MICROBIOLOGIA - Bacteriologia, Medios de cultivo y

pruebas bioquimicas
Tema 1 - Microbiologia Clnica
(evolucin histrica, conceptos
generales, organizacin de laboratorio)
Microbiologa - la ciencia que estudia los seres vivos no visibles al ojo
desnudo(microorganismos; aunque se incluyen metazoos parsitos no microscpicos),
que atribuyen el origen de la vida sobre la tierra y el mantenimiento del equilibrio en la
biosfera (en vida libre como saprofitos o depredadores con distinto grado de
simbiosis => comensalismo, mutualismo o parasitismo), aunque tambin tienen
efectos
negativos
como producir
enfermedades;
Los
virus
y
viroides => parsitos endo-celulares
obligados (no
se
replica
en
vida
libre); Microbiologa medica => estudia a los microorganismos que afectan al
hombre (reino procariota/ bacterias, los eucariotas del reino Fung, los virus y
viroides); Parasitologa =>
estudia
los eucariotas microscpicas (protozoos)
ymacroscpicas (metazoos)
de endo
o
ectoparsito (los artrpodos estudiados tambin comovectores y reservorios de
enfermedades transmisibles);

Microbiologa medica:
- Microbiologa general => se estudia conocimientos histricos, clasificacin,
estructura y fisiologa de los microorganismos.
- Microbiologa
especial =>
se
estudia 4
grupos
de
agentes
infecciosos(bacteriologa, virologa, micologa y parasitologa) +
recientemente los
viroides (moleculas circulares de ARN de bajo peso molecular que carecen de
cubierta proteica) y los priones(protenas codificadas por genes celulares
y actan como
seales
reguladoras,
responsables
de
algunas
enfermedades neurolgicas graves - Creutzfeldt-Jacob y el Kuru)

Evolucin histrica de la microbiologa - como ciencia especializada no aparece

hasta finales del siglo XIX; cuatro periodos:
-1 => periodo especulativo (desde la antigedad hasta los primeros microscopistas)
-2 => desde 1675 hasta la mitad del siglo XIX (descubrimiento de los
microorganismos porLeeuwenhoek en 1675 - constructor de lentes holandes que
invent el microscpio simple)
-3 => periodo de cultivo de microorganismos hasta finales de siglo XIX (Pasteur y
Kochlogro cristalizar a la Microbiologa como ciencia experimental bien asentada.
-4 => desde
principios
del
siglo
XX
hasta
ahora (se
estudian fisiolgica, bioqumica, gentica, ecolgica y
surgimiento
de virologa, inmunolgia.
- Redi, Spallanzani y otros fisicos del siglo XVII demostraron que el microorganismo
no se genera espontaneamente (de novo), postularon la teora de la biognesis (ser vivo
nace de otro ser vivo).
- Pasteur
(1822-1895) demostr que la
fermentacin
era
producida
por
microorganismos en crecimiento.
- Se dobl el interes de muchos naturalistas tras la publicacin de los libros de Darwin.
- Davaine (1863-1868) encontr grandes cantidades de m.o. en la sangre de las
vacas(bacteridios) y Robert Koch (1843-1910) en 1876 aisl con sus tcnicas de cultivo
puro el bacilo de antrax (Bacillus anthracis); mas tarde Koch y su colegas confirmaron
que las esporas son formas diferenciadas y resistentes de bacilos y demostraron que la
enfermedad poda transmitir sucesivamente a ratones sanos inoculndose bacilos
obtenidos de cultivo puro; basados en los postulados su maestro Henle, Koch
postul siguentes criterios:
- el microorganismo debe estar presente en todos los individuos enfermos
- el m.o. debe poder aislarse del hospedador y ser crecido en cultivo puro
- la inoculacin del m.o crecido en cultivo puro a animales sanos debe provocar
la aparicin de sintomas especficos de la enfermedad en cuestin (cada enfermedad
infecciosa esta causada por un tipo de bacteria diferente)
- el m.o. debe poder ser re-aislado del hospedador infectado de forma experimental.
Las 2 dcadas siguientes, se aislaron una gran variedad de bacterias patgenas; en
Francia elInstituto Pasteur se concentro sobre los procesos infectivos, la inmunidad del
hospedador y la obtencin de vacunas (vacuna antirrbica ensayada por Pasteur en
1885, contribuye al nacimiento de la inmunolgia).

Conceptos generales y clasificacin - al finales del siglo XIX los microorganismos

se agrupan en un nuevo reino fuera de la teora de Darwin => Protistas para los
protozoos, las algas microscpicas, los hongos microscpicos y las bacterias como
seres microscpicos;Chatton en 1932 clasifica a los seres vivos en 4 reinos => animalia,
plantae, protistas inferiores o procariotas (bacterias) y protistas superiores o
eucariotas (algas, hongos y protozoos); Whittaker en 1969 agrupa en 5 reinos =>
animalia, plantae, fungi, procariotas y protista; Magulis en 1992 los agrupa
definitivamente por ahora en 2 superreinos /dominios, 5 reinos y 2 subreinos =>
- Dominio: procaryotae, 1 reino: monera, subreino: archeobacteria y eubacteria
(incluyendo todas las bacterias divididas en grupos)
- Dominio: eucaryotae, con 4 reinos: protista, fung, animalia y plantae (incluyendo
protozoos, hongos, algas, animales y vegetales); protista => son unicelulares
eucariontes pero que no cumplen con las caractersticas para estar en
algn otro reino organismos de este tipo (p.ej. protozoos)

Diferencias bsicas entre los procariotas y los eucariotas:

- clula eucaritica => presenta un ncleo verdadero rodeado por una membrana
nuclear con determinado numero de cromosomas que estn constituidos por ADN e
hitonas(protenas del ncleo); el citoplasma contiene mitocondrias, cloroplastos,
ribosomas y otros orgnulos celulares y todo ello se recubre por una membrana que se
prolonga hacia el interior, organizando unos canales en el que forma el retculo endoplasmtico (donde
se
encuentran
los ribosomas
responsables
de
la sntesis de protenas); la membrana celular puede o no recubrirse de pared celular

(carece de peptidoglicano) para proteccin o dar la consistencia a la clula;

posee celulosa o quitina.

- clula procaritica => mas primitiva, no esta organizada y no posee

verdadero ncleo (ADN no esta rodeado de una membrana - se encuentra libre); no
posee mitocondrias, sino mesosomas (repliegues de la membrana celular donde se
hallan lasenzimas responsables de la respiracin); tampoco hay cloroplastos,
sino cromatforos(contienen clorofilas); los ribosomas se encuentran pegados a la
membrana citoplasmtica que estn protegidas por una pared celular (peptidoglicano exclusivo de procariotas, aunque arqueo-bacterias y micoplasmas no lo
poseen); las arqueo-bacterias, las eubacterias y los eucariotas se difieren en => la
estructura de RNA polimerasa y en la composicion de los lpidos de su membrana.

- los virus => un grupo aparte que no se ha integrado en ningn reino y se discute si
son o no seres vivos; es incapaces de reproducirse por si mismos, dependen de
un husped que
les
proporcione
el
mecanismo
de
la replicacin y sntesis de macromolculas); una vez que han conseguido esto, salen de
la clula infectada produciendo su muerte; hay virus que infectan a celulas animales,
otros a vegetales y otros a bacterias; un virus se define como => un bloque de
material gentico rodeado
por
una
cubierta
proteica
que
le
sirve
como vehculo de transmisin; algunos pueden llevar una envoltura circundante
compuesta de lpidos y carbohidratos; los viroides (30 especies) => agentes
infecciosos (de menor complejidad gentica y estructural conocida) que solo afectan a
plantas superiores; constituidos por 1 cadena de ARN cclica corta que no
codifica protenas; tamao 10 veces menor que los virus (parecen ser una etapa
primitiva
de
los
virus); los
priones
(proteinceous
infectious
particle) => partculas patgenas de naturaleza proteica sin acido nucleico;
identificados en 1982, aunque desde el siglo XVIII se sospechaba de su existencia; las
enfermedades "prion" en el hombre (encefalopatas espongiformes transmisibles)
afectan al sistema nervioso y se cree que tambin a los musculos.

Organizacin de un laboratorio de microbiologia clnica

Estructura (depende del tamao y caractersticas, espacio que dispone y numero de
personal):
1. reas/ secciones bsicas:
- Seccin de toma de muestras
- Seccin de recepcin y registro de muestras
- Seccin de siembra de muestras
- Seccin de medios de cultivo
- rea de almacn
2. reas/ secciones especializadas:
- Seccin de bacteriologa (se divide en reas => urocultivos, coprocultivos y parsitos,
exudados y anaerobios, hemocultivos)
- Seccin de micobacterias
- Seccin de micologa
- Seccin de antibiticos
- Seccin de serologa o inmuno-microbiologa
- Otras secciones (virologa o biologa molecular)
Normas de seguridad e higiene en el trabajo - tratan de evitar el riesgo
de infeccin al personal que trabaja en el laboratorio as como su extensin a la
comunidad (establecidas por el CDC/ centro de control de la enfermedad) americano y
del instituto nacional de salud de ese pas.
Niveles de seguridad biologa:
Nivel
1 =>
valido
para laboratorios
de
enseanza que
trabajan
con microorganismo
no patgenos bien
conocidos
y patgenos oportunistas:
- las puertas permanecen cerradas mientras se trabaja
- las mesas de trabajo se desinfectan al terminar el trabajo y cuando es necesario
(derrame/contaminacin)
- todo material contaminado debe ser esterilizado antes de desecharlo
- no pipetear aspirando con la boca
- no comer, fumar, aplicarse cosmticos, morder los lapices, bolgrafos o tener
alimentos en el laboratorio.
- lavarse las manos despus de trabajar con microorganismos y al terminar la jornada
(uso de guantes).
- realizar las tcnicas correctamente, evitando la produccin de aerosoles.
- llevar bata durante el trabajo que se quitara al salir del laboratorio.

- los materiales que no pueden ser esterilizados en el propio laboratorio, se

transportaran en contenedores cerrados para el traslado hasta su descontaminacin;
debe existir autoclave para descontaminar en el mismo edificio.
- deben existir programas de desinfeccin y desratizacin
- el diseo del laboratorio debe permitir una fcil limpieza incluso entre los muebles
que deben ser impermeable, resistentes a los cidos, lcalis y al fuego.
- cada laboratorio debe tener un lavabo.
- si las ventanas se pueden abrir, deben estar protegidas con mosquiteros
Nivel 2 => permite el trabajo con microorganismo de peligrosidad potencial
moderada (hospitales o centros de salud a nivel primario); ademas de las normas del
nivel 1, comprende las siguientes:
- es obligatorio el uso de bata o pijamas que no deben usarse fuera del laboratorio,
especialmente en el comedor o cafetera o salidas fuera del edificio.
- las tcnicas serologcas con Ags sin capacidad infectante pueden realizarse en las
mesas de trabajo
- el acceso al laboratorio debe estar limitado.
- se deben utilizar guantes en todas las tcnicas con productos potencialmente
peligrosos o animales.
- en un accidente de exposicin a productos contaminados (derrame, pinchazos),
comunicar inmediatamente al responsable del laboratorio.
- se toma una muestra de suero del personal cuando comienza a trabajar, se archivara
como suero base.
- existir un manual de normas de seguridad en el laboratorio que todo el mundo debe
conocer y donde se exponga lo que debe hacerse ante un accidente.
- se trabajara con cabinas de seguridad de nivel I, II o III cuando se
realicen tcnicas que
suponen produccin de
aerosoles
como centrifugacin,
homogenizacin de muestras, siembra o procesamiento de muestras en general.
Nivel 3 => es adecuado para trabajar con microorganismos de alto riesgo y
comprende las normas de los niveles 1 y 2 y ademas:
- todas las actividades con microorganismo o productos potencialmente patgenos se
realizaran en cabinas de seguridad; ningn trabajo se realizara en las mesas de trabajo.
- se utilizaran batas abiertas por la espalda, que no deben llevarse fuera del laboratorio;
utilizar guantes cuando se trabaja con material contaminado o animales que se
desinfectaran antes de desecharlos; en las habitaciones donde se tienen los animales se
utilizaranmascarillas rgidas.
- en el laboratorio no debe haber plantas o animales que no se utilicen en el trabajo.
- el laboratorio debe estar aislado de la circulacin general, existiendo una doble puerta
de entrada con una habitacin para cambiarse de ropa y con ducha.
- las superficies y los muebles deben ser de fcil limpieza; las ventanas deben cerrar
hermeticamente; las puertas se cerraran automticamente.
- cerca de las puerta de salida existirn lavabos que pueden accionar con el pie, codo o
rodilla.
- existir un autoclave para descontaminar en el propio laboratorio
- existir un sistema de extraccin de aire con circulacin del mismo de la puerta de
entrada hacia el interior del laboratorio; regulacin de la entrada y salida del aire
acondicionado; el aire de salida de las cabinas de seguridad tipo
III saldr directamente al exterior; el de las cabinas tipo I y II se elimina directamente

al exterior o al sistema general del edificio pasando previamente por filtros de alta
eficacia (HEPA).
Nivel 4 => este nivel solo se establece en laboratorios de experimentacin y no en
laboratorios de microbiologia clnica; se necesita este nivel cuando se
manejanmicroorganismos de altsimo riesgo o que son exticos en ese pas,
especialmente virus.

Tema 2 - El Control de calidad de un

laboratorio microbiologia clnica
El control de calidad sirve para:
- Garantizar la fiabilidad de las tcnicas que se realizan en el laboratorio
- Asegurar resultados rpidos y tiles
- Estandarizar las tcnicas e interpretar correctamente los resultados
- Controlar la calidad de las muestras, estableciendo una buena comunicacin con
los clnicos y el personal encargados de obtener muestras
- Aumentar la profesionalidad del personal del laboratorio y la confianza de
los clnicos en los resultados que reciben.
Metodos y reas de control de calidad
1. Control de calidad de las muestras => se debe controlar desde su obtencin,
transporte y procesamiento hasta la emisin de los resultados siguiendo normas
elaboradas con criterios claros de rechazo y establecer horarios fijos de recepcin de
muestras.
2. Medios de cultivo => deben ser empaquetados correctamente en bolsas
cerradas para evitar la desecacin, almacenados correctamente y etiquetados con
la fecha de caducidad (a 4C dura 8-10 semanas; sin empaquetar a 4C dura 2
semanas; los caldos y agar en tubo con tapn a 4C - 6 meses); los
que estn preparados en el laboratorio, siguen un control siguiente:
- Control de esterilidad => comprobar con 1 unidad de cada lote (<100) o 3 unidad si
es un gran lote mediante incubacin a 37C durante 24 horas; si se contaminan, debe
rechazarse.
- Control de crecimiento => se inocula un medio de cada lote con un inoculo reducido
microorganismo control (cepas de coleccin) que asegure el crecimiento o con un
inoculo estndar.
- Control de medios con caractersticas selectivas => se inocula con el germen que no
debe crecer en ello.
- Control de las caractersticas bioqumicas => se utiliza un control positivo que
produce la reaccin bioqumica esperada.
3. Reactivos de identificacin => se deben marcar con la fecha del primer uso y la
caducidad.
- Los reactivos de identificacin se deben utilizar siempre con un control positivo y
negativo.
- No deben utilizarse reactivos caducados o cuyo aspecto no sea el adecuado y debe
asegurarse su almacenamiento correcto
- Hay que utilizar siempre el lote o el vial cuya caducidad este mas prxima

4. Cepas control => una coleccin de cepas de ATCC dispone de prcticamente todos
los microorganismo que se utilizan en controles de calidad.
5. Mantenimiento de las cepas control => se mantiene de manera que no
pierdan sus caractersticas tpicas.
6. Control de aparatos => se debe mantener una temperatura ambiente en el
laboratorio entre 23-29C y la humedad entre 30-50 %; al final de jornada se limpian
los superficies con un antisptico (fenol 5% o glutaraldehido)
- Limpieza =>
las neveras
y
congeladores se
limpian
y
se
descongelan peridicamente (mnimo 1 vez al ao); las cabinas de seguridad,
centrifugas, agitadores de tubos se limpian todos los das al acabar el trabajo
con antisptico fenol 5%; lasestufas y baos se limpian cada 6 meses.
- Temperatura => un control diario de las estufas, baos, neveras y
congeladores antes de empezar el trabajo; se usa un termmetro para cada aparato
colocado en el interior del mismo
- Atmsfera de incubacin => se controla la cantidad de CO2 de las estufas con un
indicador que suele estar acoplado con sistema de alarma; se controla
la atmsfera anaerobiamediante catalizadores e indicadores de azul de metileno.
- Cabinas de flujo laminar => un cambio peridico de los filtros y un control de
laslamparas ultravioleta.
- Autoclaves => control de esterilizacion (fsico del aparato, qumico - tiras
y biolgico - esporas)
- Microscopios => se limpian con suavidad al terminar la jornada, taparlos con su
funda; se limpian cada semana los objetivos con alcohol-eter 50%; se
realiza peridicamente un ajuste de condensadores y objetivos.

Tema 3 - Tcnicas de
descontaminacin, desinfeccin y esterilizaci
n
En todo laboratorio de microbiologia se debe tener en cuenta:
- todo material para la recogida de muestra debe estar esterilizado
- todo material para la realizacin de las pruebas debe estar estril
- antes de cualquier esterilizacin, el material debe estar limpio y/o desinfectado
- conviene utilizar material desechable
- el material de uso asptico debe guardarse separadamente del uso sptico
- la limpieza de residuos en el suelo, mesas de trabajo y cualquier superficie se realiza
mediante desinfeccin peridica
- destreza y formacin por parte del personal sanitario de laboratorio (deben trabajar
en condiciones de total asepsia)
- la manipulacin de todo material debe seguir el protocolo de trabajo con medidas
cautelares para la prevencin de accidentes laborales.
Fases de la manipulacin del material del laboratorio
- Material desechable (jeringas, guantes, lancetas) => se utiliza una sola vez y se
desecha o se destruye; material punzante o cortante se desecha en recipientes

resistentes a la puncin; si no es punzante, se auto-clavar y se tirar

en contenedores especiales.
- Material reutilizable (de vidrio, de metal, batas, gorro de tela) despus de
su utilizacin se limpia, se desinfecta o se esteriliza (segn los casos)
- Todo instrumento se limpia inmediatamente despus de utilizar (segn el protocolo
de cada caso), despus se desinfecta o se esteriliza directamente para destruir
cualquier forma de vida incluidas formas de resistencia o esporas.
- Materiales no esterilizados (pero si se desinfecta - destruir toda forma de
vida patgena) que se pueden utilizar => portaobjetos para la tincin, frascos
lavadores con agua destilada, frasco de colorantes, etc.
Principios bsicos de descontaminacin concepto
de
limpieza, desinfeccin y esterilizacin
- Limpieza => se separa el material entre los de uso asptico y sptico, se limpia; los
instrumentos se limpian primero con agua fra (la sangre se adhieren con
calor), despus con agua caliente y jabn frotando en los ngulos, se enjuaga y
se volver a aclarar con agua destilada; se seca y se comprueba su estado; se protege si
es necesario.
- Desinfeccin => materiales o superficies inertes (suelo, mesa), se utilizan
metodos qumicos (detergentes, hipocloritos, etc.); desinfeccin de manos, piel y
mucosas corresponde a tcnicas de antisepsia (se aplica tpicamente antispticos).
- Esterilizacin => se usa para la reutilizacin de cualquier material.
Tcnicas de descontaminacin fsica
A. Tratamientos trmicos por calor seco y hmedo - consisten en
la esterilizacin o desinfeccin de los grmenes por aplicacin de calor seco o hmedo.
1. Descontaminacin por calor seco (depende de la temperatura, se consigue o
no la esterilizacin)
- Flameado => exponer un objeto a la llama de un mechero durante un tiempo segn el
material de que se trate (p.ej. la asa de siembra)
- Incineracin =>
se
usa
un horno
crematorio para
destruir material
desechables(jeringas, catteres)
- Horno seco => estufas de Pasteur o Poupinel (hornos metlicos de doble pared y
bandejas ajustables) mediante resistencias elctricas, esterilizan durante 2 horas a
180 o 3horas y media a 160C; tienen termmetro externo que mide la temperatura
en el interior y un selector de temperatura y un reloj;
2. Descontaminacin por calor hmedo
- Ebullicin => se utiliza poco porque no es fiable; introducir el material en agua
hirviendo
(100C)
durante
10
minutos
como mnimo;
no
es
un mtodo de esterilizacin (no destruyen esporas)
- Autoclave => un recipiente cilndrico que se cierra hermticamente; externamente
lleva un manmetro que registra la presin en el interior cuando esta en marcha;
presenta
una vlvula de
seguridad
que
se abrir espontneamente cuando
la presin interna supere la elegida o resulte peligrosa, una llave de purga que permite
la salida de vapor y un reloj que selecciona el tiempo deseado con alarma que indica el
final del proceso; interiormente hay una rejilla que se coloca por encima de una
resistencia elctrica cubierta
por
agua
destilada;
es
muy
utilizado
y se conseguir esterilizacin si sometemos el autoclave a 1 atmsfera durante 20
minutos (120C); en el se puede esterilizar => material metlico, cristal, torundas,

compresas, paos, batas, plsticos y gomas reutilizables; el inconveniente=> con el

tiempo los objetos metlicos se oxidan.
Tcnica => con autoclave apagado y abierto, aadimos agua destilada hasta la rejilla,
sin cubrirla (para que el material que deseamos esterilizar no contacte directamente
con el agua); las piezas pequeas se colocan en cestas/ cajas; se cierra la tapa y se
ajusta a presin; se abrir la llave de purga para que permita la salida de vapor y se
ajustara la presin deseada para la esterilizacin y el tiempo (1 atmsfera - 20
minutos); se pondr en marcha el aparato y se espera hasta que salga vapor por la llave
de purga; se cerrara la llave de purga y la presin comenzara a subir hasta llegar al
nivel programado; a partir de aqu comenzara a contar el tiempo de esterilizacin; una
vez realizada la esterilizacin se apagara el interruptor del autoclave y se esperara a
que el manmetro baje a 0; cuando la presin este a 0, abriremos la llave de purga para
que salga gran parte del vapor que todava se encuentra contenido; esto se realizara
con cuidado para evitar descompresiones bruscas que podran originar la apertura de
aquellos recipientes tapados con algodn graso; una ves comprobado la salida de
vapor, se abre la tapa del autoclave y se extrae el material.
- Tyndalizacin => mtodo de esterilizaciones
consecutivas (repetidas
en
34 das hasta que se elimine el germen contaminante); se utiliza cuando existe
una contaminacin de algn material o en el propio autoclave; tericamente no se
deben alcanzar temperatura >100C y no se debe abrir el aparato o recipiente que se
somete a tyndalizacin; objetivo => destruir las esporas cuando germinan y evitar
contaminaciones por microorganismos resistentes.
- Vapor fluente => utilizar el autoclave siguiendo la tcnica habitual, pero la llave de
purga abierta, lo que impedir que se produzca presin y la temperatura nunca sea >
100C; es utilizado para materiales o medios que no deban soportar temperaturas
>100C (p.ej. medios muy azucarados, para evitar su caramelizacin); es poco
usado en microbiologia.
- Uperizacin => mtodo muy utilizado en la industria alimentaria (tratar el medio a
una temperatura de 149-150C durante unos instantes (1-5 segundos). No se alteran
las propiedades del medio y produce esterilizacin.
- Pasteurizacin => no es un mtodo de esterilizacin y es utilizado en la industria
alimentaria (calentar el medio a temperaturas entre 62C (15 minutos) y 72C (30
minutos); no destruye las formas de resistencia.
Tratamientos a temperatura ambiente
1. Radiaciones ionizantes - las utilizadas en microbiologia son:
- Rayos ultravioletas => para mantener la esterilidad de superficies y recintos;
tienenpoca penetracion; acta impidiendo y alterando la duplicacin del ADN celular;
se debe evitar su presencia en la piel;

- Rayos gamma => para conseguir esterilizacin en fri, producidos por isotopos
radiactivos;
presentan
un poder
de penetracin muy
alto,
constituyendo
el mtodo de esterilizacin mas utilizado a nivel industrial (materiales de uso nico o

desechable p.ej. guantes, jeringas, catteres, prtesis, vlvulas y que pudiera alterarse
por calor)
2. Sistemas de filtracin (filtrar a las estructuras que sobrepasen un determinado
tamao, segn el tipo de filtro; la efectividad del filtro es proporcional al tamao del
poro, pudiendo conseguirse esterilizacin); presencia de presin, vaci y la carga del
filtro (+); las bacterias en medios neutros son (-).
- Filtros de membrana => filtros de celulosa muy purificada y con un tamao de
poro fino o muy fino; existe desde sistemas sencillos hasta sistemas de piezas
desmontables que llevan acoplada una bomba de vaci para ejercer succin sobre el
medio a filtrar.

- Filtros de vidrio poroso o de fibra de vidrio => se utilizan en

casos especficos y tienen mas resistencia que los anteriores.

- Filtros de Chamberland => son de porcelana porosa, mas caros que los
anteriores y menos utilizados.

- Filtros de flujo laminar => dispositivos de filtrado donde entra aire contaminado
y sale estril; utilizados como mecanismo de esterilizacin en campanas de flujo
laminar, en quirfanos y recinto que pretende crear o mantener un ambiente estril;
flujo => vertical u horizontal.

- Ultrasonidos => introducir el material en tanques de distintos tamaos con liquido

desinfectante; una vez puesto en marcha el dispositivo, comienza a vibrar a gran
velocidad originando pequesimas burbujas que entran en todos los recodos del
material consiguiendo eliminar los microorganismos; es poco utilizado, caro y poco
practico.

Tcnicas de descontaminacin qumica

1. Metodos qumicos de desinfeccin (desinfectantes que se aplica sobre objetos y
superficies y antispticos que se aplica sobre la piel y mucosas); condiciones que
cumplir en un buen mtodo de desinfeccin:
- matar el mayor numero de grmenes o al menos todos los patgenos
- ser econmico
- no ser corrosivo, toxico ni irritante para los tejidos
- se deber diluir al menos en agua
- tener un olor agradable
Los mas utilizados:
- Detergentes catinicos => diluidos al 1% para desinfeccin de manos; mas
frecuente para limpieza y desinfeccin de paredes, suelos, ropa y objetos (sin diluir)
- Clorofenoles => muy eficaces y se asocian con los detergentes catinicos para
mejorar el grado de desinfeccin.
- Compuestos clorados => para desinfeccin de superficies, ropas, urinarios; se
suelen usar diluidos en agua (lejias /hipocloritos)
- Acido fenico => diluido al 5% para la limpiar objetos y superficies.
-Amoniaco
Los antispticos mas utilizados:

- Alcoholes => limpiar y desinfectar la piel, las manos (etanol), el filo de instrumental
y superficies pequeas (metanol) que no tiene contacto con la piel (p.ej. alcohol
isopropilico70%)
- Mercurio-cromo => contiene mercurio y un buen desinfectante para heridas
superficiales (las mantiene secas y protegidas)
- Derivados yodados => para preparar la piel antes de una intervencin quirrgica,
en la puncin lumbar, antes de puncin para hemo-cultivo, etc.; son efectivos y ejercen
su accin por oxidacin (p.ej. betadine, ibetane)
Metodos qumicos de esterilizacin - los mas empleados son "Oxido de
etileno" => en forma de gas (10C) mezclado con CO2, ya que puro es muy oxidante
y podra explosionar al mezclarse con O2; presenta un gran poder de penetracin y es
muy efectivo y duradero; la esterilizacin se produce a => temperaturas bajas (40C)
con humedad relativa alta (40-60%) durante un tiempo de 3-8 horas (media de 5); se
requiere cmaras o instalaciones especificas para ello, son muy caras; el oxido de
etileno se aplica a cualquier material sensible al calor y que no pueda esterilizarse por
otros metodos (p.ej. endoscopia, plsticos termo-lbiles, cauchos, material elctrico);
el material esta listo para ser utilizado a las 48 horas despus de
la esterilizacin; deber conservarse estril en
el
interior
de
una
bolsa
de plstico cerrada por procedimientos termoelctricos y dura 6 meses.
Control de esterilizacin - permiten comprobar la eficacia del proceso
de esterilizacin
1. controles de esterilizacion de tipo fsico => incluidos en el aparato de
esterilizacion (manmetros - miden presin; vacuo-metros - miden el vaci en el
interior; termmetros, grficos que registran los valores parmetros mas significativos
del proceso: temperatura, humedad, presin, vaci, tiempo etc.)
2. controles de tipo qumico - comercializados en forma de cinta adhesiva, como
indicadores del proceso de esterilizacion (por encima de la temperatura determinada
cambian de color), fundamentalmente para el control trmico.
3. sistemas de tipo biolgico - comercializados en forma de capsulas cerradas en
cuyo interior hay esporas de resistencia a la esterilizacion conocida; dichas
ampollas, tras haber sido sometidas a condiciones de esterilizacion, se incuban a
56C (Bacillus strearat-haemophilus) o a 40C (Bacillus subtilis); a cabo de 24-48
horas, se procede a su lectura donde la germinacin y cambio de color indicara si se
han producido condiciones de esterilizacion.

Tema 4 - Toma de muestras (recogida, manejo y

tratamiento)
Seleccin de
la
muestra
para
tener significacin diagnostica - representativa del
proceso patolgico y cantidad suficiente (p.ej. no es relevante un esputo poco
purulento y contaminado por saliva); recipiente estril adecuado (para un pus de un
absceso => anaerobio, estriles);
Procedimiento para la toma de muestras:

- La toma de muestras debe realizarse antes de iniciar el tratamiento ATB (al menos
informar al laboratorio de ATB que esta recibiendo)
Es
muy
importante
seguir
las
normas
necesarias
para evitar
la contaminacin externa de las muestras (descontaminar la piel, evitar reas con flora
normal, medio de cultivo especficos para el patgeno sospechoso)
- La extraccin o recogida de las muestras se debe realizarse en el estado adecuado de
la enfermedad (durante la fase aguda o diarreica)
- La cantidad recogida debe ser suficiente y es fundamental que se utilice
unrecipiente estril y que se envi a laboratorio lo mas pronto posible.
Extraccin de sangre para hemocultivos (septicemia)
La tcnica de extraccin (se hace en un pico febril > 38,5C /antes de la toma de
la siguiente dosis de ATB) => smarch en el antebrazo, escoger la vena antes de
la desinfeccin (alcohol 70 o clorhexidina alcohlica un rea de 5cm - frotando
rigurosamente), yodo-povidona 2% desde el centro hacia afuera en el circulo, dejar
secar 1 minuto, ponerse guantes estriles, realiza la extraccin , cambiar la aguja antes
de inyectar la sangre en las botellas de cultivo, desinfectar otra vez la piel con alcohol
(sensibilidad al yodo), remitir las botellas de hemocultivos inoculadas
inmediatamente; se recomienda 3 muestras de 10 ml (cada extraccin para 2 botellas
(aerobios y anaerobios) en 24 horas con intervalo de >1 hora (al menos 2-3
extracciones separadas 30 minutes en 24 horas) en sitios diferentespara dilucidar un
posible contaminante de la piel; en nios es suficiente extraer 1-5
ml mximo cada extraccin; pacientes con tubuladora intravenosa/ catter, se toma en
la va mas abajo; se extrae lo mas limpio posible para no incluir bacterias saprofitas de
la piel;los frascos se marcan con etiqueta del paciente, numero de cama y hora
de extraccin.
Recogida de LCR (el procesamiento inmediato/ urgente) => se
recoge insertando un agua, de forma asptica, en el espacio sub-aracnoideo a nivel
lumbar, se recoge en 3-4 tubos estriles con tapa de rosca (tubo 3 o 4 => recuento
celular, 1 y 2 =>microbiolgicos y bioqumicos; si solo se llena 1 tubo =>
microbiologia retirara de forma asptica la cantidad necesaria, el resto => citolgicos
y bioqumicos;
el volumen
de
muestra
es
importante
(10
ml) para
la deteccin (p.ej.M.tuberculosis y C.neoformans); no se deben refrigerar (temperatura
ambiente o estufa a 37) excepto para estudios virales se pueden refrigerarse hasta 24
horas o congelarse a -70C si hay una mayor demora; la muestra
bacteriana => turbio (meningococo dentro de leucocitos), virales => transparente;
Recogida de otros lquidos estriles - la aspiracin percutnea de liquido
sinovial, pleural, pericrdico y peritoneal se hace de forma asptica y se inyecta
inmediatamente en un frasco o tubo esterilizadas (transporte anaerobio), antes, se
expulsar las burbujas de aire de la jeringa; se puede aadir una pequea cantidad de
heparina para evitar la coagulacion.
Recogida de muestras del tracto respiratorio superior:
- Exudado farngeo => se realiza mediante una torunda de algodn, dacrn o
alginato de calcio frotando vigorosamente ambas reas amigdalinas, la faringe
posterior y las zonas de inflamacin, ulceracin, exudacin o formacin de capsulas; la

lengua se oprime con un depresor para reducir al mnimo la contaminacin del hisopo
con secreciones bucales.
- Exudado nasal => se realiza introduciendo un hisopo profundamente en cada fosa
nasaly rotando suavemente.
Tractor respiratorio inferior - el esputo es una muestra menos relevante por la
posibilidad de la contaminacin por saliva; una buena muestra => instruir
debidamente al paciente para lograr una expectoracin profunda (ayudarle con
fisioterapia respiratoria/ clapping, hidratacin o nebulizacin); pacientes con
traquestomas => se recoge aspirando(en un frasco de Lukens); las secreciones
bronquiales se recoge mediante broncoscopio, instilando una pequea cantidad de
SF estril en el rbol bronquial (tambin puede estar contaminado por flora del tracto
superior, aunque es mas relevante que esputo); una muestra mas profunda se recoge
mediante broncoscopio con lavado bronco-alveolar (BAL) para buscar Pneumocistis
carinii y hongos; cepillado bronquial es una tcnica mas agresiva en caso de neumonas
por aspiracin;
muestras
de
bacterias anaerobias
se
recoge
por
una puncin transtorcica, biopsia transbronquial y pulmonar abierta.
Recogida de heces (se procesa lo antes posible):
- Toma de muestras para coprocultivo - se recoge con un escobilln que se
introduce en un tubo estril preparado con un medio de transporte adecuado (Cary y
Blair) (tubo con una cuchara y liquido rojo/transparente; tambin se puede utilizar
frasco de orina estril; medio Cary y Blalir mantiene la viabilidad de
los patgenos intestinales); basta con impregnar la torunda en las heces en la parte
donde se observa sangre, moco o pus;
- Muestras para estudio parasitolgico - se recoge durante 3 das consecutivos,
se guardan en la nevera en un recipientes cerrados para evitar
la desecacin (temperatura 3-5C); los huevos, las larvas y los quistes de protozoos
permanecen viables varios das; la cantidad de muestra es pequea (1 cucharilla
de caf en un frasco con alcohol polivinilico /PVA 1:3); para investigar oxiuros
(parsitos) se utiliza preparacin con cita de celofn; se proporcionan al paciente 6
portaobjetos (se toma durante 6 das consecutivos) con cinta adhesiva transparente; se
toma la muestra a primera hora de la maana antes de lavarse; se aplica la cinta sobre
los margenes del ano con una suave presin, se retira y se coloca de en el porta;
Recogida de orina - el frasco estril no debe abrirse antes de la recogida; las partes
genitalesse lava solo con agua; se recoge a primera hora de maana para
estudio microbiolgico, de forma asptica, se echa el primer chorro, se recoge la
segunda mitad unos 20-30 ml.
Sondaje vesical (puncion de sonda) y puncion suprapubica - se realiza por el personal
de enfermeria
Recogida
de
muestra
de
tracto
genital se
utiliza un
tubo
con escobilln de algodn como medio de transporte; exudado uretral => el hisopo se
introduce 2 cm dentro de la uretra y se rota suavemente antes de retirarlo (muestras
separadas para el cultivo de gonococos y clamidias o ureaplasmas => se utiliza 2
escobillones,1 para estudio de gonococos 2 para clamidias o ureaplasmas); exudado
cervical => se inserta un hisopo especial (como uretral) en el canal cervical y rotandolo y moviendo-lo durante 30" antes de retirar; exudado vaginal => el hisopo se
sumerge en el fornix posterior de la vagina; para aislamiento de gonococos pueden

ser transportados en elmedio de Stuart modificado o en el medio de Amies

con carbn en temperatura ambiente, hasta su inoculacin; para aislamiento
de clamidias y micoplasmas, el medio es tampon con sacarosa y ATB; se
puede refrigerar si hay demora en el proceso.
Procedimiento para muestras en anaerobiosis - se obtiene mejor con una jeringa y
aguja, a los que debe expulsarse todo el aire.
Transporte de muestras:
- Metodos convencionales => el mas utilizado es hisopos en tubos de plstico que
llevan incorporados diversos medios de transporte que consiste en un agar semisolido, pH regulado, carece de nutrientes, pero contiene tioglicolato de sodio como
reductor, para prolongar la viabilidad de los microorganismos cuando exista demora
entre la recogida y su cultivo; los mas utilizados => (1) Medio de
Stuart (los exudados farngeos, conjuntivales, nasales y heridas) que mantiene un pH
favorable e impide la deshidratacin de las secreciones durante el transporte y
la oxidacin y autodestruccin enzimtica de los patgenos presentes (2)Medio de
Cary y Blair (muestras fecales) donde las salmonellas y las shigelas pueden recuperarse
hasta 49 das despus de la toma de muestras y Vibrio cholerae hasta 22 das despus.
- Transporte de muestras para estudio en anaerobiosis => cuando la
muestra se va a procesar dentro de 30 minutos, puede servir como transporte
una jeringa con una aguja insertada en un tapn de goma; si la demora va a ser mayor,
se usa un tubo /frasco ampolla lleno de CO2 y libre de O2 con N2/ H2 con indicador en
agar o caldo; la muestra liquido se inyecta a traves del tapn de goma despus de
expulsar el aire de la jeringa y aguja; existe tambin un hisopo en un tubo anaerobiosis
Envi de muestras (las medidas especiales para un envi por correo a un
laboratorio de referencia):
- Muestras que contengan virus deben ser refrigeradas inmediatamente y enviarse en
una caja con unidades comerciales refrigerantes
- La sangre no se enva entera, se separa el suero y se enva en un tubo estril
- La muestra <de 50 ml debe ser envasado en un recipiente hermtico irrompible con
espacio suficiente entre ambos para retener en caso de rotura; el envase se coloca
dentro de otro envase para el envi; el envase externo se identifica con un rotulo rojo y
blanco para Agentes biolgicos /Material bio-medico.
Manejo inicial de las muestras en el laboratorio - la mayor parte de las
muestras para estudio bacteriolgico que vayan a demorarse en su procesamiento
deben mantenerse en la nevera a excepcin de LCR; los fragmentos de pelos o
raspados de piel y uas para el aislamiento de hongos pueden ser mantenidos
a temperatura ambiente durante varios das antes de ser inoculados (protegidos del
polvo).

Tema 5 - Procesamiento de las muestras en

microbiologia clnica

(protocolos de siembra)
Normas bsicas generales (antes de proceder al procesamiento de la muestra):
1. Volante de peticin debe estar bien cumplimentada (filiacin y datos administrativos
del
paciente,
datos clnicos,
datos
de
la
muestra, teraputica seguida, determinacin solicitada)
2. Tener constancia de que la obtencin de la muestra ha sido realizada correctamente,
siguiendo las normas y criterios establecidos por el laboratorio, as como su recogida,
transporte y conservacin.
3. La siembra de dicha muestra se har en los medios idneos para cada caso, bien en
placa, por agotamiento y/o mtodo cuantitativo, o bien en tubo.
Procesamiento de las muestras
1. Orinas (debe llegar al laboratorio en contenedor estril y ha de conservarse a 4C
en menos de 24 horas)
[a]
Agar
sangre,
chocolate
o
Cled/Cystine-Lactose-ElectrolyteDeficient (medios general y especifico para orinas) => se siembra en 3
direcciones/ cubrir totalmente la superficie (cuantitativa en Cled o AS - para contar
colonias; realizar antibiograma); crecern todo tipo de germenes: cocos
Gram+, bacilos Gram-, levaduras; en Cled/AS no crecen cocos
Gram- (Neisseria,
Moraxella,
Chlamydia);
en
AS
se
comprueba las caractersticas hemolticas o no de las bacterias e.j. Stafilococcus
aureus (B hemoltico) y en Cled, las caracterstica lactosa (+) => amarillas o lactosa
(-) sin cambio de color => azul verdosas.
[b] Agar Mac Conkey (selectivo para bacilos Gram-) => se siembra por
agotamiento en cuadrantes (puede ponerse un disco de Colistina en el inoculo
para ayudar a la identificacin de E.coli (sensible a colistina - comn en
orinas); crecen bacilos Gram- => Enterobacterias y tambin Pseudomonas;
observaremos las caractersticas de lactosa (+) => colonias rojas y lactosa (-) sin
cambio de color => rosa.
[c] Agar Citrato de Simmons (solo en algunos protocolos); se siembra
enla lengeta del tubo preparado en pico de flauta; las colonias consumidoras
decitrato (+) => vira a azul y las que no, permanece verde; se usa para la diferenciacin
deEnterobacterias (para diferenciar entre coliformes y coliformesfecales. Los
coliformes fecales no fueron capaces de utilizar el citrato como fuente de carbono ni
a las sales de amonio como fuente de nitrgeno. Los coliformes no
fecales como Enterobacter
aerogenes o Salmonella
enteritidis podan
utilizar el citrato en este medio dando una reaccin alcalina) en base a su capacidad de
utilizar el citrato (mediante citrato permeasa)
Los grmenes mas frecuentes que podemos encontrar (en orina se
identifican especies):
- E. coli (el mas frecuente) => bacilo Gram-, mvil, sensible a Colistina, lactosa (+),
indol (+)
- Streptococcus faecalis => coco Gram+, catalasa (-), oxidasa (-).

- Proteus spp (todas) => bacilo mvil Gram-, resistente a Colistina, lactosa (-),
oxidasa (-), Triptfano Desaminasa/TDA (+), ureasa (+) tardo.
- Stafilococcus aureus => coco Gram+, catalasa (+), coagulasa (+), B hemoltico,
oxidasa(-).
- Candidas spp (todas) => morfologa de levaduras (parece como hemates)
- Klebsiella spp => bacilo Gram-, inmvil, sensible a Colistina, ureasa (+), colonias
mucosas, lactosa (+), tardo.
- Pseudomonas spp => bacilo Gram-, mvil, sensible a Colistina, lactosa (-), oxidasa
(+)
2. Coprocultivos (contenedor especifico para coprocultivo "Cary y Blair" / bote de
orina;conservada a 4C, procurar procesarla en <24H; se siembran por agotamiento en
cuadrantes).
[a] Hecktoen o SS => medios selectivos y diferenciales donde crecern el
generoSalmonella y Shigella; en Hecktoen las Salmonellas spp => colonias
lactosas (-), verdosas y pueden ser SH2/sulfihidrogeno/ acido sulfidrico (+) con fondo
negro, sonbacilos mviles, sensible a Colistina; las Shigellas spp => lactosas (-) , SH2
(-),bacilos inmviles en fresco y sensibles a Colistina; las colonias lactosas (+) en este
medio sern amarillas;
en SS las Salmonellas y Shigella sern el del medio (caramelo) y tambin con el
fondo negro (Salmonellas SH+ y lactosa- ); colonias lactosa (+) => rojizas; las colonias
lactosas+ no son patgenas (coliformes fecales) y no se investigan.
[b] Agar Yersinia CIN => para buscar colonias de Yersinia spp (rosa
clarito - Yersinia
pestis, Yersinia
enterocolitica y Yersinia
pseudotuberculosis.) que aparece como lactosa (+),sensible a Colistina y bacilos
Gram- e mviles, fermentador de manitol. La inhibicin selectiva de organismos
gram negativos y gram positivos se obtiene mediante cristal violeta (inhibidor de
Gram+), desoxicolato sdico (inhibidor de Gam+) y los agentes antimicrobianos:
cefsulodina, Irgasan (Triclosan) y novobiocina (inhibidor de S.epidermidis).

[c] Agar Campylosel => crecer Campylobacter spp (bacilos Gram- con flagelos)
como
colonias
pequeas
translucidas, sensibles
a Nalidixico
(especies C.
coli y C.jejuni) resistente a Nalidixico el C. fetus, en fresco aparecen en coma/en S,
ureasa (+) oxidasa (+) catalasa (+); al hacer la prueba del hipurato C.jejuni seran (+)
y C.coli (-); P. hipurato => un procedimiento cualitativo para determinar la
capacidad de las bacterias de hidrolizar enzimticamente (hipuricasa) el hipurato
sdico que da lugar a acido benzoico y glicina un compuesto de color morado.

[d]
Caldo
Selenito =>
caldo
enriquecido
para
los
gneros Salmonella y Shigella. el selenito de sodio inhibe la flora Gram+ y la
mayora de la flora entrica excepto Salmonella spp.

[e] Agar McConkey (solo en algunos protocolos) => los coliformes aparecern como
colonias
rojas
por
ser
lactosas
(+);
no
es
necesario???
[f] Agar TCBS /tiosulfato citrato bilis sacarosa (detectar Vibrio cholerae) =>
aparecen colonias de color amarillo sacarosa (+), oxidasa (+) y son bacilos Grampleomrficos; el extracto de levadura y la peptona proporcionan el nitrgeno y las
vitaminas.El citrato sdico, el tiosulfato sdico, la bilis de buey y un pH alcalino fuerte
inhiben los organismos Gram+ y suprimir los coliformes (inhibidor para la mayora de
las entero-bacterias), favoreciendo el crecimiento de Vibrio cholerae porque este
organismo es sensible a los entornos cidos. La alta concentracin de sodio favorece el
crecimiento de Vibrio cholerae que es halotolerante (tolera el medio salado) y de otras
especies de Vibrio, cuya mayora es haloflica. La sacarosa (+) es un carbohidrato
fermentable, y el cloruro sdico estimula el crecimiento. El tiosulfato sdico es una
fuente de azufre y acta con el citrato frrico como indicador para detectar la
produccin de cido sulfhdrico/SH2. El azul de bromotimol y el azul de timol son
indicadores de pH. En Mc, Vibrio Cholerae es lactosa (-).

3. Exudados vaginal y uretral (la muestra llegara en uno o varios escobillones; se

siembra
por
agotamiento
en
cuadrantes).
[a] Agar Sangre (medio general) => buscamos Streptococcus B hemoliticos del
grupo B(S.agalactiae), que aparecern como colonias pequeas translucidas con un
halo de B hemlisis alrededor de la colonia; son cocos Gram+, catalasa y oxidasa (-),
anaerobio
facultativo,
prueba
de
ltex
(+).
[b] Agar chocolate => buscamos Haemophilus spp como colonias muy pequeas
grisceas que crecen bien por ser grmenes exigentes en su crecimiento que requieren
factor X y/o V (proceden de la degradacin de la Hb); tambin podemos colocar discos
de factor X y/o V y mirar el satelitismo; al fresco como coco-bacilos inmviles, Gram-;
oxidasa
y
catalasa
variable.
[c]
Agar
Thayer
Martin
o
New
York =>
buscamos N.gonorrhoeae o N.meningitis que aparecern como colonias de color
gris; son diplococos Gram-, catalasa (+), oxidasa (+) que fermentan la glucosa pero no
el
resto
de
los
azucares.
[d] Agar Gardnerella => buscamos Gardnerella vaginalis, como colonias Bhemolticas y al fresco como bacilo pequeo, Gram variable, anaerobio facultativo,
oxidasa (-) y catalasa (-). La presencia de sangre humana favorece el crecimiento de las
especies estudiadas, ya que producen -hemlisis alrededor de las colonias. La hemlisis en agar con sangre humana es altamente indicativa de presencia
de G.vaginalis. Los antibiticos incluidos en el medio inhiben la mayora de los
contaminantes Gram- y de las levaduras.

[e] Vagicult o Roiron (medio liquido) => crecen levaduras (Candidas spp)
yTrichomonas (protozoo unicelular flagelado).

[f]

Agar

[g] Medio

Sabouraud (se
de

puede
deteccin

incluir

para

detectar Candidas

spp)

de Micoplasmas y Chlamydias

4. Semen - la muestra llegara en contenedor estril/ bote de orina; se siembra por

agotamiento en cuadrante en medios: Cled, McConkey , Agar Sangre, Agar chocolate,
Thayer Martin o New York, Roiron, y cultivo de Clamydias, buscando en cada caso los
mismos
grmenes
que
en
el
caso
del
exudado
vaginal.
5. Esputo - la muestra ha de llegar en contenedor esteril y conservarse menos de 24H
a 4C; antes de sembrar se observa por el microscopio si la muestra es valida/ no esta
contaminada por saliva; se siembra por agotamiento en cuadrantes; solo se siembra
cuando en el Gram, el cociente leucocitos/ celulas epiteliales sea > 2,5 (recuento en
fresco/al microscopio); si es < a 1,5 es dudoso. Cuando sean muestras de UCI o
provenientes
de
neumonas
se
siembran
siempre.
[a]
Agar
Sangre =>
buscamos
colonias
de Streptococcus
pneumoniae oBranhamella catharralis; S.pneumoniae >> colonias verdosas
(alfa hemlisis) y al fresco como coco Gram+, catalasa (-), sensible a la
Optoquina; Branhamella catarralis >> colonias blanco-grisceas y al fresco como
cocos Gram-, oxidasa (+), catalasa (+) que no utiliza ningn azucar (no es
fermentadora), pero reduce los nitratos a nitritos/ nitratasa+ (lo que le diferencia del
genero Neisseria que ademas es fermentadora de glucosa y maltosa).
[b] Agar chocolate => buscamos Haemophilus spp como colonias puntiformes
translucidas, que al fresco como coco-bacilos, Gram-, catalasa y oxidasa variable; agar
chocolate polyvitex (contiene factor V/ NAD y factor X /hemina procedente de
ladegradacin
de
Hb)
[c] Agar McConkey => donde creceran Enterobacterias y otros bacilos Gram-.
[d]
Medio
de
Lowestein-Jensen
(o
Coletsos) =>
para
rescatar Mycobacterium tuberculosis, bacilos acido alcohol resistente (Zhiel
Neelsen+) de crecimiento muy lento; los niveles bajos de la penicilina y el cido
nalidxico tambin estn presentes en el medio de LJ para inhibir el crecimiento de lo

Gram+ y Gram-, con el fin de limitar el crecimiento de especies de micobacterias

solamente. Presencia de verde malaquita en el medio inhibe las floras mayora
acompaante; que se desinfecta y se solidifica mediante un proceso de espesamiento;
el Glicerol
mejora
el
crecimiento
de
Mycobacterium
tuberculosis.
[e] Medio Legionella => muestras de UCI; la Legionella pneumophila es bacilo
Gram-(en realidad, se tie muy mal, aerobio exigente, movil; en general, no fermenta
ni oxida los azucares, sino que utiliza los aminoacidos; es hipurato+ => un
procedimiento cualitativo para determinar la capacidad de las bacterias de hidrolizar
enzimticamente (hipuricasa) el hipurato sdico; necesita L-cisteina para crecer y
tambin iones frricos Fe. La inhibicin del crecimiento de las bacterias Gram+, la
mayora de las bacterias Gram-, levaduras y mohos, a travs de una combinacin
optimizada de 3 antibiticos. Las colonias que crecen en medio Agar Legionella y no
crecen en medio AS deben considerarse, con alta probabilidad, colonias de Legionella.

6. Cepillado bronquial (la muestra vendr en el cepillo y se conservara a 4C < de

24H);se siembra en los mismos medios que en el caso anterior (esputo) aadiendo
ademas: agar sangre anaerobios (ASA) o medio AKV (agar sangre kanamicinavancomicina), selectivopara bacilos Gram- anaerobios y Bacteroides (bacilo Gram-,
anaerobio
estricto).
7. Exudado faringeo y oral (la muestra viene en torunda, se sembrara por
agotamiento
en
cuadrante).
[a] Agar sangre => crecera todo tipo de grmenes (medio general enriquecido)
[b]
Agar
chocolate =>
crecera
todo
tipo
de
grmenes
[c] Agar Mac Conkey => creceran las Enterobacterias y otros bacilos Gram- poco
exigentes.
[d] Agar CNA /agar sangre (de cordero) colistina nalidixico, medio selectivo para
Gram+/ inhibe los Gram- => para deteccion de Streptococcus B-hemoliticos,
Enterococcus
y
Staphylococcus??
[e] Agar Sabouraud (solo en orales) => deteccion de Candidas spp.
8. Exudados varios - abscesos heridas ... (se sembrara por agotamiento en
cuadrantes. La muestra ha de llegar en tubo estril y se conservara a 4C menos de
24H.
[a]
Agar
sangre =>
crecer
todo
tipo
de
grmenes
[b]
Agar
chocolate =>
idem
[c] Agar Mac Conkey => crecern las Entero-bacterias y otros bacilos Gram (-) poco
exigentes.

[d] Agar CNA /agar sangre (de cordero) colistina nalidixico, medio selectivo para
Gram+/ inhibidor Gram- => crecern bien los Steptococcus B-hemolticos.
[e] Agar ANA (agar sangre anaerobios/ASA, aunque tambin puede utilizarse
agar AKV, agar sangre kanamicina y vancomicina) => medios selectivos para bacilos
Gramanaerobios
(estrictos)
y Bacteroides.
[f] Caldo Tioglicolato => crecen bien todo tipo de bacterias aerobias o anaerobias;
permite el desarrollo de una amplia variedad de microorganismos, incluidos los
nutricional-mente exigentes. Adems, se observa que las bacterias estrictamente
aerobias, crecen en la parte superior, mientras que las anaerobias facultativas o
anaerobias estrictas crecen en las profundidades del medio.

RELACION DE LAS BACTERIAS CON EL OXIGENO EN TIOGLICOLATO En

base a la relacin de las bacterias con el oxgeno, estas se pueden clasificar en :
1. Aerobio estricto: Un organismo el cual requiere utilizar el oxgeno como
aceptador terminal de electrones , puede tolerar un nivel del oxgeno equivalente o
mayor de una atmsfera de aire (oxgeno del 21%), y tiene un tipo terminantemente
respiratorio de metabolismo (Mycobacterium tuberculosis, Bacillus).
2. Anaerobio o Aerobio facultativo: Un organismo que puede crecer bien en
ausencia del oxgeno y en la presencia de un nivel de oxgeno equivalente a una
atmsfera del aire (oxgeno de 21%) => Enterobacterias, Vibrio spp,
Haemophilus
spp..
3. Microaeroflico (anaerobio aerotolerante): Un organismo que es capaz de un
crecimiento oxgeno-dependiente, pero no puede crecer en la presencia de un nivel del
oxgeno equivalente a una atmsfera de aire (oxgeno de <21%) => Campylobacter
fetus,
Pseudomonas
y
Neisseria.
4. Anaerobio estricto: Un organismo que es incapaz de crecimiento oxgenodependiente y no puede crecer en la presencia de una concentracin de oxgeno
equivalente a una atmsfera de aire (oxgeno de 21% - nada de O2). (Clostridium
botulinum).
5. Anaerobios aero-tolerantes: Pueden crecer con o sin oxgeno pero su
metabolismo
es
siempre
fermentativo
(Lactobacillus)
9. Liquido cefalorraqudeo - se siembra por agotamiento en cuadrante del
sedimento del tubo centrifugado a 1500 rpm a 3000 rpm durante 20 minutos, si en el
tubo hay mas de 1 ml de muestra. Sino, vortear el tubo. La muestra se ha de procesar
de
inmediato
y
si
no
es
posible,
conservarse
a
37C.
[a] Agar sangre => buscamos Neisseria meningitidis, como pequeas colonias
no hemolticas y al fresco se ve como diplococos, Gram-, oxidasa (+), catalasa (+),

fermentador de glucosa y maltosa (la fermentacin de este azucar le diferencia del

gonococo; tambin puede crecer Streptococcus pneumoniae (neumococo) que
aparecen como colonias verdosas (Alfa hemolisis) y al fresco como cocos Gram+,
catalasa
(-),
sensible
a
la
optoquina.
[b] Agar chocolate => dem y ademas pueden crecer Haemophilus spp como
colonias puntiformes translucidas, que al fresco aparecer, como coco-bacilos, Gram-,
catalasa
y
oxidasa
variable.
[c] Agar Thayer-Martin => medio selectivo para Neisserias, crecern bien los
meningococos
/N.meningitidis.
[d] Medio tioglicolato (caldo) => medios para anaerobios y aerobios.
(f)
Ademas
se
har
una
extensin
para
Gram.
10. Otros lquidos estriles (sinovial, pleural, pericardio...) - se siembran por
agotamiento; la muestra ha de llegar en tubo estril y su conservacin no se ha de
demorar
mas
de
24H
a
4C.
[a] Agar sangre => crecern casi todo tipo de microorganismos, con caractersticas
hemolticas
de
algunos
de
ellos.
[b] Agar chocolate => crecern casi todo tipo de grmenes, sobre todo exigentes.
[c] Agar McConkey => crecern Enterobacterias y otros bacilos Gram- poco
exigentes.
[d] Agar CNA => agar columbia colistina nalidixico (sangre de cordero), selectivo
para
Gram
(+)
[e] Agar ASA => agar sangre anaerobios selectivo para bacilos Gram- anaerobios
yBacteroides.
11. Cateteres y sondas - se siembra mediante la tcnica de Maki (rodamiento del
cateter)
[a] Agar chocolate => crecern casi todo tipo de grmenes, y podrn crecer bien
algunos
exigentes
como
el
Haemophillus.
[b] Agar sangre => crecern bien casi todo tipo de grmenes y podr verse sus
caractersticas
hemolticas
si
las
tuvieran.
[c] Caldo tioglicolato => si se observa crecimiento se har un pase por Agar
chocolate.
[d] Tambin
puede ponerse
en una
placa
de agar MacConkey.
12. Hemocultivos - la muestra se introduce en el vial de hemocultivos, conservando
a 37C en el Bactec (detecta CO2) hasta su identificacin.

Tema 6 - Medios de Cultivo en bacteriologa

clnica (Clasificacin y Preparacin)
Medios de cultivo - compuesto por distintos nutrientes requeridos para cultivar
grmenes como las bacterias, hongos y parsitos segn sus necesidades nutricionales
de cada uno; en funcin de sus requerimientos, existen grandes diferencias entre los
medios de cultivo que nos sirven para diferenciar cada tipo de microorganismo que
podr
crecer
en
unos
medios
de
cultivo
y
no
en
otros.

Funcin
de
medios
cultivo:
- separar y aislar distintas especies microbiales presentes en una muestra.
- paso previo para el estudio de identificacin de un microorganismo problema.
- conocer el metabolismo en funcin del nutriente o sustrato que utiliza (lactosa) o
metabolito
que
produce
(indol).
- estudios macroscpicos => visualizar las caractersticas de las colonias en medios
slidos.
- realizar antibiogramas determinando la sensibilidad (mayor/menor) de la bacteria
problema
a
distintos
antibiticos.
pruebas
de
CMI
(concentracin
minima
inhibitoria)
conservar
las
especies
microbiales
o
muestras.
Requerimientos energticos y no energticos de los medios de
cultivo - fuente de energia (fuente de carbono y de nitrogeno) y fuente no
energtica (azufre, fsforo, iones metlicos, factores de crecimiento, f. de arranque y
inhibidores) necesarios para el desarrollo (crecimiento) de cultivos microbiales; fuente
de carbono => acido acetico, alcohol, citrato sdico, azucares (mono o disacridos
incluso almidn => glucosa, lactosa, maltosa), CO2 (bacterias fotosintetizantes y
quimiolitotrofas); conocer el tipo de azucar utilizado => til para su identificacin
bioqumica y clasificacin taxonmica; fuente de nitrgeno (menos energtica) =>
protenas completas (gelatina - determinar actividad proteoltica/gelatinasa; extractos
de carne y sales de amonio), pptidos/polipeptidos (peptonas - extractos de levadura,
casena - trpsica de casena/triptfano => formacin de indol) o aminocidos y otros
=> nitratos, nitrogeno organico, amoniaco, sales de amonio, aminoacidos; conocer la
fuente nitrogenada => util para clasificacin taxonmica; fuente de azufre => sulfatos,
tiosulfatos, aminoacidos (metionina, cisteina, tiamina); fuente de fosforo =>
fosfatos; iones metalico => hierro, potasio, sodio, magnesio y en concentraciones mas
bajas
=>
cinc,
manganeso,
cobre,
cobalto,
etc;
Otros
requerimientos
no
energticos:
Factores de crecimiento => componentes que muchas bacterias no son capaces de
fabricar por si solas para su crecimiento (aminocidos => cisteina; factor X y factor V
procedente de la degradacin Hb; vitaminas, bases puricas y pirimidicas); factores
de arranque => sustancias que permite a la bacteria salir de su fase de latencia y
comenzar su fase de crecimiento exponencial (fuentes de energa => glucosa; iones
metlicos que estimula el crecimiento); factores inhibidores => componentes que
bloquar el proceso metablicos de algun microbio; muy tiles para la identificacin y
tipificacin
bioqumica
de
las
bacterias
(azida sodica => impide Gram-; antibiticos => inhibidores y destructores; colorantes
laeosina azul de metileno utilizado por medio Levine; cristal violeta en medio MacConkey
=>
impide
Gram+).
Condiciones
que
ha
de
cumplir
un
medio
de
cultivo:
1. Una composicin de nutrientes adecuada (requerimientos energticos y no
energticos)
2.
Condiciones
fsico-qumicas
apropiadas:
- Temperatura
optima/ideal (segn la
especie
microbiana
=> psicrfilas <20C;mesfilas 18-45C; termfilas > 45C; las bacterias patgenas del
hombre 35-37C; fuera de estas no crecen o crecen mucho mas despacio;)

e.j.: Yersinia 22C, Campylobacter 45C

(los
dos
son
gastrointestinales)
- Grado de humedad (cantidad de agua que necesita para crecer)
- pH adecuado es en general cercano a la neutralidad +/- 7(estabilizante de pH =>
buffers o tampones que facilitan el crecimiento); pH acido => Tiobacilos (cerca a
0); pH alcalino => bacilos ureasa positivo/ Proteus (en torno a 8) y Vibrio
cholerae (pH
9)
- Presin osmtica en
general isotnia (300
miliosmoles)
- Presencia o ausencia de oxigeno; la mayora de las bacterias aerobias y
anaerobias son facultativos que se desarollan bien con y sin O2; existen pocos
anaerobios estrictos; bacterias microaeroflica => produce mas CO2.
Principales
tipos
de
medios
de
cultivo
- segn su proporcin de agua / su consistencia (slidos, lquidos, caldo)
- segn su uso / su utilizacin (para aislamiento, crecimiento en general /recuento,
identificacion,
mantenimiento
de
cepas,
para
antibiogramas)
- segn su origen del que proceden (naturales, sintticos y semi-sintticos, complejos)
- segn su presentacin (deshidratados o liofilizados, slidos en placa petri, slidos en
tubo, lquidos en tubo, semi-slidos en tubo, doble fase en frasco o tubo).
Medios
de
cultivo segn su proporcin en
agua:
- Medios slidos > 15% de agar; para aislamiento, identificacin, elaboracin de
antibiogramas) =>1881 Koch utiliza la gelatina (inconveniente => se funde a 24oC y
existen bacterias gelatinasa positiva que destruiran tal medio); posteriormente Hesse
su
alumno
usa
el
agar (medio
inerte).
- Medios lquidos/caldos => contiene agua, fuente de carbono, sales minerales y
algunos lleva factores de crecimiento, vitaminas, peptonas y aminocidos.
- Medios
semisolidos =>
agar
semi-slidos
(<5%
de
agar)
Medios
de
cultivo segn su
uso
o utilizacin:
- Medios para aislamiento => {a} medios enriquecidos (componentes basicos +
caseina soja, triptofano para microorganismo exigente; e.j. agar sangre/chocolate
{b} medios selectivos (componentes basicos + componentes que impiden el
crecimiento de algn tipo bacteriano para seleccionar) e.j. medio Rothe (para
aislar Streptococcus faecalis /Gram+)contiene azida sdica que impide Gram-; la
mayoria de medios selectivos son tambin medios diferenciales {c} medios
diferenciales (= medios selectivos + sustancias resalta las caracteristicas microbiales de
algunas; e.j. medio Levine (contiene eosina y azul de metilenoque inhibe Gram+ y
algunas Gram-, facilita a las enterobacterias y lactosa (para las fermentadoras)
- Medios para crecimiento en general => liquida o solida sirve para el
crecimiento de la mayor parte de las bacterias (componentes basicos + sales y agua) ;
e.j. el caldo comun (contiene extracto de carne, peptona, glucosa, cloruro sodico y
agua);
el
caldo
Tioglicolato.
- Medios
de identificacin (= medios
diferenciales)
=>
sirve
para
clasificar taxonmica-mente el microoganismo; e.j. agua peptonada = indol
positivo; caldo Stuart urea-indol = ureasa; glucosa = fermentacin de glucosa
(sacarolitico
=
sacarosa
positivo).
- Medios de mantenimiento de cepas => mantener las cepas vivas durante
periodos de tiempo relativamente largos a temperaturas bajas para impedir su
crecimiento;
e.j. leche
descremada
congelada

- Medios para antibiogramas; e.j. Proctor (antibiogramas fungicas), Mueller

Hinton(a.b.bacterianas), Wilkins-Chapman (a.b.
bacteriana
anaerobicas).
Medios
de
cultivo segn su
origen
- Medios naturales => poco utilizados, se preparan artesanalmente, constituidos
por ciertos tejidos, liquidos organicos (leche, huevo, patata, suero sanguineo)
- Medios semi-sintticos => parte de su composicion son extractos
naturales (levadura, malta, patata, sagre, leche) + constituyentes sintticos
- Medios sintticos => estructuras sintticas mas o menos puras y qumicamente
definidas disueltas en agua destilada (los mas utilizados en bacteriologia y en general);
contiene: fuente de carbono o azucar, fuente de nitrgeno inorgnica como iones NO3, NH+4 o orgnica como peptona, aminocidos, aminas, etc., compuestos minerales
como oligoelementos, factores de crecimiento (vitaminas, aminoacidos, bases puricas o
pirimidnicas).
- Medios complejos => son los primeros que se utilizaron en bacteriologa; en
actualidadse uss mas en parasitologa y virologa; se preparan de forma compleja
(tejidos animales/carne de musculo, higado, corazon, yema de huevo, azucares,
pepetonas,
vegetales,
etc.
Medios
de
cultivo
segun
su
presentacion
Medios
deshidratados
o
liofilizados
Medios
ya
preparados
Medios
solidos
en
placa
Petri
Medios
solidos
en
tubo
Medios
liquidos
en
tubo
Medios
semisolidos
en
tubo
Medios
de
doble
fase
en
frasco
Principales
medios
utilizados
en
microbiologa
1. Agua peptonada (peptona en medio acuoso con pH 7 a 37C 24-48 horas) =>
determinacin de la produccin de indol debido a su alto contenido en triptfano; tras
laadicin de 5/6 gotas de reactivo Kovacs en hidrxido potsico (KOH 40%) => anillo
rojo en la superficie indicara indol positivo.

2. Medio
Chapman (selectivo
y
diferencial)
=>
aislamiento
de Staphylococcus (halfilos)S.aureus (coagulasa+); Comp: alto contenido de cloruro
sdico 75 gr (agar manitol salado); 15 gr de D-manitol (diferencial => azucar utilizado

por algunos estafilococos), 25 gr de rojo fenol (indicador positivo de pH a 37C 24-48

horas => amarillo dorado); es orientativa, se debe completar la prueba con pruebas
bioqumicas (coagulasa/latex); S.epidermidis no fermentan el manitol, por tanto el
color sigue rojizo o purpureo.

3. Agar de Thayer y Martin (Agar New York City) => no permite el crecimiento de
muchos microorganismos, pero si permite aislar gonococos y meningococos
(Neisseria); Comp: agar chocolate/ sangre calentado + formula polyvitex (vitaminas y
aminocidos) + VCAT (vancomicina => inhibe los Gram+, colistina => inhibe
los coliformes /Gram-,anfotericina => antifngico, trimetropinsulfametroxazol =>
antibitico de amplio espectro).

4. Agar chocolate Polyvitex => medio general enriquecidos donde crecen la

mayora de bacteria y Haemophyllus); Comp: agar chocolate + formula polyvitex
(vitaminas y aminocidos) incluyendo factores X (hemina) y V (NAD/ nicotinamida
adenina dinucletido) proporcionados por la hemoglobina y PolyViteX.

5. Medio base Christensen (lquidos y slidos) => para la prueba de la ureasa;

ureasa+ de rojo => rosa; grmenes con ureasa+ => Proteus y Helicobacter pilory

6. Medio citrato de Simmons (agar solido) => prueba de citrato (como fuente de
energa) para la investigacin de bacilos Gram- (la diferenciacin entre coliformes y
coliformes fecales. Los coliformes fecales (E.coli) no fueron capaces de utilizar el
citrato como fuente de carbono ni a las sales de amonio como fuente de nitrgeno. Los
coliformes no fecales comoEnterobacter aerogenes o Salmonella enteritidis podan
utilizar el citrato en este medio dando una reaccin alcalina); Comp: citrato
sdico, azul de bromotimol (indicador pH, de que el citrato esta consumido /se
alcalina; verde => azul); grmenes con citrato permeasa =>Klebsiella pneumoniae,
Salmonella, Enterobacter aerogenes.

7. Medio Clark y Lubs (caldo/ liquido) => para diferenciar entero-bacterias

medianteprueba de Voges-Proskauer (produccin de acetona/ acetil metil carbinol =>
por reduccin a 2,3 butanodiol o por oxidacin a diacetilo); y prueba de Rojo de
Metilo (acidificacin del medio con pH <4,5 y cambio de color a rojo); grmenes
con VP+ => Klebsiella
pneumoniae yEnterobacter
aerogenes;
grmenes
con RM+ => Proteus, E.coli y Salmonella.

8. Medio Cled/Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient (solido) => recuento e

identificacin de grmenes en las vas urinarias; Comp: lactosa en alta cantidad, azul
de bromotimol (indicador del consume lactosa verde => amarillo); las colonias mas
frecuente => E.coli (amarilla L+), Proteus (azul L-), Klebsiella (amarilla azulada y muy

mucosa (L+), Pseudomonas aeruginosa (verde L-), Streptococcus faecalis (amarilla

L+), Staphylococcus aereus (amarilla L+).

9. Agar sangre (se comercializa con nombre TSA => tripticasa, soja, agar)
=> investigacin de microorganismos hemolticos (consume hemates); es un medio
general enriquecida; Comp: sangre de cordero (agar columbia) o caballo o ternero =>
estriles y desfibrinadas; alfa hemlisis/ neumococo (parcial) => halo verdoso/difuso
alrededor de la colonia; beta hemlisis/ Streptococcus B-hemoltico y Staphylococcus
aureus que
causan
anginas
(total)
=>
halo
transparente;
gamma
hemlisis/ Pseudomona causa gastro intestinales (no hemolizar) => sin halo.

10. Medio eosina azul de metileno /EMB (Medio Levine) => selectivo y
diferencial, para aislamiento de entero-bacterias Gram- (E.coli, Enterobacter,
Salmonella, Shigella, Proteus, Klebsiella) Comp: alto contenido de lactosa (indicador
fermentadora), eosina azul de metileno(indicador de pH y inhibidor los Gram+ y las
floras de Gram- fastidiosas).

11. Medio de agar Hektoen (diferencial y selectivo) => aislamiento de enterobacterias patgenas Gram-; Comp: sales biliares (inhibe Gram+), lactosa (indicador de
L+ => amarillo/naranja) sacarosa, peptona, tiosulfato sdico y citrato frrico
amoniacal (indicador de la produccin SH2/H2S => puntos negro), azul de
bromotimol, fuschsina cida (indicadores de pH); en condicin normal es verde =>
fermentacion de lactosa/acidificacin => vira a amarillo/naranja (caractersticas
de fermentadora L+Escherichia, Serratia, Klebsiella, Citrobacter, Enterobacter y Vibrio
cholerae); cuando se consume lactosa + peptona (se acidifican primero, y despus se
basifican) => verde; cuando se consume azufre/ disulfurasas+ => precipita el hierro y
la colonia se vuelve negro (caracterstica de Salmonella y Proteus vulgaris).

12. Medio Kliger o KIA (Kliger Iron Agar) => medio solido en tubo (color caramelo);
muy semejante y mas utilizado es TSI (triple sugar, iron) + 10 gr de sacarosa; muy
utilizado para la identificacin de entero-bacterias, pruebas de la lactosa, glucosa, gas y
SH2; Comp: lactosa (indicador de L+), peptonas, glucosa, citrato frrico amoniacal y
tiosulfato sdico(componentes para producir SH2), rojo fenol (indicador de pH); los
grmenes productor deSH2+ => Proteus, Salmonella y Citrobacter; los productores
del gas CO2+ => Salmonella y Citrobacter y E.coli.

13. Medio MacConckey (color rosa) => aislamiento e identificacin de enterobacterias

Gram-/
poco
exigentes;
Comp: sales
biliares (inhibidor
Gram+), lactosa (indicador L+), cloruro sodico, rojo neutro, cristal violeta (inhibidor
los cocos de Gram+); L+ (consumidor de lactosa) => rojo (E.coli y Enterobacter
aerogenes), L- (no fermentador)=> Salmonella, Shigella y Pseudomonas; Gramexigentes => Neisseria, Haemophyllus.

14. Medio Mueller Hinton (general) => para la realizacion de antibiograma por el
mtodo de Bauer-Kirby

15. Medio Ornitina Movilidad/ MIO (preparado en tubo/ semisolido) =>

identificacin de la movilidad bacteriana (entero-bacterias), capacidad para
descarboxilar la ornitina (orinitina descarboxilasa /est dada por un color prpura/
alcalinidad del medio y la produccin de indol (al aadir reactivo de Kovacs); La
movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que
difunde mas all de la lnea de inoculacin; el germen que da resultado positivo de los
3 pruebas => E.coli.

16. Medio caldo F-Selenito (selectivo) => medio enriquecido con fosfato para el
aislamiento de Salmonella; Comp: selenito sdico (inhibidor de flora Gram+ y
Gram- excepto Salmonella); despus tambin se hace cultivo con agar SS.

17. Medio agar S-S (color caramelo) => aislamiento de las bacterias patgenas
importantesSalmonella y Shigella; Comp: lactosa (indicador fermentadora de
L), tiosulfato sdico y citrato de hierro (indicador de SH2), sales biliares y verde
brillante (inhibidor bacillos Gram+), rojo neutro (indicador de pH); L+ (coliformes E.Coli y Klebsiella) => rojas o rosadas; L- y SH2- => incoloras (tpico de Shigella); Ly SH2+ con la precipitacin de hierro => negro (tpico de Salmonella).

18. Medio Agar XLD (agar xilosa-lisina-desoxicolato) => se utiliza para el

aislamiento y diferenciacin de bacilos entricos Gram-, especialmente del
gnero Salmonella y
especialmente Shigella (entero-bacterias
patgenas);
Comp.: xilosa (la
fermentan
los entricos menos Shigella),
sacarosa
y
lactosa, desoxicolato de sodico (inhibe Gram+); se puede utilizar para la identificacin
de lactasa+, lisina descarboxilasa+ => Salmonellaque alcaliniza el medio y SH2+
(tiosulfato sdico + citrato de hierro amoniacal).

19. Medio

caldo

Columbia =>

caldos

para hemocultivos.

20. Medio Castaeda (caldo y solido) => bsqueda de grmenes Brucella,

Vibrios
y
Pasteurella en
sangre
(hemocultivos).
21. Medio de Lowenstein-Jensen (selectivo) => cultivo de Mycobacterium
tuberculosis y otras micobacterias; Comp: fcula de patata, verde malaquita =>
inhibidor de la mayora de grmenes; la prueba se confirma con tincin de acido
alcohol resistencia (Con la tincin de Ziehl-Neelsen las micobacterias se observan
como bacilos de color rojo); micobacterias patgenas crecen muy lenta (+ 7 das); los
niveles bajos de la penicilina y el cido nalidxicotambin estn presentes en el medio
de LJ para inhibir el crecimiento de Gram+ y Gram-, con el fin de limitar el
crecimiento => nico de micobacterias.

22. Medio Sabouraud => para el aislamiento e identificacin de hongos micelares y

levaduriformes.
23. Medio Sabouraud gentamicina tetrazolium => para el aislamiento
e identificacinde Candida (levaduriformes); La gentamicina inhibe el crecimiento de
la mayora de las bacterias Gram- y Gram+.

24. Medio Schaedler con vitamina K3 (caldo o agar solido) => para cultivo
deanaerobios (estrictos y facultativos); La presencia de factores de crecimiento como el
extracto de levadura, la hemina y la vitamina K3 y la adicin de sangre de
cordero permite el crecimiento incluso de las especies ms exigentes.
El agente reductor (L-cistina) y la elevada concentracin de dextrosa en el medio
favorecen
el
crecimiento
de especies anaerobias p.ej. Lactobacillus, Streptococcus, Clostridios y Bacteroides.
25. Medio CPS cromognico (agar/ solido) => es un medio de aislamiento y
de identificacin destinado a las muestras urinarias; permite realizar (1) el recuento
microbiano (mtodo de inoculacin estandarizado); (2) identificacin de: Escheri
chia coli, Enterococcus del grupo D, KES (Klebsiella, Enterobacter, Serratia), Proteeae
(Proteus, Providencia, Morganella); la concentracin elevada de agar evita el
crecimiento invasivo de Proteus; el medio se inocua directamente a partir de la orina,
respetando tcnicas adecuadas de toma de muestras y su transporte; permite la
identificacion
directa
de:
a. E.coli => coloracin espontanea (rosa a burdeos) de las colonias productores de
B-glucuronidasa (B-GUR) y coloracin azul revelada por el reactivo indol cuando la
cepa
genera triptofanasa.
b. Enterococcus y KES => coloracin espontanea azul-verde de
las
cepas
que producen
B-glucosidasa (B-GLU).
c. Proteeae => coloracin marrn revelada por el reactivo TDA cuando la cepa
genera triptfano desaminasa (sin
reactivo
es
incoloro).
Modo operativo - dejar atemperar las placas a temperatura ambiente; inocular la
muestra con el asa calibrada de 10ul => sumergir el asa en la orina, mantenerlo
verticalmente; descargar el asa al realizar una estra sobre un radio de la placa;
realizar estras perpendiculares muy apretadas sobre toda la superficie de la placa;
incubar en la estufa con la tapa hacia abajo a 37C en aerobiosis; se examinan los
cultivos despus de
24
horas
de incubacin.
Lectura
e interpretacin:
Recuento - estimar la concentracin bacteriana comparando la densidad de las
colonias presentes sobre la mitad superior de la placa con la del esquema; <1000
(negativo), entre 1000 - 100.000 (dudoso), mas de 100.000 (positivo)
Identificacin observar
las
colonias
(1) Colonias de color rosa a burdeos o translucidas con centro rosa a
burdeos=> presuncin de E.coli; confirmar mediante una deteccin de indol (depositar
una colonia sobre un disco de papel previamente embebido de una gota de reactivo R1

del envase ID Indol TDA) => indol+ da una coloracin azul (E.coli); la ausencia de
color
azul
(indol-)
se
debe
proceder
a
la
pruebas
de
API.
(2) Colonias de color azul-verdoso y observacin de cocos Gram+ mediante examen
directo => Enterococcus; si no cumple esta condicin, se debe proceder a las
pruebas
de
API.
(3) Colonias de color azul-verdoso y observacin de bacilos Gram- mediante examen
directo
=> grupo
KES;
la identificacin se
debe
proseguir
mediante
pruebas bioqumicas
(ureasa+ =>
Klebsiella; ornitina
descarboxilasa+ =>
Enterobacter; gelatinasa+ =>
Serratia).
(4) Colonias incoloras a marrn-anaranjado => efectuar TDA (depositar sobre algunas
colonias idnticas, una gota de reactivo R2 del envase ID Indol TDA), observar
la coloracin despus de unos 30 segundos => TDA+ da una coloracin marrn +/oscuro; efectuar indol => indol+ da color azul (Proteus, Providencia o
Morganella); ausencia de coloracin azul es indol- (Proteus mirabilis); TDA- da
una coloracin amarilla y la identificacin se debe proceder a las pruebas de API.

Tema 7 - Metodos de Siembra (cultivo de las

cepas)
Sembrar - cultivar la muestra utilizando tcnica y medios adecuados para conseguir
el
objetivo
(identificar
el
microorganismo).
Preparacin
de
inculos (pequea
parte
de
muestra)
- Muestras viscosas o concentradas (anlisis cuantitativo) => suspender un cultivo
joven y puro o un producto patolgico (muestra biolgica) en 5 ml de solucin
diluyente (caldo de cultivo, suero fisiolgico estril o agua destilada estril.
- Ajustar con la escala con un gradiente de turbidez (tecnica de Kirby-Bauer) => tubos
numerados como patrn de referencia segn la concentracin de microorganismos; se
ajusta mediante comparacin visual aproximada o mediante la absorbancia de
espectrofotometra;escala de Mcfarland => una serie de tubos con precipitacin blanco
de sulfato de bario por reaccin de acido sulfrico + cloruro de bario (escala 0,5 = 1,5 x
10.6/ml de microorganismos en el inoculo; escala 1 = 3 x 10.6 /ml; escala 2 = 6
x10.6./ml.

Metodos
de
inoculacin
y
aislamiento
de
microorganismos
1. Metodos
de
siembra
inoculacin:
{a} En medio liquido; con asa => se sumerge el asa cargada en el medio y se agita; con
pipeta => se vierte el contenido de la pipeta sobre el medio de cultivo y se
homogeneiza;
con
escobilln
=
con
asa.
{b} En
medio
solido (en
placa):
- Inoculacin previa al vertido en placa (tcnica de Barry - no se utiliza mucho) => 0,1
ml de inoculo + 25 ml de medio cultivo => fundido/ atemperado a 45-55C para no
esterilizar
=>
homogeneizar
=>
verter
en
la
placa
de
Petri.
- Inoculacin sobre la superficie del medio solidificado (tcnica de Kirby-Bauer) => se
prepara el inoculo en un tubo estril; se introduce un escobilln estril impregnando;
se elimina el exceso presionando el escobilln con movimiento de rotacin contra las
paredes del tubo; se siembra la placa emplenando la tcnica de los tres giros
distribuyendo uniformemente el inoculo; se deja secar la placa 4-5 minutos en posicion
semiabierta e invertida, quedando lista para ser utilizada (en los antibiogramas).
{c} En
medio
solido (en
tubo):
- Siembra por estria en superficie inclinada => se toma la muestra con el asa /hisopo;
se introduce en el tubo que contiene el medio; desde el fondo y en progresin
ascendente se desliza el asa en movimiento de zig-zag (se utiliza para pruebas
bioqumicas
y
renovar
cepas).
- Siembra en picadura (para ver la movilidad de los grmenes en la zona de puncin +
pruebas bioqumicas) => se toma la muestra con la aguja o hilo; se punciona en el
centro del medio introduciendo la punta de la aguja hasta 2-3 mm del fondo del tubo;
se extrae la aguja por la misma linea que se introdujo; medio solido inclinado
=> puede realizarse tambien una siembra en estra por la superficie del medio con la
misma aguja; agar semi-solido => puede usar el asa en lugar de la aguja.

2. Metodos de siembra - aislamiento (para obtener cepas puras/ bien aisladas) :

{a} Siembra en estria o zig-zag => se deposita el inoculo en el extremo superior de la
placa; se siembra con el asa o con hisopo, a partir del inoculo, con un movimiento en

zig-zag cada vez mas amplio de lado a lado de la placa; el estriado ha de hacerse sin
presionar el medio, suavemente, sin levantar el asa y sin flamearla; las colonias mas
aisladas las obtendremos en la zona mas distal del inoculo, es decir al acabar la
siembra.
{b} Siembra en tres direcciones => se deposita el inoculo en el extremo superior de la
placa dejando deslizar hacia el centro para ello inclinaremos la placa (tambin se
puede arrastras con el asa); mediante asa o escobilln, haremos movmientos laterales
de un lado a otro de la placa, dejando las estrias muy juntas; giramos la placa 90 y
realizamos la misma operacin, sin flamear o cambiar de asa; volvemos a girar la placa
haciendo lo mismo; al final nos queda una placa muy bien tapizada. Se realiza en
urinocultivos
para
el
contaje
de
las
colonias.
{c} Siembra en estra multiple => se deposita el inoculo en un extremo de la placa; con
el asa se reparte en varios tramos, siguiendo el borde de la placa; entre cada tramo se
ha de flamear o cambiar el asa; los segmentos seguidos describen un poliedro regular y
el ultimo tramo se efectua hacia el interior en el que se obtendran colonias aisladas.
{d} Tcnica por agotamiento en cuadrantes (lo que usamos) => es muy similar a la
anterior pero sin flamear el asa y estriando mas los cuadrantes, aprovechando mas la
placa.
{e} Tcnica de los 4 cuadrantes => se divide la placa en 4 cuadrantes (pueden rotularse
por la parte posterior); se deposita el inoculo en el extremo superior de uno de los
cuadrantes y se siembra en estra; sin flamear el asa, se realiza la misma operacion
sucesivamente en los otros 3 cuadrantes; en cada uno de ellos se sembrara el inoculo
que queda adherido al asa, tras la siembra del anterior; en el ultimo de los cuadrantes
sembrado,
se
encuentran
las
colonias
aisladas.
{f} Tcnica de los tres giros => se siembra en estra la mitad de la placa; flamear el asa;
se gira la placa 90, sembrando en estra la mitad superior de la misma; se repite la
operacin, es decir se ha de flamear el asa, se gira la placa y se estra; la colonia
aisladas aparecer en la zona sembrada en ultimo lugar.

Tema 8 - Caractersticas biolgicas de la

bacteria
(Morfologa)
Bacterias - organismos unicelulares de tamao 0,2-2 um, relativamente sencillos,
cuyamaterial gentico no esta rodeado por una membrana nuclear especial
(procariotas).

Estructura - constituidos por elementos obligados (presentes en todas las

bacterias eindispensables para su vida => pared celular, membrana plasmtica,
citoplasma, ribosomas y la regin nuclear); elementos facultativos (son elementos
de supervivencia y virulenciaque pueden estar o no presentes en la bacteria => capsula,
flagelos, pelos/pilis, endosporas e inclusiones citoplsmicas)

Pared celular - es el limite externo de la clula con estructura rgida, parecida a la

pared celular de las clulas vegetales; funciones => protegerse de cambios externos
adversos,mantener la morfologa de la clula, proporciona la resistencia a los
antibiticos, dar un paso selectivo de algunas sustancias, proporciona la especificidad
de grupo y de tipo (clasificacin), implicada en la patogenicidad; dar el color en la
tincin de Gram, violeta oscuro => Gram+ y color rosa => Gram-.
Estructura y composicion de la pared celular - Gram+ => mono-estratificada y
gruesa, compuesta por mureina (peptidoglicano - mono-capa, 50% peso seco/mucha
cantidad), polisacridos, protenas y cidos teicoicos; Gram- => biestratificada y
fina (1 capa es mureina en poca cantidad y 2 capa formada por polisacridos
protenas, fosfolipidos y lpidos, no tiene cidos teicoicos); las bacterias que no son
sensibles a la tincin de Gram => BAAR/ acido alcohol resistentes (micobacterias); las
que sin pared celular => los de genero mycoplasma/ patgenas; la que tienen (formas
S), pero la pierden (formas L).

Membrana plasmtica - estructura delgada que se extiende por dentro de la pared

celular, encerrando al citoplasma; funciones => acta como barrera selectiva,
interviene en ladegradacin de nutrientes y produccin de energa, en algunas se
encuentran pigmentos y enzimas para la fotosntesis; estructura y composicin =>
fosfolpidos, protenas y glicolpidos; mesosomas => plegamientos hacia dentro de la
membrana plasmtica, irregulares (no existen en las celulas eucariticas), se encargan
de dirigir la duplicacin del ADN bacteriano y realizar la respiracin.
Citoplasma - es todo lo que hay en el interior de la membrana plasmtica; funcin =>

engloba los orgnulos celulares (regin nuclear, ribosomas, inclusiones/depsitos de

reserva, vacuolas); no tienen ni aparato golgi, ni retculo endotelial plasmtica, ni
mitocondria;composicion => 80% de agua, enzimas, iones y principios inmediatos.
Regin nuclear - una zona en el interior del citoplasma donde se acumula el acido
nucleico;funciones => el acido nucleico transmite la informacin gentica de la clula
sobre estructuras y funciones celulares; estructura y composicion => es un ncleo
difuso que contiene 1 molcula ADN bicatenario, formando N cromosomas (enroscada
en forma de anillo); plsmidos => estructuras que pueden existir ademas de ADN
cromosmico (formadas por moleculares de ADN extra-cromosmico bicatenario,
pueden estar libres o unidos al ADN cromosmico /episomas), se replican
independientemente, se transmite por conjugacin, portan genes muy importantes que
determinan la resistencia a antibiticos, tolerancia a metales txicos y sntesis de
enzima.
Ribosomas - son orgnulos celulares muy abundantes (presentes en eucariotas y
procariotas) dan aspecto granuloso a su citoplasma; funciones = > sntesis de
protenas;estructura y composicion => en grupos de 3 o 4 unidos por un filamento de
ARN mensaje (polirribosomas), cada ribosoma tiene 2 subunidades de 30 y 50
Svedberg (velocidad relativa de sedimentacin), procariotas - 70S y eucariotas - 80S;
comp:
60%ARNr
y
40%
protenas.
Elementos facultativos (algunos no tienen - variables) - son elementos de
supervivencia
y
virulencia
Inclusiones citoplsmicas - aparecen en el citoplasma y no tienen una estructura
uniforme; funciones => depsitos de reserva e intervienen en funciones de regulacin;
Tipos: (1) Grnulos de reserva => lipdicos, corpsculos metacromticos (fosfato
inorgnico), polisacridos (glucgeno y almidn), grnulos de azufre; (2) Vacuolas =>
acmulos de gases o lquidos rodeados de membrana (donde se fija CO2).
Flagelos - largos apndices filamentosos frecuentes solo en los bacilos (su presencia
es rara);funciones => responsable de la movilidad (elementos patognico: facilitar la
difusin
de
las
bacterias
a
traves
de
las
membranas); estructura =>
tres
partes
(filamento,
codo
y
corpsculo
basal); tipos =>montricas (1 solo flagelo en un extremo), loftricas (2 o mas en un
extremo), anftricos (un grupo de flagelos en un extremo y otro grupo en el otro
extremo), pertricos (flagelos distribuidos en toda la superficie de la bacteria);
Pelos /pilis o fimbrias - elementos rgidos constituidos por una protena (pilina);
cortos, muy numerosos, distribuidos sobre la superficie, mas frecuentes en Gram- que
en Gram+;funciones => capacidad de fijacin a superficies (pelos comunes),
proporcionan pelos comunes y sexuales (son morfolgicamente iguales), sistema
de intercambio de informacin gentica por conjugacin (pelos sexuales).
Endosporas - solo en bacilos (Bacillus aerobio estricto y Clostridium anaerobio
estricto); una forma de resistencia que adoptan algunas bacterias ante situaciones
adversas (deficiencia nutricional, desecacin, frio, temperaturas elevadas, agentes
qumicos); se forman por un proceso de esporulacin /esporognesis, pueden
permanecer latentes durante cientos de aos y volver a una forma vegetativa por un

proceso germinacin; localizacin => zona central, subterminal o terminal (depende

de su tamao, pueden o no deformar el bacilo); la espora=> clula en reposo con
capacidad de resistencia a la desecacin, calor y agentes qumicos;esporulacin => la
produccin de estructuras, enzimas y metabolitos nuevos y la desaparicin de muchos
componentes celulares; Morfolgicamente comienza con el aislamiento del ncleo y
elementos energticos mediante el crecimiento en vaginante de la membrana; los
elementos esenciales para la vida quedan protegidos en esa nueva estructura
(endosporas); la bacteria queda en estado latente esperando una condicin externas
favorables
para
resurgir.
Capsula - estructura que rodea la pared bacteriana; se visualiza con tincin negativa
(tinta china); funciones => regula el intercambio de agua, iones y nutrientes, sirve
como almacn externo de nutrientes, defensa frente a Acs, fagos y celulas
fagocticas (elemento virulencia),protege de la desecacin (contiene agua), formacin
de colonias (habitualmente engloba mas de una bacteria); estructura y composicin =>
polisacridos y protenas.

Tamao y Morfologa de las Bacterias - 0,2 - 2 um; es preciso utilizar el

microscopio ptico; la morfologa => informacin primaria sobre el tipo de bacteria,
pero no de forma concluyente (viene dada por la rigidez de la pared; formas =>
esfrica/coco, coco-bacilo, bastoncillo/cilndrica/bacilo, helicoidal/espirilo, en
coma/vibrio, espiral/espiroqueta, estrella y cuadrangular /forma de hifas de hongos
(actinomyces/
streptomyces
productor
de
muchos
ATB,
ATF
y
inmunosupresores); agrupacin
de
los
cocos => aislados,
en
parejas/diplococos (granos de cafe - tpico de neisserias/meningitis), en
cadenas/estreptococos,
tetradas
o tretacocos (4
celulas
=>
micrococcus/micrococacceae), en racimos/estafilococos, en formas cubicas de 8
elementos/sarcinas (sarcinas
ventriculi
tolerancia
al
medio
cida/
estomago); agrupacin de los bacilos => aislados, en parejas/diplobacilos, en
cadena/estreptobacilos, algunos se parecen a cocos/cocobacilos(E.coli), en
forma empalizada/letra china (corynebacterium - algunos son saprofitos de la piel y
tambin
causante
de
difteria).
Aroma tpicos => Pseudomonas aureginosa (olor a jabn); Haemophyllus (olor
asemen/yeso); Citrobacter (olor a ftido); Proteus (olor a amoniacal); Klebsiella y E.
coli (olor a levadura de pan).

Tema

10

Fisiologa

de

las

bacterias

Morfologa macroscpica - estudio de la forma y estructura de las colonias (masas

constituidas por muchos millones de bacterias, se aprecian a simple vista y originadas
a partir de una bacteria en el medio solido); reconocible en funcin de
=> 1. caractersticas o tipo de medio de cultivo solido donde se ha desarrollado (un
microorganismo puede dar lugar a distintos tipos de colonias) 2. tipo de
microorganismo (mayor movilidad => colonias extendidas y planas); la verificacin de
las colonias (siempre en medios slidos sembrndolo por estra) => en placa y en tubo
con
agar
inclinado.
Las
colonias
en
placa
sembrndolo
por
estra
El tamao y el aspecto de cada colonia son bastante constante para cada genero y
especies, hecho que se puede utilizar como caracterstica diferencial; tamao => 1-2
mm (E.coli); 4-6mm (stafilococcus en agar sangre); extendidas en forma de velo
invadiendo toda la superficie del medio (Proteus en AS); puntiformes +/- 0,5 mm o
inferiores (stafilococos en AS); forma => segn el espesor (planas, elevadas,
semiconvexas, cncavas semicncavas, semiesfricas, en meseta); segn los bordes
(lobuladas, onduladas, rizoides, redondeadas, filamentosas, especuladas); superficie
de la colonia/ elevacin/ aspecto => lisa, rugosa (con capsulas), plana,
acuminada, umbilicada, mucosa, seca; consistencia de la colonia=> duras,
viscosas, mucosas, secas, muy secas, cremosas; transparencia y coloracin=>
debido a la elaboracin de algn tipo de pigmento, formacin de alguna sustancia por
parte de la bacteria o la utilizacin de algn sustrato del medio que se acidifique o
basifique;la presencia o no de halos de transparencia => generado por la
prueba de la gelatinasa (+) en placa y tambin por la actividad hemoltica de ciertas
bacterias con hemolisinas (estreptococos hemolticos tipo alfa, beta y gamma).

Las colonias en tubo, con agar inclinado - sembrndolo por estra

Las colonias presentan las mismas caractersticas que en placa, pero su visualizacin es
mucho peor (menor superficie); aspecto => filiforme, rizoide, arborescente,
filamentoso, difuso, perlado, equinulada, arrosariada.

Morfologa microscpica - estudio de la estructura fina de las bacterias

1. Estudio
de
su
forma
como
clula
procariota
individual:
oval/esfrica => coco/cocoidea; cilndrica/bastn => bacilo; espiral/helicoidal =>
espirilo/sacacorchos /espiroquetas; filamentosa/forma de hifas de hongos =>
filamentosas (actinomyces/ streptomyces), formas intermedias => vibrio, coco-bacilos;
bacterias helicoidales => Borrelia (poca espiras y amplitud), Treponema (tiene mas
espiras)
y
Leptospira
(muy
apretadas
y
enroladas).
2. Estudio de su agrupacin bacteriana (no todas las formas bacterianas se
agrupan, p.ej. los espirilos y los actinomicetos) => los mas frecuentes son las formas
cocoideas y las bacilares son menos frecuentes; las cocoideas => diplococos (parejas
/granos de caf => neisserias y neumococos); estreptococos (paralelos/cadenas =>
streptococcus); tetradas o tretacocos (4 celulas => micrococcus/micrococacceae);
estafilococos (racimos => staphylococcus/ micrococcus); sarcinas (cuboidales de 8
celulas o mas; sarcina ventriculi y tambin stafilococcus); las bacilares =>
diplobacilos/parejas,
estreptobacilos/
cadenas
y
formas
irregulares/en
empalizada/letra
china
(corinebacterium).
TAXONOMA
CLASIFICACIN
DE
LAS
BACTERIAS
La clasificacin definitiva de las bacterias esta aun por establecer; los que se utilizan
actualmente deben considerarse como provisionales o transitiva; la mas utilizada
suelen ser recogidas de las manuales BERGEY'S en la 9 edicin de Bergey's Manual of
Determinative Bacteriology de 1994, se agrupan a las bacterias en 35 grupos, situados
en
4
categoras
mayores:
1. Eubacterias Gram- (bacterias verdaderas) con 16 grupos; en esta categora
se incluyen a la mayor parte de las bacterias que provocan a la patologa humana.
Espiroquetas:
Familia Leptospiraceae (genero
- Leptospira)
Familia Spirochaetaceae (genero
- Borrelia,
Treponema)
Helicoidales /vibrioides aerobias - microaerfilas mviles (crecen mejor a
bajas
presiones
de
oxgeno):
Familia Campylobacteriaceae (genero
- Campylobacter,
Helicobacter)

Bacilos y cocos aerobios - microaerfilos (crecen mejor a bajas presiones de

oxgeno):
- Familia Pseudomonadaceae (genero - Pseudomonas, Stenotrophomonas)
- Familia Alcaligenaceae (genero - Bordetella) => bacilos y coco-bacilos
Familia Legionellaceae (genero
- Legionella)
Familia Neisseriaceae (genero
- Neisseria)
=>
diplococos
Familia Moraxellaceae /
Familia Branhamaceae (genero
- Moraxella,
Branhamella)
=>
diplococos
Otros
generos
=> Brucella (cocobacilos)
Bacilos
anaerobios
y
facultativos:
- Familia Enterobacteriaceae (genero - Citrobacter, Enterobacter, Escherichia,
Klebsiella, Serratia, Hafnia [coliformes] Morganella, Proteus, Providencia,
Salmonella,
Shigella,
Yersinia/peste)
Familia Vibrionaceae (genero
- Vibrio,
Aeromonas,
Plesiomonas)
Familia Pasteurellaceae (genero
- Haemophilus)
Otros
generos
=> Gardnerella
Cocos
Gramanaerobios =>
genero
- Veillonella
- Familia Rickettsiaceae (genero Coxiella, Ehrlichia, Rickettsia) - son parsitos
intercelulares
obligados,
altamente
pleomrficas
cocos/bacilos/hilos
- Familia Chlamydiaceae (genero Chlamydia) - son parsitos intercelulares
obligados
de
forma
esfrica.
2. Eubacterias Gram+ con 13 grupos (17-29); en este grupo hay los que provocan
patologia
humana
(la
mayoria).
Cocos =>
genero
- Staphylococcus
y
Streptococcus
Bacilos esporulados => genero - Bacillus (aerobio) y Clostridium (anaerobio)
Bacilos regulares no esporulados => genero - Lactobacillus y Listeria
Bacilos
irregulares
no
esporulados:
Familia Corynebacteriaceae (genero
- Corynebacterium)
Micobacterias:
Familia Mycobacteriaceae (genero
- Mycobacterium)
3. Micoplasmas (Mollicutes / bacterias sin pared) de 1 solo grupo (30);
dentro
de
este
grupo,
los
que
provocan
patologa
humana
=>
genero Mycoplasma/ Mycoplasma
pneumoniae y Ureaplasma.
4. Arqueobacterias con 5 grupos (31-35); todas las bacterias de este grupo no
provocan patologia humanas (viven en las situaciones extremas => termofilas/
termogenas)
Taxonoma => la ciencia de la clasificacin que agrupa y separa los organismos de
acuerdo con su caractersticas fenotpicas, estructurales o genticas para facilitar su
estudio; la misin => construir un esquema racional, para clasificar y nombrar los
organismos; el sistema jerrquico de la taxonoma se ha formado gradualmente a
partir del sistema binomial / binominal / binaria de nomenclatura genero y
especie establecida por Linneo en 1758 (un botnico); la taxonoma no es una ciencia
esttico, goza de gran dinamismo y esta en la relacion con los avances de los
procedimientos empleada para su estudio; el termino de sistemtica se utiliza como
sinnimo de taxonoma; los grupos de taxonoma van de dominio - imperio - reino -

tribu

divisin

clase

orden

familia

genero

especie.

Para la asignacin de una bacteria, se siguen las normas recogidas por el cdigo
internacional de nomenclatura bacteriana y adquieren validez cuando ha sido
publicado por el Intl Journal of Systematic Bacteriology; bien en un articulo o bien
dentro de los sistemas en las listas de las bacterias aprobadas que incluyen sus
nmeros; una especie bacteriana, viene definida por un nombre genrico de un
nombre especifico latinizado o helenizado y concuerdan gramaticalmente; la inicial de
genero va con letra maysculas y el de especie con minsculas; tanto el nombre de
genero o especie se escriben con letra cursiva/ italica o en su defecto, subrayado; en la
denominacin de un especie, la palabra que define genero puede ser abreviada a su
inicial seguida de un punto (p.ej. E.coli o E.coli); los nombres de las bacterias no se
eligen de manera arbitraria, sino que pueden ser descriptivos, p.ej. Staphilococcus
aureus (cocos en forma de racimos - dorados); o pueden dar homenaje a un autor p.ej.
Pasteurella, Bacilo de Koch, tambin puede dar referencia a un acontecimiento p.ej.
Legionella; el nombre generico es nico; para referirse a un especie o varios especies
no determinadas su genero => E.spp/ sp; algunas de las categoras taxonomia
superiores, se forman aadiendo las palabras que las asignan distintas terminaciones,
p.ej. aceae; para el orden => ales (sufijo) p.ej. Mycoplasmatales; todas las categoras
taxonoma
se
expresa
en
cursiva
o
itlica.
FLORAS
BACTERIANAS
Flora Normal de la especie humana => la poblacin de microorganismos
comensales que normalmente coloniza la piel y las membranas mucosas de las
personas adultas sanas; la piel y las mucosas colonizadas por microorganismos
dinmicos => cambios cualitativos y cuantitativos constantemente; 2 poblaciones:
1. La flora residente (FR) => un numero relativamente fijo de especies de
microorganismos (comensales y oportunistas) en una zona definida (si se producen
alteraciones, suelen ser temporales); permanecen intactas; encuentran condiciones
fisiolgicas y nutritivas adecuadas; no es esencial para la vida, pero es normalmente
beneficiosa (produce vitamina K en el intestino y ayudan en la absorcin de nutrientes
y impide la colonizacin de microorganismos potencialmente patgenos.
2. La flora transitoria (FT) => microorganismos no patgenos o potencialmente
patgenos, que colonizan la piel o las mucosas en periodo corto de tiempo; tiene poca
importancia, pero si la flora residente se altera, la flora transitoria puede multiplicarse
y
producir
infecciones.
La supresin de FR => vaci ecolgico => ocupacin de microorganismos ambientales
o
de
otras
zonas
de
cuerpo
=>
infecciones.
FR oportunistas => los que tienen acceso a lugares estriles; algunos ejemplos:
- Streptococcus viridans son comensales del tracto respiratorio superior y de la boca, si
alcanza el torrente sanguneo => si vlvula cardaca daada => posible endocarditis;
- Bacteroides son comensales del intestino grueso => si apendicitis perforada =>
posible
peritonitis
o
bacterimia.
- Infecciones de pacientes inmunodeprimidos por causas diversas (cncer, leucemias,
linfomas,
SIDA)
- E.coli es comensal del colon => lugar estril (o no habitual) a traves de uretra =>
infeccin
urinaria

Las causas de las interpretaciones errneas => no se toma en cuenta al

microorganismo como patgeno o se le descarta (como mero contaminante); la
omisin o inclusin de una especie en una de las categoras no implica que no pueda
ser aislada en otra zona del cuerpo o que en condiciones especiales, pueda producir
enfermedad.
Flora normal de la piel, boca y vas respiratorias superiores
- Las
principales (en
faringe
y
traquea)
=> Staphylococcus
epidermiditis (coagulasa-),Staphylococcus
aureus (coagulasa+)
en
pequeas
cantidades, Micrococcus spp, Neisseria de especies no patgenas, Estreptococos Ahemolticos y
no
hemolticos,
las
anaerobias
facultativas, Candidas.
- FT/no residente se elimina o se disminuye => pH acido, los cidos grasos de las
secreciones sebceas, lisozima, el sudor y el lavado diario con jabones desinfectantes;
se disminuye de forma temporal => la repoblacin es muy rpida.
- Al nacer => la boca y faringe son estriles; tras 12 horas => Streptococcus
viridas (las mas abundantes en la boca), posteriormente => estafilococos
(S.epidermiditis), diplococos Gram-, difteroides (Corynebacterium); salida de
dientes => espiroquetas de Bacteroides, Fusobacterium e Actynomicetes, vibrios
anaerobios, Lactobacilos y levaduras; Adulto normal=> las principales (mira arriba!!)
Los
bronquios,
bronquiolos
y
alvolos
suelen
ser
estriles.
Flora
normal
del
tracto
intestinal
- Al nacer => estril, posteriormente => colonizado por microorganismos de los
alimentos dependiendo de la dieta (p.ej. la leche materna => Estreptococos y
Lactobacilos y
el
bibern
=> flora
mixta con
menos
Lactobacilos)
.
- Adulto normal => el esfago contiene lo que previenen de la saliva y comida; en el
estomago hay poco (pH acido protegen la clera y salmonelosis - excepto Helicobacter
pilorique puede causar ulcera pptida, tiene ureasa que alcalina/neutralizar el acidez:
degradar la urea => amoniaco); el intestino delgado superior contiene Lactobacilos y
enterococos;intestino delgado inferior (leon y ciego) contiene la flora fecal; el
colon contiene >100 especies 96-99% anaerobios facultativo y estricto => Bacteroides
spp, Fusobacterium spp, Lactobacilos/ Bifidobacterium spp, Clostridium spp, cocos
Gram+
anaerobios
(Peptostreptococcus
spp).
- La utilidad/beneficio => sintetiza la vitamina K, transformacin de los pigmentos
biliares en cidos biliares, absorcin y metabolismo primario de nutrientes.
- La administracin de anti-microbianos orales => la posible proliferacin de
cepas resistentes al anti-microbiano administrado y pueden ser diseminada.
- La administracin de ATB por va parenteral en una ciruga intestinal => necesario
para reducir al mnimo posible el numero de microorganismo, evitar trauma en el acto
quirrgico
y
infeccin
peritoneal
e
diseminada.
Flora
normal
de
la
uretra
- Los mas frecuentes son estafilococos, enterococos, Corynebacterias, Neisserias no
patgenas, enterobacterias (la mayora son pobladores de la piel que recubre esta
zona).
- En los cultivos de orina, se deben limpiar con cuidado la zona perineal antes de tomar
una
muestra.
Flora

normal

de

la

vagina

- Al nacer, esta colonizada por Lactobacilos aerobios (produce pH acido),

posteriormente el pH acido se convierte en neutro y aparece flora mixta de cocos y
bacilos,
hasta
la
pubertad.
- En la pubertad esta colonizada por Lactobacilos aerobios y anaerobios que produce
cidos por su metabolismo de hidratos de carbono => cambio a pH acido (proteccin a
los
otros
microorganismos
potencialmente
patgenos.
- En la mujer adulta esta colonizada ademas de los anteriores (Lactobacillus
acidophillus - aerobios y anaerobios), estreptococos anaerobios (hemoliticos o no
hemoliticos) y otros; el moco cervical contiene lisozima con actividad bactericida.
- En la menopausia la flora vaginal cambia, aparece de nuevo una flora mixta de cocos
y
bacilos.
- La administracin de antibiticos de amplio espectro, puede eliminar las especies
protectoras, producindose una multiplicacin excesiva en la vagina de levaduras
(candidas)
u
otras
causantes
de
vaginitis.
Flora
normal
de
la
conjuntiva
del
ojo
Predomina los difteroides (Corynebacterium xerosis), Staphylococcus epidermidis y
estreptococos no hemolticos; pueden estar presentes otras especies; el control de la
flora lo ejercen las lagrimas, por su contenido en lisozima.

Tema 11 - Examen Microscpico (observacin

de microorganismos vivos)
Nociones
de
microscopia
(repasar
apuntes
de
1
curso)
Microscopio instrumento que permite amplificar la imagen de un objeto o de un
ser pequeo (micros: pequeo y scopein: ver); inventado 1610 por Galileo, el primer
cientfico italiano observando el exterior de una abeja o Jansen, el holands.
Fundamento Si se sita entre el ojo y el objeto un sistema ptico capaz de
aumentar el angulo visual, se podr ver el objeto con mayor amplitud y claridad. El
sistema de lentes - produce una imagen aumentada de una muestra diminuta. El
objetivo - pequea lente de proyeccin que aumenta y proyecta la imagen primaria del
objeto hacia el extremo superior del tubo del microscopio (imagen area). El ocular
(lupa) - aumentando la imagen area. La imagen final - se forma en la retina del ojo. La
imagen virtual (el ojo percibe la imagen final en el plano virtual).
Aumento es el numero de veces que se ve el tamao de un objeto por encima de su
valor real. En el microscopio ptico compuesto, se calcula multiplicando el aumento
individual del objetivo por el aumento individual del ocular. Objetivo - x4, x10, x40,
x100.
Aumento
ptico
ocular
x5,
x10
Resolucin la capacidad del microscopio para mostrar los detalles ms finos de un
objeto. Poder de resolucin (limite de resolucin o distancia resoluble) la distancia
minima entre dos puntos que permite distinguirlos como tales (la capacidad de
microscopio para distinguir 2 puntos separados aunque estn muy prximos entre si).
Disminuir la distancia resoluble = aumentar el poder de resolucin = aumentar la
apertura numrica (AN) = disminuir la longitud de onda de la luz empleada =
aumentar el ngulo alpha en el espacio objeto = aumentar el ndice de refraccin (IR)
en el espacio objeto (rellenar el espacio existente entre la muestra y el objetivo con una

sustancia

de

mayor

ndice

de

refraccin,

como

aceite).

Numero de campo dimetro de la imagen observada a travs del ocular (en mm).
Profundidad de foco el espesor de la muestra que es posible tener enfocado por
completo
><
aumento
y
AN
(apertura
numrica)
de
la
lente.
El contraste para mejorarlo, disminuye el cono de iluminacin (se controla
mediante
el
diafragma
de
apertura)
procedente
del
condensador.
Partes
de
un
microscopio
ptico
compuesto:
Parte mecnica sistema de soporte o esttico (pie, brazo, cabezal); sistema de
ajuste (anillo de ajuste de las dioptras, tornillo de fijacin del cabezal, tornillos
reguladores de la platina, tornillo de elevacin del condensador, tornillos de centrado
del condensador, tornillo de seguridad del condensador, control del diafragma de
apertura del condensador, anillos de enfoque macro-mtrico y micromtrico, control
de
ajuste
de
la
claridad/
la
luz).
Parte ptica sistema de iluminacin (fuente de luz - lampara halogena de
intensidad graduable; condensador - dispositivo que contiene una lente que concentra
la luz, generada en la lampara, hacia la preparacin; diafragma de apertura - el control
adecuado del cono de iluminacin que atraviesa la muestra y entra en el objetivo = se
ajusta AN); lentes (objetivos - generan imagen real, invertida y aumentada del objeto;
oculares - captan la imagen formada por el objetivo y la amplian)

Material necesario para la visualizacin microscpica portaobjetos

esmerilado y biselado, cubreobjetos 22x22, lquido de inmersin (se usa sin
cubreobjetos) es imprescindible cuando se observa muestra desecada con objetivo de
100x (tradicionalmente aceite de madera de cedro, actualmente aceites sinttico)
Tipos
de
microscopios:
Microscopio de campo oscuro si dentro de la muestra hay elementos
transparentes, con un indice de refraccin diferente al del medio que los circunda, la
luz es difractada e incide sobre el objetivo y pueden ser visualizados; permite la
observacin de seres microscpicos transparentes y no teidos (Treponema pallidum
preparacin
en
fresco).
Microscopio de fluorescencia consta de una fuente de luz muy intensa (lmpara
de Hg a alta presin), emite una radiacin que puede incidir en la muestra desde abajo,

tras atravesar un condensador de campo oscuro (iluminacin transmitida); se emplea

un
tipo
especial
de
liquido
de
inmersin
(glicerina); Tipos
de
fluorescencia: Fluorescencia primaria - fluorescencia natural (auto fluorescencia) vitamina A-tiamina, vitamina B-riboflavina; Fluorescencia secundaria - colorantes
fluorescentes: auramina (demostrar la presencia del bacilo de Koch en esputos),
naranja de acridina (detectar Gardnerella vaginalis en los exudados
vaginales; Fluorescencia terciaria inmunofluorescencia - fijacin del fluorocromo
(colorante) como rodamina y ficoeritrina al elemento investigado (a traves de Ac
marcado).
Fuente de luz => Filtro primario => Muestra Fluorescente => Filtro secundario => Luz
fluorescente
de
exitacion
(UV)
Observador
Microscopios electrnicos de transmisin (TEM) una gran amplificacin y
permite la observacin de elementos que son demasiado pequeos como para ser
vistos en un microscopio ptico, pero no sirve para observar elementos vivos, a causa
del vaco que ha de establecerse dentro del tubo y es muy costoso (solo se usa en lab de
investigacin). El poder de resolucion en microscopio electronico es x1000 > que
microscopio ptico; emplean electrones en lugar de unas fotones; microscopio ptico <
200
nm
fotones:
400
700
nm
longitud
de
onda.
Microscopio electrnico de barrido (MEB) no tiene tanto poder de resolucin
como el de transmisin, pero sin embargo, proporciona una enorme profundidad de
campo y genera unas imgenes que producen una gran sensacin de tri
dimensionalidad. 1973 se comercializo el 3 modelo que une las caracteristicas de los 2
anteriores (la gran resolucion de los TEM y la gran definicion y contraste de los MEB.
Examen en fresco de bacterias vivas (Gota pendiente) - para conocer la
movilidad y la disposicin bacteriana en una muestra se debe observar los grmenes
vivos a partir de cultivos jovenes (lleva pocas horas), que permiten visualizar mejor su
movilidad
y
su
preparacin
en
fresco.
Condiciones
que
debe
cumplir
para
este
fin:
cantidad
de
muestra
adecuada
(ni
mucho
ni
poco)
la
muestra
recogida
en
condiciones
de
esterilidad
- adecuadamente distribuida en el portaobjetos (amplia y homognea)
cantidad
de
agua
o
colorante
adecuada
- para la fijacin por calor => no debe calentarse demasiado (no quemar el dorso de la
mano
y
la
gota
+/-consumida)
=>
para
hacer
tincion
- seguir el mtodo o tcnica adecuada, se trabaja con limpieza y orden, evitando
cualquier
contaminacin.
Tcnicas para observar los microorganismos vivos - examen en fresco, entre
portaobjetos y cubreobjetos, sobre gota pendiente en porta excavado (no lo hacemos) y
con
tincin
vital.
Examen en fresco - suspender el microorganismo en agua destilada o SSF
colocandolo en un portaobjetos y posteriormente visualizarlo por microscopio su
morfologa (cocos o bacilos), disposicin/agrupacin y motilidad; Material =>
portaobjetos, microscopio, portaobjetos excavado, cubreobjetos, asa de siembra,

mechero Bunsen o de alcohol (para flamear el asa de siembra), muestra de

microorganismo
problema,
agua
destilada
estril,
vaselina
(opcional).
Tcnica - Mtodo de examen en fresco entre portaobjetos y cubreobjetos:
preparar
portaobjetos
y
cubreobjetos
limpios
y
desengrasados
- depositar una gota de agua estril en el portaobjetos (50ul/lambdas)
- con el asa de siembra esterilizada por flameado, tomar un poco de muestra del
microorganismo
y
suspenderla
en
la
gota.
- homogeneizar la muestra, colocar con cuidado sobre la suspensin un cubreobjetos,
evitando que se formen burbujas de aire al caer el cubre sobre la suspensin.
observar
al
microscopio
con
objetivo
de
40
aumentos.
Mtodo de examen en fresco sobre gota pendiente en porta excavado:
- colocar en el centro de un cubreobjetos una gota de la suspensin microbiana con una
asa
de
siembra
estril.
- colocar vaselina en los bordes del pocillo del porta excavado
- invertir el cubre sobre el porta excavado, colocandolo encima del rea cncava del
portaobjetos.
- la vaselina adherir el cubre al porta formando una cmara evitando su evaporacin y
corrientes
de
aire.
se
invertir
la
preparacin
observar
al
microscopio
con
objetivo
de
40
aumentos.
Resultados - es importante no confundirlos con los movimientos brownianos que se
producen cuando se desplaza el medio liquido y hace que todos las bacterias siga dicha
corriente en dicha direccin; el sellado con vaselina evita este problema.
Coloracin vital - es una tcnica intermedia entre los exmenes en fresco y las
tcnicas de tincin despus de fijacin previa???; consiste en teir las muestras
bacterianas con colorantes muy diluidos, permite al microorganismo acumular
parcialmente dichos colorantes; la dilucin debe ser muy altas para que no resulten
toxicas para las bacterias, evitando la muerte de tales grmenes; material =>
microscopio, asa de siembra estril, portaobjetos, cubreobjetos, mechero, papel de
filtro,
una
suspensin
de
muestra
problema,
aceite de inmersin, altas diluciones de colorantes para disminuir su toxicidad (rojo
neutro en solucin acuosa al 1:1.000 o 10 lambas : 10 ml y azul de metileno en solucin
acuosa
al
1:1.000
o
1:500).
Tcnica (se puede hacer igual como en fresco) - colocar sobre el portaobjetos
limpio y desengrasado una gota de suspensin muestra junto con otra gota del
colorante diluido utilizado; mezclar bien ambas gotas con el asa de siembra y colocar el
cubre objetos con cuidado para evitar que se formen burbujas de aire; observar al
microscopio con objetivo de inmersin; resultados => los microorganismos se
visualizaran vivos y ligeramente coloreados de rojo, en el caso de haber utilizado como
colorante el rojo neutro o de color azul si se utiliza el azul de metileno.

Tema 12 - Las tinciones en bacteriologa

La morfologa bacteriana (es incolora) puede ser estudiada por visualizacin de los
microorganismos => vivos sin teir (observar su posible movilidad) y teidos

mediante colorantes con una concentracin que matan la bacteria y no permiten

observar su movilidad, pero mejora notablemente la visualizacin de su morfologa y
estructuras.
Ventajas
de
las
tcnicas
de
tincin:
- observar mas adecuadamente su morfologa y permite diferenciar entre los distintos
tipos
- dar informacin complementaria de sus estructuras internas y/o externas que no se
observa
en
fresco.
- al conocer sus caractersticas tintoriales, nos orienta hacia un grupo u otro en la
clasificacin
bacteriana.
Factores
que
afectan
a
toda
tcnica
de
tincin:
- pureza del colorante (a + impurezas => + error y - calidad en la tincin).
- concentracin del colorante (valores ideales oscilan entre 0,2 y 2%)
- pH del colorante (en general son neutro +/- 7 o entre 6,8-7,4)
conservacin
del
colorante
elaboracin
(no
lo
hacemos
/vienen
preparadas)
- tcnica empleada (material limpios y seguir los pasos de la tcnica)
temperatura
(en
general
la
ambiental)
cantidad
de
muestra
(representativa
y
homognea)
- realizar correctamente el frotis (fijarlo bien, en general por calor => coagula las
proteinas bacterianas, para que no se arrastre con el colorante mordientes y
decolorantes)
- soluciones mordientes (ayudar a fijar el colorante a las estructuras microbianas, p.ej.
lugol
en
la
Gram)
tiempos
de
tincin
(segn
el
colorante
que
usemos)
Principales tcnicas de coloracin - clasificacin de colorantes => [1] segn su
origen (naturales y artificiales) [2] segn su comportamiento qumico (cidos, bsicos
y
neutros).
Colorantes naturales - extrado de plantas como la hematoxilina (del tronco de una
planta que por oxidacin produce hematena; el azul de ndigo (de una
leguminosa); extrado de animales como el carmin (de una cochinilla)
Colorantes artificiales - preparados artificiales y obtenidos de alquitrn de
hulla(colorantes anilina cidos, bsicos y neutros en forma de sales) p.ej. cristal violeta,
violeta de genciana, fucsina bsica, acido pcrico, azul de metileno, etc.
Colorantes segn su comportamiento qumico - se unir de forma mas estable
a la estructura que tie, dependiendo de su estructura fsico-qumica; constituido por
un anillo bencnico que unen distintos radicales => radical cromforo; a+ numero de
radicales
=>
+poder
colorante
de
la
solucin;
[1] colorantes cidos o aninicos: la carga del radical colorante es (-) =>
colorantes citoplasmticos que son bsicos (los componentes citoplasmticos captan
muy bien los colorantes cidos) => las eosinas, las auraminas.
[2] colorantes bsicos o catinicos: la carga del ion cromforo es (+) =>
colorantes de la zona nuclear que son cidas o ligeramente cidas => fucsina bsica,
cristal violeta o violeta de genciana, azul de toloudina, azul de metileno o las tioninas.
[3] colorantes neutros: es una sal compuesta de un colorante acido y un colorante
bsico => el eosina azul de metileno; es hidro-solubles (posee las propiedades de

colorantes
cidos
y
bsicos).
[4] colorantes indiferentes: insolubles en agua y solubles en alcohol, no predomina
ni la carga+ ni (-), pero tampoco es de carcter neutro => colorantes de los lpidos
como Sudan
III,
Negro
Sudan,
etc.
En bacteriologa es frecuente la utilizacin de => fucsina fenicada, violeta de genciana,
azul de metileno (son colorantes bsicos) y de aadir un mordiente que ayude a fijar
dicho colorante; los colorantes cidos se utiliza como un contraste y los colorante
neutros e indiferente como coloraciones particulares; el proceso de tincin => reaccin
de intercambio de iones entre colorante y sitios activos de la superficie o del interior de
la clula (los iones teidos/colorantes reemplazan iones de los componentes celulares)
y esto permite contrastar mucho mas el germen con respecto al medio que le rodea.
Preparacin de un frotis - realizar una extensin y fijar la muestra problema para
posterior coloracin y visualizacin al microscopio; poner en un portaobjetos, a traves
de un asa de siembra una cantidad de microorganismo problema suspendido en medio
liquido estril, extendindolo adecuadamente hasta formar una fina pelcula
homognea que posteriormente se fijara generalmente con calor cuando sea requerido,
segn el mtodo de tincin que se utilizara posteriormente; material => portaobjetos,
asa de siembra o platino, agua estril, muestra problema; tcnica => pequea cantidad
de la muestra liquida se deposita y se extiende homogneamente en el centro del
portaobjetos con el asa de siembra para tener una capa fina (segn la viscosidad, se
puede diluir con unas gotas de agua estril); si la muestra es solida (una colonia), se
deposita primero una gota de agua estril y se aade con el asa de siembra una
pequea cantidad de la colonia, se extiende homogneamente; dejar secar al aire; se
fija mediante el flameado (en algunos casos se podr hacer con alcohol) para coagular
las
protenas
y
los
grmenes
quedan
adheridos
al
portaobjetos.
Tcnica
de
tincin
los
pasos:
-realizar un frotis y fijacin por calor (generalmente), con la intensidad de calor
adecuada
que
soporte
el
dorso
de
la
mano.
-coloracin segun el tipo de tincion (generalmente con colorantes basicos que tien
estructura
acida)
-decoloracin que permite diferenciar distintos grupos bacterianos (genero
Micobacterium son resistentes a la decoloracion cida/BAAR); Gram- decoloradas con
el alcohol 96/alcohol acetonas, alcohol acido, acidoclorhidrico => micobacterias
-lavado siempre entre paso y paso con agua destilada para evitar interferencias entre
un
producto
y
otro.
-coloracin de contraste (generalmente cido), se aplican al final para las estructuras
decoloradas
con
el
decolorante,
p.ej.
safranina.
-observacin
al
microscopio
Tipos
de
tinciones
bacterianas:
(1) Tincin simple => fijacin previa, se utiliza 1 solo colorante, permite la
visualizacin de la morfologa y la agrupacin bacteriana; clasificacin => tinciones
simples con colorantes bsicos, cidos y neutros; se basa en => la afinidad de los
colorantes que suelen ser de tipo bsico (azul de metileno, violeta de genciana, azul de
toloudina => 1-2 minutos, dan color azul a las celulas o fucsina fenicada diluida => da
color
rojo
a
los
componentes
celulares.

(2) Tincin negativa => es un tincin simple (1 solo colorante => tinta china o
solucin acuosa de nigrosina al 1%) con diferencias que no necesita fijacin previa (no
mata las bacterias), permite observar caractersticas estructurales de la bacteria
ademas de su morfologa sobre un fondo oscuro, como es la presencia de capsulas p.ej.
los neumococos; se basa en => colorante acido cargado negativamente, los
microorganismos no se tien (se quedan claros y brillantes sobre un fondo teido
oscuro); para obtener una capa fina (para dejar pasar el paso de luz del microscopio y
evitar a formarse grietas al secarse el colorante) se puede hacer una extensin con el
borde de otro portaobjetos; resultado => se observan las capsulas (si las tienen) en
forma de un halo mas claro que rodea el cuerpo de la bacteria.

(3) Tinciones diferenciales => fijacin previa (en general por calor), se utiliza 2
colorantes(el ultimo es de contraste), permite visualizar su morfologa y caractersticas
estructurales (composicion de la pared bacteriana, su resistencia a la decoloracin
cida
(t.Gram
y
t.ZhielNeelsen).
(4) Tinciones estructurales => fijacin previa (en general por calor), se utiliza al
menos 2 colorantes, nos permite observar su morfologa y caractersticas estructurales
como esporas, flagelos, cilios, capsulas, corpsculos metacromticos (utiliza 1 solo
colorante???).
Tincin diferenciales de Gram => descubierto en 1883 por Cristian Gram, cuando
trabajaba con material de biopsias y utilizada a partir de 1886 como tincin diferencial;
es mas empleado en bacteriologa, para clasificar 2 grandes grupos (Gram+ y Gram-);
distinto comportamiento debido a la distinta composicion de la pared de las celulas
bacterianas; se emplea como el primer colorante bsico (cristal violeta o violeta de
genciana) que teir de color azul violeta todas las bacterias, posteriormente
un mordiente el lugol que aumenta la afinidad del primer colorante a las celulas (lo
fijara), finalmente un agente decolorante que decolora solamente un tipo de bacterias
(Gram-) que sern teidas con el colorante de contraste o segundo colorante (la
safranina) de color rosa-rojo; si se quedan con el color azul violeta sern Gram+.

Material de la tincin Gram => portaobjetos, pinzas de madera, asa de siembra,

mechero de Bunsen, pipeta Pasteur, asa de tincin (punte), frasco lavador, muestra
problema, aceite de inmersin, colorantes para la tincin de Gram.
Tcnica:
- realizar la preparacin de frotis => extender 1 gota de agua destilada estril + una
colonia de la bacteria problema por la superficie de la portaobjeto
fijacin
por
el
calor,
pero
no
quemar
las
bacterias
- aplicar el colorante cristal violeta durante 1,5 minuto o violeta de genciana durante 2
minutos
- lavar abundantemente con agua para eliminar el exceso de colorante
- aadir un mordiente, el lugol durante 1 minuto (solucin iodoiodura de potasio con
OH
de
96
o
con
acetona
a
5/1
o
con
OH
50%)
vuelve
a
lavar
con
agua
el
exceso
decolorar
con
solucin
decolorante
(alcohol
90)
lavar
abundantemente
con
agua
cubrir
el
portaobjetos
con
la
safranina
durante
1
minuto
- lavar con agua para arrastrar los restos de colorantes y dejar secar al aire
observar
con
objetivo
de
inmersin
(100x).
Tincin de grmenes del acido alcohol resistentes (BAAR + criptococo)
A. Tincin
de
Ziehl-Neelsen
Este mtodo fue desarrollado por Ehrlich en 1882 trabajando con bacilo de Koch y
mejorado posteriormente por Ziehl-Neelsen; objetivo => diferenciar del resto, las
bacterias tipos BAAR (bacterias acido alcohol resistentes, p.ej. Mycobacterium), debido
a su gran cantidad de componentes miclicos (lipoideos y cereos/cera) que forman
parte de la pared de este tipo de bacteria (los colorantes convencionales no penetran en
el interior de estas bacterias); De ah se necesitan colorantes altamente concentrados y
la presencia de calor que facilite su penetracin al interior de dichas bacterias; una vez
teidas, su decoloracin posterior no es posible (resiste incluso a decoloraciones
cidas); dicha tincin se emplea principalmente para el diagnostico y estudio de
enfermedades
como
tuberculosis
y
la
lepra.
Material => es el mismo que esta descrito en la tincin simple, pero en cuanto los
reactivos:1 colorante - solucin fenicada de fucsina bsica (carbo fucsina), 2
colorante de contraste - solucin hidro-alcohlica de azul de metileno fenicado, 3
decolorante alcohol
acido
al
3%(97%
alcohol).
Tcnica => preparacin de frotis y fijacin calor; cubrir el frotis con fucsina fenicada
bsica 5 minutos aplicando en este tiempo calor, hasta la emisin de vapores, evitando
que se caliente demasiado o que se seque el colorante; lavar abundantemente con agua
destiladahasta arrastrar el colorante; decolorar con alcohol acido para arrastrar restos

del colorante (10-30 segundos); lavar abundantemente con agua destilada; cubrir el
frotis con colorante de contraste /azul de metileno fenicado 30 segundos sin necesidad
de calentar, para teir aquellas bacterias que no son resistentes a la decoloracin (se
han decolorado) y resaltar el color rojo de los BAAR+; lavar, secar, rotular y observar
con
objetivo
de
inmersin.
Resultados => con el 1 colorante, BAAR- y BAAR+ (ambas) se tien de rojo; con el
decolorante, BAAR- se decoloran y BAAR+ no se decoloran; con el 2 colorante (de
contraste), BAAR- setien de azul y BAAR+ permanecen de color rojo/ acido alcohol
resistencia+
(bacilos
Mycobacterium
y
algunos
Nocardia)
B. Mtodo de Kin Youw modificado (coloracin en fri) Reactivos => 1
colorante: fucsina fenicada (con fenol) de KinYouw, decoloracin a 3%, 2 colorante:
azul de metileno fenicado (con fenol); tcnica => idntica, salvo para la fucsina de KY,
dejamos actuar 5 minutos sin calentamiento; existen otras tcnicas de tincin de los
BAAR => tincin de auramina o de rodamina que usan microscopio de fluorescencia.
Tincin
de
espiroquetas
(para
las
espiroquetas)
Tincin estructurales => tincin de esporas, de flagelos, de cilios (similar a flagelos,
pero corto y se extiende por todo el cuerpo, como pilis), de corpsculos
metacromticos
y
de
capsulas.
Tincin especiales => tincin de auramina y de naranjo de acridina.

Tema 13 - Pruebas bioqumicas para la

deteccin del metabolismo hidrocarbonado de
las bacterias.
Metabolismo - conjunto de reacciones qumicas que tiene lugar en las celulas vivas;
necesitan energa que se obtiene por oxidacin (perdida de electrones) de sustancias
introducidas en forma de alimentos; la gran mayora de las bacterias (hetertrofas) se
nutren de sustancias orgnicas que proceden de otros seres vivos y otras (auttrofas
- cianobacterias) se nutren de sustancias orgnicas que sintetizan ellas mismas a partir
de
sustancias
inorgnicas; 3
etapas
en
metabolismo =>
1-catabolismo/hidrlisis/degradacin de sustancias nutritivas => compuestos mas
sencillos
+
energa
en
forma
de
ATP
(adenosin
trifosfato)
2-anfibolismo/metabolismo intermedio del producto del catabolismo => compuestos
de
bajo
peso
molecular
3-anabolismo/metabolismo biosinttico de sustancias simples => biosntesis de
macromolculas
/moleculas
complejas
+
gasto
de
energa.
Enzima - catalizadores biolgicos (protenas); cada enzima afecta solo a un sustrato
especifico.
Reduccin =>
captan
electro
nes.
Catabolismo de hidratos de carbono - oxidacin de azucares para obtener la
energa es muy importante, aunque tambin se catabolizan lpidos y protenas; la 1
etapa de la degradacin de la glucosa => oxidacin de esta para formar acido pirvico
(gluclisis); 2 procesos => la respiracin (necesita O2) o la fermentacin (no necesita
O2); la gluclisis (no precisa O2) se produce en 3 vas, en funcin de la dotacin

enzimtica.
1 va glucoltico/ ruta de Embden-Meyerhof Parna (EMP) fue descubierto
porPasteur => se obtiene 2 moleculas de ATP mediante fosforilacin por cada
molcula de glucosa que se oxida; este proceso se puede realizar en presencia o no de
O2; a partir de la formacin de acido pirvico, las bacterias que usan esta va,
normalmente utilizan la va fermentativa para acabar transformando este acido
pirvico en cidos mixtos; degradacin/ hidrlisis de glucosa (6C) => acido pirvico +
2 ATP (fosforilacin) => cidos mixtos (fermentacion); son 9-10 reacciones qumicas
con un enzima diferente en cada una; utilizados por las bacterias fermentadoras que
poseen
deshidrogenasas (Clostridium,
Enterobacter,
Salmonella)
2 va de las pentosas fosfato /va fosfoglucnica (va HMP) - es una ruta
mixta y va alternativa; este ciclo rompe los azucares de 5 carbonos /pentosas
y tambin glucosa,mediante
sucesivas
reacciones y
produce
=> pentosas
intermedias (precursores de sntesis de cidos nucleicos y ciertos aminocidos) de gran
utilidad para las celulas; ademas de la gluclisis via EMP, muchas bacterias utilizan
HMP como una va alternativa para la oxidacin de la glucosa => produce acido lctico
o acido mixto + 1ATP (p.ej.Enterobacterias/ E.coli); esta va es un hbrido de la va ED
y la EMP, ya que en las primeras etapas, la oxidacin de la glucosa es similar a la via
ED y en las etapas posteriores es similar a la va EMP, es decir: proporcionan a las
bacterias no oxidativas un medio de oxidar la glucosa a acido pirvico puro, porque no
tienen las enzimas necesarios para comenzar la va EMP, apareciendo en los sistemas
analticos
como
fermentadoras.
3 va de Entner-Doudoroff (va ED/ va aerobia => requiere O2) - es otra va
por la cual la glucosa se oxida a acido pirvico; por cada molcula de glucosa se
producen 1 molcula de ATP para ser utilizada por la clula en reacciones biosintticas; esta va requiere enzimas especficos y solo los microorganismos que las
poseen pueden utilizarla sin seguir la va de las pentosas fosfato ni la gluclisis; los
microorganismos que la utilizan sonPseudomonas y Neisseria (aerobio estricto),
por carecer de las deshidrogenasas necesariaspara oxidar el acido pirvico al acido
lctico u otros cidos; los hidrogeniones se transfieren al ciclo de Krebs y se acabaran
obteniendo agua; oxidacin de glucosa => acido pirvico + 1ATP (no producen acido
lctico
ni
acido
mixto)
Respiracin - es un proceso fosforilacin oxidativa de generacin de ATP y se
caracteriza por el aceptor final de electrones generalmente es una molcula inorgnica
(O2); la glucosa se degrada => acido pirvico se sigue oxidando por la va de la
respiracin o la fermentacin (en funcin del sistema enzimtico que tienen) => ATP +
CO2 + H2O; durante la respiracin, cualquier molcula orgnica puede ser
degradada /oxidada con un mayor rendimiento que en la fermentacin.
Respiracin aerbica - cuando el aceptor final de Hidrgenos (electrones) es el O2;
en la respiracin, el acido pirvico producido por la gluclisis se escinde en 2 partes:
una parte se unen con CoA => forman acetil CoA que entra en el ciclo de Krebs donde
se liberan electrones y protones (H+); la otra parte para biosntesis???
Cadena de transporte de electrones (se encuentra en la membrana citoplasmtica de
las celulas procariticas y en las membranas internas de las mitocondrias en las celulas

eucariticas) - los electrones se mueven desde los coenzimas reducidos hasta una
molcula inorgnica como O2 en la respiracin aerbica o hasta una molcula
inorgnica diferente del oxigeno NO3- ion nitrato, SO2-4 ion sulfato, etc.; las
moleculas transportadoras de electrones son 3 tipos => [1] flavoprotenas realizan reacciones de oxidacin reduccin, [2] citocromos - protenas con un grupo
prostticos (Fe) en forma oxidada, [3] ubiquinonas o coenzima Q - transportadores no
proteicos
de
bajo
peso
molecular.
Respiracin anaerbica - cuando el aceptor final de electrones (H-) es una
sustancia inorgnica distinta del O2, tal como iones nitratos NO-3, sulfatos SO2-4,
carbonatos
CO2-3.
(Pseudomonas
y
Bacillus)
Fermentacin - proceso que se inicia a partir de acido pirvico formado en la
gluclisis de EMP /HMP, en cual el aceptor final de los electrones es un compuesto
orgnico y no requiere O2; caractersticas principales => (1) no precisa O2, pero
se puede ocurrir en su presencia, (2) no necesita el ciclo de Krebs ni cadena
transportadora de electrones, (3) utiliza1 molcula orgnica como aceptor final de
electrones, (4) libera energa a partir de azucares y otras moleculas orgnicas
(aminocidos, cidos orgnicos, purinas, pirimidinas), (5) libera solamente 2
moleculas de ATP por cada molcula del sustrato inicial, (6) los productos finales
pueden ser acido lctico, etanol y CO2, acido propinico, acido actico, CO2 y agua,
acido butrico, etc. (compuesto orgnico); cuando el aceptor final de electrones es el
lactato, se producir acido lctico y en general cuando el aceptor final sean otras sales
orgnicas, se formaran cidos mixtos p.ej. acido succnico, que son responsables de la
cada de pH en las pruebas empleadas, para la identificacin bacteriana; ademas, las
bacterias que tienen la dotacin enzimtica apropiada, pueden seguir degradando
estos cidos mixtos hasta CO2 y otros compuestos orgnicos; es til el anlisis de los
productos finales para identificar as los microorganismos; la mayor parte de la energa
producida en la fermentacin queda almacenada en los productos finales; las
fermentadoras => Streptococcus, Lactobacillus, Clostridium, Escherichia, Salmonella,
Enterobacter.
Prueba de la B-D Galactosidasa (ONPG) - se basa en la capacidad que tienen los
microorganismos de fermentar lactosa, mediante 2 enzimas => Lactosa
Permeasa (esta en la membrana celular y es capaz de transportar la lactosa a traves de
ella) y B-D-Galactosidasa (esta en el interior de la clula y es capaz de desdobla la
lactosa
en
glucosa
y
galactosa).
Clasificacin de los microorganismos segun su capacidad de fermentar o
no
la
lactosa:
- fermentadores activos de lactosa en 24 horas (poseen ambos enzimas)
- no fermentadores de lactosa (carecen de ambos enzimas, no degradan la lactosa, no
penetra
en
la
clula)
- fermentadores tardos de lactosa (poseen el enzima B-D-Galactosidasa, permeabilizar
la lactosa ligeramente cuando la concentracin es alta en 2-15 das).

La
aplicacin
fundamental
es
la
diferenciacin
de
Enterobacteriaceae =>Escherichia (+) es fermentadora activo, Proteus (-) es no
fermentadora y Klebsiella (+) es una fermentadora tarda de lactosa, es decir lactosa (-)
y ONPG (+); para detectar la enzima B-D-Galactosidasa => se utiliza un compuesto
similar a la lactosa (orto-nitrofenol): al liberarse al medio alcalino por la accin de
BDG
produce
un
color
amarillo.
Material => 1 tubo de ensayos estriles, bao mara o estufa a 37C, asa de siembra,
solucin fisiolgica esteril, discos de ONPG, microorganismo problema
Tcnica => una suspensin densa (con muchas colonias) de un cultivo puro en 0,5 ml
de suero fisiologico estril se aade un disco de ONPG y mezclar durante unos
segundos, incubar a 37C durante 30-60 minutos (en general se vira antes de 30
minutos)
Resultados => en ONPG+ se produce una coloracin amarillo y en ONPG- no se
produce color (incoloro).

Tema 14 - Pruebas bioqumicas para la

deteccin del metabolismo proteico de las
bacterias
Principal productor de energa => catabolismo de la glucosa y las oxidaciones de
proteinas y lpidos (estan relacionados entre si); la hidrlisis de protenas/
protena+agua (mediante enzimas proteolticos extracelulares, secretadas por ciertas
bacterias que sirve para su tipificacin/tipacin) => polipptidos y aminocidos; las
pruebas bioqumicas investigan fundamentalmente la capacidad de un
microorganismo de producir la hidrlisis de la gelatina; catabolismo de protenas/
protelisis se realiza mediante proteinasas/proteasas y peptidasas (desaminacin) para
obtener => ion amonio NH4+ (+) acido orgnico; acido orgnico entrar al ciclo de
Krebs
y
ion
amonio
NH4+
es
secretado
de
la
clula.
Produccin de acido sulfhdrico - tcnica con indicador incorporado al tubo/a la
placa => algunos microorganismos actan metabolizando protenas con aminocidos
azufrados (cistina, cisteina) y liberan azufre en forma de gas acido sulfhdrico SH2; el
gas es detectado a traves del medio que contiene fuente de hidrgeno (azucar) fuente
de azufre(tiosulfato sodio, cistina, cisteina) y un indicador de pH (sales de hierro
/citrato frrico amoniacal) => un precipitado negro); se observara la liberacin del gas
SH2 por algunos microorganismo que poseen enzimas desulfurasas (activada por la
fermentacin de la glucosa => acidifica/produce cidos/baja el pH) que actan sobre

los aminocidos azufrados; la temperatura de incubacin (estufa) tiene que oscilar

entre 35-36C (superior a 37 se inhibira la produccin de SH2).

Material => tubo de cultivo (KIA/kliger iron agar y TSI/triple sugar iron), agujas y
asas de siembra, estufa de cultivo, muestras de problema; si se realiza en placa de
cultivo
(Hektoen
y
SS);
Tcnica => a partir de un cultivo puro y reciente de microorganismo problema se
tomara una muestra con una aguja; sembrar en picadura (tubo de KIA o TSI) o con
agotamiento en cuadrante (Hektoen o SS); incubar durante 18-24 horas; si la tcnica se
realiza con Brucella(microaerofila), se debe incubar con una atmsfera de CO2.
Resultados => SH2 positivo (Salmonela y Proteus) se observa a lo largo de la linea
de inoculacin ennegrecimiento del medio; SH2 negativo (Brucella y Shigella) no se
ennegrece
el
medio.
Bacteria con enzimas desulfurasas (activada por la fermentacin de azucar) +
indicador de pH/sales de Fe + fuente de S + (H+) => H2S gas + indicador pH =>
precipitado
negro
insoluble/
puntos
negros
(FeS)
Prueba de las descarboxilasas - enzimas que actan sobre el grupo carbxilo de
los aminocidos Lisina, Ornitina, Arginina para formar => aminas (alcalinas) y se
desprende CO2 (el proceso se realiza en anaerobiosis) => se realiza mediante el
sistema multiprueba (API - buscar el cdigo en el libro); estas pruebas se aplican para
la identificacin de Enterobacteriaceas; se investiga la alcalinizacin del medio
inicialmente de color purpura, se observara el viraje del color del indicador del pH; la
presencia del enzima investigado supondr la alcalinizacin del medio (sigue el mismo
color como el inicio); cada pocillo contiene indicador de pH y amino acido
correspondiente al enzima a investigar; cada descarboxilasa acta sobre un aminocido
especifico; en cada reaccin se desprende CO2 y se alcaliniza el medio:
L-lisina
+
LDC/lisina
descarboxilasa
=>
Cadaverina
+
CO2
- L-ornitina + ODC/ornitina descarboxilasa => Putrescina + CO2
- L-arginina + ADH/arginina deshidrolasa => L-citrulina + NH3 (descarboxilacin) =>
Putrescina +CO2

Material =>
pruebas
de
API,
pipeta
Pasteur.
Reactivos => caldo de Moller para descarboxilasas (lleva pequea cantidad en su
composicion una pequea cantidad de glucosa, peptonas y los indicadores rojo cresol y
purpura de bromo cresol, pH6); aminocidos ensayados en forma L, muestra de
problema
y
papel
parafina.
Tcnica => se aade una gota del inoculo (suspensin microbiana) en cada pocillo de
la
prueba
de
API;
se
incuba
a
35C
durante
18-24
horas.
Resultados => durante las primeras horas de incubacin, el caldo vira a amarillo, por
la fermentacin de glucosa que lleva el medio; pero si el aminocido es descarboxilado,
el pH vuelve a subir, ya que se forma aminas alcalinas que es de color purpura
(descarboxilasa+); si se queda amarillo sera descarboxilasa-; grmenes con
descarboxilasa+ (Escherichia no es 100% descarboxilasa+ de Lisina, Arginina y
Ornitina):
- Lisina => Klebsiella,
Serratia,
Salmonella
- Ornitina => Serratia,
Proteus,
Salmonella
- Arginina => Salmonella, Pseudomonas

Tema 15 - Pruebas bioqumicas para la

deteccin de la actividad enzimtica de las
bacterias
Pruebas oxidasa - esta denominacin se le da de forma genrica al enzima
citocromo oxidasa que participa en la transferencia de electrones en la cadena
respiratoria hacia el oxigeno; oxidasa => enzima que cataliza la transferencia de
electrones del sustrato al oxigeno; los aerobios o anaerobios facultativos obtienen su
energa por la respiracin y la almacenan en forma de ATP, el oxigeno es reducido a
partir de un sustrato orgnico que procede de la nutricin con la intervencin de un
sistema de transporte de electrones denominado cadena respiratoria, producindose
agua o perxido de hidrgeno segn la especie microbiana; los citocromos son hemoprotenas que contiene Fe y actan como ultimo eslabn de la
cadena respiratoria aerobio, transferindo H+ al O2 con formacin de H2O; este
sistema se encuentra en los organismos aerobios y anaerobios facultativos,
carenciandolo de ello los anaerobios estrictos; se observara el cambio de color de un
indicador de pH incoloro cuando esta reducido (p-fenilendiamina=> formar indofenol
de
color
violeta
oscuro)
y
coloreado
cuando
se
oxida;
Aplicacin => detectar en el microorganismo estudiado el enzima citocromo oxidasa;

diferenciar entre Enterobacteriaceas (oxi-) de Pseudomonadacea (oxid+); diferencia

entre gneros Moraxella (oxi+), Neisseria (oxi+) de Acinetobacter (oxi-).

Material => placa sembrada con microorganismo problema, asa de plstico, papel de
filtro,
porta,
reactivo
oxidasa
de
Kovacs.
Tcnica => mezclar una pequea muestra pura con el reactivo en el papel de filtro
que se sita por encima de una porta, esperar 30-60 segundos y se observar el posible
cambio de color; otra manera: se aade directamente el reactivo oxidasa de Kovacs
sobre las colonias de la placa Petri con agar sangre y tambin en otro medio; si son
oxidasa positivo toman un color marrn y en seguida pasan a negro parduzco.
Resultados => oxidasa+ aparece un color purpureo en el papel, si se desarrolla el
color a los 10-60" se considera oxidasa retardado positivo, despus de 60" es
negativo; oxidasa- no
se
produce
color.
Pruebas
de
catalasa
La catalasa es una enzima que se encuentra en la mayora de los microorganismos
aerobios y anaerobios facultativos que contienen citocromo; es un enzima fundamental
que acta sobre el perxido de hidrgeno /H2O2 (es un producto final de la
degradacin aerobica oxidativa de los hidratos de carbono); si se acumula H2O2, estos
grmenes moriran; fundamento: si el microorganismo tiene el enzima catalasa y se
pone en contacto con H2O2 => se descompone en H2O + O2; aplicacin =>
diferenciacin de Streptococcus (-) de Staphylococcus (+) y Micrococcus (+);

Material => portaobjeto, pipeta Pasteur, asas de siembra de plstico (las de platino
catalizar
la
reaccin)
Reactivo =>
H2O2/
agua
oxigenada,
microorganismo
de
problema
Tcnica => se coloca una gota de H2O2 (agua oxigenada) en un porta objeto,
simultneamente, con una asa se aade una colonia del cultivo del microorganismo de
12-24
horas,
homogeneizar
y
observar.
Resultados => catalasa+ forma burbujas de O2 inmediatamente; catalasa- no
aparecen burbujas; se podrn observar falsos positivos si se utilizaran medios de
cultivo agar sangre o otros que lleven hemates (los hemates contiene catalasa).

Pruebas de Nitrato reductasa o Nitratasa (se realiza con multiprueba de API)

La nitratasa (nitrato reductasa) es el enzima que cataliza el proceso en cual el nitratos
son reducidos a nitritos (presentes en algunos microorganismos anaerobios o
anaerobios facultativos que utilizan nitrgeno como ultimo aceptor de electrones en el
proceso metablico/ respiracin anaerbica); depende de la especie bacteriana se
trate, se pueden producir diversos productos finales; reaccin: nitrato/NO-3 +
nitratasa => nitrito/NO-2 =>N2 (nitrgeno molecular/ gas nitrgeno) o otros =>
amoniaco / oxido ntrico / oxido nitroso / hidroxil amina; la prueba detecta los
productos finales liberados al medio mediante un reactivo colorimtrico API;
aplicacin => diferenciacin de especies de Haemophilus y Neisserias; cuando no se
forma color (rojo) al aadir los reactivos, puede significar => [1] no se ha
reducido el nitrato, se comprueba aadiendo polvo de zinc que acta como reductor y
si hay un cambio al rojo, es nitratasa (-) y si no hay cambio de color, sera nitratasa
(+); [2] la reduccin de nitratos ha sido llevada hasta la formacin de N2, se observa
con la aparicin de grietas o burbujas; [3] la reduccin de nitratos ha formado otros
productos nitrogenados (oxido ntrico, amoniaco, hidroxil-amina, etc.);

Material => multiprueba de API; reactivo => Nit A y Nit B, Zinc en polvo,
microorganismo; el medio no debe contener azufre ya que si el microorganismo es
productor de H2S (acido sulfhdrico) este impide la formacin de color; tcnica =>
hacemos un inoculo a partir de un cultivo puro reciente de 12-24 horas, inoculamos el
medio; incubar a 37C durante 12-24 horas, agregar 1 gota de Nit A y 1 gota de Nit B,
observar si hay un cambio o no antes de 30 segundos (se interpreta rpido, ya que el
color puede desaparecer); si no se forma color, se aade al tubo un poco de polvo de
Zinc; resultados => hay 2 posibilidades de que sean Nitratasa+ (Haemophilus y
Branhamella Catarallis): [1] cuando aparece color rojo o rosado fuerte al aadir el
reactivo A y B que indica la reduccin de nitratos a nitritos; [2] al aadir polvo de zink
no se desarrolla color indica formacin de otros productos nitrogenados;Nitratasa- =>
cuando se forma color rojo o rosado al aadir polvo de zinc en menos de 30 segundos.
Prueba de Ureasa (se hace en manual y con el sistema API) - detecta la presencia de
la ureasa en los microorganismos cuando se observa la alcalinizacin de un medio
liquido; la ureasa cataliza la hidrlisis de la urea => carbonato amnico, que sube el
pH, con lo que el medio se alcaliniza; aplicacin => diferenciar Proteus (+) de
otras Enterobacteriaceas / E.coli (-) o positivo retardado (+) como Klebsiella;

Material => tubos de cultivo, asas, pipeta Pasteur, estufa de cultivo o bao mara.
Reactivo => caldo urea de Stuart/ urea-indol (de color mbar) y microorganismo de
problema
Tcnica => con el asa estril se toma una muestra de cultivo puro reciente 18-24
horas; inoculamos el microorganismo en un tubo con caldo urea de Stuart; incubar
37C; la
reaccin
se
produce
entre
1-4
horas
Resultados => en ureasa (+) el caldo de color mbar vira a rosa fuerte durante el
tiempo de reaccin (1-4 horas); en ureasa (-) no vira el indicador; algunas cepas de
Klebsiella,
Enterobacter,
Brucella,
requieren
6
das
de
incubacin.
Prueba de Coagulasa (se hace con el kit comercial que contiene Acs anti coagulasa)
- observar la coagulacion del plasma en forma de grumos o precipitacin al ponerse en
contacto el microorganismo con el reactivo (si se utiliza el plasma en la prueba); la
coagulasa es un enzima producido por microorganismos capaz de coagular en
plasma; aplicacin => diferenciar Staphylococcus aureus (coco Gram+, catalasa+,
beta hemoltico + y coagulasa+) de otro Staphylococcus; esta prueba solo se hace si el
germen es coco Gram+, catalasa+, beta hemoltico +; tcnica => (usando el kit
comercial /prueba de ltex) seguir la instruccin de la casa comercial que hacen el
reactivo; resultados => coagulasa+ se observa en forma de grumos (si se utiliza un
plasma como reactivo => se observara la formacin de un hilo de fibrina en la
reaccin) y en coagulasa- no se forma grumos.

Prueba de Triptfano Desaminasa (TDA) - se basa en la capacidad que tienen

algunas bacterias de desaminar el triptfano por la accin de TDA, produciendo =>
acido indol pirvico que reacciona con citrato frrico amoniacal y el cloruro frrico que
lleva el medio produciendo un color marrn (determina la presencia de la enzima
TDA); tcnica => en un medio liquido de TDA (color mbar); se puede utilizar el
reactivo urea-indol; aadimos 1 sola colonia de un cultivo puro y 1 gota de reactivo
TDA del API, incubar a 37C entre 18-24 horas, y leer; resultado => el color
marrn/caf indica la presencia de TDA+ y sera negativo si no hay cambio de color; los
gneros que tienen TDA+ => Proteus, Providencia y Morganella.

Tema 16 - Pruebas bioqumicas simultaneas

(macro-tcnicas, micro-tcnicas, sistemas
rpidos, otros mtodos)
Macrotcnicas - sistemas multiprueba que permiten realizar varias pruebas
bioquimicas simultneamente, facilitando notablemente la identificacin del
microorganismos:
Kliger
Iron
Agar
(KIA)
Triple
Sugar
Iron
(TSI)
- Agar Sulfuro Indol Motilidad (ASIM) Motility Indol Agar (MIA)
IMVIC
Lisina
Iron
Agar
(LIA)
Motilidad
Indol
Ornitina
(MIO)
KIA (Kligler Iron Agar) - se pueden realizar 3 pruebas a la vez:
- utilizacin de azucares (fermentacion glucosa 0,1% y lactosa 1%)
produccin
de
gas
(CO2)
produccin
de
acido
sulfhdrico
(SH2)
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por
medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio
cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que
reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de
hierro
de
color
negro.
Fundamento => cuando el microorganismo fermenta los azucares, se acidifica el
medio porque se forman cidos orgnicos; si el medio no tienen azucares como fuente
de hidratos de carbono, utilizara protenas que alcalinizan el medio por la formacin de
aminas; las protenas en condiciones de aerobiosis (en el pico) se metabolizan mejor
por la va de descarboxilacin oxidativa de los aminocidos que en anaerobiosis (en el
fondo); la glucosa se metaboliza mejor que lactosa (la molcula es mas
pequea/sencilla); para metabolizar la lactosa, el microorganismo debe tener B-D
galactosidasa
y
lactosa
permeasa.
Material => tubos de cultivo, asa y aguja de siembra, estufa de cultivo
Reactivo => tubo con agar KIA en pico de flauta (color rojo anaranjado),
microorganismo
Tcnica => es importante tener un tubo de control; se recoge una colonia puro y
joven con un aguja; inocular por picadura y estra un tubo de cultivo con medio KIA en
pico de flauta; incubar 18-24 horas a 37C; la reaccin se ha de observar justo despus
de terminar el periodo de incubacin (suficiente tiempo para la fermentacin del
azucar); si se lee despus de 24 horas, se puede dar un falso alcalino, porque el germen
habra utilizado la peptona y el medio se alcaliniza; el pH esta ajustado a 7,4 (neutro) e
indicador rojo fenol a 6,8 (cualquier cambio de pH va a virar el medio);
Resultados => se observaran los 3 parmetros: cambios de pH/color, produccin de
gas CO2 (grietas en el medio/ se desplaza) y produccin de acido sulfhdrico SH2
(precipitado negro); siempre se compara con un tubo de control no inoculado.

Cambios de pH - [a] resultado final de la fermentacin solo de la

glucosa => K/A zona superficial roja (reaccin alcalina de las aminas) y zona profunda
amarillo (reaccion cida);despus de la fermentacin de la glucosa, el medio de cultivo
inicialmente es amarillo entero, pero posteriormente la parte del pico se
alcalina/rojo (haba poca cantidad de glucosa) por la descarboxilacin oxidativa de los
aminocidos (que forman la peptona) que se produce mejor en aerobiosis; la
fermentacin de glucosa en el pico es inicialmente mediante la va EMP, utiliza tanto
para los aerobiosis y anaerobiosis, dando un intermedio clave (acido pirvico), que a su
vez el acido pirvico es degradado mediante el ciclo de Krebs por los aerobiosis o
anaerobiosis facultativos dando CO2 + H2O y ATP; en cambio, en el fondo, el acido
pirvico es degradado hacia acido lctico y acido mixtos que mantiene el pH acido de
manera
estable.;
son
caractersticas
de Morganella,
Providencia
y
Shigella; tambin P.mirabilis, S.typhimurium, S.enteritidis, S.flexneri.
[b] en la fermentacin de glucosa y lactosa => A/A zona superficial y profunda son
amarillas
(caractersticas
de E.coli
y
K.pneumoniae);
[c] no metabolizan ni lactosa ni glucosa (pero si la peptona) => K/K todo el tubo es de
color rojo (si se trata de anaerobiosis) o si se trata de aerobiosis, la zona profunda es de
color naranja (se alcalina mas la zona con mas O2 => Pseudomonas, P.aeruginosa)
[d] si no se consume ni glucosa, ni lactosa ni peptona => no hay cambio de color en el
tubo
(grmenes
inertes).
Produccin de gas CO2 - aparecen burbujas, agrietamiento o desplazamiento del
medio del fondo del tubo, debido a la formacin de hidrgeno y de anhdrido carbnico
(CO2)
Produccin de acido sulfhdrico SH2 - se manifiesta por el color negro de la capa
profunda o un anillo negro cerca de la parte superior de la capa profunda o un
precipitado negro en la capa profunda (que puede enmascarar la acidificacin del
medio => fermentacin de la glucosa activa la desulfurasas); SH2+ => Proteus y
Salmonella.
TSI (Triple Sugar Iron) - identificacin de Yersinia enterocolitica como sacaroltica
(tambin Proteus, Lactobacillus y Clostridium), ya que el medio lleva el 3er hidrato de
carbono (sacarosa al 1%); los fundamentos y la interpretacin de los resultados son los
mismos que en el mtodo anterior, pero es imposible saber si el azucar utilizado es uno
u otro o ambos.

Agar sulfuro-indol-motilidad/ ASIM o motility-indol-agar (MIA) - tal como

indica su nombre, sirve para determinar la motilidad de los microorganismos, la
produccion de indol y la formacion de acido sulfhidrico; la forma de realizarla es la
siguiente => se siembra en picadura y se incuba a 37C durante 18-24 horas; la
motilidad se vera por la zona del inoculo con un zig-zag (en la picadura); la produccion
de indol se vera con un cambio de color a violeta purpura (el medio es de color violeta
clarito); la produccion de SH2 se vera por un cambio a negro.

IMVIC (Indol - Motilidad - rojo de Metilo - Voges-Proskauer - Citrato) - se

emplean en la identificacin de la familia enterobacteriaceas; se hacen de una en una y
conjuntamente;
Prueba de indol => estudia el metabolismo proteico/ la capacidad de degradar el
triptfano (aminocido) y de formar segn la bacteria: indol y productos indlicos
(escatol, acido indol-actico), mediante triptofanasa (enzima intracelular).
Material => tubos de ensayo, asa de siembra, pipeta Pasteur, estufa de cultivo,
mechero.
Reactivo => caldo urea-indol de la casa Biomerieux, reactivo indol de Kovacs,
microorganismo.
Tcnica => Mtodo de Kovacs: en el tubo con 500 lambdas de reactivo urea-indol, se
siembra el microorganismo problema, incubar a 37C durante 4 horas, aadir al
cultivo 2 gotas de reactivo indol de Kovacs (debe ser siempre fresco), agitar
suavemente
el
tubo
y
dejar
unos
segundos
en
reposo.
Resultado => en indol+, aparece un anillo rojo en la superficie del medio (E.coli);
en indol-, no hay cambio de color (Klebsiella pneumoniae)

Prueba de rojo de Metilo => muchas enterobacteriaceas con importancia clnica

(E.coli, Proteus mirabilis, Yersinia, Salmonella typhimurium, Citrobacter
freundii, Sighella, Vibrio) son anaerobios facultativos, que para tener energa para sus
reacciones metablicas, utilizan la fermentacin acido-mixta de los hidratos de
carbono producindose => acido succnico, acido actico, alcohol etlico (cidos
mixtos); en RM positivo, aparecen un color rojo fuerte en la superficie y en RM
negativo,
no
hay
cambio
en
la
superficie
del
medio.
Material =>
igual
que
anterior
Reactivo => Medio de Clark y Lubs en tubo (liquido amarillo), solucin de rojo de
metilo
y
microorganismo
Tcnica => (a) en el tubo del medio Clark y Lubs se siembra el microorganismo
problema (b) actualmente se utiliza la modificacin de Barry que es poner un inoculo
abundante en 0,5 ml de reactivo de Clark y Lubs y dejar incubar entre 18-24 horas (c) a
este cultivo se le aaden unas 5 gotas de indicador rojo de metilo que es rojo a pH 4,5 y
amarillo a pH 6,3; el medio cambiara de color cuando el pH sea inferior a 4,5.
Resultados => RM+ superficie del medio rojo fuerte y RM- => color amarillo en la
superficie del medio

Prueba de Voges Proskauer (2 microbilogos) - lo podemos hacer en el API =>

la fermentacin butanodilica/ butilengliclica/ acetonica (acetil metil carbinol) que
es una va alternativa de metabolismo de acido pirvico, se produce => un metabolito
neutro (producto intermediario), en presencia de aire y hidrxido potsico 40%/KOH
(por oxidacin) se forma => diacetilo y aadiendo alfa naftol, se forma un complejo
rojo;
por
reduccin,
la
acetona
forma
=>
2,3
butanodiol;
Material =>
multiprueba
API
y
resto
igual
Reactivo => Medio de Clark y Lubs (liquido amarillo), solucin de alfa naftol
(VP2),solucin de hidrxido potsico al 40% o hidroxilo sdico al 40% (KOH),

microorganismo
problema.
Tcnica => en un tubo de ensayo que contenga un medio de Clark y Lubs se siembra
el microorganismo problema, se incuba 24 horas a 37C, se aade 0,2 ml (200
lambdas) solucin KOH 40%, luego 0,6 ml de la solucin alfa naftol, agitar e inclinar
casi horizontalmente el tubo para que se favorezca la oxidacin de la acetona, reposar
el
tubo
10
minutos e
interpretar
los
resultados.
Resultados =>
en VP
positiva
(+),
p.ej. Klebsiella
pneumoniae
y
Enterobacter aerogenes, antes de 1 hora aparece coloracin rojo rosada en la superficie
del medio; VP negativa (-) p.ej.E.coli y Proteus, la superficie del medio queda de color
amarillento o cobrizo (la reaccin de los reactivos al mezclarse); la mayora
de enterobacteriaceas en VP dan reacciones opuestas a la reaccin de RM (VP+ =>
RM- o VP- => RM+); las bacterias VP+ producen menor cantidad de cidos mixtos que
sern insuficientes para bajar pH del medio con rojo metilo, por ello, cuando una
bacteria es RM- => VP+.

Prueba del Citrato => se investiga la capacidad del microorganismo de utilizar el

citrato como nica fuente de carbono y sales de amonio inorgnicas como fuente de
nitrgeno, por el crecimiento de colonias y el viraje de color del indicador incorporado
en el medio causado por la alcalinizacin; los microorganismos que utilizan el citrato,
tambin utilizan las sales de amonio; citrato sdico es una sal de acido ctrico que es
uno de los metabolitos del ciclo de Krebs y algunas bacterias pueden obtener energa
por una va diferente a la de la fermentacion de los hidratos de carbono, utilizando al
citrato como nica fuente de carbono;la alcalinizacin del medio es producido por la
formacin de amoniaco a partir de las sales de amonio que haba y la formacin de
carbonatos y bicarbonatos se debe a la degradacin del citrato.

Material =>
igual
que
anterior
Reactivos => medio solido de Citrato de Simmons en tubo con azul de bromotimol
(agar
inclinado)
y
microorganismo
de
problema
Tcnica => inocular un tubo de Citrato de Simmons con microorganismo mediante
escobilln, solo la lengeta y guardar otro tubo que sirve de control negativo; incubar
24-48 horas a 37C dejando los tubos destapados para que se desprenda el CO2, leer
los
resultados
a
las
18-24
horas
de
incubacin.
Resultados => en Citrato (+) p.ej. Enterobacter aerogenes, aparece color azul
intenso en la superficie del medio y crecimiento de colonias en la lengeta; en Citrato
(-) p.ej. E.coli, no aparece cambio de color (verde) ni crecimiento.

Micro-tcnicas
1. Sistema
en
Tiras
(API
Biomerieux)
El material y reactivos necesarios para la realizacin de estas pruebas se encuentran
comercializados en kits; fundamento => los medios deshidratados en micro-tubos se
re-hidratan mediante una suspensin de 5 ml de agua estril con 1 colonia bacteriana y
se incuban; el proceso metabolismo del microorganismo, genera cambios del color en
el medio de cultivo o al aadir reactivos y esos cambios se interpretan mediante tablas
de lectura o ordenadores (se deben seguir rigurosamente las instrucciones del
fabricante); principalmente se utiliza para la deteccin de Enterobacteriaceas,
bacterias aerobios no-fermentativas, anaerobios, levaduras, estafilococos; despus de
utilizar todo debe ser incinerado o descontaminado en autoclave o sumergido en un
germicida.

2. Sistemas
en
Tubos
(entero-Tube
BBL)
Se
utiliza
para
identificacin
de
Enterobacteriaceas
y
otras
aplicaciones; fundamento => un tubo en forma de lpiz con numerosos
compartimentos (normalmente son 8 con diferentes medios, donde pueden leer hasta
11 caractersticas); este tubo se inocula (con 1 colonia del medio y alambre de la
inoculacin atraviesa todas las cmaras) y se incuba, produce cambios de color en cada
compartimento; mediante un cdigo numrico o colorimtrico, se puede identificar al
microorganismo.

3. Sistema
rpidos
metodos
automatizados
Cuando las muestras son procesadas a traves de metodos automatizados se logran
excelentes resultados en tiempo muy cortos (se deben seguir las normas dadas por los
fabricantes);
- Para deteccin primaria del crecimiento (espectrofotometra infrarroja) => detecta
los
niveles
de
anhdrido
carbnico
(CO2),
p.ej. BACTEC
- Para identificacin (fotometra) => VITECK (crecimiento, identificacin y
antibiograma)

Tema 17 - Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos

Antibiograma - estudio de la sensibilidad del microorganismo patolgico a los
antimicrobianos; se debe hacer antes de establecer el tto de una infeccin microbiana;
diferentes metodos de antibiograma => (1) por difusin que daran resultados
cualitativos de resistencia, sensibilidad o intermedios a los diferentes ATB (2) por
dilucin nos dar resultados cuantitativos en base a 2 conceptos (CMI/ Concentracin
Mnima Inhibitoria y CMB/ CM Bactericida) (3) por deteccin enzimtica, consiste en
detectar la enzima del germen que confiere resistencia a los ATB p.ej. deteccin
de betalactamasa,
adenilasa,
acetilasa,
etc.
Clasificacin
de
las
sustancias
anti-microbianas:
(a) un microorganismo es sensible => cuando ATB alcanza niveles plasmticos => a
CMI en el lugar de la infeccin; CMI => la mnima cantidad de ATB capaz de inhibir el
crecimiento de un germen; CMB => la mnima cantidad de ATB que matara al
germen; normalmente CMI es suficiente para combatir una infeccin y los mecanismos
inmunitarios se encargan de eliminar el microorganismo, siendo por tanto la CMI es el
termino
mas
utilizado.

(b) un microorganismo es resistente => cuando la concentracin mxima de ATB que

se puede localizar en el lugar de la infeccin no es suficiente para eliminar el germen,
es decir, la concentracin de ATB necesario para destruir el germen no se puede elevar
mas
por
efectos
txicos secundarios.
(c) microorganismo de sensibilidad intermedia => no esta afectado por dosis
normales de ATB dadas a intervalos normales, pero con una dosis alta en el lugar de la
infeccin sin llegar a dosis que produzcan efectos txicos, puede eliminar el germen.

Casos clnicos => Pseudomonas que da problemas respiratoria/ urinaria y es

resistente a casi todos los ATB, se dar una dosis toxico o una combinacin de ATB por
va
endovenosa.
Normas bsicas => no efectuar un antibiograma directamente del producto
patolgico, ni tampoco utilizar mezclas de grmenes (se debe realizar un aislamiento
por agotamiento en placa), excepto para muestras de orina ambulatoria (normalmente
es una infeccin mono-microbiana); para elegir un ATB se deber ensayar aquellos que
son tiles clnicamente y se encuentran disponibles en el mercado farmacutico.
Factores a tener en cuenta => (1) caractersticas tintoriales del germen
(Gram+o-) (2)lugar de la infeccin (especialmente las vas urinarias y meningitis); es
importante porque es necesario que la CMI sea alcanzable en los lquidos corporales
para
que
sea
efectivo (3)bacteria
investigada.
La seleccin de ATB representativo de cada grupo para realizar las
pruebas
de
sensibilidad
Normalmente se selecciona un ATB representativo de cada grupo para realizar las
pruebas de sensibilidad; habitualmente se acepta que no es necesario hacer pruebas de
sensibilidad para un ATB cuando no se han descrito resistencias en esas especies,
p.ej. Streptococcus pyogenes.

1. Betalactmicos => todo el grupo tiene en comn que presenta un anilla

betalactmico y el mecanismo de accin consiste en inhibir la formacin de
peptidoglicano
de
la
pared
celular;
son bactericidas.
a. Penicilinas - tiene espectro desigual => aveces es mas efectivo a uno pero no a otro.
* Penicilina
G
sodica la
forma
oral
es
P
V
* Amoxicilina - infeccin del tracto respiratorio inferior: bronquitis aguda y crnica,
neumonas
bacterianas
y
bronconeumona, producidas
por
estreptococo, estafilococo sensible,neumococo y H.influenzae. Gastrointestinal: fiebre
tifoidea o paratifoidea. Genitourinaria: cistitis, uretritis, pielonefritis, bacteriuria,
gonorrea, aborto sptico, sepsis puerperal. De piel y tejido blando (incluida infeccin
de
herida
quirrgica),
por estreptococo, estafilococo sensible
y E.
coli.
* Amoxicilina + acido clavulanico (es un inhibidor de las betalactmasas producida
por
algunas
bacterias)
b. Cefalosporinas - actualmente se ha desarrollado la 4 generacin (semisintticos; bacteriostticas frente
a cocos
Gram+
y
bacilos
Gram-)
* Cefotaxima (indicado para gonorrea; profilaxis quirrgica; epiglotitis y meningitis
porHaemophilus)
* Cefuroxima (efectividad contra Neisseria gonorrheae y otras bacterias productoras
de penicilinasa; es activa contra Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus
epidermidis y estreptococo
beta-hemoltico;
son
susceptibles Escherichia
coli,
Klebsiella
pneumoniae,
Proteus
mirabilis)
2.
Derivados
de
betalactmicos:
* Aztreonam - se utiliza comnmente frente a las infecciones causadas
por Pseudomonas
aeruginosa,
pero
su
espectro
abarca
a
las enterobacterias (incluida Escherichia coli), como p.ej. Klebsiella, Haemophilus,
Citrobacter
y
Proteus.
3. Aminoglicosidos => en general su mecanismo de accin es la inhibicin de la
sntesis de protena en diferentes fases segn el ATB; en general derivan de los
hongos y son potentesbactericidas; son de amplio espectro y provocan toxicidad
renal y audio vestbular en alta dosis o a las personas susceptible.

* Estreptomicina (tratamiento de infecciones causadas por grmenes sensibles,

como:Mycobacterium
tuberculosis,
Salmonellas, enterococos,
estreptococos,
neumococos y algunos Gram- como Haemophilus influenzae; es eficaz en infecciones
del
tracto
respiratorio)
* Gentamicina (Acta sobre bacterias Gram- aerobias, incluyendo enterobactericeas,Pseudomonas y Haemophilus. Acta tambin sobre estafilococos (S.aureus y
S.epidermidis)
* Tobramicina (Infecciones del tracto respiratorio inferior como neumona,
bronconeumona y bronquitis aguda causadas por P.aeruginosa, Klebsiella sp.,
Enterobacter
sp.,
Serratia
sp.,
E.coli
y
S.aureus)
* Neomicina (es activo in vitro contra Escherichia coli, Klebsiella y contra flora
anaerbica
intestinal)
4.
Lincosamidas => inhibe
la
sntesis
proteica
* Clindamicina (es un buen ATB frente anaerobios) - Su actividad antibacteriana
es similar a la de eritromicina (macrolidos) en contra de estafilococos y estreptococos;
adems es efectiva en contra de anaerobios, en especial Bacteroides fragilis.
5. ATB polipeptdicos y glucopeptdicos => su mecanismo de accin es inhibir la
formacin
de
peptido
glicano
de
la
pared
celular (bactericidas)
a.
Activos
frente
a
Gram+
* Bacitracina - es utilizado para la identificacin del estreptococo del grupo A a cual
es sensible; es bactericida; se utiliza tpicamente para infecciones cutneas (por su
efecto de nefrotoxicidad) acta sobre cocos y bacilos Gram+ (Neisseria y Treponema
pallidum)
* Vancomicina - por su alta toxicidad renal y ptica, se reservan
para infecciones de Gram+ resistentes; es bactericida; tiene accin ante cocos Gram+ y
bacilos
Gram+
b. Activos frente a Gram- => ambas (polimixinas) se usan tpicamente sobre
Gram-, tambin se usa como ATB de identificacin; tienen accin ante enterobacterias (exceptoProteus, Providencia y Serratia), Pseudomonas aeruginosa, Vibrio,
Pasteurella, Haemophillus y Bordetella; son ATB de segunda eleccin (para bacilos
Gramresistentes
a
otros
ATB)
* Polimixina
B
* Polimixina
E
(Colistina)
c.
Activos
frente
a
Mycobacterium
tuberculosis
6.
Otros
* Fosfomicina - es un ATB de origen espaol de un amplio espectro que acta sobre
la
pared
celular (se
usa
en infeccin
urinaria)
* Acido fucsidico - acta sobre la sntesis proteica y destaca su accin
sobre Staphylococcus
aureus.
7. Tetraciclinas - son bacteriostticas y su mecanismo de accin es inhibir la sntesis
de las protenas; no se deben administrar a menores de 8 aos por tener efecto
secundarios sobre la denticin y los huesos; tambin pueden producir toxicidad
sobre el tracto gastrointestinal y el higado; son de amplio espectro; origen biolgico o
semi-sinttico; activas frente a cocos y bacilos Gram+ y Gram- aerobios;

son frmacos de eleccin en

brucelosis, clera,
granuloma
inguinal (ETS).
* Tetraciclina
* Doxiciclina - es el tratamiento de fiebre tifus, fiebre Q, erupciones
pustulosas por Ricketsiasy fiebre de las montaas rocosas por Ricketsias, infecciones
del tracto respiratorio causadas por Mycoplasma pneumoniae; el tratamiento de
infecciones causadas por Gram-: chancroidecausado por Haemophilus ducreyi, plaga
debida a Yersinia pestis (anteriormente Pasteurella pestis), tularemia debida a Francisella tularensis (anteriormente Pasteurella tularensis), clera causada por Vibrio
cholerae (anteriormente Vibrio comma), infecciones por Campylobacter en fetos
causadas por Campylobacter fetus (anteriormente Vibrio fetus), brucelosis causada
por
especies
de Brucella (junto
con
estreptomicina), bartonelosiscausada
por Bartonella bacilliformis, granuloma inguinal causado por Calymmatobacterium
granulomatis.
8. Cloranfenicol - es de amplio espectro; inhibe la sntesis proteica y es toxica a
nivel medular; es de origen sinttico, bacteriosttico, acta frente a Gram+ y (especialmenteHaemophilus
influenzae y Salmonella)
9. Macrolidos y similares - inhiben la sntesis proteica; amplio espectro; se
dan cuando es alrgica a penicilina; son bacteriostticos y bactericidas en alta dosis.
a. Eritromicina (un buen ATB frente neumnia atpica, legionelosis, difteria, tos
ferina)
b. Azitromicina - para tratar ciertas infecciones causadas por las bacterias, como la
bronquitis; neumona; enfermedades de transmisin sexual (ETS); y las infecciones en
los odos, pulmones, piel y garganta; no tienen ningn efecto sobre los resfriados, la
gripe
y
otras
infecciones
virales.
c. Claritomicina - interfiere la sntesis de protenas en las bacterias sensibles;
faringitis, amigdalitis, sinusitis, bronquitis aguda, reagudizacin de bronquitis crnica,
neumona bacteriana (adquirida en la comunidad), infeccin de piel y tejidos blandos
leve-moderada, foliculitis, celulitis, erisipela, infeccin localizada o diseminada
por Mycobacterium avium oM.intracellulare, infeccin localizada por M.chelonae, M.
fortuitum y M.kansaii. Prevencin de infeccin diseminada por M.avium complex en
pacientes
con
VIH
de
alto
riesgo
10.
Quimioterpicos
de
sntesis
a. Sulfamidas (es bacteriosttico, de origen sintetico; inhibe la sntesis de acido flico;
activo
frente
Gram+
y
-,
Clamidias,
Nocardia)
b. Trimetropin+sulfametoxazol (cotrimoxazol) - inhibe la sntesis de acido flico;
elimina las bacterias que provocan infecciones, incluyendo las infecciones que afectan
las
vas
urinarias,
los
pulmones
(neumona),
odos
e
intestinos
c. Quinolonas (6) - inhiben la replicacion del ADN bacteriano son buenos ATB de
amplio
espectro,
pero
se
ha
abusado
mucho.
d. Norfloxacina - infecciones de las vas urinarias y la prstata; inhibe
la replicacin del ADN bacteriano. La norfloxacina pertenece a una clase de
antibiticos llamados fluoroquinolonas; tomar norfloxacina aumenta el riesgo de que
desarrolle
tendinitis.
e. Ciprofloxacina - inhibe la replicacin del ADN bacteriano; para tratar o prevenir
determinadas infecciones bacterianas, tambin se usa para tratar o prevenir el
ntrax (una infeccin grave que se puede propagar en forma intencional como parte de

un ataque bioterrorista) en quienes han estado expuestos a los grmenes del ntrax
suspendidos en el aire; tomar ciprofloxacina aumenta el riesgo de que desarrolle
tendinitis.
11.
Quimioterapia
antituberculosa actualmente
se
emplea:
* Rifampicina - ATB sistmico, antituberculoso, bactericida. Inhibe la sntesis de ARN
bacteriano.
Tuberculosis
en
todas
sus
formas
(asociado
a
otros
tuberculostticos). Brucelosis.Erradicacin
de
meningococos
en
portadores
asintomticos, no enfermos. Alrgicos o con contraindicaciones a otros antibiticos o
quimioterpicos. Infecciones causadas porestafilococos (S.aureus, S.epidermidis,
cepas
polirresistentes)
y
por enterococos (S.faecalis,
S.faecium).
* Isoniacida - para tratar la tuberculosis, y para prevenirla en personas que han tenido
contacto con las bacterias de la tuberculosis. Elimina slo las bacterias activas (en
crecimiento). Debido a que las bacterias pueden estar en un perodo de incubacin (sin
crecimiento) durante largos perodos, la terapia con isoniazida (y otros medicamentos
para evitar la tuberculosis) debe hacerse durante mucho tiempo (por lo general entre 6
y
12
meses).
* Etambutol - el tratamiento de tuberculosis pulmonar; debe ser usado en conjuncin
con
otros
frmacos
antituberculosos.
12.
*
*
*
*

Quimioterapia
Amfotericina

antimictica:
Nistatina
Miconazol
B.
Fluconazol

13.
Quimioterapia
anti-viral
* Aciclovir - antiviral activo frente al virus herpes humano, inhibe la replicacin de
ADN
viral,
interfiriendo
con
el
ADN
polimerasa
viral.
* Ribavirina - La ribavirina se utiliza con un medicamento interfern, para tratar la
hepatitis C en personas que no han sido tratadas con interfern antes. La ribavirina
pertenece a una clase de medicamentos antivirales llamados anlogos de nuclesidos.
Esta acta impidiendo que el virus que provoca la hepatitis C se propague dentro del
cuerpo.

Pruebas de sensibilidad anti-microbiana - tcnicas que investigan la actividad

anti-microbiana de distintos quimioterpicos frente al microorganismo estudiado; sus
principales
aplicaciones:
- contribuir a la identificacin de los microorganismos (p.ej. sensibilidad del
neumococo/S.pneumonia a la optiquina; del S.pyogenes a la Bacitracina)

- constituye una base fundamental para la instauracin de una terapia adecuada.

Son tcnicas estandarizadas y se ha demostrado que existe un paralelismo entre los
resultados de sensibilidad obtenidos in vitro con los efectos teraputicos in vivo; la
prueba mas utilizada es la difusin en medio solido a excepcin de los grandes
laboratorios que utilizan sistemas multiprueba o mtodos automatizados (Vitec,
Pasco...)
Antibiticos - un grupo de compuestos qumicos teraputicamente muy tiles y
que antaose
caracterizaban
por
ser subproductos
metablicos
de
un
microorganismo siendo casi siempre letal para otros grmenes (p.ej. a los hongos);
actualmente la mayora son sintetizados en el laboratorio; uno de los primeros
es descubierto en 1927, cuando Alexander Flemming descubri la penicilina
extrayendo-lo de un hongo (Penicillium notatum) siendo en 1929 cuando efectu los
primero ensayos de sensibilidad anti-microbiana (se contaminaron las placas sin
querer por un hongo); en 1939 Rose y Miller intentaron estandarizar las mltiples
variantes de los anlisis de sensibilidad microbiana por difusin en placa y
posteriormente en los aos 50, Kirby-Bauer y Anderson estandarizaron la tcnica que
se utiliza actualmente por difusin en medio solido o en placa.
Los
principales
pruebas
para
hacer
un
antibiograma:
a.
Manuales
1.
Prueba
de
dilucin
en
medio
solido
y
liquido
2.
Prueba
de
elucin
en
disco
3.
Prueba
de
deteccin
enzimtica
4.
Prueba
de
difusin
en
medio
solido
(de
Kirby-Bauer)
b.
Automatizadas
Trminos
utilizados
en
las
pruebas
anti-microbianas:
- Microorganismo sensible o sensibilidad => es inhibido por un ATB a dosis habituales
- Microorganismo de sensibilidad intermedia => el germen "in vitro" no es claramente
sensible al ATB, pero si lo seria "in vivo" incrementando la dosis habitual sin llegar a
dosis
toxicas
- Microorganismo resistente o resistencia => no es sensible al ATB a dosis habituales y
es
necesario
administrar
dosis
toxicas
- CMI (cantidad mnima inhibitoria) => es la menor concentracin de un ATB capaz de
inhibir
el
crecimiento
bacteriano
de
una
cepa
dada
- CMB (cantidad mnima bactericida) => es la menor concentracin de un ATB con la
que
no
quedan
bacterias
vivas
de
una
cepa
dada
Tcnicas manuales de realizacin de las pruebas de sensibilidad antimicrobiana
a. Pruebas de dilucin (es una tcnica de centros de investigacin /lenta
/engorrosas) => se basan en el estudio al unisono de diferentes concentraciones de
ATB, lo que les da un carcter cuantitativo en base a los conceptos CMB y CMI; 2 tipos
=> en medio liquido y solido; se utilizan 10 tubos con grmenes en caldo nutritivo o
agar y a cada tubo se le aade una cantidad prefijada de ATB diluido seriadamente,
excepto en el tubo de control; se incuban 18-24 horas a 37C y se examina la turbidez
que indica crecimiento de grmenes; en el tubodonde no hay turbidez se ha inhibido el

crecimiento de los grmenes; con estos datos estudiamos la CMI y la CMB de los
antibiticos.
b. Pruebas de elucin en disco (disolver) => se realiza introduciendo discos de un
ATB en tubos con caldo nutritivo; el ATB se disuelve en el caldo alcanzando una
concentracin final conocida, posteriormente se inocula un volumen de una
suspensin microbiana y se sigue la misma metodologa descrita antes obtenindose
resultados cuantitativos o cualitativos en base a sensibilidad, sensibilidad intermedia o
resistencia
(no
se
utilizan
habitualmente).
c. Pruebas enzimticas de deteccin => fundamentalmente se detectan las betalactamasas; un reducido numero de bacterias son resistentes a las penicilinas y
cefalosporinas(ATB B-lactmicos) debido a que producen un enzima (b-lactamasa)
capaz de inactivar estos ATB, p.ej. los gonococos, pneumococo y algunos estreptococos;
consiste en observar el crecimiento de los grmenes en presencia de dichos ATB; se
toma la colonia sospechosa y mezclar-la con un sustrato que si cambia de color nos
indica que la colonia es B-lactamasa (+), por lo tanto es resistente a los ATB Blactamico;
se
denomina Prueba
de
NITROCEFIN.
d. Prueba de difusin en medio solido (antibiograma clsico) =>
estandarizadodesde los aos 50 (se hace igual en todo el mundo) por Kirby-Bauer y
Anderson en todos sus pasos y es mas utilizado actualmente en forma
manual; fundamento => depositar discos impregnados de ATB sobre cultivos de
microorganismos en placa; la difusin del ATB a traves del medio produce un halo de
inhibicin del crecimiento cuyo dimetro sera proporcional a la potencia del ATB
dando resultados cualitativos de resistencia, sensibilidad o sensibilidad intermedia a
los ATB; material => placas de Petri (9cm), pinzas metlicas estriles o dispensador
automtico, pie de rey o regla milimetrada, medio Mueller-Hinton, discos de ATB,
suspensin microbiana al 0,5 escala Mc Farland (10 elevado 8 u.f.c./ml; escala Mc
Farland => el 0,5 se prepara aadiendo 0,5 ml de Cl2Ba 0,04 M a 99,5 ml de acido
sulfrico
0,36M);
una
placa
llena
=>
mas
de
10
elevado
6.
Tcnica => el medio Mueller-Hinton se vierte en placas con un espesor de 4 mm; la
siembra utilizada preferentemente (a) la de Kirby-Bauer: se introduce un escobilln en
el inoculo preparado al 0,5 Mc Farland (no tenemos) y se siembra en 3 direcciones y se
deja aproximadamente 4 minutos la placa semi-abierta e invertida antes de colocar los
discos; (b)la de Barry: se hace una inoculacin previa al vertido de las placas, se
aaden 0,1 ml del inoculo a 25 ml del medio Mueller-Hinton fundido y se vierte en
placa (no se usa mas)

Eleccin de ATB => se debe seleccionar un ATB representativo de cada grupo

excepto en los casos donde existan diferencias significativas en los espectros de
actividad o resistencia; los aspectos importantes que prevalecen a la hora de
seleccionar un ATB => las caractersticas tintoriales del germen (Gram+o-), el lugar de
la
infeccin
(orina,
meningitis)
y
la
bacteria
investigada.
Concentracin de los discos => tiene que estar perfectamente estandarizada
sigundose las normas de la Federacin de Drogas y Alimentos/ FDA => la actividad
del disco debe estar entre 65% y 150% y de la OMS => entre 75% y 135%; siempre se
debe utilizar un control para controlar la actividad de los discos; en general, se escogen
discos con una concentracin que producen un halo de inhibicin entre 20 y 30
mm para organismos tipificados como sensibles y de menos de 10 mm para los
resistentes.
Implantacin de los discos (papel de filtro grueso de un dimetro 6mm que van
impregnados con una concentracin determinada de ATB); Manual => se saca el
disco de ATB con unas pinzas estriles y se deposita en la placa, la distancia mnima
entre los discos es de 24 mm para evitar la superposicin de los halos, deben estar
situados a 15 mm del borde como mnimo (se colocan 8 discos) una vez depositado el
disco se presiona ligeramente con la punta de pinzas; Automtica => se utilizan
dispensadores automticos que son unos dispositivos de plstico del tamao de una
placa de Petri con unos orificios gua que permiten la colocacin simultanea de todos
los discos en el lugar adecuado, y con una pinza se presionan ligeramente los discos
para que al girar o invertir la placa no se caigan los discos.
Incubacin
=>
18-24
horas
a
35-37C
(mximo
48
horas)
Lectura e interpretacin del antibiograma => los resultados se expresan
segn el halo de inhibicin que aparece alrededor de cada disco; el halo se mide con
una regla calibrada o pie de rey midiendo los dimetros, y segn cual sea
clasificaremos al germen como sensible (la dosis habituales es eficaz), intermedio (se
deben incrementar las dosis habituales sin llegar a dosis toxicas) o resistente (ATB es
totalmente
ineficaz);
Observacin
al
mtodo:
1.
preservar
la
estandarizacin
en
todos
sus
pasos
2. puesto que la difusin del ATB es casi instantnea no debe moverse ningn disco
una vez que se ha puesto en contacto con la superficie del agar
3.
los
discos
se
tienen
que
conservar
en
la
nevera
4. procurar que la lectura se haga a las 18-24 horas, evitndose el exceso de incubacin
5. Aunque el medio elegido es el Mueller-Hinton, se pueden emplear medios
enriquecidos como AS (estreptococo), agar chocolate (Haemophylus) para grmenes
exigentes
6.
de
vez
en
cuando
hay
que
colocar
controles
de
calidad
7.
cuando
el
germen
sea
anaerobio
el
mtodo
es
diferente
Mtodo automatizados de identificacin y susceptibilidad - actualmente
existen diferentes metodos automatizados para realizar el antibiograma; los mas
utilizados se basan fundamentalmente en la medida bien fotomtrica o bien
turbidimtrica del efecto de un ATB sobre el crecimiento de una bacteria en medio
liquido comparndolo con el de la misma bacteria en un medio sin ATB; otros metodos
se basan en tcnicas de impedancia elctrica microcalorimetra bioluminiscencia,

radiometra

...

Los metodos fotomtrico y turbidimtrico p.ej. sistema Vitec, se resume:

- se utilizan unas tarjetas desechables del tamao de un naipe donde se inyecta la
muestra ya diluida mediante un modulo inyector; la tarjeta presenta unas
perforaciones donde lleva incorporadas diferentes medios selectivos liofilizados;
- la tarjeta se sella y se coloca en un modulo incubador y de lectura, leyndose de
manera automtica los resultados cada hora; los datos los almacena un ordenador
que los compara con valores umbrales ya almacenados; el ordenador puede
dar resultados
a
las
4
horas (lo
normal
entre
4
-13
horas)
El sistema Microscan utiliza un sistema semejante al de dilucin en caldo pero en
miniatura utilizando paneles con caldo de Mueller-Hinton deshidratado (como
API); tras la inoculacin y re-hidratacin con una suspensin estandarizada del
microorganismo y suincubacin a 35C por un mnimo de 16 horas, la CIM o una
sensibilidad cualitativa (sensible, intermedio o resistente) para el organismo en prueba
se determina observando la menor concentracin ATB, que muestre inhibicin de
crecimiento; esta deteccin puede hacerse manualmente mediante un visualizador de
micro-dilucin o mediante un lector conectado a un ordenador; viene en tripletes de
un
ATB
con
diferentes
concentraciones.
Agentes antimicrobianos (ATB) activos frente a Gram- => Cefuroxima,
Cefotaxima, Colistina, Tobramicina, ; frente a Gram+ => Eritromicina, Tetraciclina,
Vancomicina, Meticilina, Clindamicina, Doxicilina; frente a ambos Gram+ y - =>
Ampicilina, Cefalotina, Gentamicina, Cotrimoxazol, Cloranfenicol, Imipenem,
Amoxicilina+acido clavulonico.

Clasificacin de los antibiticos segn su efecto bacteriano

Bactericidas => Penicilinas, Cefalosporinas, Aminoglucsidos, Rifampicina, Quinolo
nas, Monobactmicos, Polimixinas.
Bacteriostticos => Tetraciclinas, Eritromicina, Sulfonamida, Novobiocina, Cloranf
enicol
Clasificacin de los antibiticos segn su mecanismo de accin sobre la
estructura
bacteriana
I.
Inhibicin
de
la
sntesis
de
la
pared
celular
Penicilinas
Cefalosporinas
Vancomicina
Fosfomicina
Tercoplanina
Bacitracina
II.
Lesin
en
la
permeabilidad
de
la
membrana
celular
Poliomixinas
Colistinas
Nistatina
Anfotericn
B
III.
Inhibicin
de
la
sntesis
proteica
Cloranfenicol
Tetraciclina
Aminoglucsidos
Lincomicinas

IV.

Eritromicina
Inhibicin
Quinolonas
Sulfonamidas
Rifampicina
Trimetropn

de

la

sntesis

de

cidos

nucleicos

Nota: (*) Penicilina semisinttica resistente penicilinasa

Estudio de la orina
Funcin del rin:
- La eliminacin de
nuestro
organismo
de
una
importante
cantidad
de residuos metablicos, muchos de ellos intiles, y de otros que incluso
pueden comportarse como txicos.
- La regulacin de la composicin de los fluidos de nuestro organismo facilitando as,
tanto la supervivencia de las clulas como el optimo desarrollo de todos los
procesos metablicos.
- El control hormonal de la presin arterial (adrenalina, noradrenalina)

- El control de los niveles orgnicos del calcio (mineral corticoides aldosterona, 1,25
dihidroxicolecalciferol)
- El control de la eritropoyesis (eritropoyetina)
Nefronas - son unidades funcionales bsicas consiste de 2 partes => el glomerulo
(dentro de la cavidad "capsula de Bowman") y la red tubular.
El glomerulo - rodeado de una cavidad (capsula de Bowman) y dispone de una
extensa red vascular; filtrar/ depurar el plasma 25 ml de sangre por minuto (150 litros
de plasma/ dia); se filtra agua, urea, creatinina, aminocidos, cido rico,
glucosa, protenas de bajo pm.
La red tubular - el filtrado por el glomerulo es recogido en la capsula de Bowman y
se dirige hacia la red tubular donde se lleva a cabo un proceso
de reabsorcin selectiva => reabsorber agua, ciertos elementos tiles para el
organismo y que deben ser recuperadas (glucosa, agua, sodio, cloruro, potasio,
bicarbonato, urea, aminocidos, proteina) y permite la secrecin de otras que, por su
toxicidad, deben ser posteriormente eliminadas mediante la miccin (amonio, urea,
hidrogeniones/H+); se elimina 1 ml de orina por minuto (1500 ml diarios); la red
tubular
esta
formada
por
=> tbulo contorneado
proximal,
asa
de
Henle, tbulo contorneado distal y tbulo colector.
Mecanismo
de
la funcin renal:
- Filtracin glomerular => filtra el plasma desde los capilares que lo envuelven hasta la
capsula
de
Bowman.
- Reabsorcin tubular => el producto de la filtracin glomerular se modifica su
composicion
al
atravesar
la
red
tubular.
- Secrecin tubular => transporte de sustancias, desde la red capilar hacia
los tbulos renales; destaca la secrecin activa de iones H+, que permite
la regulacin del
equilibrio
acido-base
en
el
organismo.
Procedimiento de la recogida de muestra (el personal facultativo determina el
tipo de muestra necesaria para el anlisis) => informar a la persona del objeto
del anlisis; indicar
el
tipo
de
muestra
deseada;
orientar
acerca
de la tcnica de obtencin de la misma; indicar las pautas de almacenaje y
transporte adecuado (si se toma fuera del laboratorio); insistir en la importancia de la
limpieza en general y de la higiene antes de la recogida (evitar
la contaminacin involuntaria); describir el tipo y caractersticas mas adecuadas
delrecipiente a utilizar; tener en cuenta la capacidad del paciente para evacuar la vejiga
de forma voluntaria y la necesidad de utilizar tcnicas invasivas para obtener la orina
en condiciones adecuadas.
Recogida de muestras de orina
- Miccin espontanea => paciente responsable de la misma para obtener muestra
sin contaminacin; prevencin: eliminar la primera porcin de la miccin y asegurar
el lavado minucioso previo de los genitales; indicaciones: anlisis fisico-qumico,
estudio del sedimento, concentracin de creatina y microbiologia (en ocasiones).
- Cateterismo vesical/ sondaje (realizada por personal enfermera) => pacientes que
presentan dificultades de la miccin, mujeres para evitar la contaminacin vaginal.

- Puncin supra-pbica (realizada por personal facultativo)

de infeccin por microorganismos extraos en nios.

=>

diagnostico

Tipos de muestras para un anlisis de orina (sin supervisin

- miccin espontanea):
- Primera orina de la maana => se recomienda porque la concentracin de solutos es
variable a lo largo del da y esta en relacin con la ingesta de liquidos.
- Orina tomada al azar => muestra valida para cultivos microbiologicos
- Orina minutada (fraccionada, de 2 horas, de 24 horas) => gran utilidad para el
paciente diabeticos
Anlisis de orina - procedimiento tcnico encaminado a examinar los componentes
que la integran, su cantidad y la proporcin en que se encuentran; su estudio
proporciona gran informacin acerca de mltiples alteraciones orgnicas y de muy
diversa etiologa (rion,
procesos metablicos)
=>
permite
detectar
alteraciones patolgicas, estados fisiolgicos particulares no patolgicos (embarazo) y
un
buen
funcionamiento
renal.
Objetivos:
- obtener informacin del estado general del rion y las lesiones que pudieran afectarlo
- detectar la existencia de una alteracin a nivel de las vas urinarias
- teniendo en cuenta aquellos productos que se eliminan va urinaria, detectar
alteraciones funcionales de otros rganos
- detectar las alteraciones metablicas de diversa etiologia
- se intenta encontrar sustancias o componentes que normalmente no se encuentran
en la orina
- detectar alguna alteracin en la concentracin (por defecto o por exceso) de
componentes que habitualmente se encuentran en la orina
Tipos de anlisis de orina => anlisis elemental, completo, rutinario, anormales y
sedimento.
Parmetro bioqumico => Densidad - Bilirrubina - Cuerpos cetnicos - Protenas Urobilinogeno - Glucosa - Hemoglobina - Nitritos - pH - Hemates - Leucocitos
(actualmente se utiliza determinacin por qumica seca / tiras reactivas).
Anlisis general
de
una
muestra
de
orina:
- Fsico/macroscpico => cantidad, aspecto/turbidez, color, olor, densidad, pH
- Qumico/anormales => protenas,
glucosa,
cuerpos cetnicos,
sangre/hemoglobina, bilirrubina/ pigmentos biliares, urobilingeno/ urobilina,
nitritos
- Microscpico => estudio de estructuras cristalinas/cristales y de formas amorfas
en suspensin,
estudio citolgico,
estudio bacteriolgico.
- Microbiolgico => urinocultivo, identificacin del germen (pruebas bioqumicas),
ATB
(antibiograma).
- Parasitolgico => tcnicas especificas
de visualizacin macroscpica de parsitos;
estudio microscpico de parsitos en la muestra de orina: parsitos enteros o parte de
ellos,
huevos,
formas
de
resistencia
(quistes).
El

orden cronolgico de

un anlisis general=> caractersticas fsicas macroscpica - sedimentacin (a 1500

rpm durante 10-15 minutos) - pruebas bioqumicas (tiras reactivas); la muestra
sobrante se debe guardar hasta que la analtica haya concluido; hay que revisar los
resultados del sedimento concuerdan con las pruebas qumicas y comprobar
las anomalas detectadas
han
sido
confirmadas.
Examen fsico - macroscpico
Es orientativo => para diagnosticar una patologa, hay que confirmar con
otros anlisis complementarios;
hay
que tener
en
cuenta
situaciones fisiolgicas (menstruacin, grado de hidratacin, etc.) que pueden alterar
las caractersticas de
la
muestra;
1)- Cantidad / diuresis normal 1200-2000 ml/24H; alteracin => oliguria/inferior,
poliuria/superior, anuria/falta de eliminacin (<300 ml/24H)
2)- Aspecto / turbidez; recin emitida: clara y transparente; almacenada: sedimento
blanco/fosfatos y carbonatos, sedimento rojizo (uratos desaparecer al calentar la orina
a 60C);
3)- Color amarillo / mbar (en funcin de la concentracin)
4)- Olor aromtico, ligeramente amoniacal
5)- Densidad 1.010-1.030 (se determina mediante tiras reactivas);
6)- pH normal 5,5-6 (ligeramente cida); pH alcalino => posible contenido
de grmenes con ureasa.
Pruebas bioqumicas cuantitativas
Protenas - en condiciones normales las protenas se encuentran 130-150
mg/da en funcin del volumen de orina eliminado; en recin nacidos 2-8 mg/100
ml;cantidad de protena (con peso molecular menor)=> (a) albumina 1/3 del total
(fisiolgica); (b) globulinas; (c) protena de Tamm-Horsfall (T-H) es mucoprotena viscosa que no se encuentra en el plasma - se forma en el tubulo contorneado
distal, constituye la matriz de los cilindros; (d) transferrina; (e) IgA.
Proteinuria => eliminacin de
proteina
en
orina
superando
los
VN
- intensa (>4 g/da) indica un dao renal grave; se dan en sndrome nefrtico,
glomerulonefritis
(aguda
y crnica), congestin venosa
renal;
- moderada (de 0,5 - 4g/da) indica un dao renal menos graves; se dan en pielonefritis
con hipertensin,
nefropata
diabtica,
mieloma
multiple.
- leve (<0,5 g/da) se dan en riones poliqusticos, lesiones renales incipientes.
de patrn glomerular
=>
pierde
su
selectividad
en
la filtracin.
de patrn tubular
=>
cuando
hay lesin tubular
- de forma intermitente o transitoria => puede ser fisiolgica (hay que comprobarlo)
- de forma persistente => suele cursar con hematuria y su pronostico es peor.
Glucosa - la orina normal carece casi por completo de glucosa (filtrado y absorbido);
normoglucemia => 6-120 mg/dl; umbral renal 160 mg/dl; glucosuria => aumento
de la concentracin de glucosa en orina por encima de los VN, causada por (1) aumento
de la glucemia por encima de umbral renal (2) alteracin renal (tubulopata)
Cuerpos cetnicos (compuesto por acido acetilacetico/diacetico, acido betahidroxibutirico, acetona) - en personas sanas, los CC se sintetizan en el hgado y se
metabolizan por completo, de forma que en la orina aparecen en

concentraciones mnimas (indetectables); cetonuria=> aparicin de

cuerpos cetnicos detectables en orina; la presencia de cetonuria y el aumento de
cetonemia implica que no se realiza correctamente el catabolismo oxidativo de
los cidos grasos; las causas de cetonuria:
- sobrecarga de lipidos en la dieta
- diabetes mellitus (coma diabetico)
- vmitos (en nios y embarazadas)
- bajo consumo de hidratos de carbono o alteracin en su metabolismo
- ayuno prolongado
Hemoglobina - no aparece en orinas normales; hemoglobinuria => presencia de
Hb en orina (si la cantidad es alta, se puede ver a simple vista); causas => enfermedad
renal
de vas altas,
anemias hemolticas,
reacciones
transfusionales,
infecciones (malaria, paludismo)
Pigmentos biliares (bilirrubina y biliverdina) - se forman en bazo, higado y MO
por degradacin fisiolgica de Hb; 2 tipos => BB-Albumina / indirecta y BBGlucurnico /directa; aparece BB en orina, siempre que aumente la BB directa en
sangre por causas => enfermedad obstructiva (ictericia obstructiva/ acumulacin en
sangre), lesiones hepticas(hepatitis, hepato-toxicidad).
Urobilingeno - BB directa con la bilis, pasa al intestino delgado donde
por accin de la flora bacteriana se transforma en urobilingeno o estercobilingeno
(se elimina en mayora con las heces y la orina en menor concentracin); la cantidad de
urobilingeno aumenta en la orina en las hepatitis y las anemias hemolticas;
la determinacin de urobilingeno debe realizarse rpidamente en orina, ya que se
transforma en urobilina + O2(falso negativo).
Nitritos - su aparicin en la orina indica crecimiento bacteriano (bacteriuria), de
germenes capaces de reducir los nitratos ingeridos con la dieta, hasta nitritos (enterobacterias); un resultado negativo de la prueba de los nitritos, no indica ausencia de
microorganismos, ya que puede haber bacterias que no son productores de nitritos o
ausencia de nitratos ingeridos en la dieta.
Examen microscpico de orina - sedimento urinario - estudio de elementos o
estructuras de origen y composicion variados que aparecen suspendidos en la orina
que proporciona ayuda para el diagnostico y evolucin de las enfermedades renales; la
muestra debe examinarse antes de transcurridas 3-4 horas desde su recogida (algunas
estructuras como celulas y cilindros se lisan fcilmente; obtencin del sedimento:
homogeneizar bien la muestra, verter 10 ml en un tubo de centrifuga (fondo cnico),
centrifugar a 1500 rpm durante 10 minutos; decantar el sobrenadante (quedando solo
1 ml), re-suspender el sedimento residual, montar un fresco (una gota entre porta y
cubreobjetos, evitando la formacin de burbujas), observar al microscopio a 40x,
intensidad lumnica media y condensador a media altura; tambin se puede observar a
10x
en
el permetro de
cubre
si
hay
los
cilindros
hialinos.
Estructuras
organizadas
- Hemates: pueden proceder de cualquier parte del sistema renal; en gran
numeroindica infeccin, traumatismos, neoplasias y litiasis renal; presencia normal de

1-2/campo o como una contaminacin menstrual; pueden confundirse con levaduras y

cristal de oxalato clcico monohidratado; con tincin Gram se diferenciar
=> los hemates son teidos de rojo, levaduras de violeta y cristales incoloros; es
importante distinguir entre macro-hematuria (se ve en el sedimento de color rojizo)
y micro-hematuria (nicamente se detecta al microscopio), tambin si el color rojo
observado macroscpicamente procede de hemates o Hb (al centrifugar el sedimento,
el color rojizo de Hb permanece).

- Leucocitos (neutrfilos): pueden proceder de cualquier parte del sistema

renal; >50% de ellos se lisan al permanecer mas de 2-3 horas a temperatura ambiente;
presencia normal de 1-2/campo (varn) y 1-3/campo (mujer); cifra superior de normal
en el sedimento => piuria (>5 leucocitos/campo indica => infeccin renal en cualquier
nivel);

- Espermatozoides: formados por 2 partes cabeza y cola; frecuente en un sedimento

del varn (eyaculaciones recientes, poluciones nocturnas, etc.), y en mujer despus de
haber
mantenido
relaciones
sexuales.
- Bacterias: la composicion de orina es un excelente medio de cultivo para los
microorganismos; la mayora de ocasiones son fruto de una contaminacin de la flora
saprofita alojada en zonas prximas al meato urinario => anal, perineal, vaginal (sobre
todo en mujeres); su presencia en el sedimento, no debe ser tenida en cuenta salvo que
vaya
acompaada
de
piuria (aumento
de
leucocitos).
- Levaduras: su presencia en la gran mayora debido por una contaminacin, salvo
acompaada de una piuria; en personas diabticas, debido a la glucosuria, parecen
facilitar el crecimiento mictico; su identificacin es sencilla, por su forma ovoidea,
frecuentemente con presencia de celulas en gemacin; su tamao es ligeramente
mayor que los hemates (pueden confundirse); su aumento en la orina se trata
de vaginitis
causada
por
Candida
albicans.

- Parsitos:
(1) Protozoos:
normalmente
se
trata
de Trichomonas
vaginalis (frecuente en sedimentos de mujeres con vaginitis que puede
ser asintomtico y mas raro en los de hombres); aspecto piriforme de mayor tamao
que los leucocitos y una gran motilidad (por sus flagelos); su identificacin es mas
complicada cuando la motilidad esta mermada (al ser de un tamao semejante al de
los leucocitos); la piuria que le acompaa puede hacer pensar (errneamente) en
una infeccin bacteriana y se descarta esta posibilidad al obtener urocultivos
negativos;
(2) otros parsitos: su aparicin es siempre el resultado de una contaminacin de la
muestra de orina con materia fecal;

Celulas epiteliales: el rbol urinario esta revestido por 3 tipos de

epitelio => (1)columnar
/tubular
/renales
/cuboideo (capsula
de
Bowman, tbulos distal, proximal y colector) (2) transicional o urotelio (pelvis
renal, urteres, vejiga y uretra) y (3) escamoso (uretra y vejiga); una
escasa descamacin es normal, pero se puede aumentar por causas =>
microorganismos, productos qumicos, cuerpos extraos, procesos degenerativos,
procesos
invasivos-destructivos.
- Celulas tubulares /renales /cuboideas: son de tamao 1/3 mayores que los
leucocitos; su forma normal es redonda con ncleo grande y cntrico; un
sedimento normal 0-1/campo; aumentado en pielonefritis y glomerulonefritis.

- Celulas de transicin (segunda capa de vejiga): el epitelio transicional

espluriestratificado (3 capas => basal, intermedia y superficial); las celulas son de
tamao 2-4 veces mayor que leucocitos; su forma es redondeada, piriforme o
raqueta con un ncleo pequeo; un sedimento normal 0-2/campo; su aumento exige

un estudio citolgico mas completo (p.ej. tincin de Papanicolau), por posibilidad de

un carcinoma en cualquier punto entre la pelvis renal y la vejiga.

- Celulas del epitelio escamoso: son planas y tienen abundante citoplasma con
nucleo centrico y pequeo; a veces sus bordes aparecen doblados, replegados; un
sedimento normal 0-1/campo.

Cilindros: se forma en tbulos colectores y distales; es un resultado de

la consolidacin de las protenas en los tbulos de las nefronas; es normal encontrarse
algunos (sobre todo hialinos) en el sedimento; se desintegra en la orina a pH alcalino
y en presencia de bacterias (con ureasa); la matriz de todos ellos es una mucoprotena (Tamm-Horsfall) segregada en la orina; causantes de su formacin =>
(1) disminucin del pH de la orina, (2) aumento de la densidad o concentracin de
solutos, (3) un grado de estancamiento de la orina (disminucin del filtrado
glomerular); el lugar de la nefrona en que se forman, determina su tamao y forma =>
cilindros estrechos (contorneados) proceden de los tbulos distales y cilindros anchos
se
originan
en
los tbulos colectores.
- Cilindros hialinos: se pueden encontrar en grandes cantidades en orinas normales
(deshidratacin y estrs fsico) y tambin en nefropatas; su aparicin en el sedimento
no tiene significacin clnica (1-2/campo); para visualizar su escasa refringencia, hay
que evitar un exceso de iluminacin; normalmente sus contornos se aprecian con
suficiente nitidez y uno de sus extremos es romo (un dedo de guante);
existe tambin cilindros granulo-hialinos, muy semejante a los hialinos, pero con
algunas incrustaciones en su estructura (sin significacin clnica);

- Cilindros granulosos: predomina la estructura granular y desaparece el aspecto

hialino;2 tipos => cilindros granulosos finos (semejante a los hialinos en tamao y
forma; tienen mayor refringencia debido a la masiva pequeos grnulos de inclusin) y
cilindros granulososgruesos (estructura totalmente diferente a los hialinos; son de
mayor tamao, aspecto rgido y mayor refringencia; sus borden son contrastados y
angulados; en orinanormal 0-1/campo; el aumento de su presencia indica
una nefropata.

- Cilindros celulares: la presencia de ellos en la orina nunca es normal;

tipos:
(1) Epiteliales - la matriz del cilindro engloba celulas epiteliales que se han
desprendido de la luz tubular; gran variedad de nefropatas, lesiones del epitelio
tubular (debidas adiversos txicos industriales, medicamentos y virus) puede causar
la formacin de
este
cilindros.
(2) Hemticos (eritrocitarios) - aparecen en sedimentos con hematuria; es un signo
de lesin a nivel del parnquima renal (vasculares o pielonefritis); la cantidad de estos
cilindros
suele
ser escasa y
dificulta
su localizacin.
(3) Leucocitarios - fcil de reconocer porque los leucocitos presentes en su matriz se
conservan estables durante el trayecto por los tbulos; su presencia normalmente
acompaada
por
piuria
intensa e
indica infeccin localizada
en
el parnquima renal(pielonefritis) o lesiones de tipo inflamatorio (glomerulonefritis
aguda).
(4) Bacterianos - se parecen a los granulosos toscos; generalmente unidos a piuria y
muy probablemente se trate de una pielonefritis.

- Cilindros
grasos:
cilindros
granulosos
o
celulares con
pequeas
inclusiones lipdico (gotitas de grasa); muy refringentes y tonalidad amarillenta donde
se localizan dichas inclusiones; indica una nefropata todava no manifestada.

- Cilindros creos: son muy refringentes, rgidos, de apariencia dura, superficie

rugosa y brillante (como la cera de las velas), los extremos angulados y generalmente
de gran tamao; su presencia es un sntoma claro de una alteracin renal importante;
suelen estar inmersos en una cilindruria (presencia de la mayora de los diversos tipos
de cilindros).

Estructuras
no
organizadas
Cristales: en general son productos finales del metabolismo que adoptan formas
cristalinas segn la condiciones fsico-qumicas de la orina (la pH sobretodo, densidad,
temperatura, etc.) y se excretan a nivel urinario; se diferencian en 3 grupos:
(1) Cristales endognos normales - no corresponden a alteraciones metablicas ni
funcionales, muy frecuente en el sedimento y pueden aparecer en
orinas recin emitidas.
(2) Cristales endognos patolgicos - reflejan trastornos metablicos o afectacin grave
de algn rgano o
sistema
y
muy
raras
veces
aparecen
en
orina.
(3) Cristales exgenos aparecen
en
la
orina tras
la introduccin en
el
organismo (va enteral o parenteral) diversas sustancias (contrastes radiolgicos/
contraste radiopaco va endovenosa y medicamentos p.ej. sulfonamidas, etc.)

- Cristales de acido rico: en orinas cidas; son birrefringentes; de formas

variadas (p.ej. agujas); color entre marrn rojizo, el amarillo e incluso incoloros; indica
una situacin patolgica o
concentraciones
elevadas
de
acido rico;
un
sedimento normal 0-2/campo.

- Cristales
de
oxalato clcico mono-hidrato
y
di
hidratado: en orinas cidas y ligeramente neutras; menos frecuente; de
forma prismas incoloros -casi nunca aislados-unidos por un punto intermedio (pesas
de gimnasia), la mas frecuente es de forma sobre; tambin los hay de forma
redondeados, finamente estriados, incoloros y con una depresin central (radios de
bicicleta); un sedimento normal 0-2/campo.

- Uratos amorfos: en orinas cidas; se presentan como un precipitado amorfo,

coloreado debido a la presencia de pigmentos urinarios de color amarillo-naranja
(color ladrillo); no tiene mucha importancia clnica.

- Cistina: en orinas cidas; tiene significacin clnica por si solos => aparecen
comoconsecuencia
de
cistinuria;
aspecto incoloro con
forma
de
placas hexagonales, regulares
finasy transparentes;
es imprescindible una
vez
observados en el sedimento, confirmar la concentracin de cistina en la orina.

- Leucina y tirosina: en orinas cidas; raramente se observan; son productos finales

del
metabolismo
proteico y
suelen aparecer
juntos
en
situaciones clnicas graves=> destruccin o
necrosis
tisular
importante,
fundamentalmente de tejido heptico (hepatitis, cirrosis, etc.); los cristales de tirosina
forman
manojos
de
agujas
finas y
los
de leucina
son
como grnulos esfricos de estras radiales y concntricas, de aspecto oleoso o graso y
muy refringentes; ambas son de color amarillo o marrn.

- Cristales
de
bilirrubina:
en orinas cidas;
de
pacientes
con bilirrubinemia (bilirrubina alta en sangre); de forma agujas con color marrnrojizo (flecha verde).

- Uratos amoniacos: en orinas muy alcalinas; de color amarillo/marrn muy

intensa; predomina la forma esfrica de distinto tamao; no tienen mucha
importancia clnica, peropueden estar asociados a infecciones del tracto urinario, por
bacterias con ureasa+.

- Carbonato clcico: en orinas alcalinas o neutras; no es frecuente y no tiene mucha

importancia clnica (procedencia de ingesta vegetales); de forma amorfo o granular, en
ocasiones como pequeos lazos y raramente como pequeas esferas incoloras;

- Fosfato clcico (hipurato clcico): en orina alcalina o neutra; no es frecuente;

de forma prismas largos y afilados (agujas), en ocasiones se agrupan formando rosetas
o estrellas, tambin como placas granulares, amorfas e incoloras (similares a
acido rico); no tiene mucha importancia clnica, pero puede ser ligada a hipertrofia
de prstata o algunas infecciones urinarias crnicas; clculos urinarios contienen
fosfato clcico.

- Fosfato triple (amnico-magnesico-clcico): frecuente en orinas alcalinas o

neutras; de forma tapa de atad, aunque tambin puede verse como octaedros (muy
variable); no tiene mucha importancia clnica.

- Cristales de creatina: raramente encontrados en orinas de adultas, pero

es frecuente en orinas de nios y nias antes de la pubertad; es un metabolito de
la degradacin endgena del tejido muscular (su aumento => distrofias musculares,
poliomielitis,
etc.);
de
forma pseudo-hexagonal caracterstica.
- Fosfato amorfo: en orinas alcalinas; de semejante forma a uratos amorfos, pero
de color blanquecino.

Informe
del
sedimento
urinario
1. debe preceder por el estudio de "anormales" en orina (tiras reactivas => pH,
densidad
y caractersticas patolgicas)
2. deben observarse al microscopio optico (40x) al menos 10 campos.
3. debe proporcionar una visin del valor medio de cada elemento o estructura,
obtenido
en
todos
los
campos
observados.
4. debe ser "escueto" y "conciso" (solo hay que poner lo verdaderamente importante)
5. debe seguirse un orden => hay que informar primero el examen realizado
de citolgico, segundo el de qumico y por ultimo el de microbiolgico.
Examen citolgico:
- celulas hematolgicas => se redactan con nmeros y abreviaturas (p.ej. 6-8 L/C =
no.leucocitos por campo); se informa si existe piuria y hematuria y si se
forma acmulos.
- celulas epiteliales => se redactan con adjetivos: escasas (algunas 1-3) - moderada (34) -abundante (6-8) - intensa (muy abundante 10-12); las importantes son las renales y
las de transicin; las celulas escamosas (de las vas bajas), se informan cuando son
abundantes.
- cilindros: se redactan al igual que las celulas; es importante identificarlos e indicar en
el
informe el
tipo
de
cilindro.
Examen qumico (en un sedimento de orina normales, es frecuente no incluirlos en
el
informe):
- cristales => se redactan con adjetivos; cuando son muy abundante, se habla de
"diatesis".
- compuestos
amorfos =>
se
redactan
con adjetivos
Examen microbiolgico:
- bacterias => se redactan con adjetivos; es necesario especificar el tipo de m.o. y su
movilidad
- levaduras =>
se
informa
con adjetivos.

Examen microbiolgico de una muestra de orina - en condiciones normales

carecen totalmente de flora bacteriana; la infeccin del tracto urinario es frecuente y
la mayora de m.o. patgenos proceden de la flora intestina => Bacilos Gram- (E.coli,
Proteus
spp,
Pseudomonas
aeruginosa,
Klebsiella
pneumoniae); Cocos
Gram+ (Streptococcus grupo D y Staphylococcus); Levaduras (Candida spp.); la toma
de muestra debe ser obtenida en condiciones aspticas en un recipiente estril,
evitando en todo momento la contaminacin; el paciente debe ser instruido de la
forma
mas
adecuada.
Anlisis de microbiolgico (urinocultivo)
1. Preparacin de
un
"inoculo"
2. Sembrar en medio Cled (la ausencia de electrolitos, impide la invasin por
proteus);McConkey (un medio selectivo y diferencia para m.o. Gram-); agar
Cetrimide
(eficaz
para
la bsqueda de
pseudomonas)
3. Incubar a la temperatura optima de crecimiento de los m.o. buscados (generalmente
a
37C)
4. Realizar el recuento tras la incubacin (presumible-mente han crecido los causantes
de la infeccin) => menos de 10.000 mo/ml de orina es negativo; mas de 100.000
mo/ml hay infeccin urinaria; entre 10.000 y 100.000 mo/ml el diagnostico es
incierto; puede haberse infeccin no detectada por causas => un tratamiento ATB
instaurado, una obstruccin a nivel de las vas renales o la muestra recogida por
una puncin supra-pbica (sin pasar por la uretra, donde esta la infeccin).
5. Una vez determinada la infeccin, hay que resembrar en medios selectivos, para
proceder la identificacin (tipacin) del germen causal de la misma.

Tema 18 facultativos

Cocos

aerobios y anaerobios
(patologa e identificacin)

Gram+ => Micrococaceae (Staphylococcus - Micrococcus Stomatococcus

Planococus); Streptocococeae (Streptococcus Pediococcus
Gemella
Aerococcus);Peptococaceae
Gram- => Neisseriaceae (Neisseria
Branhamella
Moraxella)
Staphylococcus => cocos Gram+ inmviles, aerobios y anaerobios facultativos,
tamao +/- 1 um; en forma de racimos, catalasa+, gelatinasa+,
nitratasa+, fermentadores de muchas azucares (via EMP); no capsulados y resiste al
calor; crecen en medios generales y medios con alto contenido de NaCl
(halfilo); resistentes a agentes externos, distribuidas ampliamente en la
naturaleza, flora normal de las mucosas y la piel, causante de la intoxicaciones
alimentarias,
heridas,
etc.
Especies importantes (existe >25 especies y varios sub-especies/ cepas)
(1) S. aureus (saprofito de >40% de fosas nasales y 10% de vaginas) => estafilococo

dorado (pigmento amarillo); coagulasa+; fermenta el manitol; sensible a la

novobiacina.
- 30
Ags (propiedades
antifagocitarias
y
producen
estructuras
pigenas/ caractersticas en las lesiones: polisacrido A es el mas importantes inducen la formacion de Acs; protena A - un potente agente antignico) => se
subdividen
en
tipos segn sus
caracteres antignicos;
- Produce toxinas (hemolisinas - lisan eritrocitos y leucocitos; t.exfoliativa/
exotoxina causa
eritemas en
la piel; leucopidinas destruyen
pmn
y macrfagos; enterotoxina - anula la accin del jugo gstrico y acta en el centro del
vomito,
nauseas
y
diarreas);
- Fermentos/enzimas (coagulasas activa
la
protrombina; fibrinolisinas o estafiloquinasasactivador
del
plasmingeno; penicilinasas o beta-lactamasa - romper el anillo b-lactamico de las
penicilinas
creando
resistencia);
- Hemolisinas alfa provoca hemlisis beta en
AS; hemolisina
beta provoca hemlisis alfa en
AS;
- Enterotoxinas tipo A, B (causan intoxicaciones alimentaria) y D causa enterocolitis;
La accin patogena directa => procesos inflamatorios, forunculos, supurativos y
de necrosacin (en heridas y quemaduras); indirecta => afecta al tubo digestivo por
la entero-toxina (gastroenteritis con nauseas, vmitos y diarreas, duracin 1-2 das, se
trata con sueros orales o anti-diarreicos); la bacteria no llega al intestino (solo su
toxina), por eso no se encuentra en las heces; crece muy bien con la temperatura
veraniega
y
en
las
cremas; infeccin generalizada
(septicemia) => formacin de cogulos o trombos intravenosos, artritis, pleuritis,
endocarditis, osteomielitis o meningitis en los debilitados (periodo de incubacin 1-6
horas).

(2) S.epidermidis y (3) S.saprophyticus son

estafilococos
oportunistas;
distribuidas en el medio ambiente, la piel y mucosas; son patgenas en
debilidad; S.saprophyticus puede tener pigmento dorado y puede fermentar
Manitol; S.epidermidis sensible a la novobiocina (lo que le diferencia a
S.saprophyticus).
Aislamiento
- Muestra procede

de

de
las heces

=>

los
medios

estafilococos:
selectivos Chapman, ricos

en NaCl(carcter halfilo), contiene manitol (diferencia S. aureus del resto de

Staphylococcus); Otros tipos de muestras => medio AS (observar caractersticas de las
colonias
color, hemlisis,
etc).
Pruebas bioqumicas:
- Los estafilococos degradan muchas azucares (glucosa, sacarosa, fructosa, manosa,
etc.); produce gelatinasa+, catalasa+, nitratasa+, crecen muy bien a 37C, hemolisina
alfa
y
beta,
coagulasa+
(S.aureus).
Diagnstico bacteriolgico:
- Toma muestra con torunda estril o por puncin segn los casos en total
asepsia; tincin Gram; aislamiento en medio Chapman/manitol salado y AS, tras
la incubacin observar las colonias; pruebas bioqumicas - coagulasa (S.aureus),
fermentacin de glucosa, catalasa, gelatinasa, hemolisinas alfa y beta
(cepas patgenas), fibrinolisinas, fermentacin del manitol (S.aureus); estudio de la
sensibilidad
a
la novobiocina(diferenciar S.epidermidis de S.saprophyticus)
- Diferenciacion del genero Staphylococcus y Micrococcus (en principio no es
patogeno) => Staphylococcus sensible a bacitracina y eritromicina; Micrococcus a
veces
pueden
daroxidasa+.
- Estafilococos
coagulasa- es
un
grupo heterogneo
(+
importante
son S.epidermidis yS.saprophyticus) 80% en el pasado no causan infecciones
importantes, pero cada vez esta tomando mas importancia; ademas
muestra resistencia a varios ATB alternativa de penicilina (meticilina y cloxacilina);
pueden producir infecciones urinarias, bacteriemias (por la implantacin de cateteres
i.v.) y endocarditis.

Streptococcus => cocos Gram+, tamao pequeo, capsulados, anaerobios

facultativos, se agrupan en cadenas, fermentador de glucosa, son saprofitos,
oportunistas
y
algunos patgenos;
poseen
Ags
(polisacrido C - segn sus caractersticas, se clasifican engrupos A-V de
Lancefield; protena M antifagocitarias, la
posee
el
grupo
A)
Clasificacion
A. segn el
tipo
de
hemolisis (capacidad
de
romper hemates produce hemlisis alrededor de sus colonias en AS) => gamma hemoltico,
alfa hemolticos/ hemlisis parcial (decoloracin parda
verdosa
- S.viridans);beta hemolticos/ hemlisis total (halos de transparencia grandes
entorno a su colonia) -grupos A, B, C, D (enterococo) G y F; estreptococo NO Betahemolticos - grupo
D, S.viridansy S.pneumoniae (alfa
y
gamma)

B. segn sus caracteres bioqumicos (sensibilidad a bacitracina, optoquina,

tolerancia
a
NaCl, degradacin de
bilis
esculina
y
factor
CAMP):
Sensible
a bacitracina (grupo
A)
Crecimiento
en NaCl
6,5% (grupo D
enterococos)
- Factor CAMP => potenciar la accin hemoltica de S.aureus (lo produce grupo B)
- Pruebas de bilis esculina - hidrolisan este compuesto (grupo D enterococos)
Sensible
a optoquina (S.pneumoniae /neumococo)
- Hidrlisis de hipurato sdico (grupo
B)
C. segn los caracteres antignicos (a traves de reacciones serologcas especificas
=> aglutinacin, precipitacin, inmunofluorescencia, etc.) => los Ags en la pared
celular (pptido glicano - toxica y facilita la unin de ellos a las clulas epiteliales
invadidas; polisacrido C - distintas caractersticas que confiere la agrupacin de los
estreptococos
(grupos
de
Lancefield);
- Grupo A (la + importantes) => la mayora son Beta-hemolticos y patogenos al
hombre; protena M se presenta como pelos en el permetro de la pared
celular (anti-fagocitaras).
En
las
capsulas
del grupos
A
y
C se
encuentra enzima
hialuronidasa(caractersticas anti-fagocitaras)
Accin patgena e Inters clnico:
(1) Streptococcus del grupo A (S.pyogenes) => causan 90% de las infecciones
estreptoccicas; muy sensibles a los agentes externos; son floras de la mucosa nasal
y farngea;
poseen polisacrido C
(proporciona
la especificidad de
grupo)
y protena M(facilita la adherencia a las clulas invadidas y proteccin a la
fagocitosis); son Beta-hemolticas, sensibles a la bacitracina y variable a optoquina
- Poseen hemolisinas estreptoccicas/ estreptolisinas (O y S); estreptolisina
S(poco antignico) => holoprotena toxica responsable de hemlisis en medio
AS;estreptolisina O (muy antignico) => hetero-protena exotxica muy activa de
efecto hemoltico frente a glbulos rojos y leucocitos (pmn y macrfagos => alterando
la
estructura
celular);
induce
a
la formacin de Acs
ASLO.
- Produce toxina eritrognica responsable del exantema de la fiebre escarlatina;
Enzimas estreptoquinasas (activador
de plasmingeno =>
plasmina en
fibrinolisis); induce a la formacin Acs; se utiliza en el hospital en procesos trombognicos.
Enzima desoxirribonucleasa estreptoccica (despolimeriza
ADN);
son antignicas y
se
distingue
en
4
grupos
(A-B-C-D).
- Enzima Hialuronidasa (hidroliza el acido hialurnico del tejido conjuntivo);
facilita
su invasin.
- Proteinasa estreptoccica (origina procesos inflamatorios y necrosacin)
Patogenicidad de S.pyogenes (grupo A) => Infecciones en la piel o mucosas
(+frecuentes - anginas/faringitis sobre todo a nios/contacto directo, otitis y
sinusitis) 95% de infecciones naso-faringeas son producidas por estreptococos del
grupo
A; infecciones
NO
supuradas/ inmunolgica =>
fiebres reumticas (complicaciones de tto no adecuados), glomerulonefritis,
endocarditis, meningitis, sepsis.

(2) Streptococcus del grupo B (S.agalactiae) => saprofito del hombre en rinofaringe, uro-genital, vaginal e intestinal; produce infecciones oportunistas; hipurato+
(degrada el hipurato sdico) es lo que le diferencia del grupo A; posee factor
CAMP (potenciar la accin hemoltica de S.aureus); puede origina meningitis e
infecciones pulmonares en el neonato, infecciones del tracto respiratorio, mucosas,
piel, etc; son Beta-hemoliticos, resistente a la bacitracina;

(3) Streptococcus del grupo C => es el mas proximo al grupo A;

sonBeta hemolticos (tambin alfa y gamma) y muy sensible a los agentes externos;
resistente a la bacitracina; crecen en medios salinos (NaCl 6,5%); posee enzima
hialuronidasa; saprofito del hombre en la rinofaringe; puede producir mastitis en
vacas,
muermo
en
caballos
y
sepsis
???
en
el
hombre.
(4) Streptococcus del grupo D => son alfa, beta y gamma hemolticos; resistentes
a
agentes
externos
y
ATB;
- los enterococos => S.faecalis y S.faecium; son saprofitos del intestino del
hombre; crecen bien en NaCl 6,5% (a diferencia de los NO enterococos); hidrolizan la
bilis esculina; son alfa-beta-gamma hemolticos; resistente a la bacitracina; puede
producir infeccin urinaria
e
herida.
- los No enterococos => S.bovis, S.equinus y S.anginosos (afecta vacas y
caballos);hidrolizan
la
bilis esculina;
resistente
a
la
bacitracina;
(5) Streptococcus del grupo G, F y E => saprofitos de la rinofaringe, vias

genitales e intestino en el hombre; pueden producir infecciones en vias urinarias,

heridas; resistente a la bacitracina; son alfa y beta-hemolticos; crecen variable en
medios
salinos
(NaCl
6,5%)
(6) Streptococcus Alfa hemoliticos (S.viridans) => no son capsulados;
producen alfa y gamma hemolisis; saprofitos de la orofaringe, mucosa bucal, placa
dental (caries);
resistente
a
la
optoquina;
(7) Streptococcus pneumoniae (neumococo) => es un grupo a parte;
diplococos, Gram+ y son capsulados; muy sensibles a medios externos; son alfa y
gamma hemolticos;sensibles a optoquina; crecen variable en medios salinos (NaCl
6,5%); saprofito en aparato respiratorio; puede producir neumonias, inflamaciones
sinusitis, otitis y meningitis (mas frecuente en adultos);

Aislamiento:
- toma de muestra con total asepsia de la rino-faringe con hisopo estril, una muestra
del pus (si hubiera); se analiza de inmediato (estreptococos son sensibles a medios
externos);
- un frotis para la tincin de Gram; si se sospecha S.pneumoniae se realiza
una tincin negativa con tinta china y prueba de "Quellung" (determinar Ags de la
capsula); se produce una reaccin de Quellung cuando un Acs tipo especfico se une al
polisacrido capsular del neumococo y causa un cambio en el ndice refractivo de la
cpsula
hacindola
aparecer
hinchada
y
ms
visible.
- la siembra en AS-CNA (posibles hemlisis - estreptococos son resistentes a
nalidixico que inhibe el crecimiento de otros grmenes); realizar hemocultivos si se
sospecha endocarditis o sepsis; las colonias son grisaceos, redondos de bordes lisos y
pequeos; medios selectivo y diferencial con NaCl 6,5% => permite el crecimiento
de enterococos
del
grupo
D.
Pruebas bioqumicas:
- pruebas de catalasa-, hemolisis en AS, sensibilidad o no de optoquina y bacitracina;
hidrolisis de hipurato (positivo en el grupo B), utilizacin de bilis esculina.
identificar los
grupos antignicos segn el
tipo
de sustancia polisacrido C (clasificacin de
Lancefield)
por
metodo serolgicos => prueba de ltex (romper la capsula para sacar la
sustancia; reaccin inmuno-complejo
Ag-Ac).
- los Gram+ en general son sensibles a la vancomicina excepto algunos cocos Gram+,
catalasa- que no son estreptococos (Pediococcus es resistente a la vancomicina).

Pruebas serologcas
/
inmunologicas:
- la bsqueda en el suero (dilucin seriadas) del paciente de Acs frente a toxinas y
enzimas de estreptococos (sobre todo grupo A) => ttulos de Acs antiestreptolisinas
O (ASLO); para saber si la infeccin es aguda o creciendo; en caso de
fiebres reumticas con ttulos de ASLO negativos, se determinan los ttulos de Acs
antiestreptoquinasas (ASK), antihialuronidasas(ASH);
pruebas
de hinchamiento
capsular con suero antineumococico polivalente (prueba de Quellung) muy utilizado
para determinar S.pneumonia => se aaden Acs contra Ags capsulados, si
hay aglutinacin es signo de que esta estreptococo.
Neisseria => cocos Gram-; en forma de diplococos (granos de caf), aerobios;
son saprofitos de mucosas (genitales, faringe, fosas nasales) y cavidades del hombre y
los animales;citocromo-oxidasa y catalasa+; utilizan azucares con metabolismo
oxidativa
y
fermentativa;
producen pigmentos carotenoides; nutricionalmente exigentes; sensibles
a
medios
externos.
Especies mas importantes - 4 gneros => Neisseria, Branhamella (B.catharralis),
Acinetobacter
y
Moraxella.
(1) Neisseria meningitidis (meningococo) => es una especie patgena para el
hombre; son parsitos obligados del hombre (no se encuentran libre en la naturaleza);
es difcil de cultivar si hay competicin (acompaadas por otros grmenes);
son capsulados; utiliza glucosa y maltosa; posee fimbrias (facilita su adherencia) y
capsulas (contiene polisacridos con comportamientos serolgicos diferentes A,B,C,
etc.);
crecen
a
35-37C;
son muy
sensibles a
medios
externos;
producen meningitis epidmico (contagio por gotas de flugge en contacto ntimos);
otros causantes de meningitis => Haemophyllus influenzae, Streptococcus agalactiae,
Escherichia coli, Pseudomona aeroginosa, Micobacteria, Neisseria meningitidis,
Cryptococcus
neoformans
y
otros.
(2) Neisseria
gonorrhoeae (gonococo) => idnticas caractersticas que
meningococo; utiliza glucosa como fuente de carbono; requieren medios enriquecidos
con CO2 5-10% para potenciar su crecimiento a 35-37C; son muy sensibles a medios
externos y son parsitos estrictos del hombre y produce gonorrea (no se encuentra
libre en
la
naturaleza);
(3) Neisseria saprofitas => saprofitos de la rino-faringe y genitales; son poco
exigentes y crecen a 22-35C en medios generales; resistentes a medios externos y no
son patgenos para
el
hombre.
Accin patgena e inters clnico
Neisseria meningitidis (meningococo) => diplococos /granos de caf; coloniza las
mucosas y vas respiratorias (sobre todo superiores); 5-30% son portadores sanos en
rino-farngeo; afectan a nios de 6 meses hasta 5 aos (causas mas importantes de
mortalidad infantil); tambin afectan nios mayores y adultos jvenes de 6 hasta 25
aos;estructura antignica =>
componentes
de
su capsula (polisacrido),
las fimbrias (facilitar la adherencia y la invasin) y protenas de la membrana (toxica
sobre
las
celulas
invadidas);
Cuadro clnico - comienza con una rino-faringitis de sintomatologa leve (sobre todo
en nios - en adultos se forman Acs anti meningococo) evoluciona a forma severa, se
complica con bronquitis; si el meningococo pasa a la sangre, originara micro-focos en
la piel conerupciones petequiales (1-2mm) en el tronco e extremidades inferiores,

cefaleas, fiebres altas, artralgias; puede pasar a LCR con fiebres muy altas, cefaleas
fuertes, rigidez de nuca, vmitos, diarreas, etc.; se agravan hasta la muerte sin tto
efectivo y rpido; el examenLCR es turbio, purulento con abundantes meningococos
(debido a acumulacin de pmn con meningococo dentro (celulas CLUE); tto
con penicilina (G) - el tto del portador es rifampicina.

Neisseria
gonorrhoea (gonococo) => idnticas caractersticas que
el
meningococo; su afinidad particular es sobre las mucosas uro-genitales, con fimbrias
(adherencia a las celulas epiteliales dificultando la fagocitosis); posee endo-toxina que
inactiva Acs prximos; produce gonorrea en hombres y mujeres (ETS);
Cuadro clnico - tras un contacto sexual, los gonococos se adhieren a la superficie de
la mucosa gracias a las fimbrias y protenas de la membrana; posteriormente se
penetran a tejidos sub-epiteliales y empiezan a multiplicarse, liberando endotoxina con efecto toxico a la uretra, cuello del tero, ano (donde colonicen), produce
la destruccin de celulas del epitelio y supuracin (secrecin purulenta) y dolor a
la miccin; en las mujeres puede ir acompaada por uretritis, vaginitis y 20%
salpingitis de las trompas (produce esterilidad en mujeres); 50% de los casos
son asintomticos con lo que la ausencia de tratamiento conduce a la cronificacin;
puede provocar bacterimia dando artritis supurativos; tto => penicilina o sus
derivados; en neonatos provoca gonococia ocular que conduce a la ceguera - se
previene instilando gotas de nitrato de plata - mtodo de "Crede" y (contra Chlamydia
es mas efectivo) eritromicina???

Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico
N.meningitidis - toma de muestra de LCR (puncin lumbar), sangre y/o exudado
faringeo; se deben examinar de lo antes posible (sensibilidad al medio externo); se
transporta en un medio de Thayer-Martin modificado a 37C (en caliente); si la
muestra de LCR es turbio o purulento, se divide en 2-3 tubos; 1er tubo se centrifuga y
sobre el sedimento se realizan frotis Gram; 2nd tubo se utiliza para la siembra en AS,

agar chocolate, Mueller Hinton y Thayer-Martin; 3er tubo se realiza un hemocultivo y

recuento celular; meningococo crecen dando colonias transparentes diminutas y
no hemolticas; las placas se incuban a 37C enambiente de CO2 5-10%.
- Pruebas bioqumicas => catalasa+, oxidasa+, prueba de la utilizacin de glucosa y
maltosa
por oxidacin (aerobio),
lactosa-,
nitratasa-.
- Estudios serolgicos => inmunofluorescencia directa del LCR o el suero,
contrainmuno-electroforesis y tcnica ELISA.
Existe
sistema
de
multi-prueba
para
Neisseria
y
Haemophylus.
N.gonorrhoeae - toma de muestra a partir de la uretra (hombre), recto en
homosexuales y uretra, cuello de tero y recto (mujer), se realizan en el
laboratorio (sensibilidad a medio externo), por la maana antes de la
primera miccin (al ser posible); se procede de inmediato al estudio directo y la
siembra en medios especficos o se transporta en medio TM modificado.
- se realiza la tincin (Gram- en forma de granos de caf); en el frotis se ven los pmn
con diplococos dentro; la siembra se har en AS, agar chocolate, Thayer-Martin (con
factores de crecimiento y ATB vancomicina, anfotericina, colistina y trimetropin que
inhibe el crecimiento de otros grmenes); en TM los gonococo son colonias pequeas
de color gris y los meningococo son blanquecinas se incuba a 35-37C
y atmsfera enriquecida
de
CO2
5-10%;
- Pruebas bioqumicas => utilizacin de azucares por va oxidacin (glucosa+, lactosa,
maltosa+ para meningococo, y sacarosa); oxidasa y catalasa son positivos, nitratasa-.
- Pruebas serologcas => hemo-aglutinacin, inmunofluorescencia indirecta, ELISA
(mas
utilizadas)
- Sistema de identificacin multiprueba para Neisseria y Haemophylus.

Neisseria saprofitos (Neisseriaceas) - normalmente son flora de oro-faringe/

naso-faringe; son especies de bajo patogenicidad, aunque a veces implicadas en
meningitis y otros; no requieren medios especiales para su crecimiento.
- Branhamella
catharralis
/
Moraxella
catharralis =>
hoy
en da la clasificacin es confusa (la tendencia - dentro de la familia moraxellacea),
otros autores tienden a diferenciarla y la clasifican como familia Branhamellaceae;
es Gram-, oxidasa+, catalasa+, nitratasa+ (reducen nitratos a nitritos), no fermentan
azucares, crecen bien en medios generales (AS, agar chocolate y Thayer Martin),
son aerobias o 5% de CO2; flora normal de naso-faringe, pero a veces se asla como
agente causal en septicemias e infecciones otorrinolaringolgicas (sinusitis, otitis).
- Acinetobacter => anteriormente clasificada dentro de la familia Gram- no

fermentadoras (pero oxidasa- => bacteria inerte) junto con Pseudomonas; actualmente
esta incluido dentro de la familia Moraxellaceae; son microorganismos que pueblan
fundamentalmente suelos y aguas y presentes en medios
hospitalarios
(infeccin nosocomial);
la
especie
mas
importante
=> A.calcoaceticus (causan neumonas, infecciones urinarias y sepsis); crecen en
Mac, AS y otros; en AS producen colonias grises con halos de hemlisis, oxidasa-,
catalasa+, son cocobacilos Gram- (se pueden confundir con Neisserias por su tamao).
- Moraxella => coco-bacilo,
Gram-,
no
fermentador, inmvil,
oxidasa+,
catalasa+, difcil de distinguir con Neisseria; en general los no fermentadores son
muy difciles de distinguir y requiere numerosas pruebas bioqumicas para
etiquetarlos.

Tema
19
- Entero-bacterias y
(patologa e identificacin)

vibrios

Entero-bacterias - bacilos o coco-bacilos Gram-, aerobios y anaerobios

facultativos, mviles (flagelacin pertrica) o inmviles, fermentadoras de glucosa (con
o sin produccin de CO2), oxidasa-, catalasa+; algunos usan metabolismo fermentativo
y otros usan metabolismo oxidativo; la mayora son nitratasa+; algunos son
sulfuhidratasa+ (Proteus y Salmonella), indol+ (E.coli); son saprofitas/ flora del tracto
gastrointestinal del hombre y de los animales; tambin se encuentra en el agua y en el
suelo; resistentes a medios externos; son potencialmente patgenos en individuos
debilitados y produce infecciones oportunistas; algunos son patgenos siempre donde
sea se encuentra, otras depende de la muestra donde se asla y el resto se cuestiona su
papel.
Caractersticas antignicas:
- Ag somtico / Ag O => es lipo-polisacrido, termo-estables, se encuentra en la
pared bacteriana, es una endo-toxina (la parte polisacrido es muy antignico y la
parte lipdica es
inactiva bioqumica-mente).
- Ag capsular / Ag K => se encuentra en la capsula bacteriana, es polisacrido, es
anti-fagocitaras (relacionado con la virulencia de ciertas especies como E.coli K1 y Salmonella
thyphi).
- Ag flagelar /Ag H => es caracterstico de las cepas mviles, es proteico y
responsable
de
la accin patgena de
la
bacteria.
Clasificacin segn su
capacidad
para
fermentar
la
lactosa:
- Fermentadoras rpidas de lactosa (coliformes) => Escherichia, Enterobacter y
Klebsiella(tarda a
veces)
- Fermentadoras lentas de lactosa / ONPG+ (coliformes) => Citrobacter, Serratia,
Hafnia,
Yersinia
(patgeno)
y
Shigella
sonnei.
- NO fermentadoras de lactosa (no coliformes) => Salmonella, Shigella, Proteus,
Morganella,
Providencia
y
Edwardsiella.
Salmonella - entero-bacterias no coliformes, mviles con flagelacin pertrica;
bacilos Gram-; en general provocan infecciones entrico febriles (gastroenteritis,
entero-colitis
o
fiebres
tifoideas
o
para-tifoideas).

Especies importantes - S.typhi, S.choleraesuis, S.enteritidis, S.paratyphi A,B y C,

S.arizonae.
Accin patgena e inters clnico
- Ag somtico O, Ag flagelar H y Ag capsular VI (en S.typhi - Ag termolbil con
poderprotector frente a los cidos /cida gstrica, resistencia y anti-fagocitaras)
- endo-toxina y enterotoxina (efecto irritante y citotxico sobre el tracto intestinal)
Cuadros clnicos
1. Infecciones entricas (S.typhi - fiebres tifoideas o S.paratyphi A,B o C - paratifoideas); Las fiebres tifoideas son transmitidas al hombre va oral (alimentos crudos,
poco hechos, mal conservados y aguas contaminadas), llega al estomago, resiste la
acidez gstrica,pasa al intestino delgado (leon), penetra por endocitosis destruyendo
parte de las celulas de la mucosa intestinal; una vez dentro las salmonellas
son fagocitadas por macrfagos ytransportadas por
diferentes vas y provoca bacterimia => todo sucede en el periodo de incubacin (815 das); comienzo brusco de signos y sintomas => los macrfagos les transportan
hacia el bazo, higado y MO, produciendo multiplicacin de nuevas salmonellas, volver
al intestino generando placas ulceradas, necrosacin de placas de Peyer y en casos mas
graves
originar perforacin y
hemorragias.
Las fiebres para-tifoideas son mucho mas leve con un periodo de incubacin de entre
7-10 dias con bacterimia y estado febril que dura varias semanas; no
hay perforacin intestinal ni
hemorragias ni invasin de salmonellas a
otros rganos; cuadros clnicos => dolores de cabeza, fiebres altas, anorexia,
astenia/ cansancio;
preciso
un tratamiento
que
dura
9-10 das.
2. Infecciones gastrointestinales y enterocolitis (S.enteritidis - la mas
frecuente,S.choleraesuis, S.typhimurium y otras); periodo de incubacin 12-36
horas; se transmite por alimentos contaminados con una concentracin de salmonellas
de 10 millones a mil millones/ml, depende de tipo de la cepa; el alimento les facilita su
llegada a pasar el estomago y llegar al intestino delgado colonizando el leon y el
ciego, se penetran por fagocitosis al epitelio y se multiplican originando
una inflamacin que genera cuadros diarreicos con dolor abdominal (perdidas de
electrolitos y agua), fiebres altas, nauseas, vmitos; re quiere untratamiento de rehidratacin que dura 6 das - las floras se encargan de eliminarlas.

Aislamiento - pruebas bioqumicas - diagnostico de Salmonella

Salmonelosis => toma muestra de las heces (coprocultivo), anlisis del alimento
sospechoso; medios de cultivo SS, McConkey, caldo selenito; pruebas bioqumicas:
ONPG-, TDA-, Citrato+ (S.cholera-suis y S.enteritidis, tambien son CO2+ y Ornitina
descarboxilasa+), SH2+, fermentacion de azucares: Glucosa+, Trehalosa+
(S.typhi yS.enteritidis),
etc.
Fiebres
tifoideas
y
para-tifoideas =>
toma
muestra
de
diferentes localizacin segn la fase de enfermedad; en la fase de incubacin se
busca en heces (coprocultivos), en orina(urocultivo), sangre (hemocultivo); en la fase
inicial de la enfermedad / periodo febril, se realiza hemocultivo; en el periodo
posteriores o finales se busca en heces (coprocultivo); medios adecuados; se realiza las
pruebas bioqumicas, reacciones de aglutinacin cuantitativa (ttulos) de Ags O, H y VI
a traves de sueros especficos monovalentes y polivalentes, especialmente para Ag VI
(pruebas inmunolgicas).
Mucaptest => prueba inmunolgica utilizando suero polivalente (Acs anti O y anti
H), un resultado positivo dara unas colonias fluorescentes (posible Salmonella).

Shigella - bacilo Gram- inmvil, no fermentador de lactosa (excepto S.sonnei) ;

son patgenas para el hombre, provoca afecciones graves y contagiosas sobre el tracto
gastrointestinal (disentera bacilar) especialmente en ambientes de salubridad baja.
Accin patgena e inters clnico - se debe a la produccin de sustancias toxicas,
Ags O y K, plsmidos (facilita la invasin), adhesinas (adherencia a las celulas que
invaden),exotoxina con propiedades cito-toxicas (tipo A - origina necrosis celular,
ulceras, hemorragias y perforacin), neuro-toxicas y entero-invasivas (tipo B adherencia a las celulas del epitelio gastrointestinal); al llegar al intestino del
hombre va oral (puede resistir el acido gstrico, por la alta cantidad ingerido

y tambin protegido por los alimentos), ejerce su accin toxica, pasar al colon
originando
necrosis con
signos
y
sintomas caractersticas (las
toxinas
deS.disenteriae no suelen pasar a la sangre); cuadros diarreicos van acompaados
dedolor clico, nausea, vmitos, malestar general y fiebres muy altas
con deposiciones sanguinolentas
con
moco
y
pus.
Aislamiento
pruebas bioqumicas,
diagnostico
de
Shigella
Toma muestras de heces recin emitidas en los primeros das de la enfermedad (hay
mayor numero de shigellas), eligiendo restos de moco y sangre si los hubiera;
el estudio riguroso(teniendo en cuenta que Shigella se destruye en medios cidos y a
temperaturas <4C; medios de cultivos SS, McConkey, Hektoen, Yersinia CIN,
Campylosel, TCBS;pruebas bioqumicas TDA, KIA (K/A para Shigella y A/A
para S.sonnei),
ONPG
(positivo
para S.sonnei),
fresco,
ureasa-,
VP-, nitratasa+, manitol (positivo para Shigella y negativopara S.disenteriae); pruebas
de aglutinacin cuantitativa (titulo) para demostrar Acs en el suero del paciente a
traves
de
sueros especficos mono
y
polivalentes.

Escherichia - entero-bacterias bacilar o coco-bacilar Gram- mviles, fermentadoras

de glucosa y lactosa, produce CO2, aguantan temperaturas altas (la diferencia de otros
coliformes), resistente a medios externos, fcil de encontrar en el agua,
alimentos (indicativo de contaminacin fecal reciente); saprofito de flora aerobia y
anaerobia facultativa del tubo digestivo; puede provocar trastornos gastrointestinales
de
diarrea,
infecciones
urinarias,
meningitis
en
neonatos y
excepcionalmente bacterimia; la especie mas importante para el hombre
es E.coli (segn la cepa puede tener Ag somtico O, capsular K y flagelar H, fermentos
y endo-toxinas).
Accin patgena e inters clnico - los cuadros clnicos son variables segn el tipo

de toxina que originen; algunas cepas de E.coli forman Ag O y K antifagocitaras y resistencia a bactericidas y ATB (alto poder invasivo); otras cepas
forman endo-toxinas, causante de cuadros febriles y diarreicos; otras cepas tienen un
mecanismo de accin anlogo al de Shigella con menor gravedad; a veces la enterotoxina que producen es parecida a la deVibrio cholerae que causa perdida masiva de
agua
y
electrolitos.
- si la cepa de E.coli forma una entero-toxina citotxica parecida a Shigella => cuadros
diarreicos en brotes epidmicos que afectan a nios y lactantes (E.coli enteropatgena)
- si forma una entero-toxina semejante a Vibrio cholerae => procesos diarreicos en
nios,
adultos, originndose espordica-mente
brotes epidmicos (diarrea
del
viajero - E.colientero-toxgena)
- si forma una entero-toxina citotxica similar a S.disenteriae => procesos diarreicos
graves, hemorragico espordicamente en brotes (E.coli entero-hemorragica)
- si presenta ciertos plsmidos que incrementan su capacidad de invasin => cuadros
diarreicos graves que afectan a nios, adultos con brotes epidmicos en casos aislados
(E.colientero-invasiva)
Las cepas de E.coli se distingue con sueros antignicos; E.coli tambin puede provocar
infecciones urinarias (cistitis, pielonefritis, etc), infecciones biliares, heridas, meninges
(meningitis
en
neonatos).
Aislamiento,
pruebas bioqumicas diagnostico
Toma de muestra representativa de alimento, agua, heces, exudado; frotis de Gram;
medios
de
cultivo
Mc,
Levine; pruebas bioqumicas =>
lactosa+,
indol+, citrato-, sensible a la Colistina.

Yersinia - entero-bacterias muy patgenas para el hombre (Y.pestis - causante la

peste bubnica);
son
coco-bacilos
Gram-, mviles a
25Ccon flagelacin pertrica e inmviles a 37C, fermentadores de glucosa (ONPG
variable),capsuladas (Y.pestis)
y oxidasa-.
Especies mas importantes - Y.pestis (agente etiolgico de la peste bubnica en el
hombre) trasmitida a traves de ratas y pulgas, originando enfermedad grave
febril, epidmico de alta mortalidad; Y.pseudotuberculosis afecta animales y
excepcionalmente al hombre; Y.enterocolitica (sacarosa+ en medio TSI); los
2 ltimos afectan mas a animales que al hombre (nios) => originando estados febriles
y
diarreicos.

Accin patgena e inters clnico de Y.pestis => cuadros agudos y febriles con
alta inflamacin de los ganglios linfticos, hemorragias internas, petequias difusas en
la piel, en ocasiones septicemia y neumnia; es muy contagiosa, se origina en lugares
de salubridad baja; la muerte se produce por shock sptico (fracaso multi sistmico) o
por neumnia; factores
de
virulencia:
- La
toxina
murina (liberada
al
medio
cuando
muera
la
bacteria)
=> protena que bloquea la utilizacin de O2 por parte de las celulas.
- Endo-toxinas (liberadas en el transcurso de la enfermedad) => origina el proceso
febril
- Ag
V con
propiedades anti-fagocitaras
- Coagulasas y fibrinolisinas
Y.pestis llega al hombre a traves de la picadura de pulga (infectada por ratas con
peste),atraviesa los vasos linfticos, pasa a los ganglios donde se multiplica originando
bubones,pasa a la sangre y se disemina por el bazo, higado, pulmones, piel,
mucosas, se multiplica provocando lesiones pigenas (toxina murina), hemorrgicas,
necrtica y edematosa; en casos graves aparece coagulacion intravascular
diseminada (CID) (por la accin de lascoagulasas) o ditesis hemorragica (por
la accin de las fibrinolisinas), colapso circulatorio, toxema generalizada y
muerte; formas clnicas:
1. Peste bubnica (la mas frecuente); tras el periodo de incubacin de 37 das despus de
la
picadura,
aparecen
signos
y
sintomas
con escalofros, vmitos, formacin de bubones en las ingles axilas y/o zonas
submaxilares (los tejidos circundantes aparecen inflamados); sin tratamiento se agrava
hasta
la
muerte.
2. Peste
pulmonar (es
la complicacin de
peste bubnica);
se
produce afeccin pulmonar grave con insuficiencia respiratoria, cianosis; es altamente
mortal.
3. Peste septicmica es estadios ltimos de la peste en cual quiera de sus formas y
es
generalmente
mortal.
Aislamiento
pruebas bioqumicas diagnostico
Toma de muestra de exudados purulentos del bubn (por aspiracin), de sangre, LCR,
tejido pulmonar, ndulos linfticos o esputo, heces, segn los casos; la tincin Gram-,
nigrosina (visualizacin de capsulas); medios de cultivo => Mc, Yersinia CIN (colonias
muy
pequeas); pruebas bioqumicas => mvil a
22C y inmvil a
37C,
Lactosa-, ONPG+,ureasa+,
indol
y
TDA-,
oxidasa-, nitratasa+;
a
veces Y.pestis y Y.pseudotuberculosis son
ONPG
variable; Y.enterocolitica es sacarosa+.

Entero-bacterias oportunistas - bacilos Gram- aerobios y anaerobios facultativos,

poco exigentes nutricional-mente, ampliamente distribuidos en el medio ambiente;
son saprofitos de la flora gastrointestinal, resistente a medios externos y ATB; no
son patgenos al no ser si el husped es debilitados, pueden provocar infecciones
hospitalario;
en
la mayora son
lactosa+,
bacilos
Gramcoliformes;
Principales especies de coliformes/ lactosa+ (Escherichia, Enterobacter,
Citrobacter, Serratia, Klebsiella y Hafnia) y no coliformes /lactosa- (Proteus,
Morganella
y
Providencia).
1. Escherichia =>
Gramaerobias
y
anaerobias
facultativas,
fermentadoras rpidas de lactosa y glucosa, produce CO2, indol+, citrato-, sensible a
Colistina, mviles.
2. Enterobacter =>
fermentadora rpida de
lactosa,
produce
CO2, produce acetona de la glucosa (VP+), citrato+, mvil, ornitina-descarboxilasa+,
son comensales de flora intestinal; puede provocar a individuos debilitados diarreas,
infecciones
del
tracto
respiratorio,
heridas,
etc;
especies
importantes: E.aerogenes y E.cloacae.
3. Serratia =>
fermentadora
lenta
de
lactosa
(ONPG+)
y
la
glucosa,produce acetona (VP+), mviles, citrato+,
ADNasa+, ornitinadescarboxilasa+, saprofitas del hombre y tambin en el medio ambiente (agua y
otros lquidos), resistentes a ATB y desinfectantes; provoca infecciones urinarias y
sepsis
a
personas
debilitadas.
4. Citrobacter (huelen a peste) => fermentadora lenta de lactosa (ONPG+), mvil,
fermenta la glucosa y VP- RM+, citrato+; son comensales del tubo digestivo del
hombre y puede provocar infecciones urinaria, respiratoria, sepsis, bacterimias,
meningitis a los individuos debilitados; especies importante => C.freundii.
5. Klebsiella => inmviles, fermentadoras tarda de
lactosa,
utiliza
glucosa
yproduce acetona (VP+), citrato+, ureasa+; son comensales del tracto gastrointestinal
y vas respiratorias superiores; puede provocar neumonas, rinitis, infecciones
urinarias; especies importante => K.pneumoniae (sub especies VP+ y VP-)
y K.oxytoca (indol+).
6. Hafnia => mviles a 22C y inmviles a 37C, fermentadora lenta de lactosa

(ONPG+),citrato+, utiliza glucosa y produce acetona (VP+); provoca infecciones

hospitalarias.
7. Proteus, Morganella y Providencia => NO fermentan la lactosa, pero si glucosa
y produce CO2, RM+; mviles, TDA+ (diferenciar del resto entero-bacterias), pueblan
aguas residuales, el suelo, materia orgnica y son comensales en la flora intestinal del
hombre; pueden provocar infecciones hospitalarias; especies importantes:
- Proteus mirabilis (indol-, ureasa+, TDA+, SH2+), P.vulgaris (indol+, ureasa+,
TDA+)
- M.morganii (ureasa+, indol+,
TDA+)
- Providencia
rettgeri (ureasa-,
indol+,
TDA+)
P.mirabilis puede
provocar infeccin urinaria, descompone
la
urea
de
la
orina quegenera precipitacin de
sales clcicas => formacin de clculos renales; tambin puede provocar infecciones
gastrointestinales, toxinfecciones alimentarias, heridas, etc.

Accin patgena e inters clnico - si el husped se encuentra debilitado

(postoperatorio, tratamiento inmunosupresores) los saprofitos podran ser patgenos;
las
infecciones
mas
frecuentes
=>
- tipo urinario (40% de las infecciones hospitalarias - pacientes sondados,
encamados, intervencionados quirrgica-mente) provocado por E.coli, P.mirabilis,
P.vulgaris, Klebsiella y Enterobacter, provocando cistitis (de las vas bajas)
y pielonefritis (de las vas altas); son infecciones agudas con fiebre, dolor lumbar,
polaquiuria o anuria y disuria; es frecuente en los anlisis de orina piuria, bacteriuria y
proteinuria;
- tipo
abdominal son
poco
frecuente
=> abscesos y
peritonitis debido
a perforacin intestinal.

- tipo
respiratorio (20%
de
las
infecciones
hospitalarias)
afectando vas respiratorias altas, neumonas y bronco-neumonas (pacientes con
afecciones crnicas)
Aislamiento
pruebas bioqumicas diagnostico
- Toma de muestra segn las afecciones o procesos patolgicos en condiciones de total
asepsia
Examen
directo
(fresco
y tincin Gram)
- Aislamiento en medios especficos/ selectivos (Hektoen, Mac) que inhiben los Gram+
- Pruebas bioqumicas e inmunolgicas

Familia Vibrionaceae - Genero Vibrio, Aeromonas y Pleisomonas (los

patogenos)
Especie mas importante y patgeno del genero Vibrio - V.cholerae => bacilos
Gramanaerobios
facultativos
de morfologa curva
(pleomrficos), mviles (flagelacin loftrica), crecen bien en medios generales y pH
alcalino (sensibles
al
medios cidos), oxidasa+ (la
diferencia
de
la
enterobacteriaceae), halfilo, catalasa+, afectan al tracto gastrointestinal del hombre;
es el agente causal del clera => provoca diarreas graves hasta llegar a
la deshidratacin (diarreas
masivas), shock
hipovolmico,
coma
y
muertepor deshidratacin (puede perder hasta 10-15 lt/da de agua y electrolitos); se
diferencia dePseudomonas por la diferencia en el patrn de fermentacion de azucares.

Accin patgena e inters clnico:

- Ag somtico O (polisacridos) se
utiliza
para
su tipacin
- Ag flagelar H (no tiene valor para su tipacin - comn a todas las cepas)
- Exotoxina / entero-toxina proteica (el principal efecto patgeno del clera - provoca
diarrea
masiva)
- Adhesina (protena que tiene afinidad por los azucares) que permite adherirse a la
pared
intestinal
Para formar cuadros graves es necesario su penetracin por va oral (agua o alimentos
contaminados con el bacilo, p.ej. productos marinos crudos), eludir el medio acido del
estomago (sucede cuando se ingieren >100 millones de grmenes - en el caso de
epidemias
donde
se
encuentra
1 milln/
ml
de
agua).
Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico
- Toma de muestra a partir de las heces diarreicas, vmitos, procedindose de
inmediato a su identificacin (sensible a medios externos); medio de transporte CaryBlair.
- Aislamiento en medios de cultivo especficos TCBS que impide el crecimiento de gran
parte de microorganismos => produce colonias amarillas por la fermentacion de la
sacarosa sobre
el
medio
verde
y tambin se
siembre
en
el
Mc.
- Pruebas bioqumicas => oxidasa+, catalasa+, sacarosa+ (produce un tipo de
acido dbiles que
no
bajara
mucho
el
pH)
Pruebas serologcas para
determinar el
titulo
de
Acs.
Aeromonas - bacilo Gram- no fermentadoras de la misma familia; el especie mas
importante Aeromonas
hydrophila;
catalasa+
y
oxidasa+,
VP+,
lactosa-, ureasa-, indol+, SH2-, mviles; no son halfilo (a diferencia de Vibrio)
implicadas
en
procesos
diarreicos.
Plesiomonas - tiene las mismas caractersticas bioqumicas que Aeromonas (excepto
en pruebas de VP y ornitina descarboxilasa); el especie mas importante Plesiomonas
shigelloides(se propone a incluirla a la familia enterobacterias); hay que hacer API
para distinguirla de Aeromonas (Plesiomonas - ornitina descarboxilasa+)

Tema 20 - Bacilos y cocobacilos aerobios y

anaerobios
facultativos
(patologa e identificacin)
Pseudomonas - bacilos pequeo (coco-bacilo) Gram-, mviles (flagelacin), en
generalaerobios
estrictos, catalasa
y
citocromo
oxidasa
positivos,
en
generalmetabolismo glucdico oxidativo; ampliamente distribuidos en el agua y suelo,
pasando de aqu a los animales y al hombre; son oportunistas en el ambiente
hospitalario (pacientes inmunodeprimidos), en ocasiones resultan muy graves
(resistente
a
muchos
ATB
hay
que
combinar
varios).
Los
especies
mas
importantes:
- P. aeroginosa => presenta pigmentos fluorescentes, saprofita en la piel, tubo
digestivo??, puede provocar cuadros graves en individuos debilitados y es mortal si se
produjese
septicemia;
- P.
maltophilia (ahora
se
llama Stenotrophomonas
maltophilia)
se
llama as, porqueoxida maltosa (no oxida la glucosa); cogen cada vez mas importancia;
oxidasa
variable.
Accin patgena e inters clnico - Pseudomonas
aeroginosa
- Ag somtico O (polisacridos), Ag flagelar H (proteico), Ag mucoide M (produce
exotoxinas => enterotoxina responsables de cuadros diarreicos y toxina
eritrodrmica).
- Sustancia => (1) piocina (pigmento azulado de accin bactericida), (2) fluoresceina(
pigmento verde amarillo) y (3) pigmento melnico (tie de color marrn los cultivos).
- Cuadros
graves
o
muy
graves (de carcter oportunista)
=>
sinusitis crnicas, infecciones del aparato respiratorio (neumonas, faringitis, bronconeumonas); puede producir endocarditis en drogadictos y paciente con SIDA;
enterocolitis, pielonefritis y meningitis en neonatos; en grandes quemaduras,
agravando la lesin o provoca infeccin de heridas quirrgicas; en casos mas graves
puede
originar bacterimia
(quemaduras
graves).
Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnstico bacteriolgico
- Toma de muestra de cualquier producto patolgico, especialmente
de carcter purulento
en
total
asepsia.
- Examen directo (tincin Gram); si el pus es azulado se sospechara de P.aeroginosa.
- Aislamiento en medios generales (el bacilo piocinico es fcil de cultivar) a
temperatura 37C; es importante estudiar la presencia de pigmentos que se difunden
en el medio; lapiocianina es un pigmento responsable de la coloracin azul verdosa que
puede
adquirir
el
medio
y el
olor
a jabn de
las
colonias son
las caractersticas de P.aeroginosa.
- Pruebas bioqumicas de citocromo oxidasa+, catalasa+, gelatinasa+, utilizacin de la
glucosa va oxidativa
(aerobio).
- Pruebas serologcas para buscar Acs anti Pseudomonas.

Brucella - bacilos pequeos (coco-bacilos) Gram- inmviles, aerobios estrictos,

algunas crecen mejor en atmsferas ricas en CO2 (5-10%), su crecimiento es
lento, catalasa+, oxidasa+, nitratasa+, ureasa+, sensibles a medios cidos y se
destruyen fcilmente a
temperatura
de
pasteurizacin.
Especies mas importantes (en funcin del husped en el que anidan):
- Brucella melitensis afecta a cabras y ovejas; afecta al hombre a traves de sus leches no
esterilizada,
quesos
frescos,
carne
cruda
o
poco
hecha.
- Brucella abortus afecta a bvidos (la mayora de los casos de brucelosis en Espaa en
menor proporcin B.melitensis)
Accin patgena e inters clnico depende
de
su
estructura antignica; Brucella es capaz de mantenerse latente en el interior de la
celulas que la han fagocitado y posteriormente, empezar a multiplicarse con la
consiguiente produccin de endo-toxina;penetran en el hombre a traves de heridas
y va digestiva (alimentos procedentes de animales infectados (leche no esterilizada,
quesos frescos, carne cruda o poco hecha); posteriormente,pasaran a los
ganglios linfticos,
donde sern fagocitadas
por neutrfilos (en
la
sangre)
y macrfagos (en los tejidos) y se distribuyen por todo el organismo, volver a pasar al
torrente circulatorio originando bacterimia (brucelosis aguda o fiebres de Malta);
se caracteriza por artralgias difusas (dolores de articulaciones), sudoracin abundante,
esplenomegalia y otras distintas formas clnicas dependientes de la localizacin de
Brucella (orquitis, neumnia brucelar, etc); las fiebres son ondulantes con tendencia a
las recidivas(frecuente entre los 3 y 6 meses subsiguientes a la infeccin por Brucella);

Bordetella - bacilos o coco-bacilos Gram- aerobios estrictos, inmviles (algunas

son mviles), capsulados; son parsitos estrictos (no se encuentran libres en la
naturaleza); se transmite por las gotitas de flugge o contacto directo.
Especies
mas
importantes:
- Bordetella pertussis (bacilo Bordet y Gengou) => la mas patgena y es
elagente etiolgico de
la
tosferina
- B.parapertussis =>
aislada
en casos
benignos
de
tosferina y
no
es
estrictamente patgena
- B.bronchiseptica => afecta mas a animales que al hombre; aislada en el hombre
excepcionalmente
en casos
benignos
de
tosferina.
Accin patgena e inters clnico (Bordetella pertussis) - se infectan a traves de
gotitas (flugge) que se producen al hablar; tras periodo de incubacin de 1-2 semanas,
empiezan a multiplicarse en la superficie de las celulas epiteliales ciliadas de la
traquea,
bronquios
y
bronquiolos,
originando inflamacin en
estas
zonas, paralizacin de sus cilios y consiguiente necrosacin; presenta una
fuerte accin tusgena (tos seca) que puede llegar a agotar debido a la accin de la
toxina proteica y incremento de las mucosidades queobstruyen los bronquios (broncoconstriccin) lo que facilita un dficit en la ventilacin pulmonar; puede originar
cianosis, taquicardia y vmitos alimenticios; es altamente contagiosa, pero ya
existe vacunas de la tosferina.

Haemophilus bacilos
muy
pequeos
Gram- aerobios
y
anaerobios
facultativos, inmviles y patgenos para el hombre y muchos animales; sensibles a
medios externos, desecacin, el calor y muchos antispticos; necesita medio de cultivo

especifico con sangre como AS o agar chocolate (contiene factores X/hemina o

ferroprotoporfirina y factor V/NAD o nicotinamida-adenina-dinucleotido necesarios
para
el
proceso
de respiracin).
Especies mas importantes (clasificadas en funcin de los factores que necesitan):
- Haemophilus influenzae (bacilo de Pfeiffer) es el agente etiolgico de 10-15% de
lasmeningitis en nios de corte edad en Espaa y de neumonas en ancianos;
requiere
ambosfactores
V
y
X.
- H.parainfluenzae es agente causales en ciertas meningitis, afecciones respiratorias y
septicemias; tambin son saprofitos en fosas nasales y boca; requiere solo factor V.
- H.ducreyi es
agente etiolgico del chancro
blando (enfermedad venrea /ETS);
requiere
solo factor
X.
Accin patgena e inters clnico (Haemophilus
influenzae):
- Es capsulada (su capsula esta formada por polisacridos distintos de A-F) en
Espaa es
mas
frecuente
la
del tipo
B.
- Posee endo-toxina que es responsable de lesiones en la traquea y bronquios en
procesos
neumnicos
- Suelen afectar a las vas respiratorias originando neumonas, bronquitis aguda en
ancianos
y
adultos
debilitados.
- Puede producir meningitis en nios de corta edad; se transmite por va area y mas
frecuente en invierno y primavera; comienza como infeccin de las vas respiratorias
altas yposteriormente se extiende via sangre hasta el sistema nervioso produciendo
meningitis purulenta con mortalidad alta sin tratamiento a tiempo.
- Existe vacuna para H.influenzae tipo
B.
Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico de Haemophilus:
- Toma de muestra a partir del exudado farngeo, esputo o lquidos purulentos (en caso
de infeccin de vas respiratorias), LCR por puncin lumbar
(en
caso
de
sospecharmeningitis).
Examen
directo
(tincin Gram, tincin negativa)
- Se cultiva en agar chocolate o AS de conejo/caballo, se aaden discos que contengan
factores V y X, ATB como la bacitracina que inhibe a otros grmenes; se formaran
satelitismo segn sus necesidades de los factores; incubar en la atmsfera rica en CO2.
- Pruebas bioqumicas => indol+, ureasa+, nitratasa+, oxidasa variable (segn la
cepa),fermentacion
de
glucosa
positiva,
ONPG-.
- Tcnicas inmunolgicas => determinar el Ags capsular (se realizan por la urgencia
del diagnostico)

Legionella - la especie mas importante para el ser humano, es Legionella

pneumophila(el
agente etiolgico de
la legionelosis / neumnia atpica por Legionella);
un
coco-bacilo
o
bacilo
Gram-, aerobio estricto, requiere medios muy especficos para crecer (agar
legionella),catalasa+, oxidasa+, en ocasiones puede presentarse de forma filamentosa;
en
general
son mviles,
pero
algunas
cepas
son inmviles.
Accin patgena e inters clnico - se transmite va area a partir de aerosoles
procedentes de aguas contaminadas o sistemas de aire acondicionado o
humidificadores contaminados con Legionella; tras el periodo de incubacin (+/- 1
semana) se produce fiebres altas, astenia, malestar generalizado, tos, anorexia, dolor
pleural agudo, disnea (un cuadro tpico de una neumnia atpica); se conoce como
la enfermedad de los legionarios; el pronostico sera mas severo en ancianos o adultos
debilitados aunque con el tratamiento preciso suele remitir sin problema.

Bacillus de
la
familia Bacillaceae;
el
genero Bacillus son bacilos
esporulados aerobios o anaerobios facultativos con tamao entre 1-7 micras Gram+ y
en su mayora mviles; otro genero de la misma familia es Clostridium son bacilos
esporulados y anaerobios estrictos, que origina en su mayora potentes exotoxinas
responsables
de
cuadros clnicos graves.
Especies
mas
importantes
de Bacillus:
- Bacillus
anthracis (agente etiolgico del ntrax
o
carbunco)
- Bacillus cereus (responsable en muchas ocasiones de trastornos gastrointestinales)
- otros bacilos son comensales para el hombre o saprofitos del suelo, agua, etc., y que
depende
del
estado
inmunitario,
puede
producir
diferentes

cuadros clnicos (p.ej. Bacillus

subtillis).

Accin patgena e inters clnico de Bacillus

anthracis:
- Es un bacilo grande, habitualmente se presenta en forma de cadenas cortas o en
parejas, formando fcilmente esporas sobre todo en los cultivos viejos;
es inmvil, presenta capsulas(los patgenos) y exotoxina proteica que proporcionan
propiedades anti-fagocitaras.
- En general, el cuadro clnico que produce es el carbunco animal o humano; en el
humano tiene lugar tras un primer contacto a partir de animales infectados que tras
periodo de incubacin de 2-3 das surge una pstula maligna (color negro en la
mano) en el punto de contagio (las manos y cabeza); comienza con
una ppula eritematosa que se complica a vescula pruriginosa que se convierte
en ulcera o escara, que sin tratamiento puede necrosarse y extenderse en superficie y
profundidad; los casos no tratados, podran ser graves, ya que existe el riesgo de
septicemia intensa que en pocas horas podra originar la muerte; lo mas habitual son
las formas benignas que curan con facilitad tras un tratamiento.
- En casos excepcionales pueden aparecer formas internas como el carbunco
pulmonar ante la inhalacin de polvo contaminado
con esporas de Bacillus
anthracis que da lugar a neumonas graves; tambin puede producirse carbunco
intestinal por la ingestin de alimentos contaminados con las mismas esporas y
originara diarreas, vmitos, dolor tipo clico, fiebre, etc.

Acinetobacter - (tambin esta descrito en genero de Moraxella/ Neisseriaceas) este

genero engloba especies que pueblan la flora de suelos y agua, al igual
que Pseudomonas, son bacilos Gram- no fermentadoras, capsuladas y presentes en
ambiente hospitalarios donde afectan a pacientes inmunodeprimidos; la especie mas
frecuente es Acinetobacter calcoaceticus que produce infeccin urinaria, neumonas y

sepsis; crecen bien en Mc y AS que da colonias grises y B-hemolticas; se diferencian

de Pseudomonas en
que Acinetobacter es oxidasa-;
son fcilmente confundible
con Neisserias porque es bacilo muy pequeo (coco-bacilo); tambin es muy resistente
a los ATB.

Tema 21 - Corinebacterium
(patologa e identificacin)
Genero Corinebacterium - pequeos bacilos inmviles a temperatura corporal, se
comportan como Gram+, suelen agruparse en formas geomtricas parecidas a letras
chinas o abecedario (empalizadas); presenta granulaciones metacromticas, catalasa+,
anaerobios facultativos y pueden dar lugar a un velo superficial en medios lquidos;
presentan ciertos rasgos comunes con Mycobacterium en su pared bacteriana que es
muy rica en cidos miclicos, arabinosa y galactosa, aunque la tincin de BAAR (ZhielNielssen) paraCorinebacterium resulta negativa; la especie mas importante
es Corinebacterium
diphteriae.
Accin patgena e inters clnico de Corinebacterium
diphteriae el bacilo
diftrico llega al hombre por va respiratoria a traves de gotitas de saliva (pflugge) u
objetos recientemente contaminados invadiendo la oro-faringe y las amgdalas;
desde aqu se extiende, liberando toxinas y enzimas inhibiendo la sntesis proteica
celular, originando necrosis en las celulas epiteliales que invade; este epitelio
necrosado junto con leucocitos y fibrina formara una pseudomembrana que cubre
las amgdalas, que puede llegar a provocar una obstruccin respiratoria si se extiende
por la naso-faringe y laringe; tal pseudomembrana se encuentra fuertemente adherida
a las mucosas, de forma que si se intenta arrancar, originaria al paciente una fuerte
hemorragia; en general los signos y sintomas de la difteria suelen ser de tipo
respiratorio;
en
casos
excepcionales,
por va linftica podra pasar
a
la
sangre difundindose al resto del organismo.

Tema 22 - Mycobacterium y Nocardia

(patologa e identificacin)
La familia Mycobacteriaceae engloba un solo genero Mycobacterium;
son pequeos bacilos finos rectos y a veces incurvados, excepcionalmente pueden
encontrarse algo filamentosos; son inmviles con una pared tpica y caracterstica no
encontrada en ninguna otra familia excepto Nocardia (altamente enriquecida
con cidos miclicos y componentes creos que se tie muy difcilmente - responde
a Gram+), se necesitan colorantes con alta capacidad tintorial para su penetracin; una
vez teidos son altamenteresistentes a la decoloracin cida (AAR+ o acido alcohol
resistencia positivo) lo que les diferencia del resto de microorganismos; son muy
distribuidos en la naturaleza, pueden sersaprofitos del agua y suelo y puede provocar
infecciones graves al hombre y en ocasiones crnicas como la lepra; necesita gran
cantidad
de
oxigeno
para
sobrevivir
(aerobias
estrictas).
Las especies mas importantes del genero Mycobacterium (3 importantes
grupos):
(1) Bacilos de Mycobacterium cultivables en medios artificiales, de crecimiento
lento(>1semana hasta 3 semanas); en funcin de los cuadros clnicos se subdividen en
2
grupos:
a. especies que producen tuberculosis al hombre y a los animales (Mycobacterium
tuberculosis y Mycobacterium
bovis).
b. especies de micobacterias atpicas de crecimiento lento, podran presentar un
poder patgeno para el hombre distinto al de la tuberculosis y la lepra (Mycobacterium
avium y Mycobacterium
marinum).
(2) Micobacterias de crecimiento rpido (<1semana); no tiene inters clnico (no
son patgenos)
para
el
hombre.
(3) Bacilos de Mycobacterium no cultivables sobre medios artificiales y patgenos para
el hombre (Mycobacterium leprae) y ciertos roedores (Mycobacterium lepraemurium)
Los micobacterias tambin se pueden clasificar en funcin de la produccin de
pigmentos, de las morfologas de las colonias y de la velocidad del crecimiento.

Accin patgena e inters clnico

Mycobacterium tuberculosis - responsables de tuberculosis en el hombre
Muy rica en componentes lipdicos en su pared celular dotndole un carcter tintorial
especifico AAR+ que servir para
su identificacin y clasificacin;
contiene protenas que provocan la formacion de Acs (reaccin de la tuberculina /test
de Mantoux); es capaz decrecer en el interior de las celulas que constituyen el
sistema retculo endotelial, se multiplican dentro de ellas sin ser destruida; en el frotis
de
baciloscopia
se
puede
observar forma
cordones microscpicos.
Llega al hombre por inhalacin (excepcionalmente por ingestin de alimentos
contaminados con Mycobacterium o a traves de las heridas de la piel); produce
una lesin primaria
en
el pulmn y
mas
concretamente
a
nivel
de
los alvolos pulmonares, provocando unaintensa reaccin inflamatoria que da lugar
a exudacin; estos bacilos pueden llegar hasta los vasos linfticos y de aqu a los
ganglios, retornando a la circulacin venosa y originandofocos metstasis en
distintos rganos; sin tratamiento se va desarrollando evolucionando hacia
una necrosis "caseosa" (parecida a queso de caverna); despus de 6 semanas o mas va
evolucionando hacia una destruccin y desintegracin de las celulas pulmonares con
la formacin de una masa solida, homognea, parecida al queso (caverna tuberculosa);
provocara fiebres mas o menos variables, sudoracin por la tarde, adelgazamiento
progresivo, tos dbil o intensa (a veces con esputos muco-purulentos) y en fases mas
avanzada,hemoptisis; en general cualquier parte del organismo podra verse afectada a
causa de diseminacin (gastrointestinales, genito-urinarias, pericrdicas, etc.)
Mycobacterium
leprae - productoras
de
la
lepra
en
el
hombre
Se multiplica con extraordinaria lentitud y su clnica es bastante insidiosa y no ha
podido ser cultivado en ningn medio in vitro, por lo que se conocen poco
sus caractersticas microbiolgicas; su nico reservorio
es
el
hombre
con
autentica predileccin por las terminaciones nerviosas; es un bacilo inmvil, rectilneo,
se tie con Zhiel-Nielssen (AAR+); suelen encontrarse en la mucosa nasal, en la dermis
y
en
biopsias
de
lesiones
en
individuos
con
lepra;
La va de entrada es a traves de lesiones en la piel, se propagan a los nervios
superficiales prximos, concretamente a las celulas de Schwam; de aqu propagarse
via linftica al sistema venoso y disemina a otros rganos (lepra lepromatosa); se
multiplica mejor en las partes mas fras del organismo (la cara, extremidades)
invadiendo los nervios mas superficiales; el bacilo se multiplica en el interior de
los macrfagos de la piel y las celulas de Schwam, originando inflamacin y perdida de
sensibilidad; en estado grave tambin aparece en rganos mas profundos y su
pronostico es mas complicado; su periodo de incubacin es muy difcil de determinar,
puede durar muchos aos; su periodo de invasin es muy insidioso, sintomas raros y

no asociables a lepra (picor, hormigueo y perdida de sensibilidad en las manos/pies; a

partir de aqu, de forma lenta y progresiva aparecen lesiones cutneas (maculas
prominentes en extremidades y cara); su periodo durara toda la vida y
su evolucin mas o menos grave depender del grado de inmunidad del husped; tto
=>
ATB
sistemico.
Micobacterias atpicas - producido por Mycobacterium avium y Mycobacterium
marinum
Las micobacterias atpicas son m.o. patgeno para el hombre, frecuentemente
de carcter pulmonar, a veces confundido con Mycobacterium tuberculosis ya que
la sintomatologa es
similar
=>
tras
una invasin,
se
producen formacin de tubrculos y consiguiente necrosis
caseosa con formacin de
cavernas, diseminacin y cuadros de fibrosis pulmonar con rara aparicin de focos
extra-pulmonares; la gravedad de lesiones depende del estado inmunolgico del
paciente; los grmenes invadir especialmente individuos inmunodeprimidos; la va de
entrada es muy variable (respiratoria o mucosas).

Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico
a)Aislamiento
de Mycobacterium
tuberculosis
- Muestras puede proceder de esputo, aspirado bronquial, aspirado gstrica; LCR e
orina;
la
muestra
de
esputo
han
de
someterse
a
una descontaminacin, homogenizacin y concentracin (mediante centrifuga) previa
al cultivo; LCR, orina, etc. se puede sembrar directamente, pero lo mejor
seria centrifugar-lo antes.
- Se realizara un examen microscpico del frotis previa tincin de Zhiel-Nielssen
(AAR); tambin se pueden utilizar tinciones fluorescentes (auramina, rojo de tiacina,
naranja de acridina), cuando se sospecha que hay pocos bacilos (todo se trabaja bajo la
campana
de
flujo
laminar).
- Para aislar el bacilo de Koch de muestras estriles (LCR, orina) se
utilizaramedios lquidos como Proskauer-Beck; si pretendemos hacerlos crecer en

medios slidos (esputo),

existe
medios especficos como Lowenstein-Jensen
o
Coletsos, que contienen huevo, aminocidos, sales minerales y verde malaquita (inhibe
los grmenes contaminantes)
cuyo crecimiento
es
lento
(2-4
semanas); tambin existe agar Middlebrook que se suele emplear junto con el anterior
para completar su identificacin; Micobacterias son muy exigentes en su
crecimiento => incubar a 37C, en la oscuridad, en el ambiente con CO2 de 5-10% (en
1 semana) y en atmsfera normal a partir de la 2 semana; los tubos desenroscados
hasta que se evaporen el agua (sin secar el medio); la mayora tardan entre 3-6
semanas en crecer (algunos aun mas); si hay crecimiento, se har la identificacin de
su morfologa mediante tincin de
Zhiel-Nielssen
y
pigmentos.
- Pruebas bioqumicas => la mas importante es la prueba de la niacina+ (todas las
micobacterias producen cido nicotnico durante su crecimiento; M.tuberculosis no
metabolizan el cido nicotnico y por ello lo acumulan y es excretada al medio, sobre
todo en medios con base de huevo, del cual puede ser extrada y detectada);
es nitratasa+ y catalasa+(solo algunas cepas de Mycobacterium tuberculosis no tienen
la catalasa; en general tienencatalasa termolbil (a temperatura alta no tienen
catalasa).
- Pruebas serologcas => la mas utilizada es la tcnica ELISA; actualmente
la identificacin se hace con el PCR, posteriormente se realiza la hibridacin con las
sondas genticas (ADN) de M.tuberculosis marcadas.
- Pruebas de alergia /la prueba de la tuberculina (Mantoux); tuberculina es un
extracto proteico de bacilo tuberculoso; es solo toxico para individuos que han estado
en contacto con dicho germen, originando una reaccin intradrmica en la cara
anterior del brazo intensa; este eritema endurado (ppula de >10mm es positivo) se
debe leer hacia 48-72 horas (se mide la ppula no la zona roja); despus de las 4-6
semanas posteriores al contacto, la prueba del Mantoux dar de por vida positiva.
b)Aislamiento
de Mycobacterium
leprae
- Muestras a partir de heridas sospechosas en piel y otras localizaciones.
- Se realiza una tincin de Zhiel-Nielssen o AAR, que deber dar positiva
- No podr ser
cultivada en
medios
de
cultivo
- Se realizara un diagnostico serolgico (un estudio de la inmunidad celular y humoral
del
individuo)
- Pruebas cutneas: (depende del resultado, se hace los 3 pruebas o solo algunos).
1. reaccin de la lepromina => para conocer el tipo de lepra que posee ese individuo
(prueba de intra-dermorreaccin /Ag de bacterias inactivadas); Las personas que no
tienen lepra tendrn poca o ninguna reaccin de la piel al Ag. Los pacientes con un tipo
particular de lepra, llamado lepra lepromatosa, no tendrn ninguna reaccin de la piel
al Ag; una reaccin positiva de la piel se puede observar en pacientes con lepra
tuberculoide
y
lepra
dimorfa
tuberculoide.
2. test de pilocarpina => para buscar la ausencia de sudoracin de la piel
lesionada despus de
una inyeccin de clorhidrato
de
pilocarpina.
3. test de la histamina => inyectar histamina de tal forma que en una piel
sana aparecer una reaccion alrgica caracterstica, mientras que en las lesiones
lepromatosas esto no sucede debido a que los nervios perifricos estn lesionados y
no aparecer ninguna reaccin alrgica.
c)- Recogida

Aislamiento
de muestra de

los

de
lugares

Micobacterias atpicas
sospechosos en total asepsia

- Tincin de Zhiel-Nielssen (positiva); tincin fluorescencia con auramina, rojo de

tiacina,
naranja
de
acridina.
- Cultivos en medios Lowenstein-Jensen, Coletsos o caldo Middlebrook, donde se
puede observar el aspecto de las colonias, su velocidad de crecimiento y la presencia de
pigmentos.
Pruebas bioqumicos: niacina- (la diferencia de Mycobacterium
tuberculosis),
catalasa+,
nitratasa+.
Pruebas serologcas de
ELISA
Actualmente en grandes laboratorios, se utilizan medios de cultivos radiomtrico
(Bactec TB)de deteccion mas rapida que contiene liquido de soporte (agar
Middlebrook) con ATB para inhibir los demas grmenes y el sustrato marcado con un
istopo del carbono C14; las micobacterias al crecer metabolizan el sustrato y liberan
gas CO2 marcado radioactivamente que es detectada automticamente por el Bactec y
una vez que se ha detectado crecimiento en alguno de los medios, se realiza la tincin
de Ziehl-Neelsen para ver si lo que ha crecido son BAAR o no.

Baciloscopias - las extensiones para baciloscopias se deben hacer previamente a

la descontaminacin (CHNa 2-4%) de las muestras y homogenizacin (N-acetil
cisteina) , posteriormente su concentracin por centrifugacin; la preparacin del
frotis del esputo ha de hacerse seleccionando la parte mas purulenta que es donde hay
mas micobacterias; cuando se lleva acabo la tincin de los frotis, se debe evitar el
contacto fsico entre las portas para evitar contaminacin cruzada; es importante
cuantificar el numero de bacilos encontrados ya que esta directamente relacionado con
el grado de contagiosidad del paciente y con la gravedad de la infeccin.

El genero Nocardia - corresponde a actinomicetos aerobios que forman micelio

vegetativoque tiende a fragmentarse originando estructuras bacilares o coco-bacilares;
Gram+ inmovil,aerobios
estrictos
y
AAR+ (tiene caractersticas anlogas al Mycobacterium) poseen gran cantidad de
acidos micolicos de cadena larga en su pared bacteriana; poseen ademas glicolpidos y
fosfolpidos que sirve para su identificacion y diferenciacin; algunas especies
son patgenas para
el
hombre.
Accin patgena e inters clnico
Gran parte de nocardiosis son infecciones de carcter oportunista; no produce toxinas,
pero contiene en su pared bacteriana alta proporcin de lpidos que le confiere una
resistencia a los sistemas de defensa (macrfagos, linfocitos, etc.); tiene capacidad
de crecer y multiplicarse en el interior de los tejidos (macrfagos)
como parsito intracelular y solo crece cuando las defensas del individuo se encuentran
bajas;
las
manifestaciones clnicas mas
frecuentes
son:
A. Nocardiosis pulmonar - causada sobretodo por Nocardia asteroides que produce
lesiones
pulmonares
con abscesos, inflamacin diseminada semejante
a
la
tuberculosis; pueden surgir reas de necrosis y diseminarse por sangre a
otros rganos provocando
septicemia.
B.
Micetomas
(lesiones
granulomatosas) de carcter crnico originadas
en
eltejido subcutneo donde
se
producen tumefaccin, abscesos y pstulas y/o ndulos que
al
abrirse
presentan exudados sero-sanguinolentos; generalmente causados por Nocardia
brasiliensis y es frecuente en las extremidades inferiores y superiores; presenta
periodos de remisin y es caracterstico de climas tropicales;

Tema 23 - Bacterias anaerobias

(patologa e identificacin)
Anaerobias - todas aquellas bacterias incapaces de crecer y/o mantenerse en
contacto con O2 a la presion atmosfrica; presentan un metabolismo
anoxibitico => incapaz de utilizar O2 de la atmsfera como aceptor final de
electrones; en su lugar utilizan sustratos orgnicos como aceptores finales de
electrones(respiracin anaerbica /fermentacion); la presencia de O2 puede
ser (1) bactericida /toxica /letal directa o bacteriosttico (crecern de nuevo cuando
las condiciones son favorables); (2) inhibir ciertos sistemas enzimticos o
la funcin reguladora
primordial
del
metabolismo
celular; (3) generan
producto txicos al interaccionar sus componentes propios con O2; los anaerobios son
las bacterias predominantes en la flora normal humana y en algunas partes p.ej. boca o
intestino estn en proporcin de 1000:1 con respecto a la flora aerobia, por
tanto, la mayora de la infeccin que provoca los anaerobios son endgenas; dentro de
los
anaerobios
se
distingue
=> anaerobios
estrictos y anaerobios
aerotolerantes/microaeroflicos (puede
crecer
a
2-8%
de
O2).
Genero
Clostridium bacterias
anaerobias esporuladas;
son
bacilos Gram+, anaerobios estrictos, forman esporas a nivel terminal o subterminal,
presentan flagelacin pertrica, mviles, no presentan capsulas excepto Clostridium
perfringes; ampliamente distribuidas en el suelo, agua, etc. y altamente resistente a
medios externos; responsable de infecciones e intoxicaciones muy graves (ttanos,
botulismo, gangrena gaseosa, etc.); las especies mas patgenos actan mediante
la formacin de toxina con poder toxico sobre el husped; algunos podran formar
parte de la flora normal del hombre y animales.

Las
especies
mas
importantes
A. Clostridium que originan toxinas cuyo mecanismo de accin es neurotoxico =>Clostridium
tetanii el
agente etiolgico de ttanos y Clostridium
botulinum agente etiolgico del
botulismo.
B. Clostridium que originan toxinas que actan sobre tejidos provocando histotoxicidad =>Clostridium perfringes - agente etiolgico de la gangrena gaseosa; para
su penetracin en
el
organismo
se
requieren
lesiones
previas.
C. Clostridium que originan toxinas que actan sobre el tracto digestivo (clostridios
entero-toxicos) => Clostridium difficile - responsable de trastornos gastrointestinales
no
graves.
D. Clostridium
responsables
de cuadros
purulentos (clostridios
pigenos)
=> Clostridium perfringes; es frecuente la presencia ademas, de otras bacterias
anaerobias.
Accin patgena e inters clnico
A. Clostridium que ejercen accin neuro-toxica sobre las personas (C.tetanii y
C.botulinum)
Clostridium tetanii - es un bacilo Gram+ pequeo, formadora de esporas (aspecto
de tambor o cerilla), habitan la tierra y el intestino del hombre y animales; produce 3
toxinas
responsables
del
cuadro tpico del ttanos que
son transportadas va sangunea o humoral hasta SNC bloqueando la liberacin de
neurotransmisores, originan hiperactividad de las neuronas motoras que da lugar a
convulsiones y parlisis espstica o espasmo muscular a nivel perifrico; se ve alterado
el sistema muscular variando el ciclo de contraccin-relajacin de forma que este entra
en fase de contraccin y no se recupera (rigidez tetnica / episttonos).
Para que se produzca el ttanos es necesario una serie de condiciones tales como que el
microorganismo germine (condiciones adecuadas de anaerobiosis); tras una herida
profunda (cortante, punzante, mordeduras, araazos, partos, abortos, quemaduras,
ulceras por decubito) o herida superficiales (rozaduras) se pueden infectar y formar
costra que facilita la infeccin anaerobia; en las condiciones favorables de
anaerobiosis, las esporas deClostridium tetanii en el ambiente pasan a la herida,
germinan y tras un periodo de incubacin (5-7 das), se origina su accin patgena; es
rara que se produzca de forma local en la zona de entrada; la forma generalizada es
mas
habitual
y
mas
grave;
es
importante
la deteccin precoz
y
medidas profilcticas (vacunacin se renueva cada 10 aos).

Clostridium botulinum - bacilos Gram+ anaerobios estrictos, grandes, mviles por

su flagelacin y presentan esporas; es capaz de formar neuro-toxinas peligrosas y
potentes sobre las personas que originan parlisis o debilidad muscular; las esporas
son distribuidas ampliamente en el aire, suelo, ciertos alimentos (conservas, pescados,
etc.); si las condiciones en el ambiente son de anaerobiosis, germinaran; su
accion patgena sobre el organismo seraneuro-paralizante y con una dosis de 10
elevado a -8 (10 nanogramos) de su toxina es suficiente para causar la muerte (es el
veneno mas potentes hasta ahora), que solo se producen en condiciones adecuadas de
anaerobiosis, temperatura en torno a 30C, pH neutro o ligeramente acido y permiten
que germine la espora; sus toxinas son de carcter proteico y termolbiles (se
destruyen a temperatura 100C durante 5 minutos o 70C de 30-60 minutos).
El mecanismo de accin de las toxinas botulnicas => a traves de los alimentos
contaminadosllega
esta
neuro-toxina
al
tubo
digestivo
del
hombre
y producir toxinfeccin
alimentariainicialmente;
de aqu via sangunea y linftica llega hasta sistema nervioso perifrico donde acta en
las terminaciones nerviosas, originando parlisis en el musculo esqueltico y otras
manifestaciones neurolgicas como visin borrosa, fotofobia, sequedad de boca, lengua
y faringe, disfagia, disartria (dificultad al hablar), debilidad de los musculos
(flacidez) incluyendo los respiratorios que puede llegar mortal por fallo respiratorio y
arritmias cardacas (depende de la cantidad de toxina o del germen); su periodo
de incubacin en torno 18-36 horas despus de la ingestin del alimento contaminado
y los cuadros mas graves se originan en un periodo de incubacin inferior a 24 horas.
B.
Clostridium
que
ejercen accin histo-toxica
en mltiples tejidos
Clostridium perfringes - ejercen un efecto toxico importante pero no actan sobre
SNC;
son
Gram+,
anaerobia
estricta,
la nica especie capsuladas,
ampliamente distribuida en el suelo; de aqu a traves de heridas profundas, puede
pasar al hombre produciendo gangrena gaseosa; tambin puede encontrarse en la flora
intestinal; capaz de formar toxinas que actan sobre los tejidos, entero-toxina,
hemolisina,
neuroaminidasa.
El mecanismo de accin => tras la va de entrada (heridas) en condicin anaerobiosis
adecuadas, germinan las esporas y proliferan; es frecuente que se contaminen con otro
tipo de bacterias aerobias que consiguen agotar el oxigeno aumentando las condiciones
de anaerobiosis, se disminuye el pH aumentando el acido lctico y facilitando
la liberacin de las enzimas proteolticas y sustancias toxicas; se producirn los efectos
lesivos y graves sobre los tejidos extendindose a los vecinos, se rompern las
estructuras celulares a nivel de sus membranas, se destruirn las celulas hemticas, las
celulas endoteliales, las membranas de las celulas musculares originando procesos
de dermo-necrosis
con
dao
tisular
(gangrena).
Ademas de provocar la gangrena gaseosa a traves de heridas infectadas, C.perfringes
es tambin el agente etiolgico de una toxo-infeccin alimentaria producida por
la ingestin de carne contaminada provocando cuadros diarreicos y dolor abdominal
leve; existen otros casos mas excepcionales y graves que da lugar a cuadros diarreicos
muy acuosos y sanguinolentos, vmitos y estado de shock producido por C.difficile.

Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico
- Toma de muestra representativa, adecuada y estril en medios especficos de
transporte anaerobiosis con sustancias reductoras (bolsas generadoras de CO2) que
crean atmsferas sin O2 o en una jeringa sin aire (tapando la aguja).
- Se har un examen directo (tincin de Gram) donde se pueden apreciar las formas de
esporas (palillos de tambor); tambin se puede realizar tincin de esporas.
- Se cultivaran en medios de cultivos especficos como ASA (agar sangre
anaerobio); incubacin a 37C en 48 horas en condicin anaerobisis, utilizando
unacampana con un sobre generador de gas CO2, da lugar a la liberacin de H y CO2;
el O2 que existe en el anterior de la campana, se une al H, forman H2O que se
depositan en forma de gotitas en las paredes, tambin hay que introducir un indicador
de
anaerobiosis
(una
tira
reactiva).
- Pruebas bioqumicas => cuando existe crecimiento en el medio anaerobio, se monta
directamente el API en un recipiente/ una caja, tambin anaerobio.

Bacterias anaerobias no formadoras de esporas - crecen en ambientes de bajo

potencial oxido reductor o ambientes microaerfilos; son ampliamente distribuidos en
la naturaleza y muy pocas capaces de producir cuadros patgenos graves al
hombre; gran parte de ellos forman parte de la flora gastrointestinal, vaginal o bucal
del
hombre,
no
ejerciendo
efecto patgeno alguno.
Las
especies
mas
importantes
A.
Bacilos
Gram+ no
esporulados:
- Lactobacillus => microaerfilos, crecen mejor en anaerobiosis; son flora habitual
de laboca, vagina e intestino del hombre; son de gran utilidad a nivel
industrial (produce
acido lctico para
los
yogures);
no
intervienen
en ningn proceso patgeno para
el
hombre.
- Propionibacterium =>
son anaerobios,
pueden
crecer
en
ambientes microaerfilos; forman parte de la flora normal intestinal, tracto urinario y
piel.

- Bifidobacterium =>

es

flora intestinal del

hombre

no

son patgenos.

B.
Bacilos Gram- no
esporulados:
- Bacteroides => son flora intestinal, vaginal y bucal del hombre y se ha asociado en
ocasiones
a procesos
gastrointestinales,
especialmente Bacteroides
fragilis que acta comooportunista.
- Fusobacterium => solo la especie Fusobacterium nucleatum se asocia a
algunosprocesos patgenos en el aparato respiratorio y tracto genital femenino,
de carcter oportunista.
C.
Cocos
Gram+ no
esporulados:
- Ciertos Streptococcus anaerobios que se encuentran frecuentemente en la
floragastrointestinal
y
bucal;
no
son patgenos.
- Peptococcus =>
no
produce
efecto patgeno sobre
el
hombre
D.
Cocos
Gram- no
esporulados:
- Veillonella => forma parte de la flora intestinal y bucal y no son patgenos para el
hombre.
Accin patgena e inters clnico
Salvo excepciones, no son relacionados con procesos patgenos y la patogenicidad que
pudiera desencadenar alguno de ellos depende sobre todo de las circunstancias
del husped (oportunistas);
pueden
producir
infecciones
post-quirrgicas,
complicaciones de escaras o ulceras por decubito, complicaciones de herida en general.
Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico
Toma
de
muestra
en
condiciones
adecuada
(anaerobiosis)
Examen
directo
(tincin de
Gram)
- Se aislaran en medios anaerobiosis (ASA/ANA - agar sangre anaerobio)
Pruebas bioqumicas se
realiza
con
API
en condicin anaerobia

Tema 24 - Espiroquetas (Treponema, Borella y

Leptospira); patologa e identificacin
La familia Espiroquetaceas (con inters clnico para el hombre) - Treponema,
Borrelia y Leptospira; corresponden a especies bacterianas cuya morfologa es
filamentosa, helicoidal o espiral con filamentos axiales relacionados con su movilidad;
presenta una pared celular fina y flexible de lipo-polisacrido y lipo-proteica donde se
encuentran la mayora de Ags especficos de estas; son Gram- (difcilmente se
tie), tambin se pueden visualizar por el microscopio de contraste de fases; presentan
un metabolismo oxidativo y/o fermentativo(aerobias o anaerobias facultativas);
difundidas en las aguas, el suelo y como agentescomensales en las mucosas del hombre
y
animales.
La
familia
Espiroquetaceae
se
divide
en
5
generos:
Genero Espiroqueta =>
espiroquetas
mas
grandes
y
no
existen
especies patgenas para
el
hombre.
- Genero Cristispira => son de tamao algo menor que el Espiroqueta y no

es patgeno para
el
hombre.
- Genero Treponema => son espiroquetas muy helicoidales, muy finas,
pequeas y mviles; son microaeroflicas y presentan un metabolismo fermentativo;
existen
especies patgenas para
el
hombre
- Treponema
pallidum (el
agente etiolgico de
la sfilis).
Genero Borrelia =>
son espiroquetas
mas
grandes
que
Treponema;
son microaeroflicas y presentan pocas espiras que son amplias e irregulares;
su metabolismo es fermentativo y son difciles de cultivar en medios artificiales;
pueden provocar fiebres recurrentes al hombre transmitido por artrpodos.
- Genero Leptospira => son espiroquetas largas, muy finas y con numerosas espiras,
profundas y regulares; es difcil su visualizacin aunque se suele utilizar microscopia
de contraste de fases; son aerobias con un metabolismo oxidativo; se cultivan con
facilidad en medios artificiales; ampliamente distribuidas en la naturaleza,
especialmente en las aguas; pueden parasitar al hombre provocando leptospirosis.

Genero Treponema - son espiroquetas pequeas, finas con un numero de espiras

entre 5-20 distribuidas de forma regular, con gran movilidad; se tie difcilmente con
Gram y se tie mejor con Giemsa o tincion de plata y se visualiza con la microscopia de
campo oscuro y de contraste de fases; no crece en medios de cultivo in vitro y requiere
un medio de cultivo in vivo para crecer (testculo de conejo); crece bien en situaciones
de bajo potencial oxido-reductor (microaerofila), presentando en ocasiones
una respiracin anaerobia y un metabolismo fermentativo; el especie patgena para el
hombre es Treponema pallidum que transmite la sfilis por contacto directo; existen
dentro del genero Treponema especies comensales de las mucosas, tracto urinario,
vaginal, tubo digestivo, etc. que no son patgenos para el hombre y se pueden cultivar.
Treponema pallidum es la especie mas importante por su difusin cosmopolitana;
es el agente causal de sfilis; no son capaces de vivir fuera del organismo humano, ya
que mueren por desecacin; su transmisin es por contacto directo (va sexual) y si no
se detecta a tiempopuede durar toda la vida; mecanismo de accin:
- Periodo primario de la sfilis => comienza tras un primer contacto con lesiones
ricas en treponemas presentes en las mucosas; periodo de incubacin 1090 das (termino medio de 21 das) aparece en la zona genital un chancro primario con
abundantes treponemas, se van diseminando va hemtica y linftica a otras
localizaciones convirtiendo-se
en
unaenfermedad sistmica;
es
frecuente
su multiplicacin en ganglios prximos a la zona genital originando pequeas
tumoraciones (adenopatias); transcurrido un tiempo corto de 2-6 semanas estos signos

desaparecen espontneamente y
entra
en una
fase
silente.
- Periodo secundario o sfilis florida => surge despus de un tiempo entre 2
meses y 2 aos de la fase silente; de forma sbita se produce una espiroquetemia en
general muy florida por las manchas en la piel y en las mucosas, muy ricas en
treponemas y altamente infecciosas; tambin puede surgir excepcionalmente una
forma
eruptiva
como
lesiones
en
otros rganos, fiebre
en
ocasiones, pstulas o ppulas muy
ricas
en
treponemas;
este
cuadro clnico de carcter sistmico remite a las pocas semanas (2-6 semanas),
volviendo
a
entrar
en
una nueva
fase
de
latencia.
- Periodo terciario o sfilis terciaria => surge tras la fase de latencia entre 3-30
aos, una forma muy grave con mal pronostico; el numero de treponemas en sangre es
muy escaso y muy abundante en ganglios, bazo, huesos, sistema nervioso (neurosfilis) y aparato cardiovascular; es frecuente la formacin de granulomas, necrosis,
gomas, parlisis general
progresiva,
aneurisma
artico,
etc.
Resumen de la evolucin de sfilis => Incubacin 10-90 das (termino medio
21 das) - Periodo primario (2-6 semanas) - fase silente (2 meses - 2 aos) - Periodo
secundario/ sfilis florida (2-6 semanas) - fase latente (3-30 aos) - Periodo terciario/
Neuro-sfilis forma
muy
grave
con
mal
pronostico.
Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico del genero Treponema
pallidum
- Treponema pallidum se asla muy difcilmente, no crece en medios in vitro, solo lo
hace en medios in vivo (testculos de conejo) y el diagnostico de la infeccin se
establece durante los periodos primario y secundario mediante muestras de exudados,
condilomas,
etc.
- Examen directo al microscopio de campo oscuro o microscopio de contraste de fases
o microscopio de fluorescencia de una tincin de Giemsa o tincin Nitrato de
plata (sales de plata; es una tcnica difcil de efectuar, reservada a los laboratorios
especializados, til en la deteccin de Pneumocytis carinii, Legionella, Treponema,
hongos,
Rickettsias).
- Pruebas serologcas => se realiza la prueba de la presencia de Acs anti Treponema
pallidum en el suero del paciente con Ags especficos de Treponema pallidum que
presentan una sensibilidad y fiabilidad del 100%; los resultados dependen del periodo
de sfilis en el que se encuentre; tambin se incluyen las inmunofluorescencia
indirecta, as como las de hemo-aglutinacin pasiva partiendo de hemates tratados
con Treponema pallidum que es muy sensible y econmica.

Diagnostico serolgico de las sfilis - existe 2 tipos de pruebas (no treponmicas y

treponmicas)

a) No treponmicas => son de gran sensibilidad y fcil de hacer; se usa para prueba
de screening y si resulta (+), hay que confirmar con pruebas treponmicas; tambin se
utiliza como un seguimiento de la enfermedad; se le llama tambin prueba de
WASSERMANN;
consiste
en enfrentar
el
suero
del
paciente
con
sustancia lipdica "cardiolipina" que no es Ags treponmicos; si existen Acs anti Tp en
el suero, reaccionaran con la cardiolipina (+); pero al no ser la cardiolipina un
Ags treponmicos, puede dar lugar falsos positivo con otras enfermedades; 2 tipos de
pruebas => VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) y RPR (reagina
plasmtica
rpida)
son
pruebas
de aglutinacin con partculas de carbn (darn grumitos
grises).
b)
Treponmicas =>
se
utilizan
como prueba
confirmativas con
varias tcnicas: (1) FTA(tcnica fluorescencia de Acs anti Tp) enfrentando Ags de Tp
con posibles Acs anti Tp en el suero del paciente; (2) FTA abs donde previamente se
absorben posibles Acs naturales anti Tp saprofitos; (3) TPHA (Tp Haemagglutination
Assay) que tiene como base hemaglutinacin y sencillo de realizar (no se necesita
microscopio
fluorescencia); (4) tambin se
puede
utilizar
pruebas
de ELISA para detectar IgM y IgG; todas son pruebas muy especificas; no se utilizan
para
el
seguimiento,
porque
sera
siempre
resulta
(+).
Genero Borrelia - son espiroquetas de mayor tamao con espiras mas amplias e
irregulares con extremos afilados y son mviles; las especies patgenas para el hombre
y
los
animales,originan
fiebres
recurrentes endmicas y epidmicas;
es microaeroflica con un metabolismo fermentativo; se tien con facilidad de Gram- y
se puede cultivar in vitro, pero requiere medios muy especficos; las especies mas
importantes del genero Borrelia, se transmiten por piojos y por garrapatas.
Accin patgena e inters clnico - las fiebres recurrentes son una enfermedad
muy cosmopolita, en ocasiones endmica a condiciones de salubridad muy baja; tras la
picadura del vector, ya sea garrapata o piojo, pasan las borrelias a la sangre
del husped, ayudadas por el rascado que provoca el aplastamiento del piojo
/garrapata, que dar lugar a micro-traumas en la piel y facilitan el paso de dichas
borrelias; despus de unos7 das de incubacin se originan fiebres, dolores musculares,
cefalea, etc; clnica que dura unos 10 das y luego desaparecer, produciendo
posteriormente recurrencias; no es una enfermedad grave y es fcil de tratar,
especialmente con tetraciclinas.

Genero Leptospira - son espiroquetas muy finas con espiras regulares, muy

numerosas y apretadas, con sus extremos ligeramente incurvados y mviles; se

tien dbilmente con Gram, tambin se pueden teir con Giemsa; su metabolismo es
oxidativo (crecimientoaerobio); existe en la naturaleza leptospiras saprofitas y
parsitas; puede originar de forma casual leptospirosis en el hombre con cuadros
febriles;
el
reservorio
son
animales,
consideradas
como zoonosis.

Tema 25 - Rickettsias, Chlamydias y

Micoplasmas (patologa e identificacin)
Genero Rickettsia - son parsitos celulares estrictos (porque su dotacin enzimtica
es muy escasa) de los artrpodos (crecen muy bien en el citoplasma); son coco-bacilos
Gram-; producen en el hombre enfermedades transmitidas por piojos, garrapatas,
pulgas
y caros.
Especies
mas
importantes de
la
familia Rickettsiaceae hay
3 gneros importantes =>Rickettsia, Rochalimaea y Coxiella (Coxiella
burnetti es coco-bacilo
Gram+ que
origina
la fiebre
Q).
Accin patgena e inters clnico:
(1) Tifus exantemtico epidmico - producido por R.prowazekii; mediante
la picadura de piojo; tras el periodo de incubacin de 1-2 semanas,
aparecen escalofros,
fiebres
altas
(40C),
cefaleas,
dolores
generalizados, ndulos inflamatorio de los capilares, arteriolas, vnulas, la piel y
musculos (dificulta la corriente sangunea y en casos graves puede provocar
gangrena en las extremidades); es frecuente la formacin de maculas rosadas y
posteriormente ppulas y
petequiales.
(2) Tifus murino o endmico - producido por R.typhi mediante la picadura de la
pulga, garrapatas y caros; tras el periodo de incubacin de 4-15 das, se produce
fiebres altas, cefaleas, artralgias y mialgias generalizadas con un cuadro clnico leve sin
complicaciones
ni
recidivas como
el
tifus exantemtico.
(3) Fiebres
manchadas
de
las
montaas
rocosas producida
por R.rickettsiitrasmitidas por las garrapatas; tras el periodo de incubacin de 36 das, aparecen fiebres altas, mialgias generalizadas y una mancha negra en la zona de
la picadura; en Espaa la especie mas extendidas es R.conorii, el agente de la fiebre
botonosa o exantemtica mediterrnea, transmitida al hombre por la garrapata (sobre
todo del perro); tras el periodo de incubacin de 2-6 das provoca una mancha negra a
modo de botn en el lugar de la picadura, fiebre, artralgias, mialgias generalizada y
manchas maculo-papulosas; no se suelen complicar y responden bien al tratamiento.
(4) Fiebre Q - producida por Coxiella burnetii mediante inhalacin de esta u
otras(presencia de artrpodos), la va de entrada no se conocen hasta la fecha; tras el
periodo de incubacin de 3 semanas, se produce un estado febril con mialgias
generalizadas
ycuadro clnico leve.
Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico del genero Rickettsia

Se toma 2 muestras de sangre en estadios febriles (cuando hay mas Rickettsia):

- La 1 se centrifuga para obtener un sedimento sanguneo (concentracin alta de
Rickettsia); se usa para realizar varias tinciones p.ej. May-Grunwald-Giemsa (las
rickettsias aparecen de color purpura), tincin Gram (resulta negativo para Rickettsia y
positiva para Coxiella burnetii), tincin inmunofluorescencia y estudios de
microscopia electrnica (para observar); el sedimento tambin se usa para sembrar en
medios
de
cultivo
celular
o
embriones.
- De la 2 se obtiene sueros para pruebas serologcas (buscando ttulos de Acs), con
tecnicas inmunofluorescencia, seroaglutinacin o ELISA.

Genero Chlamydia - se consideran mas prximos a virus que a bacterias;

son parsitos intracelulares estrictos (carecen de mecanismo biosinttico autosuficiente) del hombre y animales; son cocos pequeos de Gram-, inmviles; poseen
ADN y ARN y su multiplicacin es por divisin binaria (a diferencia de virus); es capaz
de vivir en medios intracelulares durante mucho tiempo sin presentar
una sintomatologa clara lo que facilita la cronificacin de procesos infecciosos.
Especies mas importantes - dentro de la familia Chlamydiaceae:
- Chlamydia psittaci => parsito intracelular de animales y excepcionalmente del
hombre(tras
la inhalacin de
heces
de pjaros infectados),
provocando brotes neumnicos de
distinta
gravedad.
- Chlamydia
trachomatis => parsito intracelular
del
hombre,
provocandoinfecciones sistmicas o locales de distinta gravedad y afectando
especialmente
a los
genitales
y
a
los
ojos.
Accin patgena e inters clnico - se multiplican en el citoplasma de
la clula que parsita, presentando un ciclo con 2 tipos celulares diferentes:
- En 1er periodo formara una clula densa o corpsculo elemental con gran
resistencia a la sequedad, lo que permitir la dispersin de Chlamydia; es la forma
infectiva.
- En 2nd periodo formara una clula mas grande de menor densidad

o corpsculo reticulado, que es responsable de la divisin binaria y por tanto

de crecimiento
clamidias.
El proceso del ciclo => la forma infectiva (corpsculo elemental) penetra en
la clula que
va
a
parasitar
ayudado
por
los
Ags especficos,
se
produce infeccin celular, se forma una vescula citoplasmtica que bloqueara los
mecanismos de defensa de la propia clula; a partir de aqu este corpsculo elemental
aumenta su tamao, su pared se hace mas fina y permeable permitiendo el paso de
complejos enzimticos, ATP y otras sustancias que van a necesitar de
la clula que parasitan; el citoplasma de la clamidia se hace mas denso y esponjoso y
aparece la segunda forma, donde comienza a multiplicarse por divisin binaria.
Cuadros clnicos de Chlamydia
trachomatis:
- Tracoma => tras un contacto directo se produce una infeccin crnica en el epitelio
conjuntival y corneal, siendo frecuentes las recadas y sobre infecciones
con evolucin lenta hacia la ceguera; frecuente en edades infantiles.
- Conjuntivitis neonatal => aparece entre la primera y la segunda semana despus del
nacimiento; surge una conjuntivitis purulenta al neonato, asociada a infecciones
genitales por clamidias en la madre; puede evolucionar positivamente o hacia
lesiones anlogas al Tracoma.
- Linfogranuloma venreo => es una infeccin que se trasmite por contacto venreo.
Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico del genero Chlamydia
Debido al elevado riesgo de infeccin en el laboratorio al manipular clamidias se suelen
utilizar metodos indirectos (serolgicos) a veces tambien se realiza examenes
citologicos
en
cultivos especficos.
Se
toman
muestras
de
secreciones
oculares
y/o
genitales
- Se realiza un examen directo que incluyen una tincin de Giemsa y de Gram.
Se
realizan tcnicas citolgicas
- Se realizaran exmenes indirectos mediante tcnicas serologcas (la mas frecuente
ELISA) que son mas seguras y fiables; existe un kit para buscar clamidias.

Genero Micoplasma - es uno de los microorganismos mas pequeos existentes

en bacteriologa y se caracteriza por no contener pared celular => sensible a

la presin omotica del

medio
(se
lisan
facilmente),
su morfologa es pleomorfismo y resistente a ciertos antibiticos cuya mecanismo
de accin se establece en la pared bacteriana; se dividen por divisin binaria y vivir de
forma independiente y crece bien in vitro a partir de medios artificiales enriquecidos;
se encuentra extendidos en la naturaleza; son comensales de la mucosa del hombre;
existe especies patgenas como Micoplasma pneumoniae que afecta al aparato
respiratorio.
Especies
mas
importantes dentro
de
la
familiaMicoplasmataceae estn los gneros Micoplasma y Ureaplasma; solo unas
10 especies pueden producir algn efecto patgeno en las membranas celulares de las
mucosas oro-farngeas y uro-genitales; la mas importante para el hombre
es Micoplasma pneumoniae(produce neumonas); el Ureaplasma urealyticum es otra
especie patgeno que se asocia a ETS junto con el Micoplasma hominis.
Accin patgena e inters clnico
- Su infectividad se relaciona con su adherencia (debido a una glicoprotena especifica)
a los epitelios de las mucosas; su pleomorfismo puede adoptar formas filamentosas y
alargadas que aumenta la superficie de contacto a las estructuras epiteliales a las que
se une; una vez adherida, los cilios de las celulas epiteliales que tapizan la mucosa se
paralizan y provoca alteraciones metablicas en dichas celulas epiteliales.
- Cuadros clnicos => cuadro pulmonares y mas raramente cuadros genitales o urogenitales, siendo Micoplasma pneumonia es mas importante como el agente causal
mas
frecuente
de
las neumonas atpicas.
- En casos excepcionales se han podido aislar Micoplasma hominis y Ureaplasma
urealyticum en procesos uretrales y genitales como salpingitis, vaginitis, prostatitis,
cervicitis,
etc.
(son
casos
muy
raros)
Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico
- Se toman muestras de la mucosa farngea, secreciones uretrales, exudados, muestras
de
esputo,
de
sangre,
etc segn la patologa.
- Se realiza un frotis de la muestra que se puede observar en campo oscuro con
nigrosina, al microscopio de contraste de fases o con la tincin de Giemsa (se
tie dbilmente).
- Se siembra en medios especficos y con un alto grado de humedad para evitar
la desecacin.
- Se realiza pruebas bioqumicas => fermentacion de glucosa, prueba de arginina,
ureasa,
etc.;
existe
un
kit
de
la deteccin micoplasmas.
- Metodos serolgicos son mas rpidos, mas fiables y mas utilizados en la actualidad
(inmunofluorescencia y ELISA).

Genero Campylobacter - son bacilos Gram- cortos con forma de coma, espiral o
alas de gaviota (en cultivos jvenes); son microaeroflicos, mviles por un nico flagelo
polar; no fermentan los carbohidratos, oxidasa+ y catalasa+; habitan el tracto
gastrointestinal de muchos animales; en el hombre se asocian a infecciones
gastrointestinales (via de entrada oral/ digestiva), fundamentalmente, y cada vez en
mayor grado a infecciones extra-intestinales (meningitis, endocarditis, artritis sptica),
especialmente
en
pacientes
con
SIDA.
Especies clnicamente importantes para el hombre - C.jejuni, C.coli y C.
laridis sonagentes etiolgicos de diarrea; C.fetus subsp. fetus produce septicemia en
pacientes
inmuno-suprimidos.
Aislamiento a partir de "heces" - la siembra inmediata en medios selectivos a la
toma de muestra; si se tiene que posponer, se utilizaran medios de transporte
especiales (Cary-Blair o Campy-Thio) donde se mantiene viables; el cultivo de
campylobacter
tiene
que
cumplir
3
requisitos =>
(1) empleo de medios selectivos p.ej. "Campylosel" contiene sangre de cordero con
ATB y antifngico o "Skirrow" contiene sangre de caballo con ATB
(2) uso de atmsfera reducida de O2/ microaeroflica se consigue mediante sistema
de evacuacin-reemplazo hasta lograr 5% de O2, 10% de CO2 y 85% de N2 o campanas
anaerobios
con
sobres
comerciales
que
generan
la atmsfera deseada.
(3) temperatura de 42C en aislamiento inicial entre 24-48 horas (para inhibir la flora
fecal acompaante), despus pasa a 37C el 3 da; las placas han de incubar hasta 72
horas antes de descartarse como negativas; a esta temperatura se consigue
el mximo aislamiento
deC.jejuni
y
C.coli.
Si pretende aislar otras especies de campylobacter distintas a C.coli y C.jejuni => ha de
emplear
medios
selectivos
sin
cefalosporinas, incubacin a
37C, atmsfera microaeroflica,
incubacin de
7 das.

Identificacin - los campylobacter termoflicos dan lugar a colonias grises, incoloras,

mucosa y no hemolticas; se les hace una tincin Gram (bacilos Gram- con forma de S
en cultivo joven y en cultivo viejo pueden dar formas cocoideas); se monta un fresco
para observar la movilidad; son oxidasa y catalasa positivos; para diferenciar entre las
especies se puede montar un API o se realizan varias pruebas => (1) crecimiento a
distintas
temperaturas, (2) sensibilidad
al
acido
nalidixico
y
a
la
cefalotina (3) hidrlisis del hipurato (se introduce una tableta dentro de un tubo
inoculado, dar +
si
cambia
a
color
amarillo).
Campylobacter jejuni => crecimiento a 42C, hipurato+, sensibilidad a Nalidixico y
resistente
a
Cefalotina
Campylobacter coli => crecimiento a 42C, hipurato-, sensibilidad a Nalidixico y
resistente
a
Cefalotina
Campylobacter fetus => no crecen a 42C, hipurato-, resistente a Nalidixico y sensible
a
Cefalotina
Campylobacter laridis => crecimiento a 42C, hipurato-, resistente a ambos Nalidixico
y
Cefalotina
Patogenia y patologia - C.jejuni es la especie con mayor frecuencia se asocia a
infeccion en el hombre (gastroenteritis con eliminacin de sangre en heces), se
adquiere por via oral (comida y bebidas contaminadas) o por contacto con animales
infectados; sensible a pH gstrico (debe ingerirse una concentracin elevada de ellos
para que se produzca infeccion); se multiplica en el intestino delgado, invade el epitelio
y produce inflamacin; en ocasiones puede pasar al torrente circulatorio y
desarrollarse un cuadro de fiebre entrica; la diarrea acompaada de dolor abdominal
agudo, dolor de cabeza y fiebre; la infeccin es autolimitada resolviendose en una
semana sin necesidad de ATB; los casos graves se trata con eritromicina.

Helicobacter Pylori - se aislaron por 1 vez (1982) del estomago de pacientes con
lesiones gstricas y ulcera pptica; son bacilos curvados Gram- con forma de espiral y
gran actividad ureasa; se les denomino Campylobacter pyloridis, posteriormente se
rectifico a Campylobacter pylori y cuando demostraron que difera morfologicamente
del genero Campylobacter, se propuso la creacin de un nuevo genero
Helicobacter que se incluyo la especie de Helicobacter pylori; se trata de una
especie de reciente descubrimiento, implicada en procesos de infeccin gstrica.
Metodos
de deteccin de H.pylori
- Metodos directos => las muestras mas idneas para el aislamiento de H.pylori son
las biopsias de las zonas pliegues de la mucosa gstrica del antro, cuerpo y fundos;

se remitirn directamente al laboratorio para proceder a su cultivo inmediato en

medios especficos
para H.pylori; una porcin de
la
biopsia
se invertir en
la realizacin de
un
frotis
para
la tincin Gram
o
Giemsa.
- Incubacin => las placas deben incubarse en condiciones reducidas de O2 (5%), de
10% CO2 y 85% N2. Se consigue mediante sistema de evacuacin-reemplazo o usando
jarras de anaerobios con sobres comerciales que generan dicha atmsfera; la
temperatura optima es de 37C (no se desarrolla a 25C, 30C ni 42C); en aislamiento
primario, es conveniente incubar las placas hasta 7 das; Las colonias son de 1-2 mm
de dimetro,
translucidas
y
poco hemolticas.
- Identificacin => son oxidasa+, catalasa+, ureasa+, hipurato- (algunas cepas son
capaces de virar la urea de Christensen en minutos); es sensible a la cefalotina y
resistente al nalidixico (algunas cepas pueden ser sensibles); no son fermentadora de
carbohidrato;
crece
a
37C.
Metodos
indirectos:
- Prueba de la urea rpida (de Christensen) => un trozo de biopsia se inocula en un
medio
con
alta concentracin de
urea
y
un
indicador
de
pH.
- Prueba de la urea respiratoria => el paciente ingiere urea marcada y tras un periodo
de tiempo se mide el nivel de CO2 espirado; se puede emplear urea marcada con C13,
que se detecta con un espectrofotmetro de masas y urea marcada con C14 detectada
con un contador de centelleo (un mtodo diagnostico rpido y no invasivo, pero
requiere
un
equipo
especial
par
al
lectura).
- Prueba serologa => para detectar Acs utilizando la tcnica de ELISA.
Patologa existen
pruebas
claras
de
que H.pylori esta implicado
en
diversas patologas gstricas, pero se cuestiona como la causa de dichas infeccin;
parece claro que es agente etiolgico de gastritis aguda; se piensa que tambin pueda
tener un papel en la gastritis crnica activa; en las ulceras ppticas se asla 100% de
pacientes con ulcera duodenal y 77% de ulcera gstrica; parece ser que su presencia no
es suficiente para desarrollar la ulcera; no esta claro el papel que desempea en la
dispepsia no ulcerosa, en el reflujo gastro-esofgico y en el carcinoma gstrico; hasta
50% de la poblacin adulta de >60 aos es portadora de este microorganismo; se
desconoce su modo de transmisin; se ha propuesto una posible adquisicin del
mismo por contacto con animales, regin periodontal y transmisin persona-persona
(ninguno estn demostrados)
Sensibilidad antibitica - H.pylori es sensible in vitro a un gran numero de ATB,
pero, el tratamiento in vivo es difcil; nunca se emplea mono-terapia porque no es
eficaz, suelen administrarse varios frmacos juntos y aun as no se consigue erradicar
al m.o. por lo que son frecuentes las recadas tras la supresin de la terapia.

Tema 26
- VIROLOGA CLNICA (caractersticas general
es de los virus)
Introduccin - virus es un parsito intracelular estricto que requiere infestar
una clula para sintetizar sus componentes y ensamblar nuevos viriones; son de muy
pequeos tamaos (filtrables) y se caracteriza por su mecanismo
de replicacin, organizacin y composicion; virologa clnica se remonta al siglo XX y la
composicion de un virus fue determinada por Schlesinger en 1933; en los ltimos aos
se han descubierto otros agentes infecciosos mas simples como los viroides y los
priones;
- los viroides => moleculas circulares de ARN de bajo Pm sin cubierta proteica que
causan enfermedades a las plantas, infectar a los hombres y animales;
- los priones => son protenas que parecen estar codificadas por genes celulares
y actan como seales reguladoras en las celulas que invaden, resistentes a los
procesos fsico-qumicos que inactivan a los virus y no producen respuesta inmune o
inflamatoria en el husped; provocan prurigo lumbar de las ovejas y cabras
(scrapie), encefalopata espongiforme en las vacas y enfermedades neurodegenerativastransmisibles en el hombre (p.ej. CreutzfeldtJacob /encefalopata espongiforme progresiva y sndrome de Gerstman-StrausslerStreinker y el kuru); la patogenia (de todas) se caracterizan por desordenes progresivos
como ataxia (dificultad motrica), demencia, deterioro cognitivo y motor; tras un
periodo de incubacin largo (meses o aos), aparecer los sintomas clnicos; el
tropismo de la infectividad es SNC, seguido por el bazo y ndulos linfticos; en el
cerebro se detecta acumulacin anormal de protena-prion en el genoma
del husped; los priones son resistentes a las proteasas e induce
una degeneracin neuronal.

Concepto de virus - es un bloque de material gentico (ADN o ARN) rodeado de una

cubierta protena (cpside) que le sirve como vehculo para su transmisin; algunos
presenta membrana lipdica (envuelta) que se adquieren de la
membrana citoplasmtica de la clula infectada durante el proceso de salida; los virus
envueltos tienen un matriz proteica que sirve como puente entre la nucleocpside y la
envoltura; carecen de organelas citoplasmticas para crecer y multiplicarse, por lo que
necesitan la maquinaria de una clula husped, pero si poseen algunos enzimas
(nucleasas, transcriptasas, etc.); virines la partcula viral completa (genoma
+ nucleocpside); se clasifican por el tipo de husped que parasitan (virus animales,
vegetales, bacterifagos)

Estructura y morfologa de los virus - son de tamao entre 20-25 nm hasta 200300 nm; su observacin requiere un microscopio electrnico.
- Estructura del genoma => ADN o ARN mono-catenario o bicatenario;
la mayora de virus ARN tienen genomas mono-catenaria excepto
los reovirus/rotavirus (bicatenario); los virus ADN suelen ser bicatenario,
excepto parvovirus (mono-catenario); los genomas (core o ncleo) pueden ser
moleculas lineales o circulares nicas o segmentadas en varios fragmentos.
- Estructura de la cpside => su funcin es de proteger el genoma del medio
extracelular y facilitar la entrada al interior de la clula; estn compuestas de
subunidades proteicas repetidas (capsmeros) que a su vez estn compuestas de
moleculas proteicas (protmeros); segn la disposicin que adopten
los capsmeros /la cpside, se clasifican en virus de simetra helicoidal (normalmente
son virus ARN), icosaedrica (20 caras triangulares y 12 vrtices) y compleja.
- Estructura de la envoltura => los lpidos de la envoltura es lipoprotica y
procede de la membrana clula infectada, pero las protenas suelen ser
virales desplazados a las protenas celulares originales; en algunos
casos, las protenas incluyen una matriz (protena M) que contacta/ engancha con
la nucleocpside; los virus envueltos tienen estructuras glucoproticas (espculas)
importantes para los procesos de adsorcin y penetracin al interior de la clula.

Ciclo vital de los virus - las estrategias de replicacin varan dependiendo de la

estructura del virus y de su material genmico, pero en general conlleva pasos de
=> adsorcin/ adherirse - penetracin - decapsidacin - replicacin - ensamblaje
- liberacin.
- Adsorcin => la unin de la partcula viral a la superficie de la clula; no
requiere energa y no depende de la temperatura; intervienen moleculas proteicas de la
superficie del virin (protenas de unin) y protenas de la superficie de la membrana
de la clula diana (protenas receptoras); en los virus envueltos, la protena de
adherencia viral son las espculas de la capa externa de la envoltura.
- Penetracin => tras ser adherido, se penetra el virin completo o solo el genoma y
las polimerasas entran en el citoplasma celular, esto se lleva a cabo por 3
mecanismos: penetracin directa, endocitosis o fusin; penetracin directa => la
membrana solo permite la entrada del genoma viral (ocurre en virus sin envuelta p.ej.
fagos); endocitosis=> los viriones adsorbidos, quedan rodeados por la
membrana citoplasmtica de
la clula husped formndose una vescula endosmica (mecanismo mas utilizados de
losvirus sin envuelta); fusin => utilizado por los virus envueltos; existen 2 maneras
de fusin: en los paramyxovirus, su envuelta se fusiona con la
membrana citoplasmtica directamente y la nucleocpside se libera al interior del

citoplasma; en el resto de virus envueltos, la envoltura viral se fusiona con la

membrana celular formndose una vescula endosmica que posteriormente libera
la partcula viral hacia el citoplasma.
- Decapsidacin => se degrada la cpside viral para que el genoma viral pueda
liberarse e iniciar la transcripcin y la traduccin; en la mayora la penetracin y
la decapsidacin se produce a la vez.

- Replicacin => es la fase donde se produce la sntesis de todas las macromoleculas virales; la clula husped debe proporcionar la energa y los medios
suficientes que a veces puede afectar su propio metabolismo celular, pero en otros
casos apenas se alteran; es esencial que los ARNm transcriban la informacin viral y
la replicacin de la informacin gentica y que posteriormente mediante los
componentes celulares se traducen para fabricar protenas que se necesitan.
a. Replicacin de virus ADN bicatenario => tras la adsorcin y la penetracin,
el ADN viral es liberado y penetra en el ncleo + ARN polimerasas celulares => ARNm
transcrito y traducido para la sntesis ADN viral; para el proceso de traduccin =>
ARNm emigra al citoplasma celular y es traducido para formar las protenas de
la cpside => que posteriormente son transportadas al ncleo para ensamblar
el virin completo que sern liberados por lisis celular; la excepcin dar al virus
ADN poxvirus (grande y de simetra compleja) que realiza el proceso
de transcripcin y traduccin en el citoplasma celular utilizando su propia ARN
polimerasa dependiente del ADN viral, ya que no pueden utilizar ARN de
la clula husped que se localiza en el ncleo.
b. Replicacin de virus ADN mono-catenario (fagos, parvovirus) =>
necesitan un intermediario replicativo para formar ADN bicatenario que puede
transcriben el ARNm (ARN polimerasa celular necesita como plantilla una ADN
bicatenario); como resumen: ADN mono-catenario + ADN polimerasas de
la clula husped => produce ADN bicatenario + ARN polimerasas celulares => forma
ARNm
c. Replicacin de virus ARN mono-catenario de polaridad (+) => ARN
viralpenetrado en el citoplasma de la clula husped es reconocida de inmediato como
ARNm por los ribosomas, los cuales la captan e inician
su traduccin a protenas virales y tambin un enzima RNA polimerasa
(transcriptasa); RNA polimerasa producida + ARN viral (se utiliza como molde)

=> replicacin del ARN viral (todo ocurre en el citoplasma independientes del ADN
del husped).
d. Replicacin de virus ARN mono-catenario de polaridad (-) => su ARN de
polaridad (-) complementa el ARNm que es de polaridad (+); mediante su propio ARN
polimerasas sintetizara el ARNm que despus le servir de molde para la sntesis de
nuevo ARN de polaridad (-) y tambin para la traduccin de sus protenas utilizando la
maquinaria celular.
e. Un caso especial de Retrovirus => virus ARN mono-catenario de polaridad (+)
queposeen un enzima transcriptasa de reversin (transcriptasa inversa / retrotranscriptasa); su genoma ARN + retro-transciptasa => produce ADN de polaridad (-)
+ (la misma) retrotranscriptasa => origina ADN bicatenario que se integran al ADN
celular y permanece alli durante tiempo prolongado; En un momento dado el ADN
integrado se reactiva y es transcrito a ARNm vrico por la polimerasa del husped y
entonces, se completa el ciclo replicativo.

- Ensamblaje y liberacin => se puede producir tanto en el ncleo como en el

citoplasma, tras la replicacin del genoma viral y la transcripcin de
las protenas virales, los viriones se ensambla y se libera de la clula husped; consiste
en la unin ordenada del acido nucleico y de las protenas para formar
la nucleocpside, dando lugar a un virin viable; la liberacin de los virus sin envuelta
(desnudos) se produce por lisis celular; en caso de virus envueltos, salen al exterior
por gemacin de una zona de la membrana nuclear o citoplasmtica (depende si son
virus ADN o ARN); la zona de la membrana por donde
se producir la gemacin, adquiere primero las espculas y las protena de la matriz
(codificadas por el virus), que atrae a la nucleocpside, fusionndose a la
membrana, formndose la envuelta y liberndose el virin al exterior; en caso
de poxvirus(mas grandes y complejos), estos pueden sintetizar sus propias envueltas;
en caso deretrovirus, el virus no se libera de la clula sino que se integra en su genoma
y permanecer as largo tiempo o de por vida; el proceso de ensamblaje y liberacin es a
veces ineficaz, formndose partculas no infectivas.

Taxonoma vrica - los virus se dividen en familias, genero, especie o tipo y segn su
forma del genoma, tamao, forma, estructura, sintomatologa clnica que producen,
tropismo celular, etc; segn el tipo de genoma que contienen y su estructura => se
clasifica en virus ARN y virus ADN.
Virus ARN
1. De simetra cubica o icosaedrica sin envuelta - mono-catenario de polaridad
(+) que utiliza su propio ARN como mensajero (pueden ser inmediatamente
traducidos por la clula husped ya que no se necesita transcribir ARNm) con
la excepcin de Reoviridae(bicatenarios) que utilizan su propia ARN polimerasa para
transcribir ARNm; todos se ensamblan en el citoplasma de la clula husped y
son resistentes al ter.

- Familia Reo-viridae => tamao intermedio (60-80 nm de dimetro),

los nicos bicatenarios; el mas importante para el hombre es el Rotavirus (provoca
problemas diarreicos), tiene forma redonda.

- Familia Calici-viridae => son pequeos (35-39 nm), tienen poca importancia en
microbiologa clnica; el mas importante /patgeno para el hombre es el virus de
Norwalk(productor de gastroenteritis) y el virus de Hepatitis E (su inclusin no es
definitiva)

- Familia Picorna-viridae => son pequeos (20-30 nm); los gneros mas importantes
son losEnterovirus (>70 enterovirus que incluyen el Poliovirus, Echovirus,
Cosxackievirus y el virus de la hepatitis A) y los Rhinovirus (>100 rhinovirus).

2. De simetra cubica o icosaedrica con envuelta - mono-catenario

de polaridad (+), todos se ensamblan en el citoplasma de la clula husped y
son sensibles al ter.
- Familia Retro-viridae => son grandes +/- 100nm, de elevado Pm, contienen trazas de
ADN y poseen transcriptasa inversa (retro-transcriptasa) en su dotacin; adquieren su
envoltura en la membrana citoplasmtica de la clula husped; se engloban todos los
virus ARN tumorales; se divide 3 subfamilias: Oncoviridae (causan tumores y
canceres), Spumaviride yLentiviridae (dentro de esta estara VIH).

- Familia Toga-viridae => son de 40-70 nm y adquieren su envoltura en la

membrana citoplasmtica; se incluyen la mayora de los arbovirus (transmitidos
por artrpodos - los arbovirus pertenecen a numerosas familias como Togaviridae,
Flaviviridae, Arenaviridae, Reoviridae); se incluyen tambin los no
arbovirus: Alphaviruscon virus Sindbis su principal tipo, Pestivirus con el virus de
la diarrea mucosa como su principal tipo y Rubivirus con rubeolavirus su principal
tipo.

- Familia Flavi-viridae => son de 40-50 nm y adquieren su envoltura en las

membranas intra-citoplasmticas (antes se incluyen dentro de la familia Togaviridae y
los han separado por su menor tamao y por el lugar de su ensamblaje que ocurre en
el retculo endo-plasmtico); incluyen 2 gneros de importancia clnica:
(1) Flavivirus (antes llamados arbovirus del grupo B) que destaca el virus de
la fiebre amarilla y del dengue; (2) virus de la Hepatitis C; actualmente se
incluye de manera no definitiva al virus de la hepatitis G.

3. De simetra helicoidal - todos son envueltos, mono-catenario de polaridad

(-) que utiliza su propia transcriptasa (ARN polimerasa) para transcribir
ARNmensajero; se ensamblan en el citoplasma y son sensibles al ter.
- Familia Rhabdo-viridae => de forma bala o bastn; el dimetro del cilindro +/- 70nm
con longitud de 175nm; adquieren su envuelta en la membrana citoplasmtica; el
genero mas importante es virus de la rabia.

- Familia Paramyxo-viridae => de tamao 150-300nm,

son pleomrficos predominandoformas esfricas rugosas y filamentosas; adquieren su
envuelta en la membrana citoplasmtico; se
incluyen 3 gneros: Paramyxovirus (virus de la parotiditis/paperas,
parainfluenza tipos 1,2,3,4A,4B...), los Morbilivirus (virus del sarampin, entre
otros) y losPneumovirus (virus sincitial respiratorio - causan bronquiolitis en nios
pequeos).

- Familia Orthomyxo-viridae => morfolgicamente semejante a la familia

Paramyxoviridaepero mas pequeos 80-120nm, parecidos tambin a la familia
Rhabdoviridae (los 3 proceden de un ancestro comn); adquieren su envoltura en la
membrana citoplasmtica; se incluyen2 gneros: los virus de la influenza o de la gripe
tipos A, B y C.

- Familia Arena-viridae => de tamao 50-300nm, adquieren su envoltura de la

membrana citoplasmtica; algunos producen infecciones virales "lentas"; el mas
importante es virus de la fiebre de Lassa (en Africa).

- Familia Bunya-viridae => de tamao 80-100nm, de forma esfrica, adquieren su

envoltura en el aparato de Golgi; la mayora de los gneros son arbovirus.

- Familia Corona-viridae => de tamao 80-130nm, morfolgicamente se parecen a

Orthomyxovirus, pero sus proyecciones en la superficie a modo de ptalos o "corona
solar"; adquieren su envoltura en las membranas intra-citoplasmticas; la mayora de
los gneros son virus respiratorios de vas altas.

Virus ADN
a. De simetra cubica o icosaedrica sin envuelta - su genoma es ADN
bicatenario con excepcin de Parvo-viridae (mono-catenario); todos se ensamblan en
el ncleo y sonresistentes al ter
- Familia Adeno-viridae => de tamao mediano 70-90nm; se conocen 34 tipos que
afectan al hombre y mucho de ellos afectan el tracto respiratorio.

- Familia Parvo-viridae => de tamao muy pequeo 18-26nm con genoma ADN monocatenario; la mayora no tienen importancia clnica, excepto parvovirus B19,
pertenece al genero Parvovirus que causa eritema infeccioso.

- Familia Papova-viridae => son de tamao pequeos 45-55nm con ADN de tira
circular; el genero mas importante es el Papilomavirus o virus de las verrugas con
66 tipos depapilomavirus humanos (PVH); los Papovavirus en general
producen enfermedades latentes y crnicas y algunos son oncognicos.

b. De simetra cubica o icosaedrica con envuelta - son bicatenarios y todos se

ensamblan en el ncleo con excepcin de Irido-viridae que se ensamblan en el
citoplasma.
- Familia Herpes-viridae => de tamao medio +/-100nm, adquieren su envoltura en la

membrana nuclear y son sensibles al eter; de los 80 virus que existen, solo 8
tienen inters clnico para el hombre y se divide en 3 subfamilias:
(1) Alphaherpesviridaecon gneros importantes el virus Herpes simples tipo 1 y 2 y el
virus Varicella-zoster; (2)Betaherpesviridae con gneros Citomegalovirus al
citomegalovirus humano (Herpesvirus humano tipo 5) y al Herpesvirus humano tipo6,
y al genero Roseolovirus con elherpesvirus humano tipo 7;
(3) Gammaherpesvirus que incluyen virus de Epstein-Barr(herpesvirus humano tipo
4) que provoca enfermedad de Beso, pertenece al generoLimphocriptovirus.

- Familia Hepadna-viridae => de tamao 40-50nm, adquieren su envoltura en el

citoplasma, son resistentes al ter y poseen un genoma ADN parcialmente bicatenario;
el mas importante es el virus de la hepatitis B.

- Familia Irido-viridae => de tamao grande 130-300nm, sensibles al ter, adquieren

su envoltura en la membrana citoplasmtica y tambin se ensamblan en
el citoplasma (a diferencia de otros); no tienen importancia clnica para el hombre,
pero si en veterinariacomo el virus de la fiebre porcina africana.

c. De simetra compleja
- Familia Pox-viridae => son virus animales mas grandes 230x400nm de forma
ladrillo o ovoide; se caracteriza como la nica familia de virus ADN que se replica y
ensambla en el citoplasma, pues contienen una RNA polimerasa ADN dependiente (no
necesita la maquina nuclear), de hecho su replicacin es posible en celulas anucleadas (sin ncleo); sonresistentes al ter y poseen una doble envuelta (una la
adquieren en el aparato Golgi y la otra en la membrana citoplasmtica; los mas
importante son virus de la viruela, virus de la vacuna o vaccinia y virus del molluscum
contagiosum.

Principales familias de virus de inters clnico

1. Virus ARN (mono-catenario)
1.1. Familia Reo-viridae (tamao mediano 60-80nm - icosaedrico - sin envuelta - se
ensamblan en el citoplasma) - contiene 6 gneros, nicamente cabe
destacar Rotavirus)
Rotavirus (forma de rueda - el nico bicatenario) => descubiertos en 1973 en nios
con gastroenteritis; el nico con importancia clnica (agente causal
degastroenteritis espordica y epidmica en lactantes y nios; la infeccin suele
ser asintomtica en neonatos; afecta principalmente a nios entre 6-24 meses; la
prevalencia mxima en invierno y raramente en verano; periodo de incubacin 13 das, precediendo los vmitos a la diarrea que suele mantenerse de 4-5 das; el virus
se detecta en heces (dura bastante horas fuera del husped)
1.2. Familia Calici-viridae (pequeos 35-40 nm - icosaedrica - sin envuelta - de
polaridad+) - se ensamblan en el citoplasma) => tiene poca importancia
en clnica, posibles agentes causales de gastroenteritis en cualquier da del ao y a
cualquier edad; es el agente Norwalk (virus que causan gastroenteritis en EEUU) que
ahora esta dentro de Parvovirus - Parvoviridae; se incluye de forma no definitiva el
virus de Hepatitis E.
1.3. Familia Picorna-viridae (virus muy pequeos 20-30nm - icosaedrica - sin
envuelta - de polaridad+) - es una familia importante y una de las que mayor numero
de virus presenta, destacando 2 gneros Enterovirus y Rhinovirus.
Enterovirus - se asocian con distintos sndromes clnicos como parlisis,
meningitis asptica, encefalitis, miocarditis, pericarditis, pleurodinia, herpangina,
infecciones agudas del tracto respiratorio y fiebre aftosa; son habitantes transitorios

del tracto digestivo humano; existen >70 sero-tipos, siendo el tipo 72 es el virus de
la Hepatitis A; todos se diseminan por va fecal-oral y la mayora son asintomticas; los
mas importantes sonPoliovirus, Echovirus y Coxsackievirus;
- Los virus de poliomielitis /Poliovirus son tres (tipos 1,2 y 3), mas temidos
normalmente por la parlisis flcida (de cintura para-bajo) y deformidades aunque
son complicacin infrecuente; la vacuna es de Sabin (virus
atenuados), tambin Salk (virus inactivados); la vacuna de poliomielitis se administra
a los nios de 2-4-6-18 meses.

- Los virus Echo y Coxsackie tienen distintas manifestaciones (muy ubicuo/ de todo
tipo).
Para el diagnostico debe recurrirse al cultivo; el aislamiento de un enterovirus de heces
o de faringe no indica necesariamente una relacion causal con el cuadro clnico, y
deben descartarse otras causas; por el contrario si se trata de LCR.
Rhinovirus - agentes etiolgicos mas frecuentes del resfriado comn (rinitis agudas);
existen >100 tipos
1.4. Familia Toga-viridae y Familia Flavi-viridae (toga=envuelta - icosaedrica de polaridad+ - se ensamblan en el citoplasma); ambos son de forma icosaedrico, virus
de RNA mono-catenario con envuelta; se incluyen la mayora de los arbovirus;
losv.Togaviridae (pequeo 40-70 nm, adquiere su envuelto en la
membrana citoplasmtica de la clula mientras los v.Flaviviridae (40-50 nm, lo
adquieren de retculo endo-plasmtico; dentro de Togaviridae estn los arbovirus y
los gneros no arbovirus como Alphavirus(sindbis), Pestivirus y Rubivirus (rubeola)
dentro de Flaviviridae esta el virus Hepatitis C y otros que producen enfermedades
como fiebre amarilla, dengue, de genero flavivirus que pertenecen a los arbovirus tipo
B (transmitidos por artrpodos).
Virus de la Rubeola del genero Rubivirus (no es un arbovirus) - descrito hace >200
aos; consta la importancia como agente causal de malformaciones congnitas desde la
epidemia de 1940 en Australia (un oftalmlogo australiano constato un elevado
numero decataratas congnitas y ceguera asociados a esta enfermedad);
la infeccin suele ser benigna y auto-limitada; sintomas => procesos
respiratorios superiores leves, erupcin eritematosa y linfadenopata sub-occipital y
retro-auriculares; en adultos se puede complicar con artritis transitoria o artralgias;
rara vez produce encefalitis o purpura trombocitopnica; muy importante
la infeccin en gestantes por posibles aparicin de sordera neuro-sensitiva,

alteraciones cardacas, cataratas, retraso del crecimiento y sintomas encefalticos;

la incubacin dura 14-21 das; diagnosticopor mtodo serolgico (tcnica de ELISA)
para detectar IgG y sobre todo IgM en las embarazadas y un resultado positivo
indica inmunizacin frente al virus; actualmente es poco frecuente debido a
la vacuna obligatoria que se incluye en latriple vrica (paperas, sarampin y
rubeola) que se pone a los nios de15 meses (suele dar inmunidad permanente) y una
dosis de recuerdo a los 6 aos (solo las nias); a los 11 aos solo se dan vacuna de
varicela.
Clnica de Rubeola => empieza con eritema en la cara y se extiende hacia abajo (es
un eritema maculo papuloso); es menos llamativo que de la sarampin; dura +/3 das y puede haber enantema palatino.

1.5. Familia Retro-viridae (de tamao grande +/- 100nm - icosaedrica - con
envuelta - de polaridad+ - se ensamblan en el citoplasma) => poseen enzima
transcriptasa inversa / retro-transcriptasa; a esta familia pertenece el virus de la
inmuno-deficiencia humana VIHque se estudia aparte.
1.6. Familia Orthomyxo-viridae (de tamao 80-120nm - helicoidal - envuelta - de
polaridad (-) y se ensamblan en el citoplasma) - en1918 tras la Guerra Mundial, mato
mas personas que la propia guerra; esta compuesta por los distintos tipos de virus
influenza/ Gripe (tipo A, B y C).
Virus Influenza /la gripe espaola (empez en Espaa) - causan
gripe, infeccin respiratoria aguda epidmica normalmente durante mes de
noviembre-abril; la va de transmisin es area, periodo de incubacin 1-4 das,
seguido de clnicas tipo respiratorias superior, mas grave en los ancianos; se
realizan campaas de vacunacin todos los aos (sobre todo a los ancianos y pacientes
bronco-pulmonares), ya que presentan gran variabilidad antignica segun el
serotipo que causa la epidemia (tiene gran poder mutagnico); existe 3 tipos => A, B
y C (A y B causan epidemias de importancia); los influenza A se subdividen segn la
diferente composicion antignica (en la envoltura) de la hemaglutinina y la
neuraminidasa; el diagnostico es clnico; recientemente se introduce metodos de
diagnostico de muestras clnicas de antgenos virales; el de mayor
importancia clnica es virus respiratorio sincitial (VRS); para el diagnostico rpido se
usa la inmuno-fluerescencia directa en aspirados naso-faringeos, esputos o biopsia
de pulmn;existe un kit con Ags virales para detectarlos.

1.7. Familia Paramyxo-viridae (de tamao grande 150-300nm - helicoidal envuelta - de polaridad (-) y se ensamblan en el citoplasma) =>
morfolgicamente parecida al de anterior/ Orthomyxoviridae; todos ellos son causas
importantes de enfermedad respiratoria en los nios; se incluyen
3 gneros Paramyxovirus (virus de la parotiditis/paperas y
parainfluenza), Morbilivirus (virus del sarampin), Pneumovirus (virus sincitial
respiratorio)
Virus Parainfluenzae (VPI) del genero Paramyxovirus - los 5 tipos de VPI
producen infecciones del tracto respiratorio, siendo el 1 y el 2 los principales causantes
de laringo-traqueobronquitis, el 3 de bronquiolitis y neumnia en nios (segundo
agente despus del VRS), el 4 y el 5 causan infecciones mas suaves; el diagnostico
es clnico.
Virus respiratorio sincitial (VRS) del genero Pneumovirus - es la causa mas
importante de neumnia y bronquiolitis en nios y recin nacidos; produce un amplio
espectro de infecciones, siendo la mas frecuente es el resfriado comn con abundante
rinorrea; VRS esmuy contagioso y se manifiesta en forma de brotes invernales; la
inmunidad no es completapor lo que se dan las re-infecciones (mas suaves); Es
importante que la excrecin de virus se mantenga durante 2 o 3 semanas (mas tiempo
para los inmunodeprimidos), por lo que al ingresar un nio en el hospital durante 1 o 2
semanas, puede ser contagioso todava (es el agente mas frecuente
de infeccin nosocomial en pediatra); las infecciones graves se trata con la
ribavirina (inhibe la sntesis del ARN viral); el diagnostico rpido es la
inmunofluorescencia en secreciones respiratorias.
Virus del Sarampin - causa una enfermedad aguda, febril, exantemtica, de
gravedad variable que afecta a nios de 5-9 aos, se contagia por va respiratoria y
conjuntival;sintomas clnico => los primeros das como un catarro naso-oculofaringo-laringeo, luego aparece fiebre, cara rubicunda, congestin de mucosa y a los 34 das aparece "manchas Koplik" (manchas blanquecinas diminutas delante del 1 y 2
molar) dura un par de das; empieza aparecer exantema, primero retroauricularmente, despues se extiende a todo el cuerpo, las palmas y las plantas de los
pies mas tenue en zonas distales, sube a la fiebre y el exantema tenue se hace muy
eritematoso; tras 2-3 das mejora bruscamente y desapareciendo los signos en el orden
del aparecimiento (dar inmunidad permanente); el diagnostico es por
metodos serolgicos.

Virus de la parotiditis - es una enfermedad endmica con incidencia todo el ao; es

rara en nios < 1 ao, gracias a la inmunidad de la madre; afecta a nios de 5-14 aos,
se transmite por va area y por objetos introducidos a la boca (dar inmunidad
permanente); clnica => tras 24horas de clnica inespecifica, aparecern dolor
y tumefaccin de retro-parotidia y odo, aumento de fiebre, puede haber afectacin de
nervio facial leve y bilateral; complicacin => meningitis, orquitis, pancreatitis o
artritis; diagnostico es por va serolgico; el diagnostico es por metodos serolgicos.

1.8. Familia Rhabdo-viridae (de tamao grande en forma

de bastn, dimetro 70nm y longitud 175nm - helicoidal - con envuelta - de polaridad
(-) y se ensamblan en el citoplasma) => caracterstica tpica de su morfologa es forma
de "bala"; el mas importante es el causante de la rabia o hidrofobia (se atraganta con el
agua).
Virus de la rabia - causa enfermedad infecciosa aguda del SNC, de gran
importancia histrica por los trabajos de Pasteur; existe la obligacin de vacunar todos
los aos a perros y gatos, ya que es una zoonosis en la que el hombre es
un eslabn irrelevante; existen 2 formas epidemiolgicas => urbana (lo adquieren
perros y gatos no inmunizados) y salvtica (los zorros); normalmente el virus esta
presente en la saliva de animales rabiosos, transmitindose por mordeduras (son
fuentes de infeccin humana); el diagnostico sola realizarse postmortem, mediante
la observacin de los cuerpos de Negri (cerebro); tambin se pueden cultivar en
laboratorio; clnica de animales => cambian de carcter, se vuelven caprichosos,
pierden apetito, ingerir objetos no engullibles autllan con ronca, irritabilidad creciente
y muerden a personas y animales; mueren en 2 semanas; clnica de humanos =>
la incubacin 1-3 meses depende del lugar de la mordedura; el virus se propaga por los
nervios a una velocidad 1mm/hora; comienza con la alteracin del sueo, dolor de la
mordedura, tambin parestesias/ hormigueos de la zona, trastornos respiratorios (en
la voz), posteriormente aparece espasmos farngeos tras la ingestin de lquidos o solo
de verlo (hidrofobia), salivacin espumosa y espasmos en las extremidades (basta con
pequeos estmulos de luz o ruidos, para provocar lo); las personas suelen morir
por parlisis en pocas horas tras la afectacin de bulbo-raqudeo; el cuadro normal es
de 3-6 das, despus mueren.

1.9. Familia Corona-viridae (de tamao 80-130nm - helicoidal - envuelta - de

polaridad (-) y se ensamblan en el citoplasma) => adquieren su envoltura (con
proyecciones a modo de ptalos/ corona solar) en las membranas intracitoplasmticas; escasa importanciaen patologa, nicamente causan el
resfriado comn y pueden estar involucrados en cuadros de gastroenteritis.
2. VIRUS ADN (bicatenario)
2.1. Familia Parvo-ridae (de tamao muy pequeo 18-26nm - icosaedrico - sin
envuelta - se ensamblan en el ncleo - resistentes al eter) => son de tamao muy
pequeo y sonlos nicos que presentan ADN de una sola hebra (mono-catenario);
algunos tienen importancia en veterinaria y solo destaca uno como patgeno humano
(Parvovirus B19).
Parvovirus B19 (estaban incluidos en virus Norwalk) - fue vinculado al eritema
infecciosoen 1983; es benigna y afecta nios en edad escolar; presentan
una erupcin eritematosa en las mejillas (cara enbofetada) y un exantema en
extremidades y tronco (respeta a las palmas, las plantas y los labios); los adultos son
propensos a artropata asociada, que se resuelve en 2-4 semanas; diagnostico
por mtodo serolgico y metodos de ELISA.

2.2. Familia Papova-viridae (de tamao pequeo 45-55nm - ADN de tira circular icosaedrico - sin envuelta - se ensamblan en el ncleo - resistente al ter) => son
unos viruses oncognicos (efecto cancergeno), producen enfermedades latentes
y crnicas, causantes verrugas genitales o condilomas (se asocian a carcinoma de
crvix) y papilomas(Papilomavirus/ virus Papiloma humano); el diagnostico es de
tipo clnico y serolgico; prevencin => se vacunan a las nias de < 14 aos.
2.3. Familia Adeno-viridae (de tamao mediano 70-90nm - icosaedrico - sin
envuelta - se ensamblan en el ncleo - resistente al ter) => producen
principalmente patologa al tracto respiratorio, ocular y gastroenteritis; las infecciones
respiratorias solo son significativas en nios <6 aos; el diagnostico se realiza
mediante clnicas y tcnicas serologcas.

2.4. Familia Hepadna-viridae (de tamao pequeo 40-50nm - ADN parcialmente

bicatenario - icosaedrico - envueltos - se ensamblan en el ncleo - resistentes al ter)
=> su envuelta se adquiere en la membrana citoplasmtica y se ensamblan en
el ncleo; en esta familia se encuentra virus hepatitis B que se estudiara a parte.
2.5. Familia Herpes-viridae (de tamao medio +/-100nm - icosaedrico - envueltos
- se ensamblan en el ncleo - sensibles al ter) => adquiere su envuelta de la
membrana nuclear y se ensamblan en el ncleo; destaca 3 subfamilias =>
Alphaherpesviridae (VHS 1y2, virus Varicella-Zooster), Betaherpesviridae (CMV y
Roseolovirus), Gammaherpesvirus (VEB/Limphocriptovirus); todos los virus producen
infecciones latentes, capaces de reactivarse.
Virus Herpes Simple (VHS) - producen infecciones latentes que se reactivan con o
sin lesiones que sirven de fuente de infeccin para individuos susceptibles (los virus de
Herpes no se cura, solo se acantona y se puede reactivar); existen 2 tipos => VHS1 (tropismo por lesiones por encima de la cintura y suele ser leve) y VHS-2 (se
encuentra principalmente en los genitales, transmitindose por va venrea); cada
individuo tiene un tropismo estable;suele ser bucal, comienza con hormigueo y luego
aparecen vesculas, costra y desaparece en +/- 1 semana; VHS-1 se transmite
por secrecin oral, infeccin a nivel peri-oral, tambin otras zonas como los ojos; VHS2 normalmente daran infeccin genital y se contrae por va sexual; en EEUU en ciertas
capas sociales, es la enfermedad venrea mas frecuente; en mujer gestante se puede
transmitir al bebe va placenta o canal de parto o en los primeros das de vida; en
general estos virus tienen capacidad oncognicos como VEB (virus Epstein-Barr),
puede producir cncer cervical; el diagnostico se realiza mediante la tincin de Giemsa
de celulas raspadas de lesiones herpticas, para observar las caractersticas de las
celulas gigantes multi-nucleadas; tambin se cultivan en SHELL-VIAL.

Citomegalovirus (CMV) - producen infeccin asintomtica, pero con gran

importancia en huspedes inmuno-comprometidos; las infecciones se pueden clasificar
en congnitas, peri-natales o pos-natales (antes o despus del parto); es la causa mas
frecuente de infeccin congnita; el CMV se ha detectado en saliva, orina, leche
materna, semen, por lo que su transmisin es variada; tambin se transmite
por transfusiones o trasplantes; en pacientes inmuno-competentes, normalmente
son asintomtica, si da clnica va a ser semejante a mononucleosis
infecciosa (virus Epstein-Barr), comofiebre, adenopatias, hepatomegalia; en
paciente inmunodeprimidos es diferente, en general dar fiebre, neumonitis, colitis,
esofagitis, hepatitis, infeccin congnita y perinatal, puede dar retraso mental, ictericia
y sordera; el diagnostico => por serologa buscando Acs anti CMV (metodos

ELISA), cultivo en SHELL-VIAL (artificial) ya que no se pueden cultivar en celulas

vivas.
Virus Varicela-Zster (VVZ) - la varicela y el herpes zster representan diferentes
manifestaciones clnicas de un mismo virus; la varicela es mas frecuente en nios y se
caracteriza por fiebre y exantema vesicular generalizado; es una infeccin primaria
mientras su re-activacin producir el herpes zster, aparece normalmente en
adultos (cuando hay una disminucin de la inmunidad) que consiste en
una erupcin dolorosa circunscrita de lesiones vesiculares, acompaada
de inflamacin de las races dorsales de los nervios raqudeos o de los ganglios
sensitivos craneales; los estadios son => macula - ppula - vescula - umbilicacin costra; caractersticamente existe estados evolutivos todos mezclado a la vez y prurito
sobre todo en el tronco y cara (menos en las extremidades); el diagnostico sera
tipo clnico y tambin por los distintos metodos en laboratorio => examen directo
previa tincin Giemsa por microscopio electrnica, por serologa (ELISA) y por cultivo
celular.

Virus de Epstein-Barr (VEB) - es uno de los virus humanos

mas ubicuos, linfotrpico y oncognico; la infeccin primaria suele pasar en la
infancia, aumentando su sero-prevalencia 60-70% en jvenes y 80-90% en
adultos; el sndrome clnico mas frecuente es lamononucleosis
infecciosa (enfermedad de beso) que presenta fiebre, adenopatias, faringitis y
linfocitosis con linfocitos atpicos; VEB tambin se ha asociado a carcinoma nasofarngeo y al linfoma de Burkitt; diagnostico => la prueba de Paul Bunnell es
la deteccin de Acs heterofilos y tambin por mtodo de ELISA.

Herpesvirus Humano 6 (HHV-6) - es un virus de muy reciente aparicin, se ha

aislado en sndromes linfo-proliferativos y se ha vinculado

al exantema sbito (elevacin brusca de la temperatura hasta 40C de 2-4 das,

seguida de un descenso rpido que coincide con la aparicin de un exantema maculopapular que persiste 1-2 das; el diagnostico sera clnico y serolgico.
Herpesvirus Humano 7 - se descubri en 1989 (reciente); tiene tropismo por los
linfocitos T, provocando exantema sbito; se investiga si tiene relacion
con sndrome de fatiga crnica (que lo padecen sobre todo mujeres mayores).
2.6. Familia Pox-viridae (ADN bicatenario - doble membrana) - son de tamao
grande 230-400nm, con forma de ladrillo, se replica en citoplasma y se ensamblan en
el citoplasma;el mas importante es el virus de la viruela, virus de Moluscum
Contagiosum y virus de la Vaccinia;
- Viruela se contagia por inhalacin y tras 15 das aparece fiebre, mialgias
y erupcin ppula vesicular dura y luego evoluciona a pstulas y a la curacin; a veces
puede provocar muerte por exantema hemorragica o una sobre infeccin bacteriana.

- Virus de la Vaccinia es muy prximo al virus de la viruela; en individuos

inmunodeprimidos puede provocar complicaciones, pero en los inmuno-competentes
es auto-limitado; es importante en los principios de
la vacunacin (Jennen); ltimamente se investiga su utilizacin como vector para
actuar como vacuna contra virus de Hepatitis B, Herpes simple y VIH, ya que su
genoma es susceptible de poder insertarle secuencias de genes que
codifiquen protenas de otros virus y que se expresaran posteriormente cuando el
virus se replique, con lo cual tendramos Acs contra estos virus.

- Virus de Moluscum Contagiosum - provoca enfermedad cutnea benigna,

contagiosa que pueda adquirir por compartir objetos o contacto sexual; aparece en
epidermis lesiones nodulares blancas de aspecto nacarado de 2-10 mm que son

indoloras; cualquier traumatismo provoca su contagio; desaparece entre 2 meses y 1

ao.

Esquema de Virus Respiratorio

HEPATITIS VIRAL - es una enfermedad sistmica que afecta fundamentalmente el

Hgado; se conocen 7 virus de la hepatitis, denominados A,B,C,D,E,F y G que
pertenecen cada uno a familias y gneros distintos, pero que tienen todos un
tropismo heptico (no tienen relacin taxonmica); existen adems otros virus que
producen hepatitis, comoCitomegalo virus y el virus de Epstein-Barr; se pueden
clasificar segn la principal va de transmisin y la tendencia a la cronicidad en 2
grandes grupos(1) transmisin fecal-oral y no cronifican: VHA, VHE y
VHF (2) transmisin parenteral y pueden cronificar: VHB, VHC, VHD y VHG.
Virus de la Hepatitis A (VHA) - aislado en 1973, pero se sospech mucho
antes; virus ARN de la familia Picornaviridae (de pequeo tamao 20-30nm,
icosadrica, sin envuelta, polaridad+) dentro del gnero Enterovirus, el tipo 72; la
mayora de infecciones son aguda sin cronificarse (<1% fulminante); se encuentra en
las heces durante el periodo de incubacin(hasta 2 semanas).

Transmisin - se disemina por la ruta fecal-oral (estrecho contacto persona-persona)

con la implicacin de agua y alimentos que pueden causar brotes epidmicos; la mayor
excrecin del virus en heces se da en las semanas previas a la aparicin de la ictericia,
sobre todo en la fase tarda de la incubacin; otras vas de transmisin del virus son
posibles pero poco probables; existe casos durante todo el ao, con un pico en otoo.
Sintomatologa clnica suele ser menos grave que la hepatitis B; en general, la
infeccin es asintomtica y la gravedad aumenta con la edad; el periodo de incubacin
20-45 das, a continuacin suele aparecer fiebre, mialgias, fatiga, ictericia, anorexia,
dolor de cabeza o dolor en epigastrio y aumento de las transaminasas (GPT, GOT) y
hepatomegalia.
Diagnostico requiere la confirmacin del laboratorio; se observ el virus por la
primera vez por Feinstone en 1973 y es cultivable, pero se utiliza la serologa basada en
la respuesta inmunitaria; el mtodo ms utilizado es ELISA detectando Acs IgMVHA
en su fase aguda; tambin se pueden detectar Ags virales en heces (detectar Acs total
de IgG y IgM no tiene utilidad clnicamente); IgM suele durar 6 meses; IgG confiere
inmunidad y la mayor parte de nuestra poblacin de >40 aos los tienen; hasta la
fecha no se han descrito casos de cronicidad.
Prevencin las medidas ms importantes son la higiene personal, lavado y
desinfeccin de manos y objetos contaminados; no es necesario el estricto aislamiento
del paciente mientras se mantiene las medidas de desinfeccin-esterilizacin, cloracin
y nivel higinico-sanitarias; inmunizacin pasiva => se dispone una inmunoglobulina
eficaz tanto paraprofilaxis pre-exposicin (se estudia la relacin coste-eficacia antes de
utilizarla/ solo si viajan a zonas endmicas) como post-exposicin; inmunizacin
activa => existe una vacuna con buenos resultados (virus inactivados) que se pone al
mes, 6 meses y al ao (3x).

Virus de la Hepatitis B (VHB) es un virus ADN de la familia

Hepadnaviridae (ADN parcialmente bicatenario, icosadrica con envuelta, resistentes
al ter), de gran importancia socio-sanitaria y distribucin mundial (250
millones portadores asintomtico 1% desarrollan cirrosis heptica o carcinoma
hepato-celular que son complicaciones ms importantes); primeros casos se
describieron en 1833 en Bremen (Alemania), por la administracin de la vacuna de la
viruela que contiene suero humano, pero hasta los aos 40-50 no se distingui de la
hepatitis A; en 1965 Blumberg descubri el Ag Australia y se identific el virus.

Estructura se distinguen una serie de estructura del virus que dan lugar a
los marcadores serolgicos:
-Ag de superficie => HBsAg o Ag Australia (marcador de infecciosidad, codificado por
el gen S) que induce a la formacin de HBsAc o anti-HBs que confiere inmunidad.
-Ag del core o nucleo-cpside => HBcAg codificado por el gen C que no se detecta en
sangre pero si su HBcAc (marcador epidemiolgico que se mantiene de por vida);
IgM-HBcAc se detecta como marcador ms fiable de hepatitis B aguda.
-Ag soluble => HBeAg que induce al HBeAc (HBeAg es el marcador de pronstico de la
enfermedad, ya que se correlacionan con el nivel de replicacin del virus; HBeAc es
unmarcador de buena evolucin).
-Adems se distinguen su genoma ADN y una polimerasa.
- El virin completo se denomina partcula de Dane, ya que existen formas incompletas
en sangre (como p.ej. HBsAg).
Infeccin por VHB la mayora son sub-clnicas/ asintomtica (50-80%) y solo se
detectan en controles serolgicos; la mayora de las infecciones sintomticas son auto
limitadas y se resuelven en menos de 6 meses (Hep.aguda); la lesin heptica puede
ser nula o leve o llegar a casos de hepatitis fulminante (> de 6 meses se pueden
cronificar); lasintomatologa clnica es similar a la de Hepatitis A; un periodo
de incubacin es de 1-6 meses; entre 5-10% de las infecciones se hacen persistentes y
se mantiene de por vida (como portador asintomtico o sintomtico); en la mayora de
ocasiones la funcin heptica y la histologa son normales, pero en otras ocasiones dan
lugar a sndromes hepatitis crnica persistentes (HCP) y hepatitis crnica activa
(HCA); HCP es menos progresiva que HCA (puede ser ms grave y desembocar en
cirrosis).

Epidemiologia existen reas hiper-endmicas, endemia media y baja (Espaa est

en baja); el nico reservorio importante es el hombre que transmite el virus por
contacto ntimo (va sexual, parenteral y vertical-perinatal) y mediante objetos
personales o materiales de hospitales (familiares y personal sanitario corre un mayor
riesgo); la existencia de HCP presenta un reservorio estable para el virus y asegura su

supervivencia indefinida que se detecta en lquidos corporales (sangre, heces, orina,

bilis, lagrimas, semen, leche materna, sudor, secreciones vaginales, LCR, liquido
sinovial y sangre de cordn);
Marcadores en la infeccin aguda auto-limitada (en el orden de
aparicin):
-HBsAg (aparece antes del 1 mes y desaparece antes de 6 mes)
-HBeAg (aparece el 1 mes y desaparece antes del 3 mes)
-DNA viral (aparece despus del 1 mes y desaparece al 3 mes)
-Anti HBc (aparece entre 1-2 mes; Anti-HBc IgM desaparece antes del 5 mes =>
Hepatitis aguda)
-Anti HBe (aparece al 3 mes)
-Anti HBs (aparece antes del 7 mes)
Prevencin es la medida ms eficaz para combatir la infeccin; es un virus muy
contagioso cuando hay exposicin parenteral; existe inmunizacin
pasiva (gammaglobulina hiper-inmune eficaz en situaciones de pre y post-exposicin )
y inmunizacin activa (vacuna de HBsAg que se administra universalmente a 0-1-6
meses que produce respuesta inmunitaria de 90-95%).

Virus de la Hepatitis D (VHD) descubierto en 1977; es un virus ARN incompleto

/defectivo que requiere HBsAg para su replicacin (adquieren su envuelta del virus B y
si no hay infeccin de por VHB no la hay por VHD).
Tipos de infeccin:
1-Coinfeccin => infeccin simultneamente por ambos virus (VHB y VHD); el curso
natural de VHB no se modifica; al resolverse la infeccin de VHB, re resuelve tambin
la de VHD; clnicamente la hepatitis es ms grave y la tasa de hepatitis fulminantes es
mayor (hasta 20%).
2-Sobreinfeccin => cuando el VHD sobre infecta a portadores crnicos de VHB; aqu
si se modifica el curso natural de VHB y la mayora de las sobreinfecciones (70%)
desembocan en hepatitis crnica y acaban en cirrosis entre 15-20 aos.
El pronstico de VHD depende de marcadores de replicacin del virus (anti-HBe) =>
puede acabar en hepatitis crnica o cirrosis; cuando no hay marcadores
de replicacin => puede evolucionar a la curacin.

Virus de la Hepatitis C (VHC) es de reciente descubierto (1988 - aunque se

sospech desde hace mucho tiempo) del que quedan an muchos interrogantes por
resolver; en actualidad se sabe que VHC es responsable del 80-90% de los casos de
hepatitis post-transfusional y del 20-50% de los hepatitis espordica; es un virus del
tamao medio dentro de la familia Flaviviridae (virus ARN icosadrica pequeo de
tamao 40-50nm con envuelta, de polaridad+ y sensibles al ter); se distingue
regiones para la envoltura (E), el core (C) y otras no estructurales (NS).
Infeccin por VHC se diseminan fundamentalmente por la va parenteral; es la
causa ms frecuente de hepatitis post-transfusional, hepatitis espordica y
ampliamente distribuido entre ADVP (adicto a la droga de va parenteral), pacientes en
dilisis y hemoflicos; se puede transmitir por contacto sexual o convivencia con
portadores (menor importancia que Hep.B);la clnica es similar a la de la hepatitis B;
25% cursan con ictericia y la tasa de mortalidad es <1%; el curso es indolente y
prolongado; el inicio no es muy brusco, es frecuente las recurrencias, 50-70% tienden a
cronificar y 20-25% acaban desarrollando cirrosis.
Prevencin tratar todo tipo liquido corporal como potencialmente
infeccioso; todava no se dispone inmuno-profilaxis; un paciente con VHC negativa no
significa que no lo padece, porque la sensibilidad de las tcnicas ms utilizadas no es
100% fiable; si se sufre un accidente en el laboratorio o en la prctica clnica con sangre
anti-VHC+, se debe realizar un protocolo de seguimiento serolgico de la
persona; existen evidencias de que VHC puede estar implicada en cncer heptico.

Virus de la Hepatitis E (VHE) se descubri en 1983 y es responsable de

la epidemias por transmisin fecal-oral en India, Paquistn, frica del Norte y Mjico
(pases de baja salubridad); el curso es corto y parece ser que se puede transmitir
parenteralmente, pero no transfusional-mente; el virus todava no est catalogado, se

parece ms a los calcivirus da lafamilia Calciviridae (virus ARN icosadrica de tamao

pequeo 35-40nm sin envuelta, de polaridad+); clnica => aunque no se cronifica al
igual que VHA, tiene un pronstico peor (la mortalidad 1-2%), ms grave en gestantes
del 3 trimestre del embarazo (mortalidad de 20%); la habitual va de transmisin es a
travs del agua de bebida.

Virus de la Hepatitis G (VHG) se transmite por va parenteral; esta relacionado

con virus de la familia Flaviviridae (virus ARN icosadrica de tamao pequeo 4050nm, con envuelta de polaridad+); provoca aisladamente un cuadro benigno, pero
puede dar una coinfeccin con el VHB y VHC con mayor tendencia a la cronicidad.
Virus de la Hepatitis F (VHF) se transmite por va entrica (fecal-oral)
SEROLOGIA DE LAS HEPATITIS VIRICAS (1993)
Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis A la mayora de
infecciones son aguda sin cronificarse (<1% se fulmina); se encuentra en las heces
durante el periodo de incubacin (hasta 2 semanas); su deteccin con fines
diagnsticos no se emplea rutinariamente.
-Ac Anti-VHA IgM => siempre es positivo en el inicio de la sintomatologa clnica
(hasta 3-6 meses); se usa como marcador de infeccin aguda; en Ag viral es detectado
solamente en el hgado y no se utiliza para el diagnstico.
-Ac Anti-VHA IgG => su presencia demuestra un contacto previo con el virus (se
mantiene durante largos periodos de tiempo).
Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis B la evolucin
clnica es variable (desde asintomtica y anictrica hasta una enfermedad aguda que se
puede complicar hacia la cronicidad, la cirrosis o forma fulminante fatal); es evidente
su relacin con el carcinoma hepato-celular; la determinacin cualitativa y cuantitativa
de ciertas protenas virales (Ags) y de los Acs nos sirve para evaluar la situacin actual
y pronosticar el futuro de la infeccin.
-Ag de superficie HBs Australia (HBsAg) => se sintetiza en el citoplasma del
hepatocito; debido a que los hepatocitos fabrica un exceso de estos, una parte es
liberada a la sangre y puede ser detectada durante el periodo de incubacin (es el 1
marcador que aparece, incluso 2-6 semanas antes de que aparezca los sntomas,
aunque pueda haber de 5-10% de hepatitis aguda sin este marcador), en la fase aguda
de la enfermedad y en el estadio crnico; si la evolucin es favorable desaparecer a los
3-6 meses de la enfermedad; por el contrario, si se mantiene ms de 6-8 semanas

despus o si no existe una disminucin significativa de su ttulo, es indicio de mal

pronstico y de evolucin a la cronicidad.
-Ac anti-HBs => es el indicador de recuperacin de la enfermedad y el ultimo en
aparecer(+/- a los 3 meses de su evolucin); persiste durante mucho tiempo
neutralizando al virus y confiriendo proteccin; en los individuos vacunados es el nico
marcador presente.
- Ac anti-HBc => Ag HBc pertenece a la cpside y no se detecta serolgicamente, ya
que no se encuentra libre, sino en el virus entero; solo se detecta Anti-HBc; es el 1 Ac
que aparece en la enfermedad, detectable con los primeros sntomas de la enfermedad
en la fase aguda y en la crnica (entre 3-5 semanas despus de Ag Australia y es el 4
marcador en hacerse positiva); puede significar una infeccin pasada o curada dada la
larga persistencia de estos Acs en el suero (su positividad confirmada en solitario no
asegura la proteccin frente a la enfermedad).
-Ag e (HBeAg) => es parte del Ag core; proteolticamente degradado y antignicamente
diferente; es el 2 marcador, detectable en la fase aguda y en algunas formas de
enfermedad crnica en las que histolgicamente se corresponde con hepatitis crnica
activa (HCA); su valor clnico se funda en su excelente correlacin con la presencia de
replicacin viral y viremia; la sangre con HBeAg (+) se debe considerar como
infecciosa; su estudio es obligatorio en todos los sueros de HBsAg (+).
-Ac anti-HBe => es el 5 marcador; su aparicin indica buena evolucin y una baja
infectividad del paciente; en la mayora de los casos es detectable poco antes de que
desaparezca HBsAg, pudiendo encontrarlo (+) durante varios aos despus de la
infeccin.
-DNA viral libre (VHB-DNA) => es el 3 marcador; su deteccin en el suero mediante
la hibridacin no es una tcnica de rutina, a pesar de tratarse de un marcador muy
sensible tanto de la presencia del virus como de su actividad replicativa; el VHB-DNA
es positivo en un elevado nmero de pacientes HBeAg (+).

Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis D

1- Antgeno delta (HDcAg) => aparece fugazmente en sangre en la primo infeccin
y su utilizad clnica es muy limitada.
2- Anticuerpos Anti-Delta (Anti-HD IgM) => es el marcador ms importante que
aparece despus de la aparicin del Ag y se mantiene positivo a bajos ttulos a un
tiempo limitado si la evolucin es favorable; persistir su positividad a ttulos altos en
casos que evolucionan a la cronicidad.
3- Anticuerpos Anti-Delta IgG (Anti-HD IgG) => aparecen ms tarda y se mantiene
positivo durante largos periodos de tiempo; su deteccin indica solamente contacto
con el virus.
Esquema evolutivo:

-Coinfeccin de VHB y VHD = Ag Australia (+), Anti-HBc IgM (+) y AntiHD IgM (+)
-Sobre infeccin de VHD en paciente con VHB = Ag Australia (+), Anti-HBc IgM (-) y
Anti-HD IgM (+)
4- RNA Viral (HD-RNA) => la positividad por tcnicas de hibridacin o PCR indica
presencia del virus.
Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis C
-Anticuerpos Anti-VHC => se detecta empleando Ags sintticos o
recombinantes; pruebas confirmatorias de Acs Anti-VHC => se detectan por
mtodo Western Blot para ver las bandas.
-RNA viral (VHC-ARN) => no se suele hacer porque la epidemia es corta.
Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis E se estn
comercializando pruebas que detectan Ag y Acs especficos (IgG y IgM) mediante
tcnica de ELISA.
DIAGNOSTICO DE LA INFECCION
A-Hepatitis Aguda
Marcadores de rutina (los que se suelen pedir al laboratorio):
VHA => anti-VHA IgM
VHB => HBsAg o Ag Australia y HBc IgM
VHC => anti-VHC (totales)
VHD => anti-VHD IgM (en pacientes ADVP)
Criterios generales de interpretacin:
-La presencia de anti-VHA IgM => es diagnostica de infeccin aguda por VHA.
-La presencia de HBsAg y anti-HBc IgM => es diagnostica de infeccin aguda por
VHB;
-La presencia simultnea de anti-VHD IgM y anti-HBc IgM asociada a hepatitis
aguda => se considera diagnostica de coinfeccin aguda por ambos VHB y VHD; la
presencia de anti-VHD IgM y HBsAg en ausencia de anti-HBc IgM => indica sobre
infeccin por VHD en un portador crnico de VHB. En cualquier caso, dada la
situacin epidemiolgica actual en Espaa, no parece recomendable la bsqueda
rutinaria de la infeccin delta en pacientes ADVP.
-La seroconversin de anti-VHC es un criterio fiable para un diagnstico de infeccin
aguda por VHC (cambio de negativo a positivo); la seroconversin suele retrasarse mas
de 3 meses desde el comienzo de los sntomas, por lo que requiere el estudio de
muestras de seguimiento al menos hasta el 6 mes; no se ha demostrado que la
deteccin de anti-HVC IgM sea de utilidad en el diagnstico de la hepatitis C aguda.
Criterios de interpretacin en pacientes ADVP las tasas de seropositividad
para VHB (anti-HBc total) y VHC (anti-VHC) en individuos ADVP superan el 80%;
entre los ADVP crnicamente infectados por VHB (positivos para HBsAg), la
seropositividad para VHD (anti-VHD total) se aproxima a dicho porcentaje; es
frecuente que los ADVP se hallen crnicamente infectados por uno o ms de dichos
agentes en un episodio de hepatitis aguda, resultando imposible precisar su etiologa.

B-Hepatitis Crnica
Marcadores de rutina:
VHB => HBsAg y anti-HBc total (IgM + IgG)
VHD => anti-VHD total (en pacientes ADVP positivos para HBsAg)
VHC => anti-VHC
Criterios de interpretacin:
-La presencia de HBsAg y anti-HBc total asociada a hepatitis crnica => es diagnostica
de hepatitis B crnica; la presencia adicional de anti-VHD total => indica una sobre
infeccin crnica por ambos VHB y VHD.
-La presencia de anti-VHC asociada a hepatitis crnica => es altamente indicativa de
hepatitis C crnica, aunque no es un diagnostico seguro; la deteccin de ARN viral en
suero mediante PCR ayuda a establecer el diagnostico, pero un resultado negativo
aislado no lo descarta, ya que la viremia es intermitente en muchos casos; dado el alto
costo de mtodos de confirmacin de anti-VHC, se considera que una re comprobacin
del resultado positivo mediante un segundo mtodo de cribado (mtodo screening con
tcnica de ELISA) que utilice Ags obtenidos por tecnologa diferente, es suficiente para
establecer la presencia de anti-VHC en pacientes con hepatitis crnica.
VIH o SIDA
Descubrimiento del virus se sospech desde 1981 en 5 casos de neumona
porPneumocystis carinii en varones homosexuales previamente sanos y va
aumentando el nmero de casos y se fue asociando esta inmunodeficiencia adquirida
al sarcoma de Kaposi; en junio de 1982 se contabilizaron 439 casos y en EEUU se
emite un informe para definir los casos de SIDA; en febrero del mismo ao Montagnier
expone la hiptesis de un retrovirus linfotropico pudiera ser el agente causante del
sndrome; en Mayo de 1983 se aislo por primera vez el virus por Montagnier en
Francia a partir de un ganglio linftico de un paciente con linfadenopatia persistente
(LAV) y Gallo en EEUU de un enfermo de SIDA (HTLV-III).

El virus es un virus ARN de la familia Retroviridae, subfamilia

Lentiviridae (=incubacin lenta >10 aos) con tipos 1 y 2; esta familia de virus se
caracteriza por sintetizar ADN a partir de ARN viral, mediante una retro-transcriptasa;
consta de nucleo-cpside y envoltura; es muy sensible a los agentes qumicos y calor;
sus principales genes son:
a) Estructurales:
-Gen GAG (Core) => protenas 24
-ENV (Envoltura) => glicoprotenas 41, 120 y 160
-POL (Polimerasa) => es importante
b) Reguladores => genes que regulan la replicacin viral y el papel de todos ellos no
est completamente dilucidado

Patogenia en la infeccin aguda, el virus se une principalmente a receptores CD4

gracias a gp41 y gp120; por lo tanto, sus clulas diana fundamentalmente son los
linfocitos T4 (aunque tambin se unir a los linfocitos B que tiene CD4, a los
macrfagos, a las clulas cerebral, y a los precursores de hemates); este episodio se
manifiesta como un cuadro pseudogripal; es importante saber que la respuesta
inmunitaria en forma de Acs frente al virus se puede demorar 6-8 semanas (periodo de
ventana +/- 3 semanas); a continuacin el ARN se copia a ADN por accin de la
transcriptasa inversa, se pone en circulacin y se integra en el ADN de la clula
(periodo de latencia); latencia o crecimiento es clave de la patogenia de la enfermedad;
normalmente la fase de latencia se prolonga durante periodos largos de tiempo (2-8
aos incluso ms), pero en un momento dado puede progresar la enfermedad con un
progresivo deterioro de la inmunidad hasta desarrollar el SIDA; el ciclo biolgico se
resumen=>
Entrada de virus transcripcin de ARN al ADN integracin en la genoma de T4
formacin de nuevos viriones tras periodo de latencia (al salir, el virin tomara en su
salida parte de la membrana celular para utilizarla como su envuelta, esto hace que se
destruye los T4, se paraliza el sistema inmunolgica y acaba provocando el SIDA.

Epidemiologia las vas de transmisin del virus => por sangre, sexual y verticalperinatal; en Espaa la tasa de transmisin por sangre es importante (el principal
grupo afectado sonlos UDVP/ ADVP y homosexual), a diferencia de Francia o EEUU,
donde los mas afectados son homosexuales; en cuanto a las tasas de transmisin
madre-hijo oscilan 15-50%, cobrando una especial importancia en frica;
la transmisin al personal sanitario o similar es 0,2% y requiere contacto con mucosas
de la sangre o liquido corporal infeccioso (o tambin de lquidos donde se haya
cultivado al virus).
Sintomatologa clnica de SIDA desde que una persona se infecta hasta que se
desarrolle la enfermedad, suele transcurrir 6-10 aos; el estudio de la evolucin de
SIDA puede realizarse por las manifestaciones clnico que van apareciendo o por
marcadores bioqumicos (el descenso de la cifra de linfocitos T4); a partir del 1996 la
determinacin de la cantidad de virus circulante en la sangre de la persona infectada
(carga viral) se ha convertido en principal marcador de la evolucin de la enfermedad.
Fases de la enfermedad
(1) fase de la infeccin aguda => la mayora de los pacientes experimentan al cabo de
unas 3 semanas de haber infectado con el virus una serie de sntomas
pseudogripales como fiebre, cefalea, eritema, adenopatas y sensacin de mal
estar, desaparecen despus de 1-2 semanas; durante esta fase, el VIH se multiplica a
gran velocidad; en un primer momento se produce un descenso de la cifra de linfocitos
(total), pero dentro de poco alcanzan las cifras normales en respuesta de una
activacin del sistema inmunolgico; los individuos son altamente contagiosos durante
esta fase;
(2) fase asintomtica que puede durar 10 aos o incluso mas; durante este periodo, el
virus continua replicndose, causando destruccin progresiva del sistema inmune;
durante esta fase, el recuento de los linfocitos es normal;
(3) fase sintomtica precoz, se suele iniciar el desarrollo del sntoma clnico
caracterstica de la enfermedad; apareciendo infecciones oportunistas de carcter
leve p.ej. de tipo viral =>CMV, Herpes zoster, de tipo bacterianas
=> Mycobacterium, Legionella, infestacin de parsitos => Pneumocystis
carinii, Cryptosporidium, algunos hongos => Aspergillus yCndida;
(4) fase avanzada en la que aparecen infecciones y tumores, definitorios del
SIDA (sarcoma de Kaposi) que adems, puede complicarse con un cuadro neurolgico
(demencia del SIDA)con alteraciones motoras y del rea cognitiva, debido a la accin
directa del virus sobre SNC;la supervivencia media de los pacientes con la SIDA ya
desarrollado suelen ser 18-125 semanas, dependiendo del tipo de infeccin que tenga;
en ningn caso habr supervivencia cuando estn en esta fase.

Diagnstico de laboratorio de la infeccin por VIH en

Espaa fundamentalmente serolgico, por la importancia y las implicaciones que
conlleva; se realiza mediante tcnicas de ELISA en primera instancia (tcnica de
cribado), aplicando a los positivos, mtodos de confirmacin => Western Blot (WB),
inmunofluorescencia (IFI) o radioinmuno-precipitacion (RIPA).
**) El Western Blot es ms utilizado y permite diferenciar los Acs frente a las distintas
protenas del virus; tiene distintos criterios para la interpretacin de los resultados
(OMS, CDC, Cruz Roja) y los resultados se clasifiquen en:
-Positivos => lo ms aceptado es que haya bandas de envoltura (g41, gp120 y gp160) y
adems bandas del core (p24, p31 y p66) o de la polimerasa o de ambos.
-Indeterminados => se detecta la presencia de alguna banda frente a alguna protena
del virus (solo algunas protenas del core en pacientes con lupus y factor reumatoide).
-Negativo => ausencia de banda o que no se corresponde a ninguna del virus (a estas
personas se hace un seguimiento durante 6 meses, para descartar que no sean falsos
negativos).
La tcnica de WB consiste bsicamente en la incubacin de unas tiras de nitrocelulosa
en los que sean transferido las protenas de los virus, bsicamente las estructuras con
el suero del problema durante un tiempo que oscila 2-4 horas hasta los 18 horas; tras
cual se revela la presencia de Acs frente a diferente protenas del virus mediante
diferentes tcnicas inmuno-enzimticas dependiendo del fabricante; el resultado
ser la aparicin de bandas coloreadas de mayor o menor intensidad en el lugar de la
tira donde estn situadas las protenas de VIH contra las cuales existen Acs en el suero
del problema; la lectura puede hacerse de manera manual, comparando las bandas con
un control (+) o de manera automatizada por densitometra; recordar en valores
absolutos, la cifra de CD4 900-1500 linfocitos/m3 de sangre (en valores relativos 3545%); las de CD8 600-900 linfocitos/m3 de sangre; cuando la cifra de CD4 disminuye
por debajo de las 200-400 linfocitos/m3 de sangre, ser indicativo de SIDA.

*) Los mtodos de cribado (ELISA) son ms sensibles y ms especficos, siendo lo ms

novedoso los de 3 generacin con capacidad de detectar IgG e IgM, acortando el
periodo de ventana.
*) Tambin existen mtodos rpidos, aplicables en situacin de urgencia como la
aglutinacin con partculas de ltex o los que utilicen Ags fijados a soportes solidos o
membranas (se llamaDot-Blot).
*) Las tcnicas de centros especializados => cultivo y PCR; la PCR es una tcnica con
mucho futuro que presenta una enorme sensibilidad y especificidad, pero no estn al
alcance de la mayor parte de los laboratorios; una importancia aplicacin de estas
tcnicas es el diagnostico de hijos y madres portadoras del VIH.
*) Marcadores de monitorizacin o seguimiento de la enfermedad (deteccin del Ag
p24); en fases tardas, se puede observar el declinar de los Acs anti p24 que se pueden
utilizar con el mismo fin.
*) De todos modos, el que ms se utiliza para un diagnstico de SIDA es el recuento
celular de los linfocitos CD4 o T4 (o el cociente respecto a los T8).
MTODOS DIAGNSTICOS EN VIROLOGA CLNICA
Objetivo de laboratorio - proporcionar el diagnstico etiolgico y orientar
correctamente el tratamiento en el menor tiempo posible; de manera simultanea se
intenta practicar 2 tipos de diagnostico =>
- D directo (visualizar o aislar el germen mediante el cultivo e identificarlo =>
en virologa clnica no es posible, por las caractersticas fsicas y biolgicas del virus,
porque se ha de hacer mediante la deteccin de sus componentes, p.ej. Ags o
cidos nucleicos).
- D indirecto (la identificacin de los componentes de la respuesta inmune
especifica/ Acs generados).
Metodos de diagnostico directos:
a) Examen directo de la muestra (macroscpica /a simple vista) => aspecto
purulenta (en una infeccin viral nunca hay pus), presencia de sangre, moco, etc.

b) Microscpia => con la Microscpia ptica solo se puede identificar los cambios
celulares (efecto citoptico) sufrido por las celulas infectadas y con la Microscpia
electrnica se puede visualizar el virus (en laboratorios de experimentacin).
c) Cultivo => los virus se multiplican exclusivamente en el interior de las celulas
vivas, por ello debemos preparar previamente un soporte celular que permita su
crecimiento in vitromediante siguientes tcnicas:
- cultivo de rganos => las secciones de algunos rganos pueden ser viables varias
semanas y nos permiten cuidadosamente aislar por ej. virus sincitial respiratorio (VRS)
mediante secciones de tejido respiratorio.
- cultivo de tejidos => fragmentos de tejidos en suspensin (cultivar adenovirus en
un tejido adenoideo)
- cultivos celulares => celulas aisladas obtenidas por disociacin mecnica y con
enzimas proteolticas a partir de tejidos; las celulas disociadas y separadas se colocan
en un frasco de cristal o de plstico; las celulas se adhieren a las paredes del frasco y se
cubren con medios nutritivos para mantenerlas viables; en condiciones optimas, las
celulas se multiplican hasta que cubran la pared formando una capa continua de
crecimiento sobre las que se podrn replicar los virus del problema; tipos de cultivos
celulares:
*) cultivos primarios => es el primer pase in vitro, tomados directamente de un
organismo vivo; las celulas se siembran en un frasco con medio de crecimiento,
conservan el numero de cromosomas, tienen un periodo de vida corto y permiten el
crecimiento de gran variedad de virus (p.ej. celulas del rion de conejo y
mono, embrin de pollo).
*) lineas diploides => son celulas de un solo tipo (somticas) que se pueden cultivar
durante un tiempo limitado, conservan el numero de cromosomas (46) y con ventaja
de quese mantiene durante mas tiempo que cultivo primario.
*) lineas celulares continuas => se cultivan in vitro indefinidamente y tiene un
cariotipo heteroploide (numero menor que las celulas somticas); se originan de tejido
maligno o por mutacin de una clula diploide; el cultivo se multiplican de forma
indefinida y suelen presentar aberraciones en el numero de cromosomas; estas celulas
se pueden mantener a -70C o -90C indefinidamente (p.ej. lineas celulares Hep-2 y
Vero).
*) Shell-vial => es una tcnica de cultivo celular que se ha desarrollado en
los ltimos aos y que permite obtener el crecimiento de numerosos virus y ciertas
bacterias en un corto periodo de tiempo (24-48 horas); sobre un vial se coloca una
mono capa de celulas con 1ml de medio de crecimiento, y sobre ello se coloca 0,2 ml de
la muestra problema; el mtodo se basa en la centrifugacin (suave) de la muestra
sobre la mono capa, y tras un corto periodo de incubacin se pone de manifiesto
la expresin de los Ags virales en la mono capa mediante tincin inmunolgica; la
ventaja => la rapidez de obtencin de resultados en 24-48 horas, detectamos los Ags a
las pocas horas de iniciarse la infeccin; tiene una sensibilidad superior al cultivo
celular, porque inoculamos el mismo volumen de muestra en un rea mas pequea y
mas fcil la observacin al microscopio de fluorescencia.
Identificacin del crecimiento en el cultivo celular - las mas frecuentes y
disponibles en el laboratorio:
1). Efecto citoptico - los virus al multiplicarse provocan cambios en la clula donde se
replican que se manifiesta por una modificacin en la morfologa celular que se pueden

observar (p.ej. inclusiones dentro de las celulas, hinchazn del

citoplasma, formacin de celulas gigantes multi-nucleadas) en la clula sin teir o
teidas (se ve mas detalladas); cada virus presenta un tipo de
efecto citoptico caracterstico que puede ser identificado en menos de 1 semana
(p.ej. enterovirus, herpesvirus, adenovirus o poxvirus tienen como
efecto citoptico la destruccin o lisis celular en 24-48 horas;
la fusin celular/ formacin de sincition son caracterstico de herpes virus, CMV, virus
herpes zster, etc.)
2). Formacin de cuerpos de inclusin - son cambios histolgicos que se producen en
las celulas por los componentes virales o por variaciones en las estructuras celulares;
pueden localizarse en el ncleo, en el citoplasma o en ambos y se
clasifican segn su tincin en eosinfilos o basfilos; cada virus produce unos cuerpos
de inclusiones caractersticos.
3). Hem-adsorcin - es la capacidad que adquieren las celulas infectadas por un virus
para adherir a su superficie los hemates de diversas especies (p.ej.aves, carnero).
4). Hem-aglutinacin - la capacidad que adquieren las celulas infectadas por el virus de
aglutinar diversos tipos de hemates, por la formacin en su membrana de este tipo
de protenas, las hemaglutininas.
5). Deteccin mediante metodos inmuno-enzimticos o por inmunofluorescencia, de
los Ags virales mediante Acs especficos para los cuerpos de inclusin celular.
Las muestras para el aislamiento de virus se deben recoger lo antes posible,
no despus de los 3-7 primeros das del inicio de la enfermedad; se pueden conservar a
4C durante 24 horas y si no, se deben congelar a -70C porque muchos virus
son lbiles a -20C; las muestras que se utilizan con mayor frecuencia son secreciones
nasales, frotis farngeo, exudado conjuntival, lquidos vesiculares, raspados de piel,
heces, orina, LCR, etc.
d) Deteccin de los componentes estructurales virales - las tcnicas mas
usadas que permiten detectar Ags en suero y lquidos orgnicos (cuando existe una
alta concentracin viral, sera fcil detectarlos) son:
- Aglutinacin en ltex => a las moleculas de ltex se les une varias molculas de Acs
conocidos y cuando se pone en contacto con una solucin que contiene el Ag (la
muestra problema) se origina una aglutinacin que puede visualizarse; es
una tcnica sencilla, sensible, re-producible y barata. Su sensibilidad depender de la
pureza del Ac utilizado.
- Contra-inmunoelectroforesis => esta basada en el principio de que los Ags virales (o
bacterianos en su caso) suelen tener carga (-) y los Acs (+), en medio alcalino; con este
fundamento se colocan las soluciones de Acs conocidos y del Ag problema en unas
cavidades realizadas en un gel de agarosa de tal manera que puedan difundir
libremente; se colocan unas mechas en los extremos de la capa de agarosa, que
conectan con unas cubetas que contienen un buffer con una composicion diferente
dependiendo del sistema Ag-Ac; cuando se aplica una corriente elctrica, las molculas
de Ags con carga (-) migran hacia el nodo que esta en el extremo opuesto de la placa;
los Acs son arrastrados por el buffer levemente alcalino y, en el punto en que ambas
lineas se encuentran, se forma una banda de precipitacin visible; es una tcnica de
alta sensibilidad pero laboriosa, que precisa una alta concentracin de Ag y Ac.

- Enzimoinmunoensayo => se basa en la deteccin de Ags mediante el empleo de un Ac

unido a una enzima, que mantiene la capacidad de canalizar la reaccin Ag-Ac; el
enzima utilizado puede ser peoxidasa de rabano, Beta-galactosidasa o fosfatasa
alcalina; la presencia del inmuno-complejo es detectada por una reaccin coloreada
que se produce al aadir el sustrato; el empleo de enzimas tiene una serie de
ventajas:
*) el enzima se une al Ac pero deja libre los lugares de unin al Ag
*) el enzima no se modifica con la reaccin Ag-Ac y queda unido al inmuno-complejo
junto con el sustrato amplificando la reaccin y aumentando la posibilidad
de deteccin
*) los conjugados con enzimas son muy estables
*) la lectura de la reaccin se realiza en un espectrofotmetro y la cantidad de sustrato
liberado es directamente proporcional a la cantidad de Ag fijado en la reaccin
*) la lectura tambin puede hacerse cualitativamente de forma manual, "de visu".
La reaccin tiene lugar en 2 fases => en la 1- en unos pocillos sobre los que se ha
fijado un Ac especifico; al agregarle la muestra que puede contener los Ags, se unen
formando el complejo Ag-Ac; posteriormente se hace un lavado para eliminar el resto
de Ags no unidos a los Acs de la placa y otras partculas que pudieran interferir, en la
2- se agrega un Ac marcado con un enzima que se une a los sitios de unin del Ag y al
aadirse un sustrato, da lugar a una reaccin coloreada, que procederemos a medir en
un espectrofotmetro; es una tcnica que necesita varias horas para su realizacin.
- Radioinmunoanalisis => tiene el mismo fundamento que el ELISA, pero en vez de
unir un enzima al Ac, se le une un radioistopo, y lo que se mide en ultima instancia es
la radiactividad que estar en proporcin directa a la cantidad de Ag que haba en la
muestra problema; es una tcnica con la misma sensibilidad que el ELISA, pero es mas
costosa y se necesita trabajar con material radioactivo, lo que plantea problemas en
cuanto al personal y las instalaciones; esta tcnica se utilizo por primera vez para
detectar el Ag de superficie del virus de la hepatitis B.
- Inmunofluorescencia directa (IFD) => el Ag unido a una fase solida, en este caso un
portaobjetos, se pone en contacto con el Ac marcado con una sustancia fluorescente
(p.ej. isocianato de fluoresceina, rodamina, europio, etc.); tras un periodo
de incubacin, se lava para eliminar el exceso de Acs y se observa al microscopio de luz
ultravioleta; esta tcnica nos permite demostrar no solo la reaccin Ag-Ac,
sino tambin la localizacin exacta donde se produce (superficie celular,
citoplasma, ncleo...).