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PAPEL DEL LABORATORIO EN EL DIAGNOSTICO

DE LA TUBERCULOSIS PULMONAR

Med. Esther Karina Marca Pavio


PERÚ: TUBERCULOSIS 2014
◦ Población: 30’814,175 hab.
◦ Densidad poblacional: 23.9 hab. x
km2
◦ 25 Regiones geografías
◦ Morbilidad de casos de TB: 30,929
◦ Casos nuevos de TB*: 26,966
◦ Casos nuevos de TBP FP*: 16,870
◦ Casos TB-MDR*: 1,296
◦ Casos TB-XDR*: 91
◦ 59% de casos de TB, 72% de TB-
MDR y 87% TB-XDR notificados en
Lima Metropolitana y Callao.
TENDENCIA DE CASOS MDR Y XDR. PERÚ. 1997 – 2014*

1400
1,296

1200

1000
NÚMERO DE CASOS

800

XDR
600

400

200
91

0
1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014*
* Información preliminar
Fuente: ESNPCT /DGSP /MINSA /PERU
Fecha de Elaboración.: 17-MAR-2015
EL DIAGNOSTICO DE LA
TUBERCULOSISS
◦ Se establece con el aislamiento se establece definitivamente mediante
el aislamiento de M. tuberculosis de una secreción corporal (por ejemplo,
cultivo de esputo, lavado broncoalveolar o líquido pleural) o tejido
(biopsia pleural o biopsia pulmonar).
◦ Otras herramientas de diagnóstico:
◦ Baciloscopia
◦ Ampliación de ácidos nucleicos
◦ Estudios radiográficos
◦ PPD
◦ Interferón gamma
Diagnostico de tuberculosis latente
EN QUIENES REALIZAR
Según OMS la búsqueda investigación para tuberculosis
latentes se debe realizar en VIH, contactos de adultos y
niños de casos de TB pulmonar, aquellos con tratamiento
de factor de necrosis tumoral (TNF), en diálisis,
pacientes que se preparan para un trasplante de órganos
o hematológicos, y pacientes con silicosis.
Diagnostico de tuberculosis latente
◦ INTERFERON GAMMA:
◦ complementa el diagnóstico de infección latente por tuberculosis e incrementar
la sensibilidad y especificidad, al cuantificar el interferón-gamma producido por
linfocitos-T sensibilizados en respuesta al contacto con antígenos específicos de
Mycobacterium tuberculosis
◦ Se requier sangre venosa en volumen 3 ml ( heparinizada)
◦ QuantiFERON-TB Gold In-Tube (QTL-GIT)
◦ Quantiferon-TB Gold de segunda generación (QFT-G)
◦ El ensayo T-SPOT.TB
◦ Sensibilidad 80%, especificidad 95 %
◦ Los resultados se expresan en la cuantificación del interferón gamma U/ml
◦ Existe un periodo de ventana de 4- 7 semanas.
◦ No debe utilizarse en dx de TB activa.
PPD (prueba de tuberculina derivada de proteína purificada)
.
Pruebas de falsos positivos - incluyen
la infección micobacterias no tuberculosas
y la vacunación de Bacillus Calmette-
Guérin. (si es vacunado en 1 año de vida )

Pruebas falsas negativas - Pueden


producirse resultados falsos negativos en
el contexto de limitaciones biológicas
(inmunosupresión) y técnicas
(manipulación e interpretación La
vacunación contra el sarampión puede
suprimir temporalmente la reactividad de la
tuberculina esta debe posponerse hasta 4-
6 sem..
INTERFERON GAMA
PPD
VENTAJAS • No requiere equipo • Resultados
• Barato disponibles24-48 h
• No da falsos positivos
a (1)
DESVENTAJA • Requiere una inyección • Requiere equipo,
intradérmica e extracción sanguínea.
interpretación 48-72 h. Son caros
• Falsos + (vacunación, • Su sensibilidad
sensibilidad a M. no disminuida en VIH.
tuberculosas) (1)
• Falsos negativos
(inmunoisupresion y
por consideraciones
técnicas)
• Puede ocasionar
reacciones adversas
(ulceración, ampollas,
alérgicas)
• Periodo de ventana 2 –
12 sem.
DIAGNOSTICO DE
MICOBACTERIAS POR EL
LABORATORIO
¿En quien debe
sospecharse?
◦ En aquellos pacientes con
fiebre tos con mas de 15
días, dolor torácico ,
astenia.
(NTS para la atención integral
de tuberculosis)
MUESTRA
MUESTRAS
EXTRAPULMONARES
◦ ORINA: Chorro medio no menos de 5º ml, procesado inmediatamente.
Centrifugada 15 min . Preservar 4- 9+ °C no + 12 h con Bi Na.
◦ CONTENIDO GASTRICO: muestra procesada inmediatamete. Ayuna. De no
ser procesado en 4 horas preservar con BiNa no + 24 h. centrifugada 30 min.
◦ LCR : procesad inmediatamente. Guardar 4 °C no mas 4 h
◦ SINOVIAL,ASCITICO PLEURAL : Anticoagulado3 gotas EDTA o Citarto de
Na x c/ 10 ml
◦ BIPOSIAS: No usar Formol. Usar SF.
◦ PUS: Hisopos Humedecidos
BACILOSCOPIA CON TINCIONES
ACIDORRESISTENTES

◦ Es muy útil en tuberculosis pulmonar, donde con tres baciloscopias del esputo se
puede establecer la presencia de micobacterias en un 70% a 80%
• Aproximadamente 10.000 bacilos por ml son necesarios para la detección de
bacterias en frotis AFB utilizando microscopía óptica
BACILO
TUBERCUL
OSO
BACILOS ACIDO
RESISTENTES 1 – 10UM
LARGO. SON
BASTONCILLOS
DELGADOS CURVOS,
ROJO FUCIA. EN
AURAMINA
FLURECENCIA
AMARILLA.
EXISTE BACILOS ACID.
ALCOHOL
RESISTENTE COMO
RODOCOCOS
NOCARDIA
LEGONELA ; QUISTES
DE CRIPTOSPORIDIUM
E ISOSPORA (TIENEN
VORMAS VARIADAS).
• Mods
INDICACIONES DE CULTIVO
1.DIAGNOSTICO
1. Muestras con baciloscopia (-), con radiografía anormal
2. Muestras paucibacilares
3. Muestras valiosas (extrapulmonares)
2.TRATAMIENTO
1. Baciloscopia (+), después del 2 mes de tratamiento
2. Muestras mensuales en pacientes en tratamiento (MDR, XDR u
otras resistencias)
3.PRUEBAS DE SENSIBILIDAD
1. Pruebas de sensibilidad indirecta a partir de muestras
pulmonares o extra pulmonares
cultivo
SOLIDOS:
Lowenstein- Jensen ;
ogawa (contiene proteína
de huevo, l- asparagina y
acido glutámico; son fuente
de nitrógeno y glecirina
como fuente de carbono).
Verde malaquita
Herramienta más sensible
para la detección de la TB
y puede detectar tan sólo
10 bacterias / mL; La
sensibilidad: 80 % y la
especificidad 98 %
uso: evaluar
susceptibilidad a fármacos
y para la identificación de
especies.
MGIT – PRUEBA FENOTIPICA
◦ De sensibilidad a medicamentos de primera
línea y diagnostico.
◦ Fundamento: los microorganismos al respirar
consumen el oxígeno disuelto en el medio lo
que permite observar la fluorescencia que es
proporcional al número de bacterias
presentes. La fluorescencia se puede
descubrir manualmente con lámpara de
Wood a 365 nm de luz ultravioleta.
◦ INDICACIONES:
◦ Detecta tb pulmonar y extrapulmonar
◦ Tuberculosis resistente a fármacos de primera línea
◦ Tb complicada con VIH
◦ Tiempo de resultados : 4-12 días desde que el
cultivo es informado como positivo.
◦ Todo resultado positivo debe ser evaluado
mediante la microscopia para su confirmacion
BACTEC
960 MGIT
• Contiene
cultivo
middlebrook
7H9 detecta
el consumo
02 mediante
sensores
fluorometricos
.
• su resultados
se emiten
como
positivos o
negativos.
MODS- fenotipica

• Desarrollado en Perú, (Caviedes, 2000)


• Tamizaje directa a partir de muestra de esputo con
baciloscopia + o -
• Simultáneamente detecta TB y susceptibilidad a H, R y MDR
• Utiliza caldo 7H9, enriquecimiento OADC mezcla de
antibióticos PANTA
• Principio: identificación mediante microscopio invertido de
la formación de microcolonias características de MTB
(cordones)
• Utilidad: diagnostica y sensibilidad a isoniacida y rifampicina
• La sensibilidad y especificidad en cultivo es de 97,8% y
99,6%
• La sensibilidad es de 92% y una especificidad de 99,5% para
detectar TB-MDR.
• Tiempo resultado: 7 a 14 días
Griess- Ensayo de Reducción de Nitratos
(NRA). fenotípica
◦ Prueba de tamizaje directa a través de esputo positivo (+)
◦ Diseñada para evaluar la resistencia a isoniacida y rifampicina.
◦ MTB de reducir nitrato a nitrito.
◦ Lectura:
◦ Indirecto 7 y 14 días
◦ Directo 14, 21 y 28 días
◦ Griess tiene una sensibilidad de 100, 100, 82,1 y 92,2% y una especificidad del
100, 100, 92,3 y 100% para detección de resistencia a isoniazida, rifampicina,
estreptomicina y etambutol respectivamente
◦ Tiempo de resultados:14- 28 días.
METODOS DIAGNOSTICOS
GENOTIPICOS
◦ Genera resultado 1- 10 bacilos
◦ Utiliza la muestra clínica
◦ Como en todas las técnicas , el prime r paso es la extracción del material genético,
ampliación (pcr) e identificación de regiones que confiere resistencia

◦ Secuenciación genómica(identifica y analiza la secuencia nucleótido de un


fragmento de ADN especifico)
◦ Sistema de detección por fluorecencia a tiempo real por PCR
◦ GENOTYPE MTBDR PLUS (ofrece la ventaja de identificar la resistencia en
cultivo como en esputo)
GENOTYPE MTBDR PLUS
◦ Método molecular rápido que permite
detectar pacientes MDR en 5 días, con una
sensibilidad y especificidad del 95%.
◦ Uso en muestra esputo positivas y aquellas
muestras provenientes de cultivo
◦ rpoB de genes para la resistencia a
rifampicina; katG y INHA genes para la
resistencia a la isoniazida
◦ No se deben utilizar o solicitar mara el
monitoreo del tratramiento porque puede
detectar el dna de bacilos muertos.
◦ Necesita la presencia de 1-10 bacilos /ml
para ofrecer resultados positivos.
Algoritmo de diagnóstico de la TB, Perú

1. Acceso Universal
a PS rápida
TBP FN TBP FP TB EP aHyR

MODS GENOTYPE CULTIVO (+)