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Tema 14.

Gentica de levaduras

Saccharomyces cerevisiae

Formas de divisin

Saccharomyces cerevisiae

Schizosaccharomyces pombe

Esporulacin
Ascosporas

Formacin de basidiosporas

Esporulacin
Ascosporas

Saccharomyces cerevisiae

Schizosaccharomyces pombe

Pseudohifas e hifas

Saccharomyces cerevisiae

Saccharomyces cerevisiae

Saccharomyces cerevisiae, ciclo de vida a apareamiento a/ cigoto esporulacin -C -N Asca con 4 esporas germinacin a a +C +N

Clulas haploides

Saccharomyces cerevisiae
Morfognesis y diferenciacin en un organimos unicelular

Schizosaccharomyces pombe

Saccharomyces cerevisiae
Fermentacin de la glucosa

Saccharomyces cerevisiae

Tamao y composicin de las clulas de S. cerevisiae Clula haploide Volumen (m3) 70 Composicin (10-12 g) Peso hmedo 60 Peso seco 15 DNA 0,017 RNA 1,2 Protena 6 Clula diploide 120 80 20 0,034 1,9 8

S. Cerevisiae: genoma

S. cerevisiae cromosomas

S. cerevisiae Electroforesis de campo pulsante

Centromeros

Plsmidos artificiales

S. cerevisiae, genoma

Nmero de intrones
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

Yeast Fungi Mammal

>1

Tamao de los intrones


70 60 50 40 30 20 10 0 <100 <200 <1 kbp 1 to 5 >5 Fungi Verterbrate

Gentica de levaduras

Gentica de levaduras
Prueba de dominancia
X

ts

TS+

ts / TS+

Cruce del mutante con el silvestre y examen del fenotipo del diploide

Prueba de complementacin
X ts 1

ts 2

ts 1 / ts 2

Cruce de dos mutantes con el mismo fenotipo y examen del fenotipo del diploide

Gentica de levaduras
Prueba de complementacin

Gentica de levaduras
Prueba de fenotipos no seleccionados

Gentica de levaduras
1 2 3 4 5 6 7 8 a b c d

Anlisis de ttradas

Se debe un fenotipo a la mutacin de un solo gen? Mapeo de los genes entre s y respecto al centrmero Creacin de dobles mutantes Test de reversin Comprobacin de que dos fenotipos se deben a la misma mutacin

Anlisis de ttradas por micromanipulacin

Anlisis de ttradas por micromanipulacin

Gentica de levaduras
Anlisis de ttradas
Segrega el fenotipo 2:2 tras la meiosis? S: el fenotipo se debe a la mutacin de un solo gen NO: algo ms ha ocurrido (ms de una mutacin no ligadas, mutacin en plsmido o en el genoma mitocondrial)

Segregacin 2:2

Otro tipo de segregacin

Anlisis de ttradas

Gentica de levaduras
R = Resistente a una droga r = sensible
B = Blanco b = azul

Terminologa de ligamiento: Ejemplo: Rb x rB


Tres posibles tipos de ttradas Rb Rb rB rB genotipos RB RB rb rb RB Rb rB rb

espora a b c d

PD
Ditipo parental

NPD
Ditipo No parental

T
Tetratipo

Gentica de levaduras

Gentica de levaduras
Segregacin durante la meiosis
Ditipos parentales Ditipos no parentales Tetratipos rB rb RB rB rb Rb Rb RB rb Rb RB rB No ligados 1: 1: 4 Ligados >1 : <1 Ligado al centrmero 1 : 1: <4

Algunos escrutinios

Supresores extragnicos
GEN2 gen1

No crece
mutagnesis

gen2 gen1

Crece

Supresores multicopia
un ejemplo
supresor silvestre mutante

X
10 1 1

X
10x 1

Supresores multicopia
GEN2 gen1

No crece
genoteca 2

GEN2 gen1

Crece

Suprimidos multicopia
GEN2 GEN1 GEN2

El plsmido puede perderse


Mutagnesis

GEN2 gen1

El plsmido no puede perderse

Fenotipo por dosis alta

No crece en galactosa

Ausencia de complementacin

Suele indicar genes que codifican subunidades de un complejo heteromultimtico

Mutantes letales sintticos

Mutante viable

Segunda mutacin Mutante inviable

Mutantes letales sintticos


GEN2 gen1
posible la segregacin mutagnesis
GEN1

gen2
GEN1

gen1
NO es posible la segregacin

Mutantes letales sintticos


mutX
ade2

mutX ura3
ade2

mutY
ura3

ade3 ADE3 URA3

ade3 ADE3 URA3

GEN X

GEN X

UV
Colonias blancas Crecimiento en 5-FOA Colonias rojas sin sectores Sensibles a 5-FOA

Gentica molecular de levaduras


Aislamiento de alelos por gap repair

Gentica molecular de levaduras


Reemplazamiento de genes

Gentica molecular de levaduras


Delecin

Gentica molecular de levaduras


Barajado de plsmidos

Saccharomyces cerevisiae

Saccharomyces cerevisiae

Tipo sexual

Interconversin del tipo sexual


HML 200 kb CEN III E
W X Y ZL

MAT HO
X

150 kb HMRa

Y Z

Ya ZR

W Ya Y ZL ZR

~700 bp ~600 bp ~750 bp ~300 bp ~250 bp

HO corta en una secuencia de ~18 bp (-inc)

Evento no recproco. Se pierde el casette Conversin gnica, va reparacin de corte de doble cadena

Interconversin del tipo sexual

mother daughter

mother

daughter

HO est: a o pero no a/ cambian Apagado en a/ Slo las madres cambian Apagado en hijas Encendido al final de G1
Nasmyth (1983)

Un linaje de clula madre controlado por los genes SWI

Aislamiento del mutante ash1

Gentica del ciclo celular


Mutantes cdc Aislamiento de ciclinas de G1 como supresores de cdc28 por sobrexpresin

Regulacin del ciclo celular

Regulacin del ciclo celular

Regulacin del ciclo celular

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