES
rbol Acacia Angustissima (timbre)
Historia
Descripcin
Distribucin
Usos
Medicina
Propiedades antinutritivas de la Acacia angustissima
Toxicidad
Factores antinutritivos mayores en la Acacia angustissima
Metabolismo primario y metabolitos primarios
Metabolismo secundario y metabolitos secundarios
Fitoqumica de la Acacea
Alcaloides
DMT (N,N-dimetiltriptamina)
Biocombustibles
Levaduras y fermentacin
Clasificacin
Familia de las Endomycetaceae
Familia Endomycetoideoe
Aislamiento de las levaduras
Identificacin de las levaduras
Caractersticas morfolgicas
Caractersticas fisiolgicas
Caso particular de la Rafinosa
Saccharomyces cerevisiae
Mtodos de obtencin de alcohol

5
6
6
7
9
11
11
11
11
12
14
14
18
18
32
35
36
38
38
38
39
40
40
43
45
48
49

II

DESARROLLO EXPERIMENTAL

53

III

RESULTADOS Y DISCUSION

62

CONCLUSION

82

ANEXOS
Sistemas de Identificacin microbiana por multipruebas
Galera API 20

84
85

1.

REVISION BIBLIOGRAFICA

92

INDICE DE FIGURAS
FIGURA
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41

CONTENIDO
Acacia angustissima (Mill.) Kuntze
Distribucin de Acacia angustissima
Estructura del cido -acetil-2,4-diamino butrico (A-DABA)
Metabolismo de compuestos, en negro se encuentran los
metabolitos primarios y en gris los metabolitos secundarios.
Acacia alpina
Acacia aneura
Acacia angustissima
Acacia aroma
Acacia auriculiformis
Acacia baileyana
Acacia berlandieri
Acacia catechu
Acacia caven
Acacia concinna
Acacia confusa
Acacia constricta
Acacia cornigera
Acacia cultriformis
Acacia farnesiana
Acacia greggi
Acacia horrida
Acacia implexa
Acacia karroo
Acacia longifolia
Acacia maidenji
Acacia mangium
Acacia melanoxyon
Acacia mellifera
Acacia nilotica
Acacia phlebophylla
Acacia podalyriaefolia
Acacia polyacantha
Acacia pycnantha
Acacia retinodes
Acacia rigidula
Acacia roemeriana
Acacia salicina
Acacia schaffneri
Acacia Senegal
Acacia seyal
Acacia sieberiana

PGINA
8
9
13
16
18
19
19
19
20
20
20
21
21
22
22
22
23
23
24
24
25
25
25
26
26
26
27
27
27
28
28
28
29
29
29
29
30
30
30
30
31

II

42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73

Acacia simplex
Acacia tortilis
Estructura qumica de la Harmala
Estructura qumica de la DMT (dimetiltriptamina)
Saccharomyces Cerevisiae levadura modelo
Clula de Saccharomyce pombe (a). Tipo de interfase celular
(b, c).
Rafinosa
Grfica del tiempo de fermentacin de Saccharomyces
Cerevisiae
Fases de crecimiento de Saccharomyces Cerevisiae
Plan de trabajo
Identificacin de la levadura mediante la prueba de
fermentacin de carbohidratos
Pruebas bioqumicas
Identificacin de la levadura
Cuantificacin de levadura
Medios de cultivo a) APD b) ACE
Tincin negativa
Tincin de esporas
Tincin negativa
Tincin de Gram.
Cuantificacin de levaduras utilizando cuenta colonias
Cuadrcula de la cmara de Neubauer
Cmara de Neubauer
Determinacin de la cintica microbiana utilizando diferentes
sustratos. Cuantificacin en ACE
Determinacin de la cintica en diferentes sustratos,
utilizando como medio base para cuantificacin APD
Comparacin de la cuantificacin microbiana en jugo de uva
utilizando APD y ACE
Comparacin del desarrollo microbiano en caldo nutritivo en
medio base de APD y ACE
Comparacin de la cuantificacin del caldo Saboraud en
medio base de APD y ACE
Determinacin de la cintica en caldo nutritivo
Cepa 7777673
Cepa 22466223
Resultados de la prueba bioqumica galera API 20
Cromatografa de alcaloides

31
31
32
32
37
39

Realizacin de solucin salina (1% de NaCl)

Colocacin de la muestra
Llenados de cpulas con parafina
Introduccin de la tira en una cmara hmeda de incubacin
Incubacin de la cmara

86
86
87
87
88

45
51
52
56
57
58
59
60
63
63
64
64
65
65
67
67
67
68
69
70
71
72
73
74
74
81

ANEXO
1
2
3
4
5

III

6
7

Interpretacin de resultados
Anotacin de resultados

90
91

INDICE DE TABLAS
TABLA
1

CONTENIDO
Clasificacin Taxonmica

Sinnimos con los que se conoce en Mxico

Clima y Suelo en condiciones naturales

10

Asimilacin y fermentacin de los glucsidos por las

levaduras del gnero Saccharomyces

47

Clasificacin cientfica de Saccharomyces Cerevisiae

49

Compuestos y aromas generados por Saccharomyces

Cerevisiae
Prueba de bioqumica Galera API

50

7
8

PGINA
7
8

61

Anlisis bioqumicos de los microorganismos aislados de

diferentes sustratos con Acacia angustissima (timbre)

66

Anlisis de la concertacin de alcohol etlico obtenido

73

10

Primeras pruebas preliminares en la corteza y tallo de Acacia

angustissima

75

Segundas pruebas preliminares en la corteza y tallo de

Acacia angustissima

76

Terceras pruebas preliminares en la corteza y tallo de Acacia

angustissima

77

13

Por ciento de extractos obtenidos

78

14

Por ciento de taninos obtenidos

78

15

Los Rf obtenidos se correlacionan con una muestra de

11
12

IV

cafena grado Merck

79

Identificacin de alcaloides, Rf obtenidos se correlacionan con

una muestra de cafena grado Merck

80

Identificacin de alcaloides con butanol-cido actico, los Rf

obtenidos se correlacionaron con una muestra de cafena
grado Merck

81

Pruebas que consta la galera

85

Comparacin de resultados con colores de lectura

89

16
17

ANEXO

INTRODUCCION

La actual globalizacin del mercado internacional determina una economa de gran

dinamismo y fuerte competencia, que obliga en el caso de los productores de alimentos, a
estar preparados para sus cambios y contingencias, inducindolos a diversificar sus
actividades hacia otros tipos de cultivos ms rentables, en un escenario donde se
aprovechan las ventajas comparativas de calidad y costos de produccin.
De acuerdo a esta apreciacin, Mxico posee una gran gama de condiciones agroecolgicas que favoreceran en alguna forma el establecimiento de cultivos no
tradicionales, de los cuales es posible obtener materia prima natural de alto valor y de
difcil obtencin mediante sntesis, sin considerar la posibilidad primero en el plano de la
investigacin bsica, los cultivos in vitro son capaces de producir compuestos secundarios
deseados, al permitir experimentos inaccesibles a nivel de la planta intacta, son
tericamente el medio ideal para el estudio de las rutas biosintticas que conducen a la
formacin de metabolitos secundarios; estos cultivos constituyen adems, una excelente
fuente de sistemas enzimticos y segundo la va biotecnolgica, conduce a la
manipulacin gentica en las plantas permitiendo seleccionar y mejorar rendimientos de
determinadas vas metablicas con grandes expectativas.
En la actualidad el ser humano ha disminuido su inquietud para investigar las plantas,
rboles, frutos, etc., y saber que beneficios otorgan al ser humano; en la sierra de
Zonglica y parte de sus alrededores, la gente ha observado que un rbol llamado Acacia
angustissima (timbre) al ponerlo en agua azucarada, dejndolo un par de das produce
alcohol pudiendo consumir esta mezcla como bebida embriagante.
La Acacia angustissima (timbre) ha sido investigado en Mxico desde hace ms de 10
aos y hasta la fecha se sabe que ste rbol tiene varios usos, como:

alivia el dolor estomacal.

limpia el aparato digestivo.

endurece la dentadura.

Inhibe a Escherichia coli y Staphilococcus aureus.

se utiliza como forraje para ganado.

sirve como lea.

regenera suelos erosionados.

Al obtener alcohol etlico mediante Acacia angustissima se introducira al pas en la

obtencin de biocombustibles de segunda y tercera generacin (aquellos combustibles
cuya fuente de origen no sea alimentaria). Los cultivos no alimentarios pueden crecer en
tierras marginales, inadaptadas para los de alimento, pero estos biocombustibles ms
avanzados requieren mayor desarrollo en prcticas agrarias y tecnologa de refinamiento.
Objetivo General:
Obtener alcohol a partir de una solucin de azcar inoculada mediante un mtodo
no tradicional con corteza del rbol de Acacia angustissima (timbre).
Objetivos especficos:
1: Cuantificar e identificar los efectos que actan en la obtencin de alcohol por medio de
la corteza de el rbol de Acacia angustissima (timbre).
2: Aislar, clasificar e identificar los o microorganismos causantes de la fermentacin del
azcar con Acacia angustissima (timbre).
3: Identificacin preliminar de metabolitos secundarios presentes en Acacia angustissima
(timbre)
JUSTIFICACION
Actualmente la fermentacin de los carbohidratos se obtiene utilizando cepas
puras de Saccharomyces cerevisiae sin embargo es necesario recordar que la inoculacin
de microorganismos artificiales en algunos sustratos no es el nico mtodo existente
durante la fermentacin. En forma natural durante muchos aos se ha obtenido el etanol
debido a la existencia de microorganismos en las frutas las cuales al alcanzar un nivel de
madurez e incremento de la Aw (actividad de agua) permite que los carbohidratos
generados durante el metabolismo primario sea aprovechado por los microorganismos
existentes en la fruta y de esta forma se genere etanol, tal es el caso de la
Saccharomyces en uva, pera, manzana, y Zimomona mirabilis en pia. Sin embargo es
muy factible que existan plantas que se desconocen las cuales en su interior pueden
contener actividad microbiana permitiendo con ello algunas transformaciones qumicas,
que pueden ser benficas para las personas o para la economa de un pas, considerando

que actualmente se padece un problema econmico ocasionado por la utilizacin de los

energticos, a nivel mundial se considera incrementar su produccin, la Unin Europea
proyecta disminuir el consumo de gasoil con un 5.7% de biodisel para el ao 2010.
Estados Unidos planea reemplazar el 20% del consumo de petrleo utilizando etanol,
Brasil fue un pionero en la utilizacin de biocombustible, hace treinta aos implement un
plan para reducir la dependencia del petrleo, ahora tiene excedentes de etanol como
biocombustible de primera generacin, es decir, obtenido directamente de la sacarosa, sin
embargo dado la biodiversidad del Estado de Veracruz es necesario buscar fuentes
alternativas mediante las cuales sea factible la obtencin de etanol mediante un proceso
en el cul sea generado como biocombustible de segunda generacin, es decir, donde la
materia prima para generarlo no provenga de alimentos y buscar tecnologas que no
contaminen al medio ambiente o que lo pongan en peligro de extincin, si es factible que
un microorganismo fermentativo permanezca viable en una corteza de un rbol a lo mejor
ser factible que genere enzimas que hidrlisis paulatinamente el sustrato principal de
este que es la celulosa, la cual a su vez est constituida por molculas de glucosa y
considerando que en la zona de Zonglica se produce alcohol etlico mediante una
tcnica no convencional, se proceder a investigar el mecanismo por el cual se obtiene a
partir del rbol de Acacia angustissima ( timbre), como una fuente alternativa para obtener
alcohol etlico.
HIPOTESIS
Ho: Al utilizar la corteza y tallo de las ramas del rbol Acacia angustissima (timbre) como
inculo en una solucin azucarada se obtiene alcohol etlico
H1: No se obtiene alcohol etlico al utilizar la corteza y tallo de la ramas del rbol Acacia
angustissima (timbre) como inculo en una solucin azucarada

CAPITULO l
ANTECEDENTES

1. RBOL Acacia angustissima (TIMBRE)

1.1 HISTORIA
Acacia es un gnero de arbustos y de rboles pertenecientes a la familia Fabaceae y
subfamilia Mimosoideae, fue descubierta por primera vez en frica por el botnico Suizo
Carlos Linnaeus en 1773, el nombre deriva del trmino griego (akis) debido a las
espinas agudas en este tipo de especie. Las Acacias son tambin conocidas como
rboles con tres espinas. (33)
Existen cerca de 1300 especies de Acacia en el mundo 960 de las cuales son nativas de
Australia desarrollan alrededor del trpico en regiones sobre ambos hemisferios
incluyendo frica

el sur de Asia y Amrica. Tambin se conoce vulgarmente con el

nombre de acacia a muchos rboles leguminosos de otros gneros. Las Acacias

necesitan un lugar fresco para invernar, con temperatura comprendida entre 5 y 10 C. (27)
Algunas especies de Acacias poseen un sistema de defensa que algunos bilogos
consideran como nico en el Reino Vegetal, cuando ste es abordado por un depredador
de su follaje, la planta reacciona qumicamente liberando sustancias que son de
transferencia area y llegan a las plantas vecinas "dando la alarma"; de inmediato el resto
de los ejemplares comienza a segregar en sus hojas una sustancia txica -stas cambian
de color oscurecindose- que es daina en el contacto e ingestin y hasta mortal para el
depredador animal, pudiendo daar a una jirafa o intoxicar mascotas (Botanicals 1986, N
133) (26)
Esta reaccin es temporaria, an as debe seleccionarse apropiadamente la especie de
Acacia en el mbito de la Jardinera, a efectos de evitar estos efectos sobre animales y
personas.
Acacia angustissima en Amrica se cree que se ha originado en Belice. En su entorno
natural el rbol crece en barrancas y en pastizales, crece mejore en las montaas y puede
no florear a bajas elevaciones, el rbol es capaz de resistir hasta 8 meses sin lluvia. (3, 29)

Es un rbol pionero fijador de nitrgeno, de races muy profundas, por lo que es muy til
para reducir la erosin y mejorar el suelo. En la regin central y occidental de Guatemala
se utiliza para ramoneo del ganado, en Honduras es apreciado por su madera, lea,
postes y productos medicinales. Las Acacias producen muchas flores y es muy valiosa
como planta melfera. Las comunidades mayas de Yucatn y Mxico, lo usan para lea,
forraje, medicina y apicultura, en Mxico se utiliza el fruto ocasionalmente como alimento
para inducir la fermentacin del pulque, a nivel industrial para curtir pieles y la corteza
para tratamiento de la diarrea y reumatismo. La raz masticada y en infusiones se utiliza
para grgaras en el tratamiento del dolor de garganta y afianzar la dentadura.

1.2 DESCRIPCIN (25)

Porte: Es un rbol de 4-7 m de altura, aunque alcanza hasta 10 metros de altura y 25 cm.
de dimetro. En el campo se distingue por ser una de las acacias que no tiene espinas ni
glndulas en los pecolos de las hojas.
Copa: esparcida y redondeada, pertenece al reino plantae y divisin magnoliophyta segn
se describe su taxonoma en la tabla 1.

Tabla 1 Clasificacin Taxonmica

Reino
Divisin
Clase
Orden
Familia

Plantae
Magnoliophyta
Magnoliopsida
Fabales
Leguminosa

Subfamilia
Tribu
Gnero
Especie

Mimosoideae
Acacieeae
Acacia
angustissima.

(25, 28)

La Acacia angustissima se conoce en Mxico con el nombre vulgar de timbre y se dice

que este nombre se le atribuye debido a que al reventar sus vainas y soltar sus semillas
produce un sonido similar a un timbre, sin embargo en otras regiones se le conoce con
diferentes sinnimos como se demuestra en la tabla 2

Tabla 2 Sinnimos con los que se conoce en Mxico

NOMBRE COMUN
Cantem
Cheramusco
Day
Kantemo
alo de pulque
Shisich
Timbe
Timbrillo
Xaax
Yaga-up
Barbas de chivo
Guajillo
Timbre

(9, 10)

LUGAR DE ORIGEN
Tabasco
Pichucalco, Chiapas.
Sinaloa
Lengua maya, Yucatn.
Oaxaca
Chilico-Huejuntlan, Hgo.
Baja California, Oaxaca, San Luis Potos,
Tuxtla Gutirrez y Chiapas
Tuxtla Gutirrez, Chiapas.
Lengua maya en Yucatn.
Lengua Zapoteca en Oaxaca.
Huasteca, Potosina.
Sinaloa
Veracruz

Hojas: con 6-15 pares de pinas y hasta 60 o ms pares de hojuelas por pina; hojuelas de
unos 6mm de largo y 1mm de ancho, con el nervio central muy excntrico.

Flores: blancas, que junto con el follaje dan al rbol un color grisceo como se muestra
en la figura 1

Figura 1 Acacia angustissima (Mill.) Kuntze

Fruto: es una vaina aplanada y muy delgada, de 4-8 cm. de largo y de 3 a 12 mm. de
ancho; semillas pequeas, aplanadas y de color caf.

Forraje: algunos anlisis reportan un alto contenido de taninos en el follaje, baja

palatabilidad y aparentemente poco valor nutricional para el ganado. En sistemas
agroforestales con maz se ha encontrado que como abono no aporta mucho nitrgeno al
cultivo actual ya que la biomasa no se degrada fcilmente, pero tiene el potencial de
liberar nitrgeno para cultivos subsecuentes.
1.3 DISTRIBUCIN. (25)
El rbol de Acacia angustissima (timbre) se encuentra principalmente en la regin de
Mxico, Amrica Central y Europa como se muestra en la figura 2

Figura 2 Distribucin de Acacia angustissima

(30)

La especie tolera un amplio rango de climas y se le encuentra desde los bosques de roble
de altas montaas hasta las tierras bajas secas de Mxico, en altitudes que van de 0 a 2
700 m (Tabla 3). Su distribucin natural se extiende desde el sur de los E.U. pasando por
todos los pases de Amrica Central (de donde es originaria) hasta Colombia.
Desarrolla mejor en suelos de textura ligera a media, con buen drenaje aunque tolera
suelos cidos infrtiles, es tolerante a sequas, sombra y heladas.

Tabla 3 Clima y Suelo en condiciones naturales

CLIMA

Pluviometra
Estacin seca
Altitud
T. mx. Media
T. min. media
T. media anual

500- 3500 mm
0 - 7 mm
0 - 260 m
30- 36 C
10- 20 C
18 28 C

(25)

SUELO

Suelos
Textura
pH
Drenaje
Pendiente

Amplio rango, incluso

infrtiles y cidos
Ligera mediana
cido a neutro
libre
Desde plana a fuerte

Silvicultura
La semilla se almacena a baja humedad y temperatura. En algunos viveros se ha
mejorado el porcentaje de germinacin con un pre-tratamiento de inmersin de la semilla
en agua durante 12 horas inmediatamente antes de la siembra. (25)
Propagacin
No existe mucha experiencia con esta especie a nivel de vivero, pero dada su alta
regeneracin puede ser producida fcilmente mediante tcnicas tradicionales. La semilla
se debe sembrar superficialmente. En ensayos en Indonesia, la baja germinacin
obtenida se atribuy a una siembra demasiado profunda, en Papa Nueva Guinea, las
plntulas se producen en bolsas, sin problemas y estuvieron listas para su traslado al
campo seis meses despus de la siembra. (25)
Plantacin
Puede ser establecida mediante siembra directa, plantas en bolsa o por regeneracin
natural. En sistemas de cultivo en callejones en combinacin con camote (Ipomoea
batatas), se ha plantado a 50 cm. de distancia entre plantas y 6 m entre callejones. (25)

10

Manejo
La especie se regenera rpidamente; puede ser manejada con podas altas o por rebrotes
de tocones. En sistemas de cultivo en callejones de Papa Nueva Guinea, a las 6-8
semanas se realiz una poda a 1 m de altura y todo el follaje removido fue regresado al
sitio como mulch, este proceso puede repetirse a intervalos similares, ya que la especie
rebrota con facilidad. (25)
1.4 USOS
1.4.1 Medicina
Los indgenas mayas Tzotzil y Tzeltal de Mxico usan la Acacia angustissima para tratar
problemas en el tracto digestivo, dolor de dientes, artritis y reumatismo, tambin se ha
demostrado que inhibe el crecimiento de Escherichia coli y Staphilococcus aureus. (41)
1.4.2 Propiedades antinutritivas de Acacia angustissima
Muchas plantas han desarrollado estrategias para protegerse en contra de la depredacin
con herbvoros e insectos por medio de la produccin de metabolitos que afectan la
palatabilidad de la planta, interfieren con la digestin o tienen efectos txicos directos en
el animal. El efecto antinutritivo de la Acacia angustissima ha sido investigado en
rumiantes y animales monogstricos y parece que ambos redujeron digestibilidad y la
toxicidad puede limitar el potencial de esta planta como un suplemento de forraje. (18,31)

1.4.3 Toxicidad
El primer reporte de toxicidad fue en ovejas las cuales murieron despus de alimentarlas
con hojas de Acacia angustissima secadas al sol y vainas (300g por da) por varias
semanas. Los sntomas de toxicidad reportados fueron presionado de cabeza, presin
generalizada, rechinar de dientes, espuma en la trompa, temblores y sacudidas del
cuerpo. Exmenes post-mortem revelaron exceso de fluido en las cavidades abdominal,
torxica y peri-cardial, hgado moteado y filamentoso o desmenuzado, hemorragia en el
abomaso sobre las superficies del corazn y riones. Recientemente la toxicidad de la

11

Acacia angustissima en corderos fue investigado usando hojas que haban sido tratadas
con 70% de acetona acuosa, y el residuo seco del material extrado en el 70% de acetona
acuosa. Durante la prueba, los animales consumieron las hojas de Acacia angustissima y
una combinacin de las hojas tratadas y del residuo, algunos animales murieron a los 3 a
5 das. Sin embargo, otros animales los cuales fueron alimentados ya sea con las hojas
tratadas o con el residuo no mostraron efectos de enfermedad. Los resultados de este
estudio implican que el mecanismo de la toxicidad de la Acacia angustissima es complejo
y que ms de un factor puede estar implicado. En un estudio en ratas que las alimentaron
con una dieta conteniendo 75g/Kg. de hoja de Acacia angustissima las ratas tuvieron una
ingesta reducida y un aumento de peso diario promedio en comparacin con la dieta
controlada, pero no desarroll seales de toxicidad. Mientras que pocos casos de
toxicidad han sido reportados, han existido muchos reportes en la literatura donde los
animales se alimentaron con Acacia angustissima con una dieta que contiene menos de
300g/Kg. sin sntomas de toxicidad. Estos resultados y otras pruebas de alimentacin
indican que las seales clnicas de toxicidad no ocurren en rumiantes que son
gradualmente adaptados a la alimentacin de Acacia angustissima en menos de 300g/Kg.
de la dieta. Se requiere de una investigacin posterior para establecer el hecho de que la
Acacia angustissima debera ser considerada como potencialmente txico para rumiantes
cuando son alimentados con altas tasas en la dieta. (18)
1.4.4 Factores antinutritivos mayores en la Acacia angustissima
Se efectuaron pruebas alimenticias con Acacia angustissima en ovejas enfocado en la
influencia de taninos condensados, y se concluyo que otros factores diferentes a estos
compuestos pueden ser los contribuyentes a la toxicidad. Los sntomas observados en
ovejas suplementadas con Acacia angustissima aparece consistente con la toxicidad
causada por el aminocido no protenico cido 2,4 diaminobutrico (DABA) en Lathyrus
sylvestris, el aminocido no protenico, cido acetil 2,4 diaminobutrico (A
DABA), oxalil albizzin, acido 2,3 diaminopropinico (DAPA) y cido 2 amino 4N
ureico propinico (albizzina), cido oxalildiaminobutirico y cido oxalildiamino propinico
(ODAPA) han sido detectados en las hojas y/o semillas de la Acacia angustissima. El
aminocido no protenico predominante, A DABA (figura 3) vara en concentracin entre
181 y 293g/Kg. de materia seca de varias adhesiones de Acacia angustissima mientras

12

que el aminocido restante estaba presente en menores cantidades excepto por el oxalil
albizin el cual estaba presente en menos de la mitad de la concentracin de A DABA.
Anlisis preliminares indican que otros dos aminocidos no protenicos estn presentes
en las semillas de vainas tiernas de Acacia angustissima pero no estn presentes en las
hojas. (18)

Figura 3 Estructura del cido -acetil-2,4-diamino butrico (A-DABA)

(18)

Estos aminocidos necesitan ser identificados para determinar si tambin son

potencialmente txicos porque las semillas y vainas podran ser tambin alimento para
rumiantes como fuente de protena.
Investigaciones sobre la toxicidad de estos aminocidos y sus relaciones en estudios de
laboratorios en animales monogstricos han demostrado la toxicidad potencial de estos
compuestos si no son transformados en el rumiante o no son completamente
metabolizados por los microorganismos de los rumiantes. La forma desacetilada de A
DABA es DABA la cual causa neurotoxicidad en ratas, sus sntomas incluye parlisis,
hiperirritabilidad y convulsiones. En algunos casos donde resulta la neurotoxicidad DABA
puede ser detectado en cantidades sustanciales en el cerebro del sujeto. Se ha
demostrado que DABA competitivamente inhibe la ornitina transcarbamilasa, (una enzima
activa en el ciclo de la urea), por lo que el amonio se acumula y la toxicidad crnica por
amonio sucede. Hipotticamente se estableci que DABA es contribuyente a la toxicidad
de la Acacia angustissima y la cantidad de A ADABA en la Acacia angustissima es ms
alta que en los niveles de DABA en Lathyrus sylvestris.

13

1.5 METABOLISMO PRIMARIO Y METABOLITOS PRIMARIOS (32)

Se llama metabolismo primario de las plantas a los procesos qumicos que intervienen
en forma directa en la supervivencia, crecimiento y reproduccin como la fotosntesis, la
respiracin, el transporte de solutos, la translocacin, la sntesis de protenas, la
asimilacin de nutrientes, la diferenciacin de tejidos y en general la formacin de
carbohidratos, lpidos y protenas que intervienen en estos procesos o son parte
estructural de las plantas.
Debido a su carcter universal en el Reino de las plantas, los procesos que intervienen en
el metabolismo primario y sus metabolitos, se encuentran en todas las plantas sin
excepcin.
El concepto de metabolitos primarios fue creado en contraposicin al de "metabolitos
secundarios de las plantas", que no cumplen un rol directo en la supervivencia de la
planta y por lo tanto su ausencia no es letal para sta, aunque s cumplen importantes
roles de defensa, atraccin de polinizadores, entre otros. (31)
Son metabolitos primarios de las plantas los compuestos qumicos que intervienen en los
procesos mencionados: los aminocidos destinados a la formacin de protenas, los
nucletidos, los azcares, los acilglicridos.

1.6 METABOLISMO SECUNDARIO Y METABOLITOS SECUNDARIOS (24)

El metabolismo secundario compromete a aquellos procesos qumicos que son nicos
para una planta dada, y no son universales.
Dicho metabolismo es la qumica que conduce a la formacin de un producto natural.
Algunas porciones de esta qumica son comunes para un nmero de plantas diferentes o
familias de plantas, pero actualmente la qumica de productos naturales es usualmente
diferente de una planta a otra. Precursores qumicos comunes pueden conducir a
resultados diferentes.

14

Los metabolitos secundarios son molculas que no son necesarias para el crecimiento y
la reproduccin de las plantas pero que cumplen roles muy importantes en el reino
vegetal. A lo largo de la historia, los metabolitos secundarios de las plantas han sido
utilizados por la humanidad, ya que las plantas constituyen la mayor fuente de productos
orgnicos que se conoce, entre los cuales se distinguen principios activos para ser
usados en: frmacos, alimentos, plaguicidas y otros. Genricamente hablando, se hace
referencia a alcaloides, flavonoides, glicsidos, fitoesteroles, terpenos, aceites esenciales,
carotenoides, etc.
Glicsidos: Amigdalina, arbutina, cimarina, dafnina, digitoxina, escilareno, florizina,
frangulina, lanatsido, prunasina, rutina, salisina, sinigrina y uabaina.
Fitoesteroles: Estigmasterol y sitosterol
Alcaloides:

Pilocarpina,

pilocarpidina,

pilosina,

brucina,

ergonovina,

ergotamina,

fisotigmina, reserpina, estricnina, yohimbina, berberina, cefelina, codena, eritramina,

morfina, papaverina, anagirina, efedrina, anabasina, lupinina, espartana, efedrina,
cafena, teofilina, nicotina, ricinina, trigonelina, cinconina, atropina, cocana, cevadina y
escopolamina.
Aceites esenciales: Pineno, mirceno, carvona, tuyona, pulegona, carbacrol, chavicol,
safrol, citral y cidronela
Flavonoides: Quercetina, miricetina, kaemferol, morfina, isorhamnetina, apigenina,
luteolina, catequinas y epicatequinas
Fenlicos: cido glico, trans-resveratrol, cido clorognico, cido cumrico y cido
cinmico
Todos estos compuestos al ser extrados de su matriz tienen una utilidad potencial, ya sea
como: aditivos de alimentos, frmacos y plaguicidas de origen natural, estos ltimos de
gran aceptacin en los mercados de estas sustancias por su probada eficacia y
prcticamente inocuos al medio ambiente. (1,7)

15

Los metabolitos secundarios poseen otras caractersticas como son:

No tener funciones metablicas directas aparentes
Ser importantes para la supervivencia e interaccin con el entorno
Presentar diferente distribucin en el reino vegetal
No ser clasificados como secundarios basndose en su estructura, ruta
biogentica o tipo de distribucin.
Las plantas, a diferencia de los animales, mediante el proceso de fotosntesis son
capaces de elaborar materia orgnica a expensas de la luz solar, utilizando como materia
prima anhdrido carbnico (C02) y agua (H20) (Figura 4).

Figura 4 Metabolismo de compuestos, en negro se encuentran los metabolitos primarios y

en gris los metabolitos secundarios

(1,7)

16

Los carbohidratos materia orgnica rica en energa, es la base del sustento de todos los
procesos bioqumicos que ocurren en las clulas.
El proceso de utilizacin y transferencia de masa y energa que permite la vida en la
clula de todos los seres vivos, ya sea de animales o vegetales, es lo que se llama
genricamente metabolismo.
Se puede asegurar, en general que los compuestos primarios en las plantas se producen
en grandes cantidades utilizndose comercialmente y que tienen un bajo valor agregado,
tal es el caso de aceites de oleaginosas, cidos orgnicos de frutas y hortalizas, protenas
de leguminosas e hidratos de carbono provenientes de gramneas y tubrculos; que por lo
dems, son la base de la alimentacin de todos los animales y constituyen la razn de ser
de la agricultura y su tecnificacin.
Por el contrario, los productos finales del metabolismo de naturaleza anablica en las
plantas, son los compuestos secundarios, propios de cada especie, no son esenciales ni
de presencia universal, pero s, cumplen funciones estratgicas diversas, como:
1. Defensa frente a potenciales predadores y patgenos. Todo el ecosistema contiene una
gran variedad de bacterias, hongos, nematodos, insectos y animales herbvoros, incluso
otras plantas. Por su naturaleza las plantas no pueden evitar el ataque por movilizacin o
traslado, sino, por un lado, utilizan barreras de proteccin, como la cutcula y periderma,
cortezas duras, espinas, pelos custicos, hojas duras o correosas, y por otro, emplean
sustancias qumicas txicas y/o deterrentes, que repelen a herbvoros, insectos y
microorganismos.
2. Adaptacin al estrs ambiental, sustancias alelopticas que impiden el crecimiento de
otras plantas en una competencia por la subsistencia; pigmentos protectores implicados
en el desarrollo y fotosntesis; sustancias aromticas en las flores involucradas en la
polinizacin que son atrayentes o repelentes de insectos.

17

1.7 FITOQUIMICA DE LA Acacia

1.7.1 Alcaloides (16,17)
La Acacia tiene un nmero de compuestos orgnicos que defiende a la especie de pestes
y animales. Muchos de estos compuestos son psicoactivos en humanos, los alcaloides
encontrados en las Acacias incluyen a la dimetiltriptamina (DMT), 5 metoxidimetiltriptamina (5-MeO-DMT) y N-metiltriptamina (NMT)). Las hojas de las plantas tallos
y las races son algunas veces introducidas dentro de una bebida con MAOI y se
consume oralmente para curacin utilizada en ceremonias religiosas. En la mitologa
Egipcia esta asociado el rbol de la Acacia por sus caractersticas al rbol de la vida.

Acacias que contienen Alcaloides Psicoactivos

Acacia acuminata

Acacia adunca

(37, 38)

Arriba de 1.5% de alcaloides principalmente en hojas

triptamina

-metil-fenilamina, 2.4% en permiso

Principio activo en hojas

(34)

Figura 5 Acacia alpina

18

Cenizas se utilizan en pintura

(35)

Cerca del 2 a 6 % del peso seco de las hojas del

extracto etreo.

[23]

No se conoce si es psicoactivo.

Figura 6 Acacia aneura

-metil-fenil-etil-amina

(41)

NMT y DMT en hojas (1.1-10.2 ppm)

(35)

Figura 7 Acacia angustissima

Alcaloides de triptamina. Cantidades significativas de

triptamina en las semillas.

Figura 8 Acacia aroma

19

5-MeO-DMT en corteza de rbol

(57)

Figura 9 Acacia auriculiformis

0.02% triptamina y -carbolines, en las hojas,

Tetrahydroharman

(34, 35, 36)

Figura 10 Acacia baileyana

DMT, anfetamina, mezcalina, nicotina

(37)

Figura 11 Acacia berlandieri

20

DMT

(38)

y otras triptaminas en hojas y corteza

Figura 12 Acacia catechu

Triptaminas

Figura 13 Acacia caven

Acacia chundra

DMT y otras triptaminas en hojas y corteza

Acacia colei

DMT

0.3% de alcaloides en hojas y tallo, casi todas NAcacia complanata

metil-tetrahidroharman,

con

trazas

de

tetrahydroharman, algunas de triptamina.

21

Nicotina

(39)

Figura 14 Acacia concinna

DMT & NMT en hojas, tallo, corteza

0.04% NMT y 0.02% DMT en tallo

(34)

Tambin N,N-dimetiltryptamina N-oxida

(40)

Figura 15 Acacia confusa

-metil-fenilamina

(41)

Figura 16 Acacia constricta

Acacia coriacea

Cenizas se utilizan en pintura.

(54)

No se conoce si es

Psicoactiva.

22

Psicoactivo

(40)

Triptaminas

(43)

Figura 17 Acacia cornigera

Triptamina,

en

hojas

tallo

(34)

semillas.

Feniletilamina en hojas y semillas.

Figura 18 Acacia cultriformis

Acacia cuthbertsonii

Psicoactivo

Acacia delibrata

Psicoactivo

Acacia falcata

Psicoactivo pero menos del 0.02% de alcaloides

23

Trazas de 5-MeO-DMT

(41)

en frutas.

-metil-fenilamina, en flores. extracto etreo cerca del

2-6% de las hojas secas. Los alcaloides estn
presentes en la corteza y hojas. Las anfetaminas y
mezcalina tambin se encuentran en el rbol.

(43)

Figura 19 Acacia farnesiana

Acacia filiciana

Acacia floribunda

Se adiciona al pulque pero no se conoce si es

Psicoactivo

Triptamina, feniletilamina, en floresotros triptaminas,

feniletilamina

N-metil-- feniletilamina,

(57)

feniletilamina

Figura 20 Acacia greggii

Acacia harpophylla

Acacia holoserica

feniletilamina, hordeninea a una razn de

2:3 en

hojas secas, 0.6% en total

Hordenina, 1.2% en corteza

24

Psicoactiva

(54)

Psicoactiva

(45)

Figura 21 Acacia horrida

Figura 22 Acacia implexa

Acacia jurema

DMT, NMT

Psicoactiva

Figura 23 Acacia karroo

25

Acacia laeta

DMT, en las hojas

Acacia lingulata

Usada en pintura pero no se conoce si es Psicoactiva

0.2% triptamina en corteza, hojas, y en algunas flores,

feniletilamina in flores, 0.2% DMT en plantas.
Alcaloide Histamina.

(35)

Figura 24 Acacia longifolia

Acacia longifolia

Triptamina en hojas y corteza

Acacia macradenia

Triptamina

0.6% NMT y DMT en razn de 2:3 en tallos y corteza

ambos presentes en hojas

(34)

Figura 25 Acacia maidenii

Psicoactiva

(54)

Figura 26 Acacia mangium

26

DMT, en tallo y hojas, pero menos del 0.02% total de

alcaloides.

(36)

Figura 27 Acacia melanoxylon

DMT, en hojas

(34)

DMT, en hojas

(34)

Figura 28 Acacia mellifera

Figura 29 Acacia nilotica

Acacia nilotica
subsp. adstringens
Acacia obtusifolia

Psicoactiva, DMT en hojas

Triptamina, DMT, NMT, otras triptaminas, 0.4-0.5% en
corteza seca, 0.07% en tipos de ramas.

Acacia oerfota

Menos del 0.1% DMT en hojas, NMT

Acacia penninervis

Psicoactiva

27

0.3% DMT en hojas, NMT

(34)

Figura 30 Acacia phlebophylla

Triptamina en hojas,

[21]

0.5% a 2% DMT en corteza

fresca, feniletilamina, en cantidades traza.

Figura 31 Acacia podalyriaefolia

DMT en hojas

[21]

y otras triptaminas en hojas y

corteza

Figura 32 Acacia polyacantha

Acacia polyacantha

Menos del 0.2% DMT en hojas, NMT; DMT y otras

ssp. campylacantha

triptaminas en hojas y corteza

Acacia prominens

feniletilamina, -metil- feniletilamina

Acacia pruinocarpa

Las cenizas son usadas en pintura. No se conoce si

es Psicoactiva.

28

Las cenizas son usadas en pintura,

del 0.02% del total de alcaloides.

(36)

(54)

pero menos

No se conoce si

es Psicoactiva

Figura 33 Acacia pycnantha

DMT, NMT, nicotina,

(43)

pero menos del 0.02% total

de alcaloides encontrado.

(36)

Figura 34 Acacia retinodes

DMT,

NMT,

triptamina,

nicotina y otras.

anfetaminas,

mescalina,

(49, 50)

Figura 35 Acacia rigidula

-metil- feniletilamina

(47, 57)

Figura 36 Acacia roemeriana

29

Las cenizas son utilizadas en pintura.

(54)

No se

conoce si es Psicoactivo.

Figura 37 Acacia salicina

Acacia sassa

Psicoactiva

(42, 46)

-metil-feniletilamina, feniletilamina
mescalina tambin se encuentran.

Anfetaminas y

(43)

Figura 38 Acacia schaffneri

Acacia schottii

-metil- feniletilamina

(57)

Menos del 0.1% DMT en hojas,

(34)

NMT, otras

triptaminas. DMT en plantas, DMT en corteza.

Figura 39 Acacia senegal

DMT, en las hojas.

(34)

El extracto etreo de las hojas

secas contienen cerca de 1-7%.

(51)

Figura 40 Acacia seyal

30

DMT, en las hojas

(34)

Figura 41 Acacia sieberiana

DMT y NMT, en las hojas, tallo corteza y tronco

contiene 0.81% DMT y en corteza MMT

(34, 52)

Figura 42 Acacia simplex

Acacia taxensis

-methyl-phenethylamine

(57)

DMT, NMT, y otras tryptamines

(53)

Figura 43 Acacia tortilis

Acacia vestita
Acacia victoriae

Tryptamine, en las hojas y tallo , pero menos del

0.02% del alcaloide total

(36)

Triptaminas, 5-MeO-alquiltriptamina

31

Los metabolitos secundarios encontrados en Acacia angustissima fueron -metil-fenil-etilamina

(24)

, NMT y DMT en hojas (1.1-10.2 ppm)

1.7.2 DMT (N,N-dimetiltriptamina) (56)

En decreto del 18 de abril de 1991 para el pas de Argentina se encuentra prohibida, as
tambin la Repblica de Chile lo considera estupefaciente y esta considerado dentro de
las sustancias prohibidas en el decreto N 867 de 2007 En la Repblica mexicana se
encuentran prohibidas mediante el artculo 245 de la Ley General de Salud y a nivel
Internacional se encuentra prohibida desde el 5 de marzo de 1990 ya que es considerada
dentro de la lista 1 de drogas Internacionales.

Figura 44 Estructura qumica de la Harmala

Los Beta carbonilos son reversibles de la monoaminooxidasa (MAO-A) e inhibidores. Ellos

se encuentran en algunas plantas usadas para hacer ayahuasca (infusin de plantas que
inhiben MAO).

En altas dosis el alcaloide de harmala algunas veces es alucinogeno al

ser consumido

Figura 45 Estructura qumica de la DMT (dimetiltriptamina)

Este alcaloide fue sintetizado por primera vez en 1931 (Manzke), y aislado de dos plantas
distintas por investigadores independientes en 1946 (Gonalves) de la Mimosa hostilis y
en 1955 (Fish, Jonson and Horning) de la Piptadenia peregrina. Sin embargo, sus
caractersticas alucingenas se descubrieron hasta 1956 (Szra). Est presente en

32

diversos gneros de plantas de origen europeo o asitico como Acacia, Anandenanthera,

Mimosa, Piptadenia, Virola, Syrian rue y en algunas de las plantas sudamericanas con las
que se prepara la caoba, el yopo y la ayahuasca como Psychotria viridis, Psychotria
carthaginesis, B. rusbyana etc.
DMT son las siglas de su nombre qumico: diemetriltriptamina Por la rapidez con que se
presentan sus efectos y por su corta duracin, este alcaloide recibi durante los sesentas
el nombre de Businessmans trip (viaje del hombre de negocios).

Identificacin
La DMT es un slido cristalino, blanco, de olor acre, cuyo punto de fusin se alcanza a los
50C. Es un alcaloide difcil de conseguir en el mercado negro ya que no resulta
econmico sintetizarlo en pequeas cantidades. Hoy en da muchas personas han odo
hablar acerca de este psicoactivo, pero muy pocas personas saben donde pueden
encontrarlo y menos an, lo han probado.
Formas de adulteracin
Debido a la particularidad de sus efectos, es difcil adulterarla.

Farmacologa
Mecanismo de accin y formas de empleo
La DMT no tiene actividad cuando se administra oralmente a menos que est
acompaada de un inhibidor de la MAO, como sucede en el caso de la ayahuasca. Puede
ser inyectada por va intravenosa, aunque lo ms comn es fumar el alcaloide puro o
aspirarlo por la nariz en algn polvo fino hecho con plantas del amazonas como el yopo.
ste se prepara con las semillas del rbol del yopo (Anandatera peregrina) que se
humedecen, se fermentan y se mezclan con limaduras de caparazones de caracol. Una
vez seca la mezcla, se pulveriza finamente y se administra mediante un tubo largo
introducido a una fosa nasal en cuyo otro extremo otra persona sopla fuertemente para
hacer llegar el polvo a la nariz. Algunas tribus del Amazonas utilizan tabaco como aditivo
del yopo y otros utilizan plantas de la familia Virola en vez de Anandatera.

33

Sus efectos se presentan casi instantneamente despus de la primera aspiracin y

duran 15 minutos como mximo. Se cree que al igual que otras triptaminas, la DMT
interrumpe la recaptacin de serotonina provocando cambios en la esfera perceptual. D.
Christian, establece que la DMT puede ser un neurotransmisor y hallarse tambin en el
cerebro humano de forma natural
Dosificacin
Las dosis bajas van de 30 a 40 mg; las medias de 50 a 70 mg; y las altas de 80 a 100 mg.
No hay reportes de dosis letales.
Efectos psicolgicos y fisiolgicos
El investigador Douglas Rushkoff ofrece en su libro Cyberia esta interesante descripcin:
"Para aquellos que an intentan aplastar el ego en el olvido y descubrir el extremo mismo
de lo que significa ser capaz de sentir, la DMT es la nica respuesta no puede ser
descrita en trminos de magnitud, resulta ms sensato concebirla como una verdadera
llave hiperdimensional."
Al consumir esta droga es como ser disparado desde la punta de un can atmico... Los
pensamientos y las visiones se suceden a gran velocidad; una sensacin de abandonar o
trascender el tiempo y una sensacin de que los objetos han perdido toda forma y se
estn disolviendo en un juego de vibraciones caracterstico. El efecto puede ser la
transportacin instantnea hacia otro universo en un viaje sin tiempo La DMT es muy
interesante y extremadamente intensa, pero no necesariamente placentera.
Una descripcin clnica sobre sus efectos asegura que esta droga: generalmente se
caracteriza por provocar alucinaciones con los ojos abiertos o cerrados, y un extenso
movimiento en el campo visual. Hay dificultad para expresar los propios pensamientos, y
concentrarse en un tema dado. Usualmente hay cambios de humor hacia la euforia con
risas inmotivadas, pero se ha reportado sentimientos de ansiedad y estado de pnico. (5)

34

2. BIOCOMBUSTIBLES (55)

Son aquellos combustibles que se obtienen de biomasa, es decir, de organismos

recientemente vivos (como plantas) o sus desechos metablicos (como estircol).
Recientemente ha

surgido un gran inters, debido a que los gobiernos pretenden

disminuir su dependencia de los combustibles fsiles y as lograr mayor seguridad

energtica. Adems, se mencionan diversas ventajas de los biocombustibles con respecto
a otras energas, como la menor contaminacin ambiental, la sustentabilidad y las
oportunidades para sectores rurales.
La Agro Industria de la Caa de Azcar en Mxico, est consciente del rol que la
gramnea tendr en el futuro, dada a su fortaleza, pronta renovabilidad y secuestradora
potencial de CO2. Es aqu donde surge el alcohol etlico, en sus variantes: anhidro e
hidratado, como una contribucin al balance energtico y a la disminucin del
calentamiento global.
Los productos agrcolas base para la produccin de etanol son los que contienen
sacarosa como la caa de azcar, betabel, sorgo dulce; sustancias ricas en almidn como
maz, trigo, cebada o papas, y los materiales ricos en celulosa como la madera, paja del
trigo o arroz y otros residuos agrcolas. En el mbito mundial, los productos agrcolas ms
usados para obtener etanol son caa de azcar y maz, a partir del cual el Departamento
de Agricultura de los Estados Unidos proyecta incrementar su produccin energtica.
Una necesidad urgente es lograr la autosuficiencia energtica a partir de la caa. El
alcohol producido en los ingenios o en la industria de caa-alcohol permitira sustituir
importaciones de Brasil, Honduras, Cuba o Guatemala. Esto tambin dara la pauta para
producir azcar, etanol y generar energa elctrica.
En Mxico las gasolinas son oxigenadas en un 6 por ciento con MTBE, (ter-butil metil
ter) que se importa. Si se empieza a producir etanol en el pas se podran ahorrar 100
millones de dlares al ao, que se gastan en la compra al exterior de este producto. Con
base en los consumos actuales y proyectndose a las ciudades de Mxico, Guadalajara y

35

Monterrey, suponiendo una mezcla de etanol promedio del 6 por ciento, ha futuro el
mercado de combustible de etanol ser de entre 500 y 600 millones de litros por ao.

3. LEVADURAS Y FERMENTACIN
Se denomina levadura a cualquiera de los diversos hongos microscpicos unicelulares
que son importantes por su capacidad para realizar la fermentacin de hidratos de
carbono, produciendo distintas sustancias.
Aunque en algunos textos de botnica se considera que las levaduras "verdaderas"
pertenecen slo a la clase Ascomycota, desde una perspectiva microbiolgica se ha
denominado levadura a todos los hongos con predominio de una fase unicelular en su
ciclo de vida, incluyendo a los hongos basidiomicetes.
A veces suelen estar unidos entre s formando cadenas. Producen enzimas capaces de
descomponer diversos sustratos, principalmente los azcares.
Una de las levaduras ms conocidas es la especie Saccharomyces cerevisiae. Esta
levadura tiene la facultad de crecer en forma anaerobia realizando fermentacin
alcohlica. Por esta razn se emplea en muchos procesos de fermentacin industrial, por
ejemplo en la produccin de cerveza, vino, hidromiel, pan, produccin de antibiticos, etc.
Las levaduras se reproducen asexualmente por gemacin o brotacin y sexualmente
mediante ascosporas o basidioesporas. Durante la reproduccin asexual, una nueva
yema surge de la levadura padre cuando se dan las condiciones adecuadas, tras lo cual
la yema se separa del padre al alcanzar un tamao adulto. En condiciones de escasez de
nutrientes las levaduras que son capaces de reproducirse sexualmente formarn
ascosporas. Las levaduras que no son capaces de recorrer el ciclo sexual completo se
clasifican dentro del gnero Candida.

36

Figura 46 Saccharomyces cerevisiae levadura modelo

Dominio:Eukaryota
Reino: Fungi
Clasificacin cientfica
Divisiones tpicas
Ascomycota

Saccharomycotina
Taphrinomycotina
Schizosaccharomycetes

Basidiomycota

Urediniomycetes
Sporidiales

La palabra levadura evoca a todos los agentes causales de la fermentacin alcohlica.

En la naturaleza existen numerosos microorganismos morfolgicamente semejantes a las
levaduras y que no tienen ninguna facultad de tipo fermentativo, a caso limitndose a
fermentar dbilmente a la glucosa. Se les encuentra frecuentemente sobre los mismos
substratos que en los de las levaduras tpicas. Algunas son muy tiles, otras son
verdaderos agentes de contaminacin, que debido a su metabolismo especial son causa

37

de alteracin en diversos tipos de productos. Por ltimo, algunas son patgenas para el
hombre y los animales. Por tal causa interesa saber la forma de poderlas identificar.
3.1 CLASIFICACION
Lodder y Kreker Van Rij establecieron en 1952, una clasificacin de los hongos
levuriformes, que han sido universalmente adoptada. Segn estos autores, se encuentran
hongos levuriformes en tres de las familias que forman el grupo de las Talofitas:
1) Endomycetaceae, que forma parte de la clase de los Ascomicetos.
2) Sporobolomycetaceae, que forma parte de la clase de los Basidiomicetos.
3) Cryptococcaceae, que forma parte del orden Cryptococcales, en la clase de los
Hongos imperfectos o Deuteromicetos.
3.1.1 Familia Endomycetaceae, al igual que todos los Ascomicetos, se hallan
caracterizados por la facultad de originar, en ciertas condiciones especiales unas esporas
endgenas, llamadas ascosporas. La clula portadora de las mismas recibe el nombre de
asca.
3.1.2 Familia: Endomycetaceae
a) Subfamilia: Endomycetoideae
Gnero: Schizosaccharomyces.
Estas levaduras se producen vegetativamente mediante enlongamiento (alargamiento
transversal de la clula).
La especie tpica es la Schizosaccharomyces pombe (Lindner 2003), primeramente
aislada de una cerveza africana. Se la encuentran en algunas ocasiones en las
destileras. Como es excelente microorganismo productor de alcoholes, se han realizado
una serie de ensayos con vistas a su aplicacin industrial.

38

Figura 47 Clulas de Schizosaccharomyce pombe (a). Tipo de interfase celular; (b, c)

b) Subfamilia Saccharomycetoideae
Los Sporobolomycetaceae pueden igualmente formar esporas. Estas son externas,
colocadas en los extremos de unos pednculos llamados esterigmas, siendo proyectadas
a larga distancia, en el momento que alcanzan su madurez.
c) Subfamilia Cryptococcaceae nunca originan esporas.
3.2 AISLAMIENTO DE LAS LEVADURAS
Todos los hongos levuriformes son capaces de asimilar la glucosa por va oxidativa. Si el
objetivo propuesto consiste en el aislamiento de todos los microorganismos levuriformes,
susceptibles de encontrarse sobre un substrato cualquiera, se debe de utilizar un medio
de cultivo glucosado, este objetivo queda, por diversas circunstancias, mucho ms
restringido, en el sentido del aislamiento de cepas o estirpes que puedan ser
eventualmente utilizadas, se utilizarn medios de cultivo adaptados a esta investigacin.
El aislamiento de las levaduras se practica sobre placas de Petri puede ser cuantitativo, si
se resiembra en cada placa, cantidades conocidas o diluciones de alcuota conocida,
correspondiente al substrato que se va a examinar.
Los medios normales y corrientes de cultivo son: agua de touraillons glucosado; la
gelosa de Sabouraud para aislamiento; el medio glucosado de papa, recomendado por
Buttiaux o el medio glucosado en extracto de levadura, recomendado por Mossel para la
investigacin de las levaduras y mohos que aparecen en los productos alimenticios. Estos

39

dos ltimos medios, deben acidificarse en el momento de su utilizacin mediante el cido

tartrico.
Se emplea igualmente el mosto de cerveza gelosada. Las colonias aparecen sobre estos
medios, transcurridas por lo menos, 48 horas de incubacin, a una temperatura de 25 C.
se puede igualmente utilizar el mosto de uvas pasteurizado, muy empleado para la
investigacin de las levaduras en los medios enolgicos.
3.3 IDENTIFICACION DE LEVADURAS
La identificacin de las levaduras est basada en los siguientes criterios:
3.3.1 CARACTERES MORFOLGICOS
a) Aspecto exhibido por las colonias en los medios slidos.
Las colonias desarrolladas en la superficie de los medios slidos, tienen, en algunas
ocasiones, unos aspectos que sirven para diferenciar ciertos gneros o especies:
-

Las colonias del genero Rhodotorula, son pigmentadas, siendo mas frecuentes el
color rojo o rosa-salmn. Las ballitosporas, que son lanzadas una vez que se
encuentran maduras, forman sobre la tapadera vuelta de la placa de petri una
especie de reflejo de la propia colonia (fenmeno del espejo).

Las colonias pertenecientes a la especie Candida mycoderma y a las levaduras

del velo, se presentan de contorno irregular, plegadas, blanquecinas o color de
gamuza, de aspectos seco o graso.

Las colonias de los Saccharomyces, as como de la mayor parte de las levaduras

que pertenecen a los restantes gneros que no han sido mencionados
anteriormente, se presentan redondas, blancas o de un blanco-gamuza, con
bordes netos, semiesfricas o con el centro puntiagudo. Si se les deja desarrollar
hasta que alcancen un dimetro aproximado de 1cm (colonia gigante) pueden
presentar aspectos tpicos para determinadas especies.
Con el fin de estandarizar los mtodos de observacin de las colonias, el medio
universalmente adoptado es el mosto de cerveza gelosado.

40

a) Forma y tamao de las clulas

Las levaduras son siempre examinadas en estado fresco, los procedimientos normales de
fijacin y coloracin deformaran a las clulas, una tcnica muy til, es la tincin negativa
con tinta china. Mediante el examen del ultramicroscopio o el contraste de fases, se
conoce la estructura

interna. La tincin con lugol permite observar los grnulos de

glicgeno, y mediante la tincin con Sudn se observan los grnulos lipdicos.

La forma de la clula constituye en muchos casos una ayuda sumamente til. Los
Saccharomyces son, en general, ovoideos. El S. pasterianus tiene clulas rectangulares.
El S. oviformis exhibe unas clulas casi redondas. Los Kloeckera son apiculados. Las
dimensiones se pueden apreciar mediante el micrmetro ocular contrastado.
b) Facultad de formar esporas.
Constituye un carcter fundamental que permite agrupar a las levaduras estudiadas en
una de las tres familias indicadas. Esta facultad no es fcil ponerla de manifiesto, sobre
todo si se trata cepas que han sido guardadas ya que se pierden, en algunas ocasiones,
cuando se ha repicado numerosas veces sobre medios enriquecidos
Un medio apropiado para esta determinacin, lo constituye el medio de Gorodkowa. Pero
no se decidir el tipo a que corresponde, cuando se trata de casos difciles, hasta no
haber realizado otras pruebas complementarias en que se haya efectuado una prueba de
la cepa sobre un bloque de yeso o sobre un trozo de zanahoria. Como ocurre en el caso
de las bacterias esoporulantes, la esporulacin en las levaduras se presenta cuando las
condiciones de cultivo se tornan desfavorables para que se realice la reproduccin
vegetativa, considerndola como fenmeno sexual, esta consideracin conduce, en
ocasiones, a la obtencin de nuevas especies de levaduras, mejor adaptadas a ciertas
condiciones dadas, obtenidas mediante crecimiento. La industria cervecera ha sido unas
de las primeras industrias que se ha beneficiado con tales trabajos.
Es muy til considerar la forma de las esporas. Generalmente son redondas, como pasa
en los Saccharomyces. Pueden ser hemiesfricas con borde saliente (en sombrero),
como se presenta en ciertos tipos de Hansenula o saturnianos, es decir, a manera del

41

planeta Saturno, stas son pequeas (2 a 5 de dimetro). Las Saccharomyces pueden

alcanzar de 6 a 8 y aun mucho ms.
La relacin longitud/anchura puede ser, en algunos casos, un dato interesante; las
levaduras del gnero Saccharomyces, frecuentemente miden ms de largo que de ancho.
c) Tipo de reproduccin vegetativa.
Las levaduras del gnero Schizosaccharomyces se producen nicamente por escisin.
Los Saccharomyces, Torulopsis, Candida y la mayor parte de las restantes, se producen
nicamente por gemacin. Ciertas levaduras se pueden reproducir a la vez, mediante
gemacin y escisin. Pertenecen a los gneros Endomycopsis o Trichosporon. Se conoce
que las levaduras tienen un aspecto ms homogneo cuando se les cultiva sobre un
medio lquido
Todas estas observaciones (forma, dimensiones, tipo de reproduccin vegetativa), se
presentan sobre un medio lquido, que por acuerdo general es el mosto.
d) Aptitud para construir un pseudomicelio o un micelio.
La formacin de un pseudomicelio o de un micelio se presenta, como en el caso de la
esporulacin, sobre medios de cultivos pobres o agotados. Cuando la forma de
reproduccin vegetativa de la clula es la escisin, puede haber en estos casos la
formacin de un micelio verdadero. Los tabiques celulares quedan unidos entre s, que, a
su vez, se encinden y se alargan. De esta manera se constituye un filamento tabicado.
Cuando el conjunto envejece, tiene lugar una separacin en forma de clulas
rectangulares. Estas clulas libres reciben entonces el nombre de artosporas. Esto es lo
que ocurre en las levaduras del gnero Schizosaccharomyces.
Cuando la forma de reproduccin vegetativa es la gemacin, se puede presentar el mismo
fenmeno y en este caso se conduce a la formacin de un rosario de clulas o
pseudomicelio. Ciertos tipos de levaduras no forman ms que un pseudomicelio primitivo.
Otras forman un pseudomicelio capaz de evolucionar en un aparato esporfero. En estos
casos aparecen en los extremos de las clulas, pseudomicelianas que no se han
separado del conjunto, unos manojos o rosario de pequeas clulas, llamadas

42

blastosporas. Cuando aparecen en un punto cualquiera de la clula, llevan el nombre de

blastoconidios.
La formacin de un pseudomicelio es, especialmente, til para poner en evidencia a las
levaduras asporgenas. En ocasiones es difcil poder diferenciar un micelio verdadero de
un pseudomicelio, en particular, en cultivos antiguos realizados sobre medio adecuado.

3.3.2 CARCTERES FISIOLGICOS

a) Aspecto de los cultivos sobre un medio lquido.
Es indispensable apreciar el aspecto que exhiben las levaduras sobre el medio lquido
poder establecer la determinacin de los gneros o de ciertas especies. A este respecto,
las levaduras pueden ser agrupadas en dos categoras:
1. Levaduras con metabolismo fermentativo dominante.
Se caracterizan por un desprendimiento gaseoso ms o menos abundante. El lquido se
encuentra en un principio alterado, apareciendo ms tarde un depsito, mientras que el
lquido se clarifica. Se debe apreciar el aspecto de este depsito: pulverulento, es decir
que se torna en una suspensin homognea mediante simple agitado, o graso, cuando
queda ms o menos adherido a la pared del tubo. Se apreciar igualmente el aspecto de
la espuma: grasa o fina. Los Saccharomyces pertenecen a esta categora.
Una vez finalizado el proceso fermentativo, la levadura forma una especie de velo en la
superficie del medio. Este velo tardo es, por regla general, fino, que, en ocasiones,
queda reducido en forma de islotes. Las levaduras que lo producen son, generalmente,
aquellas que son capaces de reoxidar al alcohol que han producido, como ocurre con el
Saccharomyces oviformis.
2. Levaduras con metabolismo oxidativo dominante.
La mayor parte de ellas forman, sobre el medio lquido, un velo inmediato, en ocasiones
reducido a un simple anillo, ms o menos graso. Puede haber al mismo tiempo una dbil
fermentacin. El velo es, con frecuencia, espeso, graso, plegado, como ocurre en las

43

levaduras del gnero Pichia y en ciertas especies del gnero Candida. En la especie
Candida mycoderma es blanquecina y harinosa.
Otras levaduras no forman velo, pero s un deposito y no hay proceso fermentativo. Por
acuerdo y con el fin de lograr una estandarizacin en los mtodos de observacin, el
examen de los cultivos en medio lquido se verifica sobre mosto de cerveza.
b) Estudio del metabolismo de los glcidos.
Lodder y Kreger Van Rij han basado su sistema de clasificacin sobre el estudio del
metabolismo de cinco tipos de azcares sometidos a la actividad fermentativa y a la
oxidativa (asimilacin) y mediante el reconocimiento de las diferentes combinaciones que
pueden existir entre estas dos formas de ataque.
Los cinco tipos de azcares que se han estudiado son: glucosa, sacarosa, maltosa,
galactosa y lactosa, a los cuales es conveniente aadir, en ciertos casos, la rafinosa. La
eleccin de esta gama limitada de azcares se halla basada en las siguientes
consideraciones:
- Todas las levaduras son capaces de asimilar la glucosa por va oxidativa, asimilan
igualmente todas ellas a la levulosa.
- Todos los azcares fermentados por una levadura, son igualmente asimilados por va
oxidativa; pero la recproca no es cierta.
- Las levaduras que hacen fermentar a la maltosa, generalmente son incapaces de
hacerlo sobre la lactosa.
- El estudio del metabolismo de la rafinosa no tiene inters ms que para todas aquellas
levaduras que hacen fermentar a la sacarosa.
El estudio del metabolismo de los glcidos por va oxidativa (asimilacin), se realiza
mediante la tcnica auxonogrfica, descrita por primera vez por Beijerinck.

44

3.3.3 CASO PARTICULAR DE LA RAFINOSA.

La rafinosa (figura 48) es un triholsido, compuesto de glucosa, levulosa y galactosa,
hallndose la glucosa y la galactosa unidas bajo la forma de melibiosa:

Levulosa-glucosa-galactosa.
Melibiosa.

Figura 48 Rafinosa

Muchas levaduras son capaces, despus de haber hidrolizado la molcula en el puente

de unin levulosa-glucosa, se produce la fermentacin de la levulosa sin atacar a la
melibiosa. Se dice entonces que estas levaduras son capaces de fermentar un tercio de
rafinosa, como ocurre con el Saccharomyces cerevisiae.
Algunas levaduras, en nmero muy reducido, rompen el puente de unin entre la glucosa
y la galactosa, utilizando la levulosa y la glucosa y dejando intacta a la galactosa. Se dice
que son levaduras capaces de fermentar dos tercios de la rafinosa, caso tpico del
Saccharomyces pasterianus.

45

Por ltimo, otras levaduras provocan la fermentacin completa de la rafinosa, como es el

caso de Saccharomyces carlsbergensis.
La caracterizacin del porcentaje fermentativo de la rafinosa puede estar basado
mediante la medicin de la cantidad de CO2 desprendido, por lo que se precisa hacer uso
de unos tubos graduados de tipo especial (aparato de Van Iterson-Kluyver) tubos de
Durham.
c) Estudio de la asimilacin del nitrgeno de los nitratos.
La asimilacin del nitrgeno de los nitratos constituye un carcter de gnero para las
levaduras esporgenas y un carcter de especie para las levaduras asporgenas.
Entre los Saccharomycetaceae, nicamente las levaduras del gnero Hansenula son
capaces de asimilar a los nitratos. La tcnica utilizada para la caracterizacin de este
fenmeno es el mtodo auxonogrfico. Se utiliza una sal de amonio, como substrato de
referencia, ya que todas las levaduras son capaces de asimilar el nitrgeno amoniacal.
d) Estudio del metabolismo de otros substratos mencionados.
El metabolismo de la arbutina, gelatina, casena o de las grasas, no suele ser
indispensable. Los mtodos que permiten evidenciar, derivan del mtodo auxonogrfico.
La tabla que se dispone a continuacin (tabla 4) indica el comportamiento de las especies
del gnero Saccharomyces frente a los glcidos mencionados, as como ante el nitrgeno
de los nitratos. El estudio del metabolismo de los glcidos por va fermentativa se realiza
en tubos con medio lquido.

46

Tabla 4 Asimilacin y fermentacin de los glcidos por las levaduras del genero
Saccharomyces
Especies

Glucosa

Galactosa

Sacarosa

Maltosa

Lactosa

Rafinosa

pastori

mellis

baillii

bisporus

acidifaciens

delbrueckii

+f

rouxii

+f

italicus

rosei

1/3

chevalieri

+f

1/3

elegans

+f

+f

1/3 f

veronae

1/3

fructuum

1/3

marxianus

+f

+f

1/3

exigus

1/3

microellipsoid

+f

3/3

heterogeneicus

fermentati

1/3

bayanus

1/3

oviformis

1/3

pasterianus

2/3

stemeiri

cerevisiae y c.var.ellipsoi.

+f

+f

1/3

willianus

1/3

florentinus

3/3

carlsbergensis

+f

3/3

logos

3/3

uvarum

+f

+f

3/3

lactis

1/3

fragilis

1/3

A= asimilacin F= fermentativo += positivo = negativo +f= dbil o lento

= mayora de cepas positas. = mayora de cepas negativas.
Los nitratos no son asimilados.

47

3.4 Saccharomyces cerevisiae

Es un hongo unicelular tipo levadura utilizado industrialmente en la fabricacin del pan,
cerveza y vino. Se divide por gemacin y puede tener una reproduccin asexual cuando
se encuentra en su forma haploide, y de manera sexual cuando a partir de un cigoto se
forma un asca que contiene cuatro ascosporas haploides.
S. cerevisiae es uno de los modelos ms adecuados para el estudio de problemas
biolgicos. Es un sistema eucariota, con una complejidad slo ligeramente superior a la
de la bacteria pero compartiendo con ella muchas de sus ventajas tcnicas. Adems de
su rpido crecimiento, dispersin de las clulas y la facilidad con que se replican cultivos y
aslan mutantes, destaca por un sencillo y verstil sistema de transformacin de ADN. Por
otro lado, la ausencia de patogenicidad permite su manipulacin con las mnimas
precauciones. Es un sistema gentico que, a diferencia de la mayora de otros
microorganismos, presenta dos fases biolgicas estables: haploide y diploide. La fase
haploide permite generar, aislar y caracterizar mutantes con mucha facilidad, mientras
que en la diploide se pueden realizar estudios de complementacin. Una levadura
haploide contiene 16 cromosomas variando en tamao de 200 a 2200 kilobases (kb).
Una ventaja adicional de este microorganismo consiste en que se conoce la secuencia
completa de su genoma y se mantiene en constante revisin. Ello ha permitido la
manipulacin gentica de los casi 6600 genes que codifica el genoma de levadura, el uso
extensivo de micromatrices de ADN para investigar el transcriptoma y estudios a escala
genmica de, entre otros muchos aspectos, la expresin gnica, localizacin de protenas
y la organizacin funcional del genoma y el proteoma.
La maquinaria molecular de muchos procesos celulares se encuentra conservada tanto en
levadura como en plantas y en mamferos. Esto se ilustra con el hecho de que
rutinariamente se han introducido genes de eucariotas superiores en levadura para el
anlisis sistemtico de su funcin.
Por estas razones Saccharomyce cerevisiae se ha convertido en una importante
herramienta a gran escala de anlisis de genmica funcional, proporcionando un punto de
partida para el anlisis de organismos eucariotas ms complejos. Al ser un organismo

48

unicelular con una tasa de crecimiento rpida, la levadura se puede utilizar para los
estudios de clulas que resultaran muy complicados o costosos en organismos
multicelulares.
Las utilidades industriales ms importantes de Saccharomyces cerevisiae (figura 46) son
la produccin de cerveza, pan y vino, gracias a su capacidad de generar dixido de
carbono y etanol durante el proceso de fermentacin. Bsicamente este proceso se lleva
a cabo cuando esta levadura se encuentra en un medio muy rico en azcares (como la Dglucosa). En condiciones de escasez de nutrientes, la levadura utiliza otras rutas
metablicas que le permiten obtener un mayor rendimiento energtico, y por tanto no
realiza la fermentacin. Desde el punto de vista cientfico, este microorganismo se ha
empleado como modelo simple de la clula eucariota. Esto se debe a una serie de
ventajas como su facilidad de cultivo y su velocidad de divisin celular (aproximadamente
dos horas).
Tabla 5 Clasificacin cientfica de Saccharomyces cerevisiae
Reino:

Fungi

Familia: Saccharomycetaceae

Divisin: Ascomycota

Gnero: Saccharomyces

Clase:

Hemiascomycetes

Especie: S. cerevisiae

Orden:

Saccharomycetales Nombre Saccharomyces

binomial cerevisiae

4. MTODOS DE OBTENCIN DE ALCOHOL

El estudio de la dinmica, cuantificacin y composicin de la microbiota responsable de
las fermentaciones espontneas, ha mostrado diferencias tanto cualitativas como
cuantitativas, en las levaduras aisladas en una misma zona vitivincola e incluso dentro de
los depsitos de una misma bodega. Las causas de esta variabilidad pueden ser: cambios
en las tcnicas de aislamiento, cambios en las condiciones climticas, etc. Por tanto, la
necesidad de asegurar la fermentacin alcohlica, as como la tipicidad y reproducibilidad

49

de los vinos, requiere cada vez ms, el uso de cultivos iniciadores. Las levaduras se han
utilizado con excelentes resultados en muchos pases, obtenindose productos finales de
calidad ms uniforme que los que se producan con las fermentaciones espontneas. Este
ltimo punto es el que genera el debate acerca de la utilizacin o no de inculos, ya que
garantizan repetitividad a expensas de perder algo de complejidad en el producto. A pesar
de que existen levaduras comerciales para realizar las fermentaciones, es ms efectivo el
uso de cultivos puros de levaduras que procedan de la zona donde se van a utilizar, lo
que se conoce como levaduras locales seleccionadas, ya que se cree que las levaduras
que se encuentran en una microzona son: especficas del rea, totalmente adaptadas a
las condiciones climticas de la zona y a la materia prima, es decir al mosto a fermentar,
son responsables al menos parcialmente, de las caractersticas nicas de los productos
obtenidos.
La seleccin de la cepa adecuada para cada tipo de fermentacin es una estrategia muy
importante para garantizar por un lado una fermentacin correcta, as como para mejorar
las caractersticas del producto final, ya que las levaduras pueden producir compuestos
que den un toque de distincin al producto obtenido, tales como el glicerol, steres,
alcoholes superiores, etc.
Tabla 6 Compuestos y aromas generados por Saccharomyces cerevisiae
PRODUCTO

AROMA

Diacetilo

Mantequilla

Lactato de etilo y succinato de etilo

Caf

Acetato de etilo

Pegamento

Esteres y acetato

Vegetales

Vinil-fenoles

Farmacia aroma fenolato

Etil fenoles

Orin de caballo

La velocidad del proceso fermentativo sta ligada a la densidad de poblacin de levaduras

fermentativas. A) etapa de adaptacin, B) etapa de crecimiento exponencial, que va
siendo cada vez menor hasta llegar a una etapa de crecimiento nulo, donde el nmero de
nacimientos es igual al nmero de defunciones. C) etapa donde la mortalidad comienza a
ser mayor a la multiplicacin, lo que corresponde a las ltimas fases de la fermentacin.

50

Figura 49 Grfica del tiempo de fermentacin de Saccharomyces cerevisiae.

En el caso de Saccharomyces cerevisiae, se muestran 5 fases de crecimiento. (Figura 49)

La fase lag, es un perodo de adaptacin en el cual la clula se prepara para dividirse.
Durante la fase logartmica las clulas alcanzan su mxima velocidad de duplicacin y
llevan a cabo un metabolismo fermentativo del que se produce etanol. Al disminuir los
nutriente, las clulas atraviesan por el cambio diuxico, un periodo breve de tiempo en el
cual no hay divisin y la clula cambia de un metabolismo fermentativo a uno respiratorio.
En la fase postdiuxico las clulas usan como fuente de carbono el etanol producido
durante la fase logartmica, y en la fase estacionaria se presenta cuando los nutrientes del
medio se han agotado y no hay divisin celular. (5, 6, 8,15)

51

Figura 50 Fases de crecimiento de Saccharomyces cerevisiae

52

CAPITULO II
DESARROLLO EXPERIMENTAL

53

El presente trabajo se desarrollo en el Laboratorio 123 de la Facultad de Ciencias

Qumicas de Orizaba dependiente de la Universidad Veracruzana bajo la direccin de la
Q.I. Elvira Romn Garca
La muestra de rbol se recolecto en Ixhuatequilla municipio de Ixhuatln del caf
una vez seleccionada se procedi a efectuar anlisis microbiolgico de la corteza, tallo y
rama de Acacia angustissima (timbre) por lo que se procedi a realizar un experimento
segn el plan de trabajo (figura 51). Una vez que el timbre se deposit en caldo nutritivo e
incubo a 35 C por 24 horas se procedi a determinar mediante tinciones si exista
presencia microbiana y que tipo de microorganismo podra ser, al observar las tinciones
se procedi a efectuar la confirmacin del microorganismo observado y se realiz una
siembra por estra en agar cuenta estndar (ACE), agar papa dextrosa (APD), y agar
Saboraud (AS) con la finalidad de seleccionar y confirmar al tipo microbiano existente, y
corroborando la presencia microbiana se realiz una primer prueba de clasificacin de
microorganismo utilizando tubos de Durham para determinar la utilizacin de
carbohidratos para lo cul se utilizaron medios lquidos de dextrosa, fructosa, sacarosa,
lactosa, maltosa, rafinosa a los cuales se les adicion rojo fenol con la finalidad de
observar la produccin de acidez y a su vez determinar si era fermentativo mediante la
campana de retencin de CO2
Posteriormente se determin la cintica microbiana del microorganismo aislado utilizando
para ello caldo nutritivo azcar a 18 Brix , solucin de azcar ajustada a 18 Brix y jugo
de uva, la cuantificacin se realiz por el mtodo de vaciado en placa y el conteo de la
cmara de Neubauer, as como tambin se sigui la tcnica de fermentacin del
carbohidrato determinando Brix e ndice de refraccin mediante el refractmetro de
inmersin de Abb, una vez determinado que el Brix disminua y considerando la
existencia de alcohol mediante la prueba de yodoformo se procedi a efectuar la
destilacin del producto siguiendo la tcnica establecida en el AOAC (mtodo 2-4) los
resultados obtenidos se encuentran en el apartado III.
As mismo a la corteza del timbre se le realizaron extracciones de metabolitos
secundarios utilizando para ello equipo Soxhlet y realizando la extraccin con etanol,
acetato de etilo y hexano en equipos diferentes, los extractos obtenidos se concentraron
en un rotavapor y posteriormente se pesaron y efectuaron las pruebas fitoqumicas

54

preliminares para determinar qu metabolitos secundarios existan, de acuerdo a los

resultados obtenidos se procedi a realizar una cromatografa en capa fina utilizando
como fase mvil para identificar alcaloides [acetato de etilo - metanol - agua
(100:13.5:10)] y Butanol - cido ctrico al 5% (9:1) una prueba para identificar metabolitos
secundarios en Acacias utilizando [acetato de etilo c. Frmico cido actico agua
(100:11:11:27)] los resultados obtenidos se encuentran en el apartado III
Se identific y cuantifico la presencia de taninos siguiendo la norma establecida por el
AOAC (22)

55

Revisin Bibliogrfica

Muestreo

Seleccin de la planta:
Acacia Angustissima

Estudio de Metabolitos
Secundarios

Desinfectar

Lavar

Prueba de Fermentacin

Aislar e identificar el
MO existente en la
planta

Diferentes concentraciones de
azcar, diferentes tiempos de
fermentacin

Determinar la cintica
microbiana

Cuantificar el % de
alcohol obtenido

10g de palo,
sol. 18 Brix

10g de palo,
sol. 25 Brix

10g de palo,
sol. 50 Brix

Tiempo 2 das y Temperatura de

incubacin
Concentrado

Residuo
Destilacin Simple

Metabolitos
Secundarios

Alcohol agua

Figura 51 Plan de Trabajo.

56

Levadura aislada

Tomar una asada y sembrar en un tubo de caldo nutritivo, caldo saboraud y agar papa
dextrosa

Homogenizar e incubar a 35C por 24 horas

Resembrar en tubos de caldo carbohidrato.

Incubar a 35 C por 24 h

Realizar tinciones; observar y determinar de que microorganismo se

trata

Realizar Prueba de Acidez y Prueba de Lucas

Figura 52 Identificacin de la levadura mediante prueba de fermentacin de carbohidratos

57

Usar como Base caldo Rojo

Fenol

Pesar y preparar el Caldo Rojo Fenol y

distribuir en frascos

Ya distribuidos adicionar en cada

frasco el carbohidrato a utilizar

Sacarosa

Glucosa

Maltosa

Fructosa

Lactosa

Rafinosa

Vaciar en tubos en
porciones de 5 a 7 ml

Adicionar una campana

para fermentacin

Esterilizar a 121 C por 15

minutos
Figura 53 Pruebas bioqumicas

58

Levadura aislada

Tomar una asada y sembrar en un

tubo de Caldo Nutritivo

Homogenizar

Sembrar un tubo de cada

carbohidrato.

Incubar a 35 C por 24 h

Observar e identificar la
Levadura

Hacer Prueba de Acidez y

Prueba de Lucas

Figura 54 Identificacin de la levadura

59

Recoleccin de la Acacea
angustissima

Lavar en solucin de Hipoclorito

de Sodio al 5%

Enjuagar con agua estril

Colocarlas en cajas petri

estriles

10 g

10 g

90 ml de
Caldo Nutritivo

90 ml de
Jugo de uva

90 ml de
Caldo Saboraud

1 ml

APD

10 g

1 ml

1 ml

ACE

APD

ACE

ACE

APD

Tcnica de vaciado en placa

Contar levaduras a tiempo cero

Incubar a 35 C durante 5 das y

cada 24 h efectuar conteos

Figura 55 Cuantificacin de levadura

60

Posteriormente se inocularon unas galeras API para la identificacin microbiana la cual

se leer mediante la tabla 7
Tabla 7 Prueba de Bioqumica Galera API
SUBSTRATOS

REACCIONES/ENZIMAS

Triptfano

Formacin de Indol

Urea
Glucosa
Manitol
Lactosa
Sacarosa
Maltosa
Salicina
Xilosa
Arabinosa

Ureasa
Acidificacin
Acidificacin
Acidificacin
Acidificacin
Acidificacin
Acidificacin
Acidificacin

Gelatina

Hidrlisis (proteasa)

RESULTADOS
NEGATIVOS

1 gota XYL-mezcla+1gota de EHR/5mn

Amarillo
Amarillo-naranja

Hidrlisis ( glucosidasa)

Amarillo
Amarillo
verdoso

Prpura

Sin difusin del

Pigmento (2)

Acidificacin
Acidificacin
Acidificacin
Acidificacin
Acidificacin
Acidificacin
Acidificacin
Acidificacin
Catalasa
Esporas
Tincin de Gram.
Morfologa

Difusin del
Pigmento
negro (2)
Marrn
negruzco(3)

Bajo U.V. (365nm)

Fluorescencia

Glicerol
Celobiosa
Manosa
Melezitosa
Rafinosa
Sorbitol
Ramnosa
Trehalosa

Rojo
Rojo

BCP (1)

Amarillo (3)
Esculina
Citrato de hierro

POSITIVOS

Sin
fluorescencia

BCP (1)

Prpura

Amarillo
Amarillo
Verdoso

Despus de 30 min. al aire libre

2 gotas de H2O2 en un tubo positivo
Presencia de
Ausencia de burbujas
burbujas
Ausencia
Presencia
Rosa
Violeta
Bacilo
Coco

Puede ser decolorada por reduccin. Revelar entonces la reaccin de acidificacin con
ayuda de una gota de reactivo BCP. Se incuba en jarra redonda, el pigmento difunde
solamente en la parte inferior del tubo. Marron-negruzca se desarrolla a veces solamente
al aire libre: tener en cuenta para la lectura. Negra puede ser debida a la formacin de
FeS a partir de protenas del medio y del citrato de hierro. Si la produccin aparece en la
parte inferior del tubo; una produccin importante obliga a recurrir a la lectura con luz U.V.

61

III
RESULTADOS Y DISCUSION

62

Como se mencion en el plan de trabajo el microorganismo obtenido de haber inoculado

la corteza de Acacia angustissima (timbre) en diferentes sustratos se procedi a aislar
para identificar al microorganismo utilizando agar cuenta estndar (ACE) y Agar papa
dextrosa (APD) posteriormente se efecto un conteo utilizando los mismos medios de
cultivo (figura 56)

(a)

(b)
Figura 56 Medios de cultivo a) APD b) ACE

Una vez obtenidos los microorganismos en los medios antes selecccionados se procedi
a resembrar en tubo con caldo nutritivo y caldo Saboraud, posteriormente se resembraron
en APD en agar inclinado de donde se realizaron las tinciones de Gram, negativas,
esporas, as como un nalisis directo al fresco.

Figura 57 Tincin negativa

63

Figura 58 Tincin de esporas

Espora

cpsula

Figura 59 Tincin negativa

64

Figura 60 Tincin de Gram.

Figura 61 Cuantificacin de levaduras utilizando cuenta colonias

(14)

De acuerdo a la morfologa observada en el microorganismo se determin realizar una

prueba de fermentacin de carbohidratos utilizando tubos con caldo y rojo fenol como
indicador los resultados se observan en la tabla 8.

65

Tabla 8 Anlisis Bioqumicos de los microorganismos aislados de diferentes sustratos

(4)
inoculados con Acacia angustissima (timbre)
Microorganismos procedentes de diferentes sustratos
Agua
Agua
Caldo
Caldo
Caldo
azcar
azcar
nutritivo
nutritivo
nutritivo
azcar
azcar
azcar
Glucosa
+
+
+
+
+
Lactosa
+
+
+
Sacarosa
+
+
+
+
+
Rafinosa
+/+/+/+/+/Fructosa
+
+
+
+
+
Maltosa
+
+
+
+
+
Nota el signo + indica fermentacin de carbohidrato con produccin de gas
el signo +/- indica fermentativo sin produccin de gas
el signo indica que no ferment
Pruebas bioqumicas

Pruebas qumicas
Oxidacin de cido
crmico
HCl
H2SO4
NaOH
Carbonato de sodio
Bicarbonato
ter etlico
Prueba de Lucas
Pruebas de alcohol
primario
Obtencin de
acetaldehdo

Microorganismos procedentes de diferentes sustratos

positivo
positivo
positivo
positivo
positivo
Pruebas de solubilidad
n/R
n/R
n/R
calor
calor
calor
pp
pp
pp
negativo
negativo
negativo
negativo
negativo
negativo
No se
No se
No se
mezcla
mezcla
mezcla

n/R
calor
pp
negativo
negativo
No se
mezcla

n/R
Calor
pp
negativo
negativo
No se
mezcla

negativo
positivo

negativo
positivo

negativo
positivo

negativo
positivo

negativo
positivo

positivo

positivo

positivo

positivo

positivo

Despus de haber realizado estas pruebas y con la observacin microscpica se

considera que el microorganismo es una eucariota del grupo de Levaduras y que
pertenece a la familia de Saccharomyces y en las pruebas qumicas para determinar que
tipo de alcohol era, se encontr que es un alcohol primario, perteneciente al alcohol
etlico.

66

Posteriormente se consider determinar la cintica microbiana de los microorganismos

encontrados para lo cul se efectuaron conteos de los microorganismos en APD ACE y
cmara de Neubauer figura 62, 63.

Figura 62 Cuadricula de la cmara de Neubauer

(23)

Figura 63 Cmara de Neubauer

(23)

1000000000

100000000

10000000

1000000
UFC/ mL

100000

J. UVA
CALDO NUTRITIVO
CALDO SABORAUD

10000

1000

100

10

1
0

DIAS

Figura 64 Determinacin de la cintica microbiana utilizando diferentes sustratos.

Cuantificacin en ACE

67

Al efectuar el conteo microbiano en diferentes sustratos utilizando como medio base el

agar cuenta estndar se observa que existe un mejor desarrollo cuando el
microorganismo prevalece en caldo Nutritivo aunque no existe una gran diferencia cuando
se utiliz caldo Saboraud, sin embargo, cuando se efecto la cintica en jugo de uva se
observa que es menor su desarrollo, por lo que se recomienda utilizar caldo nutritivo
adicionado de glucosa y ajustando el grado brix a 18 Brix

UFC/ mL
1000000000

100000000

10000000

1000000

100000

J. UVA
CALDO NUTRITIVO
CALDO SABORAUD

10000

1000

100

10

1
0

DIAS

Figura 65 Determinacin de la cintica en diferentes sustratos, utilizando como

medio base para cuantificacin APD

En el caso de haber utilizado el agar papa dextrosa como soporte para efectuar el conteo
y considerando que el microorganismo existente en la corteza del timbre era
Saccharomyces se observa que en caldo Nutritivo y caldo Saboraud el comportamiento
microbiano fue muy similar no as habiendo utilizado el jugo de uva, por lo que se vuelve a
reafirmar que el mejor sustrato para el crecimiento de las levaduras es el caldo Nutritivo,
esto de acuerdo a los resultados obtenidos en las figuras 64 y 65

68

1000000

100000

10000
UFC / mL
APD
ACE

1000

100

10

1
0

DIAS

Figura 66 Comparacin de la cuantificacin microbiana en jugo de uva utilizando APD

y ACE

Al comparar el resultado obtenido en la cintica microbiano utilizando jugo de uva se

observa una mejor cuantificacin y curva microbiana al utilizar agar papa dextrosa as
como no se observa que exista algn otro microorganismo, sin embargo despus del
segundo da se observa que el contenido microbiano desciende y esto se debi a que
despus del tercer da aparece el desarrollo de un hongo, por lo que se considera que el
jugo de uva no es recomendable para efectuar el experimento ya que es mas vulnerable a
que se contamine rpidamente y los resultados pueden ser alterados.

69

1000000000
100000000
10000000
1000000
UFC / mL
100000
APD
ACE

10000
1000
100
10
1
0

DIAS

Figura 67 Comparacin del desarrollo microbiano en caldo nutritivo en medio base de APD
y ACE

El desarrollo microbiano utilizando caldo Nutritivo se observa que existe una mejor
cuantificacin en agar papa dextrosa mientras que en agar cuenta estndar el desarrollo
microbiano se considera inferior, esto explica que en la corteza de timbre no existe
presencia alguna de otro microorganismo y el desarrollo de Saccharomyces es mas viable
en APD, sin embargo, se podra utilizar cualquiera de los dos medios ya que al tercer da
se observa una similitud entre los conteos microbianos, aunque en base al precio sera
preferible utilizar ACE y en base a la sensibilidad del medio es preferible utilizar APD.

70

100000000

10000000

1000000

100000
UFC / mL
APD
ACE

10000

1000

100

10

1
0

DIAS

Figura 68 Comparacin de la cuantificacin del caldo Saboraud en medio base de APD y

ACE

Al comparar los resultados obtenidos cuando la corteza del timbre se coloc en

caldo Saboraud para observar si exista algn desarrollo microbiano y determinar
su cintica se observa que utilizando APD como soporte de cuantificacin en 24
horas se obtena la mxima cantidad de microorganismo desarrollado, mientras
que utilizando como medio de soporte para cuantificar ACE durante las primeras
24 horas el microorganismo tiende a efectuar su fase lag y posteriormente se
incrementa no alcanzando a cuantificar la cantidad de microorganismo realmente
existente por lo que se considera que es mas adecuado utilizar para efectuar la
cuantificacin APD.

71

Al saber a cuantas horas el microorganismo llega a su fase estacionaria, es decir, a su

mxima reproduccin (24 h), se realiza una vez ms la cintica microbiana a tres
diferentes concentraciones 100, 200 y 500 mL para determinar si el % de alcohol era el
mismo, utilizando como sustrato caldo Nutritivo y dejando que las levaduras se
reproduzcan (24 h), transcurrido el tiempo se adiciona como nutriente una solucin de
sacarosa-agua a 18 Brix, realizando su conteo microbiano.

UFC/ mL

10000000000
100000000
100mL

1000000

200mL

10000

500mL

100
1
TIEMPO 0

DIA 1

DIA 2

DIA 3

DIAS

Figura 69 Determinacin de la cintica en caldo nutritivo

Al realizar la cintica microbiana a tres diferentes concentraciones de medio pero con la

misma concentracin de azcar se observa que el desarrollo microbiano permaneci ms
alto cuando el medio contena 200 mL que cuando contena 500 mL y 100 mL, adems de
que llama la atencin de que el frasco de 200 mL es el nico que no presenta formacin
de CO2 ni olor alcohol por lo que considerando que haba existido alguna contaminacin
se procedi a aislar el microorganismo e identificar, encontrando que no era una
contaminacin si no que exista un microorganismo perteneciente a la familia de
Endomicetaceae y que no era fermentador de sacarosa por lo que se procedi a
identificarlo a travs de una galera de bioqumica API 20, (figura 72). As mismo se

72

procedi a efectuar las destilaciones de los diferentes sustratos para proceder a su

anlisis de acuerdo a las normas NMX-V-013-S-1980, NMX-V-005-S-1980, NMX-V0210S-1980 (11, 12, 13) los resultados se encuentran en la tabla 9.
Tabla 9 Anlisis de la concentracin de alcohol etlico obtenido

Parmetro
Volumen del
sustrato
Brix
g de Azcar
adicionada
Gay - Lussac
obtenido
Densidad
% Alcohol en
peso
% Alcohol en
volumen
% Acidez total
% aldehdo
% esteres

Agua
azcar

Agua azcar

100 ml

(4 )

100 ml

Caldo
nutritivo
azcar
100 mL

Caldo
nutritivo
azcar
200 mL

Caldo
nutritivo
azcar
500 mL

18
21.5260

18
21.5260

18
21.6250

18
43.3701

18
108.4252

0.9931
2.8

0.9989
0

0.9962
5.5

0.9942
11.0

0.9916
3.7

4.79

0.73

2.57

3.99

5.92

0.0748
0.0856
0.005117

1.9968
0.1998
0.01023

0.0187
0.2283
0.005511

0.1872
0.2569
0.004723

0.0062
0.4567
0.006298

Figura 70 Cepa 7777673

De acuerdo a la bioqumica reportada y a las observaciones microscpicas se establece

que es Saccharomyces cerevisiae.

73

Figura 71 Cepa 22466223

De acuerdo a la morfologa microscpica se haba considerado Saccharomyces sin

embargo por no ser fermentadora de sacarosa pero utilizar la urea se considera familia
Endomycetaceae gnero Schizosacharomyces especie pombe este microorganismo
fermenta la glucosa por lo que necesitara que otro microorganismo hidrolizar el azcar.

Figura 72 Resultados de prueba bioqumica galera API 20

Al mismo tiempo que se fue realizando el estudio microbiolgico se realiz el estudio

preliminar fitoqumico ya que la bibliografa reportaba la presencia de -metil-fenil-etil-

74

amina encontrada en el diccionario de plantas de metabolitos secundarios de 1991 as

como la NMT y DMT en hojas. Despus de haber efectuado la extraccin de la corteza y
tallos con los solventes de hexano, acetato de etilo y etanol se efectuaron las pruebas
fitoqumicas establecidas por Xorge Domnguez

(2)

los resultados encontrados

se

establecen en la tabla 10, 11, 12.

Tabla 10 Primeras pruebas preliminares en la corteza y tallo de Acacia angustissima

PRUEBA
ALCALOIDES
MAYER
DRAGENDORFF
WAGNER
FLAVONOIDES
AMONIACO
ALCALI
SHINODA
COUMARINAS
HIDROXIMATO
LEGAL
ERLICH
SESQUITERPENLACTONAS
HIDROXIMATO
LEGAL
BALLET
TOLLENS
SAPONINAS
ESPUMA
MOLISH
SAPONINAS ESTEROIDALES
ROSENTHALER
NOLLER
QUINONAS
BORNTRAGER
GLUCOSIDOS CARDIOTONICOS
KEDDE
LEGAL
TANINOS

RESULTADO
hexano
Positiva
Negativa
Positiva

Acetato de etilo
Negativa
Negativa
Positiva

Etanol
Positiva
Negativa
Positiva

Negativa
Negativa
Positiva

Positiva
Positiva
Positiva

Positiva
Positiva
Positiva

Negativa
Negativa
Negativa

Negativa
Negativa
Positiva

Negativa
Negativa
Negativa

Negativa
Negativa
Negativa
Negativa

Negativa
Negativa
Negativa
Negativa

Negativa
Negativa
Negativa
Negativa

Negativa
Negativa

Negativa
Negativa

Negativa
Negativa

Negativa
Negativa

Negativa
Negativa

Negativa
Negativa

Negativa

Negativa

Negativa

Negativa
Negativa
Negativa

Negativa
Negativa
Positiva

Negativa
Negativa
Positiva

% de extracto obtenido 1

2.35

2.2

3.8

En el extracto hexnico se encontr la presencia de alcaloides mediante las pruebas de

Mayer y Wagner y la presencia de Flavonoides mediante la prueba de Shinoda, por lo que

75

ser muy interesante en otro trabajo identificar y aislar al alcaloide, ya que al estar
mezclado con el alcohol su efecto puede estar potencializado.
Considerando que para efectuar una buena extraccin de los metabolitos secundarios se
procedi a alternar los solventes en las muestras utilizadas anteriormente, que ya estaban
secas, por lo que a la muestra extrada con hexano se le adicion acetato de etilo, la
extrada con acetato de etilo se adicion etanol, y la extrada con etanol se adicion
hexano, posteriormente se efectuaron las pruebas preliminares establecidas por Xorge
Domnguez

(2)

los resultados obtenidos se encuentran en la tabla 11.

Tabla 11 Segundas pruebas preliminares en la corteza y tallo de Acacia angustissima

PRUEBA
ALCALOIDES
MAYER
DRAGENDORFF
WAGNER
FLAVONOIDES
AMONIACO
ALCALI
SHINODA
COUMARINAS
HIDROXIMATO
ERLICH
SESQUITERPENLACTONAS
HIDROXIMATO
BALLET
TOLLENS
SAPONINAS
ESPUMA
MOLISH
SAPOGENINAS
ROSENTHALER
QUINONAS
BORNTRAGER
GLUCOSIDOS CARDIOTONICOS
KEDDE
TANINOS

RESULTADO
hexano
Negativo
Negativo
Negativo

Acetato de etilo
Negativo
Negativo
Negativo

Etanol
Negativo
Positiva
Positiva

Negativo
Flavonoles
Negativo

Positiva
Flavonoles
Flavonoles

Positiva
Flavonoles
Flavonoles

Negativo
Negativo

Negativo
Negativo

Positiva
Positiva

Negativo
Positiva
Negativo

Negativo
Positiva
Negativo

Positiva
Negativo
Negativo

Negativo
Negativo

Positiva
Positiva

Negativo
Negativo

Positiva

Positiva

Positiva

Negativo

Negativo

Negativo

Negativo
Negativo

Positiva
Positiva

Negativo
Positiva

% de extracto obtenido 2

2.4168

5.8461

10.0908

76

Considerando que para efectuar una buena extraccin de los metabolitos secundarios se
procedi a alternar los solventes en las muestras utilizadas anteriormente, que ya estaban
secas, por lo que a la muestra extrada con hexano/acetato de etilo se le adicion etanol,
la extrada con acetato de etilo/etanol se adicion hexano, y la extrada con etanol/hexano
se adicion acetato de etilo, posteriormente se efectuaron las pruebas preliminares
establecidas por Xorge Domnguez

(2,)

los resultados obtenidos se encuentran en la tabla

12.

Tabla 12 Terceras pruebas preliminares en la corteza y tallo de Acacia angustissima

PRUEBA
ALCALOIDES
MAYER
DRAGENDORFF
WAGNER
FLAVONOIDES
AMONIACO
ALCALI
SHINODA
COUMARINAS
HIDROXIMATO
ERLICH
SESQUITERPENLACTONAS
HIDROXIMATO
BALLET
TOLLENS
SAPONINAS
ESPUMA
MOLISH
SAPOGENINAS
ROSENTHALER
QUINONAS
BORNTRAGER
GLUCOSIDOS CARDIOTONICOS
KEDDE
TANINOS

RESULTADO
Hexano
Negativo
Negativo
Negativo

Acetato de etilo
Negativo
Negativo
Negativo

Etanol
Negativo
Positiva
Positiva

Negativo
Flanonal
Flavonas

Positiva
Flavonoles
Flavonoles

Positiva
Flavonoles
Flavonoles

Negativo
Negativo

Negativo
Negativo

Positiva
Positiva

Negativo
Positiva
Negativo

Negativo
Positiva
Negativo

Positiva
Negativo
Negativo

Positiva
Negativo

Positiva
Positiva

Negativo
Negativo

Positiva

Positiva

Positiva

Negativo

Negativo

Negativo

Negativo
Negativo

Positiva
Positiva

Negativo
Positiva

% de extracto obtenido 3

6.0064

1.6662

4.6321

En el extracto de acetato de etilo adems de los alcaloides y flavonoides encontrados

anteriormente se determino la presencia de coumarinas y taninos.

77

Al efectuar la extraccin con etanol se determin la presencia de alcaloides , flavonoides,

y taninos los extractos obtenidos fueron mayores para el etanol logrando obtener hasta un
10%
Tabla 13 Por ciento de extractos obtenidos
% de extracto de hexano
% de extracto de acetato de etilo
% de extracto etanlico
% de extracto total
g de Metabolitos secundarios
g de palo seco

3.8
5.8461
10.0908
19.7369
6.72
27.28

3.0032
2.35
4.6321
9.9853
4.99
45.01

1.7428
1.6662
2.2
5.6090
2.8045
47.1955

De los extractos etanlicos y de acetato de etilo que haban dado la prueba de taninos
positiva se cuantific y los resultados se encuentran en la tabla 14.
Tabla 14 Por ciento de taninos obtenidos

Extracto

Gramos por ciento de tanino

Etanlico 1

0.46

Etanlico 2

0.54

Etanlico 3

0.46

Acetato de etilo 1

0.37

Acetato de etilo 2

0.36

Acetato de etilo 3

0.54

78

Posteriormente de los extractos obtenidos se realiz una cromatografa de capa fina

utilizando como sistema de elusin para alcaloides: acetato de etilo - metanol - agua
(100:13.5:10) as como se utiliz tambin como eluato un solvente establecido por
Wagner para identificar metabolitos secundarios en Acacias acetato de etilo ac. Frmico
cido actico agua (100:11:11:27) posteriormente se determinaron los Rf utilizando un
estndar de cafena y se correlacionaron los resultados con los establecidos en la
bibliografa (21) Tabla 15
Tabla 15 Los Rf obtenidos se correlacionaron con una muestra de cafena grado Merck

ALCALOIDES

ACACEAE

Solvente acetato
de etilo metanol
agua (100:13.5:10)

Acetato de etilo/
cido frmico /cido
actico/
agua
(100:11:11:27)

Rf

Rf

Rf

Nombre
compuesto

0.468

0.7111

0.70

Quercetina-3-Oglucosido
Quercetina-3-Odirhamnosido

Extracto
de acetato
de etilo

0.4893,

0.9933

0.9

Kaempferol-3-Oarabinoside

Extracto
etanlico

0.5106 0.7659

0.40

0.40

Kaempferol
diglicosido

Muestra

Cafeina

Datos bibliogrficos

Grado
analtico

Pruebas de
color

del

Coloracin

Fluorescen
de azul o
naranja

0.7659

0.8222

Fluorescen
de azul o
naranja

79

Tabla 16 Identificacin de alcaloides, Rf obtenidos se correlacionaron con una muestra de

cafena grado Merck

(21)

Extracto

Alcohol

Acetato de etilo

Datos bibliogrficos

0.98

No
resultado

Rf

Nombre del compuesto

0.56

0.86,

0.48,

0.70

0.56

0.93

0.93,

Quercetina-3-Oglucosido Quercetina-3O-dirhamnosido

0.98

0.98

0.93

0.48

0.9

Kaempferol-3-Oarabinoside

0.56

0.40

Kaempferol diglicosido

existe

Referencia
Cafena

0.93
0.98

80

Tabla 17 Identificacin de alcaloides con butanol-acido actico, los Rf obtenidos se

correlacionaron con una muestra de cafena grado Merck

Extracto

Etanol

0.40

Acetato de etilo

Datos
(29)
bibliogrficos

Cafena

0.3548

0.29,

0.28 estricnina o
atropina

0.3548

0.27 procaina
0.53

0.53
0.53
metilamphetamine

0.83,

0.3548

0.93

Acetato

Etanlico
Cafena

Figura 73 Cromatografa de alcaloides

81

CONCLUSION

82

Se identific que la Acacia angustissima (timbre) contiene dos microorganismos uno de la

Familia de Saccharomycetaceae gnero Saccharomyces y la especie encontrada fue
cerevisiae y la familia Endomycetaceae gnero Schizosaccharomyces especie pombe
Se determin que es factible obtener etanol y el rendimiento obtenido fue satisfactorio ya
que tericamente se conoce que de 1000 Kg de azcar se obtienen 644.8 L de alcohol
por lo que de 10g de azcar es factible obtener 6.44 mL de etanol absoluto, en este
estudio se logr alcanzar un mximo de 5 lo que representa un 83 % de rendimiento.
Dentro de los metabolitos secundario se identific de forma preliminar la presencia de
alcaloides adems de acuerdo a la identificacin por CCF se encontr a los flavonoides
quercetina y kamferol
Si en un frasco se coloca agua y azcar y se adiciona la corteza de Acacia angustissima
(timbre) en 24 horas se obtendr una bebida fermentable con un grado alcohlico de 5
de acuerdo al azcar adicionado, pero una vez obtenido el alcohol en ese mismo extracto
adquiere un color caf debido a que principalmente los alcaloides son solubles en etanol,
lo cul permitira que el individuo en lugar de consumir alcohol ingiera sustancias que
podran ocasionarle algn efecto psicoactivo.
Se considera este estudio como un prembulo para incursionar en otros estudios tanto
fitoqumicos como microbiolgicos.

83

ANEXO

84

1. SISTEMAS DE IDENTIFICACIN MICROBIANA POR MULTIPRUEBAS GALERA

API 20
La batera de pruebas API20E es un sistema de identificacin rpida para bacterias de la
familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram -. Bsicamente consta de 21 tests
bioqumicos estandarizados y miniaturizados, y una base de datos. Este sistema presenta
las ventajas de ser rpido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada
tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados.
Cada tubo es una prueba bioqumica distinta. La prueba nmero 21, la oxidasa, se hace
de forma independiente a la tira.
Tabla 1 Pruebas que consta la galera:

Prueba

Reaccin / Enzimas

ONPG

Beta-galactosidasa

ADH

Arginina deshidrolasa

LDC

Lisina descarboxilasa

ODC

Ornitina descarboxilasa

CIT

Utilizacin del citrato

H2S

Produccin de H 2 S

URE

Ureasa

TDA

Triptfano desaminasa

IND

Produccin de indol

VP

Produccin de acetona (Voges-Proskauer)

GEL

Gelatinasa

GLU

Fermentacin/oxidacin de glucosa

MAN

Fermentacin/oxidacin de manitol

INO

Fermentacin/oxidacin de inositol

SOR

Fermentacin/oxidacin de sorbitol

85

RHA

Fermentacin/oxidacin de ramnosa

SAC

Fermentacin/oxidacin de sacarosa

MEL

Fermentacin/oxidacin de melobiosa

AMY

Fermentacin/oxidacin de amigdalina

ARA

Fermentacin/oxidacin de arabinosa

OX

Citocromo oxidasa

A partir de una colonia bien aislada del microorganismo, hacer una suspensin en 5 mL
de solucin salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua estril.

Figura 1 Realizacin de solucin salina (1% de NaCl)

Llenar con la suspensin del microorganismo a identificar los tubos, no la cpula (cada
pocillo tiene un tubo y una cpula, parte aerobia), de todos los pocillos (CIT , VP, GEL)

Figura 2 Colocacin de la muestra

86

Cubrir con parafina las cpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener
anaerobiosis.

Figura 3 Llenados de cpulas con parafina

Poner la tira en su propia cmara hmeda de incubacin. Previamente poner agua en los
alvolos de la cmara para proporcionar una atmsfera hmeda durante la incubacin.

Figura 4 Introduccin de la tira en una cmara hmeda de incubacin

87

Incubar a 37 C durante 18-24 h.

Figura 5 Incubacin de la cmara

Tras la incubacin se anotan los resultados inmediatos, es decir, los que no requieren ser
revelados.
Determinadas pruebas requieren ser reveladas, para el revelado se tienen que tener en
cuenta dos criterios:

Si la glucosa da negativo y los tests positivos son dos o menos de dos, no hay
que aadir reactivos. Cuando esto ocurre se hacen otros tipos de API como el API
20NE, API OF, el API M o el API 10S para ver determinados metabolismos
especiales.

Si la glucosa es positiva y/o tres o ms test son positivos se revelan los test que
requieren reactivos:

TDA Aadir una gota de FeCl3 10 %.

VP Aadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2 (C2 H5 OH).
IND Aadir una gota de reactivo de Kovacs o de Dimetilamino-cinamaldehido.
Oxidasa Aadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recin preparado
La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparacin de los colores de cada
pocillo con los de las tablas de lectura, y anotando el resultado como positivo o negativo
(ms adelante se explicar con detalle).

88

Tabla 2 Comparacin de resultados con colores de lectura.

Prueba

Reaccin / Enzimas

Negativo

Positivo

ONPG

Beta-galactosidasa

sin color

amarillo

ADH

Arginina deshidrolasa

amarillo

rojo o naranja

LDC

Lisina descarboxilasa

amarillo

rojo o naranja

ODC

Ornitina descarboxilasa amarillo

rojo o naranja

CIT

Utilizacin del citrato

verde

azul oscuro
turquesa

H2S

Produccin de H 2 S

sin precipitado precipitado

negro
negro

URE

Ureasa

amarillo

rojo o naranja

TDA

Triptfano desaminasa

amarillo

marrn-rojo

IND

Produccin de indol

amarillo

color rosa o
anillo rosa-rojo

VP

Produccin de acetona
(Voges-Proskauer)
sin color

rosa-rojo

GEL

Gelatinasa

difusin
pigmento

GLU

Fermentacin/oxidacin
de glucosa
azul o verde

amarillo

MAN

Fermentacin/oxidacin
de manitol
azul o verde

amarillo

INO

Fermentacin/oxidacin
de inositol
azul o verde

amarillo

SOR

Fermentacin/oxidacin
de sorbitol
azul o verde

amarillo

sin difusin

de

89

RHA

Fermentacin/oxidacin
de ramnosa
azul o verde

amarillo

SAC

Fermentacin/oxidacin
de sacarosa
azul o verde

amarillo

MEL

Fermentacin/oxidacin
de melobiosa
azul o verde

amarillo

AMY

Fermentacin/oxidacin
de amigdalina
azul o verde

amarillo

ARA

Fermentacin/oxidacin
de arabinosa
azul o verde

amarillo

OX

Citocromo oxidasa

La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparacin de los colores de cada
pocillo con los de las tablas de lectura, y anotando el resultado como positivo o negativo

Figura 6 Interpretacin de resultados

90

Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numrico de 7 cifras. Los

pocillos estn separados en grupos de tres: en total tenemos 7 grupos de tres tubos o
tripletes (el test nmero 21 corresponde al test de la oxidasa). Para obtener el perfil
numrico de 7 cifras, a cada pocillo se le dar el valor 0, 1, 2 4, de acuerdo a los
siguientes criterios:

Si la reaccin es negativa se pone 0.

Si la reaccin es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el

segundo, 4 si es el tercero.

Se suman los valores de cada triplete, con las sumas de los siete tripletes se
obtiene un cdigo de 7 cifras.

Figura 7 Anotacin de resultados.

Con este cdigo se busca en la tabla de identificacin la especie de que se trata, para
realizar esta operacin hay programas informticos.

91

REVISION
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