FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS, BIOQUÍMICAS Y BIOTECNOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

BIOLOGÍA CELULAR
MICROSCOPÍA ÓPTICA Y ELECTRÓNICA

Willy Valdivia Carpio Ing. Biotecnologo

Mgter. Mocita De La Fuente Torres Q.F
 Microscopia Óptica y Electrónica
Grandes
descubrimientos
suelen preceder a
grandes Inventos Las células por lo general son tan
pequeñas que no se pueden ver a
simple vista, por lo que su
descubrimiento requirió el invento
del Microscopio o por lo menos la
lupa

En los años 60 del siglo 17 Robert Hooke en Oxford

pudo observar en cortes muy delgados obtenidos
del corcho de las plantas, pequeñas cámaras a las
que denomino Cellulae del latin
Robert Hooke coloco dos lentes a
una debida distancia entre si,
Galileo Galilei no solo construyo
dentro de un tubo, tal y cual como
telescopios para observar planetas
son construidos los microscopios
y sus lunas, también construyo
actuales y pudo obtener imágenes
microscopios. (1624)
aumentadas 30 veces su tamaño
Per vedere da vicino la cose minime
original (1665)

Antony van lowenhoek construyo un microscopio

de una sola lente, pero esta lente estaba pulida
de tal manera, que el error de color (la aberración
cromática desapareció) permitiendo aumentar la
imagen observada hasta 100 veces.
El fue el primero en observar células vivas
150 años después, el botánico Matías Schleiden reconoció
que las plantas están construidas por células y propuso la 1838
hipótesis que los organismos estaban construidos igualmente
por células y pidió que se probara su tesis en tejidos animales

Theodor Schwann´s sobre la teoría de las células:

Se define que las células son las unidades funcionales
1839
de todos los organismos

Rudolf Virchow postula

Omnis Cellula ex cellula 1855
 Formación de la Imagen
Vocabulario
Eje Óptico: es un eje Horizontal que va a dividir en dos partes iguales al lente
Zonas de la lente: son las zonas alrededor de la lente. Zona Virtual y zona real
Zona Virtual: zona donde de coloca el objeto. ( Z )
Centro Óptico: centro de la lente todo rayo de luz que pase por este centro no
es desviado. (O)
Centros de Curvatura: son los centros de las esferas que dan origen a las
esferas (C )
Focos. Son puntos en donde se cruzan los rayos de luz que inciden sobre la
lente paralela al eje principal ( f )
 PROPIEDADES OPTICAS

1.Poder de resolución
2.Aumento Total
3.Profundidad de foco
4.Profundidad de campo
5.Contraste
 Poder de resolución
• Es la capacidad que tiene un sistema óptico de aislar dos puntos que
se encuentran muy próximos entre sí, de manera que se puedan
ver individualizados uno del otro
• El poder de resolución del ojo Humano
  es de:
0.1 mm = 100 µ 
• El microscopio Óptico tiene un poder de resolución de
0.2 µ
• El microscopio Electrónico puede llegar a tener un P. R
4Å
LÍMITE DE RESOLUCIÓN es la
distancia mínima entre dos puntos para
que puedan distinguirse como tales. Se
calcula por la fórmula de Abbe.
 EL NUMERO DE AUMENTOS
Es la relación entre el Aumento Total = Aumento del Objetivo X Aumento del Ocular
tamaño de la imagen y el
tamaño real del objeto
El numero de aumentos
de un microscopio óptico
resulta del producto entre
X
el numero de aumentos
del objetivo y el numero
de aumentos del ocular
 PROFUNDIDAD DE FOCO

Es el espesor máximo de la
muestra que aparece enfocada y
depende de la apertura
numérica, ( cuando la apertura
numérica aumenta, la
profundidad de foco disminuye
el poder de resolución aumenta.
(Diafragma )
La distancia focal

Es necesario enfocar ciertas

secciones a distintas alturas
debido al espesor y profundidad
 CONTRASTE

Permite distinguir los elementos presentes en el campo. Está

determinada por la distinta capacidad de absorción de luz de cada uno
de los elementos presentes en el campo.
 CAMPO DEL MICROSCOPIO
Es el área de la muestra que el observador ve a través de campo.
Depende del aumento de los aumentos del objetivo utilizado
A medida que la amplificación aumenta el objeto también los hace,
pero el área del campo disminuye
MICROSCOPIO OPTICO
 PARTES DEL MICROSCOPIO OPTICO
SISTEMA OPTICO
Los objetivos: lente situada en el
revólver. Amplía la imagen, es un
elemento vital que permite ver a
través de los oculares.​

El ocular: lente situada cerca

del ojo del observador. Capta
y amplía la imagen formada en
los objetivos.
 PARTE MECANICA
​
Pie o base: Es la parte inferior del microscopio que permite que éste se mantenga de pie, aloja
la fuente de iluminación y puede contener un mecanismo para regular la intensidad luminosa.​

Sirve de soporte a una columna o brazo sobre el cual reposa el resto del aparato. La columna
puede ser inclinada; en su parte más inferior se dispone el condensador y la parte superior
posee una cremallera que permite desplazar en sentido vertical el condensador, la platina o el
revólver y el tubo. ​
​
Mecanismo del enfoque: ​
Tornillo macrométrico: Para desplazamiento amplios gracias a una cremallera que permite el
movimiento rápido y posee dientes que se engranan y producen un movimiento tosco para
lograr un enfoque aproximado. ​

Tornillo micrométrico: Para desplazamientos cortos con una graduación tal que cada división de
la rosca permite un movimiento vertical imperceptible en el orden de 0,001 mm. ​

El movimiento del tornillo micrométrico tiene una extensión de 5mm aproximadamente y está
limitado. Permite un enfoque preciso y se utiliza con los objetivos de mayor aumento  ​
La platina: Es un soporte horizontal con un
orificio central, sobre el que se coloca la preparación,
que permite el paso de los rayos procedentes de la
fuente de iluminación y proveniente del condensador. ​
Posee un sistema de fijación e inmovilización de
la lámina porta-objeto compuesto por pinzas.​

​
El revolver: Es un implemento muy importante
que permite el intercambio rápido de objetivos
de diferentes aumentos mediante un movimiento
de rotación. ​
Considerado como un accesorio del tubo. ​

​
El tubo: Es una cámara oscura de longitud variable, cuyo
interior está pintado de negro mate y posee
un diafragma para impedir la formación de reflejos
y facilitar la observación. ​
Porta el ocular y los objetivos. Puede estar unida al brazo
mediante una cremallera para permitir el enfoque
 SISTEMA DE ILUMINACION
Sistema de iluminación​

Fuentes de luz: La más utilizada es la luz artificial ​

Condensador : Concentra los rayos luminosos​

Es un dispositivo que forma conos luminosos grandes, necesarios para
ver con los objetivos de mayor aumento. El condensador está
conformado por una o varias lentes situadas debajo de la platina del
microscopio, colocadas entre la fuente de luz y el espécimen.​

Diafragma o iris: Regula la cantidad de luz​

Es un dispositivo que se coloca inmediatamente debajo de la platina.
Debe permitir cambios en la apertura y con diámetros variables cuya
finalidad es la de obtener conos luminosos cada vez más estrechos y
eliminar los rayos de luz sobrantes​
​
Si se emplea luz visible (fotones) es usual que al microscopio se le
denomine fotónico.
 MICROSCOPIO OPTICOS

Microscopio de campo luminoso

El campo está intensamente
iluminado.​
Los objetos en estudio aparecen
más oscuros que el campo.​
El haz de luz llega a la muestra sin
nada que lo distorsione
 MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

Se trata de un microscopio convencional en el que se modifica la iluminación para que la

preparación se ilumine de forma oblicua; así, ningún haz de luz llega al objetivo directamente
desde el condensador, sino que sólo llegan aquellos haces de luz que son dispersados por
los objetos en estudio.​

Para convertir un microscopio de campo brillante en microscopio dé campo oscuro se cambia

el diafragma tipo iris por uno de campo oscuro, que es un disco opaco que obtura la parte
central del cilindro de luz.​

Los objetos observados aparecen brillantes sobre un fondo oscuro. Se pueden observar
partículas o células en estado vivo que no son visibles con el microscopio de campo brillante
por falta de contraste. No son visibles los detalles estructurales.​
Este tipo de iluminación se utiliza especialmente para la observación de microorganismos sin
teñir suspendidos en líquido.
 MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES
Permite ver estructuras vivas sin colorear. Son de bajo costo.​
Un microscopio de campo luminoso se transforma en uno de contraste de fase
sustituyendo el diafragma tipo iris por un diafragma anular, y el objetivo normal por
uno que tenga incorporada la placa de fase.​
Los diafragmas anulares y los objetivos indicados deben corresponderse entre si.​
El microscopio de contraste de fase incorpora dos elementos ópticos:​
​
Diafragma anular: es un diafragma que sólo deja pasar la luz a través de una línea
circular, que produce un cilindro de luz hueco. La preparación es iluminada por este
cilindro de luz.​
​
Lámina o placa anular de fase: Es una lente anular añadida a las lentes del objetivo
que «enlentece» los haces de luz procedentes del condensador. Esta placa tiene que
estar alineada con el diafragma.
MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA
El microscopio de interferencia incorpora,
por debajo de la muestra, una lente que separa
cada rayo del haz de luz en dos rayos. Uno de
ellos atraviesa la muestra en un punto y el otro
lo hace inmediatamente al lado.

Posteriormente, ambos rayos se reúnen e

interfieren entre sí produciendo una imagen
contrastada de ese punto.​
​
Los objetos se ven oscuros o claros en un fondo
gris
 MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
El microscopio de fluorescencia es un microscopio especialmente diseñado para observar
la luz fluorescente emitida por la muestra, tras ser excitada con luz ultravioleta.
Se utiliza para poner de manifiesto la existencia de sustancias fluorescentes en una
muestra.​
​
Los componentes básicos de este tipo de microscopio son:​
• Lámpara de mercurio: emite luz en una banda de. longitudes de onda que va desde el
ultravioleta al infrarrojo.​
• Filtro, de excitación: sólo deja pasar la luz ultravioleta. Esta luz; es la que atraviesa la
muestra. Si la muestra tiene sustancias fluorescentes emitirá luz fluorescente. Esta luz
fluorescente y la ultravioleta no absorbida por la muestra penetrarán en el objetivo.​
• Contiene un Filtro de barrera, colocado entre el objetivo y los oculares; este filtro no
deja pasar la luz ultravioleta, de modo que al observador sólo llega la luz fluorescente
emitida por la muestra tras la excitación.
 MICROSCOPIOS ELECTRONICOS

DE BARRIDO

DE TRANSMISION
En el microscopio de barrido la imagen se forma por
los electrones reflejados por el objeto y no por los
que lo han atravesado, como ocurre en el de
transmisión. En este tipo de microscopio un haz de
electrones recorre la superficie de la muestra. Para
obtener mayor contraste las muestras u objetos a
observar pueden ser tratados con sustancias de
contraste. ​
 OBJETIVOS DE LA SESION

• Realizar el reconocimiento de las partes

de un microscopio óptico y electrónico.
​
• Aprender el manejo y cuidado de un
microscopio óptico.
 https://www.cerebriti.com/juegos-de-ciencias/partes-del-microscopio
a. Objetivo 1.
12.
b. Brazo
c. Condensador
11.
d. Tornillo micrométrico 2.
e. Base 10.

f. Pinzas
3.
g. Platina 9.

h. Ocular 4.
8.
i. Tubo 5.
j. Fuente de luz 7.
6.
k. Tornillo macro métrico

L. Revolver
EXAMEN
• En el aula virtual
Preguntas para responder
1. Describa la trayectoria de los haces luminosos del microscopio
óptico y los haces de electrones del microscopio electrónico.
2. ¿Qué tipo de imagen presentan el microscopio óptico compuesto
y el Microscopio electrónico?
3. ¿Cuándo se usan los tornillos macro métricos y micrométricos?
4. Para qué utiliza el condensador, revolver y el sistema de
iluminación del microscopio óptico.