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4. ESPECTROFOTMETRO UV-VISIBLE Actualmente existen espectrofotmetros de un solo haz y doble haz, siendo estos ltimos los ms utilizados. Un espectrofotmetro UV-VIS de doble haz contiene una fuente emisora de radiacin ultravioleta que pasa a travs de un monocromador que selecciona una longitud de onda determinada que. a continuacin, es dividida en dos haces. Una pasa a travs de una disolucin que contiene el compuesto orgnico (haz de la muestra) y la otra pasa a travs de la celda de referencia que contiene nicamente el disolvente (haz de referencia). El detector mide de forma continua la relacin de intensidad entre el haz de luz que atraviesa la celda de referencia y (IR) y el haz de luz que atraviesa la celda que contiene el compuesto orgnico (IM). Un registrador traza una grfica (espectro) de la absorbancia de la muestra frente a la longitud de onda y, por tanto, de un espectro UV se extrae directamente el valor de la longitud de onda mxima (max) y de la absorbancia.
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Presentaciones Comerciales Metildopa Aldomet; Dopagrand; Dopatral; M. Finadiet; M. Fabra. Laboratorio Merck Costos: 1g U$S 13.40 , 5g U$S 42.90
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II. OBJETIVO GENERAL Realizar el estudio de anlisis va grupo funcional por espectroscopa ultravioleta para proponer un mtodo analtico para la cuantificacin de metildopa en tabletas de 100mg. 2.1 OBJETIVOS ESPECFICOS 1. Realizar los siguientes parmetros de validacin; especificidad, linealidad del sistema y mtodo, exactitud y precisin para poder confirmar que el mtodo propuesto es robusto.
III. MATERIAL Matraces aforados 50 ml. Pipetas volumtricas 1 ml. Soporte Universal. Embudo de vidrio talle corto. Anillo metlico. Vasos de precipitados 250 ml. Tubos de ensaye. Gradilla. Probeta 250 ml. Varilla de vidrio. Goteros.
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V. REACTIVOS Metildopa. Helmcell. Estearato de magnesio. cido clorhdrico concentrado. VI. PREPARACIN DE SOLUCIONES 1. cido clorhdrico 0.1 N 1L. Adicionar a un matraz aforado con agua destilada 8.5 ml de cido clorhdrico concentrado, aforar con agua destilada y agitar.
VII. PROPUESTA DE FORMULACIN METILDOPA TABLETAS Una tableta contiene: COMPONENTE Metildopa Helmcell Estereato de magnesio Total CANTIDAD 100 mg 99 mg 1 mg 200mg PORCENTAJE 50% 49.5% 0.5% 100%
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Pesar 2.475g de Helmcel y 25mg de estearato de magnesio, pasarlos a una bolsa de polietileno chica y mezclar homogneamente de forma circular. IX. SELECCIN DE LOS MTODOS ANALTICOS A DESARROLLAR Primeramente la metildopa es un aminocido, por lo que se podra facilitar la cuantificacin por adicin de ninhidrina, que da una coloracin prpura en solucin en cual podra medirse en lo que refiere su intensidad por espectrofotometra visible en el cual la intensidad de coloracin de la solucin es directamente proporcional a la concentracin inicial de metildopa. La reaccin general entre la metildopa y la ninhidrina sera la siguiente:
Como segunda opcin se tiene al grupo amino de la metildopa, el cual puede hacerse reaccionar con cido perclrico en medio no acuoso, en el cual el cido le transfiere un protn de acuerdo a la siguiente reaccin:
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X. METODOLOGA En el transcurso de las realizacin de los parmetros de la validacin se encontr que no era tan fcil solubilizar a la metildopa en el HCl 0.1 N por lo que en el experimento #1 se agit cada muestra por 10 minutos con agitacin manual para solubilizar a le metildopa y en el experimento #2 se redujo el tiempo de agitacin a 5 minutos. Para cada experimento se sigui la misma metodologa, solo que en el experimento #2 no se realiz el parmetro de especificidad, ya que los que nos importaba en era ver que tanto afectaba el tiempo de agitacin en las absorbancias obtenidas de los parmetros realizados.
A) SISTEMA DE DILUCIONES Para cada uno de los parmetros de validacin realizados se seguir el siguiente sistema de diluciones.
)(
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Preparar las soluciones de placebo, API y API+placebo siguiendo el mismo tratamiento para cada uno
Comparar los espectros obtenidos e identificar la longitud de onda mxima de absorcin de la metildopa.
2. Linealidad A. SISTEMA Construir la curva con tres niveles de a 80mg, 100mg y 120mg con tres repeticiones cada una y siguiendo el esquema de diluciones para cada nivel. Se lee la absorbancia de cada muestra a 279.5nm.
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B. METODO Preparar tres niveles de placebos cargados a 80%, 100% y 120% con 3 repeticiones para cada nivel. De tal modo que se prepara el primer nivel con 80mg de metildopa y 100mg de placebo, el segundo nivel con 100mg de metildopa y 100mg de placebo y el tercer nivel con 120mg de metildopa y 100mg de placebo. Se sigue el esquema de diluciones para cada nivel y se lee la absorbancia a 279.5nm. Diagrama de flujo.
Preparar tres niveles detres muestras de placebos cargados a 80%, 100% y120%.
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Seguir el procedimiento de valoracin para cada muestra y leer la abosrbancia a 279.5 nm.
4. Repetibilidad Preparar seis muestras al 100%. De modo que cada muestra conste de 100mg de metildopa. Para cada muestra seguir el sistema de diluciones y leer a 279.5 nm. Diagrama de flujo
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XI. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES ACTIVIDAD Seleccin del mtodo a utilizar Titulacin en medio no acuoso Rx Ninhidrina 10-Oct X 17-Oct FECHA 24-Oct 31-Oct 7-Nov 14-Nov
X X
Espectroscopa UV Experimento #1* Especificidad Linealidad sistema Linealidad del mtodo Exactitud Repetibilidad Espectroscopa UV Experimento #2** Linealidad sistema Linealidad del mtodo Exactitud Repetibilidad * Agitacin de la muestra por 10 minutos * Agitacin de la muestra por 5 minutos.
X X X X X X X X X
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Placebo No 1
Placebo No 2
Placebo No 3
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ESPECTROS APIS
API No 1
API No 2
API No 3
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ESPECTROS API+PLACEBO
API+PLACEBO No 1
API+PLACEBO No 2
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PARMETRO
ESTADGRAFO DE CONTRASTE
RESULTADO
MTODO LINEALIDAD r20.98 C.V.1.5% b0 m1 EXACTITUD C.V.2.0% =100 REPETIBILIDAD SISTEMA LINEALIDAD r20.98 C.V.1.5% b0 m1 r2=0.9984341 CV= b(0.5014<2.3646) m(5871>2.3646) 0.9984341 0.00824958% 0.0008 0.01125 C.V.2.0% r2= CV= b(1.1598<2.3646) m(07887<2.3646) CV= (1.689<2.5706) CV= 0.99354858 1.47412303 3.4763 0.97367661 0.01092104% =100 1.90787294%
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Experimento #2 * Agitacin de la muestra por 5 minutos. A. Linealidad del sistema CANTIDAD ADICIONADA 80,2 80,3 79,8 100,1 99,8 99,4 120,1 119,9 119,8 ABSORBANCIA 0,362 0,345 0,324 0,456 0,445 0,441 0,523 0,544 0,566
B. Linealidad del mtodo CANTIDAD ADICIONADA 80,6 80,5 80,1 100,2 100,5 100,7 120,3 120,6 120,7 ABSORBANCIA 0,372 0,367 0,365 0,437 0,445 0,44 0,537 0,551 0,547
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C. Exactitud CANTIDAD ADICIONADA 99,7 99 99,4 99,7 100 100,2 D. Repetibilidad CANTIDAD ADICIONADA 100,2 99,3 99,5 100,1 99,5 99,6 ABSORBANCIA 0,47 0,459 0,431 0,44 0,465 0,443 ABSORBANCIA 0,45 0,454 0,46 0,453 0,437 0,441
XIII. ANLISIS DE RESULTADOS En un principio se quera realizar la cuantificacin de la metildopa con ninhidrina llevando a cabo esta reaccin colorimtrica y determinando su absorbancia en el espectrofotmetro visible, peor al momento de efectuarla determinacin a microescala se obtuvo que la coloracin prpura de la reaccin no era estable, regresando despus de unos segundos al color transparente inicial de la solucin, siendo este mtodo de anlisis incuantificable por espectroscopa visible. En el caso de la titulacin con cido perclrico en medio no acuoso segn la FEUM (10 edicin) se necesitaban 50 ml de acetonitrilo como disolvente neutro
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XIV. CONCLUSIN Se pudo proponer un mtodo analtico robusto para la cuantificacin de metildopa tabletas y metildopa como materia prima comprobando que el mtodo es especfico, presenta linealidad es preciso y repetible.
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XV. ANEXOS (CLCULOS) ESTNDAR PARA TODOS LOS CALCULOS Estndar mg Absorbancia 99.9 0.469
0.377 80.3837953 80.3034115 80.8836003 0.385 82.0895522 82.0074627 0.377 80.3837953 80.3034115 80.688865 80.980968
0.474 101.066098 100.965032 100.746603 0.463 98.7206823 98.6219616 100.746603 0.479 102.132196 102.030064 100.259765 0.567 120.895522 120.774627 120.317503 0.555 118.336887 118.21855 119.928033 0.572 121.96162 121.839659 120.512239
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CV
1.47412303% Calculo de Andeva H0: y no depende linealmente de x Ha : y depende linealmente de x F0.975,7 8.07 SC MC Fcalc
gl 1 7
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X x x2 Sx S2X
Y Y2 Sy S2y
Evaluacin ordenada al origen H0: B0=0 Ha: B00 tcalc 1.159827858 2.039137102 2.3646 1.15982786 2.0391371
Evaluacin de la pendiente H0:M0=1 Ha:M01 tcalc -0.8876527 t0.975, 7 2.3646 -0.8876527<2.3646 H0 se acepta Intervalo de confianza 0.90355428 m 1.04379895
t0.975, 7
1.1598<2.3646
H0 se acepta
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Ex 1 Ex 2 Ex 3 Ex 4 Ex 5 Ex 6
n S CV
1.6890<2.5706 H0 se acepta
REPETIBILIDAD Cantidad adicionada 99.2 100 99.9 100.3 99.8 99.9 A 0.47 0.464 0.485 0.489 0.485 0.481 100.21322 98.9339019 103.411514 104.264392 103.411514 102.558635 Cantidad recuperada 100.113006 98.834968 103.308102 104.160128 103.308102 102.456077 % recobro 100.920369 98.834968 103.411514 103.848582 103.515133 102.558635
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n s 2 CV
H0: 0=2% Ha:0 2% calc 0.975,5 0.025,5 6 12.8325 0.8312 H0: se acepta
# 80% 1 2 3 1 2 3 1 2 3
100%
120%
Concentracin g/ml 32 32 32 40 40 40 48 48 48
CV
0.008249579%
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H0: y no depende linealmente de x Ha :y depende linealmente de X Fuente de variacin Regresin Error regresion F0.975,7 gl 1 SC MC Fcalc
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y y2 Sy s2y
Evaluacin ordenada al origen H0:B0=0 Ha:B00 tcalc 0.501426536 t0.975,7 2.3646 0.5014<2.3646 H0 se acepta Intervalo de confianza -0.015338 b 0.01693833
Evaluacin de la pendiente H0:M0=1 Ha:M01 Tcalc 5871.65224 t0.975,7 2.3646 5871.65>2.3649 H0 se rechaza Intervalo de confianza 0.01085182 m 0.011648184
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XVI. BIBLIOGRAFA 1. 2. 3. 4. Farmacopea de los Estados Unido Mexicanos, 10 Ed. Mxico (2010). Connors, Kenneth A. 1981. Curso de anlisis farmacutico ensayo del medicamento. Ed. Reverte. Guideline for Industry: Tex on validation of Analytical Procedures. ICH-Q2A, March 1995. 5. Garca A, Soberon E, Cortes M. Gua de validacin de mtodos analticos. Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos. Mxico, 2002. 6. Quintana C y Olvera E. Manual de Validacin de Mtodos Analticos. Universidad Nacional Autnoma de Mxico, Facultad de Estudios Superiores Zaragoza. Mxico; 2004.
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