TINCIÓN DE

ZHIEL-NEELSEN
BACTERIOLOGÍA CLINICA I
POR:
ANA ARMIJO
SOFÍA BECERRIL
DOCENTE: ADÁN MARTÍNEZ
Q . F. B LUIS OTONIEL GARCÍA MARIAN RAMOS
CONTRERAS FERNANDA REYES
GABRIELA SALAZAR
 INTRODUCCIÓN

El diagnóstico definitivo de las

enfermedades infecciosas causadas por
micobacterias se basa en la
demostración de su agente etiológico.
Esto se consigue, entre otras formas,
por histopatología, mediante la tinción
de los bacilos ácido alcohol resistentes
(BAAR) en los tejidos obtenidos in vivo
o en la autopsia. El nombre de este procedimiento de
microbiología hace referencia a sus autores: el
bacteriólogo Franz Ziehl y el patólogo Friedrich
Neelsen.
• Esta técnica es un tipo de coloración diferencial, lo que implica el
uso de distintos colorantes con la finalidad de crear contraste
entre las estructuras que se desean observar, diferenciar y
posteriormente identificar. 
 OBJETO DE ESTUDIO

• Aprender técnica así como el fundamento de

tinción para bacterias alcohol ácido resistentes
(BAAR).

• El uso de la técnica Ziehl Neelsen es necesario

para detectar el bacilo de Mycobacterium
tuberculosis y así ofrecer un diagnóstico certero.
 DEFINICIÓN

La tinción de Ziehl-Neelsen es
una técnica de tinción
diferencial de gran rapidez para
la identificación de bacterias
ácido-alcohol resistente (BAAR),
los cuales se denominan así
porque están rodeados de una
envoltura cérea que es
resistente a la tinción.
FUNDAMENTO
 TOMA DE MUESTRA

Las muestras que pueden ser

funcionales para esta tinción son:

*Esputo
*Lavados bronquiales
*Jugo gástrico
*Orina
*Líquidos estériles

*Las muestras deberán ser de 3 ml cada una.

*No requiere ayuno.
*Para lograr una estabilidad adecuada la muestra puede mantenerse en
refrigeración a una temperatura de cuatro grados centígrados en un
tiempo no mayor de 24 horas.
DIAGRAMA DE FLUJO/ TÉCNICA
VIDEO
MEDIOS APLICABLES PARA DIAGNOSTICO
 BACTERIAS ALCOHOL ACIDO
RESISTENTES
El numero de genero de bacterias acido-alcohol
resistentes es muy limitado :
Mycobacterium:
- Mycobacterium tuberculosis
- Mycobacterium leprae
Nocardias
 MYCOBACTERIUM
• Son bacilos finos, largos e inmóviles.
• Son resistentes a la decoloración debido a la
alta concentración de ácido mi cólico en la
pared celular.
• Por este motivo, no se las puede catalogar
dentro de la clasificación de Gram.
• Son teñidas adecuadamente con el método
de Ziehl- Neelsen.
• Son bacterias aerobias estrictas.
• Su cultivo es muy variable.
• Dentro de este género tenemos las especies
M. Tuberculosis y M. Leprae.
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
Características generales:
• También conocido como bacilo de Koch
• Son bacterias Gram positivas.
• Son aerobias estrictas.
• Son sensibles al calor, la luz solar y la luz UV.
• Poseen una multiplicación lenta (16 a 20 hs.).
• Reservorio natural: hombre.
Factores de virulencia:
• Alta concentración de lípidos en la pared
celular, lo que le confiere impermeabilidad a
agentes microbianos, resistencia a
compuestos ácidos y alcalinos y resistencia a
la lisis.
Lauberculosis (TB) es una infección bacteriana causada por un genero
llamado Mycobacterium tuberculosis. La bacteria suele atacar los pulmones,
pero puede también dañar otras partes del cuerpo. La TB se disemina a través
del aire, cuando una persona con TB pulmonar tose, estornuda o habla. Si ha
estado expuesto debería consultar a un médico para someterse a los exámenes.
Hay más probabilidades de que usted se contagie con TB si tiene un sistema
inmunitario debilitado.
 IDENTIFICACION
El cultivo puede hacerse en el medio de
Löwenstein-Jensen, que está constituido por:
• huevo (albúmina, lípidos) (coagula y le da
solidez)
• verde de malaquita (inhibe otras bacterias)
• Glicerol (fuente de carbono)
• Asparaginas (fuente de nitrógeno)

Crece muy lentamente (30 a 90 días) a 37 °C en

atmósfera con dióxido de carbono (en cultivo
crecen mejor a pesar de ser aerobio estricto),
dando colonias con aspecto de migas de pan (o
huevos de araña), secas amarillentas y rugosas.
 BASILOSCOPIA
•  Es una prueba que se utiliza en medicina para detectar la presencia
de bacilos en una muestra determinada. Se aplica principalmente para la
búsqueda del bacilo de Koch (Mycobacterium tuberculosis), agente de
la tuberculosis, en una muestra de esputo, en este caso el procedimiento se
llama baciloscopia de esputo.
El criterio a seguir en la baciloscopia es: el
número de campos varía según la cantidad
de bacilos encontrados:

1. Si no se encuentran bacilos debe

examinarse por lo menos 100 campos útiles.
2. Si se encuentran de 1 a 10 bacilos por
campo es suficiente observar 50 campos.
3. Si se encuentran más de 10 bacilos por
campo es suficiente observar 20 campos.
 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• Negativo: no se observan BAAR en 100 campos observados.
• Positivo +: se observan menos de un bacilo por campo en promedio en 100
campos observados
Positivo ++: se observan de 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50
campos observados.
• Positivo +++: Se observan más de 10 bacilos por campo en promedio en 20
campos observados.

Es necesario encontrar como mínimo 4 BAAR en la Bac para reportarlo positiva, si

se encuentran de 1 a 3 bacilos esta es la conducta a seguir:
• 1. Ampliar la lectura a 200 campos.
• 2. Si lo anterior no modifica la lectura repetir la Bac.
• 3. Si se encuentra la misma cantidad de bacilos (1 a 3) se reporta como
negativo.
 TRATAMIENTO
• La enfermedad de tuberculosis se puede tratar tomando varios
medicamentos durante un periodo de 6 a 9 meses. En la actualidad hay 10
medicamentos aprobados por la Administración de Alimentos y
Medicamentos de los EE. UU. (FDA, por sus siglas en inglés) para el
tratamiento de la tuberculosis. Entre los mas efectivos se encuentran:
• Isoniazida (INH)
• Rifampina (RIF)
• Etambutol (EMB)
• Pirazinamida (PZA)
 LIMITACIONES

*Algunos microorganismos además de las

micobacterias pueden presentar distintos
grados de ácido resistencia.

*Las micobacterias de rápido crecimiento Rhodococcus spp

pueden diferir en su capacidad de retener los
colorantes.

*No preparar extendidos demasiado gruesos ya

que puede afectar la decoloración o su
visualización.

*Algunos fármacos utilizados en el tratamiento

de la tuberculosis, hacen perder la ácido-
resistencia de los bacilos. Nocardia spp
 CONCLUSIÓN

• La tinción de Ziehl-Neelsen ultiza un contraste de colores capar de

hacer resaltar los Bacilos Alcohol- Acido Resistentes (BAAR) de color
rojo sobre un fondo azul o verde.
• El primer colorante (fucsina) se fija a la pared celular. Despues de
usara un acido que sirve para decolorar las células que no fueron
teñidas porque su pared no era lo suficientemente afín al colorante;
por lo tanto, la fuerza del decolorante ácido es capaz de eliminar el
colorante ácido.
• Las células que resisten esta decoloración se llaman ácido-resistentes.
 PREGUNTAS FRECUENTES
• ¿Por qué el colorante empleado sirve mejor en el calor?
El compuesto fenólico carbol fucsina, un colorante básico que tiene la capacidad de
interactuar con los ácidos grasos de la pared celular, la cual es de textura cerosa a
temperatura ambiente.
En presencia de calor la cera de la pared celular se derrite y las moléculas de
colorante se mueven con mayor rapidez hacia el interior.

¿De que color se observarían las esporas si no se calienta el verde de malaquita?

Trasparente porque si no se hace uso del calor, el colorante verde de malaquita no
logra penetrar en la espora y por lo tanto no la teñiría

¿Cómo interpretar los colores de la tinción?

BAAR: contiene las ceras y ácidos micólicos, no se decolora con la solución acido-
alcohol
BAANR: Se decolora con la solución A.A. por lo que se dice que no son resistentes.
• ¿Por qué la muestra clínica mas común es el esputo?
Debido a que, como se ha dicho, la tuberculosis pulmonar es la más
frecuente. Sin embargo, dado que la enfermedad puede manifestarse en
cualquier órgano, con menor frecuencia puede requerirse la investigación
de muestras muy variadas: orina, líquido cefalorraquídeo, líquido pleural, líquido
ascítico, sangre, pus de cavidades.

¿Cuáles son los reactivos empleados en esta tinción?

• Colorante primario: Se usa carbol fucsina al 0,3 % (filtrado). Este colorante
se prepara a partir de una mezcla de alcoholes: fenol en etanol (90 %) o
metanol (95 %), y en esta mezcla se disuelven 3 gramos de fucsina básica.
• Solución decolorante: En este paso se pueden emplear soluciones de ácido
alcohol (ac. Clorhídrico al 3% en etanol de 96°) o ácido sulfúrico al 25 %.
• Colorante secundario (contra-colorante): El colorante más empleado para
realizar el contraste en las muestras suele ser el azul de metileno al 0,3 %. Sin
embargo, también se pueden emplear otros, como el verde malaquita al 0,5 %.
 REFERENCIAS
• Bacteriología Medica (2009)Prescott, Harley, KleinMc Graw Hill
Interamericana, Madrid
• Biología de los microorganismos, 8va Edición (2001)Brock, T. D.Ediciones
Omega, Barcelona.
• Manual de Prácticas de Microbiologia, (2010) Vilchez Cáceda H.
• https://www.lifeder.com/tincion-ziehl-neelsen/
• https://www.christusmuguerza.com.mx/tincion-de-zieh-neelsen/
• http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5af5dc757e7
0f.pdf
• https://www.lifeder.com/tincion-ziehl-neelsen/
• https://es.scribd.com/doc/51863770/PRACTICA-4-ZHIEL-NEELSEN