PRACTICAS DE BIOLOGA IDENTIFICACIN DE BIOMOLECULAS

INTRODUCCIN Dentro de las caractersticas emergentes de los seres vivos encontramos la organizacin y complejidad de su estructura, lo que les permite cumplir con diferentes procesos metablicos para fijar o liberar energa necesaria para la vida. El metabolismo es la suma de todas las reacciones qumicas necesarias para satisfacer las necesidades primarias. Dentro del metabolismo se encuentran los procesos del anabolismo (formacin de sustancias) y el catabolismo (degradacin de sustancias). Las sustancias involucradas en estos procesos son comnmente conocidas como biomolculas. Dentro de las biomolculas encontramos las inorgnicas y las orgnicas; Las inorgnicas son aquellas que no son formadas por los seres vivos, entre estas se encuentran el agua, gases y sales y por el contrario las orgnicas son las elaboradas en los diferentes procesos fisiolgicos. El agua es la sustancia ms abundante en la clula viva y llega a representar ms del 70% de su peso. Esta molcula es de gran importancia pues la mayor parte de las reacciones intracelulares se llevan a cabo en ambiente acuoso y todos los organismos se han diseado alrededor de las propiedades del agua, tales como su carcter polar, su capacidad para formar enlaces de hidrgeno y su alta tensin superficial (Gonzlez et. al 2006). La clula, adems de hacer uso del agua, utiliza varios elementos en la formacin de las biomoleculas: macroelementos, microelementos y oligoelementos. Los macroelementos son: Carbono, Hidrogeno, Oxigeno y Nitrgeno; el principal es el carbono, que debido a su propiedad tetravalente, es decir la facilidad de formar enlaces covalentes sencillos y dobles, forma cerca de medio milln de compuestos orgnicos. Los macroelementos representan hasta un 95% del peso seco de los seres vivos. Los microelementos son: Ca, P, K, S, Cl, Na y Mg, estos hacen parte de entre el 0,3 y el 5% del peso seco y suponen casi el 10% de la biomasa. Los oligoelementos o trazas (B, F, Fe, Co, Cu, Mn, Zn, Mo y I, entre otros) estn presentes en cantidades muy pequeas (Conrado, 2010). Las biomolculas orgnicas son los carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos, cada uno de ellos con caractersticas definidas y funciones especificas, propiedades que adquieren por la variedad de grupos funcionales que poseen. La biomolculas al romperse liberan energa la cual es utilizada en el proceso del metabolismo para el funcionamiento celular. Las biomolculas estn presentes en una gran variedad de alimentos que a diario consumimos en nuestra alimentacin. Carbohidratos Los carbohidratos son las molculas de obtencin de energa rpida, se conocen con el nombre de glcidos o azucares y generalmente son de origen vegetal, su forma de reserva en los organismos es la glucosa presente en las clulas vegetales y el glucgeno en las clulas animales. 1

La clasificacin de los carbohidratos depende de la complejidad en sus estructuras qumicas, los hay sencillos como los monosacridos y disacridos que se diferencian en el nmero de carbonos presentes, los monosacridos por su parte poseen mximo 7 carbonos, y los disacridos son la unin de dos monosacridos; los hay tambin complejos como los polisacridos almidn, glucgeno y celulosa que presentan una cadena ramificada de unidades de glucosa. En contraste con los monosacridos, los polisacridos poseen miles de unidades de glucosa. Algunos ejemplos de monosacridos son la glucosa, hexosa (elemento compuesto por 6 carbonos) que constituye la primera unidad de energa y la ribosa y desoxirribosa, pentosas que hacen parte fundamental del material gentico ADN Y ARN. Dentro de los disacridos estn la sacarosa (azcar de mesa), la lactosa y la maltosa. Lpidos Los lpidos son molculas formadas principalmente por cadenas lineales de Carbono e Hidrogeno y tienen como caracterstica principal el ser insolubles en agua, su clasificacin general se basa en la consistencia a temperatura ambiente, de esta manera estn las grasas que son slidas y los aceites que son lquidos. De la misma manera que la glucosa es la unidad fundamental de los carbohidratos, en algunos lpidos la unidad fundamental son cidos grasos unidos a un glicerol. Los lpidos son la segunda fuente de energa, y sus funciones son variadas, se encuentran como barrera fsica en plantas y animales, son los responsables de que haya un equilibrio hdrico y trmico, estn presentes como parte estructural de las membranas celulares y son precursores de hormonas y vitaminas liposolubles. Algunos ejemplos son los triglicridos, fosfolpidos, ceramidas, colesterol, testosterona y vitaminas A, D, K y E. Protenas Las protenas son molculas de mayor tamao formadas por aminocidos, estos poseen en su estructura qumica un grupo amino y uno carboxilo unidos mediante un enlace peptdico; la organizacin de los aminocidos puede ser sencilla o formar estructuras mas complejas; toda protena en su inicio consta de una secuencia de aminocidos dispuestos en forma lineal y va mostrando una mayor complejidad al encontrar plegamientos continuos de los aminocidos formando estructuras tridimensionales conformadas por varias subunidades como es el caso de las enzimas. La clasificacin de las protenas puede hacerse desde varios puntos de vista, estructural, morfolgica, por su composicin o funcin biolgica; todas las protenas independientemente de su clasificacin son indispensables para los seres vivos; algunas de ellas hacen parte estructural de los tejidos, otras como la hemoglobina y mioglobulina son protenas que participan en el transporte de oxgeno en sangre y en msculo respectivamente, de igual manera existen protenas especficas para el transporte de electrones en mitocondrias y cloroplastos, y las hay con funcin de catalizadores orgnicos , las cuales se conocen comnmente como enzimas. cidos nuclcos La cuarta y ltima biomolcula son los cidos nuclecos, stos tienen como caracterstica principal el ser los portadores de la informacin gentica y no ser productores de energa. El cido nucleco conocido como ADN (cido 2

DesoxirriboNucleico) es el encargado de transmitir los rasgos genticos de padres a hijos, permitiendo a los organismos su permanencia en el tiempo y el espacio. El ADN consta de dos hebras antiparalelas constituidas por nucletidos que estn formados a su vez por un azcar pentosa, un grupo fosfato y las bases nitrogenadas Adenina, Timina, Citosina y Guanina. Por su parte el ARN (Acido RiboNucleico) es quien colabora con el proceso de lectura de la informacin gentica para el proceso de la sntesis de protenas. Su principal diferencia con respecto al ADN es que consta nicamente de una hebra y que reemplaza la base nitrogenada Timina por otra conocida como Uracilo. Identificacin de biomolculas En el estudio de las biomolculas existen diferentes pruebas qumicas que permiten determinar su presencia (pruebas cualitativas, basndose principalmente en sus propiedades fisico-qumicas, como por ejemplo las pruebas colorimtricas. Carbohidratos Dentro de las pruebas para identificar carbohidratos, esta la prueba de Fehling que determina la presencia de azucares reductores, mediante una reaccin redox llevada a cabo entre ellos y el sulfato de Cobre; la presencia del azcar reductor se confirma por la aparicin de un color anaranjado intenso. La prueba con lugol es utilizada en la determinacin de polisacridos, los cuales toman una coloracin azul-violeta en presencia del Yodo. Protenas La prueba de Biuret es utilizada en la determinacin de protenas, en ella se utiliza el reactivo Biuret, de color azul, que en presencia de enlaces peptdicos cambia a una coloracin violeta. La reaccin Xantoprotica permite evidenciar la presencia de protena de una forma indirecta, pues las protenas al desnaturalizarse, es decir, perder su estructura cuaternaria y terciaria precipitan en forma de un coloide fcilmente visible, para esta prueba es usado el acido ntrico concentrado. Lpidos La determinacin de lpidos se realiza mediante la prueba de Sudan III, que al igual de la de polisacridos con lugol no se trata de una reaccin qumica sino de afinidad por los grupos de cidos grasos. Su coloracin positiva se torna a un color naranja-rojizo.

PREGUNTA DE INVESTIGACIN Se pueden encontrar en los alimentos carbohidratos, lpidos y protenas? HIPTESIS En los alimentos se encuentran presentes los carbohidratos, los lpidos y las protenas. OBJETIVOS General Determinar de forma cualitativa la presencia de biomolculas en diferentes alimentos. Especficos - Identificar la presencia de carbohidratos, lpidos y protenas en alimentos de origen vegetal y animal. -Comprender los procesos qumicos que se llevan a cabo en cada uno de las pruebas.

VARIABLES Cambio en la coloracin de las muestras obtenidas de diferentes alimentos, despus de aplicar pruebas qumicas especficas para la identificacin de biomolculas. PREGUNTAS QUE DEBEN RESOLVERSE ANTES DE LA REALIZACIN DEL LABORATORIO - Indague sobre los diferentes mtodos por los cuales se puede evidenciar la presencia de las diferentes biomolculas en los alimentos. - Revise los fundamentos de cada uno de los mtodos, propuestos en esta gua, para la identificacin de biomolculas en alimentos de origen vegetal y animal. MATERIALES Grupo de estudiantes: - Material orgnico: manzana, naranja, papa, pan, huevo, leche, aceite. - Lpiz marcador o cinta de enmascarar. - Toallas de papel - Gradilla para tubos - Pinzas para tubos - Pipeteadores. - 13 Tubos de ensayo - Grupo general - vasos de precipitado de 50 y 100 ml - vasos de 250 ml - pipetas de 5 mililitros - pipetas Pasteur plsticas - cuchillos Equipos - Bao Mara a 80 C Reactivos - Reactivo de Fehling A y Fehling B - Lugol - Biuret - 30 ml Acido ntrico concentrado - 50 ml Hidrxido de sodio 30% - Sudan III - 50 ml Solucin de Glucosa 1% - 50 ml Solucin de albmina 10% - 50 ml Solucin de almidn 20% - cido olico

METODOLOGIA Los estudiantes deben llevar al laboratorio y preparar las diferentes muestras sugeridas por el profesor de acuerdo a las tablas 1 y 2. Pueden utilizarse alimentos diferentes.

Cada grupo procesar una serie completa de tubos con las diferentes muestras y controles y realizar la prueba asignadas para la identificacin de las biomolculas presentes en cada alimento. Con el propsito de obtener replicas por lo menos dos grupos realizaran la misma prueba; esta distribucin se consignar en la tabla 3, en la cual adems, sern consignados los resultados de los grupos para su posterior anlisis y discusin. Tabla 1. Asignacin de preparacin de muestras por grupo.
Grupo 1 Papa Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Pan Grupo 5 Leche Grupo 6 Huevo Grupo 7 Aceite vegetal

Manzana Naranja

Preparacin de muestras Rotular los vasos de precipitado para cada muestra a procesar. Papa y manzana Retirar la corteza del alimento, partir en cuadrados y macerar en el mortero agregando agua en pequeas cantidades, cuando se encuentre una masa homognea filtrarla por medio de gasa sobre un vaso de precipitado de 100 ml. Pan Disgregar el pan, colocarlo en vaso de precipitado de 100 ml y humedecerlo de manera que quede como una masa suave y homognea. Naranja Cortar, exprimir y filtrar el jugo de naranja; colocarlo en vaso de precipitado de 50 ml. Huevo Separar con cuidado la clara de la yema. La clara debe diluirse en 20-30 ml de suero fisiolgico o agua, homogenizar y colocarlo en vaso de precipitado de 50 o 100 ml. Leche y aceite vegetal La leche y aceite vegetal deben de colocarse sin ningn tratamiento dentro de vasos de precipitado de de 50 ml. Las muestras preparadas deben colocarse sobre el mismo mesn, una seguida de otra con su respectiva pipeta, con el fin de evitar contaminacin y en ningn momento deben ser retiradas del sitio. Identificacin de Biomolculas Cada grupo debe rotular los tubos con el nombre de las diferentes muestras que se van a utilizar para la identificacin de las biomolculas como se indica en la tabla 2. Debe homogenizarse cada muestra antes de proceder a medir la cantidad requerida para la prueba. Control negativo para todas las pruebas: agua Controles positivos: - azucares reductores: glucosa 1%. 5

- polisacridos: almidn 20% - protenas: albmina al 10%. - grasas: cido oleico. Tabla 2. Distribucin de las muestras y controles en los tubos de ensayo para cada grupo de trabajo.
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6 Tubo 7 Tubo 8 Tubo 9 Tubo 10 Tubo 11 Tubo 12 Tubo 13

Papa

Manzana

Naranja

Pan

Clara huevo

Yema huevo

leche

Aceite vegetal

Agua Glucosa (Control 1% negativo)

Almidn Albmina 20% 10%

cido Oleico

Carbohidratos Azucares reductores - Aadir 2 ml de cada una de las muestras en los tubos rotulados del 1 al 11. - Agregar 1 ml de Fehling A e inmediatamente agregar 1 ml de Fehling B. - Homogenizar la muestra. - Llevar a bao Mara de 80 C de 3 a 5 min. - Observar cambio de coloracin en el precipitado (prueba positiva= anaranjado intenso). Polisacaridos - Aadir 2 ml de cada una de las muestras en los tubos rotulados del 1 al 11. - Agregar 2-5 gotas de lugol. - Mezclar fuertemente hasta homogenizar la muestra. - Observar cambio de coloracin (prueba positiva= color morado oscuro o violeta).

Protenas Biuret - Aadir 2 ml de cada una de las muestras en los tubos rotulados del 1 al 12. - Agregar 2 ml de Biuret. - Agitar suavemente en forma de 8, dejar en reposo. - Observar cambio de coloracin a los 5 min. - Observar cambio de coloracin (prueba positiva= color morado). Reaccin Xantoproteica - Aadir 2 ml de cada una de las muestras en los tubos rotulados del 1 al 8 y 12. - Agregar 1 ml de cido ntrico concentrado. - La presencia de precipitado (amarillo) indica que la prueba es positiva.

Lpidos - Aadir 2 ml de cada una de las muestras en los tubos rotulados del 1 al 8 y 13 - Agregar 2 ml de agua y dejar en reposa hasta que se formen dos fases. - Aadir de 3-5 gotas de Sudan III y agitar. - Dejar en reposo y observar cambio de coloracin entre 2 a 5 min (prueba positiva= color naranja). 6

BIBLIOGRAFA Universidad de Cordoba. Conrado, M.V. 2010. Identificacin de algunos grupos funcionales orgnicos de inters bioqumico. Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular, Campus Universitario de Rabanale. Cordoba. Obtenido el 10 de febrero de 2010 en http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biolmol/pdfs/19%20GRUPOS%20FUNCIONALES.pdf. Gonzlez, T., Perea, M., Campos, H., Cogua, J. 2006. Los Seres Vivos. Morfologa, fisiologa, gentica, ecologa y Biotecnologa. Bogot: Universidad Nacional de Colombia. Facultad de Ciencias. Departamento de Biologa. Pag 26.

Guia elaborada por Janeth Camacho Docente de ctedra. Departamento de Ciencias Bsicas

Tabla 3. Registro de resultados obtenidos en el laboratorio

Respuesta de la muestra ( + / - ) 1 n (Grupo) 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

Prueba

extracto extracto jugo papa manzana naranja

pan

clara de yema de aceite huevo huevo leche vegetal

agua

glucosa almidn albumina

cido oleico

Carbohidratos (Fehling) Total positivos (+)

Carbohidratos (lugol) Total positivos (+) Protenas (reaccin xantoprotica) Total positivos (+)

Protenas (Biuret) Total positivos (+)

Lpidos (Sudan III) Total positivos (+)