CONTROL DE

CALIDAD EN
ESPERMOGRAMA
Alvarez M. Soledad
Blanco Hirota Natalia E.
Bajuk M. Milena
Conde Valentino M. Alejandra
Cul es el objetivo del anlisis del
semen?
Predecir la fertilidad potencial
masculina
Identificar causas de infertilidad
Definir el tipo de tcnica de fertilizacin
asistida
Obtencin de la muestra
3 a 5 das de abstinencia sexual
Semen obtenido por masturbacin directa
Envase estril chico de boca ancha
Transporte a temperatura corporal
Remitir dentro de la hora de recoleccin
Examen macroscpico
Volumen
VN: 7.2 - 8.0
VN: 1.5 - 6.0 ml
Aspecto
Color
Viscosidad
Licuefaccin
pH
Examen microscpico
Movilidad espermtica
Recuento espermtico
Presencia de agrupados
Morfologa espermtica
Observacin de elementos celulares
distintos de espermatozoides
Condiciones para la observacin
Gota de 10l entre porta y cubre de 22x22mm
Estabilizacin por 1 minuto
Platina termostatizada a 37 C
Temperatura del laboratorio entre 21 y 24C
Observacin de 5 campos o al menos 200
espermatozoides
Hacer por duplicado
Movilidad espermtica
Clasificacin:
Mviles
GRADO a (progresiva rpida)
GRADO b (progresiva lenta)
GRADO c (no progresiva, mviles in situ)
Inmviles
GRADO d
Vivos
Muertos (Eosina positivos)
Movilidad espermtica
Test de Eosina
VR: < 50%
espermat.
necrosados
% Promedio Diferencia lmite
0 1
1 2
02 -03 3
04 - 06 4
07 - 09 5
10 - 13 6
14 - 19 7
20 - 27 8
28 - 44 9
45 - 55 10
56 - 72 9
73 - 80 8
81 - 86 7
87 - 90 6
91 - 93 5
94 - 96 4
97 - 98 3
99 2
100 1
Movilidad espermtica
VR:
Grado a
> 25%
Grado a+b
> 50%
DILUCIONES PARA RECUENTO EN CAMARA DE
NEUBAUER
Espermatozoides por campo de 40 x
ESPERMATOZOIDES DILUCION
< 15 1:5 ME E
15 - 40 1:10 R
40 -200 1:20 A
>200 1:40 MA
SC. DILUYENTE: 50gr NaHCO3
10,0ml de formaldehdo al 36-40%(saturada)
H2O csp 1000ml
Recuento espermtico
Recuento espermtico
Recuento espermtico
Recuento espermtico
Esp /ml= N x D x 25 x 10000
n de cuadrados contados
N=n de espermatozoides contados
D=inversa de la dilucin empleada
25= nmero total de cuadrados
10.000= factor de correccin para
expresar el resultado en ml
VR: 20x10
6
esp/ml
40x10
6
esp/eyaculado
Morfologa espermtica
OMS 1999 > 15%
Kruger > 14%
Tincin: Papanicolaou
Expresin de resultados:
% Normales
% Anormales
Morfologa espermtica
Elementos celulares distintos de
espermatozoides
Clulas Epiteliales del tracto uretral y prstata
Clulas de la espermatognesis (Clulas
germinales inmaduras)
Leucocitos (Peroxidasa +)
Macrfagos
VR: <5x10
6
clulas redondas/ml
<1x10
6
leucocitos/ml
Cun confiables son
los resultados del
anlisis del semen?
Nuestro laboratorio frente al
problema
Se utilizan los criterios OMS 1999
A partir del ao 2002 se ha iniciado el CCI
para la evaluacin de morfologa, movilidad y
concentracin espermtica
Ha asumido el compromiso de desarrollar un
Programa Nacional de CCE que est en
marcha desde el 2006: PEEC-laboratorio del
semen
Control de la etapa pre-analtica
Reinterrogar a pacientes al azar para
verificar que la anamnesis fue adecuada
Citar a aquellos pacientes en que se
sospecha incumplimiento de las
instrucciones
CONTROL DE CALIDAD INTERNO
Control de la etapa analtica
Concentracin espermtica
Movilidad
Morfologa
Comprende principalmente:
CONTROL DE CALIDAD INTERNO
Niveles del control de la
etapa analtica
Intra-individual e inter-individual
Como entrenamiento de un nuevo operador
Procesamiento repetido de una muestra
10
mediciones
del control
X y DS
Grfico tipo
Levey-
Jennings
Medias mensuales
Recuento espermtico (Ez./ml)
-4
-3
-2
-1
0
1
2
3
4
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Meses 2002
U
E
S
Morfologa . (%) Normales
-4
-3
-2
-1
0
1
2
3
4
5
6
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Meses 2002
U
E
S
Movilidad grado a
-4
-3
-2
-1
0
1
2
3
4
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Meses 2002
Movilidad grado (a+b)
-4
-3
-2
-1
0
1
2
3
4
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Meses 2002
U
E
S
Monitoreo de medias mensuales
Funcionamiento de la platina
termostatizada
Limpieza del material no
descartable
Toxicidad del material
descartable
Temperatura de transporte y
conservacin de la muestra
Tamao de la gota de semen
utilizada
Tamao del cubreobjetos
Calibracin de las pipetas automticas
Homogeneizado de las muestras
Cmaras de recuento
Cubrecmaras
Grosor de los extendidos
Fijacin de los extendidos
Batera de coloracin
Concentracin espermtica
Morfologa
Probables fuentes de error :
Movilidad
Cambio de operador
CONTROL DE CALIDAD INTERNO
Control de la etapa post-analtica
Control de la verosimilitud y
coherencia de los resultados
CONTROL DE CALIDAD INTERNO
Parmetros evaluados
Morfologa
Movilidad
Concentracin
Materiales de control
Suspensin estabilizada de espermatozoides
Filmaciones en DVD
Fotomicrografas en CD
PEEC
Morfologa espermtica
Material de control: Fotomicrografas en CD
Movilidad espermtica
Material de control: Filmacin
Caractersticas especiales
Aproximacin a la tcnica microscpica
Evaluacin del criterio del operador
No hay efecto de temperatura
No hay efecto por la cmara
Concentracin espermtica
Material de control: Suspensin de
espermatozoides fijados en formol
Influencia del material volumtrico
utilizado en las diluciones
Influencia de la cmara de recuento
Informacin suministrada por
el laboratorio
Valor hallado
Instrumentos
Criterios
Conclusin
La nica forma que una metodologa
tan subjetiva pueda dar resultados
comparables y reproducibles es la
implementacin de un control de calidad
interno y externo
Agradecimientos
Ctedra de Citologa. Facultad de
Farmacia y Bioqumica
Residentes y ex-residentes del
Hospital de Clnicas