Amebas de vida Libre: Patgenos emergentes Queratitis por Acanthamoeba

Dr Jacob Lorenzo Morales Investigador Ramn y Cajal IUETSPC-ULL

1 doctorando YO 1 colaboracin nacional, 1 internacional

 Protozoo de vida libre.

Parsito emergente (CDC).

Introduccin

Organismo anfizoico. Ciclo de vida.

Trofozoito. Quiste.

Clasificacin:
Anlisis de la secuencia de ssurRNA (Booton et al., 2002). 18 Genotipos:
T1-T17: T1, T3, T4, T11, T17, T18

Introduccin Epidemiologa
Infecciones sistmicas
lceras cutneas. Infecciones nasofarngeas. Encefalitis Granulomatosa Amebiana. Asociadas a fenmenos de inmunosupresin
Steinberg et al., 2002

(A) Marciano-Cabral y Cabral, 2003; (B) Visvesvara, 2007

Introduccin Epidemiologa
Queratitis por Acanthamoeba
Infeccin invasiva de la crnea. Sntomas iniciales inespecficos. Incidencia en aumento.

Lorenzo-Morales et al., 2011

Principal grupo de riesgo: usuarios de lentes de contacto

Diagnstico y Tratamiento
Tratamiento ?

Diagnstico complejo Requiere alta experiencia

No existen soluciones de mantenimiento ni terapias totalmente efectivas en el mercado (NI PREVENCIN NI TRATAMIENTO) Nmero de casos de queratitis por Acanthamoeba aumenta cada ao a nivel mundial Alto nmero de usuarios de lentes de contacto Aparicin de cepas resistentes a tratamientos existentes

El Problema y la solucin

 Terapia

NUESTRAS INVESTIGACIONES
Quimioterapias productos en el mercado y nuevas molculas Terapia molecular siRNA Combinacin de ambas bsqueda de nuevas dianas

Investigacin translacional ULL-HRYC

 Proteasas extracelulares Degradar capas crnea Bloqueo no permite entrada amebas Impide desenquistamiento

TERAPIA MOLECULAR

ENTRADA A HOSPEDADOR BLOQUEADA

CONTROL RNAi +

QUISTES

Protist Information Server

CONTROL-RNAi
RNAi

CONTROL

A. RNAi 48 hrs B. RNAi 72 hrs

C. Control 48 hrs D. Control 72 hrs

SILENCIAMIENTO DE LA GLUCGENO FOSFORILASA IMPIDE FORMACIN QUISTES MADUROS

 Combinacin de ambos elimina a las amebas en menos de 48 h Problemas de citotoxicidad a las 48 h

siRNA Acanthamoeba

Tratamientos alto coste Alternativas????

ISCOMs (Immune Stimulating COMplex)

ISCOM DISEADOS
siRNAs

Fusin siRNAs - anti-Acanthamoeba (anticuerpos)

Citotoxicidad ISCOMs-siRNA-Ab
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 SP/GP GP 24h SP 24h SP/GP GP 48h SP 48h Tritn 24h 48h

Macrophages HeLa U205

CONCLUSIONES ISCOM
Toxicidad se ve disminuida con el empleo de ISCOM ISCOM-AB-siRNAs FUTURA TERAPIA???? Necesidad modelo in vivo

Queratitis por Acanthamoeba: laboratorio y clnica codo con codo

From bench to bedsite

Medicina translacional Los resultados del laboratorio son utilizados de manera directa para poner en prctica nuevas formas de tratamiento a pacientes. FROM BENCH TO BEDSITE AND BACK TO THE BENCH. FROM BEDSITE TO BENCH AND BACK TO BEDSITE.

Nuestras aportaciones

Existen nuevos serotipos de queratitis por Acanthamoeba Genotipo T11 Genotipo T11
Lorenzo-Morales et al. Acanthamoeba keratitis due to genotype T11 in a rigid gas permeable contact lens wearer in Spain. Acanthamoeba keratitis due to genotype T11 in a rigid gas permeable contact lens wearer in Spain. Contact Lens Anterior Eye April 2011.

Existen nuevos gneros de amebas oculares que pueden ser ms frecuentes de lo que se han reportado Vahlkampfia
Co-isolation of Vahlkampfia and Acanthamoeba in an Acanthamoeba-like keratitis in a spanish population. Cornea (F.I= 1.762), Epub Aug 2012.

Hay nuevas formas clnicas de la enfermedad : 1) Infeccin post LASIK tardia

Arnalich-Montiel et al. Mixed Acanthamoeba and multidrug resistant Achromobacter xyloxidans in late-onset keratitis after laser in situ keratomileusis. Journal of Cataract and Refractive Surgery, (F.I=2.942) 2012.

2)Difusin extracorneal
Arnalich-Montiel et al. Extracorneal amoebic spread in Acanthamoeba keratitis. Cornea 2013 (F.I.= 2.902)

Nuevos protocolos diagnsticos y de tratamiento seriada de humor acuoso y uso de voriconazol intraocular

Colaboracin clnico-parasitlogo

Monitorizacin

Arnalich-Montiel et al. Successful customized voriconazole therapy for intraocular dissemination of Acanthamoeba. Case report and review of literature. Archives of Ophthalmology.130 - 2,pp. 1474 - 14752 (F.I= 3,711)

Determinacin de sensibilidad a tratamientos alternativos Moxifloxacino y Voriconazol

Martn-Navarro et al. In vitro evaluation of moxifloxacin 0.5% and voriconazole 1% eyedrops against clinical strains of Acanthamoeba. Graefess Archives for Clinical and Experimental Ophtalmology 2013 (F.I= 2,170)

 Constancia y excelencia si no empujamos y somos sobresalientes no nos financian!!. S podemos, aunque la financiacin falle podemosmecenas, empresa privada Comunicar los resultados (visibilidad)
Reuniones Cientficas Prensa y TV Local y Nacional Hola!, Pronto, lo que sea

Jvenes Investigadores

3 doctorandos 1 Ramn y Cajal 1 Postdoct 2 Prof. TU

5 col. Nacionales Int: Uk, Alemania, Austria, Jamaica, Tnez, Irn , Per, US, Mxico y Hasta 26 centros int. diferentes

COMBINACIN DE TERAPIA GNICA Y QUIMIOTERAPIAS PARA BSQUEDA DE NUEVAS DIANAS: Nuevas terapias frente a Acanthamoeba Dra. Carmen M Martn-Navarro

Dr Francisco Arnalich-Montiel

Agradecimientos

Free-Living Amoebae Team