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2.4.

- TEST IRWIN El test de Irwin es un procedimiento observacional sistemtico que se utiliza para determinar los usos de una sustancia, para desarrollar su espectro de actividad, para detectar efectos adversos de una nueva sustancia sobre el comportamiento general y para evaluar la neurotoxicidad .Fue descrito por Irwin en 1968, para aplicar en ratones, pero rpidamente fue modificado para aplicacin en ratas. Actualmente hace parte de los procedimientos recomendados por la ICH (International Committee for Harmonization) para la evaluacin de la seguridad farmacolgica, para detectar efectos adversos de las sustancias sobre el Sistema Nervioso Central. Los datos obtenidos pueden ayudar a determinar el rango de la dosis para ser probada en otros estudios de seguridad. Puede proporcionar una orientacin inicial sobre la indicacin teraputica, mecanismo de accin o funcin fisiolgica especfica. Se usa frecuentemente en la fase exploratoria del desarrollo de un medicamento. Cuando se aplica en las fases iniciales de los estudios permite: encontrar efectos secundarios de la sustancia sobre el SNC, entender los mecanismos por los cuales se dan estos efectos, entender parte de la relacin entre la estructura y la actividad de la sustancia y posiblemente revela algunos efectos teraputicos nuevos. En fases ms avanzadas, cuando la sustancia est ms caracterizada, el test provee informacin importante sobre su margen de seguridad . 1.-PROCEDIMIENTO En esta prueba , un nmero de parmetros de comportamiento se estudi usando un normalizado sistema de puntuacin . Las ratas se estudiaron tpicamente , aunque los ratones se pueden utilizar para la mayora de las medidas . Inicialmente los ratones se aclimataron a la sala de pruebas durante al menos 30 minutos. El equipo de prueba de Irwin (temporizador, campo abierto, rejilla, regla caja de sonidos, palos de madera) se coloc bajo una campana de flujo laminar. Cada ratn se coloc primero en el frasco de visin durante cinco (5) minutos. Al final del perodo de cinco minutos, el frasco de visin con el ratn en el que fue trasladado a la arena, donde se desmont el frasco y el ratn lanzado a la arena. El ratn no fue manejado por el experimentador. Los parmetros fueron anotados en la arena. Entonces el ratn fue recogido por su cola y se mantiene por encima de la arena y se toma los siguientes parmetros. El ratn fue colocado en la moderacin supina y se tomaron los parmetros y por ltimo los tres parmetros finales se califican con el ratn por encima o en la arena. En primer lugar se mide el dimetro de la pupila antes y despus de aplicar la sustancia, lo que Permite establecer rpidamente la actividad de la misma. Se pesan los ratones para agruparlos segn cercana del peso. Grupo 1: ratones de la misma raza, con una diferencia de peso de 1 gramo o menos .Se marcan con tinta. Grupo control: Se requiere una sala de laboratorio tranquila, aislada, a una temperatura de 72 F ms o menos 1.Los resultados se registran en una forma para tabular. OBSERVACIONES GENERALES. Especie, sexo, peso. Sustancia, tiempo de inyeccin, dosis, solvente y ruta.

A los efectos de la sustancia se les da una puntuacin de 0 a 8. La puntuacin se da en el momento del pico mximo del efecto. La puntuacin de base o las respuestas normales se valoran en 4. Puntuacin por debajo de 4 son para respuestas subnormales y por encima de 4 supranormales. La puntuacin de base para los signos anormales es 0 y la puntuacin mxima es 8. Para cada tem se establece su puntuacin de base. El perfil est dividido en 3 partes: comportamental, neurolgico y autonmico, con subdivisiones cada uno. A. PERFIL COMPORTAMENTAL 1. Estado de alerta o estupor Acomodacin o emplazamiento visual (4): mide la repuesta del animal al ser puesto en diferentes posiciones y su habilidad para orientarse sin errar. Estereotipia (0): repeticin mecnica de algn movimiento. Puede indicar estimulacin o depresin central. Pasividad (0): mide la respuesta del animal al ser acomodado en posturas inusuales. Indica depresin central, miorelajacin, parlisis o anestesia. Respuestas a diferentes manipulaciones: -Acicalamiento (4). Excesivo puede indicar excitacin central o estimulacin simptica. -Vocalizacin (0): En condiciones normales no emiten sonidos. -Desasosiego (0): su presencia puede indicar estimulacin central, cambios viscerales o el aviso de convulsiones. -Irritabilidad (0): su manifestacin extrema puede ser la agresividad. -Nerviosismo (0) 2. Actividad motora Actividad espontnea (4): usualmente el ratn muestra una actitud curiosa. Reactividad (4): observar la reaccin cuando el animal es sacado de la jaula y puesto en la mesa. Estas miden la estimulacin o sedacin del sistema nervioso, de los ganglios nerviosos y de las placas neuromusculares: Respuesta tctil (4): puede indicar presencia de actividad anestsica. Respuesta al dolor (4): mide analgesia, sedacin y depresin central. B. PERFIL NEUROLOGICO 1. Excitacin central Sobresalto (0) -Ereccin de la cola (0) -Temblor (0) -Convulsiones (0) 2. Incoordinacin motora -Posicin corporal (4) y posicin de las extremidades (4): indicadores de bloqueo neuromuscular o perturbacin central. -

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-Marcha tambaleante (0): indica ataxia. -Marcha anormal (0): puede indicar ataxia o relajacin muscular. -Reflejo de enderezamiento (0). Altos puntajes pueden indicar la presencia de un depresor del sistema nervioso central, miorrelajante, anestsico, o agente que causa bloqueo sinptico en alguna parte del sistema. 3. Tono muscular -Tono de la extremidad (4): se mide sujetando la pata delantera y evaluando la resistencia a la extensin. -Fortaleza del paso (4) -Tono corporal (4) y tono abdominal (4): notando la tensin muscular en comparacin con el grupo control. Los test en este grupo pueden indicar actividad miorrelajante, bloqueo neuromuscular y depresin central. 4. Reflejos Odo (4), corneal (4), reflejo flexor ipsilateral (4). Puntuaciones alteradas pueden reflejar un bloqueo en alguna parte del sistema sensorial, las sinapsis espinales o las vas aferentes. C. PERFIL AUTONOMICO 1. Signos pticos -Tamao de la pupila (4). Dilatacin indica actividad parasimpaticoltica o simpaticomimtica. -Miosis sugiere actividad muscarnica. -Apertura palpebral (4): amplia indica actividad simpaticomimtica y estrecha indica actividad sedativa. -Exoftalmos (0): indica estimulacin simptica. 2. Secreciones -Orina (0): puede indicar actividad muscarnica o la irritacin del tracto urinario. -Salivacin (0): indicativo de actividad muscarnica. 3. Signos generales -Retorcerse (0): indica irritacin tisular o estimulacin de receptores sensoriales. -Piloereccin (0): puede ser por compensacin a bajas temperaturas o actividad simpaticomimtica. -Hipotermia (0): puede indicar actividad sedante o akinettica. -Color de la piel (4): principalmente la de las orejas puede cambiar de rosada a roja o blanca. Roja puede indicar vasodilatacin por posible actividad simpaticoltica. Blanco indica vasoconstriccin y posible actividad simpaticomimtica.

Frecuencia cardaca (4): entre muchas posibilidades, taquicardia puede indicar actividad parasimptico ltica y bradicardia actividad cardiotnica. Frecuencia respiratoria (4): puede acelerarse por sustancias txicas o analpticos del sistema respiratorio, y desacelerarse por depresores respiratorios o centrales. TOXICIDAD Segn el nmero de sobrevivientes de cada grupo se puede establecer aproximadamente una Dosis Letal . BIBLIOGRAFIA 1.-Vogel H, Hock F, Mayer D. Safety and Pharmacokinetic Assays. Sprienger-Verlag, Berlin. Heidelberg New York 2006: 327. 2.- . Roux S, Sabl E, Porsolt R. Primary Observation (Irwin) Test in Rodents for Assessing Acute Toxicity of a Test Agent and its Effects on Behavior and Physiological Function. Curr Prot in Pharmac. DOI 10.1002/0471141755.ph1010s27 January, 2005. 3.- http://www.ich.org/ 4.-http://www.tufts.edu/sackler/neuroscience/CNR/BehaviorCorePA.pdf 5.- Drug Discovery and Evaluation: Safety and Pharmacokinetic Assays ; with 125