CROMATOGRAFÍA

DE GASES
COMPONENTES DE UN
CROMATÓGRAFO DE GASES
• Fase móvil (mobile phases): Gaseosa, o fluido supercrítico.
Helio, Argón o Nitrógeno.
• Puerto de inyección (inyection port): Es un dispositivo que
permite la introducción de la muestra en la corriente del gas
portador.
• Horno de la columna: Mantiene la temperatura constante
en la columna para una optima separación de los analitos
 Medidor de
temperatura

Puerto de
Regulador inyección Detector
de presión
Válvula
Registrador
Graficador
Computadora
Columna

Horno

Tanque
Jeringa
de gas Cromatograma
 COMPONENTES DE UN
CROMATÓGRAFO DE GASES

• Soporte (Support): La función básica del soporte sólido es sostener la fase

estacionaria.
• Columna cromatográfica (Fase estacionaria): Las columnas están hechas
de cobre, acero inoxidable o tubos de vidrio, dobladas o enrolladas.
• Detectores: Los detectores son dispositivos que indican y miden los solutos
en la corriente del gas acarreador, convirtiendo una señal no medible
directamente en una señal elaborable de una propiedad física.
 GAS PORTADOR

Transporta los componentes de la muestra, y crea una matriz adecuada para el

detector.
* Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la
fase estacionaria)
* Debe ser capaz de minimizar la difusión gaseosa
• Fácilmente disponible y puro
• Económico
* Adecuado al detector a utilizar
 DETECTOR

El detector es la parte del cromatógrafo que se encarga de determinar cuándo ha salido el

analito por el final de la columna.
• Sensibilidad alta y estable
• Respuesta lineal al analito
• Tiempo de respuesta corto
• Intervalo de temperatura de trabajo amplio
• Estabilidad y reproducibilidad
• Alta fiabilidad y manejo sencillo
• Respuesta semejante para todos los analitos
• Respuesta selectiva y altamente predecible para un reducido número de analitos.
 CLASIFICACIÓN DETECTORES

• Estos pueden ser clasificados:

• Detectores según su Grado de Selectividad :
• Universales. Responde a la mayoría de los solutos
que pasan por él.
• Específicos ó Selectivos. Exhibe una gran respuesta a
un grupo particular de substancias con un mínimo de
respuesta a otras.
 CLASIFICACIÓN DETECTORES

• Detectores según su Modo de Respuesta:

• Dependientes del Flujo Másico. Producen una señal que es proporcional a
la cantidad de soluto que pasa a través de él en la unidad de tiempo pero es
independiente del volumen de gas portador requerido para la elusión.

• Dependiente de la Concentración. Dan una señal proporcional a la cantidad

de soluto por unidad de volumen de gas portador que pasa a través de él.

• Detectores según el proceso de detección Ionización, Óptico-espectroscópico,

Electroquímico, etc
 DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD
TÉRMICA (TCD)

• Determinación de la
composición de una mezcla de
gases.
• Usado ampliamente en la
industria del gas natural para
determinar propiedades como
densidad relativa y poder
calorífico.
 Detector de captura de electrones
(ECD, Electrón-Capture Detector)

Es muy sensible a las moléculas que contienen

grupos funcionales electronegativos tales como
halógenos, peróxidos, quinonas, y grupos nitro. Se
utiliza principalmente en los mercados
medioambiental, forense y farmacéutico, usado
ampliamente para determinación de plaguisidas.

Cuando determinadas moléculas atraviesan el

detector, capturan algunos de los electrones de la
muestra, lo que reduce la corriente medida. La
compensación por esta reducción se registra como un
pico positivo.
DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD TÉRMICA (TCD,
THERMICAL CONDUCTIVITY DETECTOR)

• utilizada para analizar gases

inorgánicos (argón, nitrógeno,
hidrógeno, dióxido de carbono,
etc.) y pequeñas moléculas de
hidrocarburos. El TCD
compara la conductividad
térmica de dos flujos de gases:
el gas portador puro (de
referencia) y la muestra.
 DETECTOR DE IONIZACIÓN DE
LLAMA (FID)

• Se usa para el análisis de compuestos

orgánicos que contienen grupos
funcionales como carbonilo, alcohol,
halógenos y amina que generan pocos o
ningún ion.
• Análisis de compuestos contaminados con
agua, óxido de nitrógeno y azufre, perfil de
ácidos grasos, colesterol, contenido
alcohólico, impurezas orgánicas volátiles
en materias primas.
 EJEMPLOS
• Detector termoiónico (TID, ThermoIonic Detector)

Es selectivo para
compuestos orgánicos
fosforados y
nitrogenados, su uso
es amplio en la
determinación de
pesticidas fosforados.
 DETECTOR FOTOMÉTRICO DE
FLAMA(FPD)
• Detección de compuestos sulfurados
y fosforados en mezclas complejas.
• Detección de componentes
sulfurados en extractos crudos de
aceite y en contaminantes de gas
natural.
• Detección pesticidas y herbicidas
organofosforados, así como
componentes sulfurados volátiles en
el análisis de alimentos.
 DETECTOR DE FOTOIONIZACIÓN
(PID)

• Detección de compuestos con hidrocarburos aromáticos o con

heteroátomos, compuestos alifáticos, organosulfurados, cetonas,
ésteres, aldehídos y aminas.
• Una de las aplicaciones habituales es el análisis de la contaminación
del agua por la presencia de hidrocarburos. El detector de
fotoionización utiliza luz ultravioleta para ionizar los componentes de
la columna. Los electrodos captan los iones y la corriente generada
mide la concentración.
DETECTOR DE FOTOIONIZACIÓN
(PID)
ELUYENTE Y ELUATO

• Eluyente
Disolvente o solución utilizada en el proceso de elución, como
ocurre en una cromatografía en columna.
• Eluato
Solución o sustancia obtenida por un proceso de elución.
 COLUMNA DE RELLENO

• Las columnas de relleno o empacadas consisten en unos tubos de

vidrio, metal (inerte a ser posible como el acero inoxidable, Niquel,
Cobre o Aluminio) o teflón, de longitud de 2 a 3 metros y un
diámetro interno de unos pocos milímetros, típicamente de 2 a 4. El
interior se rellena con un material sólido, finamente dividido para
tener una máxima superficie de interacción y recubierto con una
capa de espesores entre 50 nm y 1 μm. Para que puedan introducirse
en el horno, se enrollan convenientemente.
 COLUMNA DE RELLENO

• El material de relleno ideal consiste en pequeñas partículas, esféricas y

uniformes, con una buena resistencia mecánica, para tener una máxima
superficie donde interaccionar la fase estacionaria y el analito. Como todos
los componentes de columnas para GC, debe ser inerte a altas temperaturas
(~400 °C) y humectarse uniformemente con la fase líquida estacionaria
durante el proceso de fabricación.
COLUMNA CAPILAR

• Las columnas capilares son de dos tipos básicos: las de

pared recubierta (WCOT) y las de soporte recubierto
(SCOT). Las WCOT son simplemente tubos capilares
donde la pared interna se ha recubierto con una finísima
capa de fase estacionaria. Las columnas SCOT tienen en su
parte interna una fina capa de material absorbente como el
empleado en las columnas de relleno (tierra de diatomeas)
donde se ha adherido la fase estacionaria.
 COLUMNA CAPILAR

• Las ventajas de las SCOT frente a las WCOT es la mayor capacidad de

carga de esta última, ya que en su fabricación se emplean mayores
cantidades de fase estacionaria, al ser la superficie de intercambio mayor.
Por orden de eficacia, en primer lugar están las WCOT, luego las SCOT y
por último las columnas de relleno.
 COLUMNAS CROMATOGRÁFICAS
Capilares
-Se construyen con sílice
fundida.
-Los diámetros interirores
suelen ser de 200 – 250 μm.
-La longitud suele ser
superior a los 20m.
Empacadas
-Se construyen con tubo de acero
inoxidable, niquel o vidrio.
-Los diámetros interiores van de
1.6 a 9mm.
-La longitud suele ser inferior a
3m.
-Se rellenan de un material
adsorbente
SISTEMA DE INYECCIÓN

El modo estándar es la inyección directa,

la muestra es inyectada con una jeringa a
través de un septum de goma a un
alineador de vidrio donde es vaporizada
y transportada por el gas al interior de la
columna.

El bloque de inyección, se mantiene a

una temperatura tal que permita
convertir prácticamente de forma
instantánea la muestra líquida en un
tapón de vapor.
SEPTUM

• En general, se inyecta la
muestra con
una micro jeringa a través
de un
septum (junta de goma de
silicona).

• El Septum ha de ser
estable y ha de cambiarse
con frecuencia
 HORNO

• Las columnas cromatográficas se enrollan, se sujetan en un

soporte y se introducen en el interior de un horno

• El horno debe poderse calentar y enfriar rápidamente.

• La temperatura se debe poder programar para poder

trabajar en régimen de gradiente.

• Muchas aplicaciones y métodos cromatográficos requieren

comenzar a temperaturas por debajo de la ambiental.
 CONTROL Y FLUJO DE MEDICIÓN

• El caudal óptimo puede determinarse inicialmente ajustándolo

hasta obtener el número máximo de platos teóricos.

• Los valores razonables para columnas de 0,4cm de diámetro son de

75 a 90 ml / min; para columnas de 0,2 cm de diámetro un buen
valor es 25 ml / min.
 SPLIT

• El muestreo tipo split es el método más popular porque inyectar

muestras de 0.1 a 2 µl no impide que haya una buena altura y
sensibilidad en el pico.

• Una ventaja del split es que se pueden usar columnas más estrechas para
tener una mejor resolución sin tener que volver a muestrear la columna.

• El único inconveniente del split es que la cantidad inyectada a la

columna podría no ser representativa si la muestra no es completamente
vaporizada.
SPLITLESS

• Las muestras con splitless son frecuentemente usadas para análisis de

componentes donde una gran cantidad de muestra es inyectada a la columna.

• Durante el muestreo con splitless, la muestra se inyecta dentro de la

columna caliente y forma un vapor que consiste de muestra, solvente y gas.
Parte del gas sale por el respirador al pasar en el alineador.

• Esta técnica es extremadamente útil para adelgazar los picos y eliminar las
trazas de solvente y la interferencia de vapor retenido momentáneamente en
la fase estacionaria.
 TAMAÑO DE LA MUESTRA

Esto depende de la columna:

• Si la columna empleada es rellena, el volumen a inyectar será de unos 20 μL,
y en el caso de las
• Si la columna es capilar dicha cantidad es menor, de 1 μL, y dependiendo del
tipo de columna capilar (ya que existen columnas con distinto diámetro
interno) es que si se utiliza todo el volumen de muestra inyectado.
Para obtener menor cantidad de volumen, se utiliza un divisor de flujo (la
inyección se conoce como modo "Split") a la entrada de la columna que desecha
parte del analito introducido. Si se utiliza todo el volumen de muestra la
inyección es de tipo "Splitless". El modo Splitless, se empleó más para
determinar pequeñas cantidades o trazas (determinaciones ambientales).
CARACTERÍSTICAS DE LA
MUESTRA A ANALIZAR POR CG

•Volátiles

• Térmicamente estables hasta 350-

400°C
 HEAD SPACE

• Técnica de extracción de espacio en

cabeza. Permite el análisis de compuestos
volátiles de sólidos.
• Evita la pérdida de los componentes más
volátiles de una muestra.
• En este método la muestra sólida se
calienta en un vial sellado con septum
durante un tiempo, provocando la
transferencia de los compuestos volátiles al
aire del vial, denominado espacio de
cabeza.
 HEAD SPACE

• Luego con una jeringa se toma una

alícuota del aire del vial y se inyecta en el
cromatógrafo.

• La aguja debe de calentarse a las misma

temperatura que la muestra para evitar
condensaciones sobre la misma.
HEAD SPACE
MAKE UP GAS

• Para reducir al mínimo el volumen muerto del detector, se

añade make up gas  en el extremo de salida de la
columna para aumentar el flujo total que entra en el
detector.
• Ayuda a mejorar la sensibilidad del detector, ya que barre el
volumen muerto de éste.
• Se puede añadir directo a la flama de hidrógeno o al
eluyente de la columna.
TIEMPO DE RETENCIÓN, TIEMPO MUERTO
Y CROMATOGRAMA

• Tiempo de retención
Es el tiempo característico que tarda un analito particular en pasar a través del
sistema (desde la columna de entrada hasta el detector) bajo las condiciones
fijadas.
• Cromatograma

Es el resultado gráfico de la cromatografía. En el caso de separación óptima, los

diferentes picos o manchas del cromatograma se corresponden a los
componentes de la mezcla separada.
• Tiempo muerto

Es el tiempo tM para que la especie no retenida alcance el detector

Los cromatogramas de gases se utilizan extensamente para determinar la pureza
de compuestos orgánicos. La aparición de picos adicionales revela que hay
contaminantes presentes y las áreas bajo estos picos proporcionan un cálculo
aproximado del grado de contaminación.
PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS

• Pico del aire.

Es el que corresponde a la detección de una cantidad muy pequeña de aire que entra a la
columna cuando se introduce la muestra en el cromatógrafo.

• La línea de base.
Es la parte del registro que corresponde a la fase móvil pura (gas portador, ...).

• Altura de pico (h).

Es la distancia entre la cima del pico y la línea de base. En el caso de que el vértice sea
redondeado se trazan rectas tangentes a los dos puntos de inflexión de las laderas; el
punto de corte de las dos rectas determina la altura del pico.
PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS

• Anchura del pico (a).

Es la longitud del tramo de la prolongación de la línea de base,
comprendida entre las intersecciones con la misma de las laderas del
pico o, en su caso, de las líneas tangentes antes mencionadas.

• Área del pico (S).

Es la comprendida entre el pico y la prolongación de la línea de base.
Precisamente a obtener el valor de este parámetro, en los picos del
cromatograma, se dedican los dispositivos integradores.
 CUANTIFICACIÓN DEL ÁREA
DEL PICO

• El área de pico es la variable que se

normalmente se usa desde el punto de vista
cuantitativo.
• Existen varias técnicas para la
determinación del área de un pico
cromatográfico. Las áreas de pico se
obtienen por métodos convencionales,
tales como triangulación, planimetría o
mediante el uso de integradores,
mecánicos o electrónicos.
INTEGRACIÓN MANUAL Y
AUTOMÁTICA
Integración Manual:

 Métodos Geométricos (triangulación).

 Métodos Mecánicos (Planiméricos, Corte y Pesada).

Integración Automática:

 Electromecánica
 Electrónica
 NORMALIZACIÓN DE ÁREA

• La normalización de área es un medio para establecer el porcentaje de cada

componente en la muestra. Se calcula dividiendo el área de cada componente entre
el área total y multiplicando por 100%

• Este término es independiente del volumen de inyección de muestra y debe

cumplirse que todos los picos deben estar separados. Sin embargo, esta ecuación
sólo se puede aplicar para una serie homologa de compuestos de punto de
ebullición muy parecidos y con similares respuestas del detector
 MÉTODO DEL ESTÁNDAR
INTERNO
• Este método es conocido como calibración relativa o indirecta. Para ello,
relación de masas conocidas de un patrón de la muestra y de un estándar
deber ser preparadas e inyectadas al cromatógrafo para luego determinar las
relaciones de área. Estas relaciones de áreas son graficadas en función de la
relaciones de masa. De esta curva se obtiene la ecuación lineal y = mx.
• Entonces se adiciona una masa conocida del estándar interno a una masa
conocida de muestra y esta mezcla se inyecta al cromatógrafo. Del
cromatograma se obtienen las áreas de analito y del estándar y luego con la
ecuación de calibración y conociendo la masa del estándar se puede obtener
la masa del analito en la muestra.
MÉTODO DEL ESTÁNDAR
EXTERNO

• Se usa para calibrar instrumentos y procedimientos cuando

no hay efectos de interferencia de los componentes matriz
en la disolución del analito. Se prepara una serie de
estándares externas que contienen concentraciones
conocidas del analito. Idealmente se utilizan tres o más
disoluciones en el proceso de calibración.
• La calibración se lleva a cabo al obtener la señal de respuesta, como el área
de pico, como función de la concentración conocida del analito. Se obtiene
una curva de calibración al representar gráficamente los datos y ajustarlos a
una ecuación matemática con la que se pude predecir la concentración
desconocida de analito en una muestra.
 APLICACIONES

• Separación, cuantificación y
subsiguiente caracterización de una
gran variedad de productos en
distintas mezclas, desde gases
permanentes y mezclas de
isótopos, hasta aceites esenciales
en perfumes, ácidos grasos en
grasas animales y agentes
contaminantes en aguas y suelos.
• A escala preparativa se emplea para la obtención de
compuestos de elevada pureza, así como también es
posible la obtención de datos físico-químicos
relativos a propiedades superficiales, cinética y
termodinámica de procesos de adsorción y
separación, desarrollo de catalizadores, etc.
• En la industria del petróleo juega una función
primordial, por medio de la cromatografía se
pueden analizar los constituyentes de las gasolinas,
las mezclas de gases de refinería, gases de
combustión, etc