CULTIVO in vitro DE PIA (Ananas comosus)

ALUMNO: ALEX GIA GADAY

MICROPROPAGACIN EN PIA

(Ananas comosus (L.) Merr.)

CULTIVAR MD-2

PROCESO DE PROPAGACIN IN VITRO DE PIA.

Fase 0: Obtencin de explantes

Extraccin de los colinos

Al momento de extraer los colinos de la planta, se debe evitar hacerlo durante das hmedos con el fin de minimizar las condiciones favorables al establecimiento de patgenos; el corte de los colinos se realiza despus de la cosecha del fruto (si se produjo fruta) o cuando hacemos una castracin qumica o fsica; se cortan los colinos al raz de tallo.

Fase 1: INOCULACION

Desinfeccin de los colinos

A cada hijo axilar se eliminan las hojas que envuelven el pice, a un volumen de 4-5 cm de longitud x 2-3 cm de ancho aproximadamente.

Los explantes son lavados con agua y detergentepara garantizar el desprendimiento de polvo y otras impurezas.

 Se realiza la primera desinfeccin sumergiendo los explantes en una solucin de NaClO al 1 % durante 5 minutos. En la cmara de flujo laminar se practica una segunda desinfeccin con NaClO al 2 % /5 minutos, posteriormente se eliminan los residuos de NaClO con 3 enjuagues con agua estril. Por ultimo se realiza la diseccin de los pices hasta un volumen de 0.5 cm los cuales se siembran individualmente en tubos de ensayo.

Medio de cultivo
Como medios de cultivo se emplearon (MS) en todos los experimentos como medio basal y se definieron las concentraciones auxinas y de citoquininas de acuerdo a la fase. Una vez preparados los medios de cultivos, el pH se ajust a 5.8 con HCl 1 M (molar). Los medios de cultivo se esterilizaron en autoclave durante 15 minutos a 121 C y 1 atmsfera de presin. Se estudiaron 9 variantes de medios de cultivo con adiciones de diferentes concentraciones de cido indolactico (AIA), cido naftalenactico (ANA) y bencil amino purina (BAP).

Introduccin del explante:

Se sembr un pice por cada tubo de ensayo conteniendo 10 ml de medio de cultivo en estado semislido. Despus fueron trasladados al cuarto de crecimiento en condiciones de luz natural con perodo de 12 horas luz y 12 horas de oscuridad y una temperatura de 27- 28 C.

A las 4 semanas se evaluaron el nmero de hojas separadas, nmero de hojas sin separar y color de las hojas.

El BAP demostr mayor efecto en la separacin de los primordios de hojas, resultando esencial para el metabolismo celular de los explantes. Se observ que la adicin de BAP en combinacin con ANA AIA tuvo su efecto en la regeneracin de los pices y separacin de primordios de hojas.

Fase II: MULTIPLICACION

Se estudi el efecto de la interaccin de 4 concentraciones de BAP, consistencias lquida y semislida de los medios de cultivo y el manejo de dos tipos de tejidos: plantas enteras plantas partidas longitudinalmente.

Para este estudio se utilizaron frascos con capacidad de 220 ml a los que se les distribuyeron 10 ml de medio de cultivo en el caso de la consistencia lquida y 20 ml en el medio de consistencia semislida.

La proliferacin de los brotes axilares se logra con la adicin de citoquininas en el medio de cultivo para romper la dominancia apical y estimular la brotacin de las yemas que se encuentran en la base de las hojas Se obtuvo los mayores promedios de brotacin en los medios de cultivo con concentraciones de 2 y 3 mg/l de BAP de consistencia lquida, con valores promedios de 1.20 y 0.96 respectivamente

RESULTADOS

No hubo interaccin en los factores como el medio de cultivo, estado fsico del medio, tipo de corte del explante, esto indica que en la fase de multiplicacin, las plantas se deben cortar en dos partes longitudinalmente porque esta prctica garantiza que se obtengan dos plantas morfolgicamente similares en su crecimiento, pero adems representa una ventaja econmica al incrementarse la cantidad de plantas obtenidas.

Fase III
ENRAIZAMIENTO

El estudio consisti en determinar el efecto de 9 variantes de medios de cultivo suplidos con combinaciones de AIA y sacarosa sobre el crecimiento de dos tipos de cortes de los explantes (enteras y partidas longitudinalmente). Se inici con la seleccin de plantas, con 2-3 hojas y 3 cm de longitud; posteriormente fueron sembradas en frascos de vidrio con capacidad de 220 ml. Se evalu el nmero de races, longitud de las plantas (cm), nmero de hojas y nmero de brotes

Hubo diferencias estadsticas entre el promedio de nmero de races/planta que se obtuvo en el medio de cultivo que se le adicion 1mg/l de AIA y 40 g/l de sacarosa (3.60) y las variantes de medios de cultivo que contenan 1 mg/l de AIA con 30 y 50 g/l de sacarosa.

Fase IV: ACLIMATACION

Las plantas enraizadas se extrajeron de los frascos y se lavaron con agua para eliminar los restos de agar y sacarosa.

Se establecieron en bolsas de color negro de polietileno con dimensiones de 44 pulgadas que contenan sustrato de compost. Las plantas crecieron bajo condiciones de sombra con cubierta de sarn (70 %). Se aplic un riego diario y fertilizacin foliar con 2020-20 ms elementos menores en dosis de 2 g/l una vez a la semana.

Las plantas permanecieron en estas condiciones durante seis semanas.

Durante la aclimatizacin de las plantas se observ presencia de espinas en los bordes y a los dos lados de la porcin central de algunas hojas. La mayor presencia de espinas se observ en los tratamientos provenientes de plantas partidas.

BIBLIOGRAFIA CITADA

MICROPROPAGACIN EN PIA (Ananas comosus (L.) Merr.) CULTIVAR MD-2. www.una.edu.ni/Tesis/tnf62r672.pdf

CENADE (Centro de accin y apoyo al desarrollo rural). 2000. Gua Tcnica de pia. Managua, NIC. P 27.