Actividades enzimáticas: especialidad y desnaturalización por cambios de pH y temperatura FUNDAMENTO TEÓRICO

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Enzima
Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas, siempre que sean termodinámicamente posibles: Una enzima hace que una reacción química que es energéticamente posible (ver Energía libre de Gibbs), pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinéticamente favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima.2 3 En estas reacciones, las enzimas actúan sobre unas moléculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en moléculas diferentes denominadas productos. Casi todos los procesos en las células necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimáticas. Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y su velocidad crece sólo con algunas reacciones, el conjunto (set) de enzimas sintetizadas en una célula determina el tipo de metabolismo que tendrá cada célula. A su vez, esta síntesis depende de la regulación de la expresión génica. Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energía de activación (ΔG‡) de una reacción, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de reacción. Las enzimas no alteran el balance energético de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio de la reacción, pero consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. Una reacción que se produce bajo el control de una enzima, o de un catalizador en general, alcanza el equilibrio mucho más deprisa que la correspondiente reacción no catalizada. Al igual que ocurre con otros catalizadores, las enzimas no son consumidas por las reacciones que catalizan, ni alteran su equilibrio químico. Sin embargo, las enzimas difieren de otros catalizadores por ser más específicas. Las enzimas catalizan alrededor de 4.000 reacciones bioquímicas distintas. No todos los catalizadores bioquímicos son proteínas, pues algunas moléculas de ARN son capaces de catalizar reacciones (como la subunidad 16S de los ribosomas en la que reside la actividad peptidil transferasa). También

glucosídicos y pépticos. sólo aceleran el proceso. Se las puede clasificar en: Óxido-reductasas: estas enzimas están vinculadas con las reducciones y oxidaciones biológicas que intervienen en los procesos de fermentación y de respiración. Los inhibidores enzimáticos son moléculas que disminuyen o impiden la actividad de las enzimas. estas enzimas son las que actúan sobre distintos sustratos. Transferasas: estas enzimas son las encargadas de catalizar la transferencia de una porción de molécula a otra. Muchas drogas o fármacos son moléculas inhibidoras.cabe nombrar unas moléculas sintéticas denominadas enzimas artificiales capaces de catalizar reacciones químicas como las enzimas clásicas. gran cantidad de enzimas requieren de cofactores para su actividad. . carbono y oxígeno. aldehído. Hidrolasas: estas enzimas actúan sobre las moléculas de protoplasma. la concentración de la propia enzima y del sustrato. la tripsina y la pepsina que son esenciales en la digestión ya que son las que hidrolizan enlaces estéricos. sulfató. en la síntesis de antibióticos y productos domésticos de limpieza. Además. escindiéndolos. carbono y azufre o carbono y nitrógeno. entre otros grupos. amina. como son la fabricación de alimentos. Dentro de estas enzimas se encuentran proteínas como la quimiotripsina. tales como las de grasas. Igualmente. que se unen a las moléculas resultantes de la ruptura de enlaces de las moléculas mencionadas. el pH. El acto de catalizar es realizado en la escisión de los enlaces de los átomos de nitrógeno y carbono o bien. Además. Liasas: estas enzimas son las que actúan sobre los enlaces entre los átomos de carbono. Algunas enzimas son usadas comercialmente. de glicógeno y de proteínas. Isomerasas: estas son las que actúan sobre ciertas sustancias a las que transforman en otras isómeras. transfiriendo glucosilo. la actividad es afectada por la temperatura. destinción de jeans o producción de biocombustibles. Las enzimas no alteran el equilibrio de dichas reacciones ni tampoco el balance enérgico. son ampliamente utilizadas en diversos procesos industriales. Estas son esenciales en ciertas cadenas metabólicas como por ejemplo la escisión enzimática de la glucosa y en la producción de ATP. mientras que los activadores son moléculas que incrementan dicha actividad. de carbono y oxígeno. lo que significa que tienen la misma fórmula empírica pero un desarrollo diferente. Tipos de enzimas Las enzimas son las proteínas encargadas de catalizar las reacciones bioquímicas del metabolismo. Al mismo tiempo se adquiere la hidrólisis de las moléculas de agua de la que devienen las moléculas de hidrógeno y oxidrilo.7 La actividad de las enzimas puede ser afectada por otras moléculas. por ejemplo. y otros factores físico-químicos. Asimismo.

se forma una sustancia compleja denominada Biuret. MATERIALES:           Gradilla Tubo de ensayo Pipeta Clara de huevo Leche Papa cocida y cruda Agua oxigenada Reactivo Biuret Hígado de pollo Almidón REACCIÓN DE BIURET La producen los péptidos y las proteínas. ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (-CO-NH-) que se destruye al liberarse los aminoácidos. Debido a la dicha reacción fue que observamos que al agregar el reactivo de sulfato de cobre mas solución de proteína precipitado una coloración violeta.Ligasas: estas enzimas en cambio. Esto se da al mismo tiempo en que el ATP se degrada y libera energías que son las necesarias para que dichas moléculas puedan unirse. Quedando con el fondo del tubo una tonalidad azul cielo reacción positiva. pero no los aminoácidos. OBJETIVOS:   Poner de manifiesto las propiedades de las enzimas y su especialidad y desnaturalización por cambios de pH y temperatura Demostrar como la temperatura tiene efecto en la función de la enzima amilasa. son las que permiten que dos moléculas se unan. Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado. .

Añadir 1 ml de solución de almidón a cada tubo. En la mesa hay dos platos con trozos de patata. . Preparar 2 tubos de ensayo con los siguientes reactivos: TUBO 1 Amilasa (escupir un poco de saliva) 2 gotas de H2O TUBO 2 Amilasa (escupir un poco de saliva) 2 gotas de HCL 1N 2. la patata ha sido previamente cocida. inhiben la actividad enzimática. La amilasa es una de las enzimas encargadas de la digestión del almidón. 4. Cambios de pH desnaturalizan la proteína y. que al ser gas. indicará actividad catalasa. En uno de ellos. Por tanto.Precipitando a una coloración amarillenta la reacción nos torna negativa al no haber presencia de proteínas Práctica Desnaturalización a pH ácido de la amilasa Las enzimas tienen un pH óptimo de actuación. Cuestiones 1. al añadir agua oxigenada a un tejido vivo. donde descompone el H2O2 en H2O y O2. ¿En qué tubo/s da positiva la prueba del lugol?¿En cuál/es negativa? ¡Por qué? Práctica Desnaturalización de la catalasa por calor Las enzimas tienen una temperatura óptima de actuación. y que también la producen las glándulas salivares. por tanto. la detección de desprendimiento de oxígeno gas. La catalasa se encuentra en todos los tejidos vivos. Es una enzima que se encuentra a lo largo de todo el tracto digestivo de los mamíferos. Agitar los tubos y esperar 5 min. en solución acuosa se desprende en forma de burbujas. Realizar la prueba del Lugol a cada tubo. Agitar los tubos y dejarlos reposar 10 min para que transcurra la reacción enzimática. Método 1. 5. 3. concretamente hidroliza enlaces 1-4 entre moléculas de aglucosa.

Almidón Clara de huevo Leche  Luego a las diferentes muestras se les coloca por pequeñas cantidades en tubos de ensayos. Almidón y Leche. 2. . Introducir en sendos tubos de ensayo un trozo de patata de cada plato. Cuestiones 1. ¿Qué indica la falta de desprendimiento de O2 al añadir H2O2 a dicha patata? Práctica N° 1  En diferentes vasos precipitados se añaden diferentes muestras: Clara de huevo. ¿Cuál es el plato que contiene la patata cocida? 2. Añadir 1 ml de H2O2.Método 1.

. Añadimos Biuret a cada uno de los tubos de ensayo con las diferentes muestras.

 En el primer tubo de ensayo que contenía clara de huevo se tornó de color verde luego de ser agitada fuertemente.  El segundo tubo de ensayo que contenía leche se tornó de un color cielo oscuro. Leche Almidón Clara de Huevo .  El tercer tubo que contenía almidón se tornó de color azul cielo luego de ser agitada fuertemente. luego de ser agita.

 Luego a cada uno de los tubos de ensayo se les añade una muestra: Hígado de pollo.Practica N° 2  A tres tubos de ensayo se les coloca Agua oxigenada. Papa Cruda y Papa cocida. .

y esta burbujea considerablemente.  Al tercer tubo que contenía agua oxigenada se le añadió papa cocida y eta burbujea mínimamente. esta burbujea al entrar en contacto directo. . Al primer tubo que contenía agua oxigena le añadimos hígado de pollo.  Al segundo tubo que contenía agua oxigenada se le añadió papa cruda.

Hígado de Pollo Papa Cocida Papa Cruda . Observamos que la muestra del hígado de pollo tiene mayor burbujeo en cuanto a las dos muestras restantes al entrar en contacto con el agua oxigenada.

Práctica N°3 : ácido clorhídrico o sulfúrico  A los tres tubos de ensayo se les coloca Agua oxigenada. .  Seguidamente añadimos ácido clorhídrico o sulfúrico en los tubos de ensayos.

  Luego a cada uno de los tubos de ensayo se les añade una muestra: Hígado de pollo. . Papa Cruda y Papa cocida.

 Al segundo tubo que contenía también lo mismo que el primer tubo se le añadió un muestra de papa cruda. en donde la cantidad de burbuja disminuye. En donde sucedió que se calentó y se desnaturaliza. . Al primer tubo que contenía agua oxigena más ácido clorhídrico o sulfúrico le añadimos hígado de pollo.

la cual entra al estómago siendo atacado por la amilasa pancreática en forma: glucosa + glucosa = maltosa. En el cuarto experimento se realizó el reconocimiento del almidón. Al poner una gota de lugol de color rojo. produce dextrina. . de mil llega algo de dos al estómago. esta inmediatamente se vuele de color negro tal como se observa en la siguiente imagen que se realizó a base de galleta soda la cual fue masticado por tres de nuestros compañeros durante media hora para juego ser depositado en un vaso precipitado. en el tercer tubo con peróxido de sodio con papa cocida más agua oxigenada se observó qué ya no salía nada e burbujas. la cual apenas hace contacto con la amilasa salival. en donde este es una cadena larga de glucosas.

.Cuestiones: 1 ¿cuál es el plato que contiene la patata cocida? 2 ¿Qué indica la falta de desprendimiento de oxígeno al añadir H2O2 a dicha patata? El H2O2 es catalizado enzimáticamente en organismos anaerobios por la catalasa y otras per oxidasas. La catalasa no es esencial para algunos tipos de células en condiciones normales. tiene un importante papel en la adquisición de tolerancia al estrés oxidativa en la respuesta adaptativa de las células La catalasa captura el agua oxigenada de que pueda escapar de la célula y lo convierte en oxigeno molecular.