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Organismo
Argentino de
Acreditacin
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CONTENIDO
1. OBJETIVO ............................................................................................................................ 3
2. ALCANCE ............................................................................................................................ 3
3. DOCUMENTACIN DE REFERENCIA ...........................................................................3
4. ABREVIA TURAS Y DEFINICIONES ................................................................................ 3
5. RESPONSABILIDADES.....................................................................................................5
6. DESCRIPCIN .................................................................................................................... 5
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1. OBJETIVO
Establecer una gua para las actividades para la validacin de mtodos de ensayo no
normalizados, desarrollados o diseados por el Laboratorio, mtodos normalizados
empleados fuera del alcance previsto, ampliaciones y modificaciones de los mtodos
normalizados y para las verificaciones necesarias para confirmar que puede aplicar
correctamente los mtodos normalizados antes de utilizarlos para los ensayos. Regular
o sistematizar los mtodos para la validacin de las instrucciones de ensayo y de
calibracin.
El objetivo de la validacin es probar la aptitud de los m todos, as como la capacidad
del laboratorio. La validacin se apoya en los parmetros estadsticos del
procedimiento.
Los procedimientos y el alcance de la validacin no son siempre los mismos y deben
ser establecidos individualmente.
2. ALCANCE
Esta gua la deben aplicar los laboratorios de ensayo acreditados ante el OAA, los
laboratorios que solicitan su acreditacin, y los evaluadores y expertos tcnicos que
actan en los procesos de acreditacin, a todos los mtodos de ensayo establecidos.
3. DOCUMENTACIN DE REFERENCIA
3.1. MC -OAA : Manual de la Calidad del OAA: 2003.
3.2. Norma IRAM 301:2000-Norma ISO/IEC 17025: 1999.
3.3. The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A Laboratory Guide to Method
Validation and Related Topics. EURACHEM Guide. Editor: H. Holcombe, LGC,
Teddington: 1998.
3.4. NORMA IRAM 32: : Metrologa. Vocabulario VIM: 1997.
3.5.Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. Guide EURACHEM- CITAC
Guide: 2000.
3.6. Norma ISO 9000: 2000.
3.7. IUPAC, Limit of Detection, Spectrochi m. Acta 33 B, 242, 1978.
4. ABREVIA TURAS Y DEFINICIONES
4.1. ABREVIATURAS
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4.2. DEFINICIONES
Validacin: Confirmacin mediante el suministro de evidencia objetiva de que se han
cumplido los requisitos para una utilizacin o aplicacin especfica prevista (3.4.)
Verificacin: Confirmacin mediante la aportacin de evidencia objetiva de que se
han cumplido los requisitos especificados. (3.4.).
Valor verdadero convencional (de una magnitud): valor atribuido a una magnitud
particular, y aceptado a veces por convencin, porque la representa, con una
incertidumbre apropiada, para un fin dado (3.4.).
Mesurando: magnitud particular sometida a medicin (3.4.).
Incertidumbre de medida: Parmetro, asociado al resultado de una medicin, que
caracteriza la dispersin de los valores que podran ser razonablemente atribuidos al
mesurando (3.4.).
Exactitud de una medicin: proximidad entre el resultado de una medicin y el valor
verdadero del mesurando (3.4.).
Repetibilidad (de los resultados de las mediciones): proximidad entre los
resultados de mediciones sucesivas del mismo mesurando, realizadas bajo las
mismas condiciones de medicin. (Aplicacin de un mismo procedimiento, a un mismo
objeto, por el mismo operador, en intervalos cortos de tiempo, con el mismo
equipamiento instrumental, en el mismo lugar) (3.4.).
Reproducibilidad: Proximidad entre los resultados de mediciones de un mismo
mesurando, realizadas bajo distintas condiciones de medicin. (3.4.).
Precisin intermedia : magnitud que relaciona la variacin en los resultados
observados cuando uno o ms factores, tales como tiempo, equipamiento, operador,
varan dentro de un mismo laboratorio (3.5.).
Lmite de deteccin: es la menor cantidad que puede ser distinguida del fondo con
cierto nivel de confianza especificado.
Para un resultado analtico que es muy cercano al valor del blanco, se plantea la duda
de si el valor corresponde a valores aleatorios del blanco o a la presencia real del
analito. La seal del fondo es producida es producida por el blanco y exhibe ruido. El
lmite de deteccin (LD) corresponde a una seal k veces la desviacin estndar del
ruido del fondo. Tpicamente el valor de k es igual a 3 (LD=3F ). Los valores por
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encima del LD pueden ser atribuidos a la presencia del analito y los valores por debajo
del LD son indicativos de la ausencia de analito en cantidades detectables (3.7.).
Lmite de cuantificacin: es la menor cantidad que puede ser determinada
cuantitativamente con una incertidumbre asociada, para un dado nivel de confianza.
Para el anlisis cuantitativo debe quedar absolutamente claro que slo se emplean
valores atribuibles al analito. El lmite de cuantificacin es entre 3 y 10 veces el LD
(LD= 3 F), segn cada caso (3.7.).
5. RESPONSABILIDADES
La aplicacin de este documento es responsabilidad del personal del OAA involucrado
en el proceso de acreditacin y del personal de los laboratorios acreditados y de
aquellos que solicitan su acreditacin.
6. DESCRIPCIN
La realizacin de actividades de validacin de los mtodos de ensayo utilizados por el
propio laboratorio, contemplan la satisfaccin de las necesidades del cliente y la
adecuacin para realizar los ensayos previstos.
El laboratorio debe confirmar que puede aplicar correctamente los mtodos
normalizados previo a su uso en ensayos o calibraciones. Cualquier variacin en el
mtodo normalizado implica la repeticin de dicha confirmacin.
Para el caso de metodologas de ensayo o de calibracin desarrolladas por el
laboratorio los mtodos deben ser adecuada y totalmente validados antes de su uso.
Los equipos tambin deben ser calibrados y/ o validados antes de su uso.
6.1. Requisitos Generales
El OAA establece las siguientes recomendaciones:
6.1.1. Principio de la validacin
Cada validacin de un procedimiento consiste en tres pasos.
1. Establecimientos de las condiciones por cumplir (por ejemplo : lmite de deteccin <
1 mg/L, intervalo lineal mayor a 2 rdenes de magnitud, incertidumbre de los
resultados <20% en todo el intervalo de trabajo, para el caso de la validacin de un
mtodo analtico general. No puede establecerse como principio de validacin para
otros tipos de mtodos de ensayo).
2. Determinacin de los parmetros estadsticos del procedimiento.
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Objetivos de la validacin
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Mtodo de ensayo
Caso 1: mtodo normalizado
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METODOS DE ENSAYO
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Mtodo de extraccin
Porcentaje de recuperacin
Matriz de la muestra
Cambios en el pH
Robustez
Cambio de operador
Repetibilidad(sesgo)
Deteccin
Lmite
de
deteccin-
exactitud
a ensayar.
Detalle
sus resultados.
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Registro
Incertidumbres
de las mediciones.
Resultados obtenidos.
Personas
Conclusiones,
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ANEXO 1
Ejemplos de determinacin de parmetros estadsticos y realizacin de las
medidas de validacin para el caso de mtodos qumicos de anlisis.
1. Incertidumbre de los resultados
Es un parmetro de identificacin centrar e inalienable para preparar una acreditacin
segn Gua ISO 17025. Incluye los errores sistemticos y aleatorios. Para su
determinacin y especificacin existen varias posibilidades:
Indicacin acerca de la repetibilidad.
Resultados de las cartas de control.
Resultado de intercomparaciones.
Evaluacin por miembros del personal experimentados, competentes y, por
lo tanto, autorizados.
2. Repetibilidad
Puede determinarse de una manera interna. Para ello es necesario tener en cuenta
que:
Deben determinarse suficientes resultados ( recomendacin: n 10 ).
Todos los pasos del mtodo ( incluidas la toma y preparacin de la muestra,
as como la calibracin ) deben realizarse n-veces.
3. Reproducibilidad
Su determinacin tiene sentido y es posible solamente cuando otros laboratorios
cercanos utilizan el mtodo de ensayo y es posible una comparacin interlaboratorios
o cuando se realiza una ensayo de intercomparacin.
4. Elaboracin de una carta de control analizando un material de referencia
La elaboracin de una carta de control es el mtodo de eleccin para el control interno
de rutina de mtodos utilizados frecuentemente. Las cartas de control no son
adecuadas para mtodos que se utilicen meno s de alrededor de tres veces al mes.
Para ellos se analiza una muestra de control (muestra de retencin de una muestra real
o un material de referencia certificado o no ) junto con las muestras del anlisis y el
resultado se anota en la carta de control.
Las variantes ms importantes son:
Carta de control de un slo valor
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a) Se prepara una solucin del analito de inters que contenga una concentracin
entre 2,5 y 5 veces el lmite de deteccin instrumental (informado por el
fabricante) y se analiza como mnimo de 7 veces (diez veces consecutivas es
lo aconsejable) utilizando el mtodo analtico completo. Tambin puede
utilizarse el blanco de reactivos.
b) Para los propsitos operativos el LD LOD deber ser determinado
multiplicando por el apropiado valor estadstico de t (generalmente para un
nivel de confianza de 99%) por la desviacin standard obtenida de un mnimo
de 7 lecturas), donde el t estadstico es obtenido de referencias estndares o
de la tabla que sigue:
N de muestras
3
4
5
6
7
8
9
10
estadstico t
6,96
4,54
3,75
3,36
3,14
3,00
2,90
2,82
(xi x)
s = --------------------n1
donde:
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xi = la medida i de la variable x
x = el valor promedio de x.
n = es el nmero de anlisis replicados
n
x=
xi
i=1
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Personal.
Aparatos.
Reactivos, disolventes, estndares, etc.
Caudal de las fase mvil.
pH de la fase mvil ( p. ej. en HPLC ).
Gradiente de temperatura ( p. ej. en GC ).
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13. Selectividad
La selectividad da una indicacin de cuan fuertemente un re sultado es afectado por
otros componentes de la muestra.
14. Exactitud
Para la evaluacin de este parmetro se realiza el anlisis de un material de referencia
certificado, preferentemente con una matriz semejante a la de la muestra. Slo en el
caso de no existir un material adecuado se puede realizar un ensayo de recuperacin.
Cuando sea posible, se realizan un mnimo de 10 repeticiones del ensayo tres das
consecutivos.
Se compara el promedio de los valores obtenidos (X) con el valor de referencia
certificado ( ), teniendo en cuenta la incertidumbre asociada a ese material.
El mdulo de la diferencia da como resultado el sesgo del mtodo: s = X -