Dosificacin Aglutininas

Objetivo: Al concluir la prctica el alumno identificar las aglutininas salinas de ttulo

elevado, que caracterizan la sangre del llamado donador universal peligroso
Generalidades: El sistema ABO es el nico sistema en el que el plasma y suero inactivado,
contienen aglutininas que reaccionan con factores sanguneos presentes en los eritrocitos de
otras personas. Las isoaglutininas responsables de la aglutinacin en el sistema ABO son
del llamado completo, lo cual quiere decir que la adherencia del Ac al eritrocito que tiene
factor sanguneo homlogo, va seguido automticamente del antgeno.
En casos de urgencia o escases del tipo sanguneo necesario para una
transfusin se emplear sangre tipo o llamada comnmente donador universal, por
carecer sus eritrocitos de aglutingenos; pero si existen en el plasma aglutininas alfa o beta,
que pueden presentar casos de aglutinacin a los receptores, en los casos de ttulos
elevados. Hay que tomar precauciones, el riesgo de que las isoaglutininas transfundidas
daen a los hemates del receptor, se podrn realizar este tipo de transfusiones sin peligro
alguno, si se cumple con las siguientes normas:
1. El plasma de la sangre que ha de emplearse no de be contener aglutininas para los
hemates del futuro receptor
2. El ttulo de isoaglutininas reactivas deber ser inferior 1:80
La prueba cruzada menor debe realizarse con el suero neutralizado del donador,
solo si esta prueba no da aglutinacin, podr emplearse la sangre sin riesgo. Sangre
completa del donador universal, para un receptor de otro grupo sanguneo, los peligros
relacionados con transfusiones de sangre de donadores universales, pueden reducirse al
mnimo por la extraccin parcial o completa del plasma.
En casos de transfusiones de urgencia, en las que es necesario reponer el
volumen sanguneo perdido y no se puede esperar a practicar las pruebas cruzadas, se
recomienda el uso de sangre O Rh negativa con ttulos bajos de anti A y anti B y exenta
de todos los anticuerpos irregulares.
Fundamento: Las aglutininas forman parte de los donadores universales. Para cuantificar el
ttulo de isoaglutininas, se cuantifica cualquier reaccin de aglutinacin de Anti A y Anti B
que persista en una dilucin de 1:80 deber considerarse de ttulo elevado, donador
universal peligroso.
Material y equipo:

Gradilla
24 tubos de 10 x 75
3 tubos de 13 x 100
10 pipetas de 0 1
5 pipetas pasteur

2 pipeta 1ml
1 centrifuga
1 bao maria 37C
Suero o plasma problema
Solucin salina normal
Globulos rojos A y B

Tcnica:
1. En la gradilla colocar 3 hileras de tubos de 10 x 75, de 8 tubos cada una, marcar los
tubos de la primera hilera con: 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1320, 1:640 y 1:1280,
2. Realizar diluciones del suero o plasma O, poniendo 5 ml, de solucin salina en
cada uno de los tubos marcados, agregando 0 5m1, de suero o plasma del grupo O
al primer tubo, mezclar y tomar 0,5 ml de esta suspensin y ponerla en el siguiente
tubo y as sucesivamente hasta terminar desechando 0.5 ml de la suspensin final
3. Preparar suspensin de glbulos rojos en solucin salina al 5% de los grupos A y
B, en los tubos de ensaye 13 x 100
4. Aadir 0.1 ml de la suspensin preparada anteriormente de glbulos rojos del grupo
A a los tubos de la segunda hilera y 0.1 ml de la suspensin de glbulos rojos del
grupo B a los tubos de la tercera hilera
5. Depositar 0.1 ml de suero O diluido a cada uno de los tubos que contienen los
glbulos rojos A y B teniendo cuidado de marcar correctamente los tubos con
la dilucin que se emplee
6. Incubar todos los tubos A y B a 37C por treinta minutos
7. Centrifugar a 2500 rpm durante un minuto
8. Remover suavemente los glbulos rojos sedimentados, observando si existe
aglutinacin macroscpica, reportar la aglutinacin en cruces hasta el ltimo tubo
en que se encuentre
Interpretacin de resultados:
Se anotar la dilucin a la que se observ la aglutinacin en las dos hileras de
tubos que contienen la sangre A y B
Aglutinacin ms de 1:80 se considera de ttulo elevado y por lo tanto solo
transfundir a paciente con sangre de su mismo tipo o sangre O pero solo concentrado
eritrocitario.

Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida SIDA

Objetivo: Bsqueda de los antgenos virales o anticuerpos producidos como respuesta a los
antgenos, en suero sanguneo de una persona infectada por el virus de la inmunodeficiencia
humana (VIH) .
Generalidades: El sndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA) conocido tambin
como AIDS es considerado en prcticamente todos los pases del mundo como un serio
problema de salud pblica.
El agente causal del SIDA es un retrovirus que fue denominado limphadenopaty asociated
virus por su primer descubridor, el Dr Luc Montagnier, del instituto Pasteur en Francia, en
mayo de 1983. En mayo de 1984 el Dr Robert Gallo del Instituto Nacional del Cncer en
U S A, aisla y caracteriza un retrovirus de pacientes con SIDA y lo denomina human
lymphotropic virus III desde 1987, por acuerdo internacional se decide nombrar al virus
human inmunodeficiency virus (HIV en espaol virus de la inmunodeficiencia
humana hasta el momento se han reconocido dos cepas significativamente diferentes,
llamndoles VIH I y VIH 2, el virus se transmite por contacto sexual, bucal o anal por la
inoculacin o administracin de sangre o hemoderivados contaminados y perinatalmente de
madre infectada a hijo; el paso trasnplacentario del virus est demostrado y existe la
factibilidad de infeccin a travs de la lactancia.
No existen evidencias que apoyen la transmisin por contacto casual entre las personas en
ambientes escolares, sociales o de trabajo; no existe la evidencia de la transmisin por
medio de insectos, ni por tos o estornudos, as como tampoco a travs de agua o
alimentos.
Despus de infectarse una persona, puede permanecer asintomtica durante varios aos
algunos pacientes pasan por un estadio de molestias tempranas con presencia de fiebre,
artralgias y malestar general que se presentan al mismo tiempo que la seroconversin,
momento a partir del cual es posible detectar anticuerpos contra VIH en el suero del
paciente esto ocurre generalmente entre la segunda semana y el tercer mes posterior a la
infeccin, a partir de este momento pueden pasar en promedio de 8 a 9 aos para el
desarrollo del SIDA, una vez que la enfermedad se ha desarrollado, la mortalidad es muy
elevada, casi del 100%.
El virus es capaz de producir el deterioro progresivo y predecible de las funciones
inmunolgicas, siendo el SIDA una manifestacin tarda de este proceso, el padecimiento
es de naturaleza inmunosupresora y de tipo bsicamente celular, la poblacin
celular especficamente abatida, es la de los linfocitos T cooperador C4, la perdida de las
clulas T4 daa seriamente la habilidad del organismo para contrarrestar a la mayor parte
de microorganismos invasores, observando que este dao es particularmente severo, sobre
la defensa en contra de virus, hongos, parsitos y ciertas bacterias.

Mtodos de laboratorio: Una vez que la infeccin ha ocurrido, el individuo podr

permanecer totalmente asintomtico durante un lapso que puede fluctuar desde 10 meses
hasta 89 aos, un individuo infectado o infectante por el hecho de sentirse bien, continuar
su conducta habitual, con el consiguiente riesgo para si y para los dems, dentro de este
lapso asintomtico, la nica manera de conocer si una persona est o no infectada, es
mediante la bsqueda de los antgenos virales a los anticuerpos producidos en respuesta a
aquellos, en suero sanguneo o bien el aislamiento del virus a partir de algn tejido, las
pruebas de laboratorios que se disponen son las que permiten detectar anticuerpos
contra VIH y se dividen en dos categoras:
Prueba de tamizaje o escrutinio inicial (presuntivas)
1. Pruebas confirmatorias
Pruebas presuntivas:
Actualmente existen varias pruebas para la deteccin de anticuerpos contra VIH estas
pruebas difieren en su principio funcional, lo cual da lugar a diferencias en tiempo
de proceso, necesidad de instrumentacin analtica, necesidad de tratamiento y
experiencias del personal analista, entre otras, ELISA (Eenzyme Linked Inmuno Sorbent
Assay)
Fundamento: Se trata de un anlisis inmunoenzimatico heterogneo, existen dos tipos
competitivo y no competitivo, emplean una fase slida la cual ha sido recubierta con
antgenos de VIH si el suero problema contiene anticuerpos contra VIH, estos reaccionan
con el antgeno quedando por lo tanto unidos a la fase slida, el revelado de la presencia de
estos anticuerpos unidos se hace mediante un conjugado formado por un anticuerpo Anti
IgG o Anti IgM unido a una enzima, la unin del conjugado se pone de manifiesto
adicionando el substrato de la enzima, en los ELISA de tipo no competitivo, la produccin
de color es directamente proporcional a la cantidad de anticuerpos contra VIH presentes
en el suero problema, dentro de ciertos lmites, en los ELISA de tipo competitivo, la
produccin de color es inversamente proporcional.
Membrana sensibilizada.
Fundamento: Este anlisis hace uso de una membrana porosa sensibilizada con antgenos
de VIH, al depositar el suero problema sobre la membrana, la reaccin ocurre
instantneamente, drenndose rpidamente el lquido los anticuerpos unidos se ponen de
rnanifiesto mediante un conjugado especial que provoca la aparicin de un punto rojo
apreciable a simple vista.
Tiempo de proceso: 5 minutos.

Mtodo inmnunocromatogrfico en suero o plasma

OBJETIVO
Detectar cualitativamente la presencia de Antgeno de envoltura de la Hepatitis B en muestras de suero o
plasma.
INTRODUCCIN
La hepatitis viral es una enfermedad primaria sistmica, que involucra al hgado. La mayora de los casos de
hepatitis viral aguda son causados por los virus A,B (HBV) o C.
El antgeno de envoltorio del virus de la hepatitis B (HBeAG), es una protena viral secretada por las clulas
infectadas por el HBV. Su presencia indica altos niveles de virus en la sangre e indica el nivel de infeccin del
portador.
MUESTRA
Suero o plasma no hemolizado
Tira reactiva
PROCEDIMIENTO
1.
2.
3.

Llevar las muestras a temperatura ambiente

Remueva el cassette de su envoltorio metlizado tirando del empalme. Marcar el cassette
Dispensar 75 uL ( 3 gotas con la pipeta que va dentro de la bolsa) de la muestra de suero, en el
pocillo de muestra (S) y comenzar el conteo del tiempo.
4. Esperar 10 15 minutos e interpretar los resultados (no esperar ms de 20 minutos).

Determinacin cualitativa de anticuerpos anti-Brucella

OBJETIVO
Determinar cualitativamente anticuerpos anti-Brucella abortus en un suero problema.
INTRODUCCIN
El Rosa de Bengala es una tcnica de aglutinacin en porta para la deteccin cualitativa y
semicuantitativa de anticuerpos anti-Brucela en suero humano o animal. La suspensin bacteriana
y coloreada, es aglutinada por anticuerpos IgG o IgM presentes en el suero del paciente.
METODOLOGA
1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo
disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 50 L de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles Positivo y
Negativo, sobre crculos distintos de un porta.
3. Mezclar el reactivo de R. de Bengala vigorosamente. Depositar una gota (50 L) junto a cada
una de las gotas anteriores.
4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior
del crculo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
5. Agitar durante 4 minutos. El exceso de tiempo de agitacin puede originar la aparicin de
falsos positivos
LECTURA E INTERPRETACION
Examinar macroscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacin inmediatamente despus de
retirar el porta del agitador. La presencia de aglutinacin indica una concentracin de anticuerpos
anti-Brucela igual o superior a 25 UI/mL.

ACTIVIDADES
1. MENCIONA EL SIGNIFICADO CLNICO DE LA DETERMINACIN DE: HIV, HVB, Rosa de
Bengala
2. Menciona las interferencias de cada mtodo
3. Menciona otras pruebas para diagnstico de certeza de cada enfermedad (Brucelosis,
infeccin por HIV o SIDA, Hepatitis B)