Manual Completo de Inmunohematologia

FACULTAD DE BIOANALISIS
LIC. QUIMICA CLINICA.

NOMBRE: MIGUEL ANGEL ORTIZ GIL.
INMUNOHEMATOLOGIA.
CATEDRATICA: Q.C. RUTH ESTRADA MARQUEZ
DIVULGACION CIENTIFICA DE
LA QUIMICA CLINICA
OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com
www.quimicaclinicauv.blogspot.
com
CONTENIDO:
1. DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO ABO Y RH
2. DETERMUNACION DE SUBGRUPOS
3. DETERMINACION
DE
RH
4. DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
5. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD
6. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGNEA (TCNICA SALINA)
7. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUNEA (TCNICA ALBUMINA)
8. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS.
9. DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
10.IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Practica No. 1
Determinacin de grupo sanguneo ABO y Rh
Introduccin:
Un grupo sanguneo es una forma de agrupar ciertas caractersticas de la sangre que
dependen de los antgenos presentes en la superficie de los glbulos rojos y en el suero de la
sangre.
Esta ha sido la base para que se pueda clasificar a la sangre en cuatro grupos en cuanto al
sistema ABO: grupo A, grupo AB, grupo B y grupo O; y en dos con respecto al sistema Rh: Rh
negativo o Rh positivo. Lo que a la postre trae ocho grupos posibles por las combinaciones
posibles entre ambos sistemas.
Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reaccin
inmunolgica que puede desembocar en muerte.
Las personas con sangre del tipo A tienen glbulos rojos que expresan antgenos de tipo A en
su superficie y anticuerpos contra los antgenos B en el suero de su sangre.
Las personas con sangre del tipo B tiene la combinacin contraria, glbulos rojos con antgenos
de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antgenos A en el suero de su sangre.
Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antgenos (A o B) en la
superficie de sus glbulos rojos pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras
que las personas con tipo AB expresan ambos antgenos en su superficie y no fabrican ninguno
de los dos anticuerpos.
A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningn problema a
cualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO.
Los donantes de sangre y los receptores deben tener grupos compatibles. El grupo O- es
compatible con todos, por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universal.
Por otro lado, una persona cuyo grupo sea AB+ podr recibir sangre de cualquier grupo, y se
dice que es un receptor universal.
Material y equipo:
40 tubos de ensayo de 12 x 75
4 pipetas Pasteur
1 gradilla de unicel
3 tubos Vacutiner con muestra sangunea anticoagulada con EDTA
1 tubo Vacutainer con muestra sangunea sin anticoagulante
Antisuero Anti-A, Anti-AB, Anti-B y Anti-D *

Eritrocitos con antgenos conocidos A1, A2, B y O
1 centrifuga
*Reactivos:
Antisuero A monoclonal Lafon
Lote:9662
Cad: 09NOV08
Aspecto: transparente
Color: azul
Antisuero B monoclonal Lafon
Lote: 9762A
Cad:09NOV08
Aspecto: transperente
Color: amarillo
Antisuero AB monoclonal Lafon

Lote: 8764
Cad: 31OCT08
Aspecto:transparente
Color: incoloro
Antisuero D monoclonal NOVACLONE
Lote: NDMG04305
Cad: 29MAR08
Aspecto: transperente
Color: incoloro
Tcnica:
Mtodo directo
1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sangunea anticoagulada con EDTA y el
tubo Vacutainer con muestra sangunea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500
r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.
2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos nmeros
en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya
traa la muestra, y con el tipo de antisuero: Anti-A, Anti-AB, Anti-B Anti-D. Ejemplo: 1,
13, Anti-A; 1,13, Anti-AB, etc. El procedimiento se repite para las tres muestras
restantes.
3. En cuatro tubos limpios hacer una dilucin de 2-5 % de eritrocitos con agua destilada,
de cada muestra. La dilucin tomara un color rojo tenue, similar a la sangra.
4. Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilucin de eritrocitos preparada y una
gota de antisuero, segn corresponda.
5. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos
a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reaccin antigeno-anticuerpo
(formacin de un botn).
6. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reaccin o no, y correlacionando los
datos obtenidos con el mtodo inverso para determinar el grupo sanguneo.
Metodo inverso
1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sangunea anticoagulada con EDTA y el
tubo Vacutainer con muestra sangunea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500
r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.
2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos nmeros
en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya
traa la muestra, y con el tipo de eritrocitos con antigeno conocido: A 1, A2, B y O.
Ejemplo: 1,13, A1; 1,13, A2; etc. El procedimiento se repite para las tres muestras
restantes.
3. Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero segn corresponda
y una gota de los eritrocitos con antigeno conocido.
4. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos
a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reaccin antigeno-anticuerpo
(formacin de un botn).
5. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reaccin o no, y correlacionando los
datos obtenidos con el mtodo inverso para determinar el grupo sanguneo.
Resultados:
Muestra
1
2
3
4
Anti-A
+
+
Mtodo directo
Anti-AB
Anti-B
+
+
+
+
+
Anti-D
+
+
+
+
A1
+
+
+
Mtodo inverso
A2
+
+
-
B
+
+
-
O
-
Grupo y
Rh
O+
B+
A+
AB +
Interpretacin:
Para el mtodo directo la lgica fue: si en un tubo hay formacin de botn (reaccin antigenoanticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antigeno que reacciona con los
anticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo; y si no presentan aglutinacin querr
decir que no corresponde el antigeno del eritrocito con el anticuerpo del antisuero, o que el
antigeno esta ausente en esos eritrocitos. De ah que pueda observarse que una muestra
sangunea muestre un solo tipo de antgenos del sistema ABO sobre su membrana (A o B),
ambos antgenos (AB), o ninguno de ellos (O). lo mismo sucede para el sistema Rh ; al
presentarlo (Rh +) o no (Rh -).
Para el mtodo inverso el razonamiento fue: si en un tubo hay formacin del botn (reaccin
antigeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los anticuerpos
que reaccionan con los eritrocitos con antigeno conocido, los cuales sirven de reactivo para
esta prueba. Por lo tanto una reaccin positiva en este mtodo definitivamente indica que el
paciente no tiene eritrocitos con antgenos que reaccionaran con los anticuerpos de su plasma.
De ah que el mtodo se le nombre inverso.
Conclusin:
Concluyo que Para realizar una transfusin sangunea se debe tomar en cuenta la sangre del
donante y la del receptor. Los individuos pertenecientes al grupo O pueden donar sangre a
cualquier otro grupo sanguneo, porque sus eritrocitos carecen de antigeno que puedan ser
reconocidos por la sangre del receptor. Las personas del grupo AB pueden recibir sangre de
cualquier grupo, ya que carecen de anticuerpos
PRACTICA N 2
DETERMUNACION DE SUBGRUPOS
Anti- A1Lectina
(Dolichos biflorus)
Lectina de grupo sanguneo
INTRODUCCION:
El sistema de grupos sanguneos ABO sigue siendo el primero
a tener en cuenta en el momento de realizar una transfusin
de sangre. Los antgenos A y B son productos gnicos
fcilmente
detectables
y constituyen marcadores
genticos de gran valor. Entre los individuos A, se
distinguen 2 categoras: A1y A2.
La diferenciacin entre ambas se realiza mediante la
utilizacin
de
anticuerpos
monoclonales
y
lectinas
especficas de grupo sanguneo Dolichos biflorus (anti A1)
y Ulex europaeus (anti H).
Uso: Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar clulas rojas A1 de otros
subgrupos A en pruebas en tubo o en placa.
MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensaye de 10/75 mm.
Cronometro
Marcador
Centrifuga serolgica
MUESTRA BIOLOGICA:
Clulas rojas de donador o paciente
REACTIVO:
Inmucor anti-A1 Lectin en gotero
MARCA: INMUCOR. INC
LOTE: SN2132
CADUCIDAD: 2007-12-14
TECNICA:
1. Adicione una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados.
2. Adicione una gota de una suspensin de eritrocitos bajo prueba del 3-5% en
salina. Mezcle completamente el contenido del tubo.
3. Centrifugar de 15-30 minutos de 900-1000 rpm.
4. Agite suavemente el tubo y resuspenda el botn celular. Examine las reacciones
resultantes macroscpicamente. Registre resultados.
RESULTADOS ESPERADOS DE TIPIFICACION
GRUPO
SANGUINEO
A1
Anti-A
Anti-A1
A1b
A2
A2B
A1NT
A3AM1AX1
+
+ DEBIL
+DEBIL
0
Porciento
80% DE TODOS
LOS GRUPOS A
80% DE TODOS
LOS GRUPOS AB
20% DE TODOS
LOS GRUPOS A
20% DE TODOS
LOS GRUPOS AB
NO COMUN
NO CUMUN
7
ANTI-H (LECTINA)
Ulex europeaus
Para la determinacin de del estado secretor y tipificacin de las clulas rojas
INTRODUCCION:
La mayora de los grupos sanguneos ABO que se determinan
en el banco de sangre cumplen con las leyes establecidas de
antgenos y anticuerpos recprocos para ese sistema.
Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuo
desde el momento en que son capaces de tener una respuesta
inmunolgica y se producen contra los antgenos A y B.
Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad
de antgeno presente en los eritrocitos y en la saliva de
los secretores. Se hallan con mayor frecuencia y tienen ms
relevancia clnica los de A, que los de B. Al utilizar
lectinas se definen los subgrupos: A1 y A2: con el extracto
de Dolichos biflorus se aglutinan los eritrocitos A1, pero
no los de A2; y el anti H, semilla Ulex europeus, aglutina
eritrocitos que tienen antgeno H.
MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensaye de 10/75mm.
Cronometro
Marcador
Centrifuga serolgica
MUESTRA BIOLOGICA:
REACTIVO:
Inmucor anti-H (Lectina) en gotero
MARCA: GANMA.
LOTE: ML1581
CADUCIDAD: 2007-11-14
TECNICA:
1. Adicione una gota de una suspensin de eritrocitos bajo prueba del 3-5% en
salina en tubos adecuadamente marcados.
2. Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del
tubo.
3. incube durante 5 minutos a temperatura ambiente.
4. Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm.
5. Agite suavemente el tubo y resuspenda el botn celular. Examine las reacciones
resultantes macroscpicamente. Registre resultados.
INTERPRETACIN:
PROBLEMA:
ANTI A1
PACIENTE 1
PACIENTE 2
+
-
ANTI H
(ANTI A2)
+
RESULTADO
SUBGRUPO:
ANTI A1
ANTI A2
Prueba positiva: Aglutinacin de las clulas rojas.

Nota: La hemlisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto
puede indetificarse como contaminacin del reactivo.
Prueba negativa: Ausencia de aglutinacin de las clulas rojas.
CONCLUSIONES:
Concluyo
que
para
realizar
una
transfusin sangunea se debe tomar en
cuenta los subgrupos del donante y del
receptor.
Los
subgrupo
con
mayor
frecuencia y tienen ms relevancia
clnica los de A, que los de B. Y se
identifican
por
medio
de
utilizar
lectinas.
Los
subgrupos
A
ms
importantes son: A1 y A2.
PRACTICA # 3
DETERMINACION DE
Rh
INTRODUCCIN:
El factor Rh es una clase de protena que se encuentra en
los glbulos rojos de la sangre, cuando alguien tiene esa
protena se le considera Rh Positivo. Cuando no la tiene
es Rh Negativo. El factor Rh es hereditario y se
transmite en dos genes. El Factor Rh positivo es dominante,
es decir si una persona tiene un gen positivo y otro
negativo, su factor Rh ser positivo.
Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio
de la
eritroblastosis
fetal, en la que
los
glbulos
rojos
del nio
se
encuentran
sensibilizados
con
anticuerpo materno. Es til tambin en el diagnostico

de
la anemia
hemoltica
adquirida (anticuerpos
sobre
los
glbulo
rojos
del mismo paciente), as como
la
determinacin de eritrocitos sensibilizados en sangre
usados para transfusin.
Las dos clasificaciones ms importantes para describir
grupos sanguneos en humanos son los antgenos y el factor
Rh. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles
pueden provocar una reaccin inmunolgica que puede
desembocar en hemlisis, anemia, fallo renal, shock, o
muerte.
MATERIAL:
Tubos de ensayo de 12 x 75
Pipetas Pasteur
Gradilla
EQUIPO:
Centrifuga
MUESTRA BIOLGICA:
Eritrocitos lavados 3-5% del paciente
REACTIVOS:
Antisuero Anti-D
Suero anti globulina humana.
Suero reactivo control
Antisuero D monoclonal NOVACLONE
Lote: NDMG04305
CAD: 29MAR08
Color: incoloro
Suero anti globulina Humana
Lote: 405
CAD: 06-NOV-08
Color: verde
Reactivo control GAMMA-CLONE
Lote: GCM115-3
CAD: 2008-12-08
Color: incoloro
TCNICA:
Determinacin de
Rh
10
Prepare una suspensin de glbulos rojos al 35 % en

solucin salina. Los glbulos
deben
ser
lavados
previamente
5 veces
con el
objeto
de
eliminar las protenas del plasma.
Rotular 3 tubos, para la previa identificacin
de Rh.
Ponga 1 gota de la suspensin lavada en cada
tubo.
Aada una gota de anti suero D monoclonal.
Mezcle
y centrifugue 15
seg.
Y
observe
si hay
aglutinacin.
Preparacin
del control
Ponga una gota de eritrocitos lavados

Aada una gota de reactivo control.
Centrifugue 15 seg. y observe si hay
Deteccin de
sangre
al
3-5 %
aglutinacin
Du
Nota: esta tcnica se

que
no aglutinaron .
negativo
le
realizo
los
tubos
problemas
Los
tubos
que no
tuvieron aglutinacin en la
determinacin de
Rh se
incuban
15
min, y
posteriormente se lavan 3 veces con sol. Salina
Previamente lavados
se le agregan
2
gotas
de
suero
de COOMBS.
Centrifugar 15 seg y observar, desprender boton
ESQUEMAS:
RESULTADOS:
problemas
2
10
11
Aglutinacin
positiva
negativa
negativa
resultado
Rh +
Rh Rh 11
Paciente 2 cdigo 021612 plata Lugo Javier

Paciente 10 cdigo 021620 Hernndez Lpez Guillermo
Paciente 11 cdigo 021621 camarillo Sonia rebeca
INTERPRETACIN:
Para el primer mtodo:
Aglutinacion: Rh positivo
No
aglutinacin: realizar
sangre Du.
prueba
de deteccin
de
Deteccin de sangre Du
Aglutinacin. D dbil (Du positivo)
No aglutinacin: Rh negativo
CONCLUSIONES:
Con el descubrimiento del sistema Rh, se denominan Rh
positivos los hemates que son aglutinados por este
anticuerpo y tienen, por tanto, el antgeno Rh en la
superficie. Se denominan Rh negativos los que no son
aglutinados y que, por tanto, no poseen el antgeno Rh en
su superficie.
De la misma manera que en el sistema ABO, en el sistema Rh
no se puede transfundir el antgeno Rh a las personas que
no lo tienen, ya que podra originar la produccin de
anticuerpos Rh en el receptor. Los sujetos Rh negativos
slo podrn recibir sangre de donantes Rh negativos.
PRACTICA 4
INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL
INTRODUCCION:
El sistema utilizado en inmunohematologa para investigar e identificar antgenos y
anticuerpos antieritrocitarios. Es de tecnologa de microtipificacin en gel se basa en la
separacin por tamao de los eritrocitos aglutinados, durante un proceso de
centrifugacin en un gel poroso.
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna.
12
Esta tcnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccin antgenoanticuerpo con facilidad y repetitividad. As como la estandariza del uso de reactivos,
tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador.
OBJETIVO: determinacin de los antigenos del sistema ABO,Rh (D) y determinacion

del grupo serico , en tecnica de gel.
FUNDAMENTOS:
El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y. Lapierre para la
deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies. La aglutinacion se produce
al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes.
La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos. Cada
microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersion/incubacion.
La tecnologa de microtipificacin en gel se basa en la separacin por tamao de los
eritrocitos aglutinados, durante un proceso de centrifugacin en un gel poroso.
Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los
aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequeos quedan
distribuidos a lo largo de la columna.
MATERIAL
Pipeta automtica 10 ul, 50ul, 1 ml.
Puntas de pipeta desechable
Tubos de vidrios
DEG sol
Centrifugas para tarjetas DG gel
Hematies de reactivos para grupo inverso.
MUESTRA BIOLOGICA:
REACTIVO:
Placa de gel
Reactivo de gel sol
13
TECNICA
1.- determinacion de los antigenos del sistema ABO/Rh.
-preparar una suspension de hematies al 5 % de DG sol. Asegurar la resuspencion de lso
hematies antes de utilizar.
Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5%.
2.- determinacion de l grupo serico.
-homogenizar los hematies recativos A1/B
- dispersar el microtubulo N /a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo N/b
50 ul de hematies reactivos B.
-aadir suero o plasma.
3.- centrigugar en centrifuga para DG sol.
Leer los resultados.
RESULTADOS
NEGATIVO
POSITIVO
Banda de hematies al fondo de la columna, resto de la columna sin

aglutinados
+/1+
2+
3+
4+
Escasoa glutinados de pequeo tamaa d ela columna.

Algunos aglutinados pequeso en la columna
aglutinados pequeso en la columna o mediano a lo largo de la columna
Banda superior de aglutinado
Banda de aglutinados en la parte superior de la columna.
Doble poblacion (doble banda de hematies , en el fondo y en la parte
superior.
DP
INTERPRETACION DE RESULTADOS.
microtubo
A
0
+
0
+
GRUPO HEMATICO
microtubo microtubo
B
AB
0
0
+
+
SISTEMA Rh
Micrutubo D Micrutubo
D
+
+
0
0
0
+
+
0
GRUPO SERICO
microtubo
CTL
MICROTUBUBO
N+ a1
MICROTUBUBO
N+ B
ABO
GRUPO
0
0
0
0
+
0
+
0
+
+
0
0
0
A
B
AB
0
+
+
+
Micrutubo
CTL
0
0
0
0
INTERPRETACION
D positivo
D negativo
D dbil parcial
RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA
14
Resultado; A+
CONCLUSION
Concluyo que esta tcnica, es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacin y
reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una tcnica inapropiada,
asi como crear un mtodo de interpretaciones sencillas y constantes.
Practica No. 5
Prueba de compatibilidad
Introduccin:
Para requerir una ptima transfusin actualmente se

requiere de aceptaciones inmunolgicas receptor - donante,
ya que la transfusin de sangre o la de sus componentes
celulares de un donante a un receptor es una forma de
transplante.
15
La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia de

anticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetos
sensibilizados a uno o mas antgenos sanguneos. Es til en
el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacin
materno-fetal y se emplea tambin en otro tipo de pruebas
como identificacin de anticuerpos autoinmunes, deteccin
de algunos sistemas sanguneos y pruebas de compatibilidad
sangunea.
La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normales
incubados in Vitro con el suero de estudio. Durante este
periodo, si existe un anticuerpo, este se fija sobre su
respectivo determinante antignico. Una vez fijados, los
eritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivo
de Coombs, produciendo aglutinacin.
Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona, los
cuales
puedan
ser
igualmente
auto-anticuerpos
o
isoanticuerpos.
Material y equipo:
Pipetas automticas de 10 l, 25 l, 50 l y 1 ml.
Puntas de pipetas desechables
Tubos de vidrio.
Incubador para tarjetas DG Gel.
Centrifuga para tarjetas DG Gel.
Material biolgico:
Hemates reactivo para investigacin e identificacin de anticuerpos irregulares de
Diagnostic Grifols, S.A.
Suero de hemoclasificacin.
Muestras de sangre de extraccin reciente, recogida con anticoagulante o sin
anticoagulante.
Reactivos:
Tarjetas DG Gel.
DG Gel Sol.
*Reactivos:
Tarjetas DG Gel Coombs
Rango de temperatura: entre 2 y 25 C
Lote: 7049.01
Cad: 2008-03
Color: verde
DG Gel Sol
Rango de temperatura: entre 2 y 8C
Lote: 7003.701
Cad: 2008-06
Color: incoloro
Tcnica:
Mtodo manual:
16
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
Dejar atemperar (18-25C) muestras y reactivo.

Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar.
Identificar las tarjetas y muestras a utilizar.
Despegar con precaucin la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir
contaminaciones cruzadas entre ellos.
Preparar una suspensin con hemates al 1% en DG Gel Sol (10 l de sedimento o
concentrado de hemates en 1 ml de DG Gel Sol). Utilizar los hemates del donante
para la PC mayor y hemates del receptor para la PC menor. Asegurar la suspensin de
los hemates antes de utilizar.
Dispensar en el tubo correspondiente, 50 l de suspensin de los hemates al 1% del
donante (PC mayor) o 50 l de suspensin de los hemates al 1% del receptor (PC
menor).
Aadir 25 l de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 l de suero o plasma del
donante (PC menor).
Preparar auto control con 50 l de suspensin de los hemates al 1% del receptor y 25
l de suero o plasma del receptor.
Incubar 15 minutos a 37 C.
Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel.
Leer los resultados.
Interpretacin:
Negativo:
Positivo:
+/1+
2+
3+
4+
DP:
Banda de hemates en el fondo de la columna, resto de la columna sin aglutinados visibles.

Escasos aglutinados de pequeo tamao en la mitad inferior de la columna.
Algunos aglutinados de pequeo tamao en la columna.
Aglutinados de tamao pequeo o mediano a lo largo de la columna.
Banda superior de aglutinados, de tamao mediano en la mitad superior de la columna.
Banda de hemates aglutinados en la parte superior de la columna.
Doble poblacin (doble banda de hemates, en el fondo y en la parte superior de la columna.
Resultados:
Paciente:
Donador 1:
Donador 2:
Lira Cabrera Carlos Alberto

Orea Valero Erasmo.
Moreno Adolfo.
(AB+)
(A+)
(O+)
M1
m1
M2
m2
Autocontrol
GR de donador 1 +
suero del paciente
GR del paciente +
suero de donador 1
GR de donador 2 +
suero del paciente
GR del paciente +
suero de donador 2
GR del paciente +
suero del paciente
Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al
paciente (AB+), lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos; no as plasma por
parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccin en ambas pruebas
menores.
17
Conclusin:
Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiada

antes de la transfusin para: Asegurar que todos los
glbulos rojos transfundidos son compatibles con los
anticuerpos en el plasma del paciente. Evitar estimular la
produccin de nuevos anticuerpos contra los glbulos rojos
en el receptor, especialmente anti-Rh D.
PRCTICA No. 6
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGNEA

(Tcnica salina)
INTRODUCCIN
Landsteiner constat que cuando un aglutingeno se pone
en contacto con la aglutinina homloga se produce una
aglutinacin.
18
La compatibilidad sangunea es la posibilidad de mezcla

de sangre sin que se produzcan trastornos, tales como los
fenmenos de la lisis o de la aglutinacin.
A causa de este fenmeno biolgico en las transfusiones
de sangre no es suficiente con conocer que la sangre del
donante y la del receptor son del mismo grupo, o bien que
la del donante pertenezca al grupo O (cero), sino que es
necesario conocer si la compatibilidad es perfecta, porque
ningn otro fenmeno de inmunizacin interfiera. Es en
este sentido por lo que son empleadas las pruebas
cruzadas.
Adems de los 6 antgenos del sistema ABO en los
eritrocitos
humanos,
existen
numerosos
sistemas
de
aglutingenos que contienen muchos antgenos individuales
en los eritrocitos (ms de 500.000 millones posibles de
fenotipos de grupos sanguneos conocidos). Para evitar
accidentes transfusionales es indispensable tener en
cuenta el sistema Rh adems del ABO.
Del sistema de antgenos Rh es el D el ms antignico, y
el trmino Rh positivo indica que el individuo presenta
aglutingeno D. El individuo Rh negativo no tiene antgeno
D y forma la aglutinina anti-D en contacto con ste.
Las reacciones antgeno-anticuerpo pueden observarse in
vitro por:
Hemlisis: la unin antgeno-anticuerpo se traduce en
lisis de los eritrocitos en presencia
del complemento (siempre que el anticoagulante empleado no
capture los
iones Ca y Mg necesarios para la activacin del
complemento).
Aglutinacin: los anticuerpos que reaccionan en medio
salino se conocen como
anticuerpos completos o aglutinantes (comnmente tipo
IgM).
OBJETIVO: Determinacin de los antigenos del sistema ABO,
Rh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y un
Paciente Receptor.
MATERIAL
*5 Tubos de ensaye.
*6 Pipetas Pasteur.
*1Gradilla.
*1 Bulbo.
EQUIPO
Microcentrfuga.
Bao Mara Estufa.
19
*Papel Parafilm.
MUESTRA
Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA.
REACTIVOS
Antisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespecfico Anti IgG
C-d)
Para prueba de Coombs.
LABORATORIOS LAFON S.A de C. V.
Fecha de Caducidad: 31-Ene-09
Lote: 406
Hecho en Mxico
Aspecto: Transparente:
Color: Verde
TCNICA
Lavar los eritrocitos con solucin salina (3 veces).
SALINA RPIDA:
1. Agregar una gota de Eritrocitos Lavados.
2. Diluirlo al 3-5% con solucin salina 0.9%.
3. Agregar 2 gotas de suero.
4. Centrifugar y observar, anotar desprendimiento del botn.
PRUEBA MAYOR
G. Rojos del DONADOR
+
Suero del RECEPTOR
(paciente)
PRUEBA MENOR
G. Rojos del RECEPTOR
(paciente)
+
Suero del DONADOR
AUTOTESTIGO
G. Rojos del RECEPTOR
(paciente)
+
Suero del RECEPTOR
(paciente)
SALINA 37 BAO MARA:

1. Incubar tubos a Bao mara a 37C durante 1
hora (o 20 min).
2. Centirfugar despus de haber pasado el
tiempo.
3. Desprender
el
botn
de
eritrocitos
y
observar.
AGLUTINACIN No es compatible.
NO AGLUTINACIN - Lavar 3 veces.
SALINA COOMBS:
20
1. Con solucin salina 0.9% lavar los

eritrocitos de los tubos q no tuvieron
aglutinacin 3 veces.
2. Decantar y agregar 2 gotas de reactivo
de Coombs
RESULTADOS
Paciente:
Madrigal Mndez Luis Eduardo (B+)

Folio: 009164
Fecha:30/10/07
Donador 1:
Torres Avils Jos Ramn

Folio: 022604
Fecha:31/10/07
Donador 2:
Rodrguez Nez Jos Angel

(A+)
Folio: 022605
Fecha:31/10/07
(O+)
SALINA RPIDA:
M1
m1
M2
m2
Autotestigo
GR de donador 1
+ suero del
paciente
GR del paciente
+ suero de
donador 1
GR de donador 2
+ suero del
paciente
GR del paciente
+ suero de
donador 2
GR del paciente
+ suero del
paciente
4+
4+
4+
M2
4+
No
compatible
m2
4+
No
compatible
Autotestigo
Compatible
SALINA 37 BAO MARA:

M1
Compatible
m1
4+
No
compatible
SALINA COOMBS:
M1
Compatibl
e
Autotestigo
Compatible
Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puede

donar suero al paciente (B+), debido a que en el suero no
hay anticuerpos de ningn tipo que reaccionen con los
antgenos de los eritrocios del Donador 1. Mientras tanto
el Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero ni
eritrocitos.
21
INTERPRETACIN
PRUEBA POSITIVA: Existe una aglutinacin de las
clulas sanguneas que indica la presencia del
antgeno A o B. En el suero de Coombs notamos si esta
la precencia de Antgeno D en los eritrocitos. La
hemlisis no se debe interpretar como resultado
positivo ya que puede indicar contaminacin del
reactivo.
PRUEBA NEGATIVA: La no aglutinacin indica un
resultado negativo e indica que las clulas son
negativas para Antgenos del sisitema ABO y D
CONCLUSIN
He concluido que en las transfusiones de sangre no es
suficiente con conocer que la sangre del donante y la del
receptor son del mismo grupo, o bien que la del donante
pertenezca al grupo O (cero), sino que es necesario
conocer si la compatibilidad es perfecta, porque ningn
otro fenmeno de inmunizacin interfiera. Es en este
sentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas.
Prctica No. 7
Prueba de compatibilidad sangunea (tcnica albumina)
Introduccin:
La tipificacin de sangre identifica el tipo sanguneo determinando
antgenos presentes en los eritrocitos, detecta aloanticuerpos en
contra esos antgenos. As los aloanticuerpos pueden aparecer
naturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupo
conocido o a los antgenos de superficie de los eritrocitos. La prueba
de compatibilidad sangunea o cross matching esta formada por la
prueba mayor y menor.La prueba de cruzamiento mayor para los
aloanticuerpos, consiste en probar el plasma del receptor contra los
22
glbulos rojos del donante. Es incompatible cuando se genera una

reaccin hemoltica, los eritrocitos del donante se destruyen por los
aloanticuerpos del plasma del receptor. La prueba menor es una prueba
para los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los glbulos
rojos del receptor. Una incompatibilidad menor es una causa menos
frecuente para causar una reaccin en contra una transfusin, porque
el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente en
el receptor. Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizan
diversos reactivos como potencializadores que mejoran la unin de
eritrocitos con algn tipo de anticuerpo. Uno de esos
potencializadores es la albmina. La albumina bovina polimerizada es
un reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y en
centros de bancos de sangre, funciona como un potencializador que
facilita la reaccion de aglutinacin de eritrocitos sensibilizados. Al
final de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo de
Coombs. El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschi
en 1908, pero Coombs, Mourant y Race, en 1946, la introdujeron en el
estudio de los grupos sanguneos y anticuerpos, cuando una parte de
sangre (suero) fue usada para la inoculacin de animales para
inmunizarlos con protena humana, utilizando el anticuerpo obtenido en
la deteccin de los llamados anticuerpos incompletos. Esta prueba se
usa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en el
suero de sujetos sensibilizados a uno o mas antgenos sanguneos. Es
til en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacin maternofetal y se emplea tambin en otro tipo de pruebas como identificacin
de anticuerpos autoinmunes, deteccin de algunos sistemas sanguneos y
pruebas de compatibilidad sangunea. La prueba indirecta se realiza
con eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudio.
Durante este periodo, si existe un anticuerpo, este se fija sobre su
respectivo determinante antignico. Una vez fijados, los eritrocitos
son igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs, produciendo
aglutinacin. Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que
existen anticuerpos libres en el suero de la persona, los cuales
puedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos.
Objetivo: Determinacin de los antgenos del sistema ABO, Rh (D) y su
compatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor.
Material y equipo:
5 Tubos de ensaye.
6 Pipetas Pasteur.
1Gradilla.
1 Bulbo.
Papel Parafilm.
Microcentrfuga.
Bao Mara Estufa.
Material biolgico:
Muestras de sangre de extraccin
anticoagulante o sin anticoagulante.
reciente,
recogida
con
Reactivos:
Suero de Coombs*
Albmina bovina
*Suero anti-globulina humana Lafon. Lote 406. Cad: 31/01/09. Color: verde. Aspecto:
transparente.
Albumina de bovino polimerizada Interbiol. Lote APO107. Cad: 15/01/09. Color: incoloro.
Aspecto: transparente.
23
Tcnica:
1. Montar prueba mayor 1 y 2, prueba menor 1 y 2, y autotestigo,
con el procedimiento ya anteriormente conocido.
2. Agregar 2 gotas de albmina al 22%.
3. Centrifugar 20 segundos.
4. observar aglutinacin o hemolisis, o no aglutinacin.
5. A los tubos con lecturas negativas, incubar 20 minutos en bao
Mara a 37 C.
6. Centrifugar y observar:
Aglutinacin o hemlisis: reportar incompatible.
No aglutinacin: llevar a Coombs.
7. Lavar tres veces, decantar, y quitar el exceso de salina con
gasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20
segundos y observar:
No aglutinacin: reportar compatible.
Resultados:
1
2
3
4
5
PRUEBA MAYOR
donador 1.
PRUEBA MENOR
paciente.
PRUEBA MAYOR
donador 2.
PRUEBA MENOR
paciente.
AUTOTESTIGO:
1: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del

1: 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de G.R. al 3-5% del
2: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del
2: 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de G.R. al 3-5% del
2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del paciente.
Con albmina.
Despus de incubacin a 37 C.
Despus de Coombs.
Despus de validacin con glbulos
positivos.
M1
+
m1
+
M2
+
m2
+
Autotestigo
+
Interpretacin:
Prueba positiva: Alutinacin o hemolisis. Indica no compatibilidad.
Prueba negativa:No aglutinacin. Indica compatibilidad.
Esquemas:
24
Conclusin:
Concluyo que la prueba de compatibilidad sangunea en su modalidad con
albmina bovina ofrece mucha ventaja al ser, al igual que otros
reactivos, un potencializador de la reaccin antgeno-anticuerpo. Esto
permite que el operador o realizador de la prueba tenga mayor
confianza y certeza en los resultados que obtenga.
PRACTICA No. 8
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS.
25
FUNDAMENTO:
LISS es utilizado para reducir la fuerza inica del medio
de
reaccin
en
los
procedimientos
de
deteccin
e
identificacin de anticuerpos y en las pruebas de
compatibilidad. La presencia de este reactivo refuerza la
interaccin antgeno - anticuerpo durante la incubacin.
GENERALIDADES:
El uso de solucin salina de baja fuerza inica fue
descrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col. y
Elliot y col., pero en ese tiempo su uso era limitado ya
que la concentracin molar obtenida provocaba la hemlisis
de los eritrocitos suspendidos.
En 1974, Low y Messeter describieron el uso rutinario de la
solucin Liss de 0,03 M que lograba reducir el tiempo de
incubacin y no presentaba tendencia a la hemlisis al ser
suspendidos en salina a baja fuerza inica, restableciendo
la presin osmtica de la solucin mediante la adicin de
glicina.
Las soluciones de baja fuerza inica son actualmente las
ms utilizadas en inmunohematologa, provocando un aumento
en la velocidad de asociacin entre antgenos y anticuerpos
permitiendo as acortar el tiempo de incubacin de 60
minutos a 10-15 minutos, sin sacrificar la sensibilidad de
las mismas y sin costos elevados.Se ha observado que las
reacciones antgeno-anticuerpo se ven potenciadas al
reducir la fuerza inica del medio de reaccin.
La fuerza inica es uno de los factores ms importantes que
determinan la tasa y la cantidad de captacin de
anticuerpos por parte de los eritrocitos. El uso de medios
de reaccin de baja fuerza inica permite disminuir el
tiempo de incubacin y potenciar las reacciones de los
anticuerpos sin incrementar las reacciones inespecficas.
Los iones Na+ y Cl-, presentes en la solucin salina
fisiolgica, se agrupan alrededor de las molculas de
antgeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas, lo
cual dificulta la unin entre ellos. Este efecto se reduce
utilizando soluciones de baja fuerza inica y disminuyendo
de esta manera la incubacin de las pruebas.
26
En esta etapa de sensibilizacin, las posibilidades de

asociacin
pueden
incrementarse
mediante
agitacin,
centrifugacin y/o variacin de la concentracin del
anticuerpo.
Despus de que el anticuerpo se ha fijado al antgeno, los
eritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a la
aglutinacin visible; esta red tambin solidifica y
estabiliza la reaccin.
En esta etapa la reaccin depende de factores como las
caractersticas del anticuerpo, localizacin en la membrana
y nmero de sitios antignicos, fuerzas que mantienen la
distancia entre los eritrocitos.
Las caractersticas del anticuerpo que deben considerarse
son el tamao del anticuerpo involucrado y el nmero de
sitios de combinacin con el antgeno. Los anticuerpos IgM
pueden
establecer
puentes
entre
los
eritrocitos
y
aglutinarlos espontneamente en solucin salina, mientras
que los IgG no, ya que las IgM, pentamricas poseen 10
sitios de combinacin con el antgeno y las IgG dmeros
slo dos sitios.
Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en su
superficie, su interaccin con los iones del medio altera
esta carga y producen una carga neta crtica denominada
potencial zeta, y la reduccin de dicha carga permite que
los eritrocitos se aproximen lo suficiente para que sean
aglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron.
Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco de
sangre tienen un pH entre 6.5 7.0, se recomienda una
osmolalidad de 270 305 mosm/kg y una conductividad de 3.7
mm/cm. El control diario implica el examen de su apariencia
fsica: ausencia de turbidez, particulas o sedimento, as
como, corroborar la capacidad para generar hemlisis,
crenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos
normales. Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo de
un anticuerpo ya sea un anti- D, un anti- jk, anti- fy o
anti- kell diluido; se compara su capacidad de deteccin
contra un medio salino normal incubando 10min a 37C, en
LISS debe poder rastrearse un anticuerpo, en tanto que en
medio salino no.
MATERIAL Y EQUIPO:
Material
10
1
10
Cantidad
Tubos de ensayo de 12 x 75
Gradilla
Pipetas pasteur
27
1
1
1
1
Bulbo
Marcador
Microcentrfuga
Bao Mara
MATERIAL BIOLOGICO:
Glbulos rojos lavados al 3 - 5%
Suero
REACTIVOS:
Reactivo de LISS
Reactivo de Coombs
TECNICA:
1.- Lavar los eritrocitos:
Separar el suero del paquete de glbulos rojos.
Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un
ensayo y agregarle solucin salina
Centrifugar y decantar
Repetir este proceso 3 veces
tubo
de
2.- Realizar la Prueba de LISS:

Enumerar los tubos
Poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5%, segn el nmero de
tubo correspondiente,
Mezclar
y
centrifugar
un
minuto,
decantar
el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar el
exceso del reactivo.
Poner nuevamente 2 gota de LISS, resuspender por
agitacin, agregar 2 gotas de suero problema, mezclar,
incubar 15 minutos a 37 C. centrifugar 30 seg. A 1000
R.P.M.
Anotar los resultados.
3.- A las pruebas negativas realizar Coombs:
Lavar 3 veces las clulas, agregar suero
centrifugar 30 seg.
Leer aglutinaciones y anotar resultados.
de
Coombs,
REACTIVOS UTILIZADOS:
REACTIVO
MARCA
FECHA DE
CADUCIDAD
ASPECTO
COLOR
LOTE
28
Suero
Antiglobuina
humana
LISS
Lafon
31/ 01/ 2009
Transparente
Verde
Casero
realiza
do en
CMN
SIGLO
XXI
1 ao
Transparente
Transp
arente
406
---------
PACIENTE: ASCANIO MENDEZ JOSUE

DONADOR 1: GARCIA CARBAJAL OSCAR
DONADOR 2: GARCIA SUAREZ ORLANDO
O (+)
O (+)
A (+)
RESULTADOS:
Tubo
M1
m1
M2
M2
AUTOTES.
Resultado
NEGATIVO
NEGATIVO
POSITIVO
NEGATIVO
NEGATIVO
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

La hemlisis o la aglutinacin representan un resultado positivo e indican la
presencia de una reaccin antgeno-anticuerpo. Los resultados negativos no se
vera aglutinacin o hemolisis.
ESQUEMAS:
CONCLUSIONES:
Concluyo que la prueba de compatibilidad sangunea en su modalidad con
liss ofrece mucha ventaja al ser, al igual que otros reactivos, un
potencializador de la reaccin antgeno-anticuerpo. Esto permite que
el operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certeza
en los resultados que obtenga.
29
PRACTICA 9
INMUNOHEMATOLOGIA
DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO
INTRODUCCION:
PRUEBA DE COOMBS DIRECTA
El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contra
los propios glbulos rojos (GR) de un individuo. Es una prueba que sirve para
demostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo, (mientras los eritrocitos
estn circulando en el individuo). La prueba se realiza agregando directamente
el reactivo de Coombs a los eritrocitos, previamente lavados para eliminar
otras protenas no fijadas a el; una prueba directa positiva significa que la
relacin antgeno-anticuerpo ocurri in vivo, es decir que la fijacin del
anticuerpo sobre el antgeno se realizo en el organismo del individuo en
estudio.
Las indicaciones principales de esta prueba son: diagnostico de enfermedades
hemolticas, ictericia o anomalas en la apariencia de los glbulos rojos bajo el
microscopio, ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los glbulos
rojos y causan anemia; para investigar reacciones en transfusiones. Para
investigar la induccin de drogas en clulas rojas sensibilizadas, medicamentos
(por ejemplo, quinidina, metildopa, procainamida y otros) que pueden llevar a la
produccin de estos anticuerpos.
OBJETIVO: Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de los
glbulos rojos del individuo.
MATERIAL
10 Tubos de 12/75
10 Pipetas Pasteur
1 Gradilla.
1 Bulbo.
Papel Parafilm.
Microcentrfuga.
Bao Mara a 37C.
MUESTRA BIOLOGICA:
Eritrocitos lavados de (3-5%) del donador o paciente.
REACTIVO:
Suero de Coombs*
*Suero anti-globulina humana Lafon. Lote 406 Cad: 31/01/09. Color: verde. Aspecto: transparente.
TECNICA:
30
Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota de
globulos rojos (3-5%).
Centrifugar a 1000 rpm durante 20 seg.
Desprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacion.
Rotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones
(,,1/8...)
Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8.
Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotas
de suero de Coombs.
Colocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5%), mezclar
completamente y agregar al tubo #1
Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg.
LECTURA:
Aglutina.- Prueba de Coombs directa es positiva.
No aglutina.- Prueba de Coombs directa es negativa.
ESQUEMAS y RESULTADOS:
DILUCIONES
positiva
positiva
1/8 positiva
1/16 negativa
1/32 negativa
1/64 negativa
1/128 negativa
1/256 negativa
CONCLUCION:
He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir
la presencia de anticuerpos en la superficie de los glbulos rojos que se encuentran
circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones adems
sirve para la determinacin de anemia hemoltica autoinmune entre otras afecciones.
Practica 10
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
Fundamento:
31
Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que el

individuo entra en contacto con el medio ambiente y en el
cual se encuentran microorganismos como algunas bacterias
coliformes
que
contienen
sustancias
qumicas
en
su
estructura parecidas a las de este sistema. Por anticuerpos
regulares debemos identificar a los que existen en todos
los individuos y que stos tendrn durante toda su vida.
Los anticuerpos irregulares son los que no estn de esa
manera, aunque en el caso de los naturales no se conoce a
ciencia cierta qu o cmo se induce su produccin. Los
adquiridos se conocen tambin como inmunes y son el
resultado de la exposicin a antgenos desconocidos por el
individuo al momento de la
transfusin o en las mujeres
por el embarazo; estos anticuerpos son dirigidos contra
antgenos de sistemas diferentes al ABO.
Los anticuerpos naturales regulares son preferentemente
inmunoglobulinas M, las cuales fijan de manera tan
eficiente
el
complemento
que
pueden
provocar
lisis
intravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso la
muerte del paciente. Los anticuerpos adquiridos o inmunes
son generalmente inmunoglobulinas G, las cuales producen
hemlisis extravascular en el bazo o en el hgado mediante
fagocitosis del complejo eritrocito ms anticuerpo.
Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) ms comunes en
nuestra poblacin son los que involucran a los sistemas
MNSs, P1, Kidd (Jka, Jkb), Duffy (Fya, Fyb), Kell, Lewis y
Diego.
OBJETIVO: identificacin del anticuerpo irregular a travs
de las diferentes tcnicas.
MATERIAL
10 Tubos de ensaye.
10 Pipetas Pasteur.
1Gradilla.
1 Bulbo.
Papel Parafim.
EQUIPO
1. Microcentrfuga.
2. Bao Mara Estufa.
MATERIAL BIOLOGICO:
Glbulos rojos lavados al 3 - 5%
Suero
REACTIVOS
Reactivos:
1. Suero de Coombs*
2. Albmina bovina
32
3. SOLUCION SALINA
4. SOLUCION DE LISS
TCNICA SOLUCION SALINA
Lavar los eritrocitos con solucin salina (3
veces).
SALINA RPIDA:
Agregar una gota de Eritrocitos Lavados.
Dilurlo al 3-5% con solucin salina 0.9%.
Agregar 2 gotas de suero.
Centrifugar y observar, anotar desprendimiento
del botn.
SALINA 37 BAO MARA:
1) Incubar tubos a Bao mara a 37C durante 1
hora (o 20 min).
2) Centirfugar despus de haber pasado el
tiempo.
3) Desprender
el
botn
de
eritrocitos
y
observar.
SALINA COOMBS:
1) Con solucin salina 0.9% lavar los
eritrocitos de los tubos q no tuvieron
aglutinacin 3 veces.
2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivo
de Coombs
TECNICA LISS
1. Poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar una gota
de eritrocitos lavados y al 3 - 5%, segn el nmero de
tubo correspondiente,
2. Mezclar
y
centrifugar
un
minuto,
decantar
el
sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar el
exceso del reactivo.
3. Poner nuevamente 2 gota de LISS, resuspender por
agitacin, agregar 2 gotas de suero problema, mezclar,
incubar 15 minutos a 37 C. centrifugar 30 seg. A 1000
R.P.M.
4. Anotar los resultados.
A las pruebas negativas realizar Coombs:
1. Lavar 3 veces las clulas, agregar suero de Coombs,
centrifugar 30 seg.
2. Leer aglutinaciones y anotar resultados.
33
TECNICA ALBUMINA BOVINA

8. Agregar 2 gotas de albmina al 22%.
9. Centrifugar 20 segundos.
10.observar aglutinacin o hemolisis, o no aglutinacin.
11.A los tubos con lecturas negativas, incubar 20
minutos en bao Mara a 37 C.
12.Centrifugar y observar:
No aglutinacin: llevar a Coombs.
13.Lavar tres veces, decantar, y quitar el exceso de
salina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo de
Coombs y centrifugar 20 segundos y observar:
No aglutinacin: reportar compatible.
Resultados
ANTICUERPO IRREGULAR:
Anticuerpo c.
Interpretacin
Estos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo M
y ocasionalmente tipo G, y debido a esa temperatura de
reaccin carecen de importancia clnica salvo que su
reaccin ocurra tambin a 37 C, su importancia radica en
pacientes que sern intervenido a 22 c como es el caso de
operacin de corazn.
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura ptima de
reaccin a 37 C, a Estos anticuerpos tienen una relevante
importancia
clnica
ya
que
se
les
asocia
con
reacciones
transfusionales de intensidad moderada a severa, que pueden
ocasionar la muerte.
Esquemas:
CONCLUSION:
He concluido que es importante determinar los anticuerpos
irregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevante
importancia
clnica
ya
que
se
les
asocia
transfusionales de intensidad moderada a severa.
con
reacciones
34

Manual Completo de Inmunohematologia

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FACULTAD DE BIOANALISIS

LIC. QUIMICA CLINICA.

CATEDRATICA: Q.C. RUTH ESTRADA MARQUEZ

1. DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO ABO Y RH

4. DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL

6. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGNEA (TCNICA SALINA)

7. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUNEA (TCNICA ALBUMINA)

8. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS.

OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com

9. DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO

10.IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES

OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com

Antisuero Anti-A, Anti-AB, Anti-B y Anti-D *

Antisuero AB monoclonal Lafon

OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com

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OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com

OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com

OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com

Prueba positiva: Aglutinacin de las clulas rojas.

OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com

anticuerpo materno. Es til tambin en el diagnostico

OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com

Prepare una suspensin de glbulos rojos al 35 % en

Ponga una gota de eritrocitos lavados

Nota: esta tcnica se

OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com

Paciente 2 cdigo 021612 plata Lugo Javier

OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com

OBJETIVO: determinacin de los antigenos del sistema ABO,Rh (D) y determinacion

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Banda de hematies al fondo de la columna, resto de la columna sin

Escasoa glutinados de pequeo tamaa d ela columna.

RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA

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Para requerir una ptima transfusin actualmente se

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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia de

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Dejar atemperar (18-25C) muestras y reactivo.

Banda de hemates en el fondo de la columna, resto de la columna sin aglutinados visibles.

Lira Cabrera Carlos Alberto

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Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiada

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGNEA

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La compatibilidad sangunea es la posibilidad de mezcla

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SALINA 37 BAO MARA:

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1. Con solucin salina 0.9% lavar los

Madrigal Mndez Luis Eduardo (B+)

Torres Avils Jos Ramn

Rodrguez Nez Jos Angel

SALINA 37 BAO MARA:

Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puede

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glbulos rojos del donante. Es incompatible cuando se genera una

Bao Mara Estufa.

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1: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del

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