II.

PROCESO DE BIOTRANSFORMACIN
Los humanos y muchos otros animales estn constantemente expuestos en su medio
ambiente a una vasta variedad de agentes xenobiticos; los cuales pueden ser de origen natural o
formados por intervencin del hombre, En general los compuestos ms lipoflicos son ms
fcilmente absorbidos a travs de la piel, pulmones o del tracto gastrointestinal. La constante
exposicin a este tipo de sustancias podra resultar en su acumulacin dentro del organismo, al
menos que se presente un sistema eficaz de eliminacin. Con excepcin de la exhalacin, para
que un agente xenobitico pueda ser eliminado del organismo, requiere que sea soluble en fase
acuosa, lo anterior funciona para compuestos no voltiles y en consecuencia sern excretados por
la orina y las heces, que son las predominantes rutas de eliminacin. Sin embargo, los
compuestos lipoflicos que se encuentran en los fluidos de excrecin tienden a difundir hacia las
membranas y en consecuencia son reabsorbidos, mientras que los compuestos solubles en agua
son excretados, lo que dejara aparentemente una acumulacin de los agentes xenobiticos
lipoflicos dentro del organismo (Caldwell and Paulson, 1964; Klaassen et al, 1986).

1. Panorama general.
De acuerdo a la estructura de la membrana celular, esta le confiere una selectividad en la
absorcin tanto de las sustancias endgenas como xenobiticas. Esta selectividad permite que
existan vas de absorcin especfica para los nutrimentos hidrosolubles con un gasto energtico
(transporte activo), pero por otra parte aunque la mayora de los organismos vivos son casi
impermeables a la gran mayora de las sustancias hidrosolubles no deseables, no pueden prevenir
la absorcin de la mayora de las sustancias liposolubles. En la Figura 1.1. tenemos resumido en
un esquema ilustrativo, las principales vas de absorcin y eliminacin tanto de compuestos
endgenos como exgenos (Anders, 1985; Manahan, 1990; Shibamoto y Bjeldanes, 1996).
FIGURA 1.1
Principales vas de excrecin y absorcin de xenobiticos
RECTAL
(ABSORCIN)
INGESTIN
(ABSORCIN)

TRACTO GASTROINTESTINAL

HECES
(EXCRECIN)

BILIS
VENA
PORTA

CUTNEA
(ABSORCION)

HGADO

INHALACIN
(ABSORCIN)

SISTEMA SANGUINEO Y
PULMN

PIE

DISTRIBUCIN DE
UNIN A
LA FORMA LIBRE O PROTEINAS
BIOTRANSFORMADA PLASMTICA

EXHALACIN
(EXCRECIN)
RIN

MEMBRANA CELULAR
RECEPTORES
MOLECULARES

RESPUESTA
BIOQUMICA

SISTEMA
SEO

TEJIDO
ADIPOSO

ACUMULACIN
DE TXICOS

SUDOR
(EXCRECIN)

VEJIGA

ORINA
(EXCRECIN

35

ABSORCIN
Afortunadamente, los animales superiores han desarrollado un nmero de sistemas
metablicos que convierten los agentes xenobiticos liposolubles en metabolitos hidrosolubles
capaces de ser excretados por las vas de eliminacin. A esta actividad bioqumica se le ha
denominado proceso de Biotransformacin, el cual se ha dividido a su vez en dos grandes grupos
de actividad enzimtica: reaccin de Fase I y Fase II como se observa en la Figura 1.2.
FIGURA 1.2
Integracin del proceso de Biotransformacin de xenobiticos
(adaptada de Klaasen et al, 1986)
REACCIONES
DE FASE I

XENOBITICO

A
B
S
O
R
C
I

REACCIONES
DE FASE II

OXIDACIN
REDUCCIN
HIDRLISIS

CONJUGACIN

PRODUCTO
PRIMARIO
Exposicin o
adicin de
grupos
funcionales

PRODUCTO
SECUNDARIO
Biosntesis
por adicin
de grupos
endgenos

EXCRECIN
CARACTER
LIPOLTICO
O NO-POLAR

CARACTER
HIDROFLICO
O POLAR

La funcin principal del proceso de Biotransformacin es la transformacin de los agentes

xenobiticos para facilitar su remocin a travs del rin y la bilis principalmente. Sin embargo,
cuando se modifica la estructura qumica del agente xenobitico, se puede presentar en algunos
casos, que se modifique la actividad farmacolgica y en ocasiones hasta un aumento de la
toxicidad, lo que se conoce como bioactivacin, como es el caso de las sustancias denominadas
procarcinognicas, las cuales requieren del proceso de biotranformacin para manifestar el efecto
carcinognico (Loomis, 1978; Anders, 1985).

2. Reacciones fase I.
La funcin de este tipo de reacciones, es modificar la estructura qumica de la molcula,
por introduccin de grupos funcionales como son hidroxilo, amino, carboxilo entre otros. Tambin,
se puede obtener una mayor polaridad del agente xenobitico por exposicin de grupos
funcionales como es el proceso de hidrlisis. Posiblemente la oxidacin es la reaccin ms
importante de las reacciones de fase I; en general estas reacciones estn mediadas por el sistema
de oxidacin microsomal que contiene el citrocromo P-450, tambin conocido como sistema
oxidasa de funcin mixta , el cual requiere del cofactor nicotin-adenin-dinucletido-reducido
(NADPH) como donador inicial de electrones y oxgeno molecular como oxidante, segn se
observa en la Figura 2.1 (Repetto, 1981; Klaassen et al, 1985; Manahan, 1990).

36

FIGURA 2.1
Sistema de transporte de electrones de Citocromo P-450 y oxidacin
de un xenobitico (RH)

RH

2e-

NADP+

R-OH

CIT P-450+3

CIT P-450+3

NADPH

H2O

RH
CIT P-450+2

CIT P-450+2
RH

O2

2e-

2H+

RH O2 NADPH NADP+

En el esquema anterior, un electrn del NADPH se transfiere al citocromo P-450

mediante la enzima NADPH-Citrocromo P-450-reductasa. Hay que hacer notar que el origen del
citocromo P-450, se refiere a que es una protena cromgena que cuando se une al monxido de
carbono, da una forma reducida que presenta un mximo de absorcin espectral a 450 nm. Aunque
este sistema oxidativo forma parte de muchos tejidos del organismo, el sitio de la oxidacin de la
mayora de los xenobiticos se presenta en el retculo endoplsmico liso del hgado. Hay muchas
formas de citocromo P-450 o isoenzimas que le dan caractersticas particulares al organismo que las
contiene, presentndose una diferenciacin en el proceso de Biotransformacin intra e
interespecie.
El sistema de oxidacin microsomal con participacin de la citocromo P-450 es
inducible; as, la administracin de sustancias oxidables incrementa su actividad, como es el caso
de la administracin de barbitricos, ciertos plaguicidas entre otros xenobiticos; lo que le confiere
una adaptacin del retculo endoplsmico liso del hgado al incremento del proceso oxidativo. El
anterior sistema, adems de mediar muchas reacciones de oxidacin; tambin, puede llevar a
cabo reacciones de reduccin, como es la conversin de los colorantes azicos a sus
correspondientes aminas, cuando se presentan condiciones anaerobias (Hodgson and Guthrie,
1980; Timbrell, 1985).

2.1. Hidroxilacin aromtica.

La hidroxilacin aromtica, para el sistema ms simple se describe en la Figura 2.1.1, el
cual es uno de los procesos oxidativos de mayor importancia. Los mayores productos de la
hidroxilacin aromtica son fenoles, pero tambin se pueden formar catacoles y quinoles.
Consecuentemente un nmero variable de metabolitos hidroxilados se pueden formar, lo cual
depender de las caractersticas particulares de la especie considerada.

37

FIGURA 2.1.1
Metabolitos aromticos de la hidroxilacin del benceno

OH
(MAYOR METABOLITO)
O
fenol

OH

OH
OH

+
benceno

OH
O

OH

catecol
OH

OH
quinol

resorcinol
OH

OH
1,2,4 Trihidroxibenceno

Sin embargo, hay que mencionar que la hidroxilacin aromtica procede va la formacin
de un epxido como intermediario. Lo anterior se puede ilustrar en la hidroxilacin del naftaleno,
ya que generalmente se forma tanto el 1-naftol como el 2-naftol, la cual se realiza va la formacin
del epxido intermediario 1, 2-xido como se observa en la Figura 2.1.2. Cabe mencionar que
precisamente el naftaleno es el precursor de los denominados hidrocarburos aromticos
policclicos (HAP), donde el efecto carcinognico de algunos de ellos se debe a la formacin de un
epxido intermediario.
FIGURA 2.1.2
Hidroxilacin del naftaleno a travs de la formacin de epxido (adaptada de
Timbrell, 1985)

naftaleno
O

CIT P-450
O

naftalen-1,2 xido
(epoxido)
H

H O

+ H

O
H

H H

O
H
H

OH
OH

+
1 naftol

2 naftol

38

La oxidacin va formacin de epxidos es muy importante, ya que estos metabolitos

intermediarios pueden reaccionar con biomolculas celulares; as tenemos, que los epxidos
estabilizados pueden reaccionar con sitios nucleoflicos de constituyentes celulares como son
ciertos cidos nucleicos, y producir un evento mutagnico. Eventos de este tipo se presentan con
algunos hidrocarburos aromticos policclicos, as como en algunas micotoxinas.

2.2. Hidroxilacin heterocclica.

Compuestos heterocclicos con tomos de nitrgeno tales como la piridina y quinoleina,
sufren la oxidacin microsomal por hidroxilacin en la posicin 3; as, en el caso de la quinolena,
el anillo aromtico sufre la hidroxilacin en la posicin 3 pero tambin se obtiene el metabolito
hidroxilado en la posicin 6 como se observa en la Figura 2.2.1. Este tipo de reaccin es
interesante, ya que sabemos que los alcaloides tienen como caracterstica estructural, poseer un
tomo de nitrgeno heterocclico.

FIGURA 2.2.1
Hidroxilacin microsomal de priridina y quinoteina

OH
CIT P-450
O
N

N
3-hidroxi-piridina

piridina

OH
O
N
3-hidroxi-quinolena
N
quinolena

HO

N
6-hidroxi-quinolena
Otro ejemplo de hidroxilacin heterocclica lo constituye la oxidacin microsomal del anillo
de cumarina, el cual es muy comn en muchos metabolitos secundarios de algunas plantas
superiores y es la estructura bsica de un grupo de rodenticidas que tienen efecto hemoltico. En
este caso la adicin del grupo hidroxilo se lleva a cabo en la posicin 7, s sta se encuentra libre,
como se observa en la Figura 2.2.2. Tambin, hay que mencionar que algunas micotoxinas como
las aflatoxinas y ocratoxinas tienen dentro de su estructura el anillo cumarnico, por lo tanto es
factible que se lleve a cabo la hidroxilacin.

39

FIGURA 2.2.2
Hidroxilacin microsomal del anillo heterocclico de cumarina

CIT P-450
[o]
O
cumarina

HO

7 hidroxi-cumarina

2.3 N-Dealquilacin.
La N-dealquilacin es la remocin de grupos alquilo del tomo de nitrgeno y en realidad,
se podra considerar como un proceso donde se exponen los grupos funcionales como es el grupo
amino. Los grupos N-alquil son removidos oxidativamente por conversin al correspondiente
aldehdo como se observa en la Figura 2.3.1.

FIGURA 2.3.1
Dealquilacin mediada por oxidacin microsomal enzimtica

R-N

CH3

CIT P-450

CH 3

[O]

amina terciaria
CH 3
N

R-N

CH3
H

amina secundaria

CH3

aldehido

NH 2
HCHO
[O]

N,N-dimetilanilina

+ HCHO

HCHO
[O]
anilina

2.4. N-Hidroxilacin.
La N-hidroxilacin de arilaminas primarias, arilamidas e hidrazinas, es catalizada por el
sistema de oxidacin microsomal involucrando la participacin del citocromo P-450 y requiriendo
NADPH y oxgeno molecular. As, el ejemplo ms simple es el de la N-hidroxilacin de la anilina
para producir fenilhidroxilamina como se observa en la Figura 2.4.1. Hay que mencionar que los
metabolitos formados por este proceso oxidativo, pueden ser molculas muy reactivas.

40

FIGURA 2.4.1
N-hidroxilacin de la anilina

NH-OH

NH2
CIT P-450
NADPH/O 2

fenilhidroxilamina

anilina

En este proceso oxidativo se pueden presentar algunos ejemplos de bioactivacin como

es el caso de la N-hidroxilacin del 2-acetilaminofluoreno (Figura 2.4.2) que produce un potente
carcinognico (Anders, 1985; Timbrell, 1985).

FIGURA 2.4.2
N-hidroxilacin del 2-acetil-aminofluoreno (Tomado de Timbrell, 1985)

HO

HN-C-CH 3

C-CH 3

CIT P-450
NADPH/O 2
2-acetil-aminofluoreno

N-hidroxil-2-acetil-aminofluoreno
(POTENTE CARCINOGENICO)

2.5. Desulfuracin.
La sustitucin del tomo de azufre por un tomo de oxgeno en una molcula orgnica por
oxidacin microsomal, se conoce como desulfuracin y es un proceso comn para la
Biotransformacin de los insecticidas organofosforados, los cuales se usan ampliamente en las
actividades agrcolas. En la Figura 2.5.1 se tiene un ejemplo ilustrativo como es la desulfuracin
del paratin, con lo cual se obtiene el metabolito oxidado que tiene mayor efecto inhibidor sobre la
acetilcolinestarasa. (Timbrell, 1985; Miyamoto et al, 1988).
Este proceso de oxidacin microsomal es aprovechado en la bioactivacin de los
insecticidas organofosforados. As, tenemos por ejemplo que el Paratin tiene un DL50 de 10 a 12
mg/Kg p.c., en tanto que el Paraoxn (metabolito desulfurado) incrementa su toxicidad con un
DL50 entre 0.6 a 0.8 mg/Kg p.c.; los anteriores datos de toxicidad corresponden a evaluaciones en
rata por va intraperitoneal.

41

FIGURA 2.5.1
Desulfuracin oxidativa del paratin

CH 3-CH 2-O
CH 3-CH 2-O

s
CIT-P450

P
O

NO2

[O]

CH 3-CH 2-O
CH 3-CH 2-O

O
P
O

NO2

paraoxn

paratin

2.6. Reacciones de oxidacin no microsomal.

Aunque el sistema de oxidacin microsomal con la participacin del citocromo P-450, es
el proceso enzimtico ms comn en la oxidacin de un compuesto extrao, hay otras vas
metablicas que pueden llevar a cabo la oxidacin de algunas molculas orgnicas como son: la
oxidacin de aminas, alcoholes, aldehidos y purinas entre otras (Timbrell, 1985; Miyamoto et al,
1988).

En la oxidacin de aminas, hay la participacin ya sea de monoamino o diamino oxidasas,

ambas involucradas en la desaminacin tanto de aminas primarias, secundarias y terciarias,
resultando como productos sus respectivos aldehidos como se puede observar en la Figura 2.6.1.
La enzima monoamina oxidasa se localiza en las mitocondrias de varios tejidos; en tanto que la
diamino oxidasa se encuentra en el citosol de las clulas.
FIGURA 2.6.1
Oxidacin no-microsomal de putrescina y 5-hidroxitriptamina

NH 2-(CH 2)4-NH 2

DIAMINO-OXIDASA

putrescina

adipicaldehdo

CH 2-CHO

HO

CH 2-CH 2-NH 2

HO

CHO-(CH 2)2-CHO

MONOAMINO-OXIDASA

N
H
5-hidroxitriptamina

N
H
3 acetaldehdo-5-hidroxi-indol

Aunque in vitro el sistema microsomal oxidativo ha demostrado que puede oxidar el

etanol; sin embargo, in vivo la enzima que lleva a cabo esta funcin es la alcohol deshidrogenasa,
la cual se encuentra en la fraccin soluble de varios tejidos. Los productos de oxidacin de esta
enzima, son los correspondientes aldehdos o cetonas, de acuerdo a s son alcoholes primarios o
secundarios respectivamente. Los productos carbonlicos de la accin de la alcohol
deshidrogenasa, pueden sufrir una posterior oxidacin por la aldehidos deshidrogenasa y producir
los respectivos cidos orgnicos, como se muestra en el ejemplo de la Figura 2.6.2.

42

FIGURA 2.6.2
Oxidacin del etanol hasta cido-actico

ALCOHOL DESHIDROGENASA

CH 3-CH2-OH

CH 3-C

H
acetaldehdo

etanol

ALDEHIDO DESHIDROGENASA

CH 3-C

H
acetaldehdo

CH 3-COOH
cido actico

En este proceso oxidativo presentamos el caso de la bioactivacin que corresponde al

alcohol allico, ya que al actuar sobre este compuesto la alcohol deshidrogenasa se forma el
respectivo aldehdo, que en este caso corresponde a la acrolena, el cual es un hepatotxico que
causa necrosis periportal en animales de experimentacin (Figura 2.6.3, Timbrell, 1985).
Precisamente, este aldehdo por tener un carcter muy reactivo, esta implicado en la formacin de
cidos grasos cclicos, los cuales al parecer tienen un efecto txico.

FIGURA 2.6.3
Oxidacin no-microsomal del alcohol allico

O
CH 2=CH-CH 2-OH
alcohol allico

ALCOHOL DESHIDROGENASA

CH 2=CH-C

Acrolena
(HEPATOTOXICO)

2.7. Reduccin.
Aunque el sistema de oxidacin microsomal que contiene citocromo P-450 normalmente
lleva a cabo la oxidacin xenobitica; este sistema puede funcionar como un proceso de
biotranformacin reductivo. El proceso reductivo se presenta cuando hay una baja tensin de
oxgeno molecular (baja concentracin) y por consiguiente ciertos substratos xenobiticos pueden
aceptar uno o dos electrones que son proporcionados por el sistema microsomal con participacin
del Citocromo P-450, en lugar del oxgeno. En este panorama reductivo, incluso el oxgeno acta
como inhibidor de esta ruta, ya que compite con los substratos por los electrones; adicionalmente,
los mismos productos de reduccin son inhibidores de este sistema, ya que pueden competir con
los propios sitios de unin del Citocromo P-450 y por consiguiente detener el flujo de electrones,
por lo cual este proceso es menos efectivo que la oxidacin (Klaassen et al, 1986; Gilman et al,
1990; Shibamoto y Bdjeldanes, 1996).
En la figura 2.7.1 se tiene esquematizado las principales reacciones de reduccin que
puede llevar a cabo el anterior sistema, recordando que esta ruta solo se presenta en un ambiente
anaerbico. En base a lo anterior, se establece que la microflora intestinal tiene una gran

43

influencia en este proceso de reduccin; ya que estos microorganismos tienen su sistema de

oxidacin microsomal normal, pero debido al medio en que se encuentran (reduccin de la tensin
de oxgeno), pueden llevar a cabo el proceso de reduccin en lugar de la oxidacin (Hodgson and
Guther; 1980; Klaassen et al, 1986).
FGURA 2.7.1
Reacciones de reduccin del sistema microsomal con participacin de citrocromo P-450
(Adaptada de Klaassen et al, 1986)

AZO-REDUCCION

R1-N=N-R 2

CIT P-450
ausencia de O 2

+ R2-NH 2

R1-NH 2

R1

R1
CIT P-450

REDUCCION DE NITROAROMATICOS

ausencia de O 2
NH 2

NO 2

X
DESHALOGENACION REDUCTIVA

R1-C-X
X

CIT P-450 2H +
ausencia de O 2

X
R1-C-H

+ HX

R1 y R2 = sustituyentes alifticos o aromticos

X = halgeno

2.8. Hidrlisis.
En las reacciones de fase I del proceso de biotransformacin de xenobiticos, lo que se
pretende es darle un mayor carcter polar a las molculas, lo cual implica adicionarle grupos
funcionales polares tales como hidroxilo o aminas; sin embargo, otro camino para llegar al mismo
propsito implica realizar un proceso hidroltico en cierto tipo de compuestos, para que se puedan
exponer estos grupos polares funcionales (Timbrell, 1985; Gilman et al, 1990).
En ciertos tejidos de los mamferos y especialmente en el plasma sanguneo se
encuentran varias esterasas, las cuales tienen la capacidad de producir hidrlisis de diferentes
tipos de steres. Estas esterasas son clasificadas como aril-esterasas y acetil-esterasas; incluso
cabe mencionar que enzimas tales como tripsina y quimotripsina pueden producir la hidrlisis de
ciertos carboxi-steres. En la Figura 2.8.1 tenemos el esquema genrico de este proceso
hidroltico con un ejemplo ilustrativo.

44

FIGURA 2.8.1
Hidrlisis de steres por accin de esterasas

R1-C-O-R2

ESTERASA

H20

R1-C-OH

+ R2-OH

O
ster

agua

cido orgnico

alcohol

NH2
NH2

CH3

CH 3

CH2

ESTERASA

CH2
C-O-CH 2-CH2-N-CH 2-CH3

HO-CH2-CH2-N

H20

O
procana

C-OH

CH2

CH3

cido p-aminobenzico

N,N-dietil-amino-etanol

La hidrlisis de amidas es catalizada por amidasas; sin embargo, este proceso hidroltico
es ms lento en comparacin al proceso de hidrlisis de los steres. Adicionalmente, el plasma no
es un lugar de alta actividad de hidrlisis de amidas, sino que sta se presenta en otros tejidos,
como es el caso de algunas carboxil-amidasas microsomales del hgado (Repetto, 1981; Timbrell,
1985). En la Figura 2.8.2 se presenta el esquema genrico y un ejemplo de la hidrlisis de una
amida.
FIGURA 2.8.2
Hidrlisis de amidas por amidasas
O
R1-C-NH-R2 + H20
amida

agua

AMIDASA

R1-C-OH + R2-NH 2
O
cido orgnico amina

O
NH-C-CH3

NH2
AMIDASA

H2O
O-CH2-CH3
fenacetina

CH3-COOH

O-CH2-CH3
fenetidina

cido actico

Los epxidos que son anillos de tres miembros que contienen un tomo de oxgeno,
pueden ser metabolizados por la enzima epxido-hidratasa; esta enzima adiciona una molcula de
agua al epxico produciendo un transdihidrodiol. Este tipo de reaccin es de suma importancia en
el proceso de biotransformacin, ya que en la hidroxilacin de xenobiticos que es comn y se

45

producen epxidos como metabolitos intermediarios, los cuales son molculas muy reactivas que
pueden generar un evento mutagnico.
La epxido-hidaratasa es una enzima que se encuentra en la fraccin microsomal de las
clulas, muy prxima al sistema oxidasa de funcin mixta; por lo tanto, la epxido-hidratasa lleva
a cabo un proceso de destoxificacin sumamente importante, ya que desactiva intermediarios
inestables muy reactivos, que son producidos en la hidroxilacin mediada por Citocromo P-450.
(Figura 2.8.3, Timbrell, 1985; Klaassen et al, 1986).

FIGURA 2.8.3
Hidr+olisis de epxidos por accin de la epxico-hidratasa

O
R1-CH-CH-R2 + H2O

OH
EPOXIDO-HIDRATASA

OH
dihidrodiol (trans)

agua

poxido

Bencen-1,2-xido

R1-CH-CH-R2

EPOXIDO-HIDRATASA

H2O

OH
H
H
OH
Bencen (trans)1,2-dihidrodiol

3. Reacciones de fase II.

Este tipo de reacciones metablicas son de biosntesis por lo cual requieren de un gasto
energtico (formacin de enlaces qumicos); por lo tanto, son reacciones enzimticas que aparte
de requerir de ciertos cofactores, necesitan de substratos de alta energa como es el ATP.
Las reacciones de fase II tambin se denominan como reacciones de conjugacin,
involucran la adicin a los compuestos xenobiticos de molculas endgenas, las cuales
generalmente son polares y de alta disponibilidad por parte del organismo. Estos grupos
endgenos son adicionados a grupos funcionales presentes ya en los compuestos xenobiticos, o
que fueron introducidos o expuestos en la fase I del proceso de biotransformacin. El propsito
final es de obtener molculas polares y con bajo coeficiente de particin lpido/agua, para que se
facilite su excrecin al disminuir substancialmente su carcter lipoflico (Klaassen et al, 1986;
Manahan, 1990).

3.1. Glucuronidacin.
La principal reaccin de conjugacin que se presenta en la mayora de las especies
animales es la incorporacin de cido glucurnico a travs del cido uridn difosfo glucurnico
(UDPGA). La obtencin del anterior complejo donador proviene de precursores disponibles del
metabolismo normal; o sea, que el UDPGA es formado en la fraccin soluble de las clulas
hepticas a partir de la glucosa-1-fosfato como se observa en la Figura 3.1.1 (Timbrell, 1985;
Manahan, 1990).

46

FIGURA 3.1.1
Formacin del cido uridin difosfo glucurnico (UDPGA)

CH 2OH
O
OH

CH2OH
O

+ Pirofosfato

+ UTP

O P OH

O-UDP

O
glucosa-1-fosfato

uridin difosfato -D-glucosa

(UDPG)

uridin-trifosfato

CH 2COO
O
UDPG + 2NAD +

UDPG-DESHIDROGENASA

H2O

O P O P O CH 2
O
O
O

O
NH
O

cido uridin-difosfo-glucurnico
(UDPGA)

La conjugacin del UDPGA con los xenobiticos involucra un ataque nucleoflico de estos
compuestos a travs de los tomos de oxgeno, nitrgeno o azufre al carbono C-1 del cido
glucurnico, y se observa una inversin de dicho enlace ya que pasa de forma a , como se
puede observar en la Figura 3.1.2, donde se ilustra el ataque nucleoflico del fenol sobre el cido
uridn difosfo glucurnico.
FIGURA 3.1.2
Inversin del enlace a en la formacin del glcurnido
(Adaptado de Trimbell, 1985)

COOH
O

..

COOH
O O

HO
UDP-GLUCORONOSIL

O-UDP
(UDPGA)

TRANSFERASA

fenol

+
glucoronil-fenil-ter

UDP
uridin difosfato

La enzima responsable de la catlisis del proceso de conjugacin con UDPG, es la UDPglucuronosil-transferasa, la cual se encuentra en la fraccin microsomal de varios tejidos como
hgado, rin, piel, intestino y cerebro, siendo cuantitativamente de mayor importancia en el
hgado. En si, la glucuronidacin es el principal proceso de conjugacin de las reacciones de fase
II, tanto para compuestos endgenos como exgenos, y el resultado es la obtencin de
conjugados polares solubles en fase acuosa, que puedan ser eliminados del organismo a travs de
la orina o bilis. Debido a la amplitud de substratos que pueden ser aceptados y la suficiente
disponibilidad del donador (UDPGA), hace que la conjugacin con cido glucurnidico tanto
cualitativa como cuantitativamente sea la ms importante reaccin de conjugacin; as, en la
Figura 3.1.3. se muestran los principales tipos de glucurnidos que se pueden formar a partir de
diferentes grupos funcionales de los agentes xenobiticos (Burchell and Coughtrie, 1989).

47

FIGURA 3.1.3
Principales tipos de glucurnidos donde se muestra el grupo nucleoflico

TIPO DE GLUCURONIDO

GRUPO FUNCIONAL (G)

ALCHOHOL:
aliftico
alicclico
benclico
fenlico

..
G-OH

ACIDO:
aliftico
aromtico

steres glucurnidos

G-C
OH
..

-insaturado

ARILAMINAS:
aliftico

teres glucurnidos

..
G-NH

N-glucurnidos

..

(G)2-N-OH

N-HIDROXIL:
aliftico
aromtico

..

TIOLES:
aliftico
aromtico

G-SH

O-glucurnidos

S-glucurnidos

Aunque el proceso de conjugacin generalmente disminuye la actividad biolgica del

agente xenobitico original o biotransformado, hay casos excepcionales en donde se observa
tambin una bioactivacin, como es la glucuronidacin del acetilamino fluoreno, (Figura 3.1.4,
Timbrell, 1985).

FIGURA 3.1.4
Glucuronidacin del N-hidroxiaceilaminofluoreno
OH
N-COCH 3

COCH 3
UDP-GLUCURONOSIL

O-aciglucurnico

TRANSFERASA

N-hidroxiacetilaminofluoreno

N-hidroxiacetilaminofluoren-glucuronido
(CARCINOGENICO)

48

3.2.- Sulfatacin.
En los mamferos, una importante conjugacin para varios tipos de grupos hidroxilo es la
formacin de steres de sulfato. Esta misma reaccin tambin se puede presentar con grupos
amino; as, pueden ser substratos de esta conjugacin: alcoholes alifticos, aminas aromticas,
fenoles y compuestos endgenos tales como esteroides y carbohidratos. En este proceso de
conjugacin el donador del compuesto endgeno (sulfato) es el 3-fosfoadenosin-5-fosfosulfato
(PAPS), el cual a su vez requiere ATP para su formacin, como se observa en la Figura 3.2.1. El
sulfato inorgnico precursor del PAPS puede ser agotado cuando concentraciones significativas
son requeridas para este proceso de conjugacin.

FIGURA 3.2.1
Formacin del fosfoadenosin-fosfosulfato (PAPS)
NH 2
O

-O-S-O-P-O-CH 2
O
ATP

adenosintrifosfato

HSO 3

sulfato
inorgnico

O=P-O

N
N

OH

OH
3'-fosfoadinosin- 5 '-fosfosulfato
(PAPS)

El proceso de sulfatacin es un efectivo proceso de destoxificacin, ya que los conjugados

formados, son sulfatos orgnicos ionizados que son relativamente fcil de excretar, principalmente
a travs del rin. Sin embargo, debido a que el sulfato inorgnico requerido para la sntesis del
PAPS parece provenir de la cisteina, este aminocido es un factor limitante de dicho proceso de
conjugacin; as, tenemos que la sulfatacin de fenoles o aril-alcoholes tiene una baja capacidad y
por consiguiente la mayor alternativa para este tipo de compuestos es la glucuronidacin.
Para llevar a cabo la conjugacin con sulfato se requiere de la participacin de una
sulfotransferasa, de la cual hay una amplia variedad para diferentes substratos y estas se
encuentran en la fraccin soluble de las clulas de varios tejidos, particularmente del hgado,
mucosa intestinal y rin. En la Figura 3.2.2 se tiene ilustrado la sulfatacin de alcoholes
aromticos y alifticos (Klaassen et al, 1986; Mulder, 1990).
FIGURA 3.2.2
Formacin de conjugados de sulfato para etanol y fenol

CH3-CH2-OH + PAPS

ETANOL
SULFOTRANSFERASA

CH3-CH2-O-SO3H

etanol

etil-sulfato

OH

+ PAPS
fenol

FENOL
SULFOTRANSFERASA

O-SO3H

fenil-sulfato

49

3.3. Conjugacin con glutatin.

Cierto tipo de compuestos xenobiticos son excretados como conjugados de N-acetil
cisteina (conjugados del cido mercaptrico). Estos conjugados, generalmente son el resultado de
la ruptura enzimtica de los conjugados con glutatin. La conjugacin inicial con glutatin para los
diferentes substratos (ya sean alifticos o aromticos), requiere de una variedad de enzimas del
tipo glutatin-transferaras. Estas enzimas son localizadas en la fraccin soluble de las clulas
(Jakoby, 1980; Manahan, 1990).
En la Figura 3.3.1 se muestra esquemticamente el proceso completo de conjugacin con
glutatin, en donde en primera instancia est la participacin de la glutatin-transferasa para el
substrato respectivo; a continuacin se lleva a cabo la ruptura metablica de los residuos glutamil
y glicinil del glutatin y por ltimo la acetilacin del conjugado con cisteina para formar el
correspondiente derivado del cido mercaptrico. En este proceso generalmente el grupo sulfidrilo
(tiol) del glutatin acta como un nucleoflico, atacando el centro electroflico reactivo del
componente extrao.
FIGURA 3.3.1
Conjugacin con glutatin hasta la formacin del derivado de cido mercaptrico
O

HS

CH2

RS

CH

NH

NH

CH 2

CH 2

COOH

CH 2

GLUTATION-S-TRANSFERASA
COOH

CH
NH 2

CH 2

CH

NH

NH

CH 2

CH 2
CH 2

O
Conjugado con glutatin

RX

COOH

+ HX

CH

COOH

NH 2

Xenobitico

Glutatin

-GLUTAMIL-TRANSPEPTIDASA

COOH

CH 2

CH 2

CH

COOH

NH 2
Acido glutmico
NH 2

CH 2

COOH

Glicina
O
RS

CH 2

CH

RS

COOH
CISTENIL-GLICINASA

NH 2

CH 2

CH

NH

CH 2

COOH

NH 2

Conjugado con cisteina

Conjugado de cistenilglicina

RS
ACETIL-CoA
N-ACETIL-TRANSFERASA

CH 2

CH

COOH

NH

CH 3

O
Derivado del cido mercaptrico

NH2

La conjugacin con glutatin, es con frecuencia un proceso muy importante en la

destoxificacin de diferentes compuestos. Sin embargo, debido al amplio rango de substratos que
se pueden conjugar, el mecanismo de formacin de conjugados puede variar un poco; as, los
hidrocarburos aromticos, los haluros de alquilo, los haluros de arilo, los aril-epxidos, los alquil
epxidos y los nitroaromticos, pueden todos ellos ser conjugados con glutatin y excretados
como derivados del cido mercaptrico. No obstante que la eliminacin va conjugacin con
glutatin es por medio del cido mercaptrico, en ocasiones conjugados del propio glutatin o de
cistenil-glicina pueden ser excretados por la bilis (Timbrell, 1985; Klaassen et al, 1986; Manahan,
1990).

50

Precisamente a travs de la conjugacin con glutatin se pueden eliminar los epxidos,

como es el ejemplo clsico de la conjugacin del naftaleno que es un hidrocarburo aromtico, y
que se observa en la Figura 3.3.2. Tambin, la conjugacin con glutatin se ha observado que se
presenta con los hidrocarburos aromticos policclicos y las aflatoxinas

FIGURA 3.3.2
Conjugacin con glutatin del naftalen 1,2-xido (epxido)
(Adaptada de Timbrell, 1985)
:SH-GLUTATION

O
REACCION

DE FASE I

naftaleno

epoxido
S-CH 2-CH-COOH
NH 2
OH

GLICINIL

REACCION DE FASE II

S-GLUTATION

GLUTAMIL

OH

ACETIL-CoA/H +
S-CH 2-CH-COOH
2 H2O

NH-C-CH 3
O
cido naftalen-mercaptrico

51

3.4. Otros procesos de conjugacin

Hay otros procesos de conjugacin; sin embargo, la conjugacin con cido glucurnico es
la de mayor capacidad en los animales superiores. Dentro de otros procesos de conjugacin cabe
destacar la acetilacin, ya que es un proceso importante en el metabolismo de las aminas
aromticas, sulfonamidas e hidrazinas. Las enzimas que cataliza la acetilacin de aminas se
designa como Acetil CoA: amina N-acetil-transferasa, teniendo como cofactor a la acetil coenzima
A. La enzima responsable de esta conjugacin se encuentra en el citosol de las clulas de
diversos tejidos; un dato importante es que los perros y especies relacionadas, son deficientes en
este sistema de conjugacin y por lo tanto son incapaces de acetilar a un amplio nmero de
substratos. En la figura 3.4.1 se ilustra el tipo de aminas que pueden sufrir la acetilacin
(Klaassen et al, 1986; Gorrod et al, 1988).
FIGURA 3.4.1
N-acetilacin de algunos compuestos aminados
(Adaptacin de Klaassen, et al, 1986)

SUSTRATO
PRODUCTO

O
NH 2

NH-C-CH 3

aril-amina

N-ACETILACIN
O
R-NH-NH 2

R-NH-NH-C-CH 3

hidrazina sustituda

O
SO 2-NH 2

SO 2-NH-C-CH 3

aril-sulfonamida

Otra reaccin importante de fase II, es la conjugacin de compuestos con un grupo

carboxilo; en este caso, hay una amplia variedad de aminocidos para llevar a cabo la
conjugacin, y consecuentemente son excretados como pptidos. El aminocido ms
comnmente utilizado es la glicina, pero tambin se observan conjugados con ornitina, taurina y
glutamina. La reaccin involucra la acilacin del grupo amino del aminocido por parte del
compuesto extrao; a su vez, el grupo carboxilo del compuesto xenobitico tiene que formar un
derivado con la coenzima A, como puede observarse en la Figura 3.4.2 donde se ilustra la
conjugacin del cido benzico con glicina (Klaassen et al, 1986).

52

FIGURA 3.4.2
Conjugacin del cido benzico con glicina

CO-S-CoA

COOH
ATP/CoA-SH

cido benzico

AMP +

PPi

derivado de la coenzima-A
del cido benzico

CO-S-CoA

CO-NH-CH 2-COOH

+ NH 2-CH2-COOH
+

CoA-SH

glicina
cido hiprico

4. Integracin del proceso de biotransformacin.

Si bien el propsito del proceso de biotransformacin es la eliminacin de sustancias
extraas que llegan a penetrar al organismo, por lo cual es un proceso detoxificante al evitar su
acumulacin, tambin se pueden presentar fenmenos de bioactivacin, siendo, estos ltimos
ms bien casos excepcionales.
El proceso de biotransformacin es muy complejo, donde tiene gran relevancia el factor
gentico; as, tenemos que sobre un mismo agente xenobitico hay diferencia tanto cualitativa
como cuantitativa de los metabolitos formados por diferentes especies. Por lo tanto, la Toxicologa
Comparativa, nos indica las similitudes y diferencias de la respuesta hacia un agente xenobitico,
por las diferentes especies animales y el hombre. Como ejemplo de lo anterior, tenemos el
proceso de biotransformacin del fenol que se muestra en la Figura 4.1, complementandose ste,
con los datos del Cuadro 4.1; donde se observa la gran diferencia tanto cualitativa como
cuantitativa de los metabolitos formados (Nerbert and Felton, 1976; Hodgson and Guthrie, 1980).

FIGURA 4.1
Variacin iterespecie en la conversin metablica del fenol
(Adaptada de Hodgson and Guthrie, 1980)
0S03-

0S03SULFOTRANSFERASA

SULFOTRANSFERASA

PAPS

PAPS

OH

OH
Fenil sulfato

HO
Sulfato de quinol

HIDROXILACION
REACCION
DE
FASE II

REACCION
DE
FASE II

REACCI0N
DE
FASE I
Fenol

OH
Quinol

OC6 H9O6

OC6H9O6
GLUCURONILTRANFERASA
UDPGA
Fenil glucurnido

GLUCURONILTRANFERASA
UDPGA

HO
Monoglucurnido de quinol

53

CUADRO 4.1.
Variacin interespecie en la conversin metablica del fenol in vivo.
ESPECIE

PORCENTAJE DE EXCRECIN EN 24 HORAS

GLUCURNIDO
SULFATO
FENOL
QUINOL
FENOL
QUINOL
23
7
71
0
35
0
65
0
70
19
10
0
65
21
14
0
100
0
0
0
78
5
17
0
25
7
68
0
41
0
32
28
46
0
45
9
0
0
87
13

Humano
Mono Rhesus
Mono Squirrel
Mono de cola de rata
Cerdo
Cobayo
Rata
Hurn
Conejo
Gato

Del proceso de biotransformacin del fenol ilustrado con anterioridad en las diferentes
especies, se puede deducir que es de suma importancia poder conocer las similitudes y
diferencias en el metabolismo hacia los diferentes agentes xenobiticos. Precisamente, esta
informacin sustenta a la Toxicologa Comparativa, de tal manera se puede seleccionar el modelo
biolgico ms adecuado para su extrapolacin al humano (Williams, 1974; Hodgson and Guthrie,
1980).
El comportamiento anterior es probablemente debido a un proceso evolutivo de los
organismos, ya que se puede considerar que la distribucin y funcionalidad de la Citocromo P-450,
tanto en plantas como en animales es de remota aparicin, y actualmente se conoce que hay una
gran variedad de isoenzimas agrupadas por familias, siendo las CYP 1, 2 y 3 que se involucran
ms en el metabolismo de xenobiticos, en particular la CYP2 que es la que presenta mayor
variabilidad inter e intraespecie (Klaasen et al, 1986; Nebert and Gonzlez, 1987).
Finalmente, en los Cuadros 4.2 y 4.3 se tienen algunas consideraciones generales del
proceso de biotransformacin en el humano en condiciones normales de salud, donde cabe
mencionar que es de suma importancia el aspecto alimenticio (Netter, 1994). De los cuadros
mencionados, se puede deducir que la mayora de los xenobiticos son eliminados como
glucurnidos y el rin es la va de eliminacin mayoritaria (Klaasen et al, 1986).

CUADRO 4.2.
Capacidad relativa de las reacciones de conjugacin
(Adaptado de Klaassen et al, 1986).
REACCIN DE CONJUGACIN

CAPACIDAD

Glucuronidacin

Alta

Con aminocidos

Media

Sulfonacin

Baja

Con glutatin

Baja

Acetilacin

Variable

54

CUADRO 4.3.
Rutas preferidas de excrecin de conjugados de xenobiticos
(Adaptado de Klaassen et al, 1986).

METABOLITOS FORMADOS

VA DE
ELIMINACIN

Glucurnidos (< 250 PM)

Rin

Glucurnidos (> 350 PM)

Bilis

Sulfatos

Rin

Conjugados con aminocidos

Rin

Conjugados con glutatin

Bilis

Derivados del cido mercaptrico

Rin

55