EL MICROSCOPIO

MICROSCOPIO
 A finales del siglo XVI los hermanos Hans y Zacarías Jansen,
construyeron el primer microscopio compuesto. Galileo, que es
conocido por sus estudios de Astronomía, fue uno de los primeros
investigadores que utilizo el microscopio para fines científicos
 El empleo del microscopio origino nuevos términos, tales como el
de célula (empleado por Robert Hooke, 1635-1703) y las primeras
descripciones y grabados de organismos microscópicos (como los
realizados por Leeuwenhoeck, 1632-1723); este ultimo empleo
lentes compuestos en la observación de protozoarios y otros
organismos unicelulares
 El ojo humano es capaz de discriminar dos puntos que se
encuentren separados por una distancia mayor de 0,1mm solamente
. Esto constituye un obstáculo para el estudio de las estructuras
internas de la célula y es por esto que es necesario el empleo de
equipos que aumenten la resolución
MICROSCOPIO
 La posibilidad de un sistema óptico de distinguir por
separado (resolver) dos puntos muy cercanos, se
denomina poder de resolución.
 El poder de resolución en los microscopios, esta en
relación inversa con la longitud de onda de la radiación
empleada en la fuente de iluminación
 La resolución del microscopio óptico aumente y alcanza
su limite cuando se utiliza como fuente de iluminación la
luz ultravioleta, producto de su pequeña longitud de onda
 El microscopio óptico, fue perfeccionado hasta llegar a
los modelos actuales, que pueden alcanzar hasta 0,2 um
de resolución
MICROSCOPIO
 A mediados del siglo XX, se invento un tipo de
microscopio que utiliza como fuente de iluminación los
electrones. (Microscopio electrónico)
 Con este equipo se puede realizar un estudio mas
detallado de la célula y los elementos subcelulares,
moleculares y atómicos
 El microscopio electrónico al emplear una fuente de
emisión de electrones, de una longitud de onda de 0,005
nm, puede alcanzar valores resolutivos mucho mayores
que el alcanzado por los microscopios ópticos.
 El limite de poder de resolución del microscopio
electrónico es de 0,2 nm
MICROSCOPIO
 El microscopio óptico es sumamente útil para observar objetos que se
hallen fuera del limite de resolución del ojo humano (tamaño inferior a
100 mm), este microscopio (también llamado compuesto en oposición al
simple que consta de una sola lente biconvexa y se conoce como lupa)
consta de tres sistemas
- Sistema mecánico, conformado por aquellas piezas que no intervienen en
la formación de la imagen ni en el camino de la luz
- Sistema óptico, que incluyen todos los elementos que colaboran en la
ampliación de la imagen, y es integrado por aquellos componentes
encargados de colectar la luz, dosificarla y dirigirla a través del preparado
- Los lentes presentan propiedades que debemos conocer: el ocular tiene un
aumento normal de 10X (amplia diez veces el tamaño), los objetivos
tienen aumento de 4X, 10X, 40X, 100X (objetivo de inmersión) que
invierten la imagen por lo que veremos una imagen invertida y
aumentada tantas veces como el producto del aumento del ocular por el
aumento del objetivo
PARTE DEL MICROSCOPIO OPTICO
 SISTEMA MECANICO
- PIE O SOPORTE, brinda apoyo y estabilidad al aparato
- COLUMNA O VASTAGO, soporta la platina, tubo y tornillos de ajuste macro
y micrométrico
- CABEZAL, contiene los sistemas de lentes oculares
- REVOLVER, contiene el sistema de lentes de los objetivos, que permite girar
para cambiar los objetivos
- TORNILLOS DE ENFOQUES, en numero de dos
- Macrometico, que permite aproximar la platina al objetivo
- Micrométrico, consigue un enfoque claro y correcto
- PLATINA, es una plataforma horizontal sobre la cual se coloca y sujeta el
preparado a observar, tiene un orificio central que permite el paso de la luz y
un venier que posibilita la relocalización de los detalles de interés
- TORNILLOS DE DESPLAZAMIENTO, que permite desplazar la muestra en
dirección lateral y anteroposterior
- PINZAS DE SUJECCION, permiten sostener la muestra
MICROMETRICO Y MACROMETRICO
PARTE DEL MICROSCOPIO OPTICO
 SISTEMA OPTICO
- OCULAR, es un tubo cilíndrico con un diafragma fijo en el centro y una
lente en cada extremo, la superior se denomina lente ocular y la inferior
lente colectora
- OBJETIVO, esta formado por un sistema de pequeñas lentes ubicadas
muy cercanas una de la otra, la que se halla en el extremo distal del
objetivo se denomina lente frontal. Los objetivos pueden ser objetivos a
seco (no hay ninguna sustancia interpuesta entre la lente frontal y el
preparado), u objetivo de inmersión (entre la lente frontal y el preparado
se coloca una sustancia cuyo índice de refracción es muy similar al vidrio)
- CONDENSADOR, concentra el haz de luz sobre el plano del objeto que
se encuentra en la platina
- DIAFRAGMA, que se encuentra debajo del condensador que regula la
cantidad de luz que llega a el
- FUENTE DE LUZ, es una lámpara que esta ubicada en la parte inferior
del aparato y dirige los rayos luminosos hacia el condensador
OCULAR
OCULAR
PARTE DEL MICROSCOPIO
 Los objetivos como dijimos, existen de dos tipos: los de
observación en seco y los de inmersión
 OBJETIVOS SECOS, que varían desde 4X a 40X y
alcanzan con el índice de refracción del aire para que la
imagen se forme claramente
 LOS OBJETIVOS DE INMERSIÓN que incrementan el
aumento de 90X a 100X, para lo cual se utilizan aceites
de cedro o sintéticos.
 Conviene señalar que existe una estrecha relación entre
el aumento, el diámetro de la lente y la distancia al
preparado.
OBJETIVOS
CONDENSADOR
TAMAÑO DE LOS OBJETIVOS
PARTE DEL MICROSCOPIO
El diámetro de la lente se relaciona de manera inversa con el aumento (a
mayor aumento, menor diámetro), esto se debe al campo que debe
abarcar cada uno (al aumentar el tamaño debo reducir el campo, sino
la imagen sería muy grande).
La distancia al preparado, a mayor aumento que quiera conseguir, más
cerca debo estar del preparado y entender esto es fundamental para
comprender el porqué de los lentes de inmersión, llega un momento en
el que no se puede acercar más, entonces para poder acercarse se tiene
que modificar las propiedades de refracción del medio. El efecto que
se logra aumentando el índice de refracción es que, para la luz, el
preparado esté más cerca del objetivo.
 Poder de resolución, es la capacidad que tiene el microscopio de
percibir por separado dos puntos pequeños adyacentes y
cercanos, es decir permite observar detalles. El poder de
resolución aumenta a medida que disminuye la distancia que
separa dichos puntos
MICROSCOPIO OPTICO
MICROSCOPIO OPTICO
- Es el principal medio que utilizaremos a lo largo de toda
la materia para observar morfología de los tejidos a
estudiar, por lo que debemos conocer en detalle sus
partes y el funcionamiento de cada una de ellas.
- Existen diversos tipos de microscopios ópticos, los cuales
describiremos brevemente señalando sus características
fundamentales.
TIPOS DE MICROSCOPIO OPTICO
 Microscopio de campo claro: es el microscopio óptico
compuesto utilizado en la mayoría de los laboratorios. Para
formar una imagen a partir de un corte histológico usa luz
visible, por esto la muestra debe ser lo bastante fina como
para que los haces de luz puedan atravesarla. También se
usan métodos de tinción, según las necesidades, con el fin
de aumentar los detalles en la imagen.
 Microscopio de contraste de fase: posibilita la
observación de muestras sin colorear, por lo que resulta útil
para estudiar especímenes vivos.
 Microscopio de fluorescencia: permite la observación de
estructuras fluorescentes, ya sea naturales o artificiales.
TIPOS DE MICROSCOPIO OPTICO
 Microscopio de barrido con focal: se usa para estudiar la
estructura de sustancias biológicas. Combina partes de un
microscopio de campo claro con equipo fluorescente y un
sistema de barrido que emplea un rayo láser. A través de una
computadora se reconstruye la imagen tomada por planos, a
una imagen tridimensional.
 Microscopio de luz ultravioleta: sus resultados se registran
fotográficamente ya que la luz U.V. no es visible y daña la
retina. Se utiliza en la detección de ácidos nucleicos, que
absorben esta luz.
 Microscopio de luz polarizada: es una modificación del
microscopio de campo claro. Debido al fenómeno de
birrefringencia se pueden observar sustancias cristalinas y
moléculas fibrosas
MICROSCOPIO ELECTRONICO
 Es el más sofisticado de los microscopios conocidos en la ciencia.
El microscopio electrónico utiliza lentes electrostáticos y
electromagnéticos y a través de los electrones ilumina un objeto,
magnificando una imagen hasta 2 millones de veces mientras que
la luz del microscopio óptico lo hace solo 2 mil veces. El
microscopio electrónico utiliza una onda larga de un electrón
llamado Broglie Wavelength. Al controlar el rayo de la radiación
electromagnética el microscopio electrón hace posible focalizarse,
produciendo una imagen de gran escala.
 Microscopio electrónico de transmisión (MET): utiliza un haz de
electrones para producir la imagen. Permite la observación de
detalles a escala macromolecular
 Microscopio electrónico de barrido (MEB): en este caso el haz
de electrones no atraviesa la muestra, sino que choca contra su
superficie. Permite una gran magnificación de las imágenes.
PASOS PARA EL ENFOQUE DE LA
MUESTRA
 Colocar el objetivo de menor aumento en posición de
empleo y bajar la platina completamente. Si el
microscopio se recogió correctamente en el uso anterior,
ya debería estar en esas condiciones.
 Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con
las pinzas metálicas.
 Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está
en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x).
 Para realizar el enfoque:
PARA REALIZAR EL ENFOQUE
 Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación,
empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse
mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre
el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose
dañar alguno de ellos o ambos.
 Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando
lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico
y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el
micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
PASOS PARA EL ENFOQUE DE LA
MUESTRA
 Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya
casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco
el micrométrico para lograr el enfoque fino.
 Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la
imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo
anterior y repetir la operación desde el paso 3.
 El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la
preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de
percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan
las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de
inmersión si se observa una preparación que ya se
enfocó con el objetivo de inmersión.
EMPLEO DEL OBJETIVO DE INMERSION
- Bajar totalmente la platina.
 Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz
que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar
el aceite.
 Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio
camino entre éste y el de x40.
 Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de
luz.
 Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del
objetivo de inmersión.
 Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta
que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si
la gota ascendiera y se adosara a la lente.
 Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo
entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor
que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande
EMPLEO DEL OBJETIVO DE INMERSION
 Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la
preparación, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x
sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si
desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la
operación desde el paso 3.
 Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la
platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el
revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación
de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de
inmersión en posición de observación.
 Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un
papel especial para óptica. Comprobar también que el
objetivo 40x está perfectamente limpio