Tincin de Gram y Morfologa Bacteriana.

Miguel ngel Ortiz Gil.

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TINCION GRAM

Bacterilogo dans Christian Gram, 1884. Tincin diferencial Se fundamenta en la morfologa celular bacteriana.

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Tcnica Gram:

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Diferenciacin de Gram positivo y Gram negativo La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, adems de dos clases de cidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmtica, se encuentra el cido lipoteicoico, y ms en la superficie, el cido teicoico que est anclado solamente en el peptidoglucano (tambin conocido como murena). Por el contrario, la capa de las Gram negativas tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoprotenas. La membrana exterior est hecha de protena, fosfolpido y lipopolisacrido.

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PARED CELULAR
Un microorganismo gram positivo debe presentar una pared celular sana. El mismo microorganismo, si sufre dao de la pared por una u otra causa, se vuelve gram negativo. Esto indica la importancia de la pared para la retencin o el escape del colorante.

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QUE SUCEDE DURANTE LA TINCION DE GRAM?

La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin, se debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgnicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este acta deshidratando los poros cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul-violcea.
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Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms comn, aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehdo, cidos y alcoholes.

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Morfologa Bacteriana
Ya hemos visto que la tincin de GRAM aporta dos ideas bsicas para la deficinin "taxonmica" de las bacterias: el color que adquieren tras la tincin y la forma que presentan las clulas bacterianas. Esta diversidad depende de que la divisin de las clulas se d a lo largo de uno, dos o tres ejes. Formas bsicas en que se puede visualizar la morfologa bacteriana en una tincin GRAM:

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Cocos
Micrococos, aparecen aislados y dispersos tras la divisin celular. Diplococos, aparecen por pares. Estreptococoss, tienden a unirse formando cadenas. Estafilococos, aparecen en grupos irregulares, a veces de gran tamao

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Bacilos
grandes variaciones morfolgicas: fusiformes, estreptobacilos, cocobacilos.

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Espirales
Utilizamos el trmino Pleomorfismo para referirnos a la adopcin de diferentes formas en una misma especie.

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Bibliografa:
MANUAL DE TCNICAS EN MICROBIOLOGA CLNICA. M. V. lvarez, E. Boquet, I. De Fez. AEFA. 1990. DIAGNSTICO Y TRATAMIENTO CLNICOS POR EL LABORATORIO. John Bernard Henry, Todd-SanfordDavidsohn. Tomo I y II. 8 Edicin. Salvat Editores. 1988. DIAGNSTICO MICROBIOLGICO. TEXTO Y ATLAS COLOR. Koneman, Allen, Dowell, Sommers. Editorial Mdica Panamericana. 2 Reimpresin. 1990.

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