Enzimologa

CINTICA ENZIMTICA

CINTICA

Los experimentos de cintica examinan la relacin que existe entre

la cantidad de producto (P) Formado en la unidad de tiempo, [P]/t
(donde es el smbolo universal de cambio), de acuerdo a las
condiciones experimentales bajo las cuales se realiza la reaccin.
La base de la mayora de las determinaciones cinticas es la
observacin de como la velocidad (v), de una reaccin vara
directamente con la concentracin de cada una de las sustancias
que actan como reactivos para producir el producto.
Esta observacin es expresada por medio de una ecuacin de
velocidad.
Por ejemplo, la ecuacin de velocidad para la conversin, no
enzimtica, de un sustrato (S) a un producto por una reaccin de
isomerizacin sera:

Constante de Velocidad
La ecuacin anterior refleja el hecho de que la
velocidad de la reaccin depende de la
concentracin de sustrato [S]
El smbolo k es llamada constante de velocidad e
indica la relacin proporcional entre [S] y la
cantidad de producto producido por unidad de
tiempo, es decir indica la relacin que existe entre
la [S] y la velocidad de la reaccin.
Cada reaccin, bajo determinadas condiciones,
presenta una constante de velocidad caracterstica.
Las unidades en que se expresa la constante de
velocidad (k) sern s-1

Virtualmente todas las reacciones qumicas, incluyendo las

catalizadas por enzimas, se desarrollan contra una barrera
energtica que separa los reactivos de los productos.
Esta barrera, llamada Energa Libre de Activacin, esta
constituida por la diferencia entre la energa de los
reactivos y un intermediario de alta-energa cuya
formacin es requerida para la transformacin de reactivos
a productos. Por ejemplo en la reaccin:
A T* B

La conversin del reactivo A al producto B requiere

suficiente energa para que el reactivo A adquiera una
conformacin intermedia de alta energa que precede a su
conversin en producto y que se ha denominado Estado
Activado o Estado de Transicin T*

Estado de Transicin

Energa Libre de Activacin

El punto mximo en esta figura expresa
el valor de la Energa Libre de Activacin,
es decir, la diferencia en energa libre
entre el(los) reactivo(s) y el estado de
transicin en donde se ha formado el
intermediario de alta energa necesario
durante la conversin de reactivos a
productos.
El alto valor de esta energa libre de
transicin, para la formacin de este
estado de alta energa, es lo que propicia
que las reacciones qumicas no
catalizadas sean frecuentemente
demasiado lentas.

Velocidad de la Reaccin
Para que puedan reaccionar, las molculas deben
contener suficiente energa para sobrepasar la barrera
que impone el alcanzar el estado de transicin.
En ausencia de un catalizador, en nuestro caso en
ausencia de una enzima, la cantidad de molculas en una
poblacin de reactivos que pueden poseer esta energa
es muy pequea y la capacidad de formar producto es
igualmente demasiado pequea.
Por lo tanto la velocidad de la reaccin esta determinada
por el nmero de molculas con energa suficiente para
alcanzar el estado de transicin.
En general, mientras menor sea la energa de activacin
y ms molculas puedan alcanzarla, la velocidad de la
reaccin ser mayor. De esto depende el enorme valor
que tienen las enzimas en los sistemas biolgicos.

Las enzimas permiten que las reacciones se realicen a la

velocidad adecuada dentro de las condiciones que
prevalecen dentro de la clula, estableciendo una va de
reaccin alternativa con una energa de activacin
bastante ms pequea que la requerida en la va no
catalizada de reaccin.
Las enzimas no cambian las energas libres de los
reactivos ni de los productos, ni tampoco cambian el
punto de equilibrio de la reaccin.
Las enzimas aceleran notablemente la velocidad con la
cual dicho equilibrio de reaccin ser alcanzado.

CINTICA
La cintica se refiere al estudio de la velocidad de
cambio de reactivos a productos durante una reaccin
qumica
La velocidad se refiere al cambio en la concentracin
de reactivos o productos por unidad de tiempo
La tasa de cambio (rate) se refiere al cambio total en
las concentraciones por unidad de tiempo
Velocidad inicial es el cambio en la concentracin de
reactivos o productos inmediatamente despus de que
la reaccin se inicia, es decir cuando la reaccin es
lineal.

La derivacin de la primera ecuacin de velocidad para una reaccin catalizada por

enzimas fue derivada en 1903 por Henri y se bas en los siguientes supuestos:

E + S

ES

E + P

1. La enzima es un catalizador (propuesto por Berzelius en 1835-1837).

2. La enzima y el sustrato reaccionan rpidamente para formar un complejo enzimasustrato (propuesto en 1902 por Brown)
3. Slo 1 sustrato y un complejo enzima-sustrato estn involucrados, y el complejo ES se
rompe directamente para formar E libre y producto.
4. La enzima, el sustrato y el complejo enzima-sustrato estn en equilibrio, esto es la
velocidad a la cual ES se disocia a E + S es mucho ms rpida que la velocidad a la cual ES
se rompe para formar E + P.
5. La [S] es mucho mayor que la [E], de modo que la formacin del complejo ES no altera
la [S]. Los parntesis cuadrados [] indican concentraciones.
6. La velocidad de la reaccin est limitada por el rompimiento del complejo ES para
formar E libre y P (etapa limitante).
7. La velocidad es medida durante tiempos muy cortos, de modo que la velocidad de la
reaccin reversa es insignificante

Otras condiciones para la cintica de

tipo Michaelis-Menten
Para que la cintica enzimtica responda a lo
propuesto por Michaelis-Menten, algunas
condiciones secundarias, pero importantes,
deben ser mantenidas durante la reaccin:
La Temperatura, la fuerza inica, el pH, y otras

constantes fsicas que puedan afectar la velocidad

de la reaccin deben permanecer constantes
Cada molcula de enzima debe actuar en una
molcula de sustrato en cada ocasin
La enzima debe permanecer sin ninguna
modificacin, ni en su estructura, ni en su
concentracin, durante todo el tiempo que dure la
determinacin de la reaccin.

ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN

La ecuacin de Michaelis-Menten describe como vara la velocidad

de las reacciones catalizadas por enzimas de acuerdo a la
concentracin de sustrato:
Para utilizar la ecuacin de Michaelis-Menten deben asumirse
diferentes cosas:

Las concentraciones relativas de E y S: La concentracin de sustrato

([S]) es mucho mayor que la concentracin de enzima ([E]), de manera
que la proporcin de sustrato fijo a la enzima es siempre relativamente
pequea.
La reaccin esta en equilibrio: [ES] no cambia durante el tiempo (la
reaccin se asume en equilibrio de flujos), es decir, la velocidad de
formacin de ES es igual a la velocidad de su transformacin en E + S y
en E + P).
Velocidad Inicial: Deben usarse velocidades iniciales (vo). Esto significa
que la velocidad de la reaccin debe determinarse tan pronto como el
sustrato y la enzima son mezclados. En dicho tiempo, la concentracin
de productos es despreciable y, por lo tanto, la reaccin inversa de
productos a sustratos puede ser ignorada.

Las enzimas aumentan las velocidades de las

reacciones qumicas sin ser alteradas en el proceso de
conversin de reactivos a productos
Esta conducta define, precisamente, a un catalizador
Las enzimas aumentan las velocidades de reaccin
disminuyendo la cantidad de energa requerida para
formar un complejo reactivo, activado, competente
para formar productos
Esto ocurre por medio de la formacin de un complejo
entre la enzima y el sustrato (ES)

La velocidad a la cual ocurre la reaccin (1) es consecuencia de lo

siguiente:
El nmero posible de choques entre S y E, que es directamente
proporcional al producto de sus concentraciones [S][E]
El nmero de choques por un tiempo determinado capaces de
producir reaccin, el cual ser proporcional al nmero de choques
posibles
As pues, la velocidad de la reaccin ser proporcional a [S][E]:
Velocidad1 (v1) = k1 [S][E]
En donde k1 es la constante de velocidad

La velocidad a la cual ocurre la inversa de la reaccin (1) puede

deducirse del siguiente modo:
Una determinada cantidad de E liberar cierta cantidad de S
durante el tiempo en que la reaccin progresa
La velocidad de la reaccin inversa ser entonces directamente
proporcional a ES
Velocidad2 (v2) = k2 [ES]
En donde k2 es la constante de velocidad

La velocidad a la cual ocurre la reaccin (2) puede deducirse del

siguiente modo:
Una determinada cantidad de E1 producir cierta cantidad de P
durante un tiempo definido de la reaccin
La velocidad de produccin de P ser entonces directamente
proporcional a [E1]
Velocidad3 (v3) = k3 [ES]
En donde k2 es la constante de velocidad

Cintica de Michaelis-Menten (1)

Para explicar la relacin observada entre la velocidad inicial (v0) y la
concentracin inicial de sustrato ([S]0) Michaelis y Menten propusieron
que las reacciones catalizadas enzimticamente ocurren en dos etapas: En
la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en la segunda, el
complejo enzima-sustrato da lugar a la formacin del producto, liberando
la enzima libre:

En este esquema, k1, k2 y k3 son las constantes cinticas individuales de cada

proceso y tambin reciben el nombre de constantes microscpicas de
velocidad. Segn esto, podemos afirmar que:
v1 = k1 [E] [S]
v2 = k2 [ES]
v3 = k3 [ES]
Los parntesis cuadrados [] indican concentraciones

Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al

sustrato (ES), de forma que la concentracin total de enzima,
[ET], (que es constante a lo largo de la reaccin) es:
[ET] = [E] + [ES]
Como [E] = [ET] - [ES], resulta que:
v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]

Este modelo cintico adopta la hiptesis del estado estacionario,

segn la cual la concentracin del complejo enzima-sustrato es
pequea y constante a lo largo de la reaccin. Por tanto, la
velocidad de formacin del complejo enzima-sustrato (v1) es igual
a la de su disociacin (v2+ v3):
v1 = v 2 + v 3
Adems, como [ES] es constante, la velocidad de formacin de los
productos es constante:
v = v3 = k3 [ES] = constante.

Cintica de Michaelis-Menten (3)

Como v1=v2+v3, podemos decir que:

k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]
Despejando [ES], queda que:

En donde:
Este enlace nos aporta una explicacin sobre las razones que hacen de la KM
un parmetro cintico importante.
Por lo tanto, en el estado estacionario, la velocidad de formacin del producto
es:

Cintica de Michaelis-Menten (4)

Para cualquier reaccin enzimtica, [ET], k3 y KM son

constantes. Vamos a considerar dos casos extremos:
A concentraciones de sustrato pequeas ([S] << KM) v = (k3

[ET]/KM) [S]. Como los trminos entre parntesis son constantes,

pueden englobarse en una nueva constante, kobs, de forma que
la expresin queda reducida a: v = kobs [S], con lo cual la
reaccin es un proceso cintico de primer orden.
A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM), v = k3
[ET]. La velocidad de reaccin es independiente de la
concentracin del sustrato, y por tanto, la reaccin es un
proceso cintico de orden cero. Adems, tanto k3 como [ET]
son constantes, y nos permite definir un nuevo parmetro, la
velocidad mxima de la reaccin (Vmax): Vmax = k3 [ET], que es
la velocidad que se alcanzara cuando toda la enzima disponible
se encuentra unida al sustrato.

Cintica de Michaelis-Menten (5)

Si introducimos el parmetro Vmax = k3 [ET] en la

ecuacin general de la velocidad,

obtenemos la expresin ms conocida de la

ecuacin de Michaelis-Menten:

A valores bajos de [S], la velocidad inicial, Vi, aumenta

casi linealmente al aumentar [S].
Pero segn [S] aumenta, el incremento en Vi
disminuye (formando una hiprbola rectangular).
La asmptota de esta curva representa la velocidad
mxima de la reaccin, designada Vmax
La concentracin de sustrato que produce una Vi que
sea igual a la mitad de Vmax se designa como
constante de Michaelis-Menten, Km (llamada as por
los investigadores que desarrollaron este estudio de la
cintica enzimtica).

La mayora de las enzimas muestran cintica

del tipo de Michaelis-Menten, en la cual la
grfica de la velocidad inicial (vo) contra la
concentracin de sustrato ([S]), es de tipo
hiperblico.

Orden de Reaccin
Orden de Reaccin: Se refiere al nmero de molculas de reactivo
que deben estar presentes para producir un producto.

Un S unimolecular S P es una reaccin de primer orden.

Un 2S bimolecular 2S P es una reaccin de segundo orden.
Un bimolecular
S1 + S2 P es de segundo orden: de primer orden
en S1 y de primer orden en S2.

El orden de la reaccin esta dado por los exponentes de las

concentraciones de reactivos en la ley de velocidad.
v = k[A]n
n=0, orden cero (no depende de [A]
n=1, primer orden
n=2, segundo orden
v = k[A]2[B]
Segundo orden en A, primer orden en B, reaccin de
tercer orden

Significado de Km
Km es una constante
Km es una constante derivada a partir de
constantes de velocidad: (k-1 + k2)/k1
Km es, siendo verdaderas las condiciones
supuestas ciertas por Michaelis-Menten, una
estimacin de la constante de disociacion del
complejo ES para dar E + S, a partir de (k-1/k1)
Km pequea significa ES en unin fuerte;
Km alta significa ES en unin dbil

CINTICA DE TIPO MICHAELIS-MENTEN

Caractersticas de Km: la constante de Michaelis es

caracterstica de cada enzima y su sustrato particular, y
refleja la afinidad de la enzima por dicho sustrato.
La Km es numricamente igual a la concentracin de
sustrato a la cual se alcanza la mitad de la velocidad
mxima de la enzima, Vmax.
La Km no depende de la concentracin de la enzima.

Una Km numricamente pequea, refleja una gran afinidad por el

sustrato, ya que bajas concentraciones de sustrato son
suficientes para saturar al 50% de la enzima es decir, para
alcanzar la mitad de la velocidad mxima, Vmax.
Una Km numricamente grande, refleja una baja afinidad de la
enzima por su sustrato, ya que son necesarias grandes
concentraciones de sustrato para saturar el 50% de la enzima.

 Vmax es una constante

Vmax es la velocidad mxima terica de la reaccin
pero, en realidad, nunca se alcanza
Para alcanzar la velocidad mxima se requiere que
[S] >> [E] y que TODAS las molculas de enzima
estn unidas al sustrato.
Vmax se alcanza asintticamente a medida que la
concentracin de sustrato aumenta

Grfica de Dobles Recprocos o de

Lineweaver-Burk
En la prctica la determinacin de la constante de

Michaelis-Menten (Km) y de la velocidad mxima a partir

de una grfica hiperblica no nos proporciona un valor
suficientemente preciso.
Por esta razn, Lineweaver y Burk decidieron cambiar la
ecuacin de Michaelis-Menten tomando los valores
recprocos de la V y la [S] generando una grfica de dobles
recprocos.
Esto proporciona una grfica lineal del recproco de la
velocidad contra el recproco de la concentracin de
sustrato, que nos proporciona los valores exactos de la Km
en el intercepto de la lnea en el eje de las abscisas y el valor
exacto de la velocidad mxima (Vmax) en el intercepto del
eje de las ordenadas

La Ecuacin de Michaelis-Menten

Puede ser simplemente transformada tomando los inversos de ambos

miembros, lo cual nos proporcionar:

Separando los componentes del numerador en el segundo miembro de

esta ecuacin, nos da:

Que se simplifica fcilmente para dar finalmente:

Ecuacin de Dobles Recprocos o de

Lineweaver-Burk

Otras transformaciones grficas de la

ecuacin de Michaelis-Menten
Grfico de Eadie-Hofstee
v
v=V
K
max
m [S]

Vmax
v

Los valores obtenidos son mas precisos,

porque no incluye el error intrnseco en
el uso de valores recprocos

pendiente
Inclinao
= =-Km

Vmax
Km
v
[S]

 Grfico de Hanes-Woolf
K
[S]
1
m +
=
[S]
v
V
V
max
max

[S]
v

pendiente =
Inclinao

1
Vmax

Km
Vmax
-Km

[S]

Grfico de Eisenthal/Cornish-Bowden
No requiere de clculos

Vm
Vmax
v0(3)
v0(2)
v0(1)

KK
M

-[S]3

-[S]2

-[S]1

Hay enzimas que no obedecen

la ecuacin de MichaelisMenten.
Se dice que su cintica no es
Michaeliana.
Esto ocurre con las llamadas
enzimas alostricas, cuya
grfica v contra [S] no es una
hiprbola, sino una sigmoide
(en forma de s)
En la cintica sigmoidea,
pequeas variaciones en la [S]
en una zona crtica (cercana a
la KM) se traduce en grandes
variaciones en la velocidad de
reaccin.

Efecto del pH
Las enzimas, al ser protenas, poseen propiedades que son

muy sensibles al pH.

De hecho, la mayora de las protenas slo son activas en un
estrecho intervalo de pH, tpicamente entre 5 y 9.
Esto es el resultado de los efectos del pH sobre una
combinacin de factores:
(1) la fijacin del sustrato a la enzima, frecuentemente utilizando

enlaces electrostticos que dependen de la ionizacin de los

participantes.
(2) la actividad cataltica de la enzima, dependiente del estado de
ionizacin de los aminocidos importantes localizados en el sitio
activo de la enzima, as como de su estructura terciara y
cuaternaria
(3) la ionizacin del sustrato y
(4) la variacin de la estructura proteica misma (normalmente,
slo significativa a pH extremos).

La actividad enzimtica
vara con el pH
El pH ptimo es aquel al cual la

enzima manifiesta su mayor actividad y

frecuentemente refleja el pH al cual la
enzima funciona dentro del organismo.
El pH de mayor actividad vara para
diferentes enzimas.
Por ejemplo, la pepsina, una enzima
digestiva del estmago, muestra su pH
ptimo a pH <2, mientras que otras
enzimas, diseadas para funcionar a
pH neutro, seran desnaturalizadas si
se someten a condiciones tan
drsticamente cidas

Es necesario recalcar, sin embargo, que el trmino "pH ptimo" no tiene una
significacin fsico-qumica bien definida. Es mejor, en general, referirse a un
rango de pH favorable para una reaccin dada. Este rango depende no slo de
la naturaleza de la enzima particular, sino tambin del substrato y de la
concentracin de ste, de la estabilidad de la enzima, de la temperatura y de
la extensin del periodo de reaccin.

Los segmentos de la izquierda y de la

derecha de la curva de campana
obtenida, en donde la actividad
enzimtica es menor que en el pH
ptimo, representan las curvas de
titulacin de los cadenas laterales de
los residuos de aminocidos que
forman parte del sitio activo de la
enzima.
El punto de inflexin a pH 4.2 refleja
el pKa del residuo 25, cistena, y el de
pH 8.2 el pKa de la His-159.
La enzima slo es activa cuando estos
grupos se encuentran como un par
inico tiolato - imidazolium.

Efecto del pH
Como ocurre con las protenas, las enzimas poseen un punto

isoelctrico al cual su carga libre neta es cero. El pH del punto

isoelctrico, como regla, no es igual al pH al cual se observa actividad
mxima.
El pH ptimo de las enzimas varia ampliamente; la pepsina, que
existe en el medio cido del estmago, tiene un pH ptimo de
alrededor de 1,5, mientras que la arginasa tiene un pH ptimo de 9,7.
Sin embargo, la gran mayora de las enzimas tienen un ptimo entre
pH 4 y 8, muchas de ellas alrededor del pH fisiolgico del organismo,
~7.3 - 7.4. Algunas enzimas muestran una amplia tolerancia a los
cambios del pH, pero otras trabajan bien slo en un rango estrecho.
Cualquier enzima que se someta a valores extremos de pH, se
desnaturaliza. Esta sensibilidad de las enzimas a la alteracin del pH
es una de las razones por la que la regulacin del pH del organismo es
controlada celosamente y explica por qu las desviaciones de la
normalidad pueden implicar graves consecuencias.

pH ptimo

Es necesario recalcar, sin embargo, que el trmino "pH ptimo" no tiene

una significacin fsico-qumica bien definida. Es mejor, en general,
referirse a un rango de pH favorable para una reaccin dada. Este rango
depende no slo de la naturaleza de la enzima particular, sino tambin
del substrato y de la concentracin de ste, de la estabilidad de la
enzima, de la temperatura y de la extensin del periodo de reaccin.

Efecto de la temperatura
sobre las enzimas
Puesto que la estructura proteica es la que determina la actividad

enzimtica, cualquier causa que perturbe esta estructura puede

llevar a una prdida de actividad.
Aunque el rango general de temperaturas adecuadas para las
reacciones enzimticas es muy estrecho, los cambios ligeros
suelen tener una considerable influencia.
Al aumentar la temperatura, la velocidad de reaccin aumenta y,
para casi todas las enzimas, un incremento de 10C duplica e
incluso triplica la velocidad de reaccin.
Por otro lado, sin embargo, ese mismo aumento de temperatura
acelera tambin la inactivacin de la enzima por
desnaturalizacin trmica. Para muchas enzimas la regin de
inactivacin trmica est muy prxima de la temperatura ptima.
La velocidad de inactivacin trmica depende tambin del pH,
fuerza inica y del estado fsico de la enzima

 Todas las reacciones qumicas son afectadas por la temperatura. A mayor temperatura,
mayor velocidad de reaccin. La velocidad de reaccin aumenta porque hay ms
molculas con suficiente energa para llegar al estado de transicin.
Las velocidades de las reacciones catalizadas por enzimas tambin aumentan con la
temperatura . Pero, las enzimas son protenas y se desnaturalizan a temperaturas altas
Cada enzima posee una temperatura ptima a la cual opera con mayor eficiencia
Puesto que las enzimas son protenas, su temperatura ptima depende tambin del pH
y de la fuerza inica.
Si la temperatura de operacin se
eleva ms all de la temperatura
ptima, la actividad de muchas
enzimas desciende bruscamente.
Las temperaturas ptimas de
muchas enzimas se encuentran
cercanas a la temperatura normal
del organismo de donde proceden.
Por ejemplo, la temperatura
ptima de la mayora de las
enzimas en el hombre es cercana a
37C.

Estabilidad Trmica
El aumento de temperatura
acelera tambin la
inactivacin de la enzima
por desnaturalizacin
trmica.
Para muchas enzimas la
regin de inactivacin
trmica est muy prxima
de la temperatura ptima.
La velocidad de inactivacin
trmica depende de la
enzima, pero tambin del
pH, fuerza inica y del
estado fsico de la enzima

Efecto de la Ionizacin
Las velocidades iniciales de muchas

reacciones enzimticas en funcin del pH

muestran curvas en forma de campana. Estas
curvas reflejan la ionizacin de ciertos restos
de aminocidos que han de encontrarse en un
estado de ionizacin determinado a fin de
que haya actividad enzimtica.

Inhibidor:
Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a travs de
interacciones con el centro activo u otros centros especficos
(alostricos).
Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inactivan a
la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula enzimtica
De esta forma, habr dos tipos de inhibidores:
I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro activo
II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte de la
molcula, causando un cambio conformacional con
repercusin negativa en la actividad enzimtica.

Inhibidores Enzimticos
Los inhibidores enzimticos son molculas que se unen a

enzimas y disminuyen su actividad.

La unin de un inhibidor puede impedir la entrada del
sustrato al sitio activo de la enzima y obstaculizar que la
enzima catalice su reaccin correspondiente.
La unin del inhibidor puede ser reversible o irreversible.
Normalmente, los inhibidores irreversibles reaccionan con
la enzima de forma covalente y modifican su estructura
qumica a nivel de residuos esenciales de los aminocidos
necesarios para la actividad enzimtica.
En cambio, los inhibidores reversibles se unen a la enzima
de forma no covalente, dando lugar a diferentes tipos de
inhibiciones, dependiendo de la manera como el inhibidor
se une a la enzima o al complejo enzima-sustrato.

Inhibidores Enzimticos
Los inhibidores enzimticos usados dentro de la clula estn

implicados en la regulacin del metabolismo.

Por ejemplo, las enzimas en una ruta metablica pueden ser
inhibidas por los productos resultantes de sus respectivas rutas.
Este tipo de retroalimentacin negativa retarda el flujo a travs
de la ruta cuando los productos comienzan a acumularse y es una
manera importante de mantener la homeostasis en una clula.
Otros inhibidores enzimticos celulares son protenas que se
unen especficamente e inhiben una enzima importante.
Este mecanismo puede ayudar a controlar enzimas que pueden
ser dainas para la clula, como las proteasas o nucleasas.
Un buen ejemplo es el inhibidor de la ribonucleasa, que se une a
esta enzima en una de las interacciones protenaprotena ms
fuertes conocidas.

Inhibicin Enzimtica
Competitiva
El Inhibidor se fija en el sitio activo de la enzima. La inhibicin es

reversible puesto que altas concentraciones de sustrato compiten

con el inhibidor. Depende de las afinidades relativas de la enzima
por su sustrato y por el inhibidor. La Km aumenta, la Vmax
permanece sin cambios

No-competitiva
El Inhibidor se fija en un sitio diferente al sitio activo de la enzima.

El complejo ESI (Enzima-Sustrato-Inhibidor) no puede formar

productos. Concentraciones altas de sustrato no son
competidoras. La Km no se modifica, la Vmax disminuye

Un-competitiva o Anti-competitiva

El inhibidor es capaz de fijarse nicamente una vez que el

complejo ES est ya formado y el cambio en la conformacin de

la enzima le proporciona un sitio para su fijacin. Tanto la Km
como la Vmax disminuyen

Inhibicin Competitiva

S
I

EI

ES

E+P

Se define una constante de

equilibrio de disociacin del
inhibidor:

Ki =

Caractersticas:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la inhibicin
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo qumico del
substrato.
- El inhibidor es tan especfico como el substrato

[E] [I]
[EI]

Por tanto, en la inhibicin competitiva,

1. El efecto cintico del inhibidor es el aumento aparente de la

Km que aparece multiplicada por el factor (1 + i/Ki)
2. La Vmax no aparece modificada; para concentraciones muy
altas del substrato, v = Vmax, igual que en ausencia de inhibidor
3. Cuanto ms pequeo sea el valor de Ki mayor ser la potencia
del inhibidor competitivo.
4. Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas;
5. el complejo EI no es productivo

S
I

E
S
EI

ES

E+P
Inhibicin
No Competitiva

ESI

El inhibidor no se fija en el sitio activo, y lo hace indistintamente a la enzima libre E y al

complejo enzima-substrato ES; ni el complejo EI ni el complejo ESI son productivos

S
E

ES

E+P
Inhibicin
Anticompetitiva

ESI
El inhibidor slo puede fijarse al complejo ES;
el complejo ESI no es productivo

Inhibicin por Sustrato

La inhibicin por sustrato y por producto es donde el sustrato o el

producto de una reaccin enzimtica inhiben la actividad

enzimtica.
Este tipo de inhibicin puede seguir cualquier tipo de patrn de
inhibicin y es frecuentemente de gran importancia en la
regulacin del metabolismo celular.
En la inhibicin por sustrato hay una disminucin progresiva de la
actividad a altas concentraciones de sustrato. Esto puede indicar
la existencia de dos sitios de unin entre sustrato y enzima.
Cuando hay poco sustrato, se ocupa el sitio de alta afinidad y
sigue la cintica normal. Sin embargo, a altas concentraciones, el
segundo sitio de inhibicin se ocupa, inhibiendo a la enzima.
La inhibicin por parte del producto es a menudo una
caracterstica reguladora en el metabolismo y puede ser una
forma de retroalimentacin negativa.

Aplicaciones de los inhibidores

Los inhibidores enzimticos pueden ser encontrados en la
naturaleza, pero tambin son diseados y producidos
como parte de la industria, la farmacologa y la bioqumica.
En el ser humano, los inhibidores enzimticos son
utilizados principalmente como frmacos en el tratamiento
de diversas enfermedades.
Los venenos naturales son a menudo inhibidores
enzimticos que han evolucionado para defender a una
planta o animal contra sus depredadores. Estas toxinas
naturales incluyen algunos de los compuestos ms
venenosos conocidos hasta hoy.
Los inhibidores artificiales son a menudo utilizados como
insecticidas (como el Malathion), herbicidas (como el
Glifosato) o desinfectantes, (como el Triclosn).

Regulacin Enzimtica
La regulacin enzimtica depende profundamente de cada

proceso, cada clula, cada momento del metabolismo, pero

en general pueden precisarse algunos mecanismos
generales de regulacin
Por control de la expresin gentica para obtener ms o
menos enzima activa
La enzima existe en una forma inactiva (zimgeno) que
debe ser modificada, primariamente por hidrlisis
La enzima debe ser covalentemente modificada para
aumentar o disminuir su actividad, la forma ms comn es
por fosforilacin o desfosforilacin
Secuestracin, la enzima no se encuentra en el sitio
adecuado para desempear su funcin
Por regulacin alostrica, tanto positiva como negativa.

Enzimas Reguladas
En todos los organismos y, prcticamente, en todas las vas

metablicas, el control rpido en la escala de segundos o

menos puede ser alcanzado mediante la modulacin reversible
de la actividad de determinadas enzimas, llamadas enzimas
reguladas.
En este concepto, se pueden definir las enzimas reguladas, como
aquellas cuya actividad puede ser modificada rpidamente por
varios tipos de efectores, permitiendo que la clula se adapte a
las exigencias cambiantes del metabolismo celular
En la mayora de los casos estas enzimas reguladas ocupan pasos
claves, o limitantes, en los senderos metablicos.
El mecanismo ms sencillo es que las enzimas reguladas cambien
rpidamente en relacin con la concentracin de sus sustratos, o
de los productos que su actividad origina, activacin por sustrato,
inhibicin por producto.

Alosterismo
El fenmeno conocido como alostera o alosterismo es

el responsable del control reversible de la actividad de

una gran variedad de las enzimas reguladas
Muchas enzimas reguladas experimentan transiciones
alostricas entre el estado (R) activo y el estado (T)
inactivo.
Estas enzimas poseen un segundo sitio de fijacin,
alejado del sitio activo. Este segundo sitio es llamado
sitio regulador, o sitio alostrico
Un activador o inhibidor alostrico, tambin llamado en
general, efector alostrico, puede fijarse a este
segundo sitio y producir un cambio conformacional en
la enzima reguladora.
Este cambio conformacional es transmitido al sitio
activo de la enzima y modifica su actividad.

Cofactor
rea de
fijacin del
cofactor

Efector
Alostrico
Positivo

Sitio
alostrico
Negativo
Efector
Alostrico
Negativo

enzimas alostricas
Las enzimas alostricas son aquellas que, adems del

centro activo mediante el cual interactan con el sustrato,

poseen otro centro de unin llamado centro alostrico
mediante el cual interactan con otra molcula
denominada efector o modulador (la palabra "alostrico"
hace referencia a la existencia de ese "otro lugar").
La interaccin del modulador con el centro alostrico es tan
especfica como lo es la interaccin del sustrato con el
centro activo y tambin est basada en la
complementariedad estructural.
Las enzimas alostricas presentan pesos moleculares en
general superiores a las de otras enzimas y en la mayor
parte de los casos son protenas oligomricas, es decir
estn formados por varias subunidades (normalmente en
nmero par).

Efecto Alostrico
De gran importancia en el fenmeno de la actividad enzimtica es el
hecho de que, en las enzimas, pueden existir dos (o cuando menos dos)
sitios diferentes desde el punto de vista estreo- especfico y que,
adems, estn en lugares distintos, muy alejados uno de otro.
Uno de estos sitios es el centro activo, donde se fija el sustrato para dar
origen a los productos de la reaccin y por lo tanto donde reside el
aspecto funcional de la protena. El otro sitio se denomina sitio
alostrico y en l puede acomodarse de manera complementaria - pero
reversible - alguna sustancia llamada efector alostrico; al efectuarse
esta unin se produce una alteracin discreta de la estructura de la
protena, la transicin alostrica, que modifica la actividad biolgica de
la protena, porque altera las propiedades del sitio activo.
Es muy importante que el efector alostrico normal no tiene relacin
qumica o metablica alguna con el sustrato de dicha enzima y que su
accin tan especfica se debe a que altera de tal modo la conformacin
de la protena que modifica su centro activo.

Moduladores Alostricos
Los moduladores alostricos pueden ser de dos
tipos: unos estimulan la actividad de la enzima al
unirse al centro alostrico, reciben el nombre de
moduladores positivos o activadores; otros la
inhiben y se llaman moduladores negativos o
inhibidores.
Los inhibidores alostricos no responden a
ninguno de los modelos de inhibicin enzimtica
estudiados en el apartado anterior.
Las enzimas alostricas presentan siempre dos
formas, una activa y otra inactiva,
interconvertibles por efecto del modulador.

Moduladores Alostricos
Existen dos tipos de control alostrico: el control
heterotrpico que se da cuando el modulador es
una molcula diferente del sustrato, y el control
homotrpico que se da cuando el modulador es el
propio sustrato.
En ambos casos el modulador puede ser positivo
o negativo. Las enzimas con control homotrpico
poseen dos o ms centros de unin para el
sustrato; en ellos la interconversin entre las
formas activa e inactiva depende de cuntos sean
los centros de unin que estn ocupados por
molculas de sustrato.

Enzimas Alostricas
Una enzima alostrica es una enzima cuya

actividad est regulada mediante un centro

alostrico, que es un sitio, distinto del centro
activo de la enzima, al que se une un
regulador (llamado regulador alostrico) de
manera reversible y no covalente. La unin de
este regulador modifica la estructura
tridimensional de la enzima y llega a afectar
la configuracin del sitio activo, por lo que
aumenta o disminuye su actividad, segn el
caso.

Alosterismo
El alosterismo es una de las principales formas
de regulacin en la clula debido a que puede
producir cambios rpidos y fcilmente
reversibles en la actividad de las enzimas (y, por
lo tanto, en el metabolismo) sin depender de que
el regulador tenga una estructura similar al
sustrato de la enzima (lo que puede ayudar a
coregular diferentes vas metablicas).
Muchos frmacos actan unindose al sitio
alostrico de las enzimas, como los inhibidores
de la transcriptasa inversa no nuclesidos.

Reguladores alostricos de algunas enzimas

INHIBIDORES

ACTIVADORES

Glucogeno fosforilasa

ATP, Glucosa

AMP

Fosfofructoquinasa

ATP, Citrato

Piruvato quinasa

ATP

ADP

Isocitrato deshidrogenasa

ATP

ADP

-cetoglutarato deshidrogenasa

ATP

ADP

Fructosa 1,6 Bifosfatasa

AMP, Fru2,6BiP

ATP

Glucogeno sintasa

AMP

ATP, Glucosa 6-P

AcetilCoA Carboxilasa

AMP, PalmitoilCoA

ATP, Citrato

AMP, ADP, Fru2,6BiP

La glucgeno fosforilasa posee, un

sistema de regulacin alostrica que
responde inmediatamente a las
condiciones celulares en las que existe
una baja carga energtica
La glucosa y el ATP inhiben la
glucgeno fosforilasa, desplazando
su equilibrio alostrico hacia el
estado tenso (T).
El AMP activa nuevamente la
enzima desplazando el equilibrio
hacia el estado relajado (R)

AMP
ATP