Cromatografa de intercambio inico

La cromatografa de intercambio inico (o cromatografa inica) es un proceso que permite la separacin

de iones y molculas polares basado en las propiedades de carga de las molculas. Puede ser usada en casi
cualquier tipo de molcula cargada, incluyendo grandes protenas, pequeos nucletidos y aminocidos. La
solucin que debe inyectarse es usualmente llamada "muestra" y los componentes separados individualmente son
llamados analitos. Es usada a menudo en purificacin de protenas, anlisis de agua o control de calidad.

Principios[editar]

Cromatograma de intercambio inico.

Fases del intercambio inico.

La cromatografa de intercambio inico conserva los analitos basandse en las interacciones de Coulomb. La fase
estacionaria muestra en la superficie grupos funcionales inicos (R-X) que interactan con iones de carga opuesta
del analito.
Este tipo de cromatografa se subdivide a su vez en dos tcnicas. La cromatografa de intercambio catinico y la
cromatografa de intercambio aninico:

La cromatografa de intercambio catinico retienecatines cargados positivamente debido a que la fase

estacionaria muestra un grupo funcional cargado negativamente, como podra ser un cido fosfrico.

La cromatografa de intercambio aninico retiene anines usando grupos funcionales cargados

positivamente, como un catin de amonio cuaternario.

R-X+ es el analito presente en la columna, C+ es el catin, A- es el anion, M+ es la muestra y B+ es el ion de la

muestra.

Un dato a tener en cuenta es que tanto la fuerza inica de los C + como la de los A- en la fase mvil se puede ajustar
para cambiar la posicin de equilibrio, cambiando de este modo el tiempo de retencin.
El cromatograma de iones que se muestra en esta seccin corresponde a uno tpico obtenido con una columna de
intercambio aninico.

Intercambio inico
El intercambio inico es un intercambio de iones entre dos electrolitos o entre una disolucin de electrolitos y
un complejo. En la mayora de los casos se utiliza el trmino para referirse a procesos de purificacin, separacin,
y descontaminacin de disoluciones que contienen dichos iones, empleando para ello slidos polimricos o
minerales dentro de dispositivos llamados intercambiadores de iones.
Los intercambiadores de iones suelen contener resinas de intercambio inico (porosas o en forma de
gel), zeolitas, montmorillonita, arcilla y humus del suelo. Los intercambiadores de iones pueden ser
intercambiadores de cationes, que intercambian iones cargados positivamente (cationes), o intercambiadores de
aniones que intercambian iones con carga negativa (aniones). Tambin hay cambiadoresanfteros que son
capaces de intercambiar cationes y aniones al mismo tiempo. Sin embargo, el intercambio simultneo de cationes y
aniones puede ser ms eficiente si se realiza en dispositivos mixtos que contienen una mezcla de resinas de
intercambio de aniones y cationes, o pasar la solucin tratada a travs de diferentes materiales de intercambio
inico.
Los intercambiadores de iones puede ser selectivos o trabajar preferentemente con ciertos iones o clases de iones,
en funcin de su estructura qumica.1 Esto puede depender del tamao de los iones, su carga o su estructura.
Algunos ejemplos tpicos de iones que se pueden unir a los intercambiadores de iones son los siguientes:

Iones H+ (hidrones, usualmente llamados protones) y OH-(hidrxido)

Iones monoatmicos con carga elctrica 1+, como Na+, K+, o Cl-

Iones monoatmicos con carga 2+, como Ca2+ o Mg2+

Iones poliatmicos inorgnicos como SO42-y PO43-

Bases orgnicas, por lo general molculas que contienen el grupo funcional amino, -NR2H+

cidos orgnicos, por lo general molculas que contienen el grupo funcional-COO -(cido carboxlico)

Otras biomolculas que puedan ser ionizadas: aminocidos, pptidos, protenas, etc.

El intercambio inico es un proceso reversible y el intercambiador de iones se puede regenerar o cargarlo de nuevo
con los iones deseables mediante el lavado con un exceso de estos iones.

Tipos de resinas de intercambio inico.

Las resinas de intercambio inico estn destinadas a varios usos, descalcificacin,
desnitratacin, desionizacin, desnitratacin. Dependiendo de la aplicacin a la que se destinen
existen diferentes tipos.
Resinas catinicas de cido fuerte:
Intercambian iones positivos (cationes).
Funcionan a cualquier pH.
Es la destinada a aplicaciones de suavizado de agua, como primera columna de desionizacin en

los desmineralizadores o para lechos mixtos. Elimina los cationes del agua y necesitan una gran
cantidad de regenerante, normalmente cido clorhdrico (HCl).
Resinas catinicas de cido dbil:
Tienen menor capacidad de intercambio.
No son funcionales a pH bajos.
Elevado hinchamiento y contraccin lo que hace aumentar las perdidas de carga o provocar
roturas en las botellas cuando no cuentan con suficiente espacio en su interior.
Se trata de una resina muy eficiente, requiere menos cido para su regeneracin, aunque
trabajan a flujos menores que las de cido fuerte. Es habitual regenerarlas con el cido de
desecho procedente de las de cido fuerte.
Resinas aninicas de base fuerte:
Intercambian iones negativos (aniones).
Es la destinada a aplicaciones de suavizado de agua, como segunda columna de desionizacin
en los desmineralizadores o para lechos mixtos. Elimina los aniones del agua y necesitan una
gran cantidad de regenerante, normalmente sosa (hidrxidosdico - NaOH).
Resinas aninicas de base dbil:
Se trata de una resina muy eficiente, requiere menos sosa para su regeneracin.
No se puede utilizar a pH altos.
pueden sufrir problemas de oxidacin o ensuciamiento
Regeneracin de Resinas de Intercambio Inico
Tipos de regenerantes
El cloruro de sodio (NaCl) se emplea normalmente para regenerar las resinas fuertemente
cidas usadas en ablandamiento, y las resinas fuertemente bsicas en la eliminacin de
nitratos.
En ablandamiento, el cloruro de potasio (KCl) puede tambin emplearse cuando la
presencia de sodio en la solucin tratada es indeseable.
En ciertos procesos de tratamiento de condensados muy calientes, el cloruro de
amonio (NH4Cl) se puede utilizar tambin.
En la eliminacin de nitratos, la resina fuertemente bsica se puede regenerar con otros
compuestos que producen iones de cloruro, tales como el cido clorhdrico (HCl).
En el proceso de descationizacin la primera etapa de una desmineralizacin la
resina fuertemente cida (SAC) se debe regenerar con un cido fuerte. Los regenerantes
ms comunes son el cido clorhdrico y el cido sulfrico.
o El cido clorhdrico (HCl) es muy eficaz y no produce precipitados en el lecho de
resina.
o El cido sulfrico (H2SO4) es ms fcil de transportar y almacenar y a veces ms
barato, pero es menos eficaz que el clorhdrico: la capacidad til de la resina SAC es
menor. Adems, su concentracin se debe ajustar precisamente para impedir la
precipitacin de sulfato de calcio en la resina (detalles abajo). Una vez precipitado
en la columna, CaSO4 es muy difcil disolver de nuevo.
o El cido ntrico (HNO3) se puede tambin emplear, por lo menos en principio,
pero no es recomendado, porque puede producir reacciones muy exotrmicas,
hasta explosiones. Por lo tanto, hay que considerar el cido ntrico como peligroso.
En descarbonatacin, lo mejor es regenerar la resina dbilmente cida (WAC) con cido
clorhdrico (HCl). El sulfrico se debe aplicar a concentraciones muy bajas (< 0,8%) para
que no precipite sulfato de calcio. La cantidad de agua de dilucin es por lo tanto muy
grande. Otros cidos ms dbiles pueden tambin regenerar resinas WAC, por ejemplo

el cido actico (CH3COOH) o el cido ctrico, una molcula con tres grupos COOH:
(CH2COOH-C(OH)COOH-CH2COOH = C6H8O7).
En desmineralizacin las resinas fuertemente bsicas se regeneran siempre con sosa
custica (NaOH) aunque la potasa custica (hidrxido de potasio KOH) es otra opcin,
pero en general ms cara.
Las resinas dbilmente bsicas (WBA) se regeneran en general tambin con sosa custica,
pero otras bases ms dbiles se pueden emplear:
o Amonaco (NH4OH)
o Carbonato de sodio (Na2CO3)
Concentraciones
Las concentraciones usuales son:
NaCl (ablandamiento y eliminacin de nitratos): 10 %
HCl (descationizacin, descazrbonatacin y desmineralizacin): 5 %
NaOH (desmineralizacin): 4 %
H2SO4: con resinas fuertemente cidas, se debe ajustar la concentracin del cido
sulfrico con mucho cuidado entre 0,7 y 6 % segn la proporcin de calcio en el ague
bruta (la cual es la misma en la resina). Con resinas dbilmente cidas, la concentracin
es en general 0,7 %. Una concentracin demasiado alta puede resultar en precipitados de
sulfato de calcio.
Con resinas fuertemente cidas (SAC) la regeneracin se hace generalmente en varias
etapas, dichas concentraciones progresivas. Empeza con una concentracin baja de cido
sulfrico, y luego se aplica una concentracin ms alta una vez eluida la mayor parte de
los iones de calcio. Una tercera etapa se aplica a veces con una concentracin an ms
alta. La primera concentracin es en general entre 1 y 2 %, y la segunda concentracin es
doble. De tal manera se puede reducir el volumen de agua de dilucin, la regeneracin es
ms eficaz y la capacidad til ms alta.
En ciertos casos se emplean concentraciones diferentes de las de arriba, muchas veces ms
bajas, raramente ms altas.

la elucin (lo que sale de la columna)

Cromatografia de INTERCAMBIO INICO
Las sustancias se separan por el intercambio de iones; se basa en la interaccin inica del soluto
con la FE que tiene grupos funcionales cargados; FM suele ser liquido FE solido; se hacen en
columna; el soporte (FE) suele ser una resina cargada positivamente o negativamente; si su
carga (del soporte) es positiva => la elucin (lo que sale de la columna) cargada positivamente y
si la columna es negativa => el eluyente sera negativo; para conseguir separar las otras cargas
retenidas en la columna, se introduce un tampn de ph adecuado en la columna para que las
cargas retenidas se eluyan. Utilidad => en BQ para separar amino cido, pptidos, protenas,
nucletidos y todos los compuesto de naturaleza inica (Hb, isoenzimas).

Cromatografia de PENETRABILIDAD o exclusin MOLECULAR (exclusin por tamao)

Llamada filtracin de geles; se lleva a cabo en gel (como FE) de forma esferas
que estn llenos de poros que pueden ser de mayor o menor tamao segn la sustancia utilizada
para fabricar el gel; separa sustancia en funcin de su tamao y forma (no afecta el eluyente, el
pH ni la fuerza inica); los de mayor tamao no caben en el poro y pasan por entre las esferas y
llegan los primeros; una vez introducidas en el gel,las molculas mas pequeas tardaran mas en
salir de la red porosa; quedaran retenidas (+) tiempo; Las de mayor tamao, al no caber en el
poro, pasan entre las esferas y eluyen las primeras; a (+) tamao => (+) velocidad; a (-) tamao
=> (-) velocidad (son los ltimos en salir, porque se retienen en los poros); Fe es solida (gel) y
FM es liquida(puede ser agua o solucin electroltica); la elucin solo depende de la forma y
tamao de la partcula. Utilidad => separar sustancias de gran peso molecular
(pptidos, protenas, polisacridos, cidos nucleicos, purificacin de ciertas sustancias, etc.).

Para realizar estudios - Cromatografia de AFINIDAD

FE es solida (gel) y FM es liquida; Gel recubierto de Ac anti algo (hormonas, enzimas...);
metemos la muestra con distinta composicin, tenemos Ac anti alguno de sus componentes;
los dems componentes eluirn a travs de la columna; quedara el Ag y estos podrn salir
modificando el ph de la unin.
Utilidad => para saber si hay algunas enzimas, hormonas, vitaminas... (para enfermedades que
buscan una de las enzimas o hormonas y que cantidad hay).

Anlisis cualitativo (identificacin)

Si comparamos la informacin de la espectroscopia de masas o RMN con la cromatografia, este
es limitada; la cromatografia nos da datos del tiempo de retencin y de la posicin de la
sustancia en la FE tras la elucin (extraccin de una sustancia del medio que le ha adsorbido);
los datos de inters se obtienen a partir de cromatogramas obtenidos de una misma sustancia
problema, con diferentes FM y a diversas temperaturas de elucin; es una tcnica muy utilizada
para detectar la presencia o ausencia, de determinados componentes en mezclas de las que se
conoce su identidad; si en la cromatogrfica no aparece el pico de una determinada sustancia,
significa que este ausente ( o a concentracin inferior); se utiliza para

favorecer anlisis espectroscpicos posteriores de muestra muy compleja; separacin previa

para un estudio posterior de las diferentes bandas igual no siempre ha de ser propio al
cuantitativo (solo se sabe si hay o no hay estos componentes);
CROMATOGRAMA

De qumica analtica moderna W.F.PICKERING

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