TECNICAS PARA EL ESTUDIO TAXONOMICO DE HELMINTOS PARASITOS

IMPORTANCIA
Los helmintos parasitan a numerosas especies de hospederos, entre invertebrados y vertebrados Se han descrito a numerosas especies de helmintos.
cestodos Nematodos Digeneos Monogeneos Aspidogastreos

Acantocfalos

Cestodarios

IMPORTANCIA
Quedan por registrar:  otros gneros y/o especies (gen. n, sp. n.)  Gneros o especies conocidas en huspedes distintos al que parasitan inicialmente  Helmintos en nuevas reas geogrficas

IMPORTANCIA
 Para tales estudios se requiere encontrar al

parsito y procesarlo convenientemente para efectuar el estudio morfolgico  Hay otros criterios taxonmicos: numrico, bioqumico, molecular.  Todos son posteriores o tienen como base al criterio morfolgico, que sigue vigente

IMPORTANCIA
 Conocer la fauna helmintolgica de una

regin o un Pas  Enseanza  Colecciones helmintolgicas

Tipos Paratipos Holotipos

PRINCIPIOS
Antes de iniciar el estudio parasitolgico 1.- Identificar al husped (claves, museos) 2.-Determinar la procedencia y fecha de coleccin 3.- Tambin tomar en cuenta el sexo, el peso, la madurez sexual, edad del animal
estos datos deben ser registrados en una libreta de apuntes

El estudio parasitolgico se hace inmediatamente despus que el husped ha muerto o despus de un corto tiempo de conservacin en fro, para evitar el desprendimiento o la migracin de stos. Antes de la necropsia del husped, se procede a buscar hemoprasitos y ectoparsitos

Muerte del hospedero

Los mamferos y las aves

inyeccin intraperitoneal con sobredosis de NEMBUTAL o ALATAL. Los peces, anfibios y reptiles golpe en la cabeza o por puncin de la base del cerebro con un estilete
Para mamferos pequeos, anfibios, reptiles e invertebrados terrestres es muy til la campana de diseccin (campana de vidrio) en la cual se coloca al hospedero y algodones embebidos con cloroformo o ter

SECUENCIA
Deteccin Recoleccin Fijacin
Conservacin

Estudio in vivo

Tincin Montaje

Deteccin y recoleccin de monogeneos

 Tcnica para monogeneos de peces marinos

que tienen, branquial

principalmente,

ubicacin

Las branquias se colocan en frascos de vidrio de boca ancha para, por agitacin, desprender a los monogeneos y luego detectarlos en el sedimento

FIJACIN

Deteccin y recoleccin de monogeneos

 Tcnica para monogeneos de peces de agua

dulce que tienen ubicacin branquial y en el integumento

Los peces, vivos, se colocan en frascos de vidrio de boca ancha para, por agitacin, desprender a los monogeneos que han sido relajados por accin del formol diluido y luego detectarlos en el sedimento.

Formol 1/4000 (30)

Agitacin

Sacar al pez

Dejar sedimentar

Montaje semipermanente con gelatina glicerinada

Formol al 2%

Deteccin y recoleccin de helmintos endoparsitos

 Helmintos intestinales (formas adultas)
El intestino se secciona en sus partes: estmago, intestino delgado e intestino Cada parte se coloca en bandejas, donde se busca a simple vista, primero, y luego con ayuda del estereoscopio Recolectar en placas de Petri con SSF Fijacin

Para hospederos de gran tamao (rumiantes)

Fijacin

Deteccin y recoleccin de helmintos endoparsitos

 Helmintos hsticos (formas larvarias)
En hospederos pequeos (peces, roedores) examinar el mesenterio y msculos El mesenterio a simple vista y con estereoscopio y a porciones de msculo hacer squash Larvas con ganchos deben ser colocadas en agua para que evaginen probosis Recolectar en placas de Petri con SSF

Fijacin

Estudio morfolgico

Material vivo

Material fijado

Material vivo

Sin colorear
Los helmintos pequeos son naturalmente transparentes, lo cual Permite observa su anatoma interna

Coloraciones vitales
til para parsitos frgiles, pequeos, difciles de colorear. Los colorantes vitales ms usados son el Rojo Neutro, Verde de Janus, Sudan III Y azul Tripano

RELAJACIN:

Proceso que permite al los platelmintos, sobre todo cestodos, mantenerse relajados o estirados, a fin que mueran en esta posicin por accin del fijador. Se consigue:
Colocndolos en la nevera por 10 a 15 minutos. Colocndolos en frascos de vidrio y agitndolos Colocando a los endoparsitos en medios isotnicos: agua, y a los ectoparsitos en medio hipertnico: SSF

FIJACIN
Proceso que permite dar muerte al parsito en forma rpida de modo tal, que mantenga inalterada su configuracin qumica y su estructura morfolgica. Las soluciones fijadoras se caracterizan por tener rpida penetracin en los tejidos. Las ms usadas son: formol al 5%, alcohol etlico al 70%, cido actico, cido pcrico o mezclas de ellos: formol-actico, AFA, Bouin.
AFA (Alcohol-formolcido actico)
Agua destilada. 430mL Formol comercial. 50mL Acido actico. 20mL Alcohol 70% 500mL

FORMOL- ACTICO
Agua destilada. 930mL Formol comercial. 50mL Acido actico. 20mL

Propiedades de los fijadores

Los fijadores impiden la aparicin de fenmenos orgnicos de autlisis y desintegracin de los parsitos por: a. Coagulacin de las Protenas pero sin combinarse con ellas (alcohol, ac. Pcrico) b. Formacin de combinacin qumicas con sustancias orgnicas (ac. Crmico). c. Oxidacin de las sustancias orgnicas y favorecer la coloracin ulterior de los tejidos .

Fijacin de Platelmintos
Vara respecto del tamao y de la consistencia del helminto

Fijacin de platelmintos pequeos y frgiles

(0.5-2.0 mm):

Papel de filtro
HUESPED PROCEDENCIA PARASITOS LOCALIZACION FECHA

Fijacin de platelmintos grandes y musculosos

(entre 2 y 5 cm)

HUESPED P OCEDENCIA PARASITOS LOCALIZACION FECHA

H U ES PE D P LOC SI TO S A LIZA F EC CION HA

Fijacin de platelmintos muy grandes

Fijacin de Nematodos y Acantocfalos

Fijacin y conservacin de Fitonematodos

o For m ento or ci p

Otro proceso de fijacin de fitonematodos es el siguiente:

Extraer exceso de agua

Sedimentar 1 o 2 horas

Colocar a bao Maria a 60 C 1 minuto

Formalina 4%

Agregar formalina y guardar a temperatura ambiente

Seinhorst I:
Etanol 96% Glicerina Agua destilada 20 partes 1 parte 7 partes 93 partes 7 partes

Seinhorst II:
Etanol 96% Glicerina

Eliminar liquido

Agregar 10 gotas de Seinhorst I y colocar a 35-40 C por 12 horas

Agregar 2 o 3 gotas de Seinhorst II, incubar a 35-40 C por 2 o 3 horas. Este proceso se debe repetir por 2 o 3 veces

Guardar en el mismo fijador.

Colocar en placa petri con 2 o 3 ml de Agua. Colocar en estufa a 43 C por 12 minutos

Verter el fijador hasta llenar la placa

Agregar 2 gotas de solucin acuosa de Ac. pcrico

Retirar la placa de la incubadora, taparla y dejarla a T ambiente algunos das 3 o 4 gotas de glicerina pura (a 43 C) y dejar en la incubadora por 2 o 3 semanas

Colocar en incubadora 8 a 10 semanas

Retirar la placa de la incubadora y realizar el montaje

CONSERVACIN DE HELMINTOS: Los conserv dores ms utilizados son: el etanol al 70% y el formol al 5%.

La etiqueta:
 Nombre cientfico del husped.  Su procedencia.  Grupo taxonmico del parsito.  Localizacin del husped.  Fecha de coleccin del husped.  Nombre del colector del parsito.

Coloracin y montaje permanente de platelmintos: Tiene por finalidad hacer visibles los rganos internos y ciertas estructuras externas de los parsitos que han sido fijados

COLO ACIONES

Progresivas
Se expone el parsito a un tinte muy diluido hasta conseguir la intensidad deseada.

Regresivas
El parsito se sobrecolorea para luego desteirla hasta conseguir la coloracin deseada.

Coloracin con Carmn

Lavado Deshidratacin Tincin Colocar en alcohol al 70% Decoloracin Deshidratacin Aclaramiento Montaje Secar

Coloracin con hematoxilina de Delafield:

Lavado Colorante por 2 horas Eliminar el exceso de colorante Decolorar Realizar el viraje del colorante en agua de cao Deshidratar en alcoholes de 30, 50, 70, 80, 90, y absoluto Montar en laminas, en blsamo de Canad

Coloracin y montaje permanente de Nemtodos y acantocfalos.

Por poseer una cubierta externa, gruesa y resistente, no permite el ingreso de colorantes acuosos Agujerear su cubierta externa mediante estiletes finos antes de colocarlos en el colorante .

Limpieza de montajes permanentes:

 Limpiar el exceso del medio cuando el

montaje esta seco.  Con un bistur caliente al rojo se derrite el medio sobrante para luego ser limpiado con xilol.  Si se quiere limpiar el montaje cuando esta fresco se debe utilizar un trapo embebido con xilol.

MONTAJES TEMPORALES
Cuando se requiere material con fines de docencia. Cuando se requiere hacer estudios taxonmicos se recomienda, este previo aclaramiento con lacto _ fenol, creosota y glicerina; estas sustancias permiten visualizar las estructuras externas e internas

Procedimiento
Sacar al parsito del conservador o fijador y dejarlo en un petri que contenga el aclarante (lacto _ fenol, creosota y glicerina) por 10 min. hasta que acte esta solucin. 2) Realizar el montaje entre lmina y laminilla utilizando como medio circundante del parsito, el mismo aclarante. 3) Sellar los bordes de la laminilla con barniz ( evita la evaporacin).
1)

Montajes de Fitonemtodos

Procedimiento
1) 2)

3) 4)

5)

Depositar 2 gotas de azul de lactofenol en una lmina y colocarlo en una estufa a 65_70 C . Transferir los fitonemtodos desde el fijador al azul de lactofenol caliente, dejndoles por 2 min., hasta que aclaren y se coloreen de azul. Montar los fitonemtodos en azul de lactofenol (0.005%). Se puede colocar fibra de vidrio de un grosor idntico al de los nemtodos, para evitar el aplastamiento de stos. Finalmente coloca la laminilla, y se sella con blsamo de Canad.