FARMACIA Y BIOQUMICA

BIOQUMICA I

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA AMILASA SALIBAL.

I. INTRODUCCIN Los organismos vivos pueden obtener y gastar la energa ms rpidamente debido a la presencia de catalizadores biolgicos llamados enzimas. Como sucede con los catalizadores inorgnicos, las enzimas modifican la velocidad de una reaccin qumica sin afectar el equilibrio final y slo se requieren pequeas cantidades para efectuar la transformacin de un gran nmero de molculas de sustrato. Sin embargo, a diferencia de la gran mayora de catalizadores inorgnicos, las enzimas son bastantes especficas, ya que catalizan un nmero comparativamente pequeo de reacciones y, en algunos casos, pueden tener solo una reaccin. Las enzimas pueden ser descritas como catalizadores complejos de origen biolgico que tienen un alto grado de especificidad y eficiencia. Esto permite que las reacciones qumicas dentro de una clula ocurran rpidamente a travs de vas bien definidas. Sin estas protenas especializadas, la vida tal como es no podra existir. Para poder mostrar la actividad enzimtica se debe tener presente fundamentalmente que la reaccin cataltica de las enzimas es de carcter especfico, es decir, cada reaccin qumica debe ser catalizada por una determinada enzima. El reactante o sustancia qumica que reacciona para dar un producto en un sistema se denomina sustrato. Habra entonces tantos sistemas enzimticos como sustratos reaccionantes existen en un organismo vivo. Debido a que slo se necesitan muy bajas concentraciones de enzima para catalizar una reaccin dada, slo muy pocas enzimas pueden medirse directamente. La determinacin de la actividad cataltica de una enzima en un medio biolgico involucra dos aspectos: uno cualitativo y otro cuantitativo. En trminos cualitativos se debe poner de manifiesto la presencia en el medio de la enzima en estudio. Hecho esto se debe proceder a determinar la cantidad en que se halla presente. Par lo primero se recurre a la reaccin especfica por ella catalizada. En cuanto a la actividad de enzima presente, as como en la mayora de los casos es imposible determinar en trminos absolutos ( por ejemplo, miligramos o microgramos de protena enzimtica), ya que por lo general se trata de medios que contienen una mezcla compleja de diversas protenas adems de la protena en estudio. En general, la actividad de cualquier sistema enzimtico puede ser demostrada de dos maneras: 1. 2. Verificando el sustrato no transformado (sustrato residual) despus de un tiempo determinado de incubacin en condiciones especficas de pH y temperatura. Verificando los productos liberados despus de un tiempo determinado de incubacin en condiciones especficas de pH y temperatura. Q.F. FREDY MARTOS RODRGUEZ

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La finalidad del presente trabajo experimental es determinar la actividad enzimtica, utilizando la enzima amilasa salival, que tiene la capacidad de producir degradacin del almidn en maltosa (disacrido reductor) y algo de glucosa, como ejemplo de un sistema enzimtico.

II. OBJETIVOS Demostrar la actividad cataltica de la amilasa salival, determinando: La presencia de almidn no transformado (sustrato residual). Determinando la presencia de carbohidratos reductores (productos de la reaccin).

III. MATERIALES Y REACTIVOS - Solucin de almidn PH 6,0 al 1% - Amilasa salival 1% - Solucin yodada IV. DIAGRAMA EXPERIMENTAL 1. Armar el siguiente sistema: Tubo (mL) I 5 1 4 II 5 1 3 - Cloruro de sodio 0,1 M - cido clorhdrico 0,05N - Reactivo Folin Wu

Componentes Solucin de almidn 1% pH 6,0 Solucin de cloruro de sodio 0,1 M Agua destilada

- Mezclar los tubos y colocarlos al bao Mara a 37 C por 5 minutos. - Agregar 1 mL de amilasa salival 1% al tubo II. - Volverlos a colocar al bao Mara a 37 C durante 10 minutos. 2. Control de la actividad enzimtica por el sustrato residual: Inmediatamente cumplidos los 10 minutos, transferir 0,5 mL a sus correspondientes tubos del siguiente cuadro. Tubo (mL) I 5,0 0,5 0,5 II 5,0 0,5 0,5

Componentes cido clorhdrico 0,05N De los tubos I y II Solucin yodada Mezclar los tubos.

Observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color resultante.

Q.F. FREDY MARTOS RODRGUEZ

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3. Control de la actividad enzimtica por los productos formados (Folin Wu): Componentes De los tubos I y II Solucin cprica alcalina Hervir 8 minutos Luego enfriar Solucin fosfomolbdica Agua destilada Mezclar los tubos. Observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color resultante. V. RESULTADOS Tubo (mL) I 1,0 1,0 II 1,0 1,0

1,0 2,0

1,0 2,0

Q.F. FREDY MARTOS RODRGUEZ