RECONOCIMIENTO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO RESUMEN Los microscopios son herramientas creadas para el desarrollo de la investigacin microscpica.

El microscopio se utiliza para examinar objetos muy pequeos situados a muy corta distancia de la lente objetivo. Durante el desarrollo de este laboratorio conocimos los diferentes tipos de microscopios, sus usos, ventajas y desventajas de los mismos. Pudimos observar con objetivos de 10x, 40x, 100x, una muestra de cabello permitindonos conocer muy detalladamente sus componentes, los cuales son imposibles de visualizar a simple vista. INTRODUCCION El microscopio es un instrumento especialmente diseado para el estudio de estructura y objetos pequeos (microscpico) que no pueden ser examinados a simple vista. El microscopio es una herramienta fundamental en biologa y en la actualidad se ha alcanzado un gran avance en su perfeccin, hasta el punto de que existen diversos tipos de microscopio con diferentes caractersticas y modelos adecuados para diferentes propsitos. Por ejemplo: El microscopio electrnico de barrido, el microscopio de contraste de fase, el microscopio invertido, el microscopio estereoscopio, etc. Cada uno de ellos apoya una serie de tcnicas y procedimientos propios para que nosotros podamos tener una idea de las estructuras subcelulares que presentan los seres vivos. El microscopio es un instrumento muy complejo y delicado por lo que su manejo debe hacerse con mucho cuidado para evitar el deterioro. OBJETIVOS Conocer las partes mecnicas, pticas y el sistema de iluminacin del microscopio. Manejar correctamente las partes mecnicas. Manejar adecuadamente el sistema ptico. Manejar adecuadamente el sistema de iluminacin. Conocer los cuidados que se deben tener con el microscopio. Identificar los factores que daan el microscopio. MATERIAL POR EQUIPO 1 microscopio 1 hoja papel seda. 1 lienzo 1 cubreobjetos.

 1 portaobjetos METODOLOGIA Desde su invencin, el microscopio ha sido una herramienta de enorme importancia en el desarrollo de distintas disciplinas cientficas. Si bien el uso de lentes magnificadoras para la observacin de detalles en estructuras pequeas comenz en la antigua Roma, no fue hasta el desarrollo del microscopio de luz, durante el siglo XVII, que este instrumento fue utilizado en la biologa. Una clula animal tpica mide entre 10 y 20 m de dimetro, muy por debajo del tamao ms pequeo que puede apreciar el ojo humano (100 m). Para observar estructuras tan pequeas y para distinguir detalles dentro de stas, es necesario el uso de lentes de aumento. Una lente convexa constituye un microscopio simple, pero generalmente no logra aumentos mayores a 10 veces el tamao real del objeto. Para obtener imgenes mayores se desarroll el microscopio compuesto, el cual est constituido por un sistema de lentes que logran amplificar la imagen en ms de 1000 veces el tamao del objeto. En el microscopio compuesto existen bsicamente en dos sistemas de lentes, uno ocular y otro objetivo, adems de todo el sistema mecnico encargado de darle soporte. Dentro de los componentes no pticos del microscopio se encuentran en la base o pie y en el brazo del microscopio, los cuales en su conjunto se denominan estaticos. En la base del microscopio se localiza la fuente de luz del mismo, o el espejo responsable de dirigir la luz natural hacia la muestra. La platina constituye un soporte sobre el cual se coloca el espcimen, y posee un orificio que permite el pasaje de la luz. Asociados a esta platina existen dos tornillos que permiten el desplazamiento en el plano xy del espcimen. A ambos lados del estativo se disponen, muchas veces, de forma concntrica los tornillos de enfoque del microscopio (macromtrico y micromtrico), encargados de mover hacia arriba y abajo la platina para poner en foco el espcimen. Por encima de la platina se localiza el revlver portaobjetivo donde se encuentran las lentes objetivas de distinto aumento. La rotacin del revlver portaobjetivo coloca a cada una de las lentes en el eje ptico. Siguiendo el camino del eje ptico hacia arriba se encuentra el tubo donde se localizan elementos del sistema ptico. La parte ptica propiamente dicha est constituida por el condensador, la lente objetiva y la ocular. El condensador es una lente convergente que toma los rayos de luz provenientes de la fuente y forma un cono de rayos convergentes sobre la muestra. El condensador posee un tornillo de enfoque que permite su movimiento hacia arriba y abajo para lograr una ptima iluminacin del espcimen. Adems posee un diafragma o iris que regula la cantidad de luz que atraviesa el condensador y llega al espcimen, as como el ngulo del cono de luz. Las lentes ocular y objetiva son lentes convergentes, que describiremos en detalle ms adelante.

Figura 1: De forma esquemtica el microscopio funciona de la siguiente manera: la luz proveniente de una fuente pasa a travs de una lente condensadora y luego atraviesa al espcimen transparente localizado en el soporte o platina del microscopio. La lente objetiva forma luego una imagen real (es decir que puede ser proyectada en una pantalla) intermedia que se proyecta justamente en el diafragma fijo de la lente ocular. Esta imagen es posteriormente aumentada an ms por la lente ocular generndose una imagen virtual (no puede ser proyectada en una pantalla) invertida del objeto que es percibida por el ojo como si estuviese a 2.5 cm de distancia.

Caractersticas de las lentes objetivas: La lente objetiva est compuesta por un conjunto de lentes, de las cuales la ms frontal se

encarga de generar una imagen clara de las estructuras del objeto. El resto de las lentes se encargan de corregir aberraciones pticas. La aberraciones (distorsiones) esfricas o cromticas son inherentes al diseo de toda lente. Las aberraciones de tipo esfricas hacen que el campo se vea curvo cuando en realidad es plano. Las aberraciones cromticas son producto de los distintos ndices de refraccin de las diferentes longitudes de onda que componen la luz blanca, y hacen que los objetos se vean borrosos. Las lentes objetivas que presentan correcciones para ambos tipo de aberracin se denominan planapocromticas. La lente objetivo tiene inscripciones que indican ciertas caractersticas, tales como su amplificacin, apertura numrica, correcciones, etc. (figura 2) Las lentes objetivas de un microscopio, que poseen distinto poder de resolucin, suelen estar diseadas para proyectar la imagen intermedia en el mismo punto del tubo, de manera que es necesario hacer nicamente pequeas correcciones con los tornillos de enfoque cuando se cambia de lente durante la observacin. Los microscopios que poseen este tipo de lentes se denominan parafocales. Adems, el centro del campo de observacin es el mismo en los distintos lentes, por lo cual se denominan paracentrales. Iluminacin: Para obtener buenas imgenes es importante el uso de una correcta iluminacin, utilizando tanto fuentes naturales como artificiales de luz. La iluminacin debe ser brillante y uniforme en toda la muestra, lo cual se logra en los microscopios actuales utilizando el sistema de iluminacin Khler. En este sistema, una lente colectora colocada por delante de la fuente generadora de luz proyecta una imagen aumentada de la fuente de luz, cuyo foco se localiza exactamente en el diafragma o iris del condensador. Al atravesar el condensador se genera un haz de rayos paralelos que iluminan de manera uniforme la muestra. El diafragma del condensador regula el ngulo del cono de luz que alcanza el espcimen. Modificando

RESULTADOS LETRA IMPRESA. 4x. Se pueden observar puntos azules Sobre la tinta roja y una sombra Amarilla alrededor de la letra. 4x.

10x. la tinta y los puntos azules Comienzan a verse disparejos En su distribucin y se pueden Observar pequeas grietas amarillas 40x. la tinta se nota visiblemente Deteriorada y los puntos azules Muy irregulares y pueden verse Bastante claro las grietas y el Sombreado amarillo. CODIGO DE BARRA. 4x. se observa las lneas en dos colores (Morado y Naranja) y entrecruzados E intercalado como lo muestra la imagen. 10x.se ve la imagen anterior mucho ms 10x.

10x.

40x.

4x.

Ampliada pero ahora aparecen irregularidades En la imagen como lneas blancas. 40x.se ve el color totalmente imperfecto Y con grietas grandes. HEBRA DE CABELLO 4x.se pueden ver claramente las hebras Pero sin variaciones. 10x.en el cabello se observan bordes ms Oscuros y en el centro se puede notar ms 10x. 4x. 40x.

Llano y de color marrn. 40x. ALGODN 4x. se observan lneas de colores grises 10x. 40x. HILOS DE COLORES 4X. 4X. 4x. 10x. 40x. 40x.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS 1. Mencione los diferentes tipos de microscopios y realice una breve descripcin de cada uno de ellos. Microscopio compuesto: aparto ptico hecho para agrandar objetos; consiste en un nmero de lentes formando una imagen cruzada lentes posicionados cerca del objeto proyectndola hacia los lentes oculares. Es el ms utilizado. Microscopio ptico: microscopio compuesto que utiliza una combinacin de lentes agrandando la imagen de pequeos. Son antiguos, simples de utilizar y fabricar. Microscopio digital: tiene una cmara LCD adjunta y esta conectada con un LCD o a una pantalla de computador usualmente tiene ocular para ver los objetos directamente. Microscopio fluorescente: tipo especial de micros livianos que en vez de tener un reflejo utiliza fluorescencia para ver las pruebas y sus propiedades. Microscopio electrnico: es uno de los mas usados e importantes con la capacidad mas alta de magnificacin. El microscopio electrnico es una herramienta mucho mas poderosa en comparacin con los comunes mas utilizados. Microscopio estreo (estereoscopio): utiliza dos objetivos y dos oculares que permiten ver un espcimen bajo ngulos que permiten una visin ptica de tres dimensiones. 2. Por que la imagen del microscopio ptico aparece invertida?

Porque la lente convexa tergiversa la visin. 3. Que sucede con el campo de observacin cuando se aumenta el objetivo y la iluminacin? La visin se ve borrosa y es necesario cuadrarla con el micrmetro y el macrometro. 4. A que se debe que las letras del peridico o el cdigo de barra de las revistas utilizadas sean visto uniformemente impregnada de tinta por nuestros ojos? Se debe a que la visin humana no tiene la capacidad suficiente para poder distinguir detalles microscpicos. 5. Cuales tcnicas se utilizan en la microscopia electrnica, tanto en la preparacin de muestras como en montaje? Microscopio electrnico: se trabaja sobre fotografas. Fijacin: tiene mucha importancia se sigue el mismo proceso que en el microscopio ptico. Seccionado: los cortes muy finos son atravesados por electrones de muy poco poder de penetracin. Se debe incluir la muestra en una resina muy dura(polimerizada) Montaje de la preparacin: se coloca en una rejilla de cobre que acta como red en la mini-piscina. La rejilla es el porta objetos se usa de cobre porque los tejidos se adhieren mejor ah. Tincin: se tie siempre aunque sin colorantes. Se emplean metales pesados ya que estos tomos desvan a los electrones, mientras que los tomos ligeros no lo hacen. 6. Que es un microscopio invertido y para que se utiliza? Es un microscopio que tiene una disposicin invertida de sus componentes respecto a un microscopio convencional. La fuente de luz y el condensador esta sobre la plataforma apuntando hacia abajo, los objetivos estn debajo de la plataforma apuntando hacia arriba. Los nicos componentes en la misma posicin son los oculares, asimismo la muestra es colocada sobre la platina mecnica. El microscopio invertido permite observar organismos o tejidos en cultivo sin una preparacin previa favoreciendo el seguimiento del estado de crecimiento, comportamiento y parmetros investigados en el desarrollo del cultivo. Su desventaja es la limitada magnificacin ya que sus objetivos ms potentes son de 40x y 60x.

7. Cuales son las limitantes del microscopio de luz y el microscopio electrnico? El microscopio de luz utiliza un haz de luz en el rango de las longitudes de onda visibles, pero no se puede utilizar en investigaciones muy avanzadas porque no posee mucha precisin. La resolucin de un microscopio electrnico tambin esta limitada por las longitudes de onda de los electrones, adems el costo y el mantenimiento del equipo son muy altos. 8. Por que se deben utilizar colorante a la hora de observar muestras en el microscopio, cuales deben ser alguna de las propiedades de los colorantes de usos comn en microscopia? Cuando el tejido es casi transparente hay que aadirle colorantes para permitir la visin. Normalmente se emplea ms de un colorante para permitir la visin, estos colorantes son qumicamente distintos. Estas sustancias qumicas reaccionan con molculas determinadas del tejido quedndose fijadas, as se obtiene el contraste.