Actividades enzimáticas: especialidad y desnaturalización por cambios de pH y temperatura FUNDAMENTO TEÓRICO

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Enzima
Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas, siempre que sean termodinámicamente posibles: Una enzima hace que una reacción química que es energéticamente posible (ver Energía libre de Gibbs), pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinéticamente favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima.2 3 En estas reacciones, las enzimas actúan sobre unas moléculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en moléculas diferentes denominadas productos. Casi todos los procesos en las células necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimáticas. Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y su velocidad crece sólo con algunas reacciones, el conjunto (set) de enzimas sintetizadas en una célula determina el tipo de metabolismo que tendrá cada célula. A su vez, esta síntesis depende de la regulación de la expresión génica. Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energía de activación (ΔG‡) de una reacción, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de reacción. Las enzimas no alteran el balance energético de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio de la reacción, pero consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. Una reacción que se produce bajo el control de una enzima, o de un catalizador en general, alcanza el equilibrio mucho más deprisa que la correspondiente reacción no catalizada. Al igual que ocurre con otros catalizadores, las enzimas no son consumidas por las reacciones que catalizan, ni alteran su equilibrio químico. Sin embargo, las enzimas difieren de otros catalizadores por ser más específicas. Las enzimas catalizan alrededor de 4.000 reacciones bioquímicas distintas. No todos los catalizadores bioquímicos son proteínas, pues algunas moléculas de ARN son capaces de catalizar reacciones (como la subunidad 16S de los ribosomas en la que reside la actividad peptidil transferasa). También

Los inhibidores enzimáticos son moléculas que disminuyen o impiden la actividad de las enzimas. sulfató. carbono y azufre o carbono y nitrógeno. Liasas: estas enzimas son las que actúan sobre los enlaces entre los átomos de carbono. de glicógeno y de proteínas. El acto de catalizar es realizado en la escisión de los enlaces de los átomos de nitrógeno y carbono o bien. glucosídicos y pépticos. Transferasas: estas enzimas son las encargadas de catalizar la transferencia de una porción de molécula a otra. en la síntesis de antibióticos y productos domésticos de limpieza. Además. Algunas enzimas son usadas comercialmente. aldehído. Al mismo tiempo se adquiere la hidrólisis de las moléculas de agua de la que devienen las moléculas de hidrógeno y oxidrilo. Se las puede clasificar en: Óxido-reductasas: estas enzimas están vinculadas con las reducciones y oxidaciones biológicas que intervienen en los procesos de fermentación y de respiración. mientras que los activadores son moléculas que incrementan dicha actividad. la actividad es afectada por la temperatura.7 La actividad de las enzimas puede ser afectada por otras moléculas. carbono y oxígeno. Igualmente. amina. de carbono y oxígeno. sólo aceleran el proceso. como son la fabricación de alimentos. escindiéndolos. Isomerasas: estas son las que actúan sobre ciertas sustancias a las que transforman en otras isómeras. Muchas drogas o fármacos son moléculas inhibidoras. por ejemplo. Además. destinción de jeans o producción de biocombustibles. la tripsina y la pepsina que son esenciales en la digestión ya que son las que hidrolizan enlaces estéricos. estas enzimas son las que actúan sobre distintos sustratos. Estas son esenciales en ciertas cadenas metabólicas como por ejemplo la escisión enzimática de la glucosa y en la producción de ATP. Las enzimas no alteran el equilibrio de dichas reacciones ni tampoco el balance enérgico. la concentración de la propia enzima y del sustrato. son ampliamente utilizadas en diversos procesos industriales. Hidrolasas: estas enzimas actúan sobre las moléculas de protoplasma. Dentro de estas enzimas se encuentran proteínas como la quimiotripsina. Tipos de enzimas Las enzimas son las proteínas encargadas de catalizar las reacciones bioquímicas del metabolismo. tales como las de grasas. lo que significa que tienen la misma fórmula empírica pero un desarrollo diferente. y otros factores físico-químicos. entre otros grupos. Asimismo. el pH. transfiriendo glucosilo. .cabe nombrar unas moléculas sintéticas denominadas enzimas artificiales capaces de catalizar reacciones químicas como las enzimas clásicas. gran cantidad de enzimas requieren de cofactores para su actividad. que se unen a las moléculas resultantes de la ruptura de enlaces de las moléculas mencionadas.

Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado. ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (-CO-NH-) que se destruye al liberarse los aminoácidos. Debido a la dicha reacción fue que observamos que al agregar el reactivo de sulfato de cobre mas solución de proteína precipitado una coloración violeta. . Esto se da al mismo tiempo en que el ATP se degrada y libera energías que son las necesarias para que dichas moléculas puedan unirse. OBJETIVOS:   Poner de manifiesto las propiedades de las enzimas y su especialidad y desnaturalización por cambios de pH y temperatura Demostrar como la temperatura tiene efecto en la función de la enzima amilasa. pero no los aminoácidos. Quedando con el fondo del tubo una tonalidad azul cielo reacción positiva. MATERIALES:           Gradilla Tubo de ensayo Pipeta Clara de huevo Leche Papa cocida y cruda Agua oxigenada Reactivo Biuret Hígado de pollo Almidón REACCIÓN DE BIURET La producen los péptidos y las proteínas. se forma una sustancia compleja denominada Biuret.Ligasas: estas enzimas en cambio. son las que permiten que dos moléculas se unan.

Realizar la prueba del Lugol a cada tubo. la patata ha sido previamente cocida. Preparar 2 tubos de ensayo con los siguientes reactivos: TUBO 1 Amilasa (escupir un poco de saliva) 2 gotas de H2O TUBO 2 Amilasa (escupir un poco de saliva) 2 gotas de HCL 1N 2. donde descompone el H2O2 en H2O y O2. que al ser gas. 5. por tanto. indicará actividad catalasa. Agitar los tubos y dejarlos reposar 10 min para que transcurra la reacción enzimática. En uno de ellos.Precipitando a una coloración amarillenta la reacción nos torna negativa al no haber presencia de proteínas Práctica Desnaturalización a pH ácido de la amilasa Las enzimas tienen un pH óptimo de actuación. En la mesa hay dos platos con trozos de patata. Agitar los tubos y esperar 5 min. La amilasa es una de las enzimas encargadas de la digestión del almidón. Cuestiones 1. al añadir agua oxigenada a un tejido vivo. 4. 3. . Cambios de pH desnaturalizan la proteína y. la detección de desprendimiento de oxígeno gas. en solución acuosa se desprende en forma de burbujas. Método 1. inhiben la actividad enzimática. Es una enzima que se encuentra a lo largo de todo el tracto digestivo de los mamíferos. Por tanto. concretamente hidroliza enlaces 1-4 entre moléculas de aglucosa. Añadir 1 ml de solución de almidón a cada tubo. ¿En qué tubo/s da positiva la prueba del lugol?¿En cuál/es negativa? ¡Por qué? Práctica Desnaturalización de la catalasa por calor Las enzimas tienen una temperatura óptima de actuación. y que también la producen las glándulas salivares. La catalasa se encuentra en todos los tejidos vivos.

Introducir en sendos tubos de ensayo un trozo de patata de cada plato. Almidón y Leche. ¿Cuál es el plato que contiene la patata cocida? 2. Añadir 1 ml de H2O2. Cuestiones 1. .Método 1. Almidón Clara de huevo Leche  Luego a las diferentes muestras se les coloca por pequeñas cantidades en tubos de ensayos. ¿Qué indica la falta de desprendimiento de O2 al añadir H2O2 a dicha patata? Práctica N° 1  En diferentes vasos precipitados se añaden diferentes muestras: Clara de huevo. 2.

 Añadimos Biuret a cada uno de los tubos de ensayo con las diferentes muestras. .

luego de ser agita. Leche Almidón Clara de Huevo . En el primer tubo de ensayo que contenía clara de huevo se tornó de color verde luego de ser agitada fuertemente.  El segundo tubo de ensayo que contenía leche se tornó de un color cielo oscuro.  El tercer tubo que contenía almidón se tornó de color azul cielo luego de ser agitada fuertemente.

. Papa Cruda y Papa cocida.Practica N° 2  A tres tubos de ensayo se les coloca Agua oxigenada.  Luego a cada uno de los tubos de ensayo se les añade una muestra: Hígado de pollo.

 Al tercer tubo que contenía agua oxigenada se le añadió papa cocida y eta burbujea mínimamente. .  Al segundo tubo que contenía agua oxigenada se le añadió papa cruda. y esta burbujea considerablemente. Al primer tubo que contenía agua oxigena le añadimos hígado de pollo. esta burbujea al entrar en contacto directo.

 Observamos que la muestra del hígado de pollo tiene mayor burbujeo en cuanto a las dos muestras restantes al entrar en contacto con el agua oxigenada. Hígado de Pollo Papa Cocida Papa Cruda .

.  Seguidamente añadimos ácido clorhídrico o sulfúrico en los tubos de ensayos.Práctica N°3 : ácido clorhídrico o sulfúrico  A los tres tubos de ensayo se les coloca Agua oxigenada.

. Papa Cruda y Papa cocida.  Luego a cada uno de los tubos de ensayo se les añade una muestra: Hígado de pollo.

 Al primer tubo que contenía agua oxigena más ácido clorhídrico o sulfúrico le añadimos hígado de pollo.  Al segundo tubo que contenía también lo mismo que el primer tubo se le añadió un muestra de papa cruda. . En donde sucedió que se calentó y se desnaturaliza. en donde la cantidad de burbuja disminuye.

de mil llega algo de dos al estómago. en donde este es una cadena larga de glucosas. la cual apenas hace contacto con la amilasa salival. la cual entra al estómago siendo atacado por la amilasa pancreática en forma: glucosa + glucosa = maltosa. . esta inmediatamente se vuele de color negro tal como se observa en la siguiente imagen que se realizó a base de galleta soda la cual fue masticado por tres de nuestros compañeros durante media hora para juego ser depositado en un vaso precipitado. Al poner una gota de lugol de color rojo. en el tercer tubo con peróxido de sodio con papa cocida más agua oxigenada se observó qué ya no salía nada e burbujas. produce dextrina. En el cuarto experimento se realizó el reconocimiento del almidón.

. tiene un importante papel en la adquisición de tolerancia al estrés oxidativa en la respuesta adaptativa de las células La catalasa captura el agua oxigenada de que pueda escapar de la célula y lo convierte en oxigeno molecular.Cuestiones: 1 ¿cuál es el plato que contiene la patata cocida? 2 ¿Qué indica la falta de desprendimiento de oxígeno al añadir H2O2 a dicha patata? El H2O2 es catalizado enzimáticamente en organismos anaerobios por la catalasa y otras per oxidasas. La catalasa no es esencial para algunos tipos de células en condiciones normales.

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